JPWO2008096817A1 - Gabaニューロン前駆細胞マーカー65b13 - Google Patents
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Abstract
Description
本発明者によって同定されたマーカーを指標とすることにより、GABAニューロン前駆細胞を効率的に識別もしくは単離することが可能である。
(i)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列を含んでなるポリヌクレオチド;
(ii)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列において、1または複数個のヌクレオチドの挿入、置換、欠失、および/またはその一方または両末端への1または複数個のヌクレオチドの付加がなされた塩基配列によってコードされたアミノ酸配列であって、GABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているポリヌクレオチド;
(iii)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているポリヌクレオチド;および
(iv)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列からなるポリヌクレオチドと70%以上の同一性を有し、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているポリヌクレオチド。
〔2〕 ポリヌクレオチドの発現を検出する工程が、下記工程を含んでなる、〔1〕に記載の方法:
(a)被験細胞試料と〔1〕で選択されるポリヌクレオチドまたはその相補配列にハイブリダイズすることができるポリヌクレオチドまたは該ポリヌクレオチドからなるプローブとを接触させる工程;および
(b)反応性の有無を検出する工程。
〔3〕 工程(a)において、被験細胞試料から調製されたmRNAまたはそのmRNAから転写された相補的DNA(cDNA)を、プローブと接触させる、〔2〕に記載の方法。
〔4〕 〔1〕で選択されるポリヌクレオチドまたはその相補配列にハイブリダイズすることができるポリヌクレオチドの発現を検出する工程が、下記工程を含んでなる、〔1〕に記載の方法:
(a−1)被験細胞試料由来のポリヌクレオチドを鋳型とし、〔1〕で選択されるポリヌクレオチドまたはその相補配列にハイブリダイズすることができるポリヌクレオチドからなるプライマーまたは〔1〕で選択されるポリヌクレオチドまたはその相補配列にハイブリダイズすることができるポリヌクレオチドからなるプライマーセットを用いて遺伝子増幅法を実施する工程;および
(b−1)形成された増幅産物を検出する工程。
〔5〕 工程(a−1)において、被験細胞試料から調製されたmRNAまたはそのmRNAから転写された相補的DNA(cDNA)を鋳型として用いる、〔4〕に記載の方法。
〔6〕 さらに、検出する工程の後に、検出物からGABA産生ニューロン前駆細胞を分離する工程を含んでなる、〔1〕〜〔5〕のいずれか一項に記載の方法。
〔7〕 さらに、Corl1遺伝子、Pax2、Lim1/2遺伝子、Lbx1遺伝子およびCorl2遺伝子からなる群から選択される遺伝子の発現を指標として、GABA産生ニューロン前駆細胞を検出または選択される工程を含む、〔1〕〜〔6〕のいずれか一項に記載の方法。
〔8〕 以下の(v)、(vi)、(vii)、および(viii)から選択されるタンパク質を検出する工程を含んでなる、GABA産生ニューロン前駆細胞を検出または選択する方法:
(v)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列を含んでなるタンパク質;
(vi)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列において、1または複数個のアミノ酸の挿入、置換、欠失、および/またはその一方または両末端への1または複数個のアミノ酸の付加がなされたアミノ酸配列であって、GABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質;
(vii)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされ、かつ、GABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質;および
(viii)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列と70%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ、GABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質。
〔9〕 以下の(v)、(vi)、(vii)、および(viii)から選択されるタンパク質に翻訳されるmRNAを発現させるプロモーターの制御下にマーカータンパク質をコードするポリヌクレオチドを連結させることによって該マーカータンパク質の該mRNAを転写させて翻訳される該マーカータンパク質を検出する工程を含んでなる、GABA産生ニューロン前駆細胞を検出または選択する方法:
(v)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列を含んでなるタンパク質;
(vi)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列において、1または複数個のアミノ酸の挿入、置換、欠失、および/またはその一方または両末端への1または複数個のアミノ酸の付加がなされたアミノ酸配列であって、GABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質;
(vii)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされ、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質;および
(viii)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列と70%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質。
〔10〕 認識するタンパク質を検出する工程が、下記工程を含んでなる、〔8〕または〔9〕に記載の方法:
(d)被験細胞試料と〔8〕または〔9〕で選択されるタンパク質と結合する抗体とを接触させる工程; および
(e)反応性の有無を検出する工程。
〔11〕 検出する工程の後に、検出物からGABA産生ニューロン前駆細胞を分離する工程を含んでなる、〔8〕〜〔10〕のいずれか一項に記載の方法。
〔12〕 〔8〕で選択されるタンパク質以外のGABA産生ニューロン前駆細胞マーカータンパク質が、Corl1遺伝子、Pax2、Lim1/2遺伝子、Lbx1遺伝子およびCorl2遺伝子からなる群から選択される遺伝子でコードされるタンパク質である、〔8〕〜〔11〕のいずれか一項に記載の方法。
〔13〕 以下(i)、(ii)、(iii)、および(iv)から選択されるポリヌクレオチドまたはその相補配列にハイブリダイズすることができるポリヌクレオチドの発現を検出することが可能なプローブ、プライマーまたはプライマーセットを含んでなるGABA産生ニューロン前駆細胞を検出するためのキット:
(i)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列を含んでなるポリヌクレオチド;
(ii)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列において、1または複数個のヌクレオチドの挿入、置換、欠失、および/またはその一方または両末端への1または複数個のヌクレオチドの付加がなされた塩基配列によってコードされたアミノ酸配列であって、GABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質をコードするポリヌクレオチド;
(iii)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質をコードするポリヌクレオチド;および
(iv)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列からなるポリヌクレオチドと70%以上の同一性を有し、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質をコードするポリヌクレオチド。
〔14〕 さらに、Lbx1、Pax2、Lim1/2、Corl1およびCorl2遺伝子からなる群より選択される1または複数の遺伝子の転写産物にハイブリダイズするポリヌクレオチドを含む、GABA産生ニューロン前駆細胞を検出または選択するための〔13〕記載のキット。
〔15〕 さらに、小脳細胞または脊髄細胞を含む〔13〕または〔14〕記載のキット。
〔16〕 以下の(v)、(vi)、(vii)、および(viii)から選択されるタンパク質と結合する抗体を含んでなる、GABA産生ニューロン前駆細胞を検出または選択するためのキット:
(v)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列を含んでなるタンパク質;
(vi)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列において、1または複数個のアミノ酸の挿入、置換、欠失、および/またはその一方または両末端への1または複数個のアミノ酸の付加がなされたアミノ酸配列であって、GABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質;
(vii)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされ、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質;および
(viii)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列と70%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質。
〔17〕 以下の(v)、(vi)、(vii)、および(viii)から選択されるタンパクに翻訳されるmRNAを発現させるプロモーターの制御下にマーカータンパク質をコードするポリヌクレオチドを連結させたポリヌクレオチドを含む、GABA産生ニューロン前駆細胞を検出または選択するためのキット。
(v)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列を含んでなるタンパク質;
