JPWO2017018336A1

JPWO2017018336A1 - Anti-inflammatory agent

Info

Publication number: JPWO2017018336A1
Application number: JP2017530833A
Authority: JP
Inventors: 恵三河野; 丸田　和彦; 和彦丸田; 崇行北村; 章弘藤田; 森　哲也; 哲也森; 西本　友之; 友之西本; 惠温福田
Original assignee: Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo KK
Current assignee: Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo KK
Priority date: 2015-07-29
Filing date: 2016-07-22
Publication date: 2018-05-17
Anticipated expiration: 2036-07-22
Also published as: WO2017018336A1; JP6729913B2

Abstract

炎症症状の緩和、改善、さらには炎症性疾患の予防、治療に効果的で、且つ、副作用が少ない安全な抗炎症剤を提供することを課題とし、また、前記抗炎症剤を含有する化粧品、医薬部外品、食品及び医薬品を提供することを課題とし、７分子内にケトアルドヘキソース構造を有する糖質を有効成分として含有する抗炎症剤及び前記抗炎症剤を含有する化粧品、医薬部外品、食品及び医薬品を提供することにより上記課題を解決する。An object of the present invention is to provide a safe anti-inflammatory agent that is effective in alleviating and improving inflammatory symptoms, further preventing or treating inflammatory diseases, and having few side effects, and a cosmetic containing the anti-inflammatory agent, An anti-inflammatory agent containing as an active ingredient a carbohydrate having a ketoaldhexose structure in 7 molecules, and a cosmetic or quasi-drug containing the anti-inflammatory agent, with the objective of providing quasi-drugs, foods and pharmaceuticals The above problems are solved by providing products, foods, and pharmaceuticals.

Description

本発明は、抗炎症剤に関し、詳細には、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）及びインターロイキン８（ＩＬ−８）の産生を抑制することにより抗炎症作用を発揮する、抗炎症剤に関するものである。 The present invention relates to an anti-inflammatory agent, and more particularly, to an anti-inflammatory agent that exerts an anti-inflammatory effect by suppressing the production of tumor necrosis factor α (TNF-α) and interleukin 8 (IL-8). It is.

炎症は、生体組織に何らかの有害な刺激を起こす物質（起炎物質）が作用したときに生体が示す局所での一過性の反応であり、生体防御反応の一種である。しかしながら、生体組織に対してもダメージを与えることから、炎症が慢性化した場合、過剰な炎症反応はかえって有害となる。近年、生活スタイルの変化や、大気汚染、排気ガスや過度の紫外線への暴露などによる酸化ストレスの増大などにより、多種多様な炎症性疾患に関する患者数が全体として増大傾向にある。 Inflammation is a local transient reaction exhibited by the living body when a substance that causes some harmful stimulus (flame-causing substance) acts on living tissue, and is a kind of biological defense reaction. However, since it also damages biological tissues, when inflammation becomes chronic, an excessive inflammatory reaction is rather harmful. In recent years, the number of patients related to a wide variety of inflammatory diseases has been increasing as a whole due to changes in lifestyle, increased oxidative stress due to air pollution, exposure to exhaust gas and excessive ultraviolet rays, and the like.

スキンケア製品などの化粧品、歯磨きなどの医薬部外品及び口内炎治療剤などの医薬品の抗炎症成分として、グリチルリチン酸ジカリウム（以下、「ＧＫ２」と略称する場合がある）が幅広く利用されている。しかしながら、ＧＫ２は、マメ科の植物であるカンゾウ（甘草）の根に含まれるグリチルリチン酸の誘導体であり、優れた抗炎症効果を有するものの、ステロイド様作用を有するため、配合比率、使用量の上限が厳しく規定されている。このような状況下、炎症症状の緩和、改善に加え、炎症性疾患の予防、治療のために安心して利用できる抗炎症剤が求められている。 Dipotassium glycyrrhizinate (hereinafter sometimes abbreviated as “GK2”) is widely used as an anti-inflammatory component in cosmetics such as skin care products, quasi-drugs such as toothpaste, and pharmaceuticals such as stomatitis treatment agents. However, GK2 is a derivative of glycyrrhizic acid contained in the roots of licorice (licorice), a leguminous plant, and has an excellent anti-inflammatory effect, but has a steroid-like action, so the upper limit of the compounding ratio and amount used Is strictly regulated. Under such circumstances, there is a demand for an anti-inflammatory agent that can be used with peace of mind for the prevention and treatment of inflammatory diseases in addition to alleviation and improvement of inflammatory symptoms.

一般に糖質は、安全性が高い化合物として認識されており、近年、各種糖質の抗炎症剤としての利用が提案されている。特許文献１には、グルコ二糖であるニゲロース（３−Ｏ−α−グルコシルグルコース）やこれを多く含むニゲロオリゴ糖が炎症性サイトカインであるＴＮＦ−α又はインターロイキン６（ＩＬ−６）の産生を抑制し、抗炎症剤として使用できることが開示されている。また、特許文献２には、アガロース（寒天）をβ−アガラーゼによって分解して得られるネオアガロビオース、ネオアガロテトラオース及びネオアガロヘキサオースからなる糖類がＩＬ−６の産生を抑制し、抗炎症剤として使用できることが開示されている。さらに、非特許文献１には、ケトヘキソースの一種であるＤ−プシコースが抗炎症作用を有することが開示されている。加えて、特許文献３には、トレハロースとコンドロイチン硫酸とを含有する抗炎症用食品が開示されている。 In general, carbohydrates are recognized as highly safe compounds, and in recent years, the use of various carbohydrates as anti-inflammatory agents has been proposed. In Patent Document 1, nigerose (3-O-α-glucosylglucose), which is a glucodisaccharide, and nigerooligosaccharide containing a large amount thereof, produce TNF-α or interleukin 6 (IL-6), which are inflammatory cytokines. It is disclosed that it can be suppressed and used as an anti-inflammatory agent. In Patent Document 2, a saccharide composed of neoagarobiose, neoagarotetraose and neoagarohexaose obtained by degrading agarose (agar) with β-agarase suppresses IL-6 production. It can be used as an anti-inflammatory agent. Furthermore, Non-Patent Document 1 discloses that D-psicose, which is a kind of ketohexose, has an anti-inflammatory action. In addition, Patent Document 3 discloses an anti-inflammatory food containing trehalose and chondroitin sulfate.

しかしながら、上記の糖質を有効成分とする抗炎症剤は、安全性が高い半面、抗炎症作用が比較的弱く、多量に用いないと所期の効果が得られない場合があるなどの問題点があった。このような状況下、炎症症状の緩和、改善に加え、炎症性疾患の予防、治療のために、より効果的で、且つ、副作用が少ない安全な抗炎症剤の開発が望まれている。 However, the anti-inflammatory agent containing the above-mentioned carbohydrate as an active ingredient is highly safe, but has a relatively weak anti-inflammatory action, and the desired effect may not be obtained unless it is used in a large amount. was there. Under such circumstances, in addition to alleviating and improving inflammatory symptoms, development of safe anti-inflammatory agents that are more effective and have fewer side effects is desired for the prevention and treatment of inflammatory diseases.

特許第５４４４４２５号公報Japanese Patent No. 5444425 特許第５１５４７６２号公報Japanese Patent No. 5154762 特許第３２４７８７３号公報Japanese Patent No. 3247873

ムラオ（Ｋ. Ｍｕｒａｏ）ら、『ライフサイエンス（ＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ）』、第８１巻、５９２−５９９（２００７年）Murao et al., “Life Sciences”, Vol. 81, 592-599 (2007)

本発明は、炎症症状の緩和、改善、さらには炎症性疾患の予防、治療に効果的で、且つ、副作用が少ない安全な抗炎症剤を提供することを課題とし、また、前記炎症剤を含有する化粧品、医薬部外品、食品及び医薬品を提供することを課題とするものである。さらに、分子内にアルドヘキソース構造を有する糖質の抗炎症作用向上方法を提供することを課題とするものである。 An object of the present invention is to provide a safe anti-inflammatory agent that is effective in alleviating and improving inflammatory symptoms, and further preventing or treating inflammatory diseases and has few side effects, and contains the inflammatory agent. It is an object to provide cosmetics, quasi-drugs, foods and pharmaceuticals. It is another object of the present invention to provide a method for improving the anti-inflammatory action of a carbohydrate having an aldohexose structure in the molecule.

本発明者らは、一般的に安全性が高いと期待される糖質を対象に、従来から抗炎症作用を有することが知られている上記糖質より強い抗炎症作用を有する物質を探索した。具体的には、生体における過剰な炎症反応の多くが、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）、インターロイキン６（ＩＬ−６）、インターロイキン８（ＩＬ−８）などの炎症性サイトカインの過剰な産生が原因であることに注目し、これらの炎症性サイトカインの産生の抑制を指標にして強い抗炎症作用を有する糖質を探索した。その結果、分子内にケトアルドヘキソース構造を有する糖質が、炎症性サイトカインの産生を抑制する作用を強く示しながら、同時に有効な濃度では細胞障害性を示さず、副作用が少ない安全な抗炎症剤の有効成分として利用できることを見出し、本発明を完成させた。 The present inventors searched for substances having an anti-inflammatory action stronger than the above-mentioned sugars that have been conventionally known to have an anti-inflammatory action for carbohydrates that are generally expected to have high safety. . Specifically, many of the excessive inflammatory reactions in the living body are caused by excess of inflammatory cytokines such as tumor necrosis factor α (TNF-α), interleukin 6 (IL-6), and interleukin 8 (IL-8). Focusing on the cause of production, we searched for carbohydrates having a strong anti-inflammatory action using the suppression of production of these inflammatory cytokines as an index. As a result, a carbohydrate having a ketoaldhexose structure in the molecule strongly shows the action of suppressing the production of inflammatory cytokines, but at the same time, it does not show cytotoxicity at an effective concentration, and is a safe anti-inflammatory agent with few side effects The present invention was completed by finding that it can be used as an active ingredient.

すなわち、本発明は、分子内にケトアルドヘキソース構造を有する糖質を有効成分として含有する抗炎症剤を提供することにより上記課題を解決するものである。 That is, this invention solves the said subject by providing the anti-inflammatory agent which contains the carbohydrate which has keto aldohexose structure in a molecule | numerator as an active ingredient.

また、本発明は、分子内にケトアルドヘキソース構造を有する糖質を有効成分とする抗炎症剤を含有する化粧品、医薬部外品、食品及び医薬品を提供することにより上記の課題を解決するものである。 In addition, the present invention solves the above problems by providing a cosmetic, quasi-drug, food, and pharmaceutical containing an anti-inflammatory agent containing a carbohydrate having a ketoaldhexose structure in the molecule as an active ingredient. It is.

さらに、本発明は、分子内にアルドヘキソース構造を有する糖質において、そのアルドヘキソース構造における他の糖質又は置換基と結合していないフリーの水酸基をケト基に変換することを特徴とする分子内にアルドヘキソース構造を有する糖質の抗炎症作用向上方法を提供することにより上記の課題を解決するものである。 Further, the present invention provides a molecule characterized in that in a saccharide having an aldohexose structure in the molecule, a free hydroxyl group not bonded to another saccharide or substituent in the aldhexose structure is converted to a keto group. The above-described problems are solved by providing a method for improving the anti-inflammatory action of a carbohydrate having an aldohexose structure therein.

本発明によれば、炎症性サイトカインの産生を抑制する、副作用が少ない安全な抗炎症剤を提供することができる。また、本発明の抗炎症剤によれば、ＴＮＦ−α、ＩＬ−８などの炎症性サイトカインの産生を顕著に抑制することができるので、これら炎症性サイトカインの過剰産生に起因する炎症症状の緩和、改善に、さらには炎症性疾患の予防、治療に用いることができる。したがって、本発明の抗炎症剤は、化粧品、医薬部外品、食品、医薬品等の経口剤、外用剤として有利に利用でき、とりわけ、皮膚の炎症に対する抗炎症剤としては、十分な抗炎症作用を有し、高い安全性を有しているため、有利に利用できる。 According to the present invention, a safe anti-inflammatory agent that suppresses the production of inflammatory cytokines and has few side effects can be provided. In addition, according to the anti-inflammatory agent of the present invention, production of inflammatory cytokines such as TNF-α and IL-8 can be remarkably suppressed, so that alleviation of inflammatory symptoms caused by excessive production of these inflammatory cytokines is reduced. It can be used for improvement, and further for prevention and treatment of inflammatory diseases. Therefore, the anti-inflammatory agent of the present invention can be advantageously used as an oral preparation or an external preparation for cosmetics, quasi-drugs, foods, pharmaceuticals, etc., and in particular, as an anti-inflammatory agent for skin inflammation, sufficient anti-inflammatory action Since it has high safety, it can be advantageously used.

３−ケトトレハロース標品のＨＰＬＣクロマトグラムである。It is a HPLC chromatogram of a 3-ketotrehalose sample. ３−ケトトレハロース標品の^１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルである。It is a ¹³ C-NMR spectrum of a 3-ketotrehalose preparation.

本発明は、分子内にケトアルドヘキソース構造を有する糖質を有効成分として含有する抗炎症剤に関するものである。 The present invention relates to an anti-inflammatory agent containing a carbohydrate having a ketoaldhexose structure in the molecule as an active ingredient.

本発明でいう「分子内にケトアルドヘキソース構造を有する糖質」とは、アルドヘキソース（１位にアルデヒド基を有する六炭糖）において、他の糖質又は置換基と結合していないフリーの水酸基のいずれかが酸化されケト基に変換された構造を分子内に有する糖質及びその誘導体全般を意味する。「分子内にケトアルドヘキソース構造を有する糖質」は、その由来、製法を問わず、有機化学的に合成したものであっても、微生物酵素を原料糖質又はその誘導体に作用させる方法（酵素法）により得られるものであっても、また、原料糖質又はその誘導体を炭素源として微生物を培養し変換させる方法（発酵法）により培養液中に得られるものであってもよい。因みに、ヘキソース（六炭糖）は、１位にアルデヒド基を有するアルドヘキソースと、２位にケトン基を有するケトヘキソースに分類され、アルドヘキソースとしては、アロース、アルトロース、グルコース、マンノース、グロース、イドース、ガラクトース及びタロースの８種が知られている。また、ケトヘキソースとしては、プシコース、フラクトース、ソルボース及びタガトースの４種が知られている。本発明でいう「分子内にケトアルドヘキソース構造を有する糖質」は、通常、天然における存在比の高いＤ体により構成される。 The “saccharide having a ketoaldhexose structure in the molecule” as used in the present invention is a free carbohydrate that is not bonded to other carbohydrates or substituents in aldohexose (hexose sugar having an aldehyde group at the 1-position). It means a saccharide having a structure in which any one of hydroxyl groups is oxidized and converted into a keto group in the molecule and derivatives thereof. A "carbohydrate having a ketoaldhexose structure in the molecule" is a method (enzyme) that causes a microbial enzyme to act on a raw sugar or a derivative thereof, even if it is synthesized organically, regardless of its origin or production method. May be obtained by a method (fermentation method) by culturing and converting microorganisms using a raw sugar or a derivative thereof as a carbon source. Incidentally, hexose (hexose) is classified into aldohexose having an aldehyde group at the 1st position and ketohexose having a ketone group at the 2nd position, and as the aldohexose, allose, altrose, glucose, mannose, gulose, Eight kinds of idose, galactose and talose are known. Also, four types of ketohexose are known: psicose, fructose, sorbose and tagatose. The “carbohydrate having a ketoald hexose structure in the molecule” as used in the present invention is usually constituted by a D-form having a high abundance ratio in nature.

本発明の抗炎症剤において有効成分として用いる「分子内にケトアルドヘキソース構造を有する糖質」は特に限定されないものの、アルドヘキソースの３位水酸基又は２位水酸基が酸化されケト基に変換された３−ケトアルドヘキソース構造又は２−ケトアルドヘキソース構造を分子内に有する糖質及びその誘導体が好適に用いられる。斯かる分子内に３−ケトアルドヘキソース構造を有する糖質及びその誘導体（以下、本明細書では「３−ケト糖」と略称する。）又は２−ケトアルドヘキソース構造を有する糖質及びその誘導体（以下、本明細書では「２−ケト糖」と略称する。）は、単糖であっても、ホモ又はヘテロの二糖以上のオリゴ糖、さらには多糖であっても好適に用いることができる。 Although the “carbohydrate having a keto aldohexose structure in the molecule” used as an active ingredient in the anti-inflammatory agent of the present invention is not particularly limited, the hydroxyl group at the 3-position or 2-position of the aldohexose is oxidized and converted to a keto group. -Carbohydrates having a keto aldohexose structure or 2-keto aldohexose structure in the molecule and derivatives thereof are preferably used. A saccharide having a 3-ketoaldhexose structure and a derivative thereof (hereinafter, abbreviated as “3-ketosaccharide” in the present specification) or a saccharide having a 2-ketoaldhexose structure and a derivative thereof. (Hereinafter, abbreviated as “2-keto sugar” in the present specification) can be suitably used even if it is a monosaccharide, a homo or hetero disaccharide or higher oligosaccharide, or a polysaccharide. it can.

＜３−ケト糖＞
本発明における３−ケト糖に包含される単糖としては、例えば、グルコースの３位水酸基が酸化されケト基に変換された３−ケトグルコース、ガラクトースの３位水酸基が酸化されケト基に変換された３−ケトガラクトースなどが挙げられる。また、単糖の誘導体としては、例えば、メチルα−グルコシド又はメチルβ−グルコシドのそれぞれのグルコース残基の３位水酸基が酸化されケト基に変換されたメチルα−３−ケトグルコシド又はメチルβ−３−ケトグルコシド、メチルα−ガラクトシド又はメチルβ−ガラクトシドのそれぞれのガラクトース残基の３位水酸基が酸化されケト基に変換されたメチルα−３−ケトガラクトシド又はメチルβ−３−ケトガラクトシドなどが挙げられる。また、その他の単糖の誘導体としては、例えば、１，５−アンヒドログルシトールの３位水酸基が酸化されケト基に変換された１，５−アンヒドロ−３−ケトグルシトールなどが挙げられる。<3-keto sugar>
Examples of the monosaccharides included in the 3-keto sugar in the present invention include 3-ketoglucose in which the 3-position hydroxyl group of glucose is oxidized and converted to a keto group, and the 3-position hydroxyl group of galactose is oxidized and converted to a keto group. 3-ketogalactose. Examples of monosaccharide derivatives include, for example, methyl α-3-ketoglucoside or methyl β-, wherein the hydroxyl group at the 3-position of each glucose residue of methyl α-glucoside or methyl β-glucoside is oxidized and converted to a keto group. Examples include methyl α-3-ketogalactoside or methyl β-3-ketogalactoside in which the 3-position hydroxyl group of each galactose residue of 3-ketoglucoside, methyl α-galactoside or methyl β-galactoside is oxidized and converted to a keto group Can be mentioned. Examples of other monosaccharide derivatives include 1,5-anhydro-3-ketoglucitol in which the 3-position hydroxyl group of 1,5-anhydroglucitol is oxidized and converted to a keto group.

本発明における３−ケト糖に包含される二糖としては、例えば、グルコース２分子が結合した還元性グルコ二糖であるコージビオース（２−Ｏ−α−グルコシルグルコース）、ニゲロース（３−Ｏ−α−グルコシルグルコース）、マルトース（４−Ｏ−α−グルコシルグルコース）、イソマルトース（６−Ｏ−α−グルコシルグルコース）及びセロビオース（４−Ｏ−β−グルコシルグルコース）の、非還元末端側のグルコース残基の３位水酸基がそれぞれ酸化されケト基に変換された３−ケトコージビオース（２−Ｏ−α−３−ケトグルコシルグルコース）、３−ケトニゲロース（３−Ｏ−α−３−ケトグルコシルグルコース）、３−ケトマルトース（４−Ｏ−α−３−ケトグルコシルグルコース）、３−ケトイソマルトース（６−Ｏ−α−３−ケトグルコシルグルコース）及び３−ケトセロビオース（４−Ｏ−β−３−ケトグルコシルグルコース）；
非還元性グルコ二糖であるトレハロース（α−グルコシルα−グルコシド、α、α−トレハロース）、ネオトレハロース（α−グルコシルβ−グルコシド、α，β−トレハロース）、又はイソトレハロース（β−グルコシルβ−グルコシド、β，β−トレハロース）を構成する一方のグルコース残基の３位水酸基がケト基に変換された３−ケトトレハロース、３−ケトネオトレハロース、又は３−ケトイソトレハロース；
トレハロース、ネオトレハロース、又はイソトレハロースを構成する２分子のグルコース残基の２つの３位水酸基がいずれもケト基に変換された３，３´−ジケトトレハロース、３、３´−ジケトネオトレハロース、又は３，３´−ジケトイソトレハロース；
異なる単糖同士が結合したヘテロ二糖である、例えば、グルコースとフラクトースとで構成される非還元性ヘテロ二糖であるスクロース又はイソマルツロースのグルコース残基の３位水酸基がケト基に変換された３−ケトスクロース（Ｏ−α−３−ケトグルコシル（１→２）β−フラクトシド）又は３−ケトイソマルツロース（６−Ｏ−α−３−ケトグルコシルフラクトース）；
ガラクトースとグルコースとで構成される還元性ヘテロ二糖であるラクトース（４−Ｏ−β−ガラクトシルグルコース）のガラクトース残基の３位水酸基がケト基に変換された３−ケトラクトース（４−Ｏ−β−３−ケトガラクトシルグルコース）；が挙げられ、
３−ケト糖に包含される二糖の誘導体としては、マルトース、又はイソマルトースの還元末端グルコースのアルデヒド基が還元された糖アルコールであるマルチトール、又はイソマルチトールのグルコース残基の３位水酸基がさらにケト基に変換された３−ケトマルチトール（４−Ｏ−α−３−ケトグルコシルソルビトール）、又は３−ケトイソマルチトール（６−Ｏ−α−３−ケトグルコシルソルビトール）；ラクトースの還元末端グルコースのアルデヒド基が還元された糖アルコールであるラクチトールの、ガラクトース残基の３位水酸基がさらにケト基に変換された３−ケトラクチトール（４−Ｏ−β−３−ケトガラクトシルソルビトール）；などが挙げられる。Examples of the disaccharides included in the 3-ketosaccharide in the present invention include cordierbiose (2-O-α-glucosylglucose) and nigerose (3-O-α), which are reducing glucodisaccharides in which two molecules of glucose are bound. -Glucosylglucose), maltose (4-O-α-glucosylglucose), isomaltose (6-O-α-glucosylglucose) and cellobiose (4-O-β-glucosylglucose) on the non-reducing terminal side 3-ketocodibiose (2-O-α-3-ketoglucosylglucose) and 3-ketonigerose (3-O-α-3-ketoglucosylglucose) in which the 3-position hydroxyl group of each group is oxidized and converted into a keto group ), 3-ketomaltose (4-O-α-3-ketoglucosylglucose), 3-ketoisomaltose (6-O-α-3- DOO glucosyl glucose) and 3- Ketoserobiosu (4-O-β-3- keto glucosyl glucose);
Non-reducing glucodisaccharide trehalose (α-glucosyl α-glucoside, α, α-trehalose), neotrehalose (α-glucosyl β-glucoside, α, β-trehalose), or isotrehalose (β-glucosyl β- 3-ketotrehalose, 3-ketoneotrehalose, or 3-ketoisotrehalose in which the hydroxyl group at the 3-position of one glucose residue constituting glucoside (β, β-trehalose) is converted to a keto group;
3,3′-diketotrehalose and 3,3′-diketonoretrehalose in which two 3-position hydroxyl groups of two glucose residues constituting trehalose, neotrehalose or isotrehalose are both converted to keto groups Or 3,3′-diketoisotrehalose;
The 3-position hydroxyl group of the glucose residue of sucrose or isomaltulose, which is a non-reducing heterodisaccharide composed of glucose and fructose, which is a heterodisaccharide in which different monosaccharides are bonded to each other, is converted to a keto group 3-ketosucrose (O-α-3-ketoglucosyl (1 → 2) β-fructoside) or 3-keto isomaltulose (6-O-α-3-ketoglucosyl fructose);
3-ketolactose (4-O-) in which the 3-position hydroxyl group of the galactose residue of lactose (4-O-β-galactosylglucose), which is a reducing heterodisaccharide composed of galactose and glucose, is converted to a keto group. β-3-ketogalactosyl glucose);
Examples of disaccharide derivatives included in 3-ketosugar include maltose, maltitol, which is a sugar alcohol in which the aldehyde group of the reducing terminal glucose of isomaltose is reduced, or the 3-position hydroxyl group of the glucose residue of isomaltol Of 3-ketomaltitol (4-O-α-3-ketoglucosyl sorbitol) or 3-ketoisomaltitol (6-O-α-3-ketoglucosyl sorbitol) in which is further converted to a keto group; 3-ketolactitol (4-O-β-3-ketogalactosylsorbitol) in which the 3-position hydroxyl group of the galactose residue of lactitol, which is a sugar alcohol in which the aldehyde group of the reducing end glucose is reduced, is further converted to a keto group; Etc.

