JPWO2020084161A5

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Publication number: JPWO2020084161A5
Application number: JP2021522958A
Authority: JP
Publication date: 2022-11-08

Claims

配列番号１４に定められる配列又は前記配列と少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含む、ヒトアルブミンをコードするコドン最適化核酸分子。 A codon-optimized nucleic acid molecule encoding human albumin comprising the sequence set forth in SEQ ID NO: 14 or a sequence having at least 80% sequence identity with said sequence.

配列番号１４に定められる前記配列又は前記配列と少なくとも８０％の配列同一性を有する前記配列に融合された導入遺伝子を含む、請求項１に記載の核酸分子。 2. The nucleic acid molecule of claim 1, comprising a transgene fused to said sequence set forth in SEQ ID NO: 14 or having at least 80% sequence identity with said sequence.

前記導入遺伝子がコドン最適化導入遺伝子である、請求項２に記載の核酸分子。 3. The nucleic acid molecule of claim 2, wherein said transgene is a codon-optimized transgene.

前記導入遺伝子が配列番号１４に定められる前記配列又は前記配列と少なくとも８０％の配列同一性を有する前記配列の５’末端に位置する、請求項２または３に記載の核酸分子。 4. The nucleic acid molecule of claim 2 or 3, wherein said transgene is located at the 5' end of said sequence set forth in SEQ ID NO: 14 or said sequence having at least 80% sequence identity with said sequence.

前記導入遺伝子が、配列番号１４に定められる前記配列又は前記配列と少なくとも８０％の配列同一性を有する前記配列から、１つ又は複数のポリペプチド又はペプチドリンカーをコードする配列によって隔てられている、請求項２～４のいずれか一項に記載の核酸分子。 wherein said transgene is separated from said sequence set forth in SEQ ID NO: 14 or said sequence having at least 80% sequence identity with said sequence by sequences encoding one or more polypeptide or peptide linkers; The nucleic acid molecule according to any one of claims 2 to 4, wherein

前記導入遺伝子が、配列番号１４に定められる前記配列又は前記配列と少なくとも８０％の配列同一性を有する前記配列から、配列番号１８に定められるペプチドリンカーをコードする配列によって隔てられている、請求項２～５のいずれか一項に記載の核酸分子。 18. The transgene is separated from said sequence set forth in SEQ ID NO: 14 or from said sequence having at least 80% sequence identity with said sequence by a sequence encoding a peptide linker set forth in SEQ ID NO: 18. 6. The nucleic acid molecule according to any one of 2-5.

導入遺伝子にコードされるタンパク質又はポリペプチドの発現及び／又は循環レベル及び／又は活性を増加させるのに使用するための、請求項１～６のいずれか一項に記載の核酸分子。 A nucleic acid molecule according to any one of claims 1 to 6 for use in increasing the expression and/or circulating level and/or activity of a transgene-encoded protein or polypeptide.

プロモーターに動作可能に連結された請求項１～６のいずれか一項に記載の前記核酸分子を含む核酸発現カセット。 A nucleic acid expression cassette comprising the nucleic acid molecule of any one of claims 1-6 operably linked to a promoter.

前記プロモーター及び請求項１～６のいずれか一項に定められる前記核酸分子に動作可能に連結された少なくとも１つの組織特異的核酸調節エレメント；
マウス微小ウイルス（ＭＶＭ）イントロン；並びに／又は
転写終結シグナル；
を含む、請求項８に記載の核酸発現カセット。 at least one tissue-specific nucleic acid regulatory element operably linked to said promoter and said nucleic acid molecule as defined in any one of claims 1-6 ;
mouse minute virus (MVM) introns; and/or transcription termination signals;
9. The nucleic acid expression cassette of claim 8 , comprising:

前記ＭＶＭイントロンが配列番号２０に定められる前記ＭＶＭイントロンである；並びに／又は said MVM intron is said MVM intron set forth in SEQ ID NO: 20; and/or
前記転写終結シグナルがポリアデニル化シグナル、配列番号２１に定められる合成ポリアデニル化シグナル又は配列番号２３に定められるシミアンウイルス４０（ＳＶ４０）ポリアデニル化シグナルである； said transcription termination signal is a polyadenylation signal, a synthetic polyadenylation signal set forth in SEQ ID NO:21 or a simian virus 40 (SV40) polyadenylation signal set forth in SEQ ID NO:23;
請求項９に記載の核酸発現カセット。A nucleic acid expression cassette according to claim 9 .

