JPS6360998A - 生体高分子結晶の製造方法 - Google Patents
生体高分子結晶の製造方法Info
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Landscapes
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
（４１要〕
酵素等を含むタンパク賀・核酸等生体高分子結晶の製造
方法の改良である。
方法の改良である。
ンリコンゴム、フッ素系ゴム、ブタジェン系ゴム、イソ
プレン系ゴム等のゴムまたはポリエステル、ポリアミド
、ポリ塩化ビニリデン、ポリエチレン、ポリフッ化ビニ
リデン、ＦＥＰ（フッ素化エチレンプロピレン共重合体
）、ポリフッ化ビニル等のフッ素系プラスチックが透水
性であることを利用し、これらの材質よりなる透水性膜
を透過させて、生体高分子を含有する水溶液に含まれる
水分を除去し、または、シリコンゴム。
プレン系ゴム等のゴムまたはポリエステル、ポリアミド
、ポリ塩化ビニリデン、ポリエチレン、ポリフッ化ビニ
リデン、ＦＥＰ（フッ素化エチレンプロピレン共重合体
）、ポリフッ化ビニル等のフッ素系プラスチックが透水
性であることを利用し、これらの材質よりなる透水性膜
を透過させて、生体高分子を含有する水溶液に含まれる
水分を除去し、または、シリコンゴム。
フッ素系ゴム、ブタジェン系ゴム、イソプレン系ゴム等
のゴムまたはポリエステル、ポリアミド。
のゴムまたはポリエステル、ポリアミド。
ポリ塩化ビニリデン、ポリエチレン、ポリフッ化ヒニリ
デン、ＦＥＰ（）−／素化エチレンプロピレン共重合体
）、ポリフッ化ビニル等のフッ素系プラスチックよりな
る透水性膜を透過させて、生体高分子を含有する水溶液
に沈澱剤を導入して、生体高分子を含有する水溶液を過
飽和に導くものであり、容易に、しかも、再現性よく１
寸法が大きく、晶癖が均一の生体高分子の単結晶を製造
しうるようにする方法である。
デン、ＦＥＰ（）−／素化エチレンプロピレン共重合体
）、ポリフッ化ビニル等のフッ素系プラスチックよりな
る透水性膜を透過させて、生体高分子を含有する水溶液
に沈澱剤を導入して、生体高分子を含有する水溶液を過
飽和に導くものであり、容易に、しかも、再現性よく１
寸法が大きく、晶癖が均一の生体高分子の単結晶を製造
しうるようにする方法である。
未発ＩＪＩは、酵素等を含むタンパク質会核酸等生体高
分子の水溶液から生体高分子を析出させて、生体高分子
の単結晶を得る方法の改良に関する。特に、寸Ｕ：が大
きく、しかも、晶癖が単一であって良質の生体高分子−
の１口結晶を得られるようにする改良に関する。
分子の水溶液から生体高分子を析出させて、生体高分子
の単結晶を得る方法の改良に関する。特に、寸Ｕ：が大
きく、しかも、晶癖が単一であって良質の生体高分子−
の１口結晶を得られるようにする改良に関する。
酵素等を含むタンパク質・核酸等生体高分子の単結晶を
得る方法としては、従来、下記の方法が知られている。
得る方法としては、従来、下記の方法が知られている。
イ、生体高分子の過飽和水溶液を長時間静置する方法。
口、生体高分子の水溶液に含まれる水分を少量ずつ蒸発
させる方法。
させる方法。
ハ、生体高分子の水溶液と沈澱剤水溶液とを自由界面を
介して接触させ、沈澱剤を生体高分子の水溶液中に静か
に拡散させる方法。
介して接触させ、沈澱剤を生体高分子の水溶液中に静か
に拡散させる方法。
二、透析膜を使用して生体高分子の水溶液をｃ縮する方
法。
法。
、に記いづれの方法も処理条件の設定が容易でなく、寸
法が大きく晶癖の均一な単結晶生体高分子をＩ＋）現性
よく製造することは困難であるという欠点があった。
法が大きく晶癖の均一な単結晶生体高分子をＩ＋）現性
よく製造することは困難であるという欠点があった。
本発明の目的は、この欠点を解消することにあり、・ｒ
法が大きく晶癖の均一な単結晶を容易に＋ｔｉ現性よく
製造する方法を提供することにある。
法が大きく晶癖の均一な単結晶を容易に＋ｔｉ現性よく
製造する方法を提供することにある。
上記の目的を達成するために本発明が採った１段は、少
なくとも生体高分子を含有する水溶液と少なくとも沈澱
剤を含有する水溶液とを、透水性１１９を介して接触さ
せ、生体高分子を含有する水溶液を過飽和に導き、生体
