JPS6360949A

JPS6360949A - Triterpene compound and carcinostatic agent

Info

Publication number: JPS6360949A
Application number: JP20289786A
Authority: JP
Inventors: Yasuo Fujimoto; 康雄藤本; Sumatora Made; マデ　スマトラ
Original assignee: RIKEN Institute of Physical and Chemical Research
Current assignee: RIKEN Institute of Physical and Chemical Research
Priority date: 1986-08-29
Filing date: 1986-08-29
Publication date: 1988-03-17
Anticipated expiration: 2009-01-19
Also published as: JPH064563B2

Abstract

NEW MATERIAL:The compound of formula (R is H or CH3) (named as plumeric acid and methyl plumerate, respectively). USE:A carcinostatic agent. PREPARATION:Dried leaves of Brumellia actifolia Boyl are pulverized, extracted with 90% ethanol solution and concentrated under reduced pressure to obtain a crude extract. The extract is subjected to adsorption chromatography and eluted successively with water-methanol solvent. A fraction having strong growth-inhibiting activity against cultured cell of Yoshida sarcoma is selected from the obtained fractions and a crude crystal separated from the fraction is treated with ethyl acetate to separate into a component soluble in ethyl acetate and crude crystal hardly soluble in ethyl acetate. The former component is acetylated with acetic anhydride-pyridine, separated and purified by high- performance liquid chromatography, deacetylated to the original compound with 5% MeOH, KOH and the compound of formula is separated together with other two kinds of known substances.

Description

【発明の詳細な説明】（技術分野）本発明は、新規なトリテルペン化合物及び該化合物を有
効成分として含有する制癌剤に関する。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION (Technical Field) The present invention relates to a novel triterpene compound and an anticancer agent containing the compound as an active ingredient.

（発明の背景）従来、癌化学療法剤として、アルキル化剤（ナイトロジ
エンマスタード順、エチレンイミン類、スルホン酸エス
テル類）、代謝拮抗物質（葉酸拮抗剤、プリン拮抗剤、
ピリミジン拮抗剤）、植物性核***前（コルセミド、ビ
ンブラスチン等）、抗生物質（ザルコマイシン、カルチ
ノフイリン、マイトマイシン等）、ホルモン頚（副腎ス
テロイド、男性ホルモン、女性ホルモン）及びポルフィ
リン錯塩（マーフィリン、Ｃ０ＰＰ）等が用いられてい
る。しかしながら、その殆んどは、細胞毒型の物質であ
り、重大な副作用を呈するため、低毒性で優れた制癌活
性を有する制癌剤の開発が強く望まれている。(Background of the Invention) Conventionally, cancer chemotherapy agents include alkylating agents (nitrogien mustard, ethyleneimines, sulfonic acid esters), antimetabolites (folate antagonists, purine antagonists,
pyrimidine antagonists), plant pre-fission (colcemid, vinblastine, etc.), antibiotics (sarcomycin, carcinophylline, mitomycin, etc.), hormones (adrenal steroids, male hormones, female hormones), and porphyrin complex salts (marphyrin, C0PP) etc. are used. However, most of them are cytotoxic substances and exhibit serious side effects, so the development of anticancer agents with low toxicity and excellent anticancer activity is strongly desired.

本発明者らは、上記趣旨に鑑み、低毒性で制癌性を有す
る物質を動・植物、微生物界の広い生物範囲から探索を
行ってきたが、プルメリア・アクティフォリ７−ボイル
（Ｐｌｕｍｅｒｉａａｃｕｔｉｆｏｌｉａ　Ｐａ１ｒ）
（インドネシア名：　Ｋｅｍｂｏｄｊａ　Ｐｕｔｉｎ　
）より抽出された新規なトリテルペン化合物が、優れた
制癌活性を有することを見出し、本発明を完成したもの
である。In view of the above purpose, the present inventors have been searching for a substance with low toxicity and anticancer properties from a wide range of organisms in the animal, plant, and microbial worlds.
(Indonesian name: Kembodja Putin
The present invention has been completed based on the discovery that a novel triterpene compound extracted from A. ) has excellent anticancer activity.