(vi)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列において、1または複数個のアミノ酸の挿入、置換、欠失、および/またはその一方または両末端への1または複数個のアミノ酸の付加がなされたアミノ酸配列であって、GABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質;
(vii)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされ、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質;および
(viii)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列と70%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質。
〔18〕 さらに、Lbx1、Pax2、Lim1/2、Corl1およびCorl2遺伝子からなる群より選択される1または複数の遺伝子でコードされるタンパク質に結合する抗体との組合せを含む、GABA産生ニューロン前駆細胞を検出または選択するための〔16〕または〔17〕記載のキット。
〔19〕 さらに、小脳細胞または脊髄細胞を含む〔16〕〜〔18〕のいずれか一項に記載のキット。
〔20〕 識別の対象となる小脳細胞がプルキンエ細胞である、〔15〕または〔19〕に記載のキット。
〔21〕 識別の対象となる脊髄細胞がdI4またはdILAである、〔15〕または〔19〕に記載のキット。
〔22〕 下記工程を含んでなる、GABA産生ニューロン前駆細胞分化誘導に有効な物質のスクリーニング方法:
(I)GABA産生ニューロン前駆細胞に分化し得る細胞と、被験化合物とを接触させる工程;および
(II)以下に記載のポリヌクレオチドの発現を検出する工程:
下記(i)、(ii)、(iii)、および(iv)から選択される、ヌクレオチド配列またはその相補配列にハイブリダイズすることができる、GABA産生ニューロン前駆細胞のポリヌクレオチド:
(i)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列を含んでなるポリヌクレオチド;
(ii)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列において、1または複数個のヌクレオチドの挿入、置換、欠失、および/またはその一方または両末端への1または複数個のヌクレオチドの付加がなされた塩基配列によってコードされたアミノ酸配列であって、GABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質をコードするポリヌクレオチド;
(iii)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質をコードするポリヌクレオチド;および
(iv)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列からなるポリヌクレオチドと70%以上の同一性を有し、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質をコードするポリヌクレオチド。
〔23〕(III)工程(II)でポリヌクレオチドの発現を検出した化合物を選択する工程、を更に含んでなる〔22〕に記載の方法。
〔24〕 下記工程を含んでなる、GABA産生ニューロン前駆細胞分化誘導に有効な物質のスクリーニング方法:
(IV)GABA産生ニューロン前駆細胞に分化し得る細胞と、被験化合物とを接触させる工程;および
(V)以下の(v)、(vi)、(vii)、および(viii)から選択されるタンパク質を検出する工程:
(v)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列を含んでなるタンパク質;
(vi)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列において、1または複数個のアミノ酸の挿入、置換、欠失、および/またはその一方または両末端への1または複数個のアミノ酸の付加がなされたアミノ酸配列であって、GABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質;
(vii)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされ、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質;および
(viii)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列と70%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質。
〔25〕 下記工程を含んでなる、GABA産生ニューロン前駆細胞分化誘導に有効な物質のスクリーニング方法:
(IV−1)GABA産生ニューロン前駆細胞に分化し得る細胞と、被験化合物とを接触させる工程;および
(V−1)以下の(v)、(vi)、(vii)、および(viii)から選択されるタンパク質に翻訳されるmRNAを発現させるプロモーターの制御下にマーカータンパク質をコードするポリヌクレオチドを連結させることによって該マーカータンパク質の該mRNAを転写させて翻訳される該マーカータンパク質を検出する工程:
(v)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列を含んでなるタンパク質;
(vi)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列において、1または複数個のアミノ酸の挿入、置換、欠失、および/またはその一方または両末端への1または複数個のアミノ酸の付加がなされたアミノ酸配列であって、GABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質;
(vii)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされ、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質;および
(viii)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列と70%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質。
〔26〕 (VI)工程(V)でタンパク質を検出した化合物を選択する工程、を更に含んでなる〔24〕または〔25〕に記載の方法。
〔27〕 GABA産生ニューロン前駆細胞集団の製造方法であって、
(VII)GABA産生ニューロン前駆細胞を含み得る細胞集団を取得する工程;
(VIII)〔1〕〜〔12〕のいずれか一項に記載の方法を用いて、GABA産生ニューロン前駆細胞を検出する工程;および
(IX)工程(VIII)で検出または選択された細胞を増殖する工程
を含んでなる、方法。
〔28〕 GABA産生ニューロン前駆細胞が、脊髄損傷治療用または小脳変性症治療用のGABA産生ニューロン前駆細胞である〔27〕の製造方法。
〔29〕 工程
(VII)GABA産生ニューロン前駆細胞を含み得る細胞集団を取得する工程;
(VIII)〔1〕〜〔12〕のいずれか一項に記載の方法を用いて、GABA産生ニューロン前駆細胞を検出または選択する工程;および
(IX)工程(VIII)で検出された細胞を増殖する工程
で得られるGABA産生ニューロン前駆細胞集団。
〔30〕 以下の(i)、(ii)、(iii)、および(iv)から選択されるポリヌクレオチドまたはその相補配列にハイブリダイズすることができるポリヌクレオチドの発現を検出可能なプローブ、プライマー、プライマーセットを含んでなるGABA産生ニューロン前駆細胞を検出または選択するための試薬:
(i)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列を含んでなるポリヌクレオチド;
(ii)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列において、1または複数個のヌクレオチドの挿入、置換、欠失、および/またはその一方または両末端への1または複数個のヌクレオチドの付加がなされた塩基配列によってコードされたアミノ酸配列であって、GABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質をコードするポリヌクレオチド;
(iii)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質をコードするポリヌクレオチド;および
(iv)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列からなるポリヌクレオチドと70%以上の同一性を有し、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質をコードするポリヌクレオチド。
〔31〕 さらに、Lbx1、Pax2、Lim1/2、Corl1およびCorl2遺伝子からなる群より選択される1または複数の遺伝子の転写産物にハイブリダイズするポリヌクレオチドとの組合せを含む、小脳細胞または脊髄細胞を検出または選択するための〔30〕記載の試薬。
〔32〕 さらに、小脳細胞または脊髄細胞を含む〔30〕または〔31〕記載の試薬。
〔33〕 以下の(v)、(vi)、(vii)、および(viii)から選択されるタンパク質と結合する抗体を含んでなる、GABA産生ニューロン前駆細胞を検出または選択するための試薬:
(v)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列を含んでなるタンパク質;
(vi)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列において、1または複数個のアミノ酸の挿入、置換、欠失、および/またはその一方または両末端への1または複数個のアミノ酸の付加がなされたアミノ酸配列であって、GABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質;
(vii)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされ、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質;および
(viii)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列と70%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質。