本発明における３−ケト糖に包含される三糖としては、例えば、メレチトース（３^Ｆ−Ｏ−α−グルコシルスクロース）、エルロース（４^Ｇ−Ｏ−α−グルコシルスクロース）の末端グルコース残基の３位水酸基がケト基に変換された３−ケトメレチトース（３^Ｆ−Ｏ−α−３−ケトグルコシルスクロース）及び３−ケトエルロース（４^Ｇ−Ｏ−α−３−ケトグルコシルスクロース）や、マルトトリオースの非還元末端グルコース残基の３位水酸基がケト基に変換された３−ケトマルトトリオース（４−Ｏ−α−３−ケトグルコシルマルトース）などが挙げられる。Examples of the trisaccharide included in the 3-ketosaccharide in the present invention include 3 of the terminal glucose residues of meretitol (3 ^F- O-α-glucosyl sucrose) and erulose (4 ^G- O-α-glucosyl sucrose). position hydroxyl group converted 3- Ketomerechitosu the keto group ⁽³ F ^-O-α-3- keto glucosyl sucrose) and 3- Ketoerurosu ⁽⁴ G ^-O-α-3- keto glucosyl sucrose) or maltotriose Examples include 3-ketomaltotriose (4-O-α-3-ketoglucosyl maltose) in which the hydroxyl group at the 3-position of the non-reducing terminal glucose residue is converted to a keto group.

分子内にアルドヘキソース構造を有する糖質が、分子内にアルドヘキソース構造を複数有する場合、通常、非還元末端のアルドヘキソースの３位水酸基のみが酸化によりケト化され、３−ケト糖となる。３−ケト糖においては、３−ケトアルドヘキソース構造が抗炎症作用の発揮に関与していると考えられ、分子内において３−ケトアルドヘキソース構造の占める割合が高いものほど強い抗炎症作用を発揮すると考えられる。この観点からは、３−ケト糖としては、分子内の３−ケトアルドヘキソース構造が占める割合の多い二糖又は単糖が抗炎症剤の有効成分として、とりわけ有用である。 When a carbohydrate having an aldohexose structure in the molecule has a plurality of aldohexose structures in the molecule, usually only the 3-position hydroxyl group of the non-reducing terminal aldohexose is ketolated by oxidation to become a 3-keto sugar. In 3-ketosugar, the 3-keto aldohexose structure is considered to be involved in the exertion of the anti-inflammatory action, and the higher the proportion of the 3-keto aldohexose structure in the molecule, the stronger the anti-inflammatory action is exerted. I think that. From this point of view, disaccharides or monosaccharides having a large proportion of the 3-keto aldohexose structure in the molecule are particularly useful as 3-keto sugars as active ingredients of anti-inflammatory agents.

しかしながら、３−ケト糖が単糖である場合、その１位水酸基はアルデヒド基の構造をとり得ることから還元力を示し、さらに３位のケト基がさらに還元力を示すことから反応性に富み、化合物としては不安定となる。本発明の抗炎症剤の有効成分としては、より安定な３−ケト糖が望ましく、単糖である場合は、その１位水酸基が糖以外の置換基と結合することにより、アルデヒド基の構造を取らずに３位のケト基のみが還元力を示すものがより好適である。このような３−ケト糖の単糖としては、例えば、１位水酸基がメチル化されているメチルα−３−ケトグルコシド、メチルβ−３−ケトグルコシドが挙げられる。 However, when the 3-keto sugar is a monosaccharide, the hydroxyl group at the 1-position can take the structure of an aldehyde group and thus exhibits a reducing power, and the keto group at the 3-position further exhibits a reducing power and thus is highly reactive. As a compound, it becomes unstable. As the active ingredient of the anti-inflammatory agent of the present invention, a more stable 3-keto sugar is desirable, and when it is a monosaccharide, the hydroxyl group at the 1-position is bonded to a substituent other than the sugar, thereby changing the structure of the aldehyde group. It is more preferable that only the keto group at the 3 position shows a reducing power without taking it. Examples of such 3-ketosugar monosaccharides include methyl α-3-ketoglucoside and methyl β-3-ketoglucoside in which the hydroxyl group at the 1-position is methylated.

３−ケト糖が還元性の二糖の場合は、通常、非還元末端側のアルドヘキソースの３位水酸基のみがケト基に変換され、当該アルドヘキソースの１位は他の糖と結合しており同一アルドヘキソース分子内に還元力を示すアルデヒド基がなく、より安定であるため好適に用いることができる。さらには、非還元性の二糖であるトレハロースやスクロースから得られる３−ケトトレハロース、３−ケトスクロースや、トレハロースから得られる３，３´−ジケトトレハロースも好適に用いられる。 When the 3-keto sugar is a reducing disaccharide, usually, only the 3-position hydroxyl group of the aldohexose on the non-reducing end side is converted into a keto group, and the 1-position of the aldohexose is bound to another sugar. Since there is no aldehyde group which shows a reducing power in the same aldohexose molecule and it is more stable, it can be preferably used. Furthermore, 3-ketotrehalose and 3-ketosucrose obtained from trehalose and sucrose, which are non-reducing disaccharides, and 3,3′-diketotrehalose obtained from trehalose are also preferably used.

同様の理由で、二糖の還元末端グルコースのアルデヒド基が還元された糖アルコールは、還元性を示さず化合物としてはさらに安定であるため、好適に用いることができる。そのような、３−ケト糖の二糖の糖アルコールとしては、例えば、３−ケトマルチトール、３−ケトイソマルチトール、３−ケトラクチトールが挙げられる。 For the same reason, sugar alcohols in which the aldehyde group of the reducing sugar at the disaccharide of the disaccharide has been reduced can be suitably used because it does not show reducibility and is more stable as a compound. Examples of such a dike sugar alcohol of 3-keto sugar include 3-keto maltitol, 3-keto isomaltitol, and 3-ketolactitol.

本発明における３−ケト糖は、３−ケトアルドヘキソース構造を有する糖質である限り、特に限定されないものの、分子内にグルコース構造又はガラクトース構造を有する糖質は、天然に多く存在し、また、これら糖質からは酵素法又は発酵法での３−ケト糖の生成率が高いため、本発明を産業上有利に実施する目的においては、３−ケト糖として分子内に３−ケトグルコース構造又は３−ケトガラクトース構造を有する糖質がとりわけ好適に用いられる。 The 3-keto sugar in the present invention is not particularly limited as long as it is a saccharide having a 3-keto aldohexose structure, but many saccharides having a glucose structure or a galactose structure in the molecule exist in nature, From these carbohydrates, the production rate of 3-ketosugar by enzyme method or fermentation method is high. Therefore, in order to implement the present invention advantageously industrially, 3-ketoglucose structure or A carbohydrate having a 3-ketogalactose structure is particularly preferably used.

通常、３−ケト糖の調製は、アルドヘキソースの３位水酸基を選択的に酸化して、目的とする３−ケト糖を製造することが出来る３−ケト糖生成酵素を用いた酵素法や発酵法により行われる。 Usually, 3-ketosugar is prepared by enzymatic oxidation or fermentation using a 3-ketosugar-forming enzyme that can selectively oxidize the 3-position hydroxyl group of aldohexose to produce the desired 3-ketosugar. Done by law.

アルドヘキソースの３位水酸基を酸化してケト基に変換する反応を触媒し、３−ケト糖を生成する酵素としては、グルコシド３−脱水素酵素（ｇｌｕｃｏｓｉｄｅ３−ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ，ＥＣ．１．１．９９．１３）やピラノース脱水素酵素（ｐｙｒａｎｏｓｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ，ＥＣ．１．１．９９．２９）などが知られている。 As an enzyme that catalyzes a reaction of oxidizing the hydroxyl group at the 3-position of aldohexose to convert it to a keto group, and produces 3-keto sugar, glucoside 3-dehydrogenase, EC 1.1.99. .13) and pyranose dehydrogenase (EC 1.1.99.29) are known.

また、グルコシド３−脱水素酵素の産生能を有する微生物としては、リゾビウム・ラジオバクター（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍｒａｄｉｏｂａｃｔｅｒ、旧分類ではアグロバクテリウム・ツメファシエンス（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｃｅ））、フラボバクテリウム・サッカロフィラム（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｕｍ）、スフィンゴバクテリウム・ファエシウム（Ｓｐｈｉｎｇｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｆａｅｃｉｕｍ）、その他ハロモナス（Ｈａｌｏｍｏｎａｓ）属、サイトファーガ（Ｃｙｔｏｐｈａｇａ）属、アガリクス（Ａｇａｒｉｃｕｓ）属に属する微生物などが挙げられる。 Examples of microorganisms having the ability to produce glucoside 3-dehydrogenase include Rhizobium radiobacter (formerly Agrobacterium tumefaciens), Flavobacterium saccharophilum (Flavocactorophum) Examples thereof include microorganisms belonging to the genus Sphingobacterium faecium, the genus Halomonas, the genus Cytophaga, and the genus Agaricus.

また、ピラノース脱水素酵素の産生能を有する微生物としては、アガリクス・ビスポラス（Ａｇａｒｉｃｕｓｂｉｓｐｏｒｕｓ）、アガリクス・メレアグリス（Ａｇａｒｉｃｕｓｍｅｌｅａｇｒｉｓ）、アガリクス・ザンソデルマ（Ａｇａｒｉｃｕｓｘａｎｔｈｏｄｅｒｍａ）、マクロレピオタ・ラコドス（Ｍａｃｒｏｌｅｐｉｏｔａｒｈａｃｏｄｅｓ）などが挙げられる。なお、ピラノース脱水素酵素は、反応条件や反応させる基質によっては、糖質のアルドヘキソースの３位水酸基を酸化するのみならず、２位及び４位の水酸基を酸化する場合があるので、３−ケト糖を選択的に調製したい場合には、アルドヘキソースの３位水酸基のみを選択的に酸化するグルコシド３−脱水素酵素がより好適に用いられる。 Examples of microorganisms capable of producing pyranose dehydrogenase include Agaricus bisporus, Agaricus meleagris, Agaricus xanthodederma, and Macrolepiota acrod. . Note that pyranose dehydrogenase not only oxidizes the hydroxyl group at the 3-position of the saccharide aldhexose depending on the reaction conditions and the substrate to be reacted, but may oxidize the hydroxyl groups at the 2- and 4-positions. When it is desired to selectively prepare a keto sugar, glucoside 3-dehydrogenase that selectively oxidizes only the hydroxyl group at the 3-position of aldohexose is more preferably used.

３−ケト糖は、通常、原料糖質又はその誘導体を含む溶液に上記のグルコシド３−脱水素酵素若しくはピラノース脱水素酵素などの３−ケト糖生成酵素を作用させ、酵素反応により変換（酸化）されて生成する３−ケト糖を反応液より回収、精製する方法で製造されるか、もしくは、原料となる糖質又はその誘導体を炭素源として含む液体培地で、上記のグルコシド３−脱水素酵素若しくはピラノース脱水素酵素などの３−ケト糖生成酵素の産生能を有する微生物を培養し、培養液中において原料糖質又はその誘導体が微生物変換（酸化）されて生成する３−ケト糖を培養液より回収、精製する方法で製造される。３−ケト糖の反応液もしくは、培養液からの回収、精製は、遠心分離による菌体や酵素の除去、培養液及び反応液上清の加熱処理により不溶化するタンパク質等の除去、アルコール沈殿処理などによる高分子多糖類の除去、活性炭による脱色、イオン交換樹脂又は電気透析器を用いた脱塩、イオン交換樹脂などを用いたクロマトグラフィー、アルコールを用いた３−ケト糖の結晶化など種々の操作を適宜組合せて行うことができる。 3-ketosugar is usually converted (oxidized) by an enzyme reaction by causing a 3-ketosugar-producing enzyme such as glucoside 3-dehydrogenase or pyranose dehydrogenase to act on a solution containing a raw sugar or a derivative thereof. In the liquid medium containing the saccharide as a raw material or a derivative thereof as a carbon source, and the glucoside 3-dehydrogenase described above. Alternatively, a microorganism capable of producing a 3-keto sugar-producing enzyme such as pyranose dehydrogenase is cultured, and 3-keto sugar produced by microbial conversion (oxidation) of the raw material carbohydrate or its derivative in the culture liquid is cultured. It is manufactured by a method of further recovery and purification. Recovery and purification of 3-ketosugar from the reaction solution or culture solution include removal of cells and enzymes by centrifugation, removal of proteins insolubilized by heat treatment of the culture solution and reaction solution supernatant, alcohol precipitation treatment, etc. Various operations such as removal of high-molecular polysaccharides using activated carbon, decolorization using activated carbon, desalting using ion exchange resin or electrodialyzer, chromatography using ion exchange resin, crystallization of 3-keto sugar using alcohol, etc. Can be combined as appropriate.

上記した種々の３−ケト糖の内、とりわけ３−ケトマルトース、３−ケトスクロース、３−ケトラクトース、３−ケトトレハロースなどの３−ケト二糖は、マルトース、スクロース、ラクトース、トレハロースなど汎用の二糖を原料として得られ、また、分子内に３−ケトグルコース構造又は３−ケトガラクトース構造を有し、いずれも結晶の形態で得られることが知られていることから、高純度品を比較的効率よく製造することができるので、本発明の抗炎症剤の有効成分として、より好適に用いることができる。 Among the various 3-keto sugars mentioned above, 3-keto disaccharides such as 3-ketomaltose, 3-ketosucrose, 3-ketolactose, and 3-ketotrehalose are generally used as maltose, sucrose, lactose, trehalose and the like. It is obtained from disaccharides, and has a 3-ketoglucose structure or 3-ketogalactose structure in the molecule, both of which are known to be obtained in crystalline form. It can be more suitably used as an active ingredient of the anti-inflammatory agent of the present invention.

＜２−ケト糖＞
本発明における２−ケト糖は、２−ケトアルドヘキソース構造を有する糖質である限り、特に限定されないものの、本発明において好適に用いられる２−ケト単糖又は２−ケト二糖としては、例えば、２−ケトグルコース（２−デヒドロ−Ｄ−グルコース）、２−ケトトレハロース、２−ケトネオトレハロース、２−ケトイソトレハロースなどが挙げられる。<2-keto sugar>
The 2-keto sugar in the present invention is not particularly limited as long as it is a saccharide having a 2-keto aldohexose structure. Examples of the 2-keto monosaccharide or 2-keto disaccharide suitably used in the present invention include 2-ketoglucose (2-dehydro-D-glucose), 2-ketotrehalose, 2-ketoneotrehalose, 2-ketoisotrehalose and the like.

２−ケト糖の調製は、通常、グルコースの２位水酸基を選択的に酸化して、２−ケトグルコースを製造することが出来るピラノース２−オキシダーゼ（ＥＣ１．１．３．１０）を用いた酵素法により行われる。また、ピラノース２−オキシダーゼの産生能を有する微生物としては、キノコ類、例えば、カワラタケ（Ｔｒａｍｅｔｅｓｖｅｒｓｉｃｏｌｏｒ、Ｔｒａｍｅｔｅｓｍｕｌｔｉｃｏｌｏｒ）、担子菌（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｆｕｎｇｕｓ）などが挙げられる。２−ケトグルコースや、２−ケトグルコースを受容体とした糖転移反応により得られる２−ケトトレハロースなどの２−ケト糖も、上述の３−ケト糖の項で述べたと同様の方法で精製、単離することができる。 For the preparation of 2-ketosugar, usually, pyranose 2-oxidase (EC 1.1.3.10) capable of producing 2-ketoglucose by selectively oxidizing the 2-position hydroxyl group of glucose was used. Enzymatic method is used. Examples of the microorganism having the ability to produce pyranose 2-oxidase include mushrooms such as Kawaratake (Trametes versicolor, Trametes multicolor) and basidiomycetes fungus. 2-ketosugar such as 2-ketoglucose and 2-ketotrehalose obtained by transglycosylation using 2-ketoglucose as a receptor is also purified by the same method as described in the above-mentioned 3-ketosugar section, It can be isolated.

後述する実験３などに示すとおり、３−ケト二糖である３−ケトトレハロース、３−ケトラクトース、３−ケトコージビオース、３−ケトイソマルトース、３−ケトマルトース、３−ケトスクロース、３−ケト二糖の糖アルコールである３−ケトマルチトール、及び、２−ケト糖である２−ケトグルコース及び２−ケトトレハロースは、ＴＮＦ−α又はＩＬ−８の産生抑制作用を有意に発揮する濃度において、細胞増殖や細胞の生存率に悪影響を及ぼすことがないことから、３−ケト糖及び２−ケト糖などの分子内にケトアルドヘキソース構造を有する糖質は、生体に適用して安全な糖質であると考えられる。 As shown in Experiment 3 and the like to be described later, 3-keto trehalose, 3-ketolactose, 3-keto cordobiose, 3-keto isomaltose, 3-keto maltose, 3-keto sucrose, 3-keto disaccharide, 3 -Ketodisaccharide sugar alcohol 3-keto maltitol and 2-keto sugars 2-ketoglucose and 2-ketotrehalose significantly exert TNF-α or IL-8 production inhibitory action Since the concentration does not adversely affect cell proliferation and cell viability, carbohydrates having a ketoaldhexose structure in the molecule such as 3-keto sugar and 2-keto sugar are safe to apply to living bodies. It is considered to be a simple carbohydrate.

先に述べたとおり、生体における過剰な炎症反応の多くは、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）、インターロイキン６（ＩＬ−６）、インターロイキン８（ＩＬ−８）などの炎症性サイトカインの過剰な産生が原因であると言われている。 As described above, many of the excessive inflammatory reactions in the living body are caused by excess of inflammatory cytokines such as tumor necrosis factor α (TNF-α), interleukin 6 (IL-6), and interleukin 8 (IL-8). It is said that it is caused by the production.

ＴＮＦ−αは、主として活性化マクロファージから産生される炎症性サイトカインであり、ＴＮＦ−αが過剰に産生されることにより炎症反応が強まると共に、好中球等の細胞障害性のある細胞を強く活性化することにより血管内皮細胞や組織の障害が誘導され、臓器の機能不全につながることも報告されている。また、ＴＮＦ−αは肥満により肥大化した脂肪細胞からも産生され、インスリン抵抗性を誘導することによりＩＩ型糖尿病の発症と病態形成に関与することもわかっている。一般に、ＴＮＦ−αの過剰産生は、皮膚炎、関節リウマチ、乾癬、炎症性腸疾患などの炎症に関与していると言われている。一方、ＩＬ−８は、好中球を炎症局所に浸潤させる炎症性サイトカインとして知られている。炎症局所に浸潤した好中球は脱顆粒を起こすことによって、ミエロパーオキシダーゼやエラスターゼ等の組織障害作用のある酵素が放出される。そのため、炎症反応が長期化すると組織障害も見られるようになる。一般に、ＩＬ−８の過剰産生は、関節リウマチ、乾癬、気管支喘息、敗血症、血管炎症、肝炎などの炎症に関与していると言われている。すなわち、炎症の発症又は増悪を引き起こす炎症性サイトカインの過剰な産生を抑制することは、炎症症状の緩和、改善に加え、炎症性疾患の予防、治療に有効であると期待される。 TNF-α is an inflammatory cytokine mainly produced from activated macrophages. When TNF-α is excessively produced, the inflammatory reaction is strengthened and cells such as neutrophils are strongly active. It has also been reported that vascularization induces damage to vascular endothelial cells and tissues, leading to organ dysfunction. TNF-α is also produced from fat cells enlarged due to obesity, and is also known to be involved in the onset and pathogenesis of type II diabetes by inducing insulin resistance. In general, TNF-α overproduction is said to be involved in inflammation such as dermatitis, rheumatoid arthritis, psoriasis, inflammatory bowel disease and the like. On the other hand, IL-8 is known as an inflammatory cytokine that infiltrates neutrophils into inflamed areas. Neutrophils that have infiltrated the inflamed area cause degranulation, thereby releasing enzymes having a tissue damaging action such as myeloperoxidase and elastase. Therefore, when the inflammatory reaction is prolonged, tissue damage is also observed. In general, overproduction of IL-8 is said to be involved in inflammation such as rheumatoid arthritis, psoriasis, bronchial asthma, sepsis, vascular inflammation, and hepatitis. That is, suppressing excessive production of inflammatory cytokines that cause the onset or exacerbation of inflammation is expected to be effective for the prevention and treatment of inflammatory diseases, in addition to alleviation and improvement of inflammatory symptoms.

本発明における分子内にケトアルドヘキソース構造を有する糖質は、後述する実験の項で示すように、ヒトの皮膚線維芽細胞、表皮ケラチノサイト、歯肉線維芽細胞、腸管上皮細胞などにおいて、ＴＮＦ−α、ＩＬ−８などの産生を抑制することから、経口摂取しても、また、皮膚に塗布してもその作用効果を発揮し、ＴＮＦ−α、ＩＬ−８など炎症性サイトカインの過剰産生が関与する炎症に対する抗炎症剤として有利に利用できる。 The carbohydrate having a ketoaldhexose structure in the molecule of the present invention is used in human skin fibroblasts, epidermal keratinocytes, gingival fibroblasts, intestinal epithelial cells, etc. Suppresses the production of IL-8, etc., and exerts its effect even when taken orally or applied to the skin, and involves the overproduction of inflammatory cytokines such as TNF-α and IL-8 It can be advantageously used as an anti-inflammatory agent against inflammation.

また、活性酸素種による酸化ストレスが細胞障害を引き起こし、炎症性疾患を含む様々な疾患や老化現象に直接関与していることが報告されており、活性酸素種による細胞障害を予防することが炎症性疾患の予防、治療にも有効であると考えられている。本発明の抗炎症剤の有効成分である３−ケト糖は、抗酸化作用を有するため、この点においても抗炎症剤として有用である。 In addition, it has been reported that oxidative stress caused by reactive oxygen species causes cell damage and is directly involved in various diseases including inflammatory diseases and aging phenomenon. It is thought to be effective in the prevention and treatment of sexually transmitted diseases. Since 3-keto sugar, which is an active ingredient of the anti-inflammatory agent of the present invention, has an antioxidant action, it is also useful as an anti-inflammatory agent in this respect.

一般に、炎症は急性炎症と慢性炎症に二つに大別される。急性炎症は、外部からの浸襲刺激に対して発赤、腫脹、発熱、疼痛が主な徴候として現われ、炎症の原因物質や感染が無くなり、障害を受けた組織、細胞が元通りに修復すれば症状が収束方向に向かうため、短期間に終結する。一方、慢性炎症は、不完全もしくは過剰な生体免疫応答により組織の構造変化と機能欠損が惹起されるため、症状が急性炎症と比較すると長期間維持される。 In general, inflammation is roughly divided into acute inflammation and chronic inflammation. Acute inflammation is caused by redness, swelling, fever, and pain as main signs in response to external invasion stimuli, if the causative agent and infection of the inflammation disappear and the damaged tissues and cells are restored to their original state. Symptoms end in a short period of time as they move toward convergence. On the other hand, since chronic inflammation causes structural changes and functional defects of tissues due to incomplete or excessive biological immune responses, symptoms are maintained for a long time compared to acute inflammation.

慢性炎症に該当する疾患としては、例えば、花粉症のようなアレルギー、慢性呼吸器疾患、喘息、敗血症、慢性関節リウマチ、ＡＲＤＳ（急性呼吸促迫症候群）、肝炎、胃炎、炎症性腸疾患、膵炎、関節炎、動脈硬化、虚血再潅流障害、ブドウ膜炎、エンドトキシンショック、熱傷、ウイルス性心筋炎、特発性拡張型心筋症、ＳＩＲＳ（全身性炎症反応症候群）、多臓器不全、溶血性***症候群や出血性大腸炎をはじめとする血管内皮細胞障害に起因する疾患、高γ−グロブリン血症、全身性エリトマトーデス（ＳＬＥ）、アテローム性動脈硬化症、多発性硬化症、モノクローナルＢ細胞異常症、ポリクローナルＢ細胞異常症、心房粘液腫、カストルマン症候群、原発性糸球体腎炎、メサンギュウム増殖性腎炎、糖尿病性腎炎などの腎炎、閉経後骨粗鬆症、歯肉炎、歯周病、アレルギー性皮膚炎、アトピー性皮膚炎などの皮膚の炎症が挙げられる。ちなみに、上記肝炎としてはアルコール性肝炎、ウイルス性肝炎、薬剤性肝炎、非アルコール性脂肪肝、自己免疫性肝炎、肝線維化、肝硬変及び劇症肝炎などを例示することができる。また、炎症性腸疾患としては潰瘍性大腸炎、クローン病などを例示することができる。さらに、神経細胞の炎症に起因する神経変性疾患として、パーキンソン病、アルツハイマー病なども挙げられる。慢性炎症は、上記のような炎症性疾患のみにとどまらず、肥満、メタボリックシンドローム、糖尿病、動脈硬化性疾患などの生活習慣病の共通基盤になっている。 Diseases corresponding to chronic inflammation include, for example, allergies such as hay fever, chronic respiratory disease, asthma, sepsis, rheumatoid arthritis, ARDS (acute respiratory distress syndrome), hepatitis, gastritis, inflammatory bowel disease, pancreatitis, Arthritis, arteriosclerosis, ischemia-reperfusion injury, uveitis, endotoxin shock, burn, viral myocarditis, idiopathic dilated cardiomyopathy, SIRS (systemic inflammatory response syndrome), multiple organ failure, hemolytic uremic syndrome Diseases caused by vascular endothelial cell disorders such as hemorrhagic colitis and hypergammaglobulinemia, systemic lupus erythematosus (SLE), atherosclerosis, multiple sclerosis, monoclonal B cell abnormality, polyclonal Nephritis such as B cell abnormality, atrial myxoma, Castorman syndrome, primary glomerulonephritis, mesangial proliferative nephritis, diabetic nephritis, After After osteoporosis, gingivitis, periodontal disease, allergic dermatitis, inflammatory skin such as atopic dermatitis. Incidentally, examples of the hepatitis include alcoholic hepatitis, viral hepatitis, drug-induced hepatitis, non-alcoholic fatty liver, autoimmune hepatitis, liver fibrosis, cirrhosis, and fulminant hepatitis. Examples of inflammatory bowel diseases include ulcerative colitis and Crohn's disease. Furthermore, examples of neurodegenerative diseases caused by nerve cell inflammation include Parkinson's disease and Alzheimer's disease. Chronic inflammation is not limited to inflammatory diseases as described above, but is a common basis for lifestyle-related diseases such as obesity, metabolic syndrome, diabetes, and arteriosclerotic diseases.

