JPWO2007083763A1 - Method for preparing emulsion preparation of bioactive peptide and kit for preparing the preparation - Google Patents
Method for preparing emulsion preparation of bioactive peptide and kit for preparing the preparation Download PDFInfo
- Publication number
- JPWO2007083763A1 JPWO2007083763A1 JP2007554987A JP2007554987A JPWO2007083763A1 JP WO2007083763 A1 JPWO2007083763 A1 JP WO2007083763A1 JP 2007554987 A JP2007554987 A JP 2007554987A JP 2007554987 A JP2007554987 A JP 2007554987A JP WO2007083763 A1 JPWO2007083763 A1 JP WO2007083763A1
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- preparation
- emulsion
- connector
- kit
- preparing
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/44—Oils, fats or waxes according to two or more groups of A61K47/02-A61K47/42; Natural or modified natural oils, fats or waxes, e.g. castor oil, polyethoxylated castor oil, montan wax, lignite, shellac, rosin, beeswax or lanolin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/107—Emulsions ; Emulsion preconcentrates; Micelles
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medical Preparation Storing Or Oral Administration Devices (AREA)
Abstract
本発明は、非常に簡便に実施することができる上に、非常に微細なエマルションを調製することができる方法と、当該方法で利用することができるキットを提供することを課題とする。本発明に係る生理活性ペプチドエマルション製剤の調製方法は、少なくとも生理活性ペプチド水溶液とオイルアジュバントを含み、生理活性ペプチド水溶液に対するオイルアジュバントの含有割合が０．５〜５容量倍である混合液を調製し；当該混合液を、コネクタにより連結された２個のシリンジ間で移動させることを特徴とする。An object of the present invention is to provide a method that can be carried out very simply and that can prepare a very fine emulsion and a kit that can be used in the method. The method for preparing a bioactive peptide emulsion preparation according to the present invention comprises preparing a mixed solution containing at least a bioactive peptide aqueous solution and an oil adjuvant, and the content ratio of the oil adjuvant to the bioactive peptide aqueous solution is 0.5 to 5 times volume. The mixed liquid is moved between two syringes connected by a connector.
Description
本発明は、生理活性ペプチドのエマルション製剤を製造する方法、および当該方法で使用できるエマルション製剤調製用キットに関するものである。 The present invention relates to a method for producing an emulsion preparation of a physiologically active peptide, and an emulsion preparation preparation kit that can be used in the method.
癌などの悪性腫瘍に対する治療においては、ペプチドを抗原として含むワクチンを投与することによって、悪性腫瘍に対する特異的免疫を増強しようとする試みがなされている。さらに、免疫増強作用を一層高めるため、アジュバントという免疫助成剤が投与されることもある。この場合、アジュバントは流動パラフィン等の油性成分であるため、ペプチドとアジュバントを水に混合した上でエマルションとし、これを注射剤として投与する。 In the treatment of malignant tumors such as cancer, attempts have been made to enhance specific immunity against malignant tumors by administering a vaccine containing a peptide as an antigen. In addition, an adjuvant such as an adjuvant may be administered to further enhance the immunity enhancing action. In this case, since the adjuvant is an oily component such as liquid paraffin, the peptide and the adjuvant are mixed with water to form an emulsion, which is administered as an injection.
しかし、製剤中に含まれるエマルションの中に径の大きなものが含まれていると、生体がこれを異物と認識し、肉腫が形成されるなど様々な副反応が生じるおそれがある。よって、エマルション製剤においては、エマルション径を小さくすることが非常に重要になる。 However, if the emulsion contained in the preparation contains a large diameter, the living body may recognize this as a foreign substance, and various side reactions such as formation of sarcoma may occur. Therefore, in the emulsion preparation, it is very important to reduce the emulsion diameter.
微細なエマルションを製造するための技術としては、様々なものが検討されている。例えば特開２００５−１５２７４０には、大豆油等の分散相とドデシル硫酸ナトリウム水溶液等の連続相を合流させた直後に流速を急激に低下せしめることを特徴とするエマルションの製造方法と、その方法を実施するための装置が記載されている。 Various techniques for producing a fine emulsion have been studied. For example, Japanese Patent Application Laid-Open No. 2005-152740 discloses a method for producing an emulsion characterized in that the flow rate is drastically reduced immediately after a dispersed phase such as soybean oil and a continuous phase such as an aqueous sodium dodecyl sulfate solution are combined, and a method thereof. An apparatus for performing is described.
また、特開２００５−１８６０２６には、エマルションを調製するためのデバイスであって、２個のシリンジをコネクタにより連結し、その間にシラス多孔質ガラス膜製多孔体を挟んだものが開示されている。 Japanese Patent Application Laid-Open No. 2005-186026 discloses a device for preparing an emulsion, in which two syringes are connected by a connector, and a porous body made of shirasu porous glass film is sandwiched between them. .
上述した様に、微細なエマルションを調製するための技術として、従来、様々なものが知られている。しかし、エマルションを製剤として用いる場合には、従来技術で得られるエマルションの径は必ずしも満足できるものでない場合があった。例えば、エマルション製剤におけるエマルション径としては１μｍ前後が好ましいとされているが、特開２００５−１５２７４０の技術で調製されるエマルションの径は、１６、１２および８．９μｍである。 As described above, various techniques have been conventionally known for preparing a fine emulsion. However, when an emulsion is used as a preparation, the diameter of the emulsion obtained by the prior art may not always be satisfactory. For example, the emulsion diameter in the emulsion preparation is preferably about 1 μm, but the diameter of the emulsion prepared by the technique of JP-A-2005-152740 is 16, 12 and 8.9 μm.
その一方で、特開２００５−１８６０２６の技術によれば、約２μｍのエマルションも得られている。しかし特許文献２には、エマルションに関して単にＷ／Ｏ型エマルションとのみ記載されており、特殊な医薬用のペプチドエマルション製剤を調製するために如何なる原料を用いればよいか一切記載されていない。 On the other hand, according to the technique of JP-A-2005-186026, an emulsion of about 2 μm is also obtained. However, Patent Document 2 describes only an emulsion as a W / O type emulsion, and does not describe at all what raw materials should be used for preparing a special pharmaceutical peptide emulsion formulation.
また、エマルション製剤は安定性に乏しく、製造した後に出荷した場合、エマルション同士が融合して径が大きくなって危険性が増すという問題がある。よって、エマルション製剤の場合には使用直前に調製することが好ましいため、エマルション製剤をできる限り簡便に用時調製するための技術が求められていた。 In addition, emulsion formulations are poor in stability, and when shipped after production, there is a problem that the emulsions are fused to increase the diameter and increase the risk. Therefore, since it is preferable to prepare an emulsion preparation immediately before use, a technique for preparing an emulsion preparation as easily as possible is required.
そこで本発明が解決すべき課題は、非常に簡便に実施することができる上に、非常に微細なエマルションを調製することができる方法と、当該方法で利用することができるキットを提供することにある。 Thus, the problem to be solved by the present invention is to provide a method that can be carried out very simply and that can prepare a very fine emulsion, and a kit that can be used in the method. is there.
本発明者は、上記課題を解決すべく、微細なエマルションを容易に得られる条件につき鋭意研究を重ねた。その結果、オイルと水との混合液を、コネクタを介したシリンジ間で繰り返し移動させることによって、上記目的が達成できることを見出して本発明を完成した。 In order to solve the above-mentioned problems, the present inventor has conducted intensive research on conditions under which a fine emulsion can be easily obtained. As a result, the inventors have found that the above object can be achieved by repeatedly moving a mixed liquid of oil and water between syringes via a connector, and completed the present invention.