〔34〕 以下の(v)、(vi)、(vii)、および(viii)から選択されるタンパク質に翻訳されるmRNAを発現させるプロモーターの制御下にマーカータンパク質をコードするポリヌクレオチドを連結させたポリヌクレオチドを含む、GABA産生ニューロン前駆細胞を検出または選択するための試薬:
(v)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列を含んでなるタンパク質;
(vi)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列において、1または複数個のアミノ酸の挿入、置換、欠失、および/またはその一方または両末端への1または複数個のアミノ酸の付加がなされたアミノ酸配列であって、GABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質;
(vii)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされ、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質;および
(viii)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列と70%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質。
〔35〕 さらに、Lbx1、Pax2、Lim1/2、Corl1およびCorl2遺伝子からなる群より選択される1または複数の遺伝子でコードされるタンパク質に結合する抗体との組合せを含む、GABA産生ニューロン前駆細胞を検出または選択するための〔33〕または〔34〕に記載の試薬。
〔36〕 さらに、小脳細胞または脊髄細胞を含む〔33〕〜〔35〕のいずれか一項に記載の試薬。
〔37〕 識別の対象となる小脳細胞がプルキンエ細胞である、〔33〕〜〔36〕のいずれか一項に記載の試薬。
〔38〕 識別の対象となる脊髄細胞がdI4またはdILAである、〔33〕〜〔36〕のいずれか一項に記載の試薬。
〔39〕 小脳変性症または脊髄損傷の再生医療に使用するためのGABA産生ニューロン前駆細胞を検出または選択するための以下の(i)、(ii)、(iii)、および(iv)から選択されるポリヌクレオチドまたはその相補配列にハイブリダイズすることができるポリヌクレオチド:
(i)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列を含んでなるポリヌクレオチド;
(ii)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列において、1または複数個のヌクレオチドの挿入、置換、欠失、および/またはその一方または両末端への1または複数個のヌクレオチドの付加がなされた塩基配列によってコードされたアミノ酸配列であって、GABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質をコードするポリヌクレオチド;
(iii)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質をコードするポリヌクレオチド;および
(iv)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列からなるポリヌクレオチドと70%以上の同一性を有し、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質をコードするポリヌクレオチド。
〔40〕 GABA産生ニューロン前駆細胞が、脊髄または小脳のGABA産生ニューロン前駆細胞である〔39〕記載のGABA産生ニューロン前駆細胞の検出または選択するためのポリヌクレオチド。
〔41〕 〔39〕または〔40〕記載のヌクレオチド配列またはその相補配列の連続する少なくとも10個のヌクレオチドを含んでなるポリヌクレオチドからなる、〔39〕または〔40〕に記載の検出または選択するためのポリヌクレオチド。
〔42〕 〔39〕または〔40〕記載のヌクレオチド配列またはその相補配列の連続する少なくとも15個のヌクレオチドを含んでなるポリヌクレオチドからなる、〔39〕または〔40〕に記載の検出または選択するためのポリヌクレオチド。
〔43〕 〔39〕〜〔42〕のいずれか一項に記載の検出するためのポリヌクレオチドからなる、プローブ。
〔44〕 〔39〕〜〔42〕のいずれか一項に記載の検出用ポリヌクレオチドからなる、プライマー。
〔45〕 〔39〕〜〔42〕のいずれか一項に記載の二種以上の検出用ポリヌクレオチドからなる、プライマーセット。
〔46〕 以下の(v)、(vi)、(vii)、および(viii)から選択されるタンパク質と結合する、小脳変性症または脊髄損傷の再生医療に使用するためのGABA産生ニューロン前駆細胞を検出または選択するための抗体。:
(v)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列を含んでなるタンパク質;
(vi)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列において、1または複数個のアミノ酸の挿入、置換、欠失、および/またはその一方または両末端への1または複数個のアミノ酸の付加がなされたアミノ酸配列であって、GABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質;
(vii)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされ、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質;および
(viii)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列と70%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質。
〔47〕 GABA産生ニューロン前駆細胞が、小脳細胞または脊髄細胞のGABA産生ニューロン前駆細胞である〔46〕記載の抗体。
〔48〕 配列番号:2、4、38、40、42若しくは44で表されるアミノ酸配列の21番目〜510番目、配列番号:34若しくは36で表されるアミノ酸配列の20番目〜513番目、配列番号:46若しくは48で表されるアミノ酸配列の21番目〜460番目、または配列番号:50で表されるアミノ酸配列の21番目〜490番目のアミノ酸配列の少なくとも連続した6アミノ酸残基または全部からなるポリペプチドと結合する抗体である、〔46〕または〔47〕に記載の抗体。
〔49〕 抗体が、少なくとも6アミノ酸残基からなるポリペプチドと結合する抗体である、〔46〕〜〔48〕のいずれか一項に記載の抗体。
〔50〕 以下の(i)、(ii)、(iii)、および(iv)から選択されるポリヌクレオチドまたはその相補配列にハイブリダイズすることができるポリヌクレオチドによって検出または選択された、小脳変性症または脊髄損傷の再生医療に使用するためのGABA産生ニューロン前駆細胞:
(i)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列を含んでなるポリヌクレオチド;
(ii)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列において、1または複数個のヌクレオチドの挿入、置換、欠失、および/またはその一方または両末端への1または複数個のヌクレオチドの付加がなされた塩基配列によってコードされたアミノ酸配列であって、GABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質をコードするポリヌクレオチド;
(iii)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質をコードするポリヌクレオチド;および
(iv)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列からなるポリヌクレオチドと70%以上の同一性を有し、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質をコードするポリヌクレオチド。
〔51〕 GABA産生ニューロン前駆細胞が、脊髄または小脳のGABA産生ニューロン前駆細胞である〔50〕記載のGABA産生ニューロン前駆細胞。
〔52〕 ポリヌクレオチドが、前記(i)、(ii)、(iii)、および(iv)から選択されるポリヌクレオチドまたはその相補配列の連続する少なくとも10個のヌクレオチドを含んでなるポリヌクレオチドである、〔50〕または〔51〕記載のGABA産生ニューロン前駆細胞。
〔53〕 ポリヌクレオチドが、前記(i)、(ii)、(iii)、および(iv)から選択されるポリヌクレオチドまたはその相補配列の連続する少なくとも15個のヌクレオチドを含んでなるポリヌクレオチドである、〔50〕または〔51〕記載のGABA産生ニューロン前駆細胞。
〔54〕 以下の(v)、(vi)、(vii)、および(viii)から選択されるタンパク質と結合する抗体によって検出または選択された、小脳変性症または脊髄損傷の再生医療に使用するためのGABA産生ニューロン前駆細胞。:
(v)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列を含んでなるタンパク質;
(vi)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列において、1または複数個のアミノ酸の挿入、置換、欠失、および/またはその一方または両末端への1または複数個のアミノ酸の付加がなされたアミノ酸配列であって、GABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質;
(vii)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされ、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質;および
(viii)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列と70%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質。
〔55〕 GABA産生ニューロン前駆細胞が、小脳細胞または脊髄細胞のGABA産生ニューロン前駆細胞である〔54〕記載のGABA産生ニューロン前駆細胞。
〔56〕 抗体が、配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列の21番目〜510番目のアミノ酸配列の少なくとも連続した6アミノ酸残基または全部からなるポリペプチドと結合する抗体である、〔54〕または〔55〕に記載のGABA産生ニューロン前駆細胞。
