JPWO2018229920A1 - 定量評価装置 - Google Patents

Abstract

細胞の分布が均一か否かを定量的に評価して操作者に知らせることを目的として、本発明の定量評価装置（１）は、細胞を培養する培養容器内の複数の撮影領域の各画像に含まれる細胞の数または密度を計数する計数部（１９）と、計数部（１９）により計数された画像ごとの細胞の数または密度に基づいて、培養容器内の細胞の分布のばらつきに関する評価値を算出する評価値算出部（２１）と、評価値算出部（２１）により算出された評価値が所定の閾値の範囲内か否かを判定する判定部（２３）と、判定部（２３）による判定結果を表示する通知部（９）とを備える。

Description

本発明は、定量評価装置に関するものである。

細胞培養においては、古い培地を新しい培地に交換する培地交換や、増殖した細胞の数を希釈して別の培養容器に移し替える継代作業を定期的に実施する必要がある。継代作業においては、培養容器内に細胞を均一に分散させて播種することが好ましい。従来、培養容器内に細胞を極力均一に分散させる細胞培養装置が知られている（例えば、特許文献１参照。）

特開２０１０−２６８８１３号公報

しかしながら、特許文献１に記載の細胞培養装置では、培養容器に播種した細胞の分布が均一か否かを操作者が顕微鏡で確認する必要がある。そのため、細胞の分布が均一か否かは、操作者の感覚で決まり、操作者ごとにバラつきも生じる。つまり、細胞の分布が均一か否かの評価は定性的であり、一定の基準に従って判断することができない。そのため、細胞培養の品質にばらつきが発生し、その結果、研究の質の低下にも繋がるという問題がある。

本発明は、上述した事情に鑑みてなされたものであって、細胞の分布が均一か否かを定量的に評価して操作者に知らせることができる定量評価装置を提供することを目的としている。

上記目的を達成するため、本発明は以下の手段を提供する。
本発明の一態様は、細胞を培養する培養容器内の複数の撮影領域の各画像に含まれる前記細胞の数または密度を計数する計数部と、該計数部により計数された前記画像ごとの前記細胞の数または密度に基づいて、前記培養容器内の前記細胞の分布のばらつきに関する評価値を算出する評価値算出部と、該評価値算出部により算出された前記評価値が所定の閾値の範囲内か否かを判定する判定部と、該判定部による判定結果を表示する表示部とを備える定量評価装置である。

本態様によれば、計数部によって計数される培養容器内の複数の撮影領域の各画像に含まれる細胞の数または密度に基づいて、評価値算出部によって培養容器内の細胞の分布のばらつきに関する評価値を算出することで、培養容器内の細胞の大凡の分布状況が分かる。

したがって、培養容器内で細胞の分布がほぼ均等な場合の細胞の数または密度の範囲を閾値として予め設定しておくことにより、判定部によって細胞の分布が均一か否かを定量的に判定して、表示部によって操作者に伝えることができる。これにより、操作者の感覚に頼ることなく、また、操作者ごとにバラつきを生じさせることなく、細胞の分布が均一か否かを定量的に評価して操作者に知らせることができる。

上記態様においては、前記評価値算出部が、異なる前記撮影領域の前記画像において計数された前記細胞の数または密度の比率に基づいて、前記評価値を算出することとしてもよい。
このように構成することで、撮影領域ごとに細胞の分布状況を把握することができる。また、撮影領域の数が多ければ多いほど、培養容器内の細胞のより詳細な分布状況が分かる。

上記態様においては、前記評価値算出部が、異なる前記撮影領域の前記画像において計数された前記細胞の数または密度の標準偏差に基づいて、前記評価値を算出することとしてもよい。
このように構成することで、撮影領域ごとに細胞の分布状況を把握することができる。また、撮影領域の数が多ければ多いほど、培養容器内の細胞のより詳細な分布状況が分かる。

上記態様においては、前記評価値算出部が、異なる前記撮影領域の前記画像において計数された前記細胞の数または密度の内、最大値と最小値との差に基づいて、前記評価値を算出することとしてもよい。
このように構成することで、培養容器内の細胞の大凡の分布状況を簡易に把握することができる。

上記態様においては、フォーカス位置を調整可能な撮影部と、前記撮影領域ごとに前記撮影部の前記フォーカス位置を調整するか否かを操作者に確認するフォーカス調整確認部とを備えることとしてもよい。