高分子を含有する水溶液から生体高分子を析出させて生
体高分子結晶を得るものである。
なくとも生体高分子を含有する水溶液と少なくとも沈澱
剤を含有する水溶液とを、透水性１１９を介して接触さ
せ、生体高分子を含有する水溶液を過飽和に導き、生体
高分子を含有する水溶液から生体高分子を析出させて生
体高分子結晶を得るものである。
透水性膜としては、シリコンゴム、フッ素系ゴム、ブタ
ジェン系ゴム、イソプレン系ゴム等のコム１１りまたは
ポリエステル、ポリアミド、ポリ塩化ヒニリデン、ポリ
エチレン、ポリフッ化ヒニリデン、ＦＥＰ （フッ素化
エチレンプロピレン共重合体）、ポリフッ化ビニル等の
フッ素系プラスチック膜が適当である。
ジェン系ゴム、イソプレン系ゴム等のコム１１りまたは
ポリエステル、ポリアミド、ポリ塩化ヒニリデン、ポリ
エチレン、ポリフッ化ヒニリデン、ＦＥＰ （フッ素化
エチレンプロピレン共重合体）、ポリフッ化ビニル等の
フッ素系プラスチック膜が適当である。
膜厚については、ｊ１！２材質や製造方法により、水分
透過性が変わり、また、使用する有機溶媒によってもそ
の透過性が変わるので、−概に言えないが、２０〜１．
０００１Ｌｍが良く、特に、５０〜３００終■が好適で
ある。
透過性が変わり、また、使用する有機溶媒によってもそ
の透過性が変わるので、−概に言えないが、２０〜１．
０００１Ｌｍが良く、特に、５０〜３００終■が好適で
ある。
使用する沈澱剤については、無機塩としては硫酸アンモ
ニウム、リン酸ナトリウム等のリン酸ｆＱ、Ｉｉ！化ナ
トリウム、硫酸マグネシウム、塩化セシウム等が用いら
れ、有機溶媒としてはエタノール、メチルベンタンジオ
ール等の各種アルコール、アセトン等のケトン、Ｉｚ状
エーテル、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミ
ド、アセトニトリル等が用いられる。
ニウム、リン酸ナトリウム等のリン酸ｆＱ、Ｉｉ！化ナ
トリウム、硫酸マグネシウム、塩化セシウム等が用いら
れ、有機溶媒としてはエタノール、メチルベンタンジオ
ール等の各種アルコール、アセトン等のケトン、Ｉｚ状
エーテル、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミ
ド、アセトニトリル等が用いられる。
生体高分子を含有する水溶液に無機塩よりなる沈澱剤を
添加しておき、生体高分子を含有する水溶液に含まれる
水が、透水性１１Ｑを透過して他の領域に移動して除去
されるようにする方法と。
添加しておき、生体高分子を含有する水溶液に含まれる
水が、透水性１１Ｑを透過して他の領域に移動して除去
されるようにする方法と。
沈澱剤として有機溶媒を含有する水溶液を用意し、有機
溶媒が、透水性膜を透過して生体高分子を含有する水溶
液中に導入され、生体高分子を含有する水溶液を過飽和
に導くようにする方法とがある。
溶媒が、透水性膜を透過して生体高分子を含有する水溶
液中に導入され、生体高分子を含有する水溶液を過飽和
に導くようにする方法とがある。
本発明は、各種のゴム、プラスチック等の薄膜が、分子
状の水を透過する性質を利用したものであり、生体高分
子を含有する水溶液と沈澱剤を含有する水溶液とを、透
水性膜を介して接触させ、生体品分子を含有する水溶液
に含まれる水を、透水性膜を透過させて除去するか、沈
澱剤として有機溶媒を含有する水溶液を用い、有機溶媒
を、透水性膜を透過して生体高分子を含有する水溶液中
に導入するかして、生体高分子を含有する水溶液を過飽
和に導き、生体高分子を含有する水溶液から生体高分子
を析出させて生体高分子結晶を得るものである。
状の水を透過する性質を利用したものであり、生体高分
子を含有する水溶液と沈澱剤を含有する水溶液とを、透
水性膜を介して接触させ、生体品分子を含有する水溶液
に含まれる水を、透水性膜を透過させて除去するか、沈
澱剤として有機溶媒を含有する水溶液を用い、有機溶媒
を、透水性膜を透過して生体高分子を含有する水溶液中
に導入するかして、生体高分子を含有する水溶液を過飽
和に導き、生体高分子を含有する水溶液から生体高分子
を析出させて生体高分子結晶を得るものである。
以ド、厚さ ５００ｇｍのシリコンゴムよりなる透水性
１１９を使用してミオグロビンの？ｉ結晶を得ることを
目的とする、本発明の実施例に係る生体高分子結晶の製
造方法３例について説明する。