〔57〕 抗体が、少なくとも6アミノ酸残基からなるポリペプチドと結合する抗体である、〔54〕〜〔56〕のいずれか一項に記載のGABA産生ニューロン前駆細胞。
〔58〕 小脳変性症または脊髄損傷を治療する方法であって、以下の(i)、(ii)、(iii)、および(iv)から選択されるポリヌクレオチドまたはその相補配列にハイブリダイズすることができるポリヌクレオチドによって検出または選択されたGABA産生ニューロン前駆細胞を移植する方法:
(i)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列を含んでなるポリヌクレオチド;
(ii)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列において、1または複数個のヌクレオチドの挿入、置換、欠失、および/またはその一方または両末端への1または複数個のヌクレオチドの付加がなされた塩基配列によってコードされたアミノ酸配列からなり、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質をコードするポリヌクレオチド;
(iii)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質をコードするポリヌクレオチド;および
(iv)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列からなるポリヌクレオチドと70%以上の同一性を有し、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質をコードするポリヌクレオチド。
〔59〕 GABA産生ニューロン前駆細胞が、脊髄または小脳のGABA産生ニューロン前駆細胞である〔58〕記載のGABA産生ニューロン前駆細胞を移植する方法。
〔60〕 ポリヌクレオチドが、前記(i)、(ii)、(iii)、および(iv)から選択されるポリヌクレオチドまたはその相補配列の連続する少なくとも10個のヌクレオチドを含んでなるポリヌクレオチドである、〔58〕または〔59〕に記載のGABA産生ニューロン前駆細胞を移植する方法。
〔61〕 ポリヌクレオチドが、前記(i)、(ii)、(iii)、および(iv)から選択されるポリヌクレオチドまたはその相補配列の連続する少なくとも15個のヌクレオチドを含んでなるポリヌクレオチドである、〔58〕または〔59〕に記載のGABA産生ニューロン前駆細胞を移植する方法。
〔62〕 小脳変性症または脊髄損傷を治療する方法であって、以下の(v)、(vi)、(vii)、および(viii)から選択されるタンパク質と結合する抗体によって検出または選択されたGABA産生ニューロン前駆細胞を移植する方法。:
(v)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列を含んでなるタンパク質;
(vi)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列において、1または複数個のアミノ酸の挿入、置換、欠失、および/またはその一方または両末端への1または複数個のアミノ酸の付加がなされたアミノ酸配列であって、GABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質;
(vii)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされ、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質;および
(viii)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列と70%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質。
〔63〕 GABA産生ニューロン前駆細胞が、小脳細胞または脊髄細胞のGABA産生ニューロン前駆細胞である〔62〕記載のGABA産生ニューロン前駆細胞を移植する方法。
〔64〕 抗体が、配列番号:2、4、38、40、42若しくは44で表されるアミノ酸配列の21番目〜510番目、配列番号:34若しくは36で表されるアミノ酸配列の20番目〜513番目、配列番号:46若しくは48で表されるアミノ酸配列の21番目〜460番目、または配列番号:50で表されるアミノ酸配列の21番目〜490番目のアミノ酸配列の少なくとも連続した6アミノ酸残基または全部からなるポリペプチドと結合する抗体である、〔62〕または〔63〕に記載のGABA産生ニューロン前駆細胞を移植する方法。
〔65〕 抗体が、少なくとも6アミノ酸残基からなるポリペプチドと結合する抗体である、〔62〕〜〔64〕のいずれか一項に記載のGABA産生ニューロン前駆細胞を移植する方法。
本発明は、GABA産生ニューロン前駆細胞を検出または選択するためのポリヌクレオチドを提供する。
(i)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列を含んでなるポリヌクレオチド;
(ii)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列において、1または複数個のヌクレオチドの挿入、置換、欠失、および/またはその一方または両末端への1または複数個のヌクレオチドの付加がなされた塩基配列によってコードされたアミノ酸配列であって、GABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質をコードするポリヌクレオチド;
(iii)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質をコードするポリヌクレオチド;および
(iv)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列からなるポリヌクレオチドと70%以上の同一性を有し、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質をコードするポリヌクレオチド
従って、対象となるタンパク質が本発明者らにより同定された配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列と同等の生物学的特性を有しているか否かの判定は、当業者においては例えば、嗅覚神経回路パターンまたはGABAニューロン前駆細胞に選択的に発現していることを測定することにより行うことができる。
(v)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列を含んでなるタンパク質;
(vi)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列において、1または複数個のアミノ酸の挿入、置換、欠失、および/またはその一方または両末端への1または複数個のアミノ酸の付加がなされたアミノ酸配列からなり、かつ配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列からなるタンパク質と同等の機能を有するタンパク質;
(vii)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされ、かつ配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列からなるタンパク質と同等の機能を有するタンパク質;および
(viii)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列と70%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列からなるタンパク質
ここで、「配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列で表されるタンパク質と同等の機能」の好ましい機能としては、GABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現していることを意味する。
また、抗体の好ましい態様は、本発明のポリペプチドがGABA産生ニューロン前駆細胞の細胞外領域のポリペプチドであって、当該ポリペプチドと結合する抗体である。本発明に用いるポリペプチドの細胞外領域はプログラムPSORT(http://psort.ims.u-tokyo.ac.jp/)等を用いて調べることができる。具体的には、当該プログラムPSORTを用いた細胞外領域は、配列番号:2、4、38、40、42若しくは44で表されるアミノ酸配列の21番目〜510番目、配列番号:34若しくは36で表されるアミノ酸配列の20番目〜513番目、配列番号:46若しくは48で表されるアミノ酸配列の21番目〜460番目、または配列番号:50で表されるアミノ酸配列の21番目〜490番目のアミノ酸配列
なお、「配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列で表されるタンパク質と同等の機能」の好ましい機能としては、GABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現していることを意味する。
本発明の方法の好ましい態様としては、本発明の前記(i)、(ii)、(iii)および(iv)から選択されるポリヌクレオチドまたはその相補配列にハイブリダイズすることができるポリヌクレオチドの発現を検出する工程を含む方法である。
(a)被験細胞試料と、前記本発明の方法で選択されるポリヌクレオチド、その相補配列にハイブリダイズすることができるポリヌクレオチドまたは該ポリヌクレオチドからなるプローブとを接触させる工程;および
(b)反応性の有無を検出する工程
本方法においては次いで、反応性の有無を検出する。ここで反応性が有るとは、通常、接触させたポリヌクレオチドが対象となる配列とハイブリダイズした(反応した)状態をいう。
(a−1)被験細胞試料由来のポリヌクレオチドを鋳型とし、本発明のポリヌクレオチドまたは本発明のポリヌクレオチドからなるプライマーまたは本発明のポリヌクレオチドからなるプライマーセットを用いて遺伝子増幅法を実施する工程;および
(b−1)形成された増幅産物を検出する工程
また、前記工程(a−1)は、例えば、被験細胞試料から調製されたmRNAまたはそのmRNAから転写された相補的DNA(cDNA)を鋳型として用いてもよい。
前記検出する工程の後に、検出物からGABA産生ニューロン前駆細胞を分離する工程が含まれていてもよい。
(d)被験細胞試料と上記GABA産生ニューロン前駆細胞を検出または選択する工程によって選択されるタンパク質と結合する抗体とを接触させる工程
(e)反応性の有無を検出する工程