本発明の抗炎症剤の有効成分である分子内にケトアルドヘキソース構造を有する糖質は、安全性の高い物質であり、長期間にわたり経口剤、外用剤として有利に利用できるため、とりわけ慢性炎症に対する抗炎症剤として有効に利用できる。有効成分である分子内にケトアルドヘキソース構造を有する糖質を配合する場合、抗炎症剤に対して０．１乃至９０質量％（以下、特にことわらない限り本明細書では質量％を「％」と表記する）含有せしめるのが望ましく、１０乃至９０％含有せしめるのがより望ましい。 The carbohydrate having a ketoaldhexose structure in the molecule, which is an active ingredient of the anti-inflammatory agent of the present invention, is a highly safe substance and can be advantageously used as an oral preparation or an external preparation for a long period of time. It can be effectively used as an anti-inflammatory agent against When a carbohydrate having a keto aldohexose structure is blended in the molecule as an active ingredient, 0.1 to 90% by mass (hereinafter referred to as “% by mass” unless otherwise specified) with respect to the anti-inflammatory agent. It is desirable to contain it, and it is more desirable to contain 10 to 90%.

本発明の抗炎症剤の有効成分である分子内にケトアルドヘキソース構造を有する糖質は、安全性、抗炎症効果、ＴＮＦ−α、ＩＬ−８など炎症性サイトカインの産生抑制作用に影響を及ぼさない限り、製造原料由来の成分や製造過程で生じる副生成物を含んでいる標品であってもよい。しかしながら、できるだけ高純度のものを用いるのが望ましく、通常、固形物換算で、純度８０％以上、望ましくは純度９０％以上、より望ましくは純度９５％以上のものが好適に用いられる。 The carbohydrate having a ketoaldhexose structure in the molecule, which is an active ingredient of the anti-inflammatory agent of the present invention, has an effect on safety, anti-inflammatory effect, and production-suppressing action of inflammatory cytokines such as TNF-α and IL-8. As long as it is not, it may be a preparation containing components derived from the production raw materials and by-products generated in the production process. However, it is desirable to use a material having a purity as high as possible. Usually, a material having a purity of 80% or more, desirably 90% or more, more desirably 95% or more in terms of solid is suitably used.

また、本発明の抗炎症剤は、化粧品、医薬部外品、食品、医薬品などの各種組成物に配合することができる。有効成分である分子内にケトアルドヘキソース構造を有する糖質の各種組成物への配合量は、抗炎症作用を発揮できる量であればよく、特に制限はないが、通常、化粧品、医薬部外品、食品又は医薬品の総質量に対して、無水物換算で、０．０１％以上、望ましくは、０．１％以上を含有せしめるのが好適であり、０．２％以上が特に望ましい。通常０．０１％未満では、抗炎症効果を発揮するには不充分な場合がある。 Moreover, the anti-inflammatory agent of this invention can be mix | blended with various compositions, such as cosmetics, a quasi drug, a foodstuff, and a pharmaceutical. The compounding amount of the carbohydrate having a ketoaldhexose structure in the molecule as the active ingredient in the various compositions is not particularly limited as long as it is an amount capable of exerting an anti-inflammatory action. It is preferable to contain 0.01% or more, preferably 0.1% or more, particularly preferably 0.2% or more, in terms of anhydride, with respect to the total mass of the product, food or medicine. Usually, if it is less than 0.01%, it may be insufficient for exerting an anti-inflammatory effect.

本発明の抗炎症剤は、単独でも抗炎症作用を発揮することができるものの、抗炎症作用を有する公知の成分と併用することも有利に実施できる。 Although the anti-inflammatory agent of the present invention can exhibit an anti-inflammatory effect even when used alone, it can be advantageously used in combination with known components having an anti-inflammatory effect.

抗炎症作用を有する公知の成分としては、例えば、アラントイン又はその誘導体、グリチルレチン又はその誘導体、パントテン酸又はその誘導体、ビタミンＥ又はその誘導体、Ｌ−アスコルビン酸又はその誘導体、塩酸ピリドキシン、メントール、ビオチン、カンフル、テレピン油、酸化亜鉛、アズレン、グアイアズレン及びその誘導体、メフェナム酸及びその誘導体、フェニルブタゾン及びその誘導体、インドメタシン及びその誘導体、イブプロフェン及びその誘導体、ケトプロフェン及びその誘導体、ε−アミノカプロン酸、ジクロフェナクナトリウム、ジフェンヒドラミン、トラネキサム酸及びその誘導体、デキサメタゾン、コルチゾン及びそのエステル、ヒドロコルチゾン及びそのエステル、プレドニゾン、プレドニゾロンなどの副腎皮質ホルモン、藍、アセンヤク、アマチャ、アルテア、アルニカ、アロエ、イブトラノオ、イラクサ、ウコン、エイジツ、エチナシ、エンメイソウ、オウゴン、オウバク、オオムギ、オトギリソウ、オドリコソウ、オレンジ、カノコソウ、カミツレ、カモミラエキス、カロット、カワラヨモギ、カンゾウ、キュウリ、キンギンカ、クチナシ、クマザサ、クレソン、クワ、ゲンチアナ、ゲンノショウコウ、ゴカヒ、ゴボウ、コンフリー、サルビア、サンショウ、シコン、シソ、シモツケソウ、シャクヤク、シラカバ、スギナ、セイヨウオトギリソウ、セイヨウキズタ、セイヨウネズ、セイヨウハッカ、セージセンキュウ、センブリ、ソハクヒ、タイソウ、タイム、チャ、チンピ、テンチャ、トウガシ、トウキ、トウキンセンカ、トウニン、ドクダミ、トルメンチラ、ニワトコ、ニンジン、パセリ、ハッカ、バラ、ビャクダン、ビワ、ブクリョウ、ブッチャーブルーム、ブドウ、ブロッコリー、ベニバナ、ホオウ、ボダイジュ、ボタン、マロニエ、ムクロジ、モモ、ヤグルマギク、ヤグルマソウ、ユーカリエキス、ヨウバイヒ、ヨモギ、ラベンダー、ローズヒップ、ローズマリー、ローマカミツレなどの植物又は植物由来成分などが挙げられる。 Known components having an anti-inflammatory action include, for example, allantoin or a derivative thereof, glycyrrhetin or a derivative thereof, pantothenic acid or a derivative thereof, vitamin E or a derivative thereof, L-ascorbic acid or a derivative thereof, pyridoxine hydrochloride, menthol, biotin, Camphor, turpentine oil, zinc oxide, azulene, guaiazulene and derivatives thereof, mefenamic acid and derivatives thereof, phenylbutazone and derivatives thereof, indomethacin and derivatives thereof, ibuprofen and derivatives thereof, ketoprofen and derivatives thereof, ε-aminocaproic acid, diclofenac sodium , Diphenhydramine, tranexamic acid and its derivatives, dexamethasone, cortisone and its ester, hydrocortisone and its ester, prednisone, prednisolone, etc. Cortical hormone, Indigo, Acacia, Achacha, Altea, Arnica, Aloe, Ibutoranoo, Nettle, Turmeric, Ages, Echinacea, Emperor, Ogon, Oat, Barley, Hypericum, Adriatica, Orange, Ganoderma, Gecko Daylily, Cucumber, Goldfish, Gardenia, Kumazasa, Watercress, Mulberry, Gentiana, Genocera, Gocahi, Burdock, Comfrey, Salvia, Salamander, Sisson, Shimotsueso, Peonies, Birch, Horsetail, Atlantic Hypericum , Mint, sage senkyu, assembly, sohakhi, taiso, thyme, tea, chimpi, tencha, capsicum, touki, turkey senka, tonin, doc Dami, tormentilla, elderberry, carrot, parsley, mint, rose, sandalwood, loquat, bukkuri, butcher bloom, grape, broccoli, safflower, halibut, bodaiju, button, maronier, mukuroji, peach, cornflower, cornflower, eucalyptus extract, bayberry, Plants or plant-derived components such as mugwort, lavender, rosehip, rosemary, and roman chamomile are listed.

本発明の抗炎症剤を含有する組成物の製造にあたっては、有効成分である上記分子内にケトアルドヘキソース構造を有する糖質の少なくとも１種以上と、化粧品、医薬部外品、食品、医薬品等を製造する場合において通常用いられている任意成分を適宜配合すればよい。剤の形態は特に限定されず外用剤や経口剤とすることができる。 In the production of the composition containing the anti-inflammatory agent of the present invention, at least one kind of carbohydrate having a ketoald hexose structure in the molecule as an active ingredient, cosmetics, quasi drugs, foods, pharmaceuticals, etc. What is necessary is just to mix | blend arbitrarily the arbitrary component normally used in manufacturing. The form of the agent is not particularly limited and can be an external preparation or an oral preparation.

本発明の抗炎症剤を含有する組成物が化粧品である場合は、任意成分として、精製水、ｐＨ調製剤、低級アルコール、多価アルコール、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、エステル類、有機溶媒、シリコーン類、界面活性剤、増粘剤、軟化剤、乳化剤、消泡剤、加湿剤、芳香剤、金属イオン封鎖剤、染料、着色材、水溶性高分子、防腐剤、緩衝液、色素、紫外線吸収剤、収斂剤、殺菌・抗菌剤、保湿剤、細胞賦活剤、消炎・抗アレルギー剤、抗酸化・活性酸素除去剤、香料、各種薬効成分等を配合することができる。 When the composition containing the anti-inflammatory agent of the present invention is a cosmetic, as optional components, purified water, pH adjuster, lower alcohol, polyhydric alcohol, fats and oils, waxes, hydrocarbons, fatty acids, esters , Organic solvents, silicones, surfactants, thickeners, softeners, emulsifiers, antifoaming agents, humidifiers, fragrances, sequestering agents, dyes, coloring materials, water-soluble polymers, preservatives, buffers Liquids, pigments, ultraviolet absorbers, astringents, bactericides / antibacterial agents, moisturizers, cell activators, anti-inflammatory / antiallergic agents, antioxidant / active oxygen removers, fragrances, various medicinal ingredients, and the like can be blended.

本発明の抗炎症剤を含有する化粧品としては、化粧石鹸、洗顔クリーム、洗顔フォーム、クレンジングクリーム、クレンジングミルク、クレンジングローション、クレンジングオイル、マッサージクリーム、コールドクリーム、モイスチャークリーム、バニシングクリーム、ハンドクリーム、モイスチャーローション、化粧油、リキッドファンデーション、パウダーファンデーション、ケーキ状ファンデーション、スティックファンデーション、油性コンパクトファンデーション、クリーム状ファンデーション、チークブラッシャー、乳化ファンデーション、下地化粧料、ボディパウダー、クリーム状白粉、粉白粉、水白粉、固型白粉、タルカムパウダー、練り白粉、ルーズシャドウ、ベビーパウダー、ほお紅、眉墨、マスカラ、リップスティック、リップクリーム、パック、シェービングクリーム、アフターシェービングクリーム、ローション、ハンドローション、シェービングローション、アフターシェービングローション、日焼け止めクリーム、日焼け用オイル、日焼け止めローション、日焼け用ローション、柔軟化化粧水、収斂化粧水、洗浄化粧水、多層式化粧水、フェイシャルシャンプー、ボディシャンプー、ヘアシャンプー、髪洗い粉、ハンドソープ、フェイシャルリンス、ホディリンス、ヘアリンス、ヘアトリートメント、チック、ポマード、ヘアクリーム、ヘアリキッド、ヘアトニック、セットローション、スキ油、鬢付け油、ヘアスプレー、ヘアムース、ヘアトニック、ヘアダイ、ヘアブリーチ、カラーリンス、カラースプレー、パーマネントウェーブ液、プレスパウダー、ルースパウダー、アイクリーム、アイシャドー、クリームアイシャドー、パウダーアイシャドー、アイライナー、アイブラウペンシル、マスカラ、脱毛クリーム、一般香水、練り香水、粉末香水、オーデコロン、デオドラント、浴用剤、バスオイル、バスソルト、化粧用油、ベビーオイル、ネイルカラー、エナメル、エナメル除去液、ネールトリートメントなどが挙げられる。 Cosmetic products containing the anti-inflammatory agent of the present invention include cosmetic soaps, facial cleansing creams, facial cleansing foams, cleansing creams, cleansing milks, cleansing lotions, cleansing oils, massage creams, cold creams, moisturizing creams, vanishing creams, hand creams, moisturizers. Lotion, cosmetic oil, liquid foundation, powder foundation, cake foundation, stick foundation, oily compact foundation, cream foundation, cheek blusher, emulsified foundation, base cosmetic, body powder, cream white powder, white powder, white powder, solid Mold white powder, talcum powder, kneaded white powder, loose shadow, baby powder, blusher, eyebrow, mascara, lipstick Lip balm, pack, shaving cream, after shaving cream, lotion, hand lotion, shaving lotion, after shaving lotion, sunscreen cream, sunscreen oil, sunscreen lotion, sunscreen lotion, softening lotion, astringent makeup Water, Wash lotion, Multi-layer lotion, Facial shampoo, Body shampoo, Hair shampoo, Hair wash powder, Hand soap, Facial rinse, Hody rinse, Hair rinse, Hair treatment, Chick, Pomade, Hair cream, Hair liquid, Hair tonic, Set Lotion, skin oil, brazing oil, hair spray, hair mousse, hair tonic, hair dye, hair bleach, color rinse, color spray, permanent wave solution, pre Powder, Loose Powder, Eye Cream, Eye Shadow, Cream Eye Shadow, Powder Eye Shadow, Eyeliner, Eyebrow Pencil, Mascara, Hair Removal Cream, General Perfume, Kneading Perfume, Powder Perfume, Cologne, Deodorant, Bath Agent, Bath Oil, Examples include bath salt, cosmetic oil, baby oil, nail color, enamel, enamel remover, and nail treatment.

本発明の抗炎症剤を含有する組成物が医薬部外品の場合は、任意成分として、賦形剤、基剤、界面活性剤、分散剤、可溶化剤、溶剤、アルカリ剤、粘度調節剤、増粘剤、皮膜剤、起泡剤、消泡剤、着香剤、着色剤、安定剤、防腐剤、殺菌剤、退色防止剤、酸化防止剤、毛髪処理剤、湿潤剤、毛髪保護剤、毛胞賦活剤、帯電防止剤、助剤、溶剤、溶解剤、溶解補助剤、流動化剤、懸濁剤、緩衝剤、結合剤、吸着剤、噴射剤、コーティング剤、咀嚼剤、充填剤、軟化剤、調整剤、金属封鎖剤、褪色防止剤、油脂、油溶性高分子、鎮痛剤、崩壊剤、滑沢剤、乳化剤、等張化剤などの慣用の添加剤を配合することができる。 When the composition containing the anti-inflammatory agent of the present invention is a quasi-drug, as optional components, excipients, bases, surfactants, dispersants, solubilizers, solvents, alkaline agents, viscosity modifiers , Thickener, film agent, foaming agent, defoaming agent, flavoring agent, coloring agent, stabilizer, preservative, bactericidal agent, anti-fading agent, antioxidant, hair treatment agent, wetting agent, hair protection agent , Hair follicle activator, antistatic agent, auxiliary agent, solvent, solubilizer, solubilizer, fluidizer, suspending agent, buffering agent, binder, adsorbent, propellant, coating agent, chewing agent, filler Conventional additives such as softeners, modifiers, sequestering agents, anti-fading agents, fats and oils, oil-soluble polymers, analgesics, disintegrants, lubricants, emulsifiers, isotonic agents, and the like can be blended. .

本発明の抗炎症剤を含有する医薬部外品としては、口腔に用いられる医薬部外品、例えば、歯磨き、マウスウォッシュ、マウスリンス、ドリンク剤、頭皮に用いられる医薬部外品、例えば、養毛剤、育毛剤、脱毛防止剤、除毛剤、マッサージ料、それ以外には、虫除け剤、外傷治療用軟膏、抗菌クリーム、ステロイド軟膏、口腔内や皮膚の患部に貼り付けるシート状やフィルム状のはっぷ剤、美容液、薬用石鹸、清浄綿、浴用剤、ベビーパウダー、ソフトコンタクトレンズ用消毒剤などが挙げられる。 As a quasi-drug containing the anti-inflammatory agent of the present invention, a quasi-drug used for the oral cavity, for example, toothpaste, mouthwash, mouth rinse, drink, quasi-drug used for scalp, such as a hair nourishing agent , Hair restorer, hair loss prevention agent, hair removal agent, massage agent, other than that, insect repellent, trauma treatment ointment, antibacterial cream, steroid ointment, sheet-like or film-like paste to be applied to the affected area of oral cavity or skin Agents, cosmetic liquids, medicated soaps, clean cotton, bath preparations, baby powders, soft contact lens disinfectants, and the like.

本発明の抗炎症剤を含有する組成物が食品の場合は、任意成分として、水、アルコール、澱粉質、蛋白質、繊維質、糖質、脂質、ビタミン、ミネラル、着香料、着色料、甘味料、調味料、安定剤、防腐剤のような食品に通常配合される原料又は素材等を配合することができる。 When the composition containing the anti-inflammatory agent of the present invention is a food, water, alcohol, starch, protein, fiber, saccharide, lipid, vitamin, mineral, flavor, colorant, sweetener as optional ingredients Ingredients or materials usually blended in foods such as seasonings, stabilizers and preservatives can be blended.

本発明の抗炎症剤を含有する食品としては、飲料、スープ、アルコール飲料、ゼリー、ハードキャンディ、ソフトキャンディ、グミキャンディ、チューインガム、チョコレート、タブレット、冷菓等が挙げられる。食品には、機能性食品、健康食品、健康志向食品等も含まれる。 Examples of the food containing the anti-inflammatory agent of the present invention include beverages, soups, alcoholic beverages, jelly, hard candy, soft candy, gummy candy, chewing gum, chocolate, tablets, and frozen desserts. The food includes functional food, health food, health-oriented food, and the like.

本発明の抗炎症剤を含有する医薬品の形態としては、散剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、細粒剤、顆粒剤等の固形製剤、水剤、懸濁剤、乳剤等の液剤、ゲル剤等が挙げられる。錠剤、丸剤、顆粒剤、顆粒を含有するカプセル剤の顆粒は、必要により、ショ糖等の糖類、マルチトール等の糖アルコールで糖衣を施したり、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース等でコーティングを施してもよいし、胃溶性若しくは腸溶性物質のフィルムで被覆してもよい。また、製剤の溶解性を向上させるために、前記の製剤を公知の可溶化処理を施すこともできる。常法に基づいて、前記液剤を注射剤、点滴剤に配合して使用してもよい。 Examples of pharmaceutical forms containing the anti-inflammatory agent of the present invention include solid preparations such as powders, tablets, pills, capsules, fine granules, granules, liquids such as liquids, suspensions, emulsions, and gels. Etc. If necessary, the granules of capsules containing tablets, pills, granules, granules can be sugar-coated with sugars such as sucrose, sugar alcohols such as maltitol, gelatin, hydroxypropylcellulose, hydroxypropylmethylcellulose, etc. A coating may be applied, or a film of gastric or enteric material may be coated. Moreover, in order to improve the solubility of a formulation, the said formulation can also be given a known solubilization process. Based on a conventional method, the solution may be used in an injection or a drip.

本発明の抗炎症剤を含有する医薬品を使用する場合、その投与量又は摂取量は、所望の改善、治療又は予防効果が得られるような量であれば特に制限されず、通常その態様、患者の年齢、性別、体質その他の条件、疾患の種類並びにその程度等に応じて適宜選択される。例えば、該医薬品中に有効成分である分子内にケトアルドヘキソース構造を有する糖質を無水物換算で、０．０１乃至３０％の含量となるように配合し、分子内にケトアルドヘキソース構造を有する糖質として１日当たり約０．１ｍｇ乃至１，０００ｍｇの範囲で摂取させればよい。 In the case of using the pharmaceutical agent containing the anti-inflammatory agent of the present invention, the dose or intake thereof is not particularly limited as long as the desired improvement, treatment or prevention effect can be obtained. It is appropriately selected according to the age, sex, constitution and other conditions, the type and degree of disease. For example, a saccharide having a ketoaldhexose structure in the molecule as an active ingredient is blended in the pharmaceutical so as to have a content of 0.01 to 30% in terms of anhydride, and the ketoaldhexose structure is incorporated in the molecule. What is necessary is just to ingest in the range of about 0.1 mg-1,000 mg per day as a carbohydrate to have.

また、本発明の抗炎症剤は、安全性に優れたものであるので、ヒトに対してだけでなく、例えば、非ヒト動物、例えば、ラット、マウス、モルモット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、サル、チンパンジー等の哺乳類、鳥類、両生類、爬虫類等の治療剤、飼料又は餌料に配合してもよい。飼料又は餌料としては、例えばヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ニワトリ等に用いる家畜用飼料、ウサギ、ラット、マウス等に用いる小動物用飼料、ウナギ、タイ、ハマチ、エビ等に用いる魚介類用飼料、イヌ、ネコ、小鳥、リス等に用いるペットフードなどが挙げられる。 Moreover, since the anti-inflammatory agent of the present invention is excellent in safety, not only for humans, for example, non-human animals such as rats, mice, guinea pigs, rabbits, sheep, pigs, cows, You may mix | blend with mammals, such as a horse, a cat, a dog, a monkey, a chimpanzee, birds, an amphibian, a reptile, etc., feed, or a feed. As feed or feed, for example, livestock feed used for sheep, pigs, cows, horses, chickens, etc., feed for small animals used for rabbits, rats, mice, etc., feed for fish and shellfish used for eels, Thailand, hamachi, shrimp, etc. Examples include pet food used for dogs, cats, small birds, squirrels, and the like.

また、本発明の抗炎症作用の向上方法によれば、分子内にアルドヘキソース構造を有する糖質における、他の糖質又は置換基と結合していないフリーの水酸基をケト基に変換することにより、抗炎症作用が弱い糖質の抗炎症作用を向上させることができるので、アルドヘキソース構造を有する糖質の抗炎症作用の向上方法としても有用である。 In addition, according to the method for improving anti-inflammatory action of the present invention, by converting a free hydroxyl group that is not bonded to another carbohydrate or substituent in a carbohydrate having an aldohexose structure in the molecule to a keto group. Since the anti-inflammatory action of a carbohydrate having a weak anti-inflammatory action can be improved, it is also useful as a method for improving the anti-inflammatory action of a sugar having an aldohexose structure.

当該抗炎症作用の向上方法として好適な方法としては、アルドヘキソース構造における３位水酸基又は２位水酸基を酵素法又は発酵法によりケト基へ変換させる方法が挙げられ、当該方法の場合、アルドヘキソース構造を分子内に有する糖質の非還元末端のアルドヘキソースの３位水酸基又は２位水酸基が酸化され、当該糖質の抗炎症作用が変換前に比べて向上する。 As a method suitable for improving the anti-inflammatory action, there is a method in which the hydroxyl group at the 3-position or the hydroxyl group at the 2-position in the aldohexose structure is converted to a keto group by an enzymatic method or a fermentation method. In the molecule, the 3-position hydroxyl group or the 2-position hydroxyl group of the non-reducing end aldhexose of the saccharide is oxidized, and the anti-inflammatory action of the saccharide is improved as compared with that before the conversion.

以下、本発明につき実験により具体的に説明する。 Hereinafter, the present invention will be specifically described by experiments.