前記導入遺伝子が、分泌可能な治療用タンパク質又は分泌可能な免疫原性タンパク質をコードする、請求項８～１０のいずれか一項に記載の核酸発現カセット。 The nucleic acid expression cassette of any one of claims 8-10, wherein the transgene encodes a secretable therapeutic protein or a secretable immunogenic protein.

前記導入遺伝子が、第ＩＸ因子、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩａ因子、第ＶＩＩＩ因子、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、組織因子（ＴＦ）、組織因子経路阻害剤（ＴＦＰＩ）、ＡＤＡＭＴＳ１３、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、胎盤増殖因子（ＰＬＧＦ）、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、可溶性ｆｍｓ様チロシンキナーゼ１（ｓＦＬＴ１）、α１－アンチトリプシン（ＡＡＴ）、インスリン、プロインスリン、第Ｘ因子、フォン・ヴィルブランド因子、Ｃ１エステラーゼ阻害剤（Ｃ１－ＩＮＨ）、ライソゾーム酵素、ライソゾーム酵素イズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、インターフェロン－α、インターフェロン－β、インターフェロン－γ、インターロイキン１（ＩＬ－１）、インターロイキン２（ＩＬ－２）、インターロイキン３（ＩＬ－３）、インターロイキン４（ＩＬ－４）、インターロイキン５（ＩＬ－５）、インターロイキン６（ＩＬ－６）、インターロイキン７（ＩＬ－７）、インターロイキン８（ＩＬ－８）、インターロイキン９（ＩＬ－９）、インターロイキン１０（ＩＬ－１０）、インターロイキン１１（ＩＬ－１１）、インターロイキン１２（ＩＬ－１２）、ケモカイン（Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフ）リガンド５（ＣＸＣＬ５）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、ケラチノサイト成長因子（ＫＧＦ）、単球走化性タンパク質－１（ＭＣＰ－１）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、アファミン（ＡＦＭ）、α１－アンチトリプシン、α－ガラクトシダーゼＡ、α－Ｌ－イズロニダーゼ、リポタンパク質リパーゼ、アポリタンパク質、低密度リポタンパク質受容体（ＬＤＬ－Ｒ）、アルブミン、ジペプチジルペプチダーゼ（ＤＰＰ－４）－抵抗性グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ－１）、ＧＬＰ－２、グルカゴン、成長ホルモン（ＧＨ）、インターフェロン（例えばＩＦＮアルファ－２ｂ）、β－ナトリウム利尿ペプチド、ＩＬ－１Ｒａ、エキセンディン－４、オキシントモジュリン、ホリスタチン、抗体及びナノボディからなるリストより選択される分泌可能な治療用タンパク質をコードする、請求項８～１１のいずれか一項に記載の核酸発現カセット。 the transgene is factor IX, factor VII, factor VIIa, factor VIII, hepatocyte growth factor (HGF), tissue factor (TF), tissue factor pathway inhibitor (TFPI), ADAMTS13, vascular endothelial growth factor (VEGF), placental growth factor (PLGF), fibroblast growth factor (FGF), soluble fms-like tyrosine kinase 1 (sFLT1), α1-antitrypsin (AAT), insulin, proinsulin, factor X, von Wille Brand factor, C1 esterase inhibitor (C1-INH), lysosomal enzymes, lysosomal enzyme iduronate-2-sulfatase (I2S), erythropoietin (EPO), interferon-α, interferon-β, interferon-γ, interleukin-1 (IL -1), interleukin 2 (IL-2), interleukin 3 (IL-3), interleukin 4 (IL-4), interleukin 5 (IL-5), interleukin 6 (IL-6), interleukin Leukin 7 (IL-7), Interleukin 8 (IL-8), Interleukin 9 (IL-9), Interleukin 10 (IL-10), Interleukin 11 (IL-11), Interleukin 12 (IL-11) 12), chemokine (CXC motif) ligand 5 (CXCL5), granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF), granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF), macrophage colony-stimulating factor (M-CSF) , stem cell factor (SCF), keratinocyte growth factor (KGF), monocyte chemotactic protein-1 (MCP-1), tumor necrosis factor (TNF), afamin (AFM), α1-antitrypsin, α-galactosidase A, α-L-iduronidase, lipoprotein lipase, apoliprotein, low-density lipoprotein receptor (LDL-R), albumin, dipeptidyl peptidase (DPP-4)-resistant glucagon-like peptide 1 (GLP-1), GLP- 2, selected from the list consisting of glucagon, growth hormone (GH), interferon (eg IFN alpha-2b), beta-natriuretic peptide, IL-1Ra, exendin-4, oxyntomodulin, follistatin, antibodies and nanobodies A nucleic acid expression cassette according to any one of claims 8 to 11, encoding a secretable therapeutic protein.