前記検出する工程の後に、検出物からGABA産生ニューロン前駆細胞を分離する工程が含まれていてもよい。本発明におけるGABA産生ニューロン前駆細胞の分離は、抗65B13抗体を用いたフローサイトメトリーにより効率的に行なうことができる。
本発明のキットには、さらにLbx1、Pax2、Lim1/2、Corl1およびCorl2遺伝子からなる群より選択される1または複数の遺伝子の転写産物にハイブリダイズするポリヌクレオチドが含まれていてもよい。
本発明のキットには、さらに小脳細胞または脊髄細胞が含まれていてもよい。
該キットにはさらに、Lbx1、Pax2、Lim1/2、Corl1およびCorl2遺伝子からなる群より選択される1または複数の遺伝子でコードされるタンパク質に結合する抗体との組合せが含まれていてもよい。
さらに小脳細胞または脊髄細胞が含まれていてもよい。
本発明は、GABA産生ニューロン前駆細胞分化誘導に有効な物質のスクリーニング方法を提供する。本方法によりスクリーニングされる化合物は、GABA産生ニューロン前駆細胞分化誘導する機能を示すことから、GABA産生ニューロンにおける何等かの欠陥が病因となっている疾病の治療のための候補化合物となることが期待され有用である。本スクリーニング方法によって取得される化合物の治療対象となる疾患としては、例えば脊髄小脳変性症を挙げることができる。
(I)GABA産生ニューロン前駆細胞に分化し得る細胞と、被験化合物とを接触させる工程;および
(II)前記(i)、(ii)、(iii)、および(iv)から選択される、ヌクレオチド配列またはその相補配列にハイブリダイズすることができる、GABA産生ニューロン前駆細胞のポリヌクレオチドの発現を検出する工程
(f)被検試料の存在下で、GABA産生ニューロン前駆細胞へ分化する能力のある細胞からGABA産生ニューロン前駆細胞への分化を誘導する工程、
(g)分化を誘導した細胞における65B13遺伝子の転写産物または翻訳産物を検出する工程、
(h)被検試料の非存在下で検出した場合と比較して、該転写産物または翻訳産物の量を増大させる化合物を選択する工程。
(IV)GABA産生ニューロン前駆細胞に分化し得る細胞と、被験化合物とを接触させる工程;および
(V)前記(v)、(vi)、(vii)、および(viii)から選択されるタンパク質を検出する工程:
上記方法の好ましい態様としては、さらに、(VI)工程(V)でタンパク質を検出した化合物を選択する工程を含む方法である。
(VII)GABA産生ニューロン前駆細胞を含み得る細胞集団を取得する工程;
(VIII)本発明のGABA産生ニューロン前駆細胞を検出または選択する方法を用いて、GABA産生ニューロン前駆細胞を検出する工程;および
(IX)工程(VIII)で検出または選択された細胞を増殖する工程
を含んでなる、方法が挙げられる。
マウスLbx1の塩基配列を配列番号:5、アミノ酸配列を配列番号:6に、ヒトLbx1の塩基配列を配列番号:7、アミノ酸配列を配列番号:8に示す。
マウスPax2の塩基配列を配列番号:9、アミノ酸配列を配列番号:10に、ヒトPax2の塩基配列を配列番号:11、アミノ酸配列を配列番号:12に示す。
マウスLim1の塩基配列を配列番号:13、アミノ酸配列を配列番号:14に、ヒトLim1の塩基配列を配列番号:15、アミノ酸配列を配列番号:16に示す。
マウスLim2の塩基配列を配列番号:17、アミノ酸配列を配列番号:18に、ヒトLim2の塩基配列を配列番号:19、アミノ酸配列を配列番号:20に、ラットLim2の塩基配列を配列番号:21、アミノ酸配列を配列番号:22に示す。
マウスCorl1の塩基配列を配列番号:23に、アミノ酸配列を配列番号:24に、ヒトCorl1の塩基配列を配列番号:25、アミノ酸配列を配列番号:26に、ラットCorl1の塩基配列を配列番号:27に、アミノ酸配列を配列番号:28に示す。
マウスCorl2の塩基配列を配列番号:29に、アミノ酸配列を配列番号:30に、ヒトCorl2の塩基配列を配列番号:31、アミノ酸配列を配列番号:32に示す。
また前記試薬には、さらに小脳細胞または脊髄細胞を含めることができる。
また前記試薬には、さらに、小脳細胞または脊髄細胞が含まれていてもよい。
前記試薬による識別可能な細胞は、小脳細胞の場合はプルキンエ細胞、脊髄細胞の場合はdI4またはdILAを挙げることができる。
65B13(Neph3)は、胎児脳内において幾つかの領域に選択的に発現している(図1;WO 2004/038018;Minaki Y, Mizuhara E, Morimoto K, Nakatani T, Sakamoto Y, Inoue Y, Satoh K, Imai T, Takai Y, Ono Y. Migrating postmitotic neural precursor cells in the ventricular zone extend apical processes and form adherens junctions near the ventricle in the developing spinal cord. Neurosci Res. 2005, 52(3):250-62.)。中脳ではドーパミンニューロン前駆細胞に発現することが明らかになっているが(WO 2004/038018)、それ以外の領域における65B13発現細胞種については同定されていない。そこで、脊髄および小脳原基の65B13発現細胞の同定を試みた。
小脳はグルタミン酸産生顆粒細胞と、プルキンエ細胞、ゴルジ細胞、星状細胞、籠細胞などのGABA産生ニューロンにより構成される(Wang VY, Zoghbi HY. Genetic regulation of cerebellar development. Nat Rev Neurosci. 2001, 2(7):484-91.)。顆粒細胞はE12.5-14.5にかけてのrhombic lip領域から発生することが知られている(Wang VY, Zoghbi HY. Genetic regulation of cerebellar development. Nat Rev Neurosci. 2001, 2(7):484-91.)。一方、GABA産生ニューロンの発生については明らかでない部分が多いものの、最近の知見から、E11.5-E13.5のrhombomere1背側領域(小脳原基領域)からプルキンエ細胞が産生されると考えられている(Chizhikov VV, Lindgren AG, Currle DS, Rose MF, Monuki ES, Millen KJ. The roof plate regulates cerebellar cell-type specification and proliferation. Development. 2006, 133(15):2793-804.)。ゴルジ細胞については詳細な報告はないが、同様の領域から発生後期(E13.5-15.5)に産生されると考えられ、一方、星状細胞と籠細胞は生後に白質内の前駆細胞から発生すると考えられている(Zhang L, Goldman JE. Generation of cerebellar interneurons from dividing progenitors in white matter. Neuron. 1996, 16(1):47-54.)。
E12.5およびE14.5小脳原基領域を切り出し、実施例1と同様の方法で、セルソーターを用いて65B13陽性細胞を検出・分離した。その結果、いずれの発生時期の小脳原基領域からも65B13陽性細胞を生きたまま分離することが可能であることが示された(図7)。そして、2日間の培養により、これらの細胞のほとんどがニューロンに分化し、E12.5の65B13陽性細胞のほとんどはCorl2陽性のプルキンエ細胞に(図8A)、そしてE14.5の65B13陽性細胞のほとんどはPax2陽性のゴルジ細胞様ニューロンに(図8B)分化することが確認された。したがって、胎児期小脳では、65B13は、プルキンエ細胞およびゴルジ細胞の前駆細胞に選択的に発現し、抗65B13抗体を用いることで、これらの前駆細胞を分離可能であることが明らかになった。すなわち、65B13は脊髄dorsal hornおよび小脳のGABA産生ニューロン前駆細胞を分離するためのマーカーとして有用であることが示された。
次に、65B13をマーカーに用いることで、in vitroで分化誘導したGABAニューロン前駆細胞を分離可能であるか調べるために、以下のプロトコールにより、ES細胞より分化誘導した脊髄神経細胞(Wichterle H, Lieberam I, Porter JA, Jessell TM. Directed differentiation of embryonic stem cells into motor neurons. Cell. 2002, 110(3):385-97.)の分離を試みた。
次に、65B13プロモーターを用いることで、外来遺伝子をGABA産生ニューロン前駆細胞特異的に発現させることが可能であるかを調べるために、以下のプロトコールで、トランスジェニックマウスを作製し、外来遺伝子の発現を解析した。
本発明者によって同定されたマーカー遺伝子は、膜タンパク質をコードすることから、該マーカーを指標とすることにより、GABAニューロン前駆細胞を検出・選択し、GABAニューロン前駆細胞を生きた状態のまま単離(分離)することが可能である。
本発明のマーカーを利用した、GABAニューロン前駆細胞の取得方法により、高純度のGABAニューロンが得られることから、例えば、脊髄GABAニューロンであれば痛みに対する創薬などに、小脳GABAニューロンであれば小脳変性症に対する創薬などに適用することが可能である。
配列番号:35 Mouse 65B13 BC052773 extracellular: 20-513 a.a.
配列番号:37 Human 65B13 NM_032123 extracellular: 21-510 a.a.
配列番号:39 Human 65B13 NM_199180 extracellular: 21-510 a.a.
配列番号:41 Human 65B13 AY358742 extracellular: 21-510 a.a.
配列番号:43 Human 65B13 AY305301 extracellular: 21-510 a.a.
配列番号:45 Human 65B13 NM_199179 extracellular: 21-460 a.a.
配列番号:47 Human 65B13 AY305302 extracellular: 21-460 a.a.
配列番号:49 Human 65B13 BC064925 extracellular: 21-490 a.a.
配列番号:51 Chimpanzee 65B13 (predicted) XM_512603 extracellular: 21-445 a.a.
配列番号:53 Cattle 65B13 (predicted) XM_583222 extracellular: 44-607 a.a.