プルメリア・アクティフォリア・ボイルは、インドネシ
ア産植物であり、古来より歯痛、皮ふ病等の治療に用い
られているといわれる。今回、本発明者らは、上記プル
メリア・アクティフォリア・ボイルの葉の成分について
、その生理活性を探索したところ、本発明の新規なトリ
テルペン化合物を単離・精製し、該化合物が優れた制癌
活性を示すことを見出した。Plumeria actifolia Boil is a plant from Indonesia, and is said to have been used to treat toothaches, skin diseases, etc. since ancient times. This time, the present inventors investigated the physiological activity of the above-mentioned components of the leaves of Plumeria actifolia Boil, and found that the novel triterpene compound of the present invention was isolated and purified. It was found that it showed activity.

（発明の目的）本発明の目的は、よりすぐれた制癌活性を有する新規な
化合物を提供することにある。又、本発明の目的は、上
記新規な化合物を有効成分とする制癌剤を提供すること
にある。(Objective of the Invention) An object of the present invention is to provide a novel compound having better anticancer activity. Another object of the present invention is to provide an anticancer agent containing the above-mentioned novel compound as an active ingredient.

（発明の構成）本発明の新規なトリテルペン化合物は、後述の理化学的
性質を示し、プルメリア・アクティフォリア・ボイルよ
り抽出・単離される。以下、その抽出・単離方法の一例
を示す。(Structure of the Invention) The novel triterpene compound of the present invention exhibits the physical and chemical properties described below, and is extracted and isolated from Plumeria actifolia Boil. An example of the extraction/isolation method will be shown below.

プルメリア・アクティフォリア・ボイルの乾燥葉を粉末
化した後、９０％エタノール溶液にて抽出し、減圧ａ縮
して粗抽出物を得る。次いで、得られた粗抽出物を吸着
クロマトグラフィーに付し、水−メタノール系溶媒にて
順次溶出する。得られた各分画について吉田肉腫培養細
胞に対して生育阻害活性の強い分画から得られた粗結晶
を酢酸エチルにて処理し、酢酸エチル可溶部と難溶性粗
結晶に分離する。得られた酢酸エチル可溶部を、無水酢
酸−ピリジンにてアセチル化処理後、高速液体クロマト
グラフィーにて分離・精製し、５９６！ＪｅＯＨ−ＫＯ
Ｈにより脱アセチル化し、元の化合物に戻し３種の化合
物を単離する。これらの化合物のウチ、２　ｆｆｉはマ
ススペクトル、ＮＭＲスペクトルデータから公知物質で
あると同定されたが、他の１種は、そのスペクトルデー
タより新規物質と同定された。The dried leaves of Plumeria actifolia Boil are powdered, extracted with a 90% ethanol solution, and compressed under reduced pressure to obtain a crude extract. Next, the obtained crude extract is subjected to adsorption chromatography and sequentially eluted with water-methanol solvent. For each of the obtained fractions, the crude crystals obtained from the fraction with strong growth inhibiting activity against cultured Yoshida sarcoma cells are treated with ethyl acetate to separate into ethyl acetate soluble portion and sparingly soluble crude crystals. The obtained ethyl acetate soluble portion was acetylated with acetic anhydride-pyridine, and then separated and purified using high performance liquid chromatography. JeOH-KO
Deacetylation is performed with H to restore the original compound and isolate three types of compounds. One of these compounds, 2ffi, was identified as a known substance based on mass spectrum and NMR spectrum data, while the other one was identified as a new substance based on its spectrum data.

かくして単離された本発明のトリテルペン化合物は、下
記の構造式及び物理的性質を有する。The triterpene compound of the present invention thus isolated has the following structural formula and physical properties.