１１９を使用してミオグロビンの？ｉ結晶を得ることを
目的とする、本発明の実施例に係る生体高分子結晶の製
造方法３例について説明する。
剃↓」
まず、下記の３液を用意する。
ａ、Ａ液
ミオグロビン２１１１７％を含む１／１５Ｍリン酸緩衝
液（ｐＨ７，２） 。
液（ｐＨ７，２） 。
ｂ、Ｂ液
！／１５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，２） 。
ｃ、Ｃ液
２Ｍの水酸化ナトリウム水溶液を僅かに加えてｐＨ７，
２にした硫酸アンモニウム飽和水溶液。
２にした硫酸アンモニウム飽和水溶液。
つぎに、Ａ液とＣ液とを、体積比４：６をもって混合し
て試料溶液（生体高分子を含有する水溶液）を製造する
。
て試料溶液（生体高分子を含有する水溶液）を製造する
。
Ｂ液とＣ液とを、体積比ｌ：９をもって混合して沈Ｖ剤
溶液を製造する。
溶液を製造する。
第１１％参照
容器１中に、沈殿剤溶液２を５１注入し、厚さ５０Ｑｐ
ｍのシリコンゴムよりなる透水性膜３を張り、次に、試
料溶液４を１ｍｌ注入し、２０℃の温度において静置す
る。
ｍのシリコンゴムよりなる透水性膜３を張り、次に、試
料溶液４を１ｍｌ注入し、２０℃の温度において静置す
る。
１週間後に、透水性膜３の上面に沈澱が開始し、約１ケ
月後に、１辺の長さが０．５■■の立方体状をなす均質
の単結晶が得られる。
月後に、１辺の長さが０．５■■の立方体状をなす均質
の単結晶が得られる。
第２例
第１例の場合と同様に、試ネ１溶液と沈殿剤溶液とＢ液
との３液を用意する。
との３液を用意する。
第２図参照
容器ｌ中に、沈殿剤溶液２を５１注入し、厚さ５００ｐ
ｍのシリコンゴムよりなる透水性膜３を張り、次に、Ｂ
液５を１１注入し、再び透水膜３を張り、その後試料溶
液４を１■１注入し、２０℃の温度において静置する。
ｍのシリコンゴムよりなる透水性膜３を張り、次に、Ｂ
液５を１１注入し、再び透水膜３を張り、その後試料溶
液４を１■１注入し、２０℃の温度において静置する。
２茜間後に、上方の透水性膜３の上面に沈澱が開始し、
約２ケ月後に、１辺の長さが１■の立方体状をなす均質
の単結晶が１１）られる。
約２ケ月後に、１辺の長さが１■の立方体状をなす均質
の単結晶が１１）られる。
剃ユ］
第１例の場合と同様に、試料溶液と沈Ｖ削溶液との２液
を用意する。
を用意する。
第３図参照
容器６中に、沈殿剤溶液２を１０ｍｌ注入する。
厚さ ５００ ＩＬｍのシリコンゴムよりなる透水性膜
３が底張された容器７中に試料溶液４を１１注入し、２
０℃の温度において静置する。
３が底張された容器７中に試料溶液４を１１注入し、２
０℃の温度において静置する。
沈を副溶液２の濃度が減少したら、取り換えて、沈を副
溶液２の濃度を一定に保ち、または、次第に高濃度にす
る。
溶液２の濃度を一定に保ち、または、次第に高濃度にす
る。
１週間後に、上方の透水性膜３の上面に沈澱が開始し、
約４０口後に、１辺の長さが１．５窮鳳の立方体状をな
す均質の単結晶が得られる。
約４０口後に、１辺の長さが１．５窮鳳の立方体状をな
す均質の単結晶が得られる。
以」二説明せるとおり、本発明に係る生体高分子結晶の
製造方法においては、生体高分子を含有する水溶液と沈
澱剤を含有する水溶液とを、シリコンゴム、フッ素系ゴ
ム、ブタジェン系ゴム、イソプレン系ゴム等のゴムまた
はポリエステル、ポリアミド、ポリ塩化ビニリデン、ポ
リエチレン、ポリフッ化どニリデン、ＦＥＰ（フッ素化
エチレンプロピレンツ（重合体）、ポリフッ化ビニル等
のフッ素系プラスチックよりなる透水性膜を介して接触
させ、生体高分子を含有する水溶液に含まれる木を、透
水性膜を透過させて除去するか、沈Ｖ剤として有機溶媒
を含有する水溶液を用い。
製造方法においては、生体高分子を含有する水溶液と沈
澱剤を含有する水溶液とを、シリコンゴム、フッ素系ゴ
ム、ブタジェン系ゴム、イソプレン系ゴム等のゴムまた
はポリエステル、ポリアミド、ポリ塩化ビニリデン、ポ
リエチレン、ポリフッ化どニリデン、ＦＥＰ（フッ素化
エチレンプロピレンツ（重合体）、ポリフッ化ビニル等
のフッ素系プラスチックよりなる透水性膜を介して接触
させ、生体高分子を含有する水溶液に含まれる木を、透
水性膜を透過させて除去するか、沈Ｖ剤として有機溶媒
を含有する水溶液を用い。
有機溶媒を、透水性膜を透過して生体高分子を含有する