培養容器に細胞を播種した直後は細胞が浮遊しており、撮影領域ごとに最適なフォーカス位置が異なることがある。したがって、このように構成することで、フォーカス調整確認部により操作者が撮影部のフォーカス位置を調整するか否かを判断して、各撮影領域の最適なフォーカス位置での画像を取得することができる。これにより、評価値算出部により算出される評価値の精度を向上することができる。

上記態様においては、前記フォーカス調整確認部が、同一の前記撮影領域での前記フォーカス位置の調整を促し、前記評価値算出部が、同一の前記撮影領域での異なる前記フォーカス位置での前記画像において計数された前記細胞の数または密度の合計値または平均値に基づいて、前記評価値を算出することとしてもよい。

培養容器に細胞を播種した直後は細胞が浮遊しており、各撮影領域において、１箇所のフォーカス位置では画像に全ての細胞が含まれないことがある。したがって、このように構成することで、フォーカス調整確認部によるフォーカス位置の調整の催促によって、操作者が同一の撮影領域において撮影部のフォーカス位置を変えながら複数の画像を取得し、各撮影領域に存在する複数の細胞の画像を漏らさず取得することができる。

そして、評価値算出部により、同一の撮影領域での各画像の細胞の数または密度の合計値または平均値に基づいて、評価値を精度よく算出することができる。これにより、細胞の分布が均一か否かを定量的により精度よく評価して操作者に知らせることができる。

本発明によれば、細胞の分布が均一か否かを定量的に評価して操作者に知らせることができるという効果を奏する。

本発明の第１実施形態に係る定量評価装置の概略構成図である。 図１の定量評価装置により細胞の分布状況を確認する培養容器の一例を示す図である。 図１の定量評価装置において細胞の分布状況を確認する他の培養容器の一例を示す図である。 図１の定量評価装置において閾値を設定する通知部の画面の一例を示す図である。 図１の定量評価装置において複数画像撮影モードに設定する撮影開始ボタンの一例を示す図である。 図１の定量評価装置において画像の取得を指示する通知部の画面の一例を示す図である。 図１の定量評価装置において細胞の分布状況の評価を表示する通知部の画面の一例を示す図である。 図１の定量評価装置により細胞の分布状況を評価する工程を説明するフローチャートである。 所定の閾値の範囲と撮影領域ごとの細胞数の比率との関係の一例を示す図である。 本発明の第２実施形態に係る定量評価装置の概略構成図である。 図７の定量評価装置において複数画像撮影モードに設定する撮影開始ボタンの一例を示す図である。 図７の定量評価装置において画像の取得を指示する通知部の画面の一例を示す図である。 図７の定量評価装置においてユーザにフォーカス位置を確認する通知部の画面の一例を示す図である。 図７の定量評価装置において細胞の分布状況の評価を表示する通知部の画面の一例を示す図である。 図７の定量評価装置により細胞の分布状況を評価する工程を説明するフローチャートである。 培養容器に播種した直後の細胞の浮遊状態の一例を示す図である。 本発明の第３実施形態に係る定量評価装置の概略構成図である。 図１１の定量評価装置において複数画像撮影モードに設定する撮影開始ボタンの一例を示す図である。 図１１の定量評価装置において画像の取得を指示する通知部の画面の一例を示す図である。 図１１の定量評価装置においてユーザにフォーカス位置の調整を促す通知部の画面の一例を示す図である。 図１１の定量評価装置において細胞の分布状況の評価を表示する通知部の画面の一例を示す図である。 図１１の定量評価装置により細胞の分布状況を評価する工程を説明するフローチャートである。

〔第１実施形態〕
本発明の第１実施形態に係る定量評価装置について図面を参照して以下に説明する。
本実施形態に係る定量評価装置１は、図１に示すように、細胞Ｓを培養する培養容器３（例えば、図２，３参照）内の画像を取得する顕微鏡５と、顕微鏡５を制御したり、顕微鏡５により取得された画像を処理したりするＰＣ（Personal Computer）７と、ＰＣ７により処理された画像や情報等を表示するモニタのような通知部（表示部）９とを備えている。

培養容器３は、例えば、図２に示すような光学的に透明な材質からなるシャーレや、図３に示すような光学的に透明な材質からなるフラスコ等が用いられる。図２および図３において、符号Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈは、培養容器３内の撮影領域（観察位置）を示している。本実施形態においては、培養容器３として、図２に示すシャーレを例示して説明する。この培養容器３には、細胞懸濁液（図示略）が播種されている。