Ｃｌ−１゜化合、物〔１〕　（Ｒ＝Ｈ）（ブルメル酸（Ｐｌｕｍｅ
ｒｉｃａｃｉｄ）と命名した。）化合物ＣＵＥ　　（Ｒ＝ＣＨ，）　（ブルメル酸メチル
（！、１ｅｔｈｙｌ　Ｐｌｕｍｅｒａｔｅ　）と命名し
た。）〔物理的性質〕化合物ＣＩ）（Ｒ＝Ｈ）ｍ、ｐ、　：　２０９．５〜２１２．５℃（エタノール
より再結晶、微細結晶）マス・スペクトル：ｍ／Ｚ；　４５６（Ｍ−）　Ｃ２９
Ｈ４４０４゜２４８（ベースピーク）、２０７　（８％
）、２０３（３３％）、１８９（１０％） ’　Ｈ−Ｎ！、ＩＲ（４００ＭＨｚ、δ、　Ｃ［ｌＣｆ
　３）　：５、２８　（ＬＨ，ｂｓ、　　ビニル）　、
５．１３　（ＬＨ，ｂｓ　、エキソメチレン）　、４．
７５（１８，ｂｓ、　　エキソメチル０、９７　（３Ｈ
，ｄ、　−ＣＤ５）　、０．８８　（３Ｈ，ｄ、−ＣＨ
，）、０、８４（３Ｈ，Ｓ、　−ＣＬ）　、０．７９（
３Ｈ，Ｓ、　ＣＨ，）化合物［ＩＩ］　　（Ｒ＝ＣＩＩ
、）ｍ、ｐ、　：　１３０．５〜１３２．５℃（メタノール
より再結晶、柱状晶）マス・スペクトル＋ｍ／ｚ；　４７０（Ｍ”　）　Ｃ３
０）１４６０４．２６２（ベースビーク）、２０７　（
４％）、２０３（８７％）、１８９（２８９６）’Ｈ−
ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、δ、　ＣＤＣｌ　３）　’５、
２７　（ｔ、　Ｊ＝３．５）１ｚ、ビール）、５．１４
．４．７５（２Ｈ，ｂｓ、　　エキソメチレン）、１、
１０　（３Ｈ，ｓ、　ＣＨ，）、０．９４　（３Ｈ，ｄ
、−Ｃ）１３）、０．８７（３Ｈ，ｄ、−ＣＤ５）　、
０．７９（３Ｈ，ｓ、−ＣＨ＊）、０、７８　（３Ｈ，
ｓ、　（Ｌ）いずれの化合物も、マウスに対し５０ｍｇ／ｋｇ連続投
与しても何ら毒性を認めない。Cl-1° compound, substance [1] (R=H) (Blumeric acid (Plume
ricacid). ) Compound CUE (R=CH,) (Named methyl plumerate (!, 1ethyl Plumerate).) [Physical properties] Compound CI) (R=H) m, p, : 209.5-212.5°C (Recrystallized from ethanol, fine crystals) Mass spectrum: m/Z; 456 (M-) C29
H4404°248 (base peak), 207 (8%
), 203 (33%), 189 (10%) 'H-N! , IR (400MHz, δ, C[lCf
3): 5, 28 (LH, bs, vinyl),
5.13 (LH, bs, exomethylene), 4.
75 (18, bs, exomethyl 0,97 (3H
,d, -CD5) ,0.88 (3H,d, -CH
,), 0,84(3H,S, -CL), 0.79(
3H,S, CH,) Compound [II] (R=CII
, ) m, p, : 130.5-132.5°C (recrystallized from methanol, columnar crystal) Mass spectrum + m/z; 470 (M”) C3
0) 14604.262 (base beak), 207 (
4%), 203 (87%), 189 (2896)'H-
NMR (400MHz, δ, CDCl3) '5,
27 (t, J=3.5)1z, beer), 5.14
．． 4.75 (2H, bs, exomethylene), 1,
10 (3H,s, CH,), 0.94 (3H,d
, -C)13), 0.87 (3H, d, -CD5),
0.79 (3H, s, -CH*), 0,78 (3H,
(L) No toxicity was observed for any of the compounds even when 50 mg/kg was continuously administered to mice.

本発明の制癌剤は、経口及び非経口投与のいずれも使用
可能であり、経口投与する場合は、軟・硬カプセル剤又
は錠剤、顆粒剤、細粒剤、散剤として投与され、非経口
投与する場合は、水溶性懸濁液、油性製剤などの皮下或
いは静脈注射剤、点滴剤及び固体状又は懸濁粘稠液状と
して持続的な粘膜吸収が維持できるように生薬のような
剤型で投与され得る。The anticancer agent of the present invention can be administered either orally or parenterally; when administered orally, it is administered as a soft/hard capsule, tablet, granule, fine granule, or powder; when administered parenterally, can be administered in the form of herbal medicines, such as subcutaneous or intravenous injections such as aqueous suspensions and oil-based preparations, infusions, and solid or suspended viscous liquids to maintain sustained mucosal absorption. .