＜実験１：各種３−ケト糖の調製＞
トレハロース、コージビオース、イソマルトース、ラクトース、マルトース、スクロース及びマルチトールをそれぞれ原料糖質として、発酵法により３−ケトトレハロース、３−ケトコージビオース、３−ケトイソマルトース、３−ケトラクトース、３−ケトマルトース、３−ケトスクロース及び３−ケトマルチトールを調製した。加えて、トレハロース及びメチルα−グルコシドをそれぞれ原料糖質として、酵素法により３，３´−ジケトトレハロース及びメチルα−３−ケトグルコシドを調製した。<Experiment 1: Preparation of various 3-keto sugars>
Trehalose, cordobiose, isomaltose, lactose, maltose, sucrose and maltitol are used as raw material carbohydrates, respectively, and 3-ketotrehalose, 3-ketocodibiose, 3-ketoisomaltose, 3-ketolactose, 3- Ketomaltose, 3-keto sucrose and 3-keto maltitol were prepared. In addition, 3,3′-diketotrehalose and methyl α-3-ketoglucoside were prepared by enzymatic methods using trehalose and methyl α-glucoside as raw sugars, respectively.

＜実験１−１：３−ケトトレハロースの調製＞
トレハロース（登録商標『トレハ』、株式会社林原販売、トレハロース純度９８．０％以上）２０（ｗ／ｖ）％、ポリペプトン（日本製薬株式会社製）１（ｗ／ｖ）％、酵母エキスＳ（日本製薬株式会社製）０．２（ｗ／ｖ）％、硫酸マグネシウム７水和物０．０１（ｗ／ｖ）％、及び水からなる液体培地（ｐＨ６．８）を試験管１本当たり３ｍＬ入れ、オートクレーブで１２１℃、２０分滅菌し、冷却した後、寒天スラント培地にて２７℃で培養したフラボバクテリウム・サッカロフィラムＮＢＲＣ１５９４４株を一白金耳接種し、２７℃で７２時間、２７０ｒｐｍで振トウ培養したものをシード培養液とした。<Experiment 1-1: Preparation of 3-ketotrehalose>
Trehalose (registered trademark “Treha”, sold by Hayashibara Co., Ltd., trehalose purity 98.0% or more) 20 (w / v)%, polypeptone (manufactured by Nippon Pharmaceutical Co., Ltd.) 1 (w / v)%, yeast extract S (Japan) 3 mL of liquid culture medium (pH 6.8) consisting of 0.2 (w / v)%, magnesium sulfate heptahydrate 0.01 (w / v)%, and water is manufactured by Pharmaceutical Co., Ltd. Sterilize in autoclave at 121 ° C for 20 minutes, cool, and then inoculate one platinum loop of Flavobacterium saccharophilum NBRC15944 strain cultured at 27 ° C in agar slant medium, and culture at 27 ° C for 72 hours at 270 rpm This was used as a seed culture solution.

上記と同じ組成を有する液体培地を、５００ｍＬ容三角フラスコに５０ｍＬ入れたものを５０本調製し、ｐＨ６．８に調整後、１２１℃で２０分間滅菌し、冷却した後、上記のシード培養液をそれぞれの三角フラスコ１本に対して、０．５ｍＬずつ接種した後、２７℃で７２時間、２４０ｒｐｍで回転振トウ培養しメイン培養液とした。培養液の糖組成をＨＰＬＣにより分析したところ、原料であるトレハロース以外の新しい糖質ピークが確認された。 50 liquid culture media having the same composition as above, 50 mL in a 500 mL Erlenmeyer flask are prepared, adjusted to pH 6.8, sterilized at 121 ° C. for 20 minutes, cooled, and then the above seed culture solution is added. After inoculating 0.5 mL each of each Erlenmeyer flask, it was subjected to rotary shaking tow culture at 27 ° C. for 72 hours at 240 rpm to obtain a main culture solution. When the sugar composition of the culture broth was analyzed by HPLC, a new carbohydrate peak other than trehalose as a raw material was confirmed.

培養終了後、得られた約２，３００ｍＬの培養液を１０，０００ｒｐｍで遠心分離することにより菌体を除去し、得られた培養上清液を１００℃の湯浴中で加熱処理し、さらに１０，０００ｒｐｍで遠心分離して不溶物を除去して上清を回収した。得られた上清液にエタノール９，２００ｍＬを添加し、１０，０００ｒｐｍで遠心分離して上清を回収した。回収した溶液をエバポレーターにて減圧下で１，１００ｍＬに濃縮し、０．２μｍメンブランフィルターにてろ過した後、電気透析器（商品名『マイクロアシライザーＧ０』、旭化成工業株式会社製）に供し脱塩した。得られた電気透析液を０．２μｍメンブランフィルターでろ過し、下記条件による分取ＨＰＬＣに供し、原料トレハロースから新たに生成した糖質のピーク画分を分取し、濃縮し、凍結乾燥にて粉末化し、標品７６．５ｇを得た。 After completion of the culture, about 2,300 mL of the obtained culture solution is centrifuged at 10,000 rpm to remove the cells, and the resulting culture supernatant is heat-treated in a 100 ° C. hot water bath, Centrifugation was performed at 10,000 rpm to remove insoluble matters, and the supernatant was collected. 9,200 mL of ethanol was added to the obtained supernatant, and the supernatant was collected by centrifugation at 10,000 rpm. The collected solution is concentrated to 1,100 mL under reduced pressure using an evaporator, filtered through a 0.2 μm membrane filter, and then subjected to an electrodialyzer (trade name “Microacylizer G0”, manufactured by Asahi Kasei Kogyo Co., Ltd.). Salted. The obtained electrodialysate was filtered through a 0.2 μm membrane filter, and subjected to preparative HPLC under the following conditions. The peak fraction of carbohydrate newly produced from the raw trehalose was collected, concentrated, and freeze-dried. Powdered to obtain 76.5 g of a standard product.

（分取ＨＰＬＣ条件）
カラム：ＹＭＣ−ＰａｃｋＯＤＳ−ＡＱ
（内径５０ｍｍ、長さ５００ｍｍ、株式会社ワイエムシイ製）
溶離液：超純水
流速：５．０ｍＬ／分
カラム温度：２５℃
検出：示差屈折計(Preparative HPLC conditions)
Column: YMC-Pack ODS-AQ
(Inner diameter 50mm, length 500mm, YMC Co., Ltd.)
Eluent: Ultrapure water Flow rate: 5.0 mL / min Column temperature: 25 ° C
Detection: Differential refractometer

得られた標品を下記条件によるＨＰＬＣ分析に供し、ＨＰＬＣクロマトグラム（図１）に基づき、純度を９８．１％と決定した。また、当該標品を、ＬＣ／ＭＳ分析に供したところ、トレハロースの分子量３４２よりも２（水素原子２つ分）小さい分子量３４０を有することが判明した。さらに、当該標品を試料としてＮＭＲ（^１Ｈ−ＮＭＲ及び^１３Ｃ−ＮＭＲ）スペクトルを測定したところ、^１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（図２）において、トレハロースを構成する２つのグルコース残基の片方のグルコース残基の３位炭素のシグナルが大きく低磁場側にシフトしていることが確認（国立研究開発法人産業技術総合研究所が提供している有機化合物のスペクトルデータベース（ＳＤＢＳ）『http://sdbs.db.aist.go.jp/sdbs/cgi-bin/cre_index.cgi』に記載の原料トレハロースの^１３Ｃ−ＮＭＲデータとの比較）され、本標品が３−ケトトレハロースであることが判明した。The obtained sample was subjected to HPLC analysis under the following conditions, and the purity was determined to be 98.1% based on the HPLC chromatogram (FIG. 1). Further, when the sample was subjected to LC / MS analysis, it was found to have a molecular weight 340 that is 2 (two hydrogen atoms) smaller than the molecular weight 342 of trehalose. Furthermore, when the NMR ( ¹ H-NMR and ¹³ C-NMR) spectrum was measured using the sample as a sample, one of the two glucose residues constituting trehalose in the ¹³ C-NMR spectrum (FIG. 2) was measured. It is confirmed that the signal at the 3-position carbon of the residue is greatly shifted to the low magnetic field side (Spectral database of organic compounds (SDBS) provided by National Institute of Advanced Industrial Science and Technology (http: // sdbs .db.aist.go.jp / sdbs / cgi-bin / cre_index.cgi "compared with ^{13 C-NMR} data of the material trehalose according to) the, it was found the present preparation is 3-keto trehalose .

（分析用ＨＰＬＣ条件）
装置：Ｐｒｏｍｉｎｅｎｃｅ（株式会社島津製作所製）
カラム：ＳｈｏｄｅｘＳＵＧＡＲＫＳ−８０１
（内径８ｍｍ、長さ３００ｍｍ、昭和電工株式会社製）
溶離液：超純水
流速：０．４ｍＬ／分
カラム温度：７５℃
検出：示差屈折計(Analytical HPLC conditions)
Equipment: Prominence (manufactured by Shimadzu Corporation)
Column: Shodex SUGAR KS-801
(Inner diameter 8mm, length 300mm, Showa Denko KK)
Eluent: Ultrapure water Flow rate: 0.4 mL / min Column temperature: 75 ° C
Detection: Differential refractometer

＜実験１−２：３−ケトコージビオースの調製＞
マルトース５．０％（ｗ／ｖ）、酵母エキスＳ（日本製薬株式会社製）０．１（ｗ／ｖ）、魚肉エキス（マルハ株式会社製）０．３（ｗ／ｖ）％、リン酸水素２カリウム０．０１（ｗ／ｖ）％、リン酸２水素ナトリウム１水和物０．０６（ｗ／ｖ）％、硫酸マグネシウム７水和物０．０５（ｗ／ｖ）％、硫酸鉄７水和物０．００１（ｗ／ｖ）％、硫酸マンガンｎ水和物０．００１（ｗ／ｖ）％、炭酸カルシウム０．３（ｗ／ｖ）％及び水からなる液体培地（ｐＨ６．８）を試験管１本当たり３ｍＬ入れ、オートクレーブで１２１℃、２０分滅菌し、冷却した後、寒天スラント培地にて２７℃で培養したリゾビウム・ラジオバクターＧ３７株を一白金耳接種し、２７℃で７２時間振トウ培養したものをシード培養液とした。<Experiment 1-2: Preparation of 3-keto cordobiose>
Maltose 5.0% (w / v), yeast extract S (manufactured by Nippon Pharmaceutical Co., Ltd.) 0.1 (w / v), fish meat extract (manufactured by Maruha Corporation) 0.3 (w / v)%, phosphoric acid Dipotassium hydrogen 0.01 (w / v)%, sodium dihydrogen phosphate monohydrate 0.06 (w / v)%, magnesium sulfate heptahydrate 0.05 (w / v)%, iron sulfate Liquid medium (pH 6.) consisting of heptahydrate 0.001 (w / v)%, manganese sulfate n-hydrate 0.001 (w / v)%, calcium carbonate 0.3 (w / v)% and water. 8) was put in 3 mL per test tube, sterilized in an autoclave at 121 ° C for 20 minutes, cooled, and then inoculated with a platinum loop of Rhizobium radiobacter G37 strain cultured at 27 ° C in an agar slant medium. The seed culture solution was cultured for 72 hours in a shake tow.

マルトースをコージビオース（株式会社林原調製品、純度９５．９％）に替えた以外は上記と同じ組成を有する液体培地を、５００ｍＬ容三角フラスコに５０ｍＬ入れたものを１０本調製し、ｐＨ６．８に調整後、１２１℃で２０分間滅菌し、冷却した。次いで、上記のシード培養液をそれぞれの三角フラスコ１本に対して、０．５ｍＬずつ接種した後、２７℃で５４時間、回転振トウ培養しメイン培養液とした。培養液の糖組成をＨＰＬＣにより分析したところ、原料であるコージビオース以外の新しい糖質ピークが確認された。 10 liquid media having the same composition as described above except that maltose was replaced with Kojibiose (Hayashibara Co., Ltd., purity 95.9%) were put in 50 mL in a 500 mL Erlenmeyer flask and adjusted to pH 6.8. After adjustment, the mixture was sterilized at 121 ° C. for 20 minutes and cooled. Next, 0.5 mL each of the above seed culture solution was inoculated into one Erlenmeyer flask, and then the shaker tow culture was performed at 27 ° C. for 54 hours to obtain a main culture solution. When the sugar composition of the culture broth was analyzed by HPLC, new carbohydrate peaks other than the raw material, Codybiose, were confirmed.

培養終了後、得られた約５００ｍＬの培養液に脱イオン水１，２００ｍＬを添加し希釈した後、８，０００ｒｐｍで遠心分離することにより菌体を除去し、得られた遠心上清にエタノール５，１００ｍＬを添加し、沈殿物をろ過にて除いた。次いで、ろ液をエバポレーターにて減圧下で２５０ｍＬに濃縮し、得られた濃縮液にエタノール５００ｍＬを添加し、８，０００ｒｐｍで遠心分離して上清を回収した。回収した溶液をエバポレーターにて減圧下で３００ｍＬに濃縮し、１１，０００ｒｐｍで遠心分離して上清を回収し、０．２μｍメンブランフィルターにてろ過した後、電気透析器（商品名『マイクロアシライザーＧ１』、旭化成工業株式会社製）に供し脱塩した。得られた電気透析液をエバポレーターにて減圧下で約２０ｍＬに濃縮し、０．２μｍメンブランフィルターでろ過し、下記条件による分取ＨＰＬＣを繰り返して、原料コージビオースから新たに生成した糖質のピーク画分を分取し、濃縮し、凍結乾燥にて粉末化し、標品８．７ｇを得た。得られた標品の純度をＨＰＬＣにより分析したところ、９１．２％であった。実験１−１で３−ケトトレハロースについて行ったと同様のＬＣ／ＭＳ分析、^１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル分析により分析したところ、得られた標品が３−ケトコージビオース（２−Ｏ−α−３−ケトグルコシルグルコース）であることが判明した。After completion of the culture, 1,500 mL of deionized water was added to the obtained approximately 500 mL of the culture solution for dilution, and then the cells were removed by centrifugation at 8,000 rpm. Ethanol 5 was added to the resulting supernatant. , 100 mL was added and the precipitate was removed by filtration. Next, the filtrate was concentrated to 250 mL under reduced pressure using an evaporator, and 500 mL of ethanol was added to the resulting concentrated solution, followed by centrifugation at 8,000 rpm to recover the supernatant. The collected solution is concentrated to 300 mL under reduced pressure using an evaporator, centrifuged at 11,000 rpm, the supernatant is collected, filtered through a 0.2 μm membrane filter, and then electrodialyzed (trade name “Micro Acylizer”). G1 ”, manufactured by Asahi Kasei Kogyo Co., Ltd.) for desalting. The obtained electrodialysis solution is concentrated to about 20 mL under reduced pressure using an evaporator, filtered through a 0.2 μm membrane filter, and subjected to preparative HPLC under the following conditions to obtain a peak of newly produced saccharide from the raw material cordobiose. The fraction was collected, concentrated, and powdered by freeze-drying to obtain 8.7 g of a standard product. The purity of the obtained sample was analyzed by HPLC and found to be 91.2%. When analysis was conducted by LC / MS analysis and ¹³ C-NMR spectrum analysis similar to those performed for 3-ketotrehalose in Experiment 1-1, the obtained sample was found to be 3-ketocodibiose (2-O-α-3). -Ketoglucosylglucose).

（分取ＨＰＬＣ条件）
カラム：ＹＭＣ−ＰａｃｋＲ＆ＤＯＤＳ−Ａ
（内径２０ｍｍ、長さ２５０ｍｍ、株式会社ワイエムシイ製）
溶離液：超純水
流速：３．５ｍＬ／分
カラム温度：３５℃
検出：示差屈折計(Preparative HPLC conditions)
Column: YMC-Pack R & D ODS-A
(Inner diameter 20 mm, length 250 mm, manufactured by YMC Co., Ltd.)
Eluent: Ultrapure water Flow rate: 3.5 mL / min Column temperature: 35 ° C
Detection: Differential refractometer

＜実験１−３：３−ケトイソマルトースの調製＞
メイン培養に用いる液体培地の糖質をイソマルトース（株式会社林原調製品、純度９７．７％）に替えた以外は実験１−２と同様にリゾビウム・ラジオバクターＧ３７株を培養し、同様の操作により精製したところ、脱塩後の濃縮液から結晶が析出した。結晶懸濁液から遠心分離により結晶を回収し、特級エタノールにて洗浄し、オーブン（４０℃）で乾燥することにより、標品６．０ｇを得た。得られた標品の純度をＨＰＬＣにより分析したところ、９８．５％であった。実験１−１で３−ケトトレハロースについて行ったと同様の手法により分析したところ、得られた標品が３−ケトイソマルトース（６−Ｏ−α−３−ケトグルコシルグルコース）であることが判明した。<Experiment 1-3: Preparation of 3-keto isomaltose>
Rhizobium radiobacter strain G37 was cultured in the same manner as in Experiment 1-2, except that the sugar in the liquid medium used for main culture was changed to isomaltose (Hayashibara Co., Ltd., purity 97.7%). As a result of purification, crystals were precipitated from the concentrated solution after desalting. Crystals were collected from the crystal suspension by centrifugation, washed with special grade ethanol, and dried in an oven (40 ° C.) to obtain 6.0 g of a standard product. The purity of the obtained sample was analyzed by HPLC and found to be 98.5%. As a result of analysis similar to that performed for 3-ketotrehalose in Experiment 1-1, it was found that the obtained preparation was 3-keto isomaltose (6-O-α-3-ketoglucosylglucose). .

＜実験１−４：３−ケトラクトースの調製＞
ラクトース２．０％（ｗ／ｖ）、酵母エキス（Ｄｉｆｃｏ株式会社製）０．１（ｗ／ｖ）％及び水からなる液体培地（ｐＨ６．８）をシード培養及びメイン培養に用い、５００ｍＬ容三角フラスコに培地１００ｍＬを入れたものを３本用いた以外は、実験１−２と同様にリゾビウム・ラジオバクターＧ３７株を培養した。培養液の糖組成をＨＰＬＣにより分析したところ、原料であるラクトース以外の新しい糖質ピークが確認された。<Experiment 1-4: Preparation of 3-ketolactose>
A liquid medium (pH 6.8) comprising lactose 2.0% (w / v), yeast extract (manufactured by Difco) 0.1 (w / v)%, and water is used for seed culture and main culture. Rhizobium radiobacter strain G37 was cultured in the same manner as in Experiment 1-2, except that three flasks containing 100 mL of medium were used in an Erlenmeyer flask. When the sugar composition of the culture solution was analyzed by HPLC, a new carbohydrate peak other than lactose as a raw material was confirmed.

培養終了後、得られた培養液約３００ｍＬを珪藻土ろ過することにより菌体を除去し、ろ液をエバポレーターにて減圧濃縮し、得られた濃縮液を実験１−２に準じた分取ＨＰＬＣに供し、新たに生成した糖質のピーク画分を分取した。分取した溶液を活性炭で脱色ろ過し、ろ液をエバポレーターにて減圧濃縮し、濃縮液の５倍量のメタノールを添加し室温に放置したところ、約１週間で結晶が析出した。結晶懸濁液を濾過して結晶を回収し、真空乾燥することにより標品３．８ｇを得た。得られた標品の純度をＨＰＬＣにより分析したところ、９８．６％であった。実験１−１で３−ケトトレハロースについて行ったと同様の手法により分析したところ、得られた標品が３−ケトラクトース（４−Ｏ−β−３−ケトガラクトシルグルコース）であることが判明した。 After completion of the culture, about 300 mL of the obtained culture solution is filtered through diatomaceous earth to remove the cells, the filtrate is concentrated under reduced pressure using an evaporator, and the resulting concentrate is subjected to preparative HPLC according to Experiment 1-2. Then, a peak fraction of newly produced carbohydrate was collected. The separated solution was decolorized and filtered with activated carbon, the filtrate was concentrated under reduced pressure using an evaporator, and 5 times the amount of the concentrated methanol was added and allowed to stand at room temperature. Crystals precipitated in about one week. The crystal suspension was filtered to recover the crystals, and vacuum dried to obtain 3.8 g of a standard product. When the purity of the obtained standard was analyzed by HPLC, it was 98.6%. As a result of analysis by a method similar to that performed for 3-ketotrehalose in Experiment 1-1, it was found that the obtained preparation was 3-ketolactose (4-O-β-3-ketogalactosylglucose).

＜実験１−５：３−ケトマルトースの調製＞
マルトース５．０％（ｗ／ｖ）、ビール酵母エキス（オリエンタル酵母工業株式会社製）０．０２（ｗ／ｖ）、ソルリス０９５Ｅ（オリエンタル酵母工業株式会社製）０．０４（ｗ／ｖ）％、クエン酸２アンモニウム０．４５（ｗ／ｖ）％、リン酸水素２アンモニウム０．４５（ｗ／ｖ）％、コハク酸アンモニウム０．６０（ｗ／ｖ）％、リン酸水素二カリウム０．１０（ｗ／ｖ）％、塩化カルシウム２水和物０．０５（ｗ／ｖ）％、硫酸マグネシウム７水和物０．０５（ｗ／ｖ）％、硫酸鉄７水和物０．００５（ｗ／ｖ）％、ミネラル酵母Ｚｎ０．００１（ｗ／ｖ）％及び水からなる液体培地（ｐＨ６．８）を試験管１本当たり３ｍＬ入れ、オートクレーブで１２１℃、２０分滅菌し、冷却した後、寒天スラント培地にて２７℃で培養したリゾビウム・ラジオバクターＧ３７株を一白金耳接種し、２７℃で４８時間振トウ培養したものをシード培養液とした。<Experiment 1-5: Preparation of 3-ketomaltose>
Maltose 5.0% (w / v), Beer yeast extract (Oriental Yeast Industry Co., Ltd.) 0.02 (w / v), Sollis 095E (Oriental Yeast Industry Co., Ltd.) 0.04 (w / v)% , 0.45 (w / v)% diammonium citrate, 0.45 (w / v)% diammonium hydrogen phosphate, 0.60 (w / v)% ammonium succinate, dipotassium hydrogen phosphate 10 (w / v)%, calcium chloride dihydrate 0.05 (w / v)%, magnesium sulfate heptahydrate 0.05 (w / v)%, iron sulfate heptahydrate 0.005 ( 3 mL of a liquid medium (pH 6.8) consisting of w / v)%, mineral yeast Zn0.001 (w / v)% and water, sterilized in an autoclave at 121 ° C. for 20 minutes, and cooled. And cultured at 27 ° C. in an agar slant medium. The Zobiumu radiobacter G37 strain was a platinum loop inoculation, a material obtained by tow culture shaking for 48 hours at 27 ℃ was a seed culture solution.

上記と同じ組成を有する液体培地を、５００ｍＬ容三角フラスコに５０ｍＬ入れたものを２０本調製し、ｐＨ６．８に調整後、１２１℃で２０分間滅菌し、冷却した。次いで、上記のシード培養液をそれぞれの三角フラスコ１本に対して、０．５ｍＬずつ接種した後、２７℃で７２時間、回転振トウ培養しメイン培養液とした。培養液の糖組成をＨＰＬＣにより分析したところ、原料であるマルトース以外の新しい糖質ピークが確認された。 Twenty liquid culture media having 50 mL in a 500 mL Erlenmeyer flask having the same composition as above were prepared, adjusted to pH 6.8, sterilized at 121 ° C. for 20 minutes, and cooled. Next, 0.5 mL each of the above seed culture solution was inoculated into one Erlenmeyer flask, and then the tow culture was performed at 27 ° C. for 72 hours to obtain a main culture solution. When the sugar composition of the culture solution was analyzed by HPLC, a new carbohydrate peak other than maltose as a raw material was confirmed.

培養終了後、得られた約１Ｌの培養液を１０，０００ｒｐｍで遠心分離することにより菌体を除去し、得られた遠心上清を１００℃で１０分間加熱処理した後、再び１０，０００ｒｐｍで遠心分離した。得られた遠心上清にエタノール２，７００ｍＬを添加し、さらに１０，０００ｒｐｍで遠心処理を行った。次いで、遠心上製をエバポレーターにて減圧下で５００ｍＬに濃縮し、得られた濃縮液を０．２２μｍメンブランフィルターにてろ過した後、実験１−１と同じ条件による分取ＨＰＬＣを繰り返して、原料マルトースから新たに生成した糖質のピーク画分を分取し、濃縮し、凍結乾燥にて粉末化し、標品５．１ｇを得た。得られた標品の純度をＨＰＬＣにより分析したところ、９６．２％であった。実験１−１で３−ケトトレハロースについて行ったと同様の手法により分析したところ、得られた標品が３−ケトマルトース（４−Ｏ−α−３−ケトグルコシルグルコース）であることが判明した。 After completion of the culture, the cells were removed by centrifuging about 1 L of the obtained culture solution at 10,000 rpm. The obtained supernatant was heat-treated at 100 ° C. for 10 minutes, and then again at 10,000 rpm. Centrifuged. Ethanol 2,700mL was added to the obtained centrifugation supernatant, and also centrifuged at 10,000 rpm. Subsequently, the centrifugal product was concentrated to 500 mL under reduced pressure using an evaporator, and the obtained concentrated solution was filtered through a 0.22 μm membrane filter, and then preparative HPLC was repeated under the same conditions as in Experiment 1-1 to obtain raw material maltose. The newly produced carbohydrate peak fraction was collected, concentrated and powdered by freeze-drying to obtain 5.1 g of a standard product. The purity of the obtained sample was analyzed by HPLC and found to be 96.2%. As a result of analysis by a method similar to that performed for 3-ketotrehalose in Experiment 1-1, it was found that the obtained preparation was 3-ketomaltose (4-O-α-3-ketoglucosylglucose).