顕微鏡５は、例えば、培養容器３を搭載するステージ（図示略）と、培養容器３内を撮影するカメラのような撮影部１１とを備えている。撮影部１１は、ユーザ（操作者）がフォーカス位置を調整することができるようになっている。

ＰＣ７は、図１に示すように、ユーザが閾値を設定する閾値設定部１３と、顕微鏡５による撮影を制御する撮影制御部１５と、顕微鏡５の撮影部１１により取得された画像を記録する記録部１７と、細胞Ｓ（播種細胞）の数または密度を計数する計数部１９と、培養容器３内の細胞Ｓの分布のばらつきに関する評価値を算出する評価値算出部２１と、評価値算出部２１により算出された評価値を判定する判定部２３とを備えている。通知部９、閾値設定部１３および撮影制御部１５はユーザが操作するものであり（ユーザインタラクションあり）、撮影部１１、記録部１７、計数部１９、評価値算出部２１および判定部２３はユーザが操作するものではない（ユーザインタラクションなし）。

閾値設定部１３は、図４Ａに示すように、通知部９の画面上で、許容できる細胞Ｓの分布のばらつきの程度を示す所定の閾値Ｔをユーザに設定させるようになっている。閾値Ｔとしては、例えば、培養容器３内で細胞Ｓの分布がほぼ均等な場合の細胞Ｓの数または密度の範囲を設定することが好ましい。

撮影制御部１５は、複数の画像を撮影する複数画像撮影モードに設定する撮影開始指示部２５と、複数画像撮影モード設定中に、顕微鏡５の撮影部１１に撮影の指示を送る撮影指示部２７と、複数画像撮影モードを終了する撮影終了指示部２９とを備えている。

撮影開始指示部２５は、図４Ｂに示すように、通知部９の画面上に表示される「撮影開始ボタン」をユーザが押すと、複数画像撮影モードに設定するようになっている。
撮影指示部２７は、図４Ｃに示すように、複数画像撮影モード設定中に通知部９の画面上に表示される「撮影ボタン」をユーザが押すと、撮影部１１を作動させて画像を取得させるようになっている。

撮影終了指示部２９は、図４Ｃに示すように、複数画像撮影モード設定中に通知部９の画面上に表示される「撮影終了ボタン」をユーザが押すと、複数画像撮影モードを終了するようになっている。

計数部１９は、記録部１７に記録されている画像を読み出して、読み出した画像に含まれている細胞Ｓの数または密度を計数するようになっている。
評価値算出部２１は、例えば、培養容器３内の異なる撮影領域の画像において計数された細胞Ｓの数または密度の比率に基づいて、評価値Ｖを算出するようになっている。これにより、培養容器３内の細胞Ｓの大凡の分布状況が分かる。培養容器３内に撮影領域の数が多ければ多いほど、評価値Ｖを複数算出して培養容器３内の細胞Ｓのより詳細な分布状況が分かる。

判定部２３は、評価値算出部２１により算出された評価値Ｖが、閾値設定部１３において設定された所定の閾値Ｔの範囲内か否かを判定するようになっている。培養容器３内の全ての撮影領域の評価値Ｖが所定の閾値Ｔの範囲内の場合は、培養容器３内の細胞Ｓの分布のばらつきは許容範囲内といえる。この場合は、判定部２３は、判定結果として、例えば図４Ｄに示すように、通知部９の画面上に「細胞の播種ムラ→ＯＫ」と表示させるようになっている。一方、培養容器３内のいずれかの撮影領域の評価値Ｖが所定の閾値Ｔの範囲外の場合は、培養容器３内の細胞Ｓの分布のばらつきは許容範囲外といえる。この場合は、判定部２３は、判定結果として、例えば、通知部９の画面上に「細胞の播種ムラ→ＮＧ」と表示させるようになっている。

このように構成された定量評価装置１の作用について、図５に示すフローチャートを参照して説明する。
本実施形態に係る定量評価装置１により培養容器３内の細胞Ｓの分布状況を評価するには、ユーザは、細胞Ｓを播種した培養容器３を顕微鏡５のステージに搭載し、図４Ａに示すように、通知部９の画面上で所定の閾値Ｔを入力して、閾値設定部１３により閾値Ｔを設定する（ステップＳＡ１)。