本発明の有効成分の製剤化は、界面活性剤、賦形剤、滑
沢剤、佐剤、及び必要に応じて腸溶性製剤とするために
医薬的に許容し得る被膜形成物質、コーティング助剤等
を用いて適宜行うことができ、その具体例を挙げれば、
次のとおりである。The active ingredients of the present invention are formulated using surfactants, excipients, lubricants, adjuvants, and, if necessary, pharmaceutically acceptable film-forming substances and coating aids to form enteric-coated formulations. This can be done as appropriate using, for example,
It is as follows.

本発明の組成物の崩壊、溶出を良好ならしめるために、
界面活性剤、例えばアルコール、エステル類、ポリエチ
レングリコール誘導体、ソルビタンの脂肪酸エステル類
、硫酸化脂肪アルコール類等の１種又は２種以上を添加
することができる。In order to improve the disintegration and elution of the composition of the present invention,
One or more surfactants such as alcohols, esters, polyethylene glycol derivatives, fatty acid esters of sorbitan, sulfated fatty alcohols, etc. can be added.

また、賦形剤として、例えば蔗糖、乳糖、デンプン、結
晶セルロース、マンニラ）、［［水珪酸、アルミン酸マ
グネシウム、メタ珪酸アルミン酸マグネシウム、合成珪
酸アルミニウム、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム
、リン酸水素カルシウム、カルボキシメチルセルロース
カルシウム等の１種又は２種以上を組合せて添加するこ
とができる。In addition, as excipients, for example, sucrose, lactose, starch, crystalline cellulose, mannilla), [[hydrosilicic acid, magnesium aluminate, magnesium metasilicate aluminate, synthetic aluminum silicate, calcium carbonate, sodium hydrogen carbonate, calcium hydrogen phosphate] , carboxymethylcellulose calcium, etc., or a combination of two or more thereof can be added.

滑沢剤としては、例えばステアリン酸マグネシウム、タ
ルク、硬化油等を１種又は２種以上添加することができ
、また矯味剤及び矯臭剤として、食塩、サッカリン、糖
、マンニット、オレンジ油カンゾウエキス、クエン酸、
ブドウ糖、メントール、ユーカリ油、リンゴ酸等の甘味
剤、香料、着色料、保存料等を含有させてもよい。As a lubricant, for example, one or more types of magnesium stearate, talc, hydrogenated oil, etc. can be added, and as a flavoring agent and a flavoring agent, salt, saccharin, sugar, mannitol, orange oil licorice extract, etc. can be added. ,citric acid,
Sweeteners such as glucose, menthol, eucalyptus oil, and malic acid, fragrances, coloring agents, preservatives, and the like may be included.

懸濁剤、潤滑剤の如き佐剤としては、例えばココナツト
油、オリーブ油、ゴマ油、落花生油、乳酸カルシウム、
ベニバナ油、大豆リン脂質等を含有させることができる
。Examples of adjuvants such as suspending agents and lubricants include coconut oil, olive oil, sesame oil, peanut oil, calcium lactate,
Safflower oil, soybean phospholipids, etc. can be contained.

また被膜形成物質としては、セルロース、糖類等の炭水
化物誘導体として酢酸フタル酸セルロース（ＣＰＡ）、
またアクリル酸系共重合体、二塩基酸モノエステル類等
のポリビニル誘導体としてアクリル酸メチル・メタアク
リル酸共重合体、メタアクリル酸メチル・メタアクリル
酸共重合体が挙げられる。Film-forming substances include cellulose, cellulose acetate phthalate (CPA) as carbohydrate derivatives such as sugars,
Examples of polyvinyl derivatives such as acrylic acid copolymers and dibasic acid monoesters include methyl acrylate/methacrylic acid copolymers and methyl methacrylate/methacrylic acid copolymers.