＜実験１−６：３−ケトスクロースの調製＞
シード培養及びメイン培養に用いる液体培地の糖質をスクロース（和光純薬工業株式会社、試薬特級）に替えた以外は実験１−５と同様にリゾビウム・ラジオバクターＧ３７株を培養した。培養液の糖組成をＨＰＬＣにより分析したところ、原料であるスクロース以外の新しい糖質ピークが確認された。培養終了後、３−ケトマルトースとほぼ同様の操作により精製し、標品７．５ｇを得た。得られた標品の純度をＨＰＬＣにより分析したところ、９０．３％であった。実験１−１で３−ケトトレハロースについて行ったと同様の手法により分析したところ、得られた標品が３−ケトスクロース（Ｏ−α−３−ケトグルコシル（１→２）β−フラクトシド）であることが判明した。<Experiment 1-6: Preparation of 3-keto sucrose>
Rhizobium radiobacter G37 strain was cultured in the same manner as in Experiment 1-5, except that the sugar in the liquid medium used for seed culture and main culture was changed to sucrose (Wako Pure Chemical Industries, Ltd., reagent special grade). When the sugar composition of the culture solution was analyzed by HPLC, a new carbohydrate peak other than sucrose as a raw material was confirmed. After completion of the culture, purification was carried out in substantially the same manner as 3-ketomaltose to obtain 7.5 g of a standard product. The purity of the obtained sample was analyzed by HPLC and found to be 90.3%. When the analysis was performed by the same method as that performed for 3-ketotrehalose in Experiment 1-1, the obtained sample was 3-ketosucrose (O-α-3-ketoglucosyl (1 → 2) β-fructoside). It has been found.

＜実験１−７：３−ケトマルチトールの調製＞
シード培養及びメイン培養に用いる液体培地の糖質をマルチトール（東京化成工業株式会社、純度９３．０％以上）に替え、濃度を３％に変更した以外は実験１−５と同様にリゾビウム・ラジオバクターＧ３７株を培養した。培養液の糖組成をＨＰＬＣにより分析したところ、原料であるマルチトール以外の新しい糖質ピークが確認された。培養終了後、３−ケトマルトースと同様の操作により精製し、標品９．４ｇを得た。得られた標品の純度をＨＰＬＣにより分析したところ、９０．２％であった。実験１−１で３−ケトトレハロースについて行ったと同様の手法により分析したところ、得られた標品が３−ケトマルチトール（４−Ｏ−α−３−ケトグルコシルソルビトール）であることが判明した。<Experiment 1-7: Preparation of 3-keto maltitol>
Rhizobium / Rhizobium was the same as in Experiment 1-5 except that the sugar in the liquid medium used for seed culture and main culture was changed to maltitol (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd., purity 93.0% or more) and the concentration was changed to 3%. Radiobacter G37 strain was cultured. When the sugar composition of the culture broth was analyzed by HPLC, a new carbohydrate peak other than maltitol as a raw material was confirmed. After completion of the culture, purification was performed in the same manner as for 3-ketomaltose to obtain 9.4 g of a standard product. The purity of the obtained sample was analyzed by HPLC and found to be 90.2%. As a result of analysis similar to that performed for 3-ketotrehalose in Experiment 1-1, it was found that the obtained preparation was 3-keto maltitol (4-O-α-3-ketoglucosyl sorbitol). .

＜実験１−８：３，３´−ジケトトレハロースの調製＞
スクロース１．０（ｗ／ｖ）％、トレハロース４．０（ｗ／ｖ）％、尿素０．０９（ｗ／ｖ）％、硫酸マグネシウム七水和物０．０１５（ｗ／ｖ）％、硫酸鉄七水和物０．００１（ｗ／ｖ）％、クエン酸一水和物０．０１７（ｗ／ｖ）％、リン酸二水素カリウム０．１０７（ｗ／ｖ）％、リン酸二水素ナトリウム二水和物０．２１７（ｗ／ｖ）％を含む液体培地をｐＨ６．８に調整後、試験管１本当たり３ｍＬ入れ、オートクレーブで１２１℃、２０分滅菌し、冷却した後、フラボバクテリウム・サッカロフィラムＮＢＲＣ１５９４４株をグリセロールストックから３０μＬ接種した。２７℃で９６時間振トウ培養したものをシード培養液とした。<Experiment 1-8: Preparation of 3,3′-diketotrehalose>
Sucrose 1.0 (w / v)%, trehalose 4.0 (w / v)%, urea 0.09 (w / v)%, magnesium sulfate heptahydrate 0.015 (w / v)%, sulfuric acid Iron heptahydrate 0.001 (w / v)%, citric acid monohydrate 0.017 (w / v)%, potassium dihydrogen phosphate 0.107 (w / v)%, dihydrogen phosphate After adjusting the liquid medium containing sodium dihydrate 0.217 (w / v)% to pH 6.8, put 3 mL per test tube, sterilize in an autoclave at 121 ° C. for 20 minutes, cool, and then add flavobacteria. Um Saccharophilum NBRC15944 strain was inoculated with 30 μL from a glycerol stock. A seed culture was obtained by shaking and culturing at 27 ° C. for 96 hours.

上記と同じ組成を有する液体培地を、５００ｍＬ容三角フラスコに１００ｍＬ入れたものを４０本調製し、ｐＨ６．８に調整後、１２１℃で２０分間滅菌し、冷却した。次いで、上記のシード培養液をそれぞれの三角フラスコ１本に対して、１ｍＬずつ接種した後、２７℃で２４時間、回転振トウ培養しメイン培養液とした。 40 liquid culture media having the same composition as described above were prepared by putting 100 mL in a 500 mL Erlenmeyer flask, adjusted to pH 6.8, sterilized at 121 ° C. for 20 minutes, and cooled. Next, 1 mL each of the above seed culture solution was inoculated into each Erlenmeyer flask, and then the shaker tow culture was performed at 27 ° C. for 24 hours to obtain a main culture solution.

上記メイン培養液を１０，０００ｒｐｍで遠心分離した。遠心上清は除去し、得られた菌体にＴｒｉｔｏｎＸ−１００、リゾチームを添加し、室温で１時間撹拌した。次いで、−８０℃に１時間置くことで凍結し、３８℃の湯浴中で１時間融解した。次いで、超音波破砕を行い、１０，０００ｒｐｍで遠心分離した。得られた遠心上清をグルコシド３−脱水素酵素の粗酵素液とした。 The main culture was centrifuged at 10,000 rpm. The centrifugation supernatant was removed, and Triton X-100 and lysozyme were added to the obtained cells, followed by stirring at room temperature for 1 hour. Next, it was frozen by placing it at −80 ° C. for 1 hour, and thawed in a 38 ° C. water bath for 1 hour. Subsequently, ultrasonic crushing was performed, and centrifugation was performed at 10,000 rpm. The obtained centrifugal supernatant was used as a crude enzyme solution of glucoside 3-dehydrogenase.

グルコシド３−脱水素酵素の活性は、概略、以下の原理に基づき測定した。すなわち、メチルα−グルコシドを基質とし、グルコシド３−脱水素酵素がメチル−α−グルコシドを酸化しメチル−α−３−ケトグルコシドに変換する際にグルコシド３−脱水素酵素の補酵素であるフラビンアデニンジヌクレオチド（ＦＡＤ）が還元され、還元型ＦＡＤ（ＦＡＤＨ_２）が生成することから、フェナジンメトサルフェイト（ＰＭＳ）とジクロロインドフェノール（ＤＣＩＰ）を共役させ、最終的に酸化型ＤＣＩＰの減少（還元型ＤＣＩＰの生成）を波長６６０ｎｍの吸光度を測定することでメチル−α−グルコシドの酸化活性を評価した。具体的には、適宜希釈した酵素液をマイクロプレートのウェルに１９５μＬ入れ、これに、メチル−α−グルコシド、ＰＭＳ、ＤＣＩＰ、及び、リン酸緩衝液（ｐＨ７．０）を含む基質溶液５０μＬを添加することにより、反応液量を２００μＬとし、且つ、メチル−α−グルコシド、ＰＭＳ、ＤＣＩＰ及びリン酸緩衝液の終濃度をそれぞれ１０ｍＭ、１ｍＭ、６０μＭ及び５０ｍＭになるように調製し酵素反応液とした。酵素反応はｐＨ７．０、３０℃、暗所で１０分間行い、経時的に波長６６０ｎｍの吸光度をプレートリーダーにて測定した。なお、グルコシド３−脱水素酵素の活性１単位は、上記条件下で１分間に１μｍｏｌの基質を酸化する活性と定義した。The activity of glucoside 3-dehydrogenase was roughly measured based on the following principle. That is, flavin which is a coenzyme of glucoside 3-dehydrogenase when methyl α-glucoside is used as a substrate and glucoside 3-dehydrogenase oxidizes methyl-α-glucoside and converts it to methyl-α-3-ketoglucoside Since adenine dinucleotide (FAD) is reduced and reduced FAD (FADH ₂ ) is produced, phenazine methosulfate (PMS) and dichloroindophenol (DCIP) are conjugated, and finally reduction of oxidized DCIP ( Production of reduced DCIP) was measured for absorbance at a wavelength of 660 nm to evaluate the oxidation activity of methyl-α-glucoside. Specifically, 195 μL of an appropriately diluted enzyme solution is placed in a well of a microplate, and 50 μL of a substrate solution containing methyl-α-glucoside, PMS, DCIP, and phosphate buffer (pH 7.0) is added thereto. As a result, the reaction volume was adjusted to 200 μL, and the final concentrations of methyl-α-glucoside, PMS, DCIP, and phosphate buffer were adjusted to 10 mM, 1 mM, 60 μM, and 50 mM, respectively. . The enzyme reaction was carried out at pH 7.0, 30 ° C. in the dark for 10 minutes, and the absorbance at a wavelength of 660 nm was measured with a plate reader over time. In addition, 1 unit of activity of glucoside 3-dehydrogenase was defined as the activity of oxidizing 1 μmol of substrate per minute under the above conditions.

トレハロース、フェリシアン化カリウム、及びリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）の終濃度が、それぞれ４０ｍＭ、１００ｍＭ、及び２５０ｍＭ、上記で得た粗酵素液がトレハロース１ｇ当たり１８単位となるように調製した反応液３９０ｍＬを２７℃、８時間反応させた。得られた反応液に９１０ｍＬのエタノールを添加し、１０，０００ｒｐｍで遠心分離した。遠心上清をエバポレーターにて減圧下で６０ｍＬに濃縮し、得られた濃縮液を０．２２μｍメンブランフィルターにてろ過した後、実験１−１と同じ条件による分取ＨＰＬＣを繰り返して、原料トレハロースから新たに生成した糖質のピーク画分を分取し、濃縮した。次いで、下記条件で分取を繰り返して、原料トレハロースから新たに生成した糖質のピーク画分を分取し、濃縮し、凍結乾燥にて粉末化し、標品４．３ｇを得た。得られた標品の純度をＨＰＬＣにより分析したところ、９８．１％であった。標品の一部を実験１−１で３−ケトトレハロースについて行ったと同様の手法により分析したところ、得られた標品が３，３´−ジケトトレハロースであることが判明した。 The final concentrations of trehalose, potassium ferricyanide, and phosphate buffer (pH 7.0) were 40 mM, 100 mM, and 250 mM, respectively, and 390 mL of a reaction solution prepared so that the crude enzyme solution obtained above was 18 units per gram of trehalose. Was reacted at 27 ° C. for 8 hours. To the obtained reaction solution, 910 mL of ethanol was added and centrifuged at 10,000 rpm. The centrifugal supernatant was concentrated to 60 mL under reduced pressure using an evaporator, and the obtained concentrated solution was filtered through a 0.22 μm membrane filter. Then, preparative HPLC was repeated under the same conditions as in Experiment 1-1, and from the raw material trehalose. The newly produced peak fraction of carbohydrate was collected and concentrated. Subsequently, fractionation was repeated under the following conditions, and a peak fraction of a saccharide newly produced from the raw material trehalose was collected, concentrated, and pulverized by freeze-drying to obtain 4.3 g of a standard product. When the purity of the obtained standard was analyzed by HPLC, it was 98.1%. When a part of the sample was analyzed by the same method as that performed on 3-ketotrehalose in Experiment 1-1, it was found that the obtained sample was 3,3′-diketotrehalose.

（分取ＨＰＬＣ条件）
カラム：ＳｈｏｄｅｘＳＵＧＡＲＫＳ−８０１
（内径８．０ｍｍ、長さ３００ｍｍ、昭和電工株式会社製）
溶離液：超純水
流速：０．４ｍＬ／分
カラム温度：７５℃
検出：示差屈折計(Preparative HPLC conditions)
Column: Shodex SUGAR KS-801
(Inner diameter 8.0mm, length 300mm, manufactured by Showa Denko KK)
Eluent: Ultrapure water Flow rate: 0.4 mL / min Column temperature: 75 ° C
Detection: Differential refractometer

＜実験１−９：メチルα−３−ケトグルコシドの調製＞
メチルα−グルコシド、フェリシアン化カリウム、及びリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）の終濃度が、それぞれ４０ｍＭ、１００ｍＭ、及び２５０ｍＭ、実験１−８と同様の手法で調製した粗酵素液がメチルα−グルコシド１ｇ当たり８．１単位となるように調製した反応液２４０ｍＬを、室温にて２時間反応させた。得られた反応液に５６０ｍＬのエタノールを添加し、１０，０００ｒｐｍで遠心分離した。遠心上清をエバポレーターにて減圧下で４０ｍＬに濃縮し、得られた濃縮液を０．２２μｍメンブランフィルターにてろ過した後、実験１−１と同じ条件による分取ＨＰＬＣを繰り返して、原料メチルα−グルコシドから新たに生成した糖質のピーク画分を分取し、濃縮し、凍結乾燥にて粉末化し、標品０．９ｇを得た。得られた標品の純度をＨＰＬＣにより分析したところ、９８．１％であった。標品の一部を実験１−１で３−ケトトレハロースについて行ったと同様の手法により分析したところ、得られた標品がメチルα−３−ケトグルコシドであることが判明した。<Experiment 1-9: Preparation of methyl α-3-ketoglucoside>
The final concentrations of methyl α-glucoside, potassium ferricyanide, and phosphate buffer (pH 7.0) were 40 mM, 100 mM, and 250 mM, respectively, and the crude enzyme solution prepared in the same manner as in Experiment 1-8 was methyl α-glucoside. 240 mL of a reaction solution prepared to be 8.1 units per 1 g was reacted at room temperature for 2 hours. 560 mL of ethanol was added to the resulting reaction solution and centrifuged at 10,000 rpm. The centrifugal supernatant was concentrated to 40 mL under reduced pressure with an evaporator, and the obtained concentrated solution was filtered with a 0.22 μm membrane filter. Then, preparative HPLC was repeated under the same conditions as in Experiment 1-1, and the raw material methyl α -A peak fraction of carbohydrate newly produced from glucoside was collected, concentrated, and powdered by freeze-drying to obtain 0.9 g of a standard product. When the purity of the obtained standard was analyzed by HPLC, it was 98.1%. When a part of the sample was analyzed by the same method as performed for 3-ketotrehalose in Experiment 1-1, it was found that the obtained sample was methyl α-3-ketoglucoside.

＜実験２：２−ケトグルコース及び２−ケトトレハロースの調製＞
ピラノース２−オキシダーゼを用いた酵素法によりＤ−グルコースから２−ケトグルコースを調製するとともに、得られた２−ケトグルコースを受容体とし、β−グルコース−１−リン酸（以下、「β−Ｇ１Ｐ」と略称する。）をグルコシル供与体としたトレハロースホスホリラーゼの糖転移反応により２−ケトトレハロースを調製した。<Experiment 2: Preparation of 2-ketoglucose and 2-ketotrehalose>
2-ketoglucose is prepared from D-glucose by an enzymatic method using pyranose 2-oxidase, and the obtained 2-ketoglucose is used as a receptor to form β-glucose-1-phosphate (hereinafter referred to as “β-G1P”). 2-ketotrehalose was prepared by transglycosylation of trehalose phosphorylase using glucosyl donor.

＜実験２−１：２−ケトグルコースの調製＞
Ｄ−グルコースを５０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ５．５）に終濃度３％（ｗ／ｖ）になるように溶解した基質溶液１００ｍＬに、基質１ｇ当たり３１単位のピラノース２−オキシダーゼ（カワラタケ（Ｔｒａｍｅｔｅｓｓｐ．）由来、シグマアルドリッチジャパン社販売）、及び、基質１ｇ当たり２，７００単位のカタラーゼ（牛肝臓由来、和光純薬工業株式会社販売）を添加し、２４０ｒｐｍで振トウしながら、２７℃で２４時間反応させた。なお、カタラーゼを併用した理由は、ピラノース２−オキシダーゼがＤ−グルコースに作用し２−ケトグルコースを生成する反応過程で過酸化水素が生成するため、酵素を失活させる懸念がある過酸化水素を分解するためである。酵素反応後、得られた反応液を１００℃で１０分間加熱することにより酵素を失活させた。得られた反応液における２−ケトグルコースの純度をＨＰＬＣにより分析したところ、９６．４％であった。なお、得られた標品が２−ケトグルコースであることは、市販の２−ケトグルコース標準品（試薬、シグマアルドリッチジャパン社販売）とＨＰＬＣ分析におけるクロマトグラムを比較することにより確認した。最終的に３ｇのＤ−グルコースから２．８６ｇの２−ケトグルコースが得られた。<Experiment 2-1: Preparation of 2-ketoglucose>
In 100 mL of a substrate solution in which D-glucose was dissolved in 50 mM acetate buffer (pH 5.5) to a final concentration of 3% (w / v), 31 units of pyranose 2-oxidase (Travemes sp. ), Sigma Aldrich Japan Co., Ltd.), and 2,700 units of catalase (derived from beef liver, Wako Pure Chemical Industries Co., Ltd.) per gram of substrate were added and shaken at 240 rpm for 24 hours at 27 ° C. Reacted. The reason for using catalase in combination is that hydrogen peroxide is produced in the reaction process in which pyranose 2-oxidase acts on D-glucose to produce 2-ketoglucose. It is for decomposing. After the enzyme reaction, the resulting reaction solution was heated at 100 ° C. for 10 minutes to deactivate the enzyme. It was 96.4% when the purity of 2-ketoglucose in the obtained reaction liquid was analyzed by HPLC. In addition, it confirmed by comparing the chromatogram in HPLC analysis with the commercially available 2-ketoglucose standard goods (a reagent, the sale by Sigma-Aldrich Japan) that the obtained standard was 2-ketoglucose. Finally, 2.86 g of 2-ketoglucose was obtained from 3 g of D-glucose.

＜実験２−２：２−ケトトレハロースの調製＞
実験２−１の方法で得た２−ケトグルコース含有反応液にβ−Ｇ１Ｐ（林原調製品）、５０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ５．５）を添加し、２−ケトグルコースの終濃度を１％（ｗ／ｖ）、β−Ｇ１Ｐの終濃度を１０％となるように調整した基質溶液２００ｍＬに、β−Ｇ１Ｐ１ｇ当たり１０単位（２−ケトグルコース当たり１００単位）のトレハロースホスホリラーゼ（サーモアナエロバクター由来、林原調製品）を添加し４０℃で２４時間反応させた。酵素反応後、得られた反応液を１００℃で１０分間加熱することにより酵素を失活させた。反応液をＬＣ／ＭＳ分析に供し、分子量がトレハロースより２小さい２−ケトトレハロースの生成を確認した。反応液中の２−ケトトレハロース含量は０．３７ｇであった。得られた反応液を脱塩した後、実験１−１で行ったと同じ条件で分取ＨＰＬＣを行い、２−ケトトレハロース画分を回収し、実験１−１で行ったと同じ分析条件で２−ケトトレハロースの純度を測定したところ、９５．０％であった。最終的に２ｇの２−ケトグルコースを用いて０．３６ｇの２−ケトトレハロースが得られた。<Experiment 2-2: Preparation of 2-ketotrehalose>
Β-G1P (Hayashibara Preparation) and 50 mM acetate buffer (pH 5.5) were added to the 2-ketoglucose-containing reaction solution obtained by the method of Experiment 2-1, and the final concentration of 2-ketoglucose was 1% ( w / v), 200 units of a substrate solution adjusted to a final concentration of β-G1P of 10%, 10 units of β-G1P (100 units per 2-ketoglucose) trehalose phosphorylase (from Thermoanaerobacter, Hayashibara preparations) were added and reacted at 40 ° C. for 24 hours. After the enzyme reaction, the resulting reaction solution was heated at 100 ° C. for 10 minutes to deactivate the enzyme. The reaction solution was subjected to LC / MS analysis, and production of 2-ketotrehalose having a molecular weight 2 smaller than that of trehalose was confirmed. The 2-ketotrehalose content in the reaction solution was 0.37 g. After desalting the obtained reaction solution, preparative HPLC was performed under the same conditions as in Experiment 1-1, the 2-ketotrehalose fraction was recovered, and the same analysis conditions as in Experiment 1-1 were performed. The purity of ketoretrehalose was measured and found to be 95.0%. Finally, 0.36 g of 2-ketotrehalose was obtained using 2 g of 2-ketoglucose.

＜実験３：ヒト単球性細胞のＴＮＦ−α産生に及ぼす３−ケト糖又は２−ケト糖の影響＞
ヒト単球性細胞株であるＴＨＰ−１細胞は、リポポリサッカライド（ＬＰＳ）とインターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）で刺激すると大量のＴＮＦ−αを産生する。そこで、この実験系を用いて３−ケト糖又は２−ケト糖がＴＮＦ−α産生に及ぼす影響を検討した。<Experiment 3: Effect of 3-keto sugar or 2-keto sugar on TNF-α production of human monocytic cells>
THP-1 cells, a human monocytic cell line, produce large amounts of TNF-α when stimulated with lipopolysaccharide (LPS) and interferon-γ (IFN-γ). Therefore, the influence of 3-keto sugar or 2-keto sugar on TNF-α production was examined using this experimental system.

本実験で用いたＴＨＰ−１細胞は、細胞分化誘導剤としても知られている酪酸ナトリウムで処理するとＬＰＳに対する応答性が高まることが報告されていることから、予め２ｍＭの酪酸ナトリウムで４〜５日間培養したものを用いた。酪酸ナトリウム処理したＴＨＰ−１細胞を、１０％ウシ胎児血清含有ＲＰＭＩ１６４０培地を用い１×１０^６個／ｍＬの細胞濃度に調製したものを９６ウェルマイクロプレートに０．１ｍＬ添加した。次に同培地に実験１で得た３−ケトトレハロース、３−ケトラクトース、３−ケトコージビオース、３−ケトイソマルトース、３−ケトマルトース、３−ケトスクロース、３−ケトマルチトール、３，３´−ジケトトレハロース、メチルα−３−ケトグルコシド、実験２で得た２−ケトグルコース、２−ケトトレハロースをウェル当たり０．０５ｍＬ添加して、表１に示す各終濃度になるよう調整し、３７℃で２〜３時間インキュベーションした。その後、同培地に、１２．５μｇ/ｍＬの濃度に調製したＬＰＳと１，２５０ＩＵ/ｍＬの濃度に調製したヒトＩＦＮ-γを混合した培地を、ウェル当たり０．１ｍＬ添加してＴＨＰ−１細胞を刺激した。ＴＨＰ−１細胞を３７℃で１８時間培養した後に、培養上清中のＴＮＦ−α産生量を特異的ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫測定）法により測定した。なお、ＴＮＦ−α産生量は、被験物質無添加の対照における培養上清中のＴＮＦ−α産生量を１００％として、下記計算式により相対評価した。また、従来から抗炎症剤として知られているグリチルリチン酸ジカリウム（ＧＫ２）の作用と比較した。The THP-1 cells used in this experiment have been reported to increase responsiveness to LPS when treated with sodium butyrate, which is also known as a cell differentiation inducer. Therefore, 4 to 5 with 2 mM sodium butyrate in advance. What was cultured for one day was used. 0.1 mL of THP-1 cells treated with sodium butyrate prepared at a cell concentration of 1 × 10 ⁶ cells / mL using RPMI 1640 medium containing 10% fetal bovine serum was added to a 96-well microplate. Next, 3-ketotrehalose, 3-ketolactose, 3-ketocodibiose, 3-ketoisomaltose, 3-ketomaltose, 3-ketosucrose, 3-ketosultol, 3 , 3′-diketotrehalose, methyl α-3-ketoglucoside, 2-ketoglucose obtained in Experiment 2 and 2-ketotrehalose were added at 0.05 mL per well so that the final concentrations shown in Table 1 were obtained. Adjust and incubate at 37 ° C. for 2-3 hours. Thereafter, 0.1 mL per well of a medium in which LPS prepared to a concentration of 12.5 μg / mL and human IFN-γ adjusted to a concentration of 1,250 IU / mL were added to the same medium to add THP-1 cells. Stimulated. After THP-1 cells were cultured at 37 ° C. for 18 hours, the amount of TNF-α produced in the culture supernatant was measured by a specific ELISA (enzyme-linked immunoassay) method. The production amount of TNF-α was evaluated relative to the following formula using the TNF-α production amount in the culture supernatant of the control without addition of the test substance as 100%. Moreover, it compared with the effect | action of the dipotassium glycyrrhizinate (GK2) conventionally known as an anti-inflammatory agent.