次いで、図４Ｂに示すように、ユーザは通知部９の画面上で「撮影開始ボタン」を押して、撮影開始指示部２５により複数画像撮影モードに設定する（ステップＳＡ２）。次いで、ユーザは、例えば、培養容器３の撮影領域Ａが撮影部１１の視野範囲に納まるように、顕微鏡５のステージ上で培養容器３を移動させる（ステップＳＡ３）。

培養容器３の撮影領域Ａが撮影部１１の視野範囲に納まったら、図４Ｃに示すように、ユーザは通知部９の画面上で「撮影ボタン」を押し、撮影指示部２７により顕微鏡５の撮影部１１を作動させて、撮影領域Ａの画像を取得する（ステップＳＡ４）。撮影部１１により取得された画像は記録部１７に送られて記録される（ステップＳＡ５）。

ユーザは、培養容器３の撮影領域の数が十分か否かを判断し（ステップＳＡ６）、他の撮影領域Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅについても、撮影領域Ａと同様に、撮影領域Ｂ，Ｃ，Ｄ，ＥごとにステップＳＡ３，ＳＡ４，ＳＡ５の作業を繰り返す。そして、各撮影領域Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅの各画像を取得して記録部１７に記録させる。

培養容器３内の全ての撮影領域Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅの画像を取得したら、すなわち、ユーザが撮影領域の数は十分と判断したら（ステップＳＡ６「ＹＥＳ」）、ユーザは、図４Ｃに示す通知部９の画面上の「撮影終了ボタン」を押して、撮影終了指示部２９により複数画像撮影モードを終了する（ステップＳＡ７）。

複数画像撮影モードが終了すると、計数部１９により、記録部１７に記録されている撮影領域Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅで撮影された画像が読み出され、各画像に含まれている細胞Ｓの数または密度が計数される（ステップＳＡ８）。

次いで、評価値算出部２１により、計数部１９により計数された画像ごとの細胞Ｓの数または密度に基づき、例えば、撮影領域Ａの細胞Ｓの数または密度を基準として、撮影領域Ａの細胞Ｓの数または密度に対する他の撮影領域Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅの細胞Ｓの数または密度の比率が評価値Ｖとしてそれぞれ算出される（ステップＳＡ９）。

次いで、判定部２３により、例えば、図６に示すように、撮影領域Ａの評価値Ｖを１とし、撮影領域Ａの評価値Ｖに対する他の撮影領域Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅの評価値Ｖが１±閾値Ｔの範囲内か否かがそれぞれ判定される（ステップＳＡ１０）。図６は、各撮影領域の細胞の数の比率を評価値Ｖとした場合を例示している。

判定部２３により、撮影領域Ａを含む全ての撮影領域Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅの評価値Ｖが１±閾値Ｔの範囲内に含まれると判定された場合は、図４Ｄに示すように、通知部９の画面上に「細胞の播種ムラ→ＯＫ」と表示され、培養容器３内の細胞Ｓの分布のばらつきが許容範囲内であることがユーザに知らされる。

一方、判定部２３により、撮影領域Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅの評価値Ｖのいずれか１つでも１±閾値Ｔの範囲内に含まれていないと判定された場合は、通知部９の画面上に「細胞の播種ムラ→ＮＧ」と表示され、培養容器３内の細胞Ｓの分布のばらつきが許容範囲外であることがユーザに知らされる（ステップＳＡ１１）。

以上説明したように、本実施形態に係る定量評価装置１によれば、評価値算出部２１によって算出される評価値Ｖにより、培養容器３内の細胞Ｓの大凡の分布状況が分かる。そして、判定部２３により、その評価値Ｖと、許容できる細胞Ｓの分布のばらつきの程度を示す閾値Ｔとが比較されることで、細胞Ｓの分布がほぼ均一か否かを定量的に判定することができる。これにより、ユーザの感覚に頼ることなく、また、ユーザごとにバラつきを生じさせることなく、細胞Ｓの分布が均一か否かを定量的に評価してユーザに知らせることができる。

〔第２実施形態〕
次に、本発明の第２実施形態に係る定量評価装置について、図面を参照して以下に説明する。
本実施形態に係る定量評価装置３１は、図７に示すように、合焦確認部（フォーカス調整確認部）３３を備える点で第１実施形態と異なる。
本実施形態の説明において、上述した第１実施形態に係る定量評価装置１と構成を共通とする箇所には同一符号を付して説明を省略する。