また、上記皮膜形成物質をコーティングするに際し、通
常使用されるコーティング助剤、例えば可塑剤の池、コ
ーティング操作時の薬剤相互の付着防止のための各種添
加剤を添加することによって皮膜形成剤の性質を改良し
たり、コーティング操作をより容易ならしめることがで
きる。なお、有効成分を皮膜形成物質を用いてマイクロ
カプセル化してから賦形剤等を混合した剤型としても良
次に代表的な剤型における配合比は下記の通りである。In addition, when coating the above-mentioned film-forming substances, the properties of the film-forming agent can be improved by adding commonly used coating aids, such as plasticizers, and various additives to prevent mutual adhesion of chemicals during coating operations. This can improve the coating process and make coating operations easier. In addition, the compounding ratio in a typical dosage form, which is a dosage form in which the active ingredient is microencapsulated using a film-forming substance and then mixed with excipients, etc., is as follows.

有効成分　０．１〜９０　　重量％０．３〜１５　　重
量％賦　　形　　剤　　　１０〜９９．８　　　　〃８
５〜９９．４　　　〃滑　　沢　　剤　　　　０〜５０
〃０〜２０〃界面活性剤　　０〜５０〃０〜２０〃皮膜形成物質　　０．１〜５０　　　　〃０．３〜２０
〃特に好ましい賦形剤は、乳糖、結晶セルローズ、カル
ボキシメチルセルロースカルシウムである。Active ingredient 0.1-90 Weight% 0.3-15 Weight% Excipient 10-99.8 〃8
5~99.4 Lubricating agent 0~50
〃0~20〃Surfactant 0~50〃0~20〃 Film forming substance 0.1~50 〃0.3~20
Particularly preferred excipients are lactose, crystalline cellulose, and calcium carboxymethylcellulose.

また、投与量は、対象腫瘍を有効に治療するに十分な量
であり、腫瘍の症状、投与経路、剤型などによって左右
されるが、一般に、経口投与の場合、大人では１日当り
、薬０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重（小人では０．０
１〜６０ｍｇ／ｋｇ体重）の範囲で、その上限は好まし
くは約５０ｍｇ／ｋｇ体重、更に好ましくは約１０ｍｇ
／ｋｇ体重程度であり、非経口投与の場合、その上限は
約１０ｍｇ／ｋｇ体重程度であり、好ましくは５　ｍｇ
　／　ｋｇ体重、更に好ましくは２　ｍｇ　／　ｋｇ体
重が適当である。In addition, the dosage is sufficient to effectively treat the target tumor, and depends on the symptoms of the tumor, administration route, dosage form, etc., but in general, in the case of oral administration, adults should receive 0 drug per day. .01-100mg/kg body weight (0.0 for dwarfs)
1 to 60 mg/kg body weight), and the upper limit is preferably about 50 mg/kg body weight, more preferably about 10 mg
/kg body weight, and in the case of parenteral administration, the upper limit is about 10 mg/kg body weight, preferably 5 mg/kg body weight.
/kg body weight, more preferably 2 mg/kg body weight.

次に、本発明化合物の制癌活性を確認した制癌性試験法
について述べる。Next, the anticancer activity test method for confirming the anticancer activity of the compound of the present invention will be described.

１５％の子牛血清を含有するＭＥＭ培地にッスイ製）に
、ラットの復水から取り出した書出肉腫細胞（Ｙｏｓｈ
ｉｄａ　ｓａｒｃｏｍａ　ｃｅｌｌｓ）を接種して培養
し、細胞数が約１０ＸＩ　０５ｃｅｌｌｓ　／−になっ
た時点で上記培地で５倍に希釈（２０Ｘ　１０’ｃｅｌ
ｌｓ／−）　Ｌ、ｉｍＩ！づつバイアルビンに分注する
。次いで、各濃度の本発明化合物のメタノール又はアセ
トン溶液を加え、ゴム栓をして３７℃で培養し約３日後
にトリパンブルーにて染色後、生細抱数を計測する。供
試細胞増殖の抑制率は、次式により求めた。Written sarcoma cells (Yosh) taken from rat condensate were placed in MEM medium containing 15% calf serum (Ssui).
ida sarcoma cells) and cultured, and when the cell number reached approximately 10XI 05 cells/-, diluted 5 times with the above medium (20X 10' cells/-).
ls/-) L,imI! Dispense into vials. Next, a methanol or acetone solution of the compound of the present invention at each concentration is added, a rubber stopper is placed, and the cells are cultured at 37°C. About 3 days later, after staining with trypan blue, the number of viable cells is counted. The inhibition rate of test cell proliferation was determined by the following formula.