ＴＨＰ−１細胞のＴＮＦ−α産生に及ぼす３−ケト糖又は２−ケト糖の影響を表１に示す。実験は３回行い、対照に対してダネットの多重比較検定を行なった。表１に３回の実験の平均値を示し、危険率ｐ＜０．０１の場合を有意差ありと判定し、＊で示した。 Table 1 shows the effect of 3-keto sugar or 2-keto sugar on TNF-α production of THP-1 cells. The experiment was performed in triplicate and Dunnett's multiple comparison test was performed on the control. Table 1 shows the average values of three experiments. When the risk rate is p <0.01, it is determined that there is a significant difference, and is indicated by *.

表１から明らかなように、抗炎症剤として知られているＧＫ２は、濃度依存的にＴＨＰ−１細胞のＴＮＦ−α産生を抑制し、１．０ｍＭで対照の５３．３％、２．０ｍＭで１７．４％まで抑制した。一方、３−ケト二糖である３−ケトトレハロース、３−ケトラクトース、３−ケトコージビオース、３−ケトイソマルトース、３−ケトマルトース、３−ケトスクロース、３−ケトマルチトール及び３，３´−ジケトトレハロースも、０．５ｍＭ乃至２．０ｍＭの濃度範囲で、いずれもＴＨＰ−１細胞のＴＮＦ−α産生を対照の１．５〜８７．８％まで抑制し、その抑制はいずれも濃度依存的で、且つ、有意なものであった。 As is apparent from Table 1, GK2, known as an anti-inflammatory agent, suppresses TNF-α production of THP-1 cells in a concentration-dependent manner, and 53 mM and 2.0 mM of the control at 1.0 mM. To 17.4%. Meanwhile, 3-ketotrehalose, 3-ketolactose, 3-ketocodibiose, 3-ketoisomaltose, 3-ketomaltose, 3-ketosucrose, 3-ketomaltitol and 3, 3'-diketotrehalose also suppressed TNF-α production in THP-1 cells to 1.5-87.8% of the control in the concentration range of 0.5 mM to 2.0 mM, Was also concentration-dependent and significant.

３−ケト単糖の誘導体であるメチルα−３−ケトグルコシドは、ＴＮＦ−α産生抑制作用が弱く、４．０ｍＭでも有意な抑制を示さなかったものの、８．０ｍＭで７９．７％、１６．０ｍＭで４９．５％まで抑制した。一方、２−ケトグルコースは２．０ｍＭで６９．０％、４．０ｍＭで５３．８％までＴＮＦ−αの産生を抑制し、２−ケトトレハロースは０．５乃至２．０ｍＭの濃度範囲で６９．６〜４１．３％まで抑制した。 Methyl α-3-ketoglucoside, which is a derivative of 3-keto monosaccharide, has a weak TNF-α production inhibitory effect and did not show significant suppression even at 4.0 mM, but it was 79.7% at 8.0 mM, 16 It was suppressed to 49.5% at 0.0 mM. On the other hand, 2-ketoglucose inhibits TNF-α production up to 69.0% at 2.0 mM and 53.8% at 4.0 mM, and 2-ketotrehalose has a concentration range of 0.5 to 2.0 mM. It was suppressed to 69.6 to 41.3%.

なお、本実験においては、各被験試料の各濃度において細胞数についても同時に測定したところ、３−ケト糖である３−ケトトレハロース、３−ケトラクトース、３−ケトコージビオース、３−ケトイソマルトース、３−ケトマルトース、３−ケトスクロース、３−ケトマルチトール及びメチルα−３−ケトグルコシド、２−ケト糖である２−ケトグルコース及び２−ケトトレハロースは、いずれの濃度で用いた場合も、細胞数はほぼ対照と同等であり、これらの３−ケト糖又は２−ケト糖の添加によりＴＨＰ−１細胞の生細胞数は低下しないことが確認された。なお、３，３´−ジケトトレハロースの場合には、１．０〜２．０ｍＭの濃度ではわずかに生細胞数が低下したものの、生細胞数を低下させない０．２５ｍＭの低濃度においてもＴＮＦ−αの産生抑制作用が認められた。 In this experiment, when the number of cells was also measured at each concentration of each test sample, 3-ketosugars 3-ketotrehalose, 3-ketolactose, 3-ketocodibiose, 3-ketoiso When maltose, 3-ketomaltose, 3-ketosucrose, 3-ketomaltitol and methyl α-3-ketoglucoside, 2-ketosugars 2-ketoglucose and 2-ketotrehalose are used at any concentration However, the number of cells was almost the same as the control, and it was confirmed that the addition of these 3-keto sugars or 2-keto sugars did not reduce the number of viable THP-1 cells. In the case of 3,3′-diketotrehalose, the number of viable cells slightly decreased at a concentration of 1.0 to 2.0 mM, but TNF even at a low concentration of 0.25 mM that does not decrease the number of viable cells. -Α production inhibitory action was observed.

本実験の結果は、３−ケト糖である３−ケトトレハロース、３−ケトラクトース、３−ケトコージビオース、３−ケトイソマルトース、３−ケトマルトース、３−ケトスクロース、３−ケトマルチトール、３，３´−ジケトトレハロース及びメチルα−３−ケトグルコシド、及び、２−ケト糖である２−ケトグルコース、２−ケトトレハロースはいずれも炎症性サイトカインであるＴＮＦ−αの産生を抑制し、抗炎症剤の有効成分として有用であることを物語っている。ＴＨＰ−１細胞が分泌する炎症性サイトカインＴＮＦ−αは、糖尿病、慢性呼吸器疾患、慢性関節リュウマチ、胃炎、炎症性腸疾患、アテローム性動脈硬化症、心血管障害、ニキビ、アトピー性皮膚炎、神経変性疾患などにおいてその病態形成に深く関与していることがわかっており、本実験の結果は、これらの疾患を含む幅広い炎症に対する抗炎症剤の有効成分として、３−ケト糖又は２−ケト糖が利用できることを示している。 The results of this experiment are 3-keto sugars 3-ketotrehalose, 3-ketolactose, 3-ketocodibiose, 3-keto isomaltose, 3-ketomaltose, 3-ketosucrose, 3-keto maltitol , 3,3′-diketotrehalose and methyl α-3-ketoglucoside, and 2-ketosugar 2-ketoglucose and 2-ketotrehalose all inhibit the production of TNF-α, an inflammatory cytokine. And it is useful as an active ingredient of anti-inflammatory agents. The inflammatory cytokine TNF-α secreted by THP-1 cells is diabetes, chronic respiratory disease, rheumatoid arthritis, gastritis, inflammatory bowel disease, atherosclerosis, cardiovascular disorder, acne, atopic dermatitis, It has been found that it is deeply involved in the pathogenesis of neurodegenerative diseases and the like, and the results of this experiment show that 3-keto sugar or 2-keto is an effective ingredient of anti-inflammatory agents against a wide range of inflammations including these diseases. It shows that sugar can be used.

＜比較実験１：ヒト単球性細胞のＴＮＦ−α産生に及ぼす原料糖質の影響＞
上記で用いた３−ケト糖の原料糖質、すなわち、トレハロース、ラクトース、コージビオース、イソマルトース、マルトース、スクロース、マルチトール、メチル−α−グルコシドに加えて、非特許文献１において抗炎症作用を有することが報告されているＤ−プシコースを被験試料とし、実験３で用いた実験系を用いＴＮＦ−α産生抑制作用を同様に調べた。なお、培地中の各被験試料の濃度を、トレハロース、ラクトース、コージビオース、イソマルトース、マルトース、スクロース、マルチトールについては、４．８ｍＭ、１９．２ｍＭ及び５７．２ｍＭ、メチル−α−グルコシド、Ｄ−プシコースについては、４．８ｍＭ、１４．４ｍＭ及び４３．２ｍＭの三段階とした。<Comparative experiment 1: Effect of raw sugar on TNF-α production of human monocytic cells>
In addition to the 3-keto sugar raw material used above, that is, trehalose, lactose, cordobiose, isomaltose, maltose, sucrose, maltitol, methyl-α-glucoside, non-patent document 1 has an anti-inflammatory action. Using D-psicose reported to be the test sample, the TNF-α production inhibitory action was similarly examined using the experimental system used in Experiment 3. The concentration of each test sample in the medium was 4.8 mM, 19.2 mM and 57.2 mM, methyl-α-glucoside, D- for trehalose, lactose, cordobiose, isomaltose, maltose, sucrose, and maltitol. For psicose, the three stages were 4.8 mM, 14.4 mM and 43.2 mM.

ＴＨＰ−１細胞のＴＮＦ−α産生に及ぼす３−ケト糖の原料糖質及びＤ−プシコースの影響を表２に示す。実験は３回行い、対照に対してダネットの多重比較検定を行なった。表２に実験３回の平均値を示し、危険率ｐ＜０．０１の場合を有意差ありと判定し、＊で示した。 Table 2 shows the effects of 3-ketosugar raw sugar and D-psicose on TNF-α production in THP-1 cells. The experiment was performed in triplicate and Dunnett's multiple comparison test was performed on the control. Table 2 shows the average values of three experiments. When the risk rate p <0.01, it was determined that there was a significant difference, and indicated by *.

表２から明らかなように、トレハロース、ラクトース、コージビオース、マルトース、スクロース、マルチトールは濃度を５７．６ｍＭ又は４３．２ｍＭまで高めた場合にはじめてＴＮＦ−α産生抑制作用を示したものの、イソマルトースは５７．６ｍＭの濃度でも作用を示さなかった。３−ケト二糖がいずれも２ｍＭ以下の濃度でＴＮＦ−α産生抑制作用を示した上記表１の結果と比べると、これら原料二糖の作用はごく弱く、少なくとも５０倍以上の濃度を用いなければ、同様のＴＮＦ−α産生抑制作用を示さないことが分かった。一方、抗炎症作用が報告されているＤ−プシコース、さらにメチル−α−グルコシドは４３．２ｍＭの濃度でＴＮＦ−α産生抑制作用を示した。しかしながら、Ｄ−プシコース及びメチル−α−グルコシドの作用は３−ケト二糖である３−ケトトレハロース、３−ケトラクトース、３−ケトコージビオース、３−ケトイソマルトース、３−ケトマルトース、３−ケトスクロース、３−ケトマルチトール、３，３´−ジケトトレハロースの作用、及び、２−ケト糖である２−ケトグルコース、２−ケトトレハロースの作用に比べ弱いものであった。 As is clear from Table 2, trehalose, lactose, cordobiose, maltose, sucrose, and maltitol showed TNF-α production inhibitory action only when the concentration was increased to 57.6 mM or 43.2 mM. There was no effect even at a concentration of 57.6 mM. Compared with the results in Table 1 above, in which all 3-keto disaccharides showed TNF-α production inhibitory action at a concentration of 2 mM or less, the action of these raw disaccharides was very weak, and at least 50 times the concentration should be used. For example, it was found that the same TNF-α production inhibitory action was not exhibited. On the other hand, D-psicose, which has been reported to have an anti-inflammatory effect, and methyl-α-glucoside exhibited a TNF-α production inhibitory effect at a concentration of 43.2 mM. However, the action of D-psicose and methyl-α-glucoside is the 3-keto disaccharide 3-ketotrehalose, 3-ketolactose, 3-ketocodibiose, 3-keto isomaltose, 3-keto maltose, 3 -It was weaker than the action of ketosucrose, 3-ketomaltitol, 3,3'-diketotrehalose, and the action of 2-ketoglucose and 2-ketotrehalose which are 2-ketosugars.

これらの結果から、分子内にアルドヘキソース構造を有する糖質において、そのアルドヘキソース構造における３位水酸基又は２位水酸基をケト基に変換することによりアルドヘキソース構造を有する糖質の抗炎症作用を顕著に向上させることができることが明らかとなった。 From these results, in the carbohydrate having an aldohexose structure in the molecule, the anti-inflammatory action of the carbohydrate having an aldohexose structure is remarkable by converting the hydroxyl group at position 3 or hydroxyl group at position 2 in the aldohexose structure to a keto group. It became clear that it can be improved.

＜実験４：ヒト皮膚線維芽細胞のＩＬ−８産生に及ぼす３−ケト糖の影響＞
炎症性サイトカインであるＩＬ−８の産生に及ぼす３−ケト糖の影響をヒト正常皮膚線維芽細胞（ＮＨＤＦ細胞）について調べた。<Experiment 4: Effect of 3-Ketosaccharide on IL-8 Production of Human Skin Fibroblasts>
The effect of 3-ketosugar on the production of IL-8, an inflammatory cytokine, was examined in normal human skin fibroblasts (NHDF cells).

９６ウェルマイクロプレートに、１０％ウシ胎児血清含有ダルベッコ変法イーグル培地を用いて、１×１０^５個／ｍＬの濃度に調製したＮＨＤＦ細胞を０．２ｍＬ添加し、ウェルの底面全体を占める状態まで培養した。培養上清を吸引除去した後、新鮮な１０％ウシ胎児血清含有ダルベッコ変法イーグル培地をウェル当り０．１ｍＬ添加した。次に同培地で適宜希釈した３−ケトトレハロース、３−ケトラクトース、３−ケトコージビオース又は３−ケトイソマルトースを０．０５ｍＬ添加し、終濃度が表３に示す濃度になるよう調整し３７℃で２４時間培養し、これにＩＬ−８の産生を刺激するヒトＩＬ−１βを終濃度１ｎｇ／ｍＬとなるように添加してさらに２４時間培養した。比較のため、抗炎症剤として知られているＧＫ２についても同様に行った。To a 96-well microplate, 0.2 mL of NHDF cells prepared at a concentration of 1 × 10 ⁵ cells / mL using Dulbecco's modified Eagle's medium containing 10% fetal bovine serum was added until the entire surface of the well was occupied. Cultured. After aspirating and removing the culture supernatant, 0.1 mL of fresh Dulbecco's modified Eagle medium containing 10% fetal calf serum was added per well. Next, 0.05 mL of 3-ketotrehalose, 3-ketolactose, 3-ketocodibiose or 3-ketoisomaltose diluted appropriately in the same medium is added, and the final concentration is adjusted to the concentration shown in Table 3. After culturing at 37 ° C. for 24 hours, human IL-1β that stimulates the production of IL-8 was added thereto to a final concentration of 1 ng / mL, and further cultured for 24 hours. For comparison, the same procedure was performed for GK2, which is known as an anti-inflammatory agent.

培養上清中のＩＬ−８量は特異的ＥＬＩＳＡキット（アフィメトリックス社製）を用いて検出し、テトラメチルベンジジンで発色させた後、４５０ｎｍの吸光度を測定した。被験試料を添加しない以外は同様に処理したものを対照とし、対照における培養上清中のＩＬ−８産生量を１００％として、下記計算式により、ＩＬ−８産生量を相対評価した。 The amount of IL-8 in the culture supernatant was detected using a specific ELISA kit (manufactured by Affymetrix), developed with tetramethylbenzidine, and the absorbance at 450 nm was measured. The sample treated in the same manner except that the test sample was not added was used as a control, and the production amount of IL-8 in the culture supernatant in the control was defined as 100%, and the production amount of IL-8 was relatively evaluated by the following formula.

ＮＨＤＦ細胞のＩＬ−８産生に及ぼす３−ケト糖の影響を表３に示す。なお、実験は３回行い、対照に対してダネットの多重比較検定を行なった。表３に３回の実験の平均値を示し、危険率ｐ＜０．０１の場合を有意差ありと判定し、＊で示した。 Table 3 shows the effect of 3-keto sugar on IL-8 production of NHDF cells. The experiment was performed three times, and Dunnett's multiple comparison test was performed on the control. Table 3 shows the average value of three experiments. When the risk rate is p <0.01, it is determined that there is a significant difference, and is indicated by *.

表３から明らかなように、対照と比較して、３−ケトトレハロース、３−ケトラクトース、３−ケトコージビオース及び３−ケトイソマルトースでは、試験した濃度範囲においてＩＬ−８産生抑制作用が認められた。なお、ＩＬ−８産生抑制作用が認められた濃度では、３−ケトトレハロースの３．０ｍＭでわずかに細胞数の減少が認められた以外は、細胞数に影響は認められなかったことから、３−ケト糖によるＩＬ−８産生抑制は細胞自体の障害作用によるものではないことが確認された。また、ＧＫ２は３．０ｍＭでは対照に対してＩＬ−８産生の有意な抑制が認められたものの、０．５ｍＭ及び１．０ｍＭでは逆にＩＬ−８産生の増加が認められた。 As is clear from Table 3, compared to the control, 3-ketototrehalose, 3-ketolactose, 3-ketocodibiose and 3-ketoisomaltose have IL-8 production inhibitory action in the tested concentration range. Admitted. In addition, at the concentration at which IL-8 production inhibitory action was observed, there was no effect on the cell number except that a slight decrease in the cell number was observed at 3.0 mM of 3-ketotrehalose. -It was confirmed that suppression of IL-8 production by ketosugar was not due to the damaging action of the cells themselves. Moreover, although GK2 significantly suppressed IL-8 production with respect to the control at 3.0 mM, an increase in IL-8 production was recognized conversely at 0.5 mM and 1.0 mM.

本実験の結果は、３−ケト糖である３−ケトトレハロース、３−ケトラクトース、３−ケトコージビオース及び３−ケトイソマルトースはいずれも炎症性サイトカインであるＩＬ−８の産生を抑制し、抗炎症剤の有効成分として有用であることを物語っている。より具体的には、３−ケト糖がヒト正常皮膚線維芽細胞からのＩＬ−８産生を抑制したことから、アレルギー性皮膚炎、アトピー性皮膚炎、ニキビ、乾癬などの皮膚の炎症症状の緩和、改善に加え、各種炎症性疾患の予防、治療に有用であることを物語っている。 As a result of this experiment, the 3-keto sugars 3-ketotrehalose, 3-ketolactose, 3-ketocodibiose and 3-ketoisomaltose all inhibited the production of IL-8, an inflammatory cytokine. It is useful as an active ingredient in anti-inflammatory drugs. More specifically, since 3-ketosugar suppressed IL-8 production from human normal skin fibroblasts, alleviation of skin inflammatory symptoms such as allergic dermatitis, atopic dermatitis, acne and psoriasis In addition to improvement, it is useful for the prevention and treatment of various inflammatory diseases.

＜実験５：ヒト表皮ケラチノサイト細胞（ＮＨＥＫ細胞）のＩＬ−８産生に及ぼす３−ケト糖の影響＞
炎症性サイトカインであるＩＬ−８の産生に及ぼす３−ケト糖の影響をヒト表皮ケラチノサイト細胞（ＮＨＥＫ細胞）について調べた。<Experiment 5: Effect of 3-ketosugar on IL-8 production of human epidermal keratinocyte cells (NHEK cells)>
The effect of 3-ketosugar on the production of IL-8, an inflammatory cytokine, was examined in human epidermal keratinocyte cells (NHEK cells).

コラーゲンコートした９６ウェルマイクロプレートに、増殖因子含有ケラチノサイト用培地（商品名「ＥｐｉＬｉｆｅ」，ライフテクノロジーズ社製）を用いて、５．０×１０^４個／ｍＬの濃度に調製した正常ＮＨＥＫ細胞を０．２ｍＬ添加し、１〜２日おきに培地を交換しながら３７℃で３日間培養した。その後、増殖因子を含有しないケラチノサイト用培地に交換し、さらに２４時間培養することにより細胞を調製した。培養上清を吸引除去した後、増殖因子を含有しないケラチノサイト用培地で、適宜希釈した３−ケトトレハロース、３−ケトラクトース、３−ケトコージビオース又は３−ケトイソマルトースをウェル当たり０．２ｍＬ添加し、終濃度が表４に示す濃度になるよう調整し３７℃で２４時間培養し、これにＩＬ−８の産生を刺激するヒトＴＮＦ‐αを終濃度１０ｎｇ／ｍＬ、ヒトＩＦＮ-γを１００ＩＵ／ｍＬとなるようにウェル当たり０．０５ｍＬ添加し、さらに１８〜２０時間培養した。比較のため、抗炎症剤として知られているＧＫ２についても同様に行った。Normal NHEK cells prepared at a concentration of 5.0 × 10 ⁴ cells / mL were added to a collagen-coated 96-well microplate using a growth factor-containing keratinocyte culture medium (trade name “EpiLife”, manufactured by Life Technologies). 2 mL was added and cultured at 37 ° C. for 3 days while changing the medium every 1-2 days. Thereafter, the cells were prepared by replacing the medium with a keratinocyte medium containing no growth factor and further culturing for 24 hours. After aspirating and removing the culture supernatant, 0.2 mL of 3-ketotrehalose, 3-ketolactose, 3-ketocodibiose or 3-ketoisomaltose diluted appropriately with a medium for keratinocytes containing no growth factor per well The final concentration is adjusted to the concentration shown in Table 4 and cultured at 37 ° C. for 24 hours. To this, human TNF-α that stimulates the production of IL-8 is added at a final concentration of 10 ng / mL, and human IFN-γ is added. 0.05 mL was added per well so that it might become 100 IU / mL, and also it culture | cultivated for 18 to 20 hours. For comparison, the same procedure was performed for GK2, which is known as an anti-inflammatory agent.

培養上清中のＩＬ−８量は特異的ＥＬＩＳＡキット（アフィメトリックス社製）を用いて検出し、テトラメチルベンジジンで発色させた後、４５０ｎｍの吸光度を測定した。被験試料を添加しない以外は同様に処理したものを対照とし、実験４と同様にＩＬ−８産生量を相対評価した。 The amount of IL-8 in the culture supernatant was detected using a specific ELISA kit (manufactured by Affymetrix), developed with tetramethylbenzidine, and the absorbance at 450 nm was measured. A sample treated in the same manner except that the test sample was not added was used as a control, and the production amount of IL-8 was relatively evaluated in the same manner as in Experiment 4.

ＮＨＥＫ細胞のＩＬ−８産生に及ぼす３−ケト糖の影響を表４に示す。なお、実験は３回行い、対照に対してダネットの多重比較検定を行なった。表４に３回の実験の平均値を示し、危険率ｐ＜０．０１の場合を有意差ありと判定し、＊で示した。 Table 4 shows the effect of 3-keto sugar on the production of IL-8 in NHEK cells. The experiment was performed three times, and Dunnett's multiple comparison test was performed on the control. Table 4 shows the average values of three experiments. When the risk rate p <0.01, it was determined that there was a significant difference, and indicated by *.

表４から明らかなように、対照と比較して、３−ケトトレハロース、３−ケトラクトース、３−ケトコージビオース及び３−ケトイソマルトースでは、試験した濃度範囲においてＩＬ−８産生抑制作用が認められた。また、ＩＬ−８産生抑制作用が認められた濃度では、３−ケトトレハロースの３．０ｍＭでわずかな細胞数の減少が認められた以外は、細胞数に影響は認められなかったことから、３−ケト糖によるＩＬ−８産生抑制は細胞の障害作用によるものではないことが確認された。また、ＧＫ２は０．５ｍＭ及び１．０ｍＭでは対照に対してＩＬ−８産生の有意な抑制が認められたものの、逆に３．０ｍＭでは有意なＩＬ−８産生の増加が認められた。 As is apparent from Table 4, compared to the control, 3-ketototrehalose, 3-ketolactose, 3-ketocodibiose and 3-ketoisomaltose have IL-8 production inhibitory action in the tested concentration range. Admitted. Further, at the concentration at which IL-8 production inhibitory action was observed, there was no effect on the cell number except that a slight decrease in cell number was observed at 3.0 mM of 3-ketotrehalose. -It was confirmed that the suppression of IL-8 production by ketosugar was not due to the cell damaging action. Moreover, although GK2 significantly suppressed IL-8 production with respect to the control at 0.5 mM and 1.0 mM, conversely, significant increase in IL-8 production was observed at 3.0 mM.