Claims (65)
- 以下の(i)、(ii)、(iii)、および(iv)から選択されるポリヌクレオチドまたはその相補配列にハイブリダイズすることができるポリヌクレオチドの発現を検出する工程を含んでなる、GABA産生ニューロン前駆細胞を検出する方法:
(i)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列を含んでなるポリヌクレオチド;
(ii)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列において、1または複数個のヌクレオチドの挿入、置換、欠失、および/またはその一方または両末端への1または複数個のヌクレオチドの付加がなされた塩基配列によってコードされたアミノ酸配列であって、GABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているポリヌクレオチド;
(iii)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているポリヌクレオチド;および
(iv)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列からなるポリヌクレオチドと70%以上の同一性を有し、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているポリヌクレオチド。 - ポリヌクレオチドの発現を検出する工程が、下記工程を含んでなる、請求項1に記載の方法:
(a)被験細胞試料と請求項1で選択されるポリヌクレオチドまたはその相補配列にハイブリダイズすることができるポリヌクレオチドまたは該ポリヌクレオチドからなるプローブとを接触させる工程;および
(b)反応性の有無を検出する工程。 - 工程(a)において、被験細胞試料から調製されたmRNAまたはそのmRNAから転写された相補的DNA(cDNA)を、プローブと接触させる、請求項2に記載の方法。
- 請求項1で選択されるポリヌクレオチドまたはその相補配列にハイブリダイズすることができるポリヌクレオチドの発現を検出する工程が、下記工程を含んでなる、請求項1に記載の方法:
(a−1)被験細胞試料由来のポリヌクレオチドを鋳型とし、請求項1で選択されるポリヌクレオチドまたはその相補配列にハイブリダイズすることができるポリヌクレオチドからなるプライマーまたは請求項1で選択されるポリヌクレオチドまたはその相補配列にハイブリダイズすることができるポリヌクレオチドからなるプライマーセットを用いて遺伝子増幅法を実施する工程;および
(b−1)形成された増幅産物を検出する工程。 - 工程(a−1)において、被験細胞試料から調製されたmRNAまたはそのmRNAから転写された相補的DNA(cDNA)を鋳型として用いる、請求項4に記載の方法。
- さらに、検出する工程の後に、検出物からGABA産生ニューロン前駆細胞を分離する工程を含んでなる、請求項1〜5のいずれか一項に記載の方法。
- さらに、Corl1遺伝子、Pax2、Lim1/2遺伝子、Lbx1遺伝子およびCorl2遺伝子からなる群から選択される遺伝子の発現を指標として、GABA産生ニューロン前駆細胞を検出または選択される工程を含む、請求項1〜6のいずれか一項に記載の方法。
- 以下の(v)、(vi)、(vii)、および(viii)から選択されるタンパク質を検出する工程を含んでなる、GABA産生ニューロン前駆細胞を検出または選択する方法:
(v)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列を含んでなるタンパク質;
(vi)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列において、1または複数個のアミノ酸の挿入、置換、欠失、および/またはその一方または両末端への1または複数個のアミノ酸の付加がなされたアミノ酸配列であって、GABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質;
(vii)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされ、かつ、GABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質;および
(viii)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列と70%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ、GABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質。 - 以下の(v)、(vi)、(vii)、および(viii)から選択されるタンパク質に翻訳されるmRNAを発現させるプロモーターの制御下にマーカータンパク質をコードするポリヌクレオチドを連結させることによって該マーカータンパク質の該mRNAを転写させて翻訳される該マーカータンパク質を検出する工程を含んでなる、GABA産生ニューロン前駆細胞を検出または選択する方法:
(v)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列を含んでなるタンパク質;
(vi)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列において、1または複数個のアミノ酸の挿入、置換、欠失、および/またはその一方または両末端への1または複数個のアミノ酸の付加がなされたアミノ酸配列であって、GABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質;
(vii)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされ、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質;および
(viii)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列と70%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質。 - 認識するタンパク質を検出する工程が、下記工程を含んでなる、請求項8または9に記載の方法:
(d)被験細胞試料と請求項8または9で選択されるタンパク質と結合する抗体とを接触させる工程; および
(e)反応性の有無を検出する工程。 - 検出する工程の後に、検出物からGABA産生ニューロン前駆細胞を分離する工程を含んでなる、請求項8〜10のいずれか一項に記載の方法。
- 請求項8で選択されるタンパク質以外のGABA産生ニューロン前駆細胞マーカータンパク質が、Corl1遺伝子、Pax2、Lim1/2遺伝子、Lbx1遺伝子およびCorl2遺伝子からなる群から選択される遺伝子でコードされるタンパク質である、請求項8〜11のいずれか一項に記載の方法。
- 以下(i)、(ii)、(iii)、および(iv)から選択されるポリヌクレオチドまたはその相補配列にハイブリダイズすることができるポリヌクレオチドの発現を検出することが可能なプローブ、プライマーまたはプライマーセットを含んでなるGABA産生ニューロン前駆細胞を検出するためのキット:
(i)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列を含んでなるポリヌクレオチド;
(ii)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列において、1または複数個のヌクレオチドの挿入、置換、欠失、および/またはその一方または両末端への1または複数個のヌクレオチドの付加がなされた塩基配列によってコードされたアミノ酸配列であって、GABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質をコードするポリヌクレオチド;
(iii)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質をコードするポリヌクレオチド;および
(iv)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列からなるポリヌクレオチドと70%以上の同一性を有し、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質をコードするポリヌクレオチド。 - さらに、Lbx1、Pax2、Lim1/2、Corl1およびCorl2遺伝子からなる群より選択される1または複数の遺伝子の転写産物にハイブリダイズするポリヌクレオチドを含む、GABA産生ニューロン前駆細胞を検出または選択するための請求項13記載のキット。
- さらに、小脳細胞または脊髄細胞を含む請求項13または14記載のキット。
- 以下の(v)、(vi)、(vii)、および(viii)から選択されるタンパク質と結合する抗体を含んでなる、GABA産生ニューロン前駆細胞を検出または選択するためのキット:
(v)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列を含んでなるタンパク質;
(vi)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列において、1または複数個のアミノ酸の挿入、置換、欠失、および/またはその一方または両末端への1または複数個のアミノ酸の付加がなされたアミノ酸配列であって、GABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質;
(vii)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされ、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質;および
(viii)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列と70%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質。 - 以下の(v)、(vi)、(vii)、および(viii)から選択されるタンパクに翻訳されるmRNAを発現させるプロモーターの制御下にマーカータンパク質をコードするポリヌクレオチドを連結させたポリヌクレオチドを含む、GABA産生ニューロン前駆細胞を検出または選択するためのキット。
(v)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列を含んでなるタンパク質;
(vi)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列において、1または複数個のアミノ酸の挿入、置換、欠失、および/またはその一方または両末端への1または複数個のアミノ酸の付加がなされたアミノ酸配列であって、GABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質;
(vii)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされ、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質;および
(viii)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列と70%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質。 - さらに、Lbx1、Pax2、Lim1/2、Corl1およびCorl2遺伝子からなる群より選択される1または複数の遺伝子でコードされるタンパク質に結合する抗体との組合せを含む、GABA産生ニューロン前駆細胞を検出または選択するための請求項16または17記載のキット。
- さらに、小脳細胞または脊髄細胞を含む請求項16〜18のいずれか一項に記載のキット。
- 識別の対象となる小脳細胞がプルキンエ細胞である、請求項15または19に記載のキット。
- 識別の対象となる脊髄細胞がdI4またはdILAである、請求項15または19に記載のキット。
- 下記工程を含んでなる、GABA産生ニューロン前駆細胞分化誘導に有効な物質のスクリーニング方法:
(I)GABA産生ニューロン前駆細胞に分化し得る細胞と、被験化合物とを接触させる工程;および
(II)以下に記載のポリヌクレオチドの発現を検出する工程:
下記(i)、(ii)、(iii)、および(iv)から選択される、ヌクレオチド配列またはその相補配列にハイブリダイズすることができる、GABA産生ニューロン前駆細胞のポリヌクレオチド:
(i)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列を含んでなるポリヌクレオチド;
(ii)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列において、1または複数個のヌクレオチドの挿入、置換、欠失、および/またはその一方または両末端への1または複数個のヌクレオチドの付加がなされた塩基配列によってコードされたアミノ酸配列であって、GABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質をコードするポリヌクレオチド;
(iii)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質をコードするポリヌクレオチド;および
(iv)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列からなるポリヌクレオチドと70%以上の同一性を有し、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質をコードするポリヌクレオチド。 - (III)工程(II)でポリヌクレオチドの発現を検出した化合物を選択する工程、を更に含んでなる請求項22に記載の方法。
- 下記工程を含んでなる、GABA産生ニューロン前駆細胞分化誘導に有効な物質のスクリーニング方法:
(IV)GABA産生ニューロン前駆細胞に分化し得る細胞と、被験化合物とを接触させる工程;および
(V)以下の(v)、(vi)、(vii)、および(viii)から選択されるタンパク質を検出する工程:
(v)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列を含んでなるタンパク質;
(vi)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列において、1または複数個のアミノ酸の挿入、置換、欠失、および/またはその一方または両末端への1または複数個のアミノ酸の付加がなされたアミノ酸配列であって、GABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質;
(vii)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされ、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質;および
(viii)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列と70%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質。 - 下記工程を含んでなる、GABA産生ニューロン前駆細胞分化誘導に有効な物質のスクリーニング方法:
(IV−1)GABA産生ニューロン前駆細胞に分化し得る細胞と、被験化合物とを接触させる工程;および
(V−1)以下の(v)、(vi)、(vii)、および(viii)から選択されるタンパク質に翻訳されるmRNAを発現させるプロモーターの制御下にマーカータンパク質をコードするポリヌクレオチドを連結させることによって該マーカータンパク質の該mRNAを転写させて翻訳される該マーカータンパク質を検出する工程:
(v)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列を含んでなるタンパク質;
(vi)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列において、1または複数個のアミノ酸の挿入、置換、欠失、および/またはその一方または両末端への1または複数個のアミノ酸の付加がなされたアミノ酸配列であって、GABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質;
(vii)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされ、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質;および
(viii)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列と70%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質。 - (VI)工程(V)でタンパク質を検出した化合物を選択する工程、を更に含んでなる請求項24または25に記載の方法。
- GABA産生ニューロン前駆細胞集団の製造方法であって、
(VII)GABA産生ニューロン前駆細胞を含み得る細胞集団を取得する工程;
(VIII)請求項1〜12のいずれか一項に記載の方法を用いて、GABA産生ニューロン前駆細胞を検出する工程;および
(IX)工程(VIII)で検出または選択された細胞を増殖する工程
を含んでなる、方法。 - GABA産生ニューロン前駆細胞が、脊髄損傷治療用または小脳変性症治療用のGABA産生ニューロン前駆細胞である請求項27の製造方法。
- 工程
(VII)GABA産生ニューロン前駆細胞を含み得る細胞集団を取得する工程;
(VIII)請求項1〜12のいずれか一項に記載の方法を用いて、GABA産生ニューロン前駆細胞を検出または選択する工程;および
(IX)工程(VIII)で検出された細胞を増殖する工程
で得られるGABA産生ニューロン前駆細胞集団。 - 以下の(i)、(ii)、(iii)、および(iv)から選択されるポリヌクレオチドまたはその相補配列にハイブリダイズすることができるポリヌクレオチドの発現を検出可能なプローブ、プライマー、プライマーセットを含んでなるGABA産生ニューロン前駆細胞を検出または選択するための試薬:
(i)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列を含んでなるポリヌクレオチド;
(ii)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列において、1または複数個のヌクレオチドの挿入、置換、欠失、および/またはその一方または両末端への1または複数個のヌクレオチドの付加がなされた塩基配列によってコードされたアミノ酸配列であって、GABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質をコードするポリヌクレオチド;
(iii)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質をコードするポリヌクレオチド;および
(iv)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列からなるポリヌクレオチドと70%以上の同一性を有し、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質をコードするポリヌクレオチド。 - さらに、Lbx1、Pax2、Lim1/2、Corl1およびCorl2遺伝子からなる群より選択される1または複数の遺伝子の転写産物にハイブリダイズするポリヌクレオチドとの組合せを含む、小脳細胞または脊髄細胞を検出または選択するための請求項30記載の試薬。
- さらに、小脳細胞または脊髄細胞を含む請求項30または31記載の試薬。
- 以下の(v)、(vi)、(vii)、および(viii)から選択されるタンパク質と結合する抗体を含んでなる、GABA産生ニューロン前駆細胞を検出または選択するための試薬:
(v)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列を含んでなるタンパク質;
(vi)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列において、1または複数個のアミノ酸の挿入、置換、欠失、および/またはその一方または両末端への1または複数個のアミノ酸の付加がなされたアミノ酸配列であって、GABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質;
(vii)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされ、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質;および
(viii)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列と70%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質。 - 以下の(v)、(vi)、(vii)、および(viii)から選択されるタンパク質に翻訳されるmRNAを発現させるプロモーターの制御下にマーカータンパク質をコードするポリヌクレオチドを連結させたポリヌクレオチドを含む、GABA産生ニューロン前駆細胞を検出または選択するための試薬:
(v)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列を含んでなるタンパク質;
(vi)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列において、1または複数個のアミノ酸の挿入、置換、欠失、および/またはその一方または両末端への1または複数個のアミノ酸の付加がなされたアミノ酸配列であって、GABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質;
(vii)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされ、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質;および
(viii)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列と70%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質。 - さらに、Lbx1、Pax2、Lim1/2、Corl1およびCorl2遺伝子からなる群より選択される1または複数の遺伝子でコードされるタンパク質に結合する抗体との組合せを含む、GABA産生ニューロン前駆細胞を検出または選択するための請求項33または34に記載の試薬。
- さらに、小脳細胞または脊髄細胞を含む請求項33〜35のいずれか一項に記載の試薬。
- 識別の対象となる小脳細胞がプルキンエ細胞である、請求項33〜36のいずれか一項に記載の試薬。
- 識別の対象となる脊髄細胞がdI4またはdILAである、請求項33〜36のいずれか一項に記載の試薬。
- 小脳変性症または脊髄損傷の再生医療に使用するためのGABA産生ニューロン前駆細胞を検出または選択するための以下の(i)、(ii)、(iii)、および(iv)から選択されるポリヌクレオチドまたはその相補配列にハイブリダイズすることができるポリヌクレオチド:
(i)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列を含んでなるポリヌクレオチド;
(ii)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列において、1または複数個のヌクレオチドの挿入、置換、欠失、および/またはその一方または両末端への1または複数個のヌクレオチドの付加がなされた塩基配列によってコードされたアミノ酸配列であって、GABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質をコードするポリヌクレオチド;
(iii)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質をコードするポリヌクレオチド;および
(iv)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列からなるポリヌクレオチドと70%以上の同一性を有し、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質をコードするポリヌクレオチド。 - GABA産生ニューロン前駆細胞が、脊髄または小脳のGABA産生ニューロン前駆細胞である請求項39記載のGABA産生ニューロン前駆細胞の検出または選択するためのポリヌクレオチド。