以下に本発明を実施例、製剤例及び試験例によって具体
的に説明する。The present invention will be specifically explained below using Examples, Formulation Examples, and Test Examples.

実施例１インドネシアにて採集したプルメリア・アクティフォリ
ア・ボイルの葉を、自然乾燥させたちの５００ｇを、ミ
キサーにて粉末状にし、９０％ＥｔＯＨに一晩浸漬した
後濾別し、抽出液を減圧下にて１縮し黒褐色の油状物質
１８．５　ｇを得た。Example 1 500g of naturally dried leaves of Plumeria actifolia Boil collected in Indonesia were ground into powder using a mixer, immersed in 90% EtOH overnight, filtered, and the extract was decompressed. The mixture was condensed at the bottom to obtain 18.5 g of a dark brown oily substance.

これを、ＥｔＯＡｃ　、　Ｈ２Ｏそれぞれ６００ｍ１！
、２００ｍ１に分配し両層を減圧Ｓ縮して、ＥｔＯＡｃ
層かみ黒色油状物質１７．３ｇ、水層から茶色油状物質
１．２２　ｇを１等だ。Add this to 600ml each of EtOAc and H2O!
, 200ml, both layers were compressed under reduced pressure, and EtOAc
17.3g of black oily substance in the layer and 1.22g of brown oily substance in the water layer.

ＥｔＯＡｃ層を、逆相カラムクロマトグラフィー（ダイ
ヤイオンＨＰ−２０４０φ×４７０の１にてａ　−ｇの
７つの分画に分離した。展開溶媒は、Ｈ２ＯＳ）１．０
　：　ＭｅＯｔｌ＝　８０　：　２０．６０：４０．４
０：６０各２１．２０　：　８０　２．３４２、！、Ｉ
ｅＯＨ７ｊ２、アセトン４１を順次使用した。The EtOAc layer was separated into seven fractions a to g using reverse phase column chromatography (Diaion HP-2040φ x 470. The developing solvent was H2OS) 1.0
:MeOtl=80:20.60:40.4
0:60 each 21.20: 80 2.342,! , I
eOH7j2 and acetone 41 were used in this order.

各分画を、減圧濃縮した後、書出肉腫培養細胞に対する
生育阻害活性試験を行なった結果、Ｈ２Ｏ：ＭｅＯＨ＝
６０：４０，４０：６０及び！Ｊｅｓｔ（１００％の分
画に強い活性が認められた。After concentrating each fraction under reduced pressure, we conducted a growth inhibitory activity test on cultured written sarcoma cells. As a result, H2O:MeOH=
60:40, 40:60 and! Jest (strong activity was observed in the 100% fraction.

ＭｅＯ）１１００％の分画にεｔＯＡｃ３０＋＋＋ｊ！
を加え、吸引濾過し、ＥｔＯＡｃ難溶性の結晶を濾別し
、さらに結晶をＥｔＯＡｃ　５　ｍｊ！で４回洗い、黄
白色の粗結晶（α）３．６０ｇとＥｔＯＡｃ層から５．
９８　ｇの粗結晶を得た。MeO) εtOAc30+++j for the 1100% fraction!
was added, filtered with suction, and filtered off crystals that were poorly soluble in EtOAc. Washed 4 times with
98 g of crude crystals were obtained.

ＥｔＯＡｃ層（５，９８ｇ）をカラムクロマトグラフィ
ー’　（Ｓｉｎ、、４０φＸ２５０＋ｎ＋ｎ）にて７分
画（ｈ〜ｍ）に分離した。展開溶媒は、ヘキサン：Ｅｔ
ＯＡｃ　＝　２０　：　１．１０：１各４００ｍ１．７
：３５００−１１：１　６００ｍｅ、ヘキサン：巳ｔＯ
Ａｃ＝　３・：　７　、ＥｔＯＡｃ　、及び！、１　ｅ
　ＯＨ各５００ｍアセトン２００ｍ１を順次使用した。The EtOAc layer (5.98 g) was separated into 7 fractions (hm) by column chromatography (Sin, 40φX250+n+n). The developing solvent is hexane:Et
OAc = 20: 1.10:1 each 400m 1.7
:3500-11:1 600me, hexane:mitO
Ac= 3.: 7, EtOAc, and! , 1 e
500ml each of OH and 200ml of acetone were used sequentially.