本発明に係る生理活性ペプチドのエマルション製剤の調製方法は、
少なくとも生理活性ペプチド水溶液とオイルアジュバントを含み、生理活性ペプチド水溶液に対するオイルアジュバントの含有割合が０．５〜５容量倍である混合液を調製し；
当該混合液を、コネクタにより連結された２個のシリンジ間で移動させることを特徴とする。A method for preparing an emulsion preparation of a physiologically active peptide according to the present invention includes:
Preparing a liquid mixture containing at least a physiologically active peptide aqueous solution and an oil adjuvant, wherein the content ratio of the oil adjuvant to the physiologically active peptide aqueous solution is 0.5 to 5 times volume;
The mixed liquid is moved between two syringes connected by a connector.
また、本発明に係るエマルション製剤調製用キットは、
生理活性ペプチドを生理食塩水または１〜６ｗ／ｖ％のアルカリ金属炭酸水素塩水溶液に溶解した溶液を凍結乾燥することにより得た生理活性ペプチド組成物を１種以上；
生理活性ペプチド組成物を溶解することによって、血漿と等張または略等張の生理活性ペプチド溶液を得られる量の水を生理活性ペプチド組成物と同数；および
オイルアジュバントを生理活性ペプチド組成物と同数；
含有することを特徴とする。The emulsion preparation preparation kit according to the present invention comprises:
One or more physiologically active peptide compositions obtained by lyophilizing a solution in which the physiologically active peptide is dissolved in physiological saline or an aqueous 1-6 w / v% alkali metal bicarbonate solution;
By dissolving the physiologically active peptide composition, an amount of water that is isotonic or nearly isotonic with plasma can be obtained in the same amount of water as that of the physiologically active peptide composition; and the same amount of oil adjuvant as that of the physiologically active peptide composition. ;
It is characterized by containing.
本発明に係る生理活性ペプチドエマルション製剤の調製方法は、
少なくとも生理活性ペプチド水溶液とオイルアジュバントを含み、生理活性ペプチド水溶液に対するオイルアジュバントの含有割合が０．５〜５容量倍である混合液を調製し；
当該混合液を、コネクタにより連結された２個のシリンジ間で移動させることを特徴とする。The method for preparing a physiologically active peptide emulsion preparation according to the present invention comprises:
Preparing a liquid mixture containing at least a physiologically active peptide aqueous solution and an oil adjuvant, wherein the content ratio of the oil adjuvant to the physiologically active peptide aqueous solution is 0.5 to 5 times volume;
The mixed liquid is moved between two syringes connected by a connector.
本発明で用いる生理活性ペプチドの種類は、特に制限されないが、例えば、ヒトや動物の疾患予防や治療などに用いる抗原として利用し得るものを挙げることができる。例えば、癌などの悪性腫瘍に対する患者の特異的免疫を高めるワクチン、ウイルスや細菌による感染症の予防や持続感染患者においてウイルスや細菌等に対する特異的免疫を高めるワクチン、またはアレルギー反応を抑制する減感作療法のための抗原等が挙げられる。 The type of the physiologically active peptide used in the present invention is not particularly limited, and examples thereof include those that can be used as antigens used for preventing or treating diseases of humans and animals. For example, vaccines that increase specific immunity of patients against malignant tumors such as cancer, vaccines that prevent specific infections caused by viruses and bacteria, and vaccines that increase specific immunity to viruses and bacteria in patients with persistent infection, or desensitization that suppresses allergic reactions. Examples include antigens for therapeutic therapy.
さらに、本発明に用いるペプチドの大きさには特に制限はないが、ペプチドを構成するアミノ酸数において好ましくは２０以下、より好ましくは４〜２０、さらに好ましくは８〜２０、さらに好ましくは８〜１５、最も好ましくは９または１０である。ペプチドを構成するアミノ酸数が多過ぎると、溶解性が悪くなり易くなることがあるためである。 Furthermore, although there is no restriction | limiting in particular in the magnitude | size of the peptide used for this invention, Preferably it is 20 or less in the number of amino acids which comprise a peptide, More preferably, it is 4-20, More preferably, it is 8-20, More preferably, it is 8-15. , Most preferably 9 or 10. This is because if the number of amino acids constituting the peptide is too large, the solubility may be easily deteriorated.
本発明で用いるオイルアジュバントは、医薬製剤の構成成分として許容されている油性の免疫助成剤であれば特にその種類は問わない。例えば、流動パラフィン、ラノリン、フロイント等を挙げることができる。 The oil adjuvant used in the present invention is not particularly limited as long as it is an oil-based immune adjuvant that is acceptable as a component of a pharmaceutical preparation. Examples thereof include liquid paraffin, lanolin, and Freund.
本発明で用いる水としては、純水、精製水、蒸留水、滅菌水など医薬製剤の構成成分として許容されているものを使用できる。但し、生理活性ペプチドを溶解した場合、その浸透圧が血漿と同等である必要がある。よって、ペプチドが塩類等と共に凍結乾燥されたものである場合には、溶液が血漿と等張または略等張となる様に滅菌水等の量を調整するか、必要に応じて塩化ナトリウム等の塩類を添加する。なお、略等張は、水溶液中の塩濃度がヒトへの投与に許容される濃度であればよいが、水溶液中の塩濃度が０．５〜６ｗ／ｖ％となることが好ましい。ペプチドが塩類等を含まない場合には、生理食塩水やグルコース水溶液などを用いてもよい。また、最終的に、薬理上許容されている酸や塩基によりｐＨを調整してもよい。 As the water used in the present invention, those permitted as constituents of pharmaceutical preparations such as pure water, purified water, distilled water and sterilized water can be used. However, when a physiologically active peptide is dissolved, its osmotic pressure needs to be equivalent to that of plasma. Therefore, if the peptide is lyophilized with salts, etc., adjust the amount of sterilized water or the like so that the solution is isotonic or substantially isotonic with plasma, Add salt. The isotonicity may be any concentration as long as the salt concentration in the aqueous solution is acceptable for administration to humans, but the salt concentration in the aqueous solution is preferably 0.5 to 6 w / v%. When the peptide does not contain salts or the like, physiological saline or aqueous glucose solution may be used. Finally, the pH may be adjusted with a pharmacologically acceptable acid or base.
本発明では、生理活性ペプチド、オイルアジュバントおよび水を混合して混合液とする。好適には、先ず生理活性ペプチドを水に溶解した上でオイルアジュバントを加える。この際の混合割合は、エマルションの形成を容易にするために、生理活性ペプチド水溶液に対するオイルアジュバントの含有割合で０．５〜５容量倍とする。 In the present invention, a bioactive peptide, an oil adjuvant and water are mixed to form a mixed solution. Preferably, the bioactive peptide is first dissolved in water and then an oil adjuvant is added. The mixing ratio at this time is 0.5 to 5 times the content ratio of the oil adjuvant to the physiologically active peptide aqueous solution in order to facilitate the formation of the emulsion.
本発明では、上記混合液を調製するに当たり、生理活性ペプチド水溶液とオイルアジュバントの混合物を攪拌し、水相と油相からなる分離した層を解消することが好ましい。通常、水相である生理活性ペプチド水溶液と油相であるオイルアジュバントを単に混合すると、水相と油相が二層に分離する。しかし、混合液における二層分離を解消しておけば、続くエマルションの調製工程の効率をよりいっそう高めることができる。ここで、水相と油相からなる分離した層を解消するとは、かかる二層に分離した液を攪拌することによって、少なくとも水相と油相による二層の形成が肉眼で観察できなくなることをいうものとする。なお、当該二層間の界面が解消されると、比較的径の大きなエマルションが形成され、混合液は白濁する。 In the present invention, in preparing the above mixed solution, it is preferable to stir the mixture of the physiologically active peptide aqueous solution and the oil adjuvant to eliminate the separated layer composed of the aqueous phase and the oil phase. Usually, when a physiologically active peptide aqueous solution that is an aqueous phase and an oil adjuvant that is an oil phase are simply mixed, the aqueous phase and the oil phase are separated into two layers. However, if the two-layer separation in the mixed solution is eliminated, the efficiency of the subsequent emulsion preparation process can be further increased. Here, eliminating a separated layer composed of an aqueous phase and an oil phase means that the formation of at least two layers by the aqueous phase and the oil phase cannot be observed with the naked eye by stirring the liquid separated into the two layers. It shall be said. When the interface between the two layers is eliminated, an emulsion having a relatively large diameter is formed, and the mixed solution becomes cloudy.