本実験の結果は、３−ケト糖である３−ケトトレハロース、３−ケトラクトース、３−ケトコージビオース及び３−ケトイソマルトースはいずれも炎症性サイトカインであるＩＬ−８の産生を抑制し、抗炎症剤の有効成分として有用であることを物語っている。より具体的には、３−ケト糖がヒト表皮ケラチノサイト細胞からのＩＬ−８産生を抑制したことから、アレルギー性皮膚炎、アトピー性皮膚炎、ニキビ、乾癬などの皮膚の炎症症状の緩和、改善に加え、各種炎症性疾患の予防、治療に有用であることを物語っている。 As a result of this experiment, the 3-keto sugars 3-ketotrehalose, 3-ketolactose, 3-ketocodibiose and 3-ketoisomaltose all inhibited the production of IL-8, an inflammatory cytokine. It is useful as an active ingredient in anti-inflammatory drugs. More specifically, since 3-ketosugar suppressed IL-8 production from human epidermal keratinocyte cells, alleviation and improvement of skin inflammatory symptoms such as allergic dermatitis, atopic dermatitis, acne and psoriasis In addition, it is useful for the prevention and treatment of various inflammatory diseases.

＜実験６：ヒト歯肉線維芽細胞のプロスタグランジンＥ２及びＩＬ−６産生に及ぼす３−ケト糖及び２−ケト糖の影響＞
歯周病では歯周病原性細菌の感染により、歯周組織のマクロファージや線維芽細胞が活性化され、炎症関連サイトカインであるＩＬ−１、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α及びプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）が過剰に産生され、組織破壊を誘導していると考えられている。特に歯周病患者の歯肉組織や歯肉溝滲出液中では、ＰＧＥ２レベルが健常者のそれに比べて亢進しており、実際に非ステロイド性抗炎症剤のインドメタシンやイブプロフェンを歯周炎モデルに投与すると歯周病の進行が抑制されることも報告されている（「野口和行、歯周病とプロスタグランジン、鹿歯紀要、２８巻、３９-４８頁（２００８）」）。従って、活性化歯肉線維芽細胞からのＰＧＥ２やＩＬ−６等の炎症メディエーターの産生を抑制できれば、歯周病の予防や治療に有効と考えられる。<Experiment 6: Effect of 3-keto sugar and 2-keto sugar on prostaglandin E2 and IL-6 production of human gingival fibroblasts>
In periodontal disease, macrophages and fibroblasts in periodontal tissues are activated by infection with periodontopathogenic bacteria, and inflammation-related cytokines IL-1, IL-6, TNF-α and prostaglandin E2 (PGE2) are activated. ) Is produced in excess and is thought to induce tissue destruction. In particular, in the gingival tissue and gingival crevicular fluid of periodontal disease patients, PGE2 levels are higher than that of healthy individuals, and when non-steroidal anti-inflammatory drugs indomethacin and ibuprofen are actually administered to a periodontitis model It has also been reported that the progression of periodontal disease is suppressed (“Noguchi Kazuyuki, Periodontal Disease and Prostaglandins, Bullet Journal, Vol. 28, 39-48 (2008)”). Therefore, if production of inflammatory mediators such as PGE2 and IL-6 from activated gingival fibroblasts can be suppressed, it is considered effective for the prevention and treatment of periodontal disease.

ＩＬ−１β刺激による活性化ヒト歯肉線維芽細胞（ＨＧＦ細胞）からのＰＧＥ２及びＩＬ−６産生系を用いて、３−ケトトレハロース及び２−ケトグルコースがＰＧＥ２及びＩＬ−６産生に及ぼす影響を調べ、ＧＫ２と比較した。 Using PGE2 and IL-6 production systems from activated human gingival fibroblasts (HGF cells) stimulated with IL-1β, the effects of 3-ketotrehalose and 2-ketoglucose on PGE2 and IL-6 production were examined. , Compared with GK2.

コラーゲンコートした９６ウェルマイクロプレート（ＡＳＡＨＩガラス社製）に、１０％ウシ胎児血清含有ダルベッコ変法イーグル培地を用いて、５×１０^４個／ｍＬの濃度に調製したＨＧＦ細胞を０．２ｍＬ添加し、ウェルの底面全体を占める状態まで培養した。培養上清を吸引除去した後、新鮮な1０％ウシ胎児血清含有ダルベッコ変法イーグル培地をウェル当り０．１５ｍＬ添加した。次に同培地で適宜希釈した３−ケトトレハロース、２−ケトグルコース又はＧＫ２を０．０５ｍＬ添加し、３７℃で２４時間培養した。その後、ヒトＩＬ−１βを終濃度１ｎｇ／ｍＬとなるように添加し、さらに２４時間培養した。0.2 mL of HGF cells prepared at a concentration of 5 × 10 ⁴ cells / mL were added to a collagen-coated 96-well microplate (ASAHI Glass Co., Ltd.) using Dulbecco's modified Eagle's medium containing 10% fetal bovine serum. Incubation was performed until the entire bottom surface of the well was occupied. After aspirating and removing the culture supernatant, 0.15 mL of fresh Dulbecco's modified Eagle medium containing 10% fetal bovine serum was added per well. Next, 0.05 mL of 3-ketotrehalose, 2-ketoglucose or GK2 appropriately diluted with the same medium was added, and the mixture was cultured at 37 ° C. for 24 hours. Thereafter, human IL-1β was added to a final concentration of 1 ng / mL and further cultured for 24 hours.

培養上清中のＰＧＥ２及びＩＬ−６は、それぞれ特異的ＥＬＩＳＡキット（ＰＧＥ２；ＥｎｚｏＬｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅｓ社製、ＩＬ−６；Ｒ＆Ｄ社製）を用いて検出し、テトラメチルベンジジンで発色させた後、４５０ｎｍの吸光度を測定することにより定量した。被験物質を添加しない以外は同様に処理したものを対照とし、対照における培養上清中のＰＧＥ２及びＩＬ−６を１００％として、実験４でＩＬ−８産生量について示したと同様の計算式により、ＰＧＥ２及びＩＬ−６産生量を相対評価した。なお、実験は３回行い、対照に対してダネットの多重比較検定を行なった。危険率ｐ＜０．０１を有意差ありとし、＊で示した。結果を表５に示す。 PGE2 and IL-6 in the culture supernatant were detected using a specific ELISA kit (PGE2; manufactured by Enzo Lifesciences, IL-6; manufactured by R & D), and developed with tetramethylbenzidine. Quantification was performed by measuring absorbance. The same treatment except that the test substance was not added was used as a control, and PGE2 and IL-6 in the culture supernatant in the control were taken as 100%. The relative production of PGE2 and IL-6 was evaluated. The experiment was performed three times, and Dunnett's multiple comparison test was performed on the control. The risk factor p <0.01 was considered significant and indicated by *. The results are shown in Table 5.

表５から明らかなように、被験物質を添加しない対照と比較して、３−ケトトレハロースでは濃度依存的、且つ、有意なＰＧＥ２産生抑制作用が認められた。しかも１ｍＭ以下の濃度ではＧＫ２よりも強いＰＧＥ２産生抑制作用が認められた。一方、２−ケトグルコースでは２ｍＭの濃度で有意なＰＧＥ２産生抑制作用が見られた。また、３−ケトトレハロース及び２−ケトグルコースはいずれも２ｍＭの濃度でＧＫ２と同程度のＩＬ−６産生抑制作用を示した。なお、試験した濃度範囲では細胞障害作用は認められなかった。 As is apparent from Table 5, 3-ketototrehalose showed a concentration-dependent and significant PGE2 production inhibitory action as compared to the control to which no test substance was added. Moreover, a PGE2 production inhibitory action stronger than that of GK2 was observed at a concentration of 1 mM or less. On the other hand, 2-ketoglucose showed a significant PGE2 production inhibitory effect at a concentration of 2 mM. In addition, both 3-ketotrehalose and 2-ketoglucose exhibited IL-6 production inhibitory action comparable to that of GK2 at a concentration of 2 mM. Note that no cytotoxic effect was observed in the concentration range tested.

これらの結果から、３−ケトトレハロース及び２−ケトグルコースには活性化歯肉線維芽細胞からの炎症メディエーターの産生を抑制する作用があり、歯周病の予防又は治療に有効であることが判明した。 From these results, it was found that 3-ketotrehalose and 2-ketoglucose have an action of suppressing the production of inflammatory mediators from activated gingival fibroblasts and are effective in preventing or treating periodontal disease. .

＜実験７：ヒト腸管上皮細胞株Ｃａｃｏ−２のＩＬ−８産生に及ぼす３−ケト糖の影響＞
腸管への細菌の侵入による炎症時には、生体の防御反応として粘膜固有層のマクロファージ等から産生されたＩＬ−１やＴＮＦ−αが上皮細胞に作用してＩＬ−８等のケモカインが産生され、このＩＬ−８により好中球を炎症局所に浸潤・集積させて微生物の排除にあたる。しかし炎症性腸疾患の場合のように、何らかの理由により炎症が長期化、慢性化した場合、過剰な炎症応答（例えばＩＬ−８産生量持続的増大）の結果として浸潤した好中球による組織破壊が起こるとも報告されている。従って、ＩＬ−１やＴＮＦ−αによる腸管上皮細胞からの炎症メディエーターとしてのＩＬ−８産生を抑制することは、潰瘍性大腸炎やクローン病等の炎症性腸疾患の軽減又は治療につながると考えられることから、ヒト腸管上皮細胞からのＩＬ−８産生に及ぼす３−ケト糖の影響を調べた。<Experiment 7: Effect of 3-ketosugar on IL-8 production of human intestinal epithelial cell line Caco-2>
During inflammation due to invasion of bacteria into the intestinal tract, IL-1 and TNF-α produced from macrophages in the lamina propria and the like act as epithelial cells as a defense reaction of the living body to produce chemokines such as IL-8. IL-8 infiltrates and accumulates neutrophils in the inflamed area to eliminate microorganisms. However, if inflammation is prolonged or chronic for any reason, as in inflammatory bowel disease, tissue destruction by infiltrated neutrophils as a result of an excessive inflammatory response (eg, sustained increase in IL-8 production) Has also been reported to occur. Therefore, suppression of IL-8 production as an inflammatory mediator from intestinal epithelial cells by IL-1 or TNF-α is considered to lead to reduction or treatment of inflammatory bowel diseases such as ulcerative colitis and Crohn's disease. Therefore, the influence of 3-ketosugar on IL-8 production from human intestinal epithelial cells was examined.

コラーゲンコートした９６ウェルマイクロプレート（ＩＷＡＫＩガラス社製）に、１０％ウシ胎児血清含有ダルベッコ変法イーグル培地を用いて、３×１０^４個／ｍＬの濃度に調製したＣａｃｏ−２細胞を０．２ｍＬ添加し、３７℃で３日間培養した。培養上清を吸引除去した後、新鮮な１％ウシ胎児血清含有ダルベッコ変法イーグル培地をウェル当り０．１ｍＬ添加した。次に同培地で適宜希釈した３−ケトトレハロース、３−ケトマルチトール、又はＧＫ２をウェル当り０．０５ｍＬ添加し、３７℃で７時間インキュベーションした。インキュベーション後、同培地で２．５ｎｇ/ｍＬの濃度に調整したＩＬ−１βと６２．５ｎｇ/ｍＬの濃度に調整したＴＮＦ−αを含む培地をウェル当り０．１ｍＬ添加して刺激した。刺激から１６〜１８時間後に、培養上清中のＩＬ−８産生量を、特異的ＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ社製）を用いて検出し、テトラメチルベンジジンで発色させた後、４５０ｎｍの吸光度を測定した。ＩＬ−８産生量は、被験物質を添加しない以外は同様に処理したものを対照とし、対照における培養上清中のＩＬ−８産生量を１００％として、実験４で用いたと同じ計算式により相対評価した。0.2 mL of Caco-2 cells prepared at a concentration of 3 × 10 ⁴ cells / mL using collagen-coated 96-well microplate (IWAKI Glass Co., Ltd.) using Dulbecco's modified Eagle medium containing 10% fetal bovine serum After addition, the cells were cultured at 37 ° C. for 3 days. After aspirating and removing the culture supernatant, 0.1 mL of fresh Dulbecco's modified Eagle medium containing 1% fetal bovine serum was added per well. Next, 0.05 mL of 3-ketotrehalose, 3-ketomaltitol, or GK2 appropriately diluted with the same medium was added per well, and incubated at 37 ° C. for 7 hours. After the incubation, a medium containing IL-1β adjusted to a concentration of 2.5 ng / mL and TNF-α adjusted to a concentration of 62.5 ng / mL with the same medium was added and stimulated by adding 0.1 mL per well. 16-18 hours after stimulation, the amount of IL-8 produced in the culture supernatant was detected using a specific ELISA kit (manufactured by R & D), developed with tetramethylbenzidine, and the absorbance at 450 nm was measured. . The amount of IL-8 produced is the same as that used in Experiment 4 with the same treatment except that the test substance is not added as the control and the amount of IL-8 produced in the culture supernatant in the control as 100%. evaluated.

表６から明らかなように、活性化腸管上皮細胞株Ｃａｃｏ−２細胞において、ＧＫ２ではＩＬ−１βとＴＮＦ-αの刺激によるＩＬ−８産生の抑制は全く認められなかった。これに対して３−ケトトレハロース及び３−ケトマルチトールでは濃度依存的、且つ有意なＩＬ−８産生抑制作用が認められた。 As is clear from Table 6, in the activated intestinal epithelial cell line Caco-2 cells, GK2 did not show any inhibition of IL-8 production by stimulation with IL-1β and TNF-α. In contrast, 3-ketotrehalose and 3-keto maltitol showed a concentration-dependent and significant IL-8 production inhibitory action.

この結果は、３−ケトトレハロース及び３−ケトマルチトールが炎症性腸疾患の予防又は治療効果を有することを示している。 This result indicates that 3-ketotrehalose and 3-keto maltitol have a preventive or therapeutic effect on inflammatory bowel disease.

＜実験８：３−ケト糖による前処理がヒト皮膚線維芽細胞の酸化障害への耐性に及ぼす影響＞
正常ヒト皮膚線維芽細胞（ＮＨＤＦ細胞）を用い、ヒト皮膚線維芽細胞の酸化障害に対する耐性に及ぼす３−ケト糖の影響、詳細には、細胞の３−ケト糖存在下での前処理が活性酸素種の１つである過酸化水素で処理したときに生じる細胞障害に及ぼす影響を調べた。<Experiment 8: Effect of pretreatment with 3-ketosugar on resistance to oxidative damage in human skin fibroblasts>
Using normal human skin fibroblasts (NHDF cells), the effect of 3-ketosugar on the resistance of human skin fibroblasts to oxidative damage, specifically, pretreatment of cells in the presence of 3-ketosugar is active The effect on cell damage caused by treatment with hydrogen peroxide, one of the oxygen species, was examined.

９６ウェルマイクロプレートに、１０％ウシ胎児血清含有ダルベッコ変法イーグル培地を用いて、１×１０^５個／ｍＬの濃度に調製したＮＨＤＦ細胞を０．２ｍＬ添加し、ウェルの底面全体を占める状態まで培養した。培養上清を吸引除去した後、新鮮な１０％ウシ胎児血清含有ダルベッコ変法イーグル培地をウェル当り０．１ｍＬ添加した。次に同培地で適宜希釈した３−ケトトレハロース、３−ケトラクトース、３−ケトコージビオース又は３−ケトイソマルトースを０．１ｍＬ添加し、３７℃で２４時間培養した。比較のため、抗炎症剤として知られているＧＫ２についても同様に行った。To a 96-well microplate, 0.2 mL of NHDF cells prepared at a concentration of 1 × 10 ⁵ cells / mL using Dulbecco's modified Eagle's medium containing 10% fetal bovine serum was added until the entire surface of the well was occupied. Cultured. After aspirating and removing the culture supernatant, 0.1 mL of fresh Dulbecco's modified Eagle medium containing 10% fetal calf serum was added per well. Next, 0.1 mL of 3-ketotrehalose, 3-ketolactose, 3-ketocodibiose or 3-ketoisomaltose diluted appropriately in the same medium was added, and cultured at 37 ° C. for 24 hours. For comparison, the same procedure was performed for GK2, which is known as an anti-inflammatory agent.

培養後、培養上清を吸引除去した後、ＨＡＮＫＳ緩衝液にて１５０μＭの濃度に調製した過酸化水素をウェル当り０．２ｍＬ添加し、３７℃で２時間インキュベーションした。次いで、過酸化水素溶液を吸引除去し、１０％ウシ胎児血清含有ダルベッコ変法イーグル培地をウェル当り０．２ｍＬ添加した後、さらに３７℃で４８時間培養した。 After culturing, the culture supernatant was removed by suction, 0.2 mL of hydrogen peroxide prepared to a concentration of 150 μM with HANKS buffer was added per well, and the mixture was incubated at 37 ° C. for 2 hours. Subsequently, the hydrogen peroxide solution was removed by suction, 0.2 mL of Dulbecco's modified Eagle medium containing 10% fetal calf serum was added per well, and further cultured at 37 ° C. for 48 hours.

培養後の細胞数は、セルカウンティングキット（株式会社同人化学研究所製）を用いて測定した。すなわち、４８時間培養した細胞の培養上清を吸引除去した後、新鮮な１０％ウシ胎児血清含有ダルベッコ変法イーグル培地をウェル当り０．１ｍＬ添加し、さらに同培地にて１０倍希釈したセルカウンティングキットをウェル当り０．１ｍＬ添加して３７℃で２時間インキュベーションした。最後に、細胞数に対応する４５０ｎｍの吸光度を分光光度計にて測定した。被験物質（３−ケト糖）での前処理を行わない以外は同様に過酸化水素処理した細胞を対照とし、対照における吸光度を１００％として、下記計算式により細胞数を相対細胞数として評価した。 The number of cells after the culture was measured using a cell counting kit (manufactured by Doujin Chemical Laboratory Co., Ltd.). Specifically, after removing the culture supernatant of cells cultured for 48 hours, 0.1 mL of Dulbecco's modified Eagle's medium containing fresh 10% fetal bovine serum was added per well, and further diluted 10-fold in the same medium. The kit was added at 0.1 mL per well and incubated at 37 ° C. for 2 hours. Finally, the absorbance at 450 nm corresponding to the number of cells was measured with a spectrophotometer. A cell treated with hydrogen peroxide in the same manner except that no pretreatment with a test substance (3-ketosugar) was performed as a control, the absorbance in the control was 100%, and the number of cells was evaluated as a relative cell number by the following formula. .

３−ケト糖存在下での前処理が過酸化水素で処理したときに生じるヒト皮膚線維芽細胞の細胞障害への耐性に及ぼす影響を表５に示した。なお、実験は３回行い、対照に対してダネットの多重比較検定を行なった。表７に３回の実験の平均値を示し、危険率ｐ＜０．０１の場合を有意差ありと判定し、＊で示した。 Table 5 shows the effect of pretreatment in the presence of 3-ketosugar on the resistance of human skin fibroblasts to cell damage caused by treatment with hydrogen peroxide. The experiment was performed three times, and Dunnett's multiple comparison test was performed on the control. Table 7 shows the average values of three experiments. When the risk rate is p <0.01, it is determined that there is a significant difference, and is indicated by *.

表７から明らかなように、３−ケトトレハロース、３−ケトラクトース、３−ケトコージビオース及び３−ケトイソマルトースで前処理したヒト皮膚線維芽細胞は、対照と比較して、試験した濃度範囲において濃度依存的且つ有意に細胞数が多かったことから、３−ケト糖がヒト皮膚線維芽細胞の過酸化水素による細胞障害に対する耐性を賦与する作用を有することが判明した。なお、ＧＫ２にはそのような作用は認められなかった。 As is apparent from Table 7, human dermal fibroblasts pretreated with 3-ketotrehalose, 3-ketolactose, 3-ketocodibiose and 3-ketoisomaltose were tested at the concentrations tested compared to the control. Since the number of cells was concentration-dependent and significantly high in the range, it was found that 3-ketosugar has an effect of conferring resistance to human skin fibroblast cell damage caused by hydrogen peroxide. GK2 did not have such an effect.

本実験結果は、３−ケト糖である３−ケトトレハロース、３−ケトラクトース、３−ケトコージビオース及び３−ケトイソマルトースは、いずれも活性酸素種による細胞障害への耐性をヒト皮膚線維芽細胞に賦与する効果があり、活性酸素種を原因とする炎症に対する抗炎症剤の有効成分として有用であることを物語っている。より具体的には、活性酸素種の関与が報告されている手術侵襲、虚血再灌流障害、潰瘍性大腸炎、さらには、アトピー性皮膚炎などの皮膚炎症疾患や紫外線暴露による皮膚の老化の予防乃至治療に有用であることを物語っている。 The results of this experiment show that 3-ketosugars 3-ketotrehalose, 3-ketolactose, 3-ketocodibiose and 3-ketoisomaltose all have resistance to cell damage caused by reactive oxygen species in human skin fibers. It has an effect of imparting to blast cells, and is useful as an active ingredient of an anti-inflammatory agent against inflammation caused by reactive oxygen species. More specifically, surgical invasion, ischemia-reperfusion injury, ulcerative colitis, and skin aging diseases such as atopic dermatitis and skin aging caused by UV exposure have been reported to involve reactive oxygen species. It is useful for prevention and treatment.

実験３乃至８の結果から、３−ケト糖又は２−ケト糖などの分子内にケトアルドヘキソース構造を有する糖質は、細胞に悪影響を与えることなく、炎症性サイトカインであるＴＮＦ−α、ＩＬ−８、ＰＧＥ２、ＩＬ−６などの産生を抑制し、また、３−ケト糖は活性酸素種による細胞障害を予防する作用も有していることから、これら３−ケト糖及び２−ケト糖は抗炎症剤の有効成分として用いることができることが判明した。また、分子内にケトアルドヘキソース構造を有する糖質を有効成分とする本発明の抗炎症剤は、ＧＫ２と比較すると、低濃度で炎症性サイトカインの産生を抑制し、抗酸化作用を有するためより効果的で、且つ、副作用の懸念が少ない安全な抗炎症剤と言える。 From the results of Experiments 3 to 8, a carbohydrate having a ketoald hexose structure in a molecule such as 3-keto sugar or 2-keto sugar has no adverse effect on cells and is an inflammatory cytokine, TNF-α, IL Since the production of -8, PGE2, IL-6, etc. is suppressed, and the 3-keto sugar also has an action of preventing cell damage caused by reactive oxygen species, these 3-keto sugar and 2-keto sugar It was found that can be used as an active ingredient of anti-inflammatory agents. In addition, the anti-inflammatory agent of the present invention containing a carbohydrate having a ketoaldhexose structure in the molecule as an active ingredient suppresses the production of inflammatory cytokines at a low concentration and has an antioxidative effect as compared with GK2. It can be said to be a safe anti-inflammatory agent that is effective and has few side effects.

次に実施例を挙げて、本発明を更に詳しく説明するが、本発明はこれら実施例に何ら限定されるものではない。 EXAMPLES Next, although an Example is given and this invention is demonstrated in more detail, this invention is not limited to these Examples at all.

＜抗炎症剤＞
下記組成を混合し、定法により０．５ｇずつ打錠して、経口用抗炎症剤を調製した。
（組成）（質量％）
３−ケトトレハロース１０．０
トレハロース９０．０
ステアリン酸マグネシウム０．２<Anti-inflammatory agent>
The following composition was mixed and tableted by 0.5 g by a conventional method to prepare an oral anti-inflammatory agent.
(Composition) (mass%)
3-Ketotrehalose 10.0
Trehalose 90.0
Magnesium stearate 0.2

本品は、抗炎症作用の有効成分として３−ケトトレハロースを含有しているので、敗血症、慢性関節リウマチ、ＡＲＤＳ、肝炎、炎症性腸疾患、活性酸素が関与する疾患等を改善できる経口用抗炎症剤である。 Since this product contains 3-ketotrehalose as an active ingredient of anti-inflammatory action, it can be used for oral anti-oral treatment that can improve sepsis, rheumatoid arthritis, ARDS, hepatitis, inflammatory bowel disease, diseases involving active oxygen, etc. It is an inflammatory agent.

＜クレンジングクリーム＞
下記組成のクレンジングクリームを常法により調製した。
（組成）（質量％）
ステアリン酸２．０
ステアリルアルコール３．０
親油型モノステアリン酸グリセリル２．０
ミツロウ１．５
ワセリン６．０
流動パラフィン４０．０
ジメチルポリシロキサン（１００ＣＳ）０．５
セスキオレイン酸ソルビタン１．０
防腐剤適量
トリエタノールアミン１．０
プロピレングリコール１０．０
ポリエチレングリコール２０００００．５
カルボキシビニルポリマー０．０５
精製水残量
３−ケトトレハロース５％（ｗ／ｖ）水溶液１．０
香料適量<Cleansing cream>
A cleansing cream having the following composition was prepared by a conventional method.
(Composition) (mass%)
Stearic acid 2.0
Stearyl alcohol 3.0
Lipophilic glyceryl monostearate 2.0
Beeswax 1.5
Vaseline 6.0
Liquid paraffin 40.0
Dimethylpolysiloxane (100CS) 0.5
Sorbitan sesquioleate 1.0
Preservative Appropriate amount Triethanolamine 1.0
Propylene glycol 10.0
Polyethylene glycol 20000 0.5
Carboxyvinyl polymer 0.05
Purified water remaining amount 3-ketotrehalose 5% (w / v) aqueous solution 1.0
Perfume

本品は、３−ケトトレハロースが配合されているので、ヒト皮膚における真皮の線維芽細胞、表皮のケラチノサイトにおいて炎症性サイトカインの産生を抑制し、皮膚の炎症を抑制、改善することができる。また、本品は、皮膚を滑らかにするクレンジングクリームであり、軽やかな伸び広がりでメイクの汚れ落ちもよい。 Since this product is formulated with 3-ketotrehalose, it can suppress the production of inflammatory cytokines in dermal fibroblasts in human skin and keratinocytes in the epidermis, thereby suppressing and improving skin inflammation. In addition, this product is a cleansing cream that smoothes the skin.