水溶液中に導入するかして、生体高分子を含有する水溶
液をゆっくり穏やかにコントロールして過飽和に導くこ
とが出来るので１寸法が大きく晶癖の均一なｒｐ結晶を
容易に再現性よく製造することができる。
水溶液中に導入するかして、生体高分子を含有する水溶
液をゆっくり穏やかにコントロールして過飽和に導くこ
とが出来るので１寸法が大きく晶癖の均一なｒｐ結晶を
容易に再現性よく製造することができる。
第１図は、未発ＩＪ＋の第１の実施例に係る生体高分子
結晶の製造方法の実施状７８を示す図である。 第２図は１本発明の第２の実施例に係る生体高分子−結
晶の製造方法の実施状Ｊ’ｆｊを示す図である。 第３図は１本発明の第３の実施例に係る生体高分子結晶
の製造方法の実施状態を示す図である。 １・・・容器、 ２・・・沈澱副溶液、 ３・・・透水性膜、 ４・・・試料溶液。 ５・・・ｌ／１５Ｍリン酸緩衝液（Ｂ液）、６・・・容
器、 ７・・・透水性膜が底張された容器。
結晶の製造方法の実施状７８を示す図である。 第２図は１本発明の第２の実施例に係る生体高分子−結
晶の製造方法の実施状Ｊ’ｆｊを示す図である。 第３図は１本発明の第３の実施例に係る生体高分子結晶
の製造方法の実施状態を示す図である。 １・・・容器、 ２・・・沈澱副溶液、 ３・・・透水性膜、 ４・・・試料溶液。 ５・・・ｌ／１５Ｍリン酸緩衝液（Ｂ液）、６・・・容
器、 ７・・・透水性膜が底張された容器。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 ［１］生体高分子を含有する水溶液から前記生体高分子
を析出させてなす生体高分子結晶の製造方法において、 前記生体高分子を含有する水溶液と沈澱剤を含有する水
溶液とを透水性膜を介して接触させて、前記生体高分子
を含有する水溶液を過飽和に導き、前記生体高分子を析
出させる ことを特徴とする生体高分子結晶の製造方法。 ［２］前記透水性膜は、シリコンゴム、フッ素系ゴム、
ブタジエン系ゴム、イソプレン系ゴム等のゴム、または
、ポリエステル、ポリアミド、ポリ塩化ビニリデン、ポ
リエチレン、ポリフッ化ビニリデン、ＦＥＰ（フッ素化
エチレンプロピレン共重合体）、ポリフッ化ビニル等の
フッ素系プラスチックであることを特徴とする特許請求
の範囲第１項記載の生体高分子結晶の製造方法。 ［３］前記生体高分子を含有する水溶液は無機塩よりな
る沈澱剤を含有しており、前記生体高分子を含有する水
溶液に含まれる水が、前記透水性膜を透過して除去され
ることを特徴とする特許請求の範囲第１項または第２項
記載の生体高分子結晶の製造方法。 ［４］前記沈澱剤を含有する水溶液は有機溶媒を含有し
ており、該有機溶媒が、前記透水性膜を透過して前記生
体高分子を含有する水溶液中に導入されることを特徴と
する特許請求の範囲第１項または第２項記載の生体高分
子結晶の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20434286A JPS6360998A (ja) | 1986-08-29 | 1986-08-29 | 生体高分子結晶の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20434286A JPS6360998A (ja) | 1986-08-29 | 1986-08-29 | 生体高分子結晶の製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6360998A true JPS6360998A (ja) | 1988-03-17 |
Family
ID=16488915
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP20434286A Pending JPS6360998A (ja) | 1986-08-29 | 1986-08-29 | 生体高分子結晶の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6360998A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5529927A (en) * | 1993-12-28 | 1996-06-25 | San-Ei Gen F.F.I., Inc. | "Alga species lobsphaera TM-33 (ATCC 75630) which is useful for preparing trehalase" |