例えば、オイルアジュバントを攪拌しつつ生理活性ペプチド水溶液を少量ずつ加えたり、或いは生理活性ペプチド水溶液の一部をオイルアジュバントへ加えては攪拌するという操作を繰り返し行う。また、生理活性ペプチド水溶液の全量とオイルアジュバントを一方のシリンジへ挿入して振とう攪拌するか、或いは、生理活性ペプチド水溶液の一部とオイルアジュバントを一方のシリンジへ挿入しては振とう攪拌するという操作を繰り返し、シリンジ内で水相と油相からなる分離した層を解消してもよい。より好ましくは、オイルアジュバントへ生理活性ペプチドを半量加えて５秒〜１分間程度攪拌する操作を２回行う。 For example, the bioactive peptide aqueous solution is added little by little while stirring the oil adjuvant, or a part of the bioactive peptide aqueous solution is added to the oil adjuvant and stirred. Also, insert the whole amount of the bioactive peptide aqueous solution and the oil adjuvant into one syringe and shake, or insert a part of the bioactive peptide aqueous solution and the oil adjuvant into one syringe and shake and shake. By repeating this operation, the separated layer composed of the aqueous phase and the oil phase may be eliminated in the syringe. More preferably, an operation of adding half the amount of the physiologically active peptide to the oil adjuvant and stirring for about 5 seconds to 1 minute is performed twice.
なお、水相と油相からなる分離した層が解消された混合液を静置しておくと、再び相分離が起こる場合があるので、かかる二層を解消した後はできるだけ速やかに次工程へ移行することが好ましい。 In addition, if the liquid mixture from which the separated layer consisting of the aqueous phase and the oil phase has been dissolved is allowed to stand, phase separation may occur again. After eliminating these two layers, proceed to the next step as soon as possible. It is preferable to migrate.
本発明方法では、次に、コネクタにより連結された２個のシリンジ間で、上記混合液を繰り返し移動させる。即ち、断面積が大きなシリンジ筒から断面積の小さなコネクタへ、また、コネクタからシリンジへの移動を繰り返して混合液を激しく攪拌することによって、径が１μｍ前後という微細なエマルションを簡便に調製することができる。 Next, in the method of the present invention, the mixed liquid is repeatedly moved between two syringes connected by a connector. That is, a fine emulsion having a diameter of about 1 μm can be easily prepared by vigorously stirring the mixed solution by repeatedly moving from a syringe cylinder having a large cross-sectional area to a connector having a small cross-sectional area and from the connector to the syringe. Can do.
当該工程で用いるシリンジ筒部の断面積は、コネクタの断面積の２〜１５０倍、好ましくは２〜５０倍とする。シリンジ筒部の断面積がコネクタ断面積の２倍未満であると、上述した効果が十分に発揮されない場合があり、一方、１５０倍を超えるとシリンジや装置等にかかる負担が大きくなり過ぎるおそれがある。 The cross-sectional area of the syringe barrel used in this step is 2 to 150 times, preferably 2 to 50 times the cross-sectional area of the connector. If the cross-sectional area of the syringe cylinder is less than twice the cross-sectional area of the connector, the above-described effects may not be sufficiently exhibited. On the other hand, if the cross-sectional area exceeds 150 times, the burden on the syringe or the device may become too large. is there.
より具体的には、シリンジの筒部の断面積は５０〜５００ｍｍ2程度とすればよく、コネクタの断面積は０．５〜３０ｍｍ2程度とすればよい。なお、シリンジ筒部やコネクタの断面の形状は特に制限されないが、負担が局所的にかかることを防ぐために円形や楕円形、或いは多角形である略円形が好適であり、円形が特に好ましい。また、当該規定における断面積は、シリンジの筒部の空洞部分における断面積と、コネクタ内に形成されている通路のうち最も細い部分における空洞部分の断面積とする。つまり、本発明で用いるコネクタは、端部においてシリンジと密着させる必要があるため、端部は円錐状に広げる場合がある。この場合においては、中央の通路部の空洞部分の断面積を基準にする。More specifically, the cross-sectional area of the cylindrical portion of the syringe may be a 2 order of 50 to 500 mm, the cross-sectional area of the connectors may be set to 2 about 0.5 to 30 mm. In addition, although the shape of the cross section of the syringe barrel or the connector is not particularly limited, a circular shape, an elliptical shape, or a substantially circular shape that is a polygonal shape is preferable to prevent a burden from being locally applied, and a circular shape is particularly preferable. Moreover, the cross-sectional area in the said prescription | regulation shall be the cross-sectional area in the hollow part of the cylinder part of a syringe, and the cross-sectional area of the hollow part in the narrowest part among the paths currently formed in the connector. In other words, since the connector used in the present invention needs to be in close contact with the syringe at the end, the end may be expanded conically. In this case, the sectional area of the hollow portion of the central passage portion is used as a reference.
コネクタの流路の断面形状を円形にする場合には、当該流路の内径を０．８〜１．７ｍｍとすることが好ましく、さらに、０．９ｍｍ以上、１．５ｍｍ以下とすることが好ましい。微細なエマルションを安定して調製できるからである。なお、流路の太さが均一でない場合は、流路の内径とは、最も細い部分における内径をいうものとする。 When the cross-sectional shape of the flow path of the connector is circular, the internal diameter of the flow path is preferably 0.8 to 1.7 mm, and more preferably 0.9 mm or more and 1.5 mm or less. . This is because a fine emulsion can be stably prepared. In addition, when the thickness of a flow path is not uniform, the internal diameter of a flow path shall mean the internal diameter in the narrowest part.
コネクタの流路の長さは１０〜１５ｍｍとすることが好ましい。流路の長さが１０ｍｍ未満となると、抵抗が少なくなるため、エマルションの調製の効率が悪くなることがある。一方、１５ｍｍより長くなるとコネクタの強度が十分確保できなくなる場合がある。 The length of the connector channel is preferably 10 to 15 mm. When the length of the flow path is less than 10 mm, the resistance decreases, and thus the efficiency of emulsion preparation may be deteriorated. On the other hand, if it is longer than 15 mm, the connector strength may not be sufficiently secured.
なお、本発明のコネクタは、中央部に気泡を抜くための排出口を有する三方活栓としてもよく、排出口を有さない直管状のコネクタのいずれでもよい。但し、液漏れなどを防止する観点からは、直管状のコネクタを用いることが好ましい。 The connector of the present invention may be a three-way cock having a discharge port for extracting bubbles at the center, or any of a straight tubular connector having no discharge port. However, from the viewpoint of preventing liquid leakage and the like, it is preferable to use a straight tubular connector.
混合液のシリンジ間の移動は、３０回以上繰り返すことが好ましい。回数が多いほど微細なエマルションが形成し易くなり、３０回以上であれば製剤として適するエマルションが形成されると考えられるからである。一方、上限は特に制限されないが、過剰に移動を繰り返してもエマルションが無制限に微細となる訳ではないので、例えば目視などで確認しつつ適宜移動を停止すればよい。通常、１５０回程度行えば十分である。 The movement of the mixed liquid between the syringes is preferably repeated 30 times or more. This is because as the number of times increases, it becomes easier to form a fine emulsion, and when it is 30 times or more, an emulsion suitable as a preparation is considered to be formed. On the other hand, the upper limit is not particularly limited, but even if the movement is repeated excessively, the emulsion does not become infinitely fine. Therefore, the movement may be appropriately stopped while visually confirming, for example. Usually, about 150 times is sufficient.