合焦確認部３３は、複数画像撮影モード設定中に、図８Ｂに示すように、ユーザが通知部９の画面上の「撮影ボタン」を押すと、図８Ｃに示すように、顕微鏡５の撮影部１１のフォーカス位置を調整するか否かを通知部９の画面上でユーザに確認するようになっている。ユーザは通知部９の画面上の「ＯＫ」ボタンを押す前に、顕微鏡５において、フォーカス位置を調整することができる。

通知部９の画面上でユーザが「ＯＫ」ボタンを押すと、合焦確認部３３においてフォーカス位置は適切とみなされ、撮影指示部２７からの指示によって撮影部１１が作動され撮影が行われる。合焦確認部３３によるフォーカス位置を調整するか否かの確認は、撮影領域ごとに行われるようになっている。

このように構成された定量評価装置３１の作用について、図９のフローチャートを参照して説明する。
本実施形態に係る定量評価装置３１により培養容器３内の細胞Ｓの分布状況を評価するには、ユーザは、閾値Ｔを設定した後（ステップＳＡ１）、図８Ａに示すように、通知部９の画面上で「撮影開始ボタン」を押して、撮影開始指示部２５により複数画像撮影モードに設定する（ステップＳＡ２）。

そして、例えば培養容器３の撮影領域Ａが撮影部１１の視野範囲に納まるように培養容器３を移動させた後（ステップＳＡ３）、図８Ｂに示すように、ユーザが通知部９の画面上の「撮影ボタン」を押すと、合焦確認部３３の作動により、図８Ｃに示すように、撮影領域Ａにおいて撮影部１１のフォーカス位置を調整するか否かが通知部９の画面上でユーザに確認される（ステップＳＢ３）。

ユーザは、図８Ｃに示す通知部９の画面上で「ＯＫ」ボタンを押す前に、撮影領域Ａでの撮影部１１のフォーカス位置を調整する。そして、フォーカス位置が適切と判断したら、ユーザは、図８Ｃに示すように通知部９の画面上で「ＯＫ」ボタンを押す。これにより、撮影指示部２７からの指示によって撮影部１１が作動して撮影領域Ａの画像が取得され（ステップＳＡ４）、記録部１７に記録される（ステップＳＡ５）。

ユーザは、培養容器３の撮影領域の数が十分か否かを判断する（ステップＳＡ６）。そして、他の撮影領域Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅについても、撮影領域Ａと同様にステップＳＡ３，ＳＢ３，ＳＡ４、ＳＡ５の作業を繰り返し、撮影領域Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅごとにフォーカス位置を確認および調整して画像を取得し、記録部１７に記録させる。ステップＳＡ７−ＳＡ１１については、第１実施形態と同様であるので説明を省略する。

以上説明したように、本実施形態に係る定量評価装置３１によれば、例えば、図１０に示すように、培養容器３に細胞Ｓを播種した直後で細胞Ｓが浮遊しているために、撮影領域Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅごとに最適なフォーカス位置が異なる場合において、撮影領域Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅごとにフォーカス位置を調整して、各撮影領域Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅの最適なフォーカス位置で画像を取得することができる。これにより、評価値算出部２１により算出される評価値Ｖの精度を向上して、細胞Ｓの分布が均一か否かを定量的により精度よく評価してユーザに知らせることができる。図１０において、符号Ｗは培養溶液を示している。

〔第３実施形態〕
次に、本発明の第３実施形態に係る定量評価装置について、図面を参照して以下に説明する。
本実施形態に係る定量評価装置４１は、図１１に示すように、合計値算出部４３を備える点で第２実施形態と異なる。
本実施形態の説明において、上述した第１，第２実施形態に係る定量評価装置１，３１と構成を共通とする箇所には同一符号を付して説明を省略する。

本実施形態においては、合焦確認部３３が、図１２Ｂに示すように、ユーザが通知部９の画面上で「撮影ボタン」を押すと、図１２Ｃに示すように、通知部９の画面上で、培養容器３内の同一の撮影領域でのフォーカス位置の調整をユーザに促すようになっている。これにより、ユーザは、例えば、同一の撮影領域において、異なる深さ位置に複数の細胞Ｓが存在する場合に、深さ位置が異なるそれぞれの細胞Ｓに合わせてフォーカス位置を変更する。