＜洗顔料＞
下記組成の洗顔料を常法により調製した。
（組成）（質量％）
ラウリン酸５．０
ミリスチン酸１８．５
ステアリン酸６．０
グリセリン１２．０
ポリエチレングリコール１５００５．０
水酸化カリウム６．５
精製水残量
ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド５．０
ヤシ油脂肪酸メチルタウリンナトリウム１．８
ポリオキシエチレンラウリルエーテル（７．５Ｅ．Ｏ．）２．０
ジステアリン酸エチレングリコールラウリルエーテル１．０
ヒドロキシプロピルメチルセルロース１％（ｗ／ｖ）水溶液５．０
３−ケトラクトース５％（ｗ／ｖ）水溶液２．０
香料適量<Face wash>
A face wash having the following composition was prepared by a conventional method.
(Composition) (mass%)
Lauric acid 5.0
Myristic acid 18.5
Stearic acid 6.0
Glycerin 12.0
Polyethylene glycol 1500 5.0
Potassium hydroxide 6.5
Purified water remaining amount Palm oil fatty acid diethanolamide 5.0
Palm oil fatty acid methyl taurine sodium 1.8
Polyoxyethylene lauryl ether (7.5E.O.) 2.0
Distearate ethylene glycol lauryl ether 1.0
Hydroxypropyl methylcellulose 1% (w / v) aqueous solution 5.0
3-ketolactose 5% (w / v) aqueous solution 2.0
Perfume

本品は、３−ケトラクトースが配合されているので、ヒト皮膚における真皮の線維芽細胞、表皮のケラチノサイトにおいて炎症性サイトカインの産生を抑制し、皮膚の炎症を抑制、改善することができる。また、本品は、皮膚をキメ細やかに保つ洗顔料であり、豊かな泡立ちとさっぱりとした使用感を奏する。 Since this product is formulated with 3-ketolactose, it can suppress the production of inflammatory cytokines in dermal fibroblasts in human skin and keratinocytes in the epidermis, thereby suppressing and improving skin inflammation. In addition, this product is a facial cleanser that keeps the skin fine and has a rich lather and a refreshing feel.

＜パック＞
下記組成のパックを常法により調製した。
（組成）（質量％）
ポリビニルアルコール１５．０
ポリエチレングリコール３．０
プロピレングリコール７．０
エタノール１０．０
ローヤルゼリーエキス１．０
３−ケトコージビオース０．５
防腐剤適量
香料適量
精製水残量<Pack>
A pack having the following composition was prepared by a conventional method.
(Composition) (mass%)
Polyvinyl alcohol 15.0
Polyethylene glycol 3.0
Propylene glycol 7.0
Ethanol 10.0
Royal Jelly Extract 1.0
3-keto cordobiose 0.5
Preservative appropriate amount Fragrance appropriate amount Purified water remaining

本品は、３−ケトコージビオースが配合されているので、ヒト皮膚における真皮の線維芽細胞、表皮のケラチノサイトにおいて炎症性サイトカインの産生を抑制し、皮膚の炎症を抑制、改善することができる。本品は、その典型的な使用態様により、皮膚の炎症を改善し、皮膚の状態を良好に維持することができるパックであり、美白効果にも優れている。 Since this product is formulated with 3-keto cordobiose, it can suppress the production of inflammatory cytokines in dermal fibroblasts in human skin and keratinocytes in the epidermis, thereby suppressing and improving skin inflammation. . This product is a pack that can improve skin inflammation and maintain a good skin condition according to its typical usage, and is also excellent in whitening effect.

＜日焼け止め用ゲルクリーム＞
下記組成の日焼け止め用ゲルクリームを常法により調製した。
配合成分（質量％）
パラメトキシケイ皮酸オクチル４．０
オキシベンゾン３．０
流動パラフィン１６．０
オリーブ油９．０
ジブチルヒドロキシトルエン０．０１
３−ケトイソマルトース１．０
アクリル酸／メタクリル酸アルキル共重合体０．６
カルボキシビニルポリマー０．４
アスコルビン酸２−グルコシド２．０
アラントイン１．０
トリエタノールアミン１．０
防腐剤適量
精製水残量<Gel cream for sunscreen>
A gel cream for sunscreen having the following composition was prepared by a conventional method.
Compounding ingredients (mass%)
Octyl paramethoxycinnamate 4.0
Oxybenzone 3.0
Liquid paraffin 16.0
Olive oil 9.0
Dibutylhydroxytoluene 0.01
3-keto isomaltose 1.0
Acrylic acid / alkyl methacrylate copolymer 0.6
Carboxyvinyl polymer 0.4
Ascorbic acid 2-glucoside 2.0
Allantoin 1.0
Triethanolamine 1.0
Preservative appropriate amount Purified water remaining

本品は、３−ケトイソマルトースが配合されているので、ヒト皮膚における真皮の線維芽細胞、表皮のケラチノサイトにおいて炎症性サイトカインの産生を抑制し、皮膚の炎症を抑制、改善することができる。また、本品は、３−ケトイソマルトース及びアラントインの持つ抗炎症作用により、日焼けを抑制し、ほてりをおさめる消炎効果に優れたジェルである。 Since this product is formulated with 3-keto isomaltose, it can suppress the production of inflammatory cytokines in dermal fibroblasts in human skin and keratinocytes in the epidermis, and suppress or improve skin inflammation. In addition, this product is a gel excellent in anti-inflammatory effect that suppresses sunburn and suppresses hot flashes by the anti-inflammatory action of 3-keto isomaltose and allantoin.

＜乳液＞
ポリオキシエチレンベヘニルエーテル０．５質量部、テトラオレイン酸ポリオキシエチレンソルビトール１質量部、親油型モノステアリン酸グリセリン１質量部、ピルビン酸０．５質量部、ベヘニルアルコール０．５質量部、アボガド油１質量部、３−ケトマルトース１質量部、ビタミンＥ及び防腐剤の適量を、常法に従って加熱溶解し、これにＬ−乳酸ナトリウム１質量部、１，３−ブチレングリコール５質量部、カルボキシビニルポリマー０．１質量部及び精製水８５．３質量部を加え、ホモゲナイザーにかけ乳化し、更に香料の適量を加えて攪拌混合し乳液を製造した。<Emulsion>
0.5 parts by mass of polyoxyethylene behenyl ether, 1 part by mass of polyoxyethylene sorbitol tetraoleate, 1 part by mass of lipophilic glyceryl monostearate, 0.5 parts by mass of pyruvic acid, 0.5 parts by mass of behenyl alcohol, avocado oil 1 part by weight, 1 part by weight of 3-ketomaltose, appropriate amounts of vitamin E and preservatives are dissolved by heating according to a conventional method, and 1 part by weight of L-sodium lactate, 5 parts by weight of 1,3-butylene glycol, carboxyvinyl 0.1 parts by mass of the polymer and 85.3 parts by mass of purified water were added, emulsified with a homogenizer, an appropriate amount of a fragrance was added, and the mixture was stirred and mixed to produce an emulsion.

本品は、３−ケトマルトースが配合されているので、ヒト皮膚における真皮の線維芽細胞、表皮のケラチノサイトにおいて炎症性サイトカインの産生を抑制し、皮膚の炎症を抑制、改善するとともに、皮膚の状態を良好に維持ことができる。本品は、日焼け止め、しみ・そばかす防止、美肌、色白用の乳液として有利に利用できる。 Since this product contains 3-ketomaltose, it suppresses the production of inflammatory cytokines in dermal fibroblasts in human skin and keratinocytes in the epidermis, and controls and improves skin inflammation. Can be maintained well. This product can be advantageously used as an emulsion for sunscreen, stains and freckles prevention, beautiful skin and fair skin.

＜ジュース＞
下記組成のジュースを常法により製造した。
（組成）（質量％）
冷凍濃縮温州みかん果汁５．０
果糖ブドウ糖液糖１１．０
クエン酸０．２
Ｌ−アスコルビン酸０．０２
香料０．２
色素０．１
３−ケトラクトース０．２
水８９．２８<Juice>
A juice having the following composition was produced by a conventional method.
(Composition) (mass%)
Frozen and concentrated Wenzhou orange juice 5.0
Fructose glucose liquid sugar 11.0
Citric acid 0.2
L-ascorbic acid 0.02
Fragrance 0.2
Dye 0.1
3-ketolactose 0.2
Water 89.28

本品は、３−ケトラクトースが配合されているので、歯周病や歯肉炎を予防するのに有用なジュースである。また、本品は、ビタミンＣ作用が強化されているため、みかんの風味が長期間劣化しにくいジュースである。 Since this product contains 3-ketolactose, it is a useful juice for preventing periodontal disease and gingivitis. In addition, this product is a juice that does not deteriorate the flavor of oranges for a long period of time due to its enhanced vitamin C action.

＜グレープフルーツゼリー＞
下記組成のグレープフルーツゼリーを常法により製造した。
（組成）（質量％）
３−ケトトレハロース６．０
安定剤１．２
グレープフルーツ砂じょう１．０
ｐＨ調整剤０．９
グレープフルーツ果汁（６倍濃縮果汁）０．５
アスコルビン酸２−グルコシド２．０
酵素処理ステビア０．０４
ベニバナ黄色０．０１
精製水残量<Grapefruit jelly>
A grapefruit jelly having the following composition was produced by a conventional method.
(Composition) (mass%)
3-Ketotrehalose 6.0
Stabilizer 1.2
Grapefruit sand 1.0
pH adjuster 0.9
Grapefruit juice (6-fold concentrated juice) 0.5
Ascorbic acid 2-glucoside 2.0
Enzyme-treated stevia 0.04
Safflower yellow 0.01
Purified water remaining

本品は、３−ケトトレハロースが配合されているので、歯周病や歯肉炎を予防するのに有用なグレープフルーツゼリーである。また、本品は、ビタミンＣ作用が強化されているため、グレープフルーツの風味が長期間劣化しにくいゼリーである。 Since this product contains 3-ketotrehalose, it is a grapefruit jelly that is useful for preventing periodontal disease and gingivitis. Moreover, since this product has enhanced vitamin C action, it is a jelly that does not easily deteriorate the flavor of grapefruit for a long time.

＜チューインガム＞
ガムベース３質量部を柔らかくなるまで加熱融解し、これにトレハロース含量約５０％（ｗ／ｗ）の粉末緑黄色野菜を７質量部加え、さらに、適量の着色料及び着香料とともに、３−ケトスクロースを固形分重量含量０．１％になるように加えた後、常法により練り合わせ、成型し、包装して３−ケトスクロースを含有するチューインガムを得た。<Chewing gum>
Heat and melt 3 parts by weight of gum base until soft, add 7 parts by weight of powdered green-yellow vegetable with a trehalose content of about 50% (w / w), and add 3-keto sucrose along with appropriate amounts of coloring and flavoring. After adding so that it might become a solid content weight content 0.1%, it knead | mixed by the conventional method, shape | molded and packaged, and the chewing gum containing 3-keto sucrose was obtained.

３−ケトスクロースを配合した本品は、皮膚の炎症を抑制し、歯周病や歯肉炎の予防効果に優れたチューインガムであり、テクスチャー、呈味ともに良好である。 This product containing 3-keto sucrose is a chewing gum that suppresses inflammation of the skin and is excellent in preventing periodontal disease and gingivitis, and has good texture and taste.

＜液剤＞
定法により、下記の成分を混合し、膜濾過した後、滅菌したプラスチック製容器に３０ｍＬずつ充填して液剤を得た。
（組成）（質量％）
塩化ナトリウム０．６
塩化カリウム０．０３
塩化カルシウム０．０２
乳酸ナトリウム０．３１
トレハロース４．４
パラチニット０．２
３−ケトトレハロース０．０５
精製水残量<Liquid>
The following components were mixed by a conventional method, filtered through a membrane, and then filled into a sterilized plastic container by 30 mL to obtain a solution.
(Composition) (mass%)
Sodium chloride 0.6
Potassium chloride 0.03
Calcium chloride 0.02
Sodium lactate 0.31
Trehalose 4.4
Palatinit 0.2
3-Ketotrehalose 0.05
Purified water remaining

３−ケトトレハロースを配合した本品は、結膜炎や炎症性疾患を治療するための点眼剤や注射剤として有用であり、ビタミン、カロリー及びミネラルの補給作用を兼備している。 This product containing 3-ketotrehalose is useful as eye drops and injections for treating conjunctivitis and inflammatory diseases, and also has a vitamin, calorie and mineral replenishment action.

＜マウスウォッシュ＞
下記組成のマウスウォッシュを常法により製造した。
（組成）（質量％）
グリセリン１０．０
１，３−プロパンジオール３．０
低分子量寒天５．０
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油０．２
３−ケトイソマルトース０．５
アスコルビン酸２−グルコシド１．０
塩化セチルピリジニウム０．０５
ｌ−メントール０．０５
ラネキサム酸０．０５
サッカリンナトリウム０．０２
パラオキシ安息香酸メチル０．０１
香料０．０５
クエン酸適量
水８９．２８<Mouthwash>
A mouthwash having the following composition was produced by a conventional method.
(Composition) (mass%)
Glycerin 10.0
1,3-propanediol 3.0
Low molecular weight agar 5.0
Polyoxyethylene hydrogenated castor oil 0.2
3-keto isomaltose 0.5
Ascorbic acid 2-glucoside 1.0
Cetylpyridinium chloride 0.05
l-Menthol 0.05
Ranexamic acid 0.05
Saccharin sodium 0.02
Methyl paraoxybenzoate 0.01
Fragrance 0.05
Citric acid appropriate amount water 89.28

本品は、３−ケトイソマルトースが配合されているので、歯周病や歯肉炎の予防に優れたマウスウォッシュとして有利に利用できる。 Since this product contains 3-keto isomaltose, it can be advantageously used as a mouthwash excellent in preventing periodontal disease and gingivitis.

＜練歯磨＞
下記組成の練歯磨を常法により製造した。
（組成）（質量％）
第二リン酸カルシウム３０．０
ハイドロキシアパタイト１０．０
炭酸カルシウム５．０
３−ケトトレハロース３０．０
ラウリル硫酸ナトリウム１．５
モノフルオロリン酸ナトリウム０．７
ポリオキシエチレンソルビタンラウレート０．５
塩酸ジフェンヒドラミン０．５
防腐剤０．０５
精製水２２．０<Toothpaste>
A toothpaste having the following composition was produced by a conventional method.
(Composition) (mass%)
Dicalcium phosphate 30.0
Hydroxyapatite 10.0
Calcium carbonate 5.0
3-Ketotrehalose 30.0
Sodium lauryl sulfate 1.5
Sodium monofluorophosphate 0.7
Polyoxyethylene sorbitan laurate 0.5
Diphenhydramine hydrochloride 0.5
Preservative 0.05
Purified water 22.0

本品は、３−ケトトレハロースが配合されているので、口腔内の炎症、歯槽膿漏などによる歯茎の腫れ、炎症、出血などの予防や治療に優れた歯磨剤として有利に利用できる。 Since this product contains 3-ketotrehalose, it can be advantageously used as a dentifrice excellent in prevention and treatment of inflammation in the oral cavity, swelling of the gums due to alveolar pyorrhea, inflammation, bleeding and the like.

＜ファンデーション＞
下記組成のファンデーションを常法により調製した。
（組成）（質量％）
タルク２０．０
マイカ３３．０
カオリン７．０
ナイロンパウダー１０．０
二酸化チタン１０．０
雲母チタン３.０
ステアリン酸亜鉛１．０
赤酸化鉄１．０
黄色酸化鉄３．０
２−ケトグルコース１．５
クチナシ黄・ベニバナ赤処理セルロース２．０
糖転移ヘスペリジン３．０
スクワラン６．０
酢酸ラノリン１．０
ミリスチン酸オクチルドデシル２．０
香料適量
防腐剤適量<Foundation>
A foundation having the following composition was prepared by a conventional method.
(Composition) (mass%)
Talc 20.0
Mica 33.0
Kaolin 7.0
Nylon powder 10.0
Titanium dioxide 10.0
Mica titanium 3.0
Zinc stearate 1.0
Red iron oxide 1.0
Yellow iron oxide 3.0
2-ketoglucose 1.5
Gardenia yellow, safflower red-treated cellulose 2.0
Glycosyl hesperidin 3.0
Squalane 6.0
Lanolin acetate 1.0
Octyldodecyl myristate 2.0
Perfume appropriate amount Preservative appropriate amount

本品は、２−ケトグルコースが配合されているので、皮膚の炎症を抑制し、皮膚の状態を良好に維持し、日焼け止め、しみ・そばかす防止、美肌、色白用のファンデーションとして利用することができる。また、本品は、抗酸化作用、ラジカル補足作用、エラスターゼ阻害作用、リパーゼ阻害作用等を有するクチナシ黄・ベニバナ赤を担持したセルロースパウダーを含有しているので、ニキビやシワの発生を抑制し、ハリがある肌を保持することができる。 Since this product contains 2-ketoglucose, it suppresses skin inflammation, maintains a good skin condition, and can be used as a foundation for sunscreen, spots and freckles, beautiful skin, and fair skin. it can. In addition, this product contains cellulose powder carrying gardenia yellow and safflower red, which has an antioxidant action, radical scavenging action, elastase inhibitory action, lipase inhibitory action, etc., thus suppressing the occurrence of acne and wrinkles, Can hold firm skin.

本発明の、分子内にケトアルドヘキソース構造を有する糖質を有効成分として含有する抗炎症剤は、各種の炎症症状の緩和剤又は改善剤、及び、各種の炎症の予防剤又は治療剤として、化粧品、医薬部外品、食品及び医薬品の分野で利用することができる。 The anti-inflammatory agent containing a carbohydrate having a ketoaldhexose structure in the molecule as an active ingredient according to the present invention is a relieving agent or ameliorating agent for various inflammatory symptoms, and a prophylactic or therapeutic agent for various inflammations. It can be used in the fields of cosmetics, quasi drugs, foods and pharmaceuticals.

図２において、
←：トレハロースの^１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルに比べ低磁場側にシフトしたＣ−３位炭素のシグナルIn FIG.
←: C-3 carbon signal shifted to a lower magnetic field side than the ¹³ C-NMR spectrum of trehalose

Claims

分子内にケトアルドヘキソース構造を有する糖質を有効成分として含有する抗炎症剤。 An anti-inflammatory agent containing a carbohydrate having a ketoaldhexose structure in the molecule as an active ingredient.

前記ケトアルドヘキソース構造が３−ケトアルドヘキソース構造又は２−ケトアルドヘキソース構造である請求項１記載の抗炎症剤。 The anti-inflammatory agent according to claim 1, wherein the keto aldohexose structure is a 3-keto aldo hexose structure or a 2-keto aldo hexose structure.

前記糖質が、単糖、二糖又はその糖アルコールである請求項１又は２記載の抗炎症剤。 The anti-inflammatory agent according to claim 1 or 2, wherein the carbohydrate is a monosaccharide, a disaccharide or a sugar alcohol thereof.

前記糖質が、そのケトアルドヘキソース構造の１位水酸基が他の糖又は糖以外の置換基と結合している糖質であることを特徴とする請求項１乃至３のいずれかに記載の抗炎症剤。 The antisaccharide according to any one of claims 1 to 3, wherein the carbohydrate is a carbohydrate in which the hydroxyl group at the 1-position of the ketoaldhexose structure is bonded to another sugar or a substituent other than sugar. Inflammatory agent.

前記３−ケトアルドヘキソース構造が、３−ケトグルコース構造又は３−ケトガラクトース構造である請求項２乃至４のいずれかに記載の抗炎症剤。 The anti-inflammatory agent according to any one of claims 2 to 4, wherein the 3-keto aldohexose structure is a 3-ketoglucose structure or a 3-ketogalactose structure.

前記３−ケトアルドヘキソース構造を有する糖質が、３−ケトトレハロース、３−ケトコージビオース、３−ケトイソマルトース、３−ケトラクトース、３−ケトマルトース、３−ケトスクロース及び３−ケトマルチトールから選ばれる１種又は２種以上である請求項２乃至５のいずれかに記載の抗炎症剤。 The carbohydrate having the 3-keto aldohexose structure is 3-keto trehalose, 3-keto cordobiose, 3-keto isomaltose, 3-ketolactose, 3-keto maltose, 3-keto sucrose and 3-keto multi The anti-inflammatory agent according to any one of claims 2 to 5, which is one type or two or more types selected from Toll.

前記２−ケトアルドヘキソース構造が、２−ケトグルコース構造である請求項２乃至４のいずれかに記載の抗炎症剤。 The anti-inflammatory agent according to any one of claims 2 to 4, wherein the 2-keto aldohexose structure is a 2-ketoglucose structure.

前記２−ケトアルドヘキソース構造を有する糖質が、２−ケトグルコース又は２−ケトトレハロースである請求項２乃至４及び７のいずれかに記載の抗炎症剤。 The anti-inflammatory agent according to any one of claims 2 to 4 and 7, wherein the carbohydrate having the 2-keto aldohexose structure is 2-ketoglucose or 2-ketotrehalose.

炎症性サイトカインである腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）又はインターロイキン−８（ＩＬ−８）の産生を抑制する請求項１乃至８のいずれかに記載の抗炎症剤。 The anti-inflammatory agent according to any one of claims 1 to 8, which suppresses the production of tumor necrosis factor α (TNF-α) or interleukin-8 (IL-8), which are inflammatory cytokines.

前記抗炎症剤の対象とする炎症が慢性炎症である請求項１乃至９のいずれかに記載の抗炎症剤。 The anti-inflammatory agent according to any one of claims 1 to 9, wherein the inflammation targeted by the anti-inflammatory agent is chronic inflammation.

慢性炎症が糖尿病、慢性呼吸器疾患、慢性関節リウマチ、胃炎、肝炎、炎症性腸疾患、神経変性疾患、心血管障害、乾癬、アトピー性皮膚炎、歯周病のいずれかである請求項１０記載の抗炎症剤。 11. The chronic inflammation is any one of diabetes, chronic respiratory disease, rheumatoid arthritis, gastritis, hepatitis, inflammatory bowel disease, neurodegenerative disease, cardiovascular disorder, psoriasis, atopic dermatitis and periodontal disease. Anti-inflammatory agents.

分子内にケトアルドヘキソース構造を有する糖質を０．１％乃至９０％含有する請求項１乃至１１のいずれかに記載の抗炎症剤。 The anti-inflammatory agent according to any one of claims 1 to 11, comprising 0.1% to 90% of a carbohydrate having a ketoaldhexose structure in the molecule.

請求項１乃至１２のいずれかに記載の抗炎症剤を含有する化粧品、食品、医薬部外品又は医薬品。 A cosmetic, food, quasi-drug or pharmaceutical comprising the anti-inflammatory agent according to any one of claims 1 to 12.

分子内にアルドヘキソース構造を有する糖質において、そのアルドヘキソース構造における他の糖質又は置換基と結合していないフリーの水酸基をケト基に変換することを特徴とする、分子内にアルドヘキソース構造を有する糖質の抗炎症作用の向上方法。 In a saccharide having an aldohexose structure in the molecule, a free hydroxyl group that is not bonded to other saccharides or substituents in the aldhexose structure is converted to a keto group, and the aldohexose structure in the molecule For improving the anti-inflammatory action of carbohydrates having

前記他の糖質又は置換基と結合していないフリーの水酸基が３位水酸基又は２位水酸基である請求項１４記載の方法。 The method according to claim 14, wherein the free hydroxyl group not bonded to the other carbohydrate or substituent is a hydroxyl group at the 3-position or a hydroxyl group at the 2-position.

ケト基への変換が、酵素法又は発酵法によって行われる請求項１４又は１５記載の方法。 The method according to claim 14 or 15, wherein the conversion to a keto group is performed by an enzymatic method or a fermentation method.

分子内にアルドヘキソース構造を有する糖質が単糖又は二糖である請求項１４乃至１６のいずれかに記載の方法。 The method according to any one of claims 14 to 16, wherein the carbohydrate having an aldohexose structure in the molecule is a monosaccharide or a disaccharide.

前記二糖がトレハロース、コージビオース、イソマルトース、ラクトース、マルトース、スクロース及びマルチトールである請求項１７記載の方法。 18. The method of claim 17, wherein the disaccharide is trehalose, cordobiose, isomaltose, lactose, maltose, sucrose and maltitol.

前記単糖がグルコースである請求項１７記載の方法。 The method according to claim 17, wherein the monosaccharide is glucose.