また、混合液のシリンジ間の移動を２０回以上繰り返した後に０．５〜１０分間静置し、再度１回以上、より好ましくは１０回以上移動を繰り返すのも好適な態様である。この態様は、特にエマルションが形成され難い場合に効果を発揮でき、エマルションの形成がより一層容易になる。 Moreover, it is also a suitable aspect to repeat the movement of the mixed liquid between the syringes 20 times or more, and then leave it for 0.5 to 10 minutes, and repeat the movement once more or more, more preferably 10 times or more. This aspect can exert an effect particularly when an emulsion is difficult to be formed, and the formation of the emulsion is further facilitated.
なお、以下では、混合液が一方のシリンジからコネクタを通過して他方のシリンジへ移動するまでを、ポンピング１回という。即ち、混合液のシリンジ間の移動１回を、ポンピング１回とする。 In the following description, the period from when one of the syringes passes through the connector to the other syringe is referred to as one pumping. That is, one movement of the mixed solution between the syringes is one pumping.
さらに本発明においては、事前に混合液を攪拌し、水相と油相からなる分離した層を解消しておいた場合には、より少ないポンピングの回数でエマルションが調製できる。この場合には、ポンピングを少なくとも３回以上で５０回以下、より好ましくは１０〜５０回ポンピングを行う。 Furthermore, in the present invention, when the mixed solution is stirred in advance and the separated layer composed of the aqueous phase and the oil phase is eliminated, an emulsion can be prepared with a smaller number of pumping operations. In this case, the pumping is performed at least 3 times and 50 times or less, more preferably 10 to 50 times.
また、ポンピングの速度は特に制限されないが、ポンピングの速度が遅過ぎたりまたは早過ぎる場合にはエマルションが形成され難くなる場合がある。よって、ポンピングの速度は、好ましくは１分間当たり３０〜９０回、より好ましくは６０〜９０回の速度で行うことが好ましい。 In addition, the pumping speed is not particularly limited, but if the pumping speed is too slow or too fast, it may be difficult to form an emulsion. Therefore, the pumping speed is preferably 30 to 90 times per minute, more preferably 60 to 90 times.
本発明に係るエマルション製剤調製用キットは、１種以上の生理活性ペプチド組成物と、これと同数の水およびオイルアジュバントを含有する。 The kit for preparing an emulsion preparation according to the present invention contains one or more physiologically active peptide compositions and the same number of water and oil adjuvants.
本発明キットにおける１種以上の生理活性ペプチド組成物は、それぞれ生理食塩水または１〜６ｗ／ｖ％のアルカリ金属炭酸水素塩水溶液に溶解した溶液を、凍結乾燥することにより得たものである。ここで「１種以上」としたのは、特に患者の免疫活性を増強するためのペプチドエマルション製剤においては、患者に応じた生理活性ペプチドを複数投与する場合があることを考慮したものであり、好ましくは２種以上、さらに好ましくは２種を用いる。また、ここでの生理活性ペプチドは、本発明方法に関して説明したものと同様のものを用いることができる。 The one or more physiologically active peptide compositions in the kit of the present invention are obtained by lyophilizing a solution dissolved in physiological saline or 1 to 6 w / v% aqueous solution of alkali metal hydrogencarbonate. Here, the term “one or more” is used in consideration of the fact that a plurality of physiologically active peptides may be administered depending on the patient, particularly in the peptide emulsion preparation for enhancing the immune activity of the patient. Preferably two or more, more preferably two are used. In addition, as the physiologically active peptide here, the same peptide as described for the method of the present invention can be used.
生理活性ペプチドを溶解するための溶媒としては、生理食塩水または１〜６ｗ／ｖ％のアルカリ金属炭酸水素塩水溶液を用いる。ここでは、生理食塩水と当該アルカリ金属炭酸水素塩水溶液を混合して用いてもよい。 As a solvent for dissolving the physiologically active peptide, physiological saline or a 1 to 6 w / v% aqueous solution of alkali metal bicarbonate is used. Here, you may mix and use the physiological saline and the said alkali metal hydrogencarbonate aqueous solution.
本発明のエマルション製剤調製用キットに含まれるペプチド組成物は、生理活性ペプチドをいったん溶媒に溶解したものをバイアルに分注した後に凍結乾燥することにより製造する。これは、利便性の観点からは溶液の状態のほうがよいが、安定性が悪くなるという問題点があり、凍結乾燥粉末とすることで、安定性が向上するためである。溶媒としては生理食塩水が好適であるが、生理活性ペプチドの中には生理食塩水に溶解し難いものがある。また、使用される生理活性ペプチドの種類は患者により異なる場合が多いので、逐一溶媒を検討していたのではキットの生産性が低下してしまう。そこで本発明では、生理活性ペプチドを溶解するための溶媒として、より好適には１〜６ｗ／ｖ％のアルカリ金属炭酸水素塩水溶液を用いる。当該溶媒は、生理食塩水に対する溶解性が低いペプチドにも溶解性を示すため、キットの生産性を向上することができる。 The peptide composition contained in the kit for preparing an emulsion preparation of the present invention is produced by dispensing a bioactive peptide once dissolved in a solvent into a vial and then lyophilizing it. This is because the solution state is better from the viewpoint of convenience, but there is a problem that the stability is deteriorated, and the lyophilized powder improves the stability. Although physiological saline is suitable as a solvent, some physiologically active peptides are difficult to dissolve in physiological saline. In addition, since the type of physiologically active peptide to be used is often different depending on the patient, if the solvent is examined one by one, the productivity of the kit is lowered. Therefore, in the present invention, a 1 to 6 w / v% aqueous alkali metal bicarbonate solution is more preferably used as a solvent for dissolving the physiologically active peptide. Since the solvent exhibits solubility in a peptide having low solubility in physiological saline, the productivity of the kit can be improved.
本発明のペプチド組成物としては、２種以上のペプチドを溶媒に溶解し凍結乾燥したものや、１種類ずつのペプチドを溶解し凍結乾燥した後に混合したものであってもよいが、好ましくはペプチド１種類ずつを個別に溶解および凍結乾燥し、複数のペプチドを混合しないものであることが好ましい。２種類以上のペプチドを混合した凍結乾燥粉末の状態で保管すると、使用する場合に問題を生ずる可能性があるためである。 The peptide composition of the present invention may be one obtained by dissolving two or more types of peptides in a solvent and lyophilized, or one obtained by dissolving one type of peptide and lyophilizing it. It is preferable that each type is individually dissolved and freeze-dried and a plurality of peptides are not mixed. This is because if the lyophilized powder in which two or more kinds of peptides are mixed is stored in a lyophilized powder, a problem may occur when used.
上記アルカリ金属の炭酸水素塩としては、炭酸水素リチウム、炭酸水素ナトリウムおよび炭酸水素カリウムを挙げることができるが、炭酸水素ナトリウムが好適である。また、アルカリ金属の炭酸水素塩水溶液濃度を１〜６ｗ／ｖ％としたのは、１ｗ／ｖ％未満であるとペプチドの溶解効果が十分に発揮されない場合があり、６ｗ／ｖ％を超えると、投与するに当たり適切な塩濃度に調整するために水の容量が多くなってしまい、投与に不適切な状態となってしまうおそれがあるからである。 Examples of the alkali metal hydrogen carbonate include lithium hydrogen carbonate, sodium hydrogen carbonate, and potassium hydrogen carbonate. Sodium hydrogen carbonate is preferable. Moreover, the alkali metal hydrogen carbonate aqueous solution concentration is set to 1 to 6 w / v%. If the concentration is less than 1 w / v%, the peptide dissolution effect may not be sufficiently exerted, and if it exceeds 6 w / v%. This is because the volume of water increases in order to adjust the salt concentration to an appropriate level for administration, which may result in an inappropriate state for administration.
本発明キットにおける水の量は、生理活性ペプチド組成物を溶解することによって、血漿と等張または略等張の生理活性ペプチド溶液を得られる量とする。ここで「略等張」は、前述したものと同義である。 The amount of water in the kit of the present invention is such that a physiologically active peptide solution that is isotonic or substantially isotonic with plasma can be obtained by dissolving the physiologically active peptide composition. Here, “substantially isotonic” has the same meaning as described above.