| US5565341A (en) * | 1993-08-13 | 1996-10-15 | Kureha Chemical Industry Co., Ltd. | Process for producing trehalose |
| US5776739A (en) * | 1919-06-10 | 1998-07-07 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Process for producing disaccharides and novel disaccharides |
| US5827715A (en) * | 1995-07-31 | 1998-10-27 | Showa Sangyo Co., Ltd. | Heat resistant maltose phosphorylase, process for preparation thereof, bacteria used for preparation thereof, and methods for using the enzyme |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS53109554A (en) * | 1977-03-07 | 1978-09-25 | Agency Of Ind Science & Technol | Crystallization of proteins |
-
1986
- 1986-08-29 JP JP20434286A patent/JPS6360998A/ja active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS53109554A (en) * | 1977-03-07 | 1978-09-25 | Agency Of Ind Science & Technol | Crystallization of proteins |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| US5776739A (en) * | 1919-06-10 | 1998-07-07 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Process for producing disaccharides and novel disaccharides |
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| US5529927A (en) * | 1993-12-28 | 1996-06-25 | San-Ei Gen F.F.I., Inc. | "Alga species lobsphaera TM-33 (ATCC 75630) which is useful for preparing trehalase" |
| US5827715A (en) * | 1995-07-31 | 1998-10-27 | Showa Sangyo Co., Ltd. | Heat resistant maltose phosphorylase, process for preparation thereof, bacteria used for preparation thereof, and methods for using the enzyme |
| US5939308A (en) * | 1995-07-31 | 1999-08-17 | Showa Sangyo Co., Ltd. | Heat resistant maltose phosphorylase, process for preparation thereof, bacteria used for preparation thereof, and methods for using the enzyme |
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