- 請求項39または40記載のヌクレオチド配列またはその相補配列の連続する少なくとも10個のヌクレオチドを含んでなるポリヌクレオチドからなる、請求項39または40に記載の検出または選択するためのポリヌクレオチド。
- 請求項39または40記載のヌクレオチド配列またはその相補配列の連続する少なくとも15個のヌクレオチドを含んでなるポリヌクレオチドからなる、請求項39または40に記載の検出または選択するためのポリヌクレオチド。
- 請求項39〜42のいずれか一項に記載の検出するためのポリヌクレオチドからなる、プローブ。
- 請求項39〜42のいずれか一項に記載の検出用ポリヌクレオチドからなる、プライマー。
- 請求項39〜42のいずれか一項に記載の二種以上の検出用ポリヌクレオチドからなる、プライマーセット。
- 以下の(v)、(vi)、(vii)、および(viii)から選択されるタンパク質と結合する、小脳変性症または脊髄損傷の再生医療に使用するためのGABA産生ニューロン前駆細胞を検出または選択するための抗体。:
(v)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列を含んでなるタンパク質;
(vi)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列において、1または複数個のアミノ酸の挿入、置換、欠失、および/またはその一方または両末端への1または複数個のアミノ酸の付加がなされたアミノ酸配列であって、GABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質;
(vii)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされ、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質;および
(viii)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列と70%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質。 - GABA産生ニューロン前駆細胞が、小脳細胞または脊髄細胞のGABA産生ニューロン前駆細胞である請求項46記載の抗体。
- 配列番号:2、4、38、40、42若しくは44で表されるアミノ酸配列の21番目〜510番目、配列番号:34若しくは36で表されるアミノ酸配列の20番目〜513番目、配列番号:46若しくは48で表されるアミノ酸配列の21番目〜460番目、または配列番号:50で表されるアミノ酸配列の21番目〜490番目のアミノ酸配列の少なくとも連続した6アミノ酸残基または全部からなるポリペプチドと結合する抗体である、請求項46または47に記載の抗体。
- 抗体が、少なくとも6アミノ酸残基からなるポリペプチドと結合する抗体である、請求項46〜48のいずれか一項に記載の抗体。
- 以下の(i)、(ii)、(iii)、および(iv)から選択されるポリヌクレオチドまたはその相補配列にハイブリダイズすることができるポリヌクレオチドによって検出または選択された、小脳変性症または脊髄損傷の再生医療に使用するためのGABA産生ニューロン前駆細胞:
(i)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列を含んでなるポリヌクレオチド;
(ii)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列において、1または複数個のヌクレオチドの挿入、置換、欠失、および/またはその一方または両末端への1または複数個のヌクレオチドの付加がなされた塩基配列によってコードされたアミノ酸配列であって、GABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質をコードするポリヌクレオチド;
(iii)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質をコードするポリヌクレオチド;および
(iv)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列からなるポリヌクレオチドと70%以上の同一性を有し、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質をコードするポリヌクレオチド。 - GABA産生ニューロン前駆細胞が、脊髄または小脳のGABA産生ニューロン前駆細胞である請求項50記載のGABA産生ニューロン前駆細胞。
- ポリヌクレオチドが、前記(i)、(ii)、(iii)、および(iv)から選択されるポリヌクレオチドまたはその相補配列の連続する少なくとも10個のヌクレオチドを含んでなるポリヌクレオチドである、請求項50または51記載のGABA産生ニューロン前駆細胞。
- ポリヌクレオチドが、前記(i)、(ii)、(iii)、および(iv)から選択されるポリヌクレオチドまたはその相補配列の連続する少なくとも15個のヌクレオチドを含んでなるポリヌクレオチドである、請求項50または51記載のGABA産生ニューロン前駆細胞。
- 以下の(v)、(vi)、(vii)、および(viii)から選択されるタンパク質と結合する抗体によって検出または選択された、小脳変性症または脊髄損傷の再生医療に使用するためのGABA産生ニューロン前駆細胞。:
(v)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列を含んでなるタンパク質;
(vi)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列において、1または複数個のアミノ酸の挿入、置換、欠失、および/またはその一方または両末端への1または複数個のアミノ酸の付加がなされたアミノ酸配列であって、GABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質;
(vii)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされ、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質;および
(viii)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列と70%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質。 - GABA産生ニューロン前駆細胞が、小脳細胞または脊髄細胞のGABA産生ニューロン前駆細胞である請求項54記載のGABA産生ニューロン前駆細胞。
- 抗体が、配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列の21番目〜510番目のアミノ酸配列の少なくとも連続した6アミノ酸残基または全部からなるポリペプチドと結合する抗体である、請求項54または55に記載のGABA産生ニューロン前駆細胞。
- 抗体が、少なくとも6アミノ酸残基からなるポリペプチドと結合する抗体である、請求項54〜56のいずれか一項に記載のGABA産生ニューロン前駆細胞。
- 小脳変性症または脊髄損傷を治療する方法であって、以下の(i)、(ii)、(iii)、および(iv)から選択されるポリヌクレオチドまたはその相補配列にハイブリダイズすることができるポリヌクレオチドによって検出または選択されたGABA産生ニューロン前駆細胞を移植する方法:
(i)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列を含んでなるポリヌクレオチド;
(ii)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列において、1または複数個のヌクレオチドの挿入、置換、欠失、および/またはその一方または両末端への1または複数個のヌクレオチドの付加がなされた塩基配列によってコードされたアミノ酸配列からなり、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質をコードするポリヌクレオチド;
(iii)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質をコードするポリヌクレオチド;および
(iv)配列番号:1の178から2280番目の塩基、配列番号:3の127から2079番目で表される塩基配列、配列番号:33の668番目から2770番目で表される塩基配列、配列番号:35の130番目から2232番目で表される塩基配列、配列番号:37の199番目から2100番目で表される塩基配列、配列番号:39の199番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:41の15番目から2325番目で表される塩基配列、配列番号:43の15番目から1916番目で表される塩基配列、配列番号:45の199番目から1950番目で表される塩基配列、配列番号:47の15番目から1766番目で表される塩基配列、若しくは配列番号:49の196番目から2262番目で表される塩基配列からなるポリヌクレオチドと70%以上の同一性を有し、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質をコードするポリヌクレオチド。 - GABA産生ニューロン前駆細胞が、脊髄または小脳のGABA産生ニューロン前駆細胞である請求項58記載のGABA産生ニューロン前駆細胞を移植する方法。
- ポリヌクレオチドが、前記(i)、(ii)、(iii)、および(iv)から選択されるポリヌクレオチドまたはその相補配列の連続する少なくとも10個のヌクレオチドを含んでなるポリヌクレオチドである、請求項58または59に記載のGABA産生ニューロン前駆細胞を移植する方法。
- ポリヌクレオチドが、前記(i)、(ii)、(iii)、および(iv)から選択されるポリヌクレオチドまたはその相補配列の連続する少なくとも15個のヌクレオチドを含んでなるポリヌクレオチドである、請求項58または59に記載のGABA産生ニューロン前駆細胞を移植する方法。
- 小脳変性症または脊髄損傷を治療する方法であって、以下の(v)、(vi)、(vii)、および(viii)から選択されるタンパク質と結合する抗体によって検出または選択されたGABA産生ニューロン前駆細胞を移植する方法。:
(v)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列を含んでなるタンパク質;
(vi)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列において、1または複数個のアミノ酸の挿入、置換、欠失、および/またはその一方または両末端への1または複数個のアミノ酸の付加がなされたアミノ酸配列であって、GABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質;
(vii)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドとストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされ、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質;および
(viii)配列番号:2、4、34、36、38、40、42、44、46、48または50で表されるアミノ酸配列と70%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつGABA産生ニューロン前駆細胞に選択的に発現しているタンパク質。 - GABA産生ニューロン前駆細胞が、小脳細胞または脊髄細胞のGABA産生ニューロン前駆細胞である請求項62記載のGABA産生ニューロン前駆細胞を移植する方法。
- 抗体が、配列番号:2、4、38、40、42若しくは44で表されるアミノ酸配列の21番目〜510番目、配列番号:34若しくは36で表されるアミノ酸配列の20番目〜513番目、配列番号:46若しくは48で表されるアミノ酸配列の21番目〜460番目、または配列番号:50で表されるアミノ酸配列の21番目〜490番目のアミノ酸配列の少なくとも連続した6アミノ酸残基または全部からなるポリペプチドと結合する抗体である、請求項62または63に記載のGABA産生ニューロン前駆細胞を移植する方法。
- 抗体が、少なくとも6アミノ酸残基からなるポリペプチドと結合する抗体である、請求項62〜64のいずれか一項に記載のGABA産生ニューロン前駆細胞を移植する方法。
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