本発明キットに含まれる生理活性ペプチド組成物を製造する際において、生理食塩水または炭酸水素塩水溶液の量は、ペプチドを均一溶解できるものであれば特に制限はない。但し、ペプチドと生理食塩水またはアルカリ金属の炭酸水素塩水溶液との比率は、得られるペプチド溶液のペプチド濃度が０．４質量％以下、好ましくは０．１〜０．４質量％、より好ましくは０．３〜０．４質量％となる様にすることが好ましい。 In producing the physiologically active peptide composition contained in the kit of the present invention, the amount of physiological saline or aqueous bicarbonate solution is not particularly limited as long as the peptide can be uniformly dissolved. However, the ratio of the peptide to physiological saline or alkali metal bicarbonate aqueous solution is such that the peptide concentration of the obtained peptide solution is 0.4% by mass or less, preferably 0.1 to 0.4% by mass, more preferably It is preferable to be 0.3 to 0.4% by mass.
本発明キットとしては、さらに筒部の断面積が５０〜５００ｍｍ2である２個のシリンジを含有するものや、当該シリンジ用のコネクタを含むものが好適である。コネクタとしては、その断面積が上記シリンジの筒部断面積の０．０２〜０．５倍であるもの、流路の断面形状が内径０．８〜１．７ｍｍの円形であるもの、また、流路の長さが１０〜１５ｍｍであるものが好適である。エマルション製剤においては患者により使用するペプチドが異なる場合が多いため、エマルション製造用のシリンジやコネクタは逐一交換する必要がある。よって、これらシリンジやコネクタを備えたキットは利便性が高い。As the kit of the present invention, one containing two syringes having a cross-sectional area of the cylinder part of 50 to 500 mm 2 and one containing the syringe connector are suitable. As the connector, the cross-sectional area is 0.02 to 0.5 times the cylindrical cross-sectional area of the syringe, the cross-sectional shape of the flow path is a circle having an inner diameter of 0.8 to 1.7 mm, The thing whose length of a flow path is 10-15 mm is suitable. In the emulsion preparation, the peptide to be used is often different depending on the patient. Therefore, it is necessary to replace the syringe and the connector for producing the emulsion one by one. Therefore, the kit provided with these syringes and connectors is highly convenient.
本発明のキットに含まれるシリンジは、図１に示すような一般的なものでよい。但し、本発明では油性であるアジュバントを含む混合液を挿入してポンピングを繰り返すため、シリンジ筒部やガスケットの材質は、表面コートされたものなど耐久性の高いものが好適である。 The syringe included in the kit of the present invention may be a general one as shown in FIG. However, in the present invention, since a mixture liquid containing an oily adjuvant is inserted and pumping is repeated, the syringe barrel and gasket material is preferably highly durable such as a surface-coated one.
本発明のキットに含まれるシリンジ用のコネクタは、２つのシリンジを連結するためのものであり、例えば、図２と４に示すようなものを用いることができる。図２に示すコネクタは、気泡を抜くための排出口を有する三方活栓を有する。また、図４は直管状のコネクタであり、管の左右にシリンジとの結合部を有する。 The connector for a syringe included in the kit of the present invention is for connecting two syringes. For example, the connector shown in FIGS. 2 and 4 can be used. The connector shown in FIG. 2 has a three-way cock having a discharge port for removing air bubbles. Moreover, FIG. 4 is a straight tubular connector and has a connection part with a syringe on the right and left of a pipe | tube.
本発明に係るエマルション製剤を調製するには、本発明キットの生理活性ペプチド組成物を水に溶解したものをコネクタにより連結されたシリンジの一方に挿入し、ポンピングする。このポンピングは、図３に示すように、少なくとも、コネクタにより連結されたシリンジを着脱自在に固定する固定台１１と、当該シリンジの各プランジャを同方向に往復動させる連動機構を有するポンピング装置により行なうことができる。
In order to prepare the emulsion preparation according to the present invention, the bioactive peptide composition of the kit of the present invention dissolved in water is inserted into one of syringes connected by a connector and pumped. As shown in FIG. 3, this pumping is performed by at least a pumping device having a fixing
上記固定台は、上記方法やキットにおいて説明したシリンジを着脱自在に固定するものである。この固定台は、シリンジのプランジャが押引されるに連れて筒部が移動しない様に固定するものである必要がある。例えば、図３において固定台１１にシリンジ筒部のツバを引っ掛け、上からカバーをして固定する。また、個々の患者に投与すべき製剤を調製するごとに、或いは異なる生理活性ペプチドを用いるごとにシリンジやコネクタを交換する必要が生じる場合があるので、当該固定台は、シリンジが着脱自在なものである必要がある。
The said fixing stand fixes the syringe demonstrated in the said method or kit so that attachment or detachment is possible. The fixing base needs to be fixed so that the cylindrical portion does not move as the plunger of the syringe is pushed and pulled. For example, in FIG. 3, the flange of the syringe cylinder is hooked on the fixing
ポンピング装置は、上記固定台に固定したシリンジの各プランジャを同方向に往復動させるための連動機構を有する。この連動機構としては、例えばモーターの回転運動を水平運動に変えるカムによりポンピング部１０を動かし、各プランジャを同方向に往復動させるものが考えられる。また、当該連動機構は、上記固定台自体が動かない様に固定されている場合には、各プランジャを押引するものであればよく、各プランジャが動かない様に固定されている場合には、上記固定台を往復運動させるものであればよい。
The pumping device has an interlocking mechanism for reciprocating the plungers of the syringe fixed on the fixed base in the same direction. As this interlocking mechanism, for example, a mechanism that moves the
ポンピング装置は、好適にはプランジャの往復動速度を調整する手段を有する。当該手段としては、例えばモーターの回転数を変える変速機や、モーターの回転自体を制御する装置などを挙げることができる。 The pumping device preferably has means for adjusting the reciprocating speed of the plunger. Examples of the means include a transmission that changes the rotation speed of the motor, and a device that controls the rotation of the motor itself.
本発明に係る生理活性ペプチドエマルション製剤の調製方法によれば、エマルション径が極めて微細なペプチドエマルション製剤を簡便に調製することができる。よって、エマルション製剤を調製してから使用するまでに時間がかかるとエマルション同士が融合して径が大きくなり思わぬ副作用を生じることがあるが、本発明方法によれば、例えば病院等で製剤を調製した後直ぐに投与することが可能になる。 According to the method for preparing a physiologically active peptide emulsion preparation according to the present invention, a peptide emulsion preparation having an extremely fine emulsion diameter can be easily prepared. Therefore, if it takes a long time to prepare the emulsion preparation and use it, the emulsions may be fused and the diameter may increase, causing unexpected side effects. It can be administered immediately after preparation.
また、本発明エマルション製剤調製用キットは、本発明方法で使用できるものであり、且つ特定の溶媒を用いることによりペプチドの分注を効率良く行なうことができ、製造が容易である。 In addition, the kit for preparing an emulsion preparation of the present invention can be used in the method of the present invention, and by using a specific solvent, the peptide can be efficiently dispensed and is easy to manufacture.
以下、実施例を挙げて本発明をより具体的に説明するが、本発明はもとより下記実施例により制限を受けるものではなく、前・後記の趣旨に適合し得る範囲で適当に変更を加えて実施することも可能であり、それらはいずれも本発明の技術的範囲に含まれる。 EXAMPLES Hereinafter, the present invention will be described more specifically with reference to examples. However, the present invention is not limited by the following examples, but may be appropriately modified within a range that can meet the purpose described above and below. It is also possible to implement, and they are all included in the technical scope of the present invention.