前記導入遺伝子が、肝臓関連疾患を治療及び／又は予防するための治療用タンパク質をコードする、請求項８～１２のいずれか一項に記載の核酸発現カセット。 Nucleic acid expression cassette according to any one of claims 8 to 12, wherein the transgene encodes a therapeutic protein for treating and/or preventing liver-related diseases.

前記肝臓関連疾患が血友病Ａ、血友病Ｂ又は第ＶＩＩ因子欠乏症である、請求項１３に記載の核酸発現カセット。 14. The nucleic acid expression cassette of claim 13, wherein said liver-related disease is hemophilia A, hemophilia B or factor VII deficiency.

前記導入遺伝子が、
凝固因子ＩＸ（ＦＩＸ）；
凝固第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）；又は
凝固第ＶＩＩ因子（ＦＶＩＩ）若しくは因子ＦＶＩＩａ（ＦＶＩＩａ）の軽鎖若しくは重鎖；
をコードする、請求項１１～１４のいずれか一項に記載の核酸発現カセット。 the transgene is
clotting factor IX (FIX );
coagulation factor VIII (FVIII ); or the light or heavy chain of coagulation factor VII (FVII) or factor FVIIa (FVIIa);
The nucleic acid expression cassette according to any one of claims 11 to 14 , which encodes a

前記ＦＩＸが高活性化変異を含む； said FIX comprises a hyperactivating mutation;
前記導入遺伝子がコドン最適化凝固因子ＦＶＩＩＩである、若しくは前記凝固第ＶＩＩＩ因子がＢドメインの欠損を有する；又は said transgene is a codon-optimized coagulation factor FVIII, or said coagulation factor VIII has a B domain deletion; or
前記ＦＶＩＩ若しくはＦＶＩＩａの軽鎖が、ＦＶＩＩ又はＦＶＩＩａの重鎖に１つ若しくは複数の切断可能なポリペプチド若しくはペプチドリンカーによって結合される； said FVII or FVIIa light chain is linked to the FVII or FVIIa heavy chain by one or more cleavable polypeptide or peptide linkers;
請求項１５に記載の核酸発現カセット。16. A nucleic acid expression cassette according to claim 15.