図１２Ｃに示すように、ユーザが通知部９の画面上で「ＯＫ」ボタンを押すと、合焦確認部３３においてフォーカス位置は調整されたとみなされ、撮影指示部２７からの指示によって撮影部１１が作動され撮影が行われる。一方、ユーザが、図１２Ｃに示す通知部９の画面上で「Ｃａｎｃｅｌ」ボタンを押すと、図１２Ｂに示す「撮影ボタン」と「撮影終了ボタン」の画面に戻るようになっている。

合計値算出部４３は、同一の撮影領域でフォーカス位置が異なる複数の画像において計数部１９により計数された細胞Ｓの数または密度の合計値を算出するようになっている。
本実施形態においては、評価値算出部２１は、合計値算出部４３により算出された撮影領域ごとの細胞Ｓの数または密度の合計値に基づいて、評価値Ｖを算出するようになっている。

このように構成された定量評価装置４１の作用について、図１３のフローチャートを参照して説明する。
本実施形態に係る定量評価装置４１により培養容器３内の細胞Ｓの分布状況を評価するには、ユーザは、閾値Ｔを設定した後（ステップＳＡ１）、図１２Ａに示すように、通知部９の画面上で「撮影開始ボタン」を押して、撮影開始指示部２５により複数画像撮影モードに設定する（ステップＳＡ２）。

そして、例えば培養容器３の撮影領域Ａが撮影部１１の視野範囲に納まるように培養容器３を移動させた後（ステップＳＡ３）、図１２Ｂに示すように、ユーザが通知部９の画面上で「撮影ボタン」を押すと、合焦確認部３３の作動により、図１２Ｃに示すように、ユーザは、撮影領域Ａにおいてフォーカス位置を調整することを通知部９の画面上で促される（ステップＳＣ３)。

ユーザが、撮影領域Ａのいずれかの深さ位置にいる細胞Ｓに合わせてフォーカス位置を調整して、図１２Ｃに示すように通知部９の画面上で「ＯＫ」ボタンを押すと、撮影指示部２７からの指示によって撮影部１１が作動して、撮影領域Ａにおいて変更したフォーカス位置の画像が取得され（ステップＳＡ４）、記録部１７に記録される（ステップＳＡ５）。

ユーザは、培養容器３の撮影領域Ａでの撮影枚数が十分か否かを判断し（ステップＳＣ５）、撮影領域Ａでの撮影枚数が十分でないと判断した場合は、ステップＳＣ３に戻る。そして、撮影領域Ａにおいて、ステップＳＣ３、ＳＡ４，ＳＡ５を繰り返し、異なる深さ位置にいる他の細胞Ｓに合わせてフォーカス位置を調整して、画像を取得する。

撮影領域Ａにおいて、この作業を繰り返し、異なる深さに存在する複数の細胞Ｓの画像を漏らさず取得して記録させる。そして、ユーザは、撮影領域Ａでの撮影枚数が十分と判断した場合は、図１２Ｃに示す通知部９の画面上で「Ｃａｎｃｅｌ」ボタンを押し、図１２Ｂに示す「撮影ボタン」と「撮影終了ボタン」の画面に戻る。

続いて、ユーザは、培養容器３の撮影領域の数が十分か否かを判断する（ステップＳＡ６）。そして、他の撮影領域Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅについても、撮影領域Ａと同様にステップＳＡ３，ＳＣ３，ＳＡ４、ＳＡ５、ＳＣ５の作業を繰り返し、撮影領域Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅごとにフォーカス位置を複数箇所に変更しながら確認および調整して複数のフォーカス位置の画像を取得し記録部１７に記録させる。

培養容器３内の全ての撮影領域Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅの画像を取得したら、ユーザは、図１２Ｂに示す通知部９の画面上の「撮影終了ボタン」を押して、撮影終了指示部２９により複数画像撮影モードを終了する（ステップＳＡ７）。複数画像撮影モードが終了すると、計数部１９により、記録部１７に記録されている撮影領域Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅで撮影された画像が読み出され、各画像に含まれている細胞Ｓの数または密度が計数される（ステップＳＡ８）。

次いで、合計値算出部４３により、撮影領域Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅごとに、フォーカス位置が異なる複数の画像においてそれぞれ計数された細胞Ｓの数または密度が合算されて、撮影領域Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅごとに合計値が算出される（ステップＳＣ８）。

次いで、評価値算出部２１により、合計値算出部４３によって算出された各撮影領域Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅの細胞Ｓの数または密度の合計値に基づいて、評価値Ｖが算出される（ステップＳＡ９）。ステップＳＡ１０，１１については、第１実施形態と同様であるので説明を省略する。