実施例１
表１に示す前立腺癌治療用または脳腫瘍治療用の生理活性ペプチド（４ｍｇ）を４ｗ／ｖ％炭酸水素ナトリウム水溶液（１ｍＬ）に溶解し、さらにオイルアジュバントとしてＳＥＰＰＩＣ社製のＩＳＡ５１ＶＧ（１ｍＬ）を加え、混合液とした。２個のシリンジ（ビーブラウン社製、２ｍＬシリンジ、断面積：６６．３ｍｍ2）を断面積：２．４３ｍｍ2のコネクタで連結し、得られた混合液を一方のシリンジへ挿入した。ここで、シリンジの筒部断面積は、コネクタ断面積の約２７倍である。このシリンジをポンピング装置に設置し、１００回／分の速度でポンピングを１００回繰り返した。その結果、表１に示す通り、Ｎｏ．１、５および１４以外はエマルションを形成することができた。次にＮｏ．１、５および１４において、シリンジを５ｍＬ容のもの（断面積：１１１．６３ｍｍ2、シリンジの筒部断面積／コネクタ断面積＝約４６）に変更した以外は同様の処理を行なったが、Ｎｏ．１ではエマルションを形成することができたものの、Ｎｏ．５と１４では形成できなかった。次いで、実施例１〜１６において５ｍＬシリンジを使用し、ポンピングを１００回／分の速度で５０回繰り返した後に５分間静置し、さらに同様の速度でポンピングを５０回繰り返したところ、全ての実施例でエマルションを形成することができた。Example 1
A physiologically active peptide (4 mg) for treating prostate cancer or brain tumor shown in Table 1 was dissolved in a 4 w / v% aqueous sodium hydrogen carbonate solution (1 mL), and further ISA51VG (1 mL) manufactured by SEPPIC was added as an oil adjuvant. A mixed solution was obtained. Two syringes (manufactured by Bee Brown, 2 mL syringe, cross-sectional area: 66.3 mm 2 ) were connected with a connector having a cross-sectional area: 2.43 mm 2 , and the obtained mixed solution was inserted into one syringe. Here, the cylinder cross-sectional area of the syringe is approximately 27 times the connector cross-sectional area. This syringe was installed in a pumping apparatus, and pumping was repeated 100 times at a rate of 100 times / minute. As a result, as shown in Table 1, no. Except 1, 5, and 14, emulsions could be formed. Next, no. 1, 5 and 14, the same treatment was performed except that the syringe was changed to a 5 mL volume (cross-sectional area: 111.63 mm 2 , syringe cylinder cross-sectional area / connector cross-sectional area = about 46). . In No. 1, an emulsion could be formed. 5 and 14 could not be formed. Then, using a 5 mL syringe in Examples 1 to 16, pumping was repeated 50 times at a rate of 100 times / minute, and then allowed to stand for 5 minutes, and further pumping was repeated 50 times at the same rate. In the example an emulsion could be formed.
５分間の静置を介してポンピングを５０回繰り返して形成したエマルションについて、粒度分布計（日機装社製、マイクロトラックＵＰＡ１５０−ＥＸ）を用いて、ポンピング終了後と、さらに１日間静置した場合におけるエマルションの粒度分布を、動的光散乱法により測定した。各エマルションのメディアン径を表２に示す。 About emulsion formed by repeating pumping 50 times through standing for 5 minutes, using a particle size distribution meter (manufactured by Nikkiso Co., Ltd., Microtrac UPA150-EX), after completion of pumping, and when standing for another day The particle size distribution of the emulsion was measured by a dynamic light scattering method. Table 2 shows the median diameter of each emulsion.
当該結果の通り、本発明方法と装置によれば、１μｍ前後という極めて微細なエマルション径を有するペプチドエマルションを簡便に得られることが実証された。 As a result, it was demonstrated that the method and apparatus of the present invention can easily obtain a peptide emulsion having an extremely fine emulsion diameter of about 1 μm.
実施例２
本発明のエマルション製剤調製用キットを製造する場合を考慮して、種々の溶媒に関し、実施例１で使用したＮｏ．１〜１２のペプチドの溶解性を調べた。具体的には、冷暗所保存されていたペプチドを室温に戻した後、低湿度室（温度：２３．０℃、湿度：１０％ＲＨ）中で約５ｍｇを秤量し、透明容器へ入れた。そこへ溶媒を２００μＬ加え、穏やかに攪拌して溶解したか否かを目視で確認した。溶解が確認できない場合には、さらに溶媒を２００μＬずつ加えて攪拌する操作を繰り返し、溶媒量１．２５ｍＬでも溶解しない場合には「不溶」と判断した。結果を表３に示す。Example 2
In consideration of the case where the emulsion preparation preparation kit of the present invention is manufactured, the No. 1 used in Example 1 is related to various solvents. The solubility of 1-12 peptides was examined. Specifically, after returning the peptide stored in a cool dark place to room temperature, about 5 mg was weighed in a low humidity chamber (temperature: 23.0 ° C., humidity: 10% RH) and put into a transparent container. 200 μL of the solvent was added thereto, and it was visually confirmed whether or not it was dissolved by gentle stirring. When dissolution could not be confirmed, the operation of adding 200 μL of solvent and stirring was repeated, and when dissolution did not occur even with a solvent amount of 1.25 mL, it was judged as “insoluble”. The results are shown in Table 3.
表中、◎は５ｍｇ／２００μＬで溶解した場合、○は少なくとも５ｍｇ／１．２５ｍＬまでで溶解した場合、×は５ｍｇ／１．２５ｍＬでも溶解しなかった場合、−は未実施、＊は１％酢酸を用いたことを示す。 In the table, ◎ is dissolved at 5 mg / 200 μL, ○ is dissolved at least up to 5 mg / 1.25 mL, × is not dissolved even at 5 mg / 1.25 mL,-is not conducted, * is 1% It shows that acetic acid was used.
上記結果の通り、先ず注射製剤で汎用されている生理食塩水を用いたところ、半数のペプチドを溶解することができたが、溶解性を示さないペプチドが８個あった。そこで、４ｗ／ｖ％炭酸水素ナトリウムを用いたところ、全てのペプチドに溶解性を示した。また、Ｎｏ．１、２、４、６、７、９のペプチドに関しては１０％または１％酢酸でも同様の実験を行なったが、３個のペプチドが不溶であった。 As described above, first, when physiological saline widely used for injection preparations was used, half of the peptides could be dissolved, but 8 peptides did not show solubility. Therefore, when 4 w / v% sodium bicarbonate was used, all peptides showed solubility. No. Similar experiments were performed with 1, 2, 4, 6, 7, and 9 peptides with 10% or 1% acetic acid, but 3 peptides were insoluble.
エマルション製剤調製用キットを製造するに当たっては、ペプチドを溶解する溶媒の種類はできるだけ統一して数を少なくする方が生産性は高い。本実施例２により、生理活性ペプチドに対しては、炭酸水素ナトリウム水溶液が高い溶解性を示すことが明らかとなった。なお、結果としては示していないが、１Ｍ水酸化ナトリウムでも実験を行なったところ、高い溶解性が示された。しかし、水酸化ナトリウムは注射剤に適さない。一方、炭酸水素ナトリウムは、注射剤の成分として特に問題はない。 In producing an emulsion preparation preparation kit, productivity is higher when the types of solvents for dissolving peptides are unified as much as possible to reduce the number. This Example 2 revealed that the aqueous sodium hydrogen carbonate solution exhibits high solubility for the physiologically active peptide. In addition, although not shown as a result, when it experimented also with 1M sodium hydroxide, high solubility was shown. However, sodium hydroxide is not suitable for injection. On the other hand, sodium bicarbonate has no particular problem as a component of an injection.
以上の結果より、本発明のエマルション製剤調製用キットを製造するに当たり、いったん生理活性ペプチドを溶解するための溶媒としては炭酸水素ナトリウム水溶液が適することが実証された。 From the above results, it was demonstrated that an aqueous sodium hydrogen carbonate solution is suitable as a solvent for dissolving the physiologically active peptide once in producing the emulsion preparation preparation kit of the present invention.