前記高活性化変異がＲ３３８Ｌアミノ酸置換に対応する； said hyperactivating mutation corresponds to the R338L amino acid substitution;
前記ＦＶＩＩＩの前記Ｂドメインが配列番号１５に定められるリンカーで置換される；又は said B domain of said FVIII is replaced with a linker set forth in SEQ ID NO: 15; or
前記ＦＶＩＩ若しくはＦＶＩＩａの軽鎖が、ＦＶＩＩ又はＦＶＩＩａの重鎖に１つ若しくは複数の切断可能なポリペプチド若しくはペプチドリンカーによって結合される； said FVII or FVIIa light chain is linked to the FVII or FVIIa heavy chain by one or more cleavable polypeptide or peptide linkers;
請求項１６に記載の核酸発現カセット。17. A nucleic acid expression cassette according to claim 16.

前記導入遺伝子が、配列番号１１に定められる核酸配列を有する凝固因子ＩＸをコードする； said transgene encodes clotting factor IX having the nucleic acid sequence set forth in SEQ ID NO: 11;
前記導入遺伝子が、配列番号１６に定められる核酸配列を有する凝固第ＶＩＩＩ因子をコードする；又は said transgene encodes coagulation factor VIII having the nucleic acid sequence set forth in SEQ ID NO: 16; or
前記導入遺伝子が、配列番号３４に定められるアミノ酸配列をコードする； said transgene encodes the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO:34;
請求項１１～１７のいずれか一項に記載の核酸発現カセット。A nucleic acid expression cassette according to any one of claims 11-17.

少なくとも１つの組織特異的核酸調節エレメントが、少なくとも１つの肝臓特異的核酸調節エレメントである、請求項１１～１８のいずれか一項に記載の核酸発現カセット。 A nucleic acid expression cassette according to any one of claims 11 to 18 , wherein at least one tissue-specific nucleic acid regulatory element is at least one liver-specific nucleic acid regulatory element.

前記少なくとも１つの肝臓特異的核酸調節エレメントが、配列番号２５に定められるセルピンエンハンサー又は前記配列と少なくとも９５％の同一性を有する配列からなる、請求項１９に記載の核酸発現カセット。 20. The nucleic acid expression cassette of claim 19 , wherein said at least one liver-specific nucleic acid regulatory element consists of the serpin enhancer set forth in SEQ ID NO: 25 or a sequence having at least 95% identity to said sequence.

前記少なくとも１つの肝臓特異的核酸調節エレメントが、配列番号２５に定められるセルピンエンハンサー又は前記配列と少なくとも９５％の同一性を有する配列のトリプルリピートからなる、請求項１９または２０に記載の核酸発現カセット。 21. The nucleic acid expression cassette of claim 19 or 20, wherein said at least one liver-specific nucleic acid regulatory element consists of the serpin enhancer set forth in SEQ ID NO: 25 or triple repeats of a sequence having at least 95% identity to said sequence. .

前記リピートがタンデムに配置された、請求項２１に記載の核酸発現カセット。 22. The nucleic acid expression cassette of claim 21, wherein said repeats are arranged in tandem.

前記プロモーターが、肝臓特異的プロモーターである、請求項８～２２のいずれか一項に記載の核酸発現カセット。 A nucleic acid expression cassette according to any one of claims 8 to 22 , wherein said promoter is a liver-specific promoter .