以上説明したように、本実施形態に係る定量評価装置４１によれば、例えば、図１０に示すように、培養容器３に細胞Ｓを播種した直後で細胞Ｓが浮遊しているために、各撮影領域において１箇所のフォーカス位置では画像に全ての細胞Ｓが含まれない場合において、合焦確認部３３によるフォーカス位置の調整の催促に従って、ユーザは撮影領域ごとにフォーカス位置を変更して複数のフォーカス位置の画像を取得し、各撮影領域に存在する複数の細胞Ｓの画像を漏らさず取得することができる。そして、評価値算出部２１により、同一の撮影領域での複数のフォーカス位置での画像の細胞Ｓの数または密度の合計値に基づいて、評価値Ｖを精度よく算出することができる。したがって、細胞Ｓの分布が均一か否かを定量的により精度よく評価して操作者に知らせることができる。

本実施形態においては、同一の撮影領域での異なる複数のフォーカス位置での画像において計数部１９により計数された細胞Ｓの数または密度の合計値を算出する合計値算出部４３を備えることとしたが、これに代えて、同一の撮影領域での異なる複数のフォーカス位置での画像において計数部１９により計数された細胞Ｓの数または密度の平均値を算出する平均値算出部を備えることとしてもよい。

以上、本発明の実施形態について図面を参照して詳述してきたが、具体的な構成はこの実施形態に限られるものではなく、本発明の要旨を逸脱しない範囲の設計変更等も含まれる。例えば、本発明を上記各実施形態および変形例に適用したものに限定されることなく、これらの実施形態および変形例を適宜組み合わせた実施形態に適用してもよく、特に限定されるものではない。

また、例えば、評価値算出部２１が、異なる撮影領域の画像において計数された細胞Ｓの数または密度の標準偏差に基づいて、評価値Ｖを算出することとしてもよい。
このようにすることで、撮影領域ごとに細胞Ｓの分布状況を把握することができる。また、撮影領域の数が多ければ多いほど、培養容器３内の細胞Ｓのより詳細な分布状況が分かる。

また、例えば、評価値算出部２１が、異なる撮影領域の画像において計数された細胞Ｓの数または密度の内、最大値と最小値との差に基づいて、評価値Ｖを算出することとしてもよい。
このようにすることで、培養容器３内の細胞Ｓの大凡の分布状況を簡易に把握することができる。

１，３１，４１ 定量評価装置
９ 通知部（表示部）
１１ 撮影部
１９ 計数部
２１ 評価値算出部
２３ 判定部
３３ 合焦確認部（フォーカス調整確認部）
Ｓ 細胞

Claims (6)

1. 細胞を培養する培養容器内の複数の撮影領域の各画像に含まれる前記細胞の数または密度を計数する計数部と、
   該計数部により計数された前記画像ごとの前記細胞の数または密度に基づいて、前記培養容器内の前記細胞の分布のばらつきに関する評価値を算出する評価値算出部と、
   該評価値算出部により算出された前記評価値が所定の閾値の範囲内か否かを判定する判定部と、
   該判定部による判定結果を表示する表示部とを備える定量評価装置。
2. 前記評価値算出部が、異なる前記撮影領域の前記画像において計数された前記細胞の数または密度の比率に基づいて、前記評価値を算出する請求項１に記載の定量評価装置。
3. 前記評価値算出部が、異なる前記撮影領域の前記画像において計数された前記細胞の数または密度の標準偏差に基づいて、前記評価値を算出する請求項１に記載の定量評価装置。
4. 前記評価値算出部が、異なる前記撮影領域の前記画像において計数された前記細胞の数または密度の内、最大値と最小値との差に基づいて、前記評価値を算出する請求項１に記載の定量評価装置。
5. フォーカス位置を調整可能な撮影部と、
   前記撮影領域ごとに前記撮影部の前記フォーカス位置を調整するか否かを操作者に確認するフォーカス調整確認部とを備える請求項１から請求項４のいずれかに記載の定量評価装置。
6. 前記フォーカス調整確認部が、同一の前記撮影領域での前記フォーカス位置の調整を促し、
   前記評価値算出部が、同一の前記撮影領域での異なる前記フォーカス位置での前記画像において計数された前記細胞の数または密度の合計値または平均値に基づいて、前記評価値を算出する請求項５に記載の定量評価装置。

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