実施例３
上記実施例１で使用した生理活性ペプチド（Ｎｏ．１、３、６）と、生理食塩水または４ｗ／ｖ％炭酸水素ナトリウム水溶液とを表４に記載の容量で混合してペプチド溶液を得た後に、バイアルへペプチド溶液を充填し、凍結乾燥を行なって生理活性ペプチド組成物を得た。Example 3
A peptide solution was obtained by mixing the physiologically active peptide (No. 1, 3, 6) used in Example 1 above and physiological saline or 4 w / v% sodium bicarbonate aqueous solution in the volumes shown in Table 4. Later, the peptide solution was filled into a vial and freeze-dried to obtain a physiologically active peptide composition.
上記生理活性ペプチド組成物の溶解性と安定性について、以下の様に評価した。まず、上記生理活性ペプチド組成物の１バイアルに水１ｍＬを添加し、穏やかに１分間混合攪拌を行った後に目視にて状態を確認した。結果を表５に示す。 The solubility and stability of the physiologically active peptide composition were evaluated as follows. First, 1 mL of water was added to one vial of the bioactive peptide composition, and after gently mixing and stirring for 1 minute, the state was visually confirmed. The results are shown in Table 5.
表５の結果の通り、生理活性ペプチドをいったん生理食塩水または炭酸水素ナトリウム水溶液に溶解した上で凍結乾燥した生理活性ペプチド組成物は、極めて容易に水へ溶解できることが実証された。 As shown in Table 5, it was demonstrated that a bioactive peptide composition obtained by dissolving a bioactive peptide in physiological saline or a sodium hydrogen carbonate aqueous solution and then lyophilizing it can be dissolved in water very easily.
実施例４
上記実施例３で製造した生理活性ペプチド組成物、実施例１で使用したオイルアジュバントおよび水をそれぞれ別個のバイアルに包装し、また、５ｍＬシリンジ（筒部断面積：１１１．６３ｍｍ2）とそのコネクタ（断面積：２．４３ｍｍ2）を加え、表６に記載のエマルション製剤調製用キットとした。Example 4
The bioactive peptide composition produced in Example 3 above, the oil adjuvant and water used in Example 1 were each packaged in separate vials, and a 5 mL syringe (cylinder cross-sectional area: 111.63 mm 2 ) and its connector (Cross sectional area: 2.43 mm 2 ) was added to prepare an emulsion preparation preparation kit shown in Table 6.
当該エマルション製剤調製用キットを用いて、実施例１と同様に生理活性ペプチド組成物を水に溶解し、オイルアジュバントを加えた後に、コネクタで連結した５ｍＬシリンジの一方に挿入し、断続的にポンピングを繰り返したところ、均一で微細なエマルションを調製することができた。 Using the emulsion preparation preparation kit, the bioactive peptide composition was dissolved in water in the same manner as in Example 1, and after adding an oil adjuvant, it was inserted into one of 5 mL syringes connected by a connector and pumped intermittently. As a result of repeating the above, a uniform and fine emulsion could be prepared.
上記結果の通り、本発明のエマルション製剤調製用キットは、エマルション製剤を簡便に用時調製できるものとして極めて有用であることが実証された。 As described above, it was demonstrated that the emulsion preparation preparation kit of the present invention is extremely useful as an emulsion preparation that can be easily prepared at the time of use.
実施例５
コネクタの内径を検討するために、生理食塩水（１ｍＬ）とオイルアジュバントとしてＳＥＰＰＩＣ社製のＩＳＡ５１ＶＧ（１ｍＬ）を用いて、以下のようにしてエマルション製剤を調製した。まず、これら生理食塩水とオイルアジュバントを混合した２個のシリンジ（ビーブラウン社製、５ｍＬ容のもの（断面積：１１１．６３ｍｍ2））を準備し、一方のシリンジへ得られた混合液を全量分取し、表７のコネクタのいずれかで連結して、手動で５回のポンピングを行った。次いで、このシリンジをポンピング装置に設置し、表７に記載の条件でポンピングした。Example 5
In order to examine the inner diameter of the connector, an emulsion formulation was prepared as follows using physiological saline (1 mL) and ISA51VG (1 mL) manufactured by SEPPIC as an oil adjuvant. First, prepare two syringes (5 mL volume (cross-sectional area: 111.63 mm 2 ) manufactured by Bea Brown Co., Ltd.) in which these physiological saline and oil adjuvant are mixed. The whole amount was collected and connected with one of the connectors in Table 7, and pumping was performed five times manually. Subsequently, this syringe was installed in the pumping apparatus and pumped under the conditions described in Table 7.
また、得られたエマルションについて、以下の通りドロップテストを行った。詳しくは、得られたエマルション分散液の１滴を水面上に滴下し、当該分散液が水中に直ぐ分散しない場合を「良（○）」、直ぐに分散する場合を「不良（×）」とした。なお、エマルションが適切に形成されていれば、その分散液を水中に滴下しても直ぐには分散しないが、適切に形成されていない場合には、直ぐに分散する。以上の結果を表７に示す。 Moreover, the drop test was done about the obtained emulsion as follows. Specifically, one drop of the obtained emulsion dispersion was dropped onto the water surface, and the case where the dispersion did not disperse immediately in water was defined as “good (◯)”, and the case where it was immediately dispersed was defined as “bad (×)”. . In addition, if the emulsion is appropriately formed, the dispersion does not immediately disperse even when dropped in water. However, if the emulsion is not properly formed, it is immediately dispersed. The results are shown in Table 7.
表７の結果から、コネクタの流路の内径が０．８ｍｍの場合では、エマルションを安定的に得られない場合があった。しかし、ポンピングの速度を遅くすることによって、エマルションを得ることができた。また、当該内径が１．０〜１．４ｍｍのコネクタを使用した場合では、微細なエマルションをより一層安定して調製できることがわかった。 From the results of Table 7, when the inner diameter of the connector flow path is 0.8 mm, the emulsion may not be stably obtained. However, an emulsion could be obtained by slowing down the pumping speed. Further, it was found that when a connector having an inner diameter of 1.0 to 1.4 mm is used, a fine emulsion can be prepared more stably.
実施例６
エマルションの調製方法とコネクタの長さを以下のようにして検討した。まず、表１に記載のＮ０．１４のペプチド（４ｍｇ）を４Ｗ／Ｖ％炭酸水素ナトリウム水溶液（１ｍＬ）に溶解した。次いで、２個の５ｍL容シリンジを、表８に記載の直管状のコネクタで連結した。生理活性ペプチド水溶液とオイルアジュバント（１ｍＬ）とを一方のシリンジ内に加え、表８に記載の条件でエマルションを調製した。結果を表８に示す。Example 6
The preparation method of the emulsion and the length of the connector were examined as follows. First, N0.14 peptide (4 mg) described in Table 1 was dissolved in 4 W / V% aqueous sodium hydrogen carbonate solution (1 mL). Then, two 5 mL syringes were connected with straight tubular connectors described in Table 8. An aqueous physiologically active peptide solution and oil adjuvant (1 mL) were added to one syringe, and an emulsion was prepared under the conditions described in Table 8. The results are shown in Table 8.
表８の結果から、混合工程において、生理活性ペプチド水溶液を半量ずつオイルアジュバントと振とう混合して水相と油相からなる二層を解消した後にポンピングを行ったほうが、再現性良くエマルションを調製し得ることがわかった。また、コネクタの長さは、１０ｍｍのものよりも１５ｍｍのものの方が、少ないポンピング回数でエマルションを調製し得ることがわかった。 From the results of Table 8, in the mixing step, it is more reproducible to prepare an emulsion with better reproducibility by pumping after removing the two layers consisting of an aqueous phase and an oil phase by shaking and mixing the bioactive peptide aqueous solution by half with oil adjuvant. I knew it could be. Further, it was found that the emulsion having a connector length of 15 mm can be prepared with a smaller number of pumping times than that of 10 mm.