前記プロモーターが、トランスサイレチン（ＴＴＲ）プロモーター、最小限ＴＴＲプロモーター（ＴＴＲｍ）、ＡＡＴプロモーター、アルブミン（ＡＬＢ）プロモーター若しくは最小限プロモーター、アポリポタンパク質Ａ１（ＡＰＯＡ１）プロモーター若しくは最小限プロモーター、補体因子Ｂ（ＣＦＢ）プロモーター、ケトヘキソキナーゼ（ＫＨＫ）プロモーター、ヘモペキシン（ＨＰＸ）プロモーター若しくは最小限プロモーター、ニコチンアミドＮメチルトランスフェラーゼ（ＮＮＭＴ）プロモーター若しくは最小限プロモーター、（肝臓）カルボキシルエステラーゼ１（ＣＥＳ１）プロモーター若しくは最小限プロモーター、プロテインＣ（ＰＲＯＣ）プロモーター若しくは最小限プロモーター、アポリポタンパク質Ｃ３（ＡＰＯＣ３）プロモーター若しくは最小限プロモーター、マンナン結合レクチンセリンプロテアーゼ２（ＭＡＳＰ２）プロモーター若しくは最小限プロモーター、ヘプシジン抗菌ペプチド（ＨＡＭＰ）プロモーター若しくは最小限プロモーター wherein the promoter is transthyretin (TTR) promoter, minimal TTR promoter (TTRm), AAT promoter, albumin (ALB) promoter or minimal promoter, apolipoprotein A1 (APOA1) promoter or minimal promoter, complement factor B ( CFB) promoter, ketohexokinase (KHK) promoter, hemopexin (HPX) promoter or minimal promoter, nicotinamide N-methyltransferase (NNMT) promoter or minimal promoter, (liver) carboxylesterase 1 (CES1) promoter or minimal promoter, protein C (PROC) promoter or minimal promoter, apolipoprotein C3 (APOC3) promoter or minimal promoter, mannan-binding lectin serine protease 2 (MASP2) promoter or minimal promoter, hepcidin antimicrobial peptide (HAMP) promoter or minimal promoter
、又はセルピンペプチダーゼ阻害剤、クレードＣ（アンチトロンビン）、メンバー１（ＳＥＲＰＩＮＣ１）プロモーター若しくは最小限プロモーターから選択される肝臓特異的プロモーター、またはＴＴＲｍである、請求項８～２３のいずれか一項に記載の核酸発現カセット。, or a liver-specific promoter selected from a serpin peptidase inhibitor, clade C (antithrombin), member 1 (SERPINC1) promoter or minimal promoter, or TTRm. of nucleic acid expression cassettes.

ウイルスベクターである請求項８～２４のいずれか一項に記載の前記核酸発現カセットを含むベクター。 A vector comprising the nucleic acid expression cassette according to any one of claims 8 to 24 , which is a viral vector .

配列番号２、配列番号３、配列番号６又は配列番号８を有する、請求項２５に記載のベクター。 26. The vector of claim 25 , having SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:6 or SEQ ID NO: 8 .

請求項２５又は２６に記載の前記ベクター及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。 27. A pharmaceutical composition comprising the vector of claim 25 or 26 and a pharmaceutically acceptable carrier.

遺伝子治療に使用するための、請求項２５又は２６に記載のベクター又は請求項２７に記載の医薬組成物。 A vector according to claim 25 or 26 or a pharmaceutical composition according to claim 27 for use in gene therapy .

肝臓関連疾患の治療に使用するための、請求項２５又は２６に記載のベクター又は請求項２７に記載の医薬組成物。 A vector according to claim 25 or 26 or a pharmaceutical composition according to claim 27 for use in the treatment of liver-related diseases .

前記導入遺伝子がＦＩＸ、ＦＶＩＩＩ、ＦＶＩＩ又はＦＶＩＩａである場合、血友病の治療に使用するための、請求項２５若しくは２６に記載のベクター又は請求項２７に記載の医薬組成物。 27. A vector according to claim 25 or 26 or a pharmaceutical composition according to claim 27 for use in the treatment of hemophilia when said transgene is FIX, FVIII, FVII or FVIIa.

肝臓細胞で導入遺伝子産物を発現させるためのインビトロ又はエクスビボの方法であって、
請求項８～２４のいずれか一項に記載の前記核酸発現カセット又は請求項２５又は２６に記載の前記ベクターを前記肝臓細胞に導入すること；
前記導入遺伝子産物を前記肝臓細胞で発現させること；
を含む、方法。 An in vitro or ex vivo method for expressing a transgene product in liver cells, comprising:
introducing the nucleic acid expression cassette according to any one of claims 8 to 24 or the vector according to claim 25 or 26 into the liver cells;
expressing said transgene product in said liver cells;
A method, including