実施例７
表１に記載のＮｏ．１〜Ｎｏ．６、Ｎｏ．８、Ｎ０．９およびＮｏ．１１〜Ｎｏ．１６のペプチドについて、実施例６で用いた内径１ｍｍ、流路の長さが１０ｍｍの直管状コネクタを用いて、実施例６と同様の方法でエマルションの調製を行った。結果を表９と１０に示す。Example 7
No. described in Table 1 1-No. 6, no. 8, N0.9 and no. 11-No. For 16 peptides, an emulsion was prepared in the same manner as in Example 6 using the straight tubular connector having an inner diameter of 1 mm and a flow path length of 10 mm used in Example 6. The results are shown in Tables 9 and 10.
表９と１０の結果から、ポンピングの前に混合液の水相と油相からなる二層を解消しておけば、様々な生理活性ペプチドで微細なエマルション製剤をより一層効率的に調製し得ることがわかった。 From the results of Tables 9 and 10, if the two layers consisting of the aqueous phase and the oil phase of the mixed solution are eliminated before pumping, a fine emulsion formulation can be prepared more efficiently with various bioactive peptides. I understood it.
Claims (13)
少なくとも生理活性ペプチド水溶液とオイルアジュバントを含み、生理活性ペプチド水溶液に対するオイルアジュバントの含有割合が０．５〜５容量倍である混合液を調製し；
当該混合液を、コネクタにより連結された２個のシリンジ間で移動させることを特徴とする生理活性ペプチドエマルション製剤の調製方法。A method for preparing an emulsion formulation of a bioactive peptide comprising the steps of:
Preparing a liquid mixture containing at least a physiologically active peptide aqueous solution and an oil adjuvant, wherein the content ratio of the oil adjuvant to the physiologically active peptide aqueous solution is 0.5 to 5 times volume;
A method for preparing a bioactive peptide emulsion preparation, wherein the mixed liquid is moved between two syringes connected by a connector.
生理活性ペプチドを生理食塩水または１〜６ｗ／ｖ％のアルカリ金属炭酸水素塩水溶液に溶解した溶液を凍結乾燥することにより得た生理活性ペプチド組成物を１種以上；
生理活性ペプチド組成物を溶解することによって、血漿と等張または略等張の生理活性ペプチド溶液を得られる量の水を生理活性ペプチド組成物と同数；および
オイルアジュバントを生理活性ペプチド組成物と同数；
含有することを特徴とするエマルション製剤調製用キット。A kit for preparing an emulsion formulation of a bioactive peptide,
One or more physiologically active peptide compositions obtained by lyophilizing a solution in which the physiologically active peptide is dissolved in physiological saline or an aqueous 1-6 w / v% alkali metal bicarbonate solution;
By dissolving the bioactive peptide composition, the same amount of water as that of the bioactive peptide composition is obtained in the same amount as that of the bioactive peptide composition; and the amount of water adjuvant is the same as that of the bioactive peptide composition. ;
A kit for preparing an emulsion preparation, comprising:
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2006014057 | 2006-01-23 | ||
| JP2006014057 | 2006-01-23 | ||
| PCT/JP2007/050831 WO2007083763A1 (en) | 2006-01-23 | 2007-01-19 | Method for production of emulsion preparation comprising physiologically active peptide, and kit for production of the preparation |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPWO2007083763A1 true JPWO2007083763A1 (en) | 2009-06-11 |
Family
ID=38287714
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2007554987A Pending JPWO2007083763A1 (en) | 2006-01-23 | 2007-01-19 | Method for preparing emulsion preparation of bioactive peptide and kit for preparing the preparation |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPWO2007083763A1 (en) |
| WO (1) | WO2007083763A1 (en) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114617954A (en) * | 2007-09-18 | 2022-06-14 | 亮径生物疗法有限公司 | CTL inducer composition |
| KR101712039B1 (en) | 2008-09-05 | 2017-03-03 | 온코세라피 사이언스 가부시키가이샤 | Device and method for automatically preparing emulsion drug |
| ES2620277T3 (en) * | 2010-07-07 | 2017-06-28 | Green Peptide Co., Ltd. | Peptide Cancer Vaccine |
| JP5624446B2 (en) * | 2010-12-10 | 2014-11-12 | 宣行 湧井 | Tablet suspension administration device and tablet suspension administration method |
| EP2823879B1 (en) | 2012-03-06 | 2019-04-24 | Shionogi & Co., Ltd. | Emulsion preparation device and emulsion preparation method |
| JP6975226B2 (en) * | 2017-03-23 | 2021-12-01 | テルモ株式会社 | Mixing aids and syringe system |
| CA3118417A1 (en) | 2018-11-02 | 2020-05-07 | Taiho Pharmaceutical Co., Ltd. | Emulsion formulation and method for preparing the same |
| WO2021117771A1 (en) | 2019-12-10 | 2021-06-17 | 大日本住友製薬株式会社 | Method for preparing peptide emulsion formulation |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2001089389A (en) * | 1999-07-22 | 2001-04-03 | Sumitomo Pharmaceut Co Ltd | Inducer for antigen-specific t cell |
| JP2005061910A (en) * | 2003-08-08 | 2005-03-10 | Fujirebio Inc | Immunoassay instrument for measuring hiv antigen-antibody and method therefor |
| JP4534123B2 (en) * | 2003-12-26 | 2010-09-01 | エス・ピー・ジーテクノ株式会社 | Emulsion preparation device and method |
-
2007
- 2007-01-19 JP JP2007554987A patent/JPWO2007083763A1/en active Pending
- 2007-01-19 WO PCT/JP2007/050831 patent/WO2007083763A1/en active Application Filing
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2007083763A1 (en) | 2007-07-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPWO2007083763A1 (en) | Method for preparing emulsion preparation of bioactive peptide and kit for preparing the preparation | |
| ES2637795T3 (en) | Hydrophobic drug delivery material, method for manufacturing it and methods for administering a drug delivery composition | |
| CN110664757B (en) | Nanocrystalline eye drop, preparation method and application thereof | |
| KR20150083117A (en) | Methods and devices for the treatment of ocular disease in human subjects | |
| CN104159570A (en) | Stabilized glucagon nanoemulsions | |
| JP2006522133A (en) | Non-aqueous single phase media and formulations utilizing such media | |
| KR20060127841A (en) | Delivery of physiologixal agents with in-situ gels comprising anionic polysaccharides | |
| JP6816015B2 (en) | Soluble microniddles for protein or peptide transfer | |
| ES2785089T3 (en) | Procedures, devices, systems and kits to prepare compositions for the care and repair of varicose veins | |
| JP2006199589A (en) | Nanoparticle containing physiologically active protein or peptide, method for producing the same and external preparation comprising the nanoparticle | |
| ES2782111T3 (en) | Sustained-release cyclosporin-loaded microparticles | |
| CN109010272A (en) | Aprepitant emulsion formulation and preparation method thereof | |
| AU2015364280A1 (en) | Method and compositions for dissolving or solubilizing therapeutic agents | |
| JP4113990B2 (en) | Anticancer agent-containing emulsion preparation and method for producing the same | |
| CN107233583B (en) | Ultrasonic contrast agent with ultra-long duration and preparation method thereof | |
| NO880403L (en) | PARENTAL SUSPENSIONS. | |
| CN1660119A (en) | Liposome combination of precursor of vitamine D3 and preparation method | |
| JPH10203962A (en) | Sustained release emulsion preparation of medicine and its production | |
| CN105796486A (en) | Butylphthalide fat emulsion injection and preparation process thereof | |
| CN109646422A (en) | A kind of preparation method of the ophthalmic administration system of polyacrylic resin package load medicine montmorillonite | |
| CN107233582B (en) | Method for preparing ultrasonic contrast agent based on tert-butyl alcohol/water mixed solvent | |
| CN103169718B (en) | Application of anthracene nucleus antibiotic and its pharmaceutical salt for treating neovascular glaucoma | |
| WO2020038298A1 (en) | Microcapsule-based vaccine | |
| WO2011047639A1 (en) | Pharmaceutical solution of taxanes comprising chelating agent and preparation method thereof | |
| JP2008510807A (en) | Suspending agent comprising active ingredient, suspending medium, density-modifying solid having enhanced physical stability |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20110329 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20110726 |