各分画について細胞活性試験を行なった結果、ヘキサン
：ＥｔＯＡｃ　＝　１　：１及び３ニアの分画に強い活
性が認められた。As a result of carrying out a cell activity test on each fraction, strong activity was observed in the hexane:EtOAc=1:1 and 3Nia fractions.

活性の強かった八本サン：ＥｔＯＡｃ　＝　３　：　７
の分画をＩＩＰＬＣ（ヌクレオシル５０−５　２０φＸ
３００ｕヘキサン：ＥｔＯＡｃ　＝　１　：　１　）　
テ１分画に分け、各分画について細胞活性試験を行い、
活性の強い分画（Ｒｆ値０．３８〜０．３２　）をさら
に高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）　　（ヌク
レオシル５０−５８φＸ３００ｎｍ　　ヘキサン：　Ｅ
ｔＯＡｃ＝１：１）で分離したところ、Ｃ）Ｉｃ　Ｉｌ
ｓ難溶性（ＥｔＯＡｃも、同様）の結晶Ｆ（６６ｍｇ）
、Ｇ（２２ｍｇ）を得た。Hachimotosan with strong activity: EtOAc = 3: 7
The fraction was analyzed by IIPLC (Nucleosil 50-5 20φX
300u hexane:EtOAc = 1:1)
Divide into 1 fraction, perform cell activity test on each fraction,
The highly active fraction (Rf value 0.38-0.32) was further subjected to high performance liquid chromatography (HPLC) (Nucleosil 50-58φX300nm Hexane: E
When separated with tOAc=1:1), C) Ic Il
s Poorly soluble (same as EtOAc) crystal F (66 mg)
, G (22 mg) was obtained.

Ｆ　、　Ｇの書出肉腫培養細胞に対する活性は、それぞ
れ１００．２５μｇ／ｍ１で、１００％生育阻害を示し
た。The activity of F and G against cultured written sarcoma cells was 100.25 μg/ml, respectively, showing 100% growth inhibition.

Ｇ（２２ｍｇ）をＨＰＬＣ（ＯＤＳ−１ｔ−２１５１６
φ×１５０ｍｍ　　Ｍｅｏｌ（：８２０　＝４　：　１
）にて分離した後、主成分である無色微細結晶Ｍ（１８
ｍｇ）を得た。G (22 mg) by HPLC (ODS-1t-21516
φ×150mm Meol (:820 =4:1
), the main component, colorless fine crystals M (18
mg) was obtained.

この結晶Ｍ　（８，３ｍｇ）にピリジン１，５ｍｌ、Ａ
Ｃ２０１５０μ！を加え室温で１４時間攪拌し、さらに
ベンゼンを加え減圧下で共沸し、濃縮した後ＨＰＬＣ（
ヌクレオシル５ｏ−５８φＸ３００ｍｍへキサ７：Ｅｔ
Ｏ＾ｃ＝８：１にて分離・精！！（４−デメチル−４，
２３−ｆヒドロ−２α−ヒドロキシウルソル酸ジアセテ
ート（４−ｄｅｍｅｔｈｙｌ　−４、２３−ｄｅｈｙｄ
ｒｏ　−２ａ−ｈｙｄｒｏｘｙｕｒｓｏｌｉｃ　ａＣｉ
ｄ　ｄｉａｃｅｔａｔｅ）（Ａ〕６．０ｍｇを得た。To this crystal M (8.3 mg), 1.5 ml of pyridine, A
C20150μ! was added and stirred at room temperature for 14 hours, further benzene was added, azeotropically distilled under reduced pressure, concentrated, and HPLC (
Nucleosil 5o-58φX300mm Hexa7:Et
Separation and separation at O^c=8:1! ! (4-demethyl-4,
23-f hydro-2α-hydroxyursolic acid diacetate (4-demethyl-4,23-dehyd
ro-2a-hydroxyursolic aCi
d diacetate) (A) 6.0 mg was obtained.

（〔Ａ〕の物理的性質）ｍ、Ｉ］、　：　Ｌ　６７．３〜１６９．０℃（’、ｔ
ｉ　ｅ　ＯＨより再結晶、微細結晶）ＭＳ：ｍ／Ｚ　；　５４０（Ｍ”　）　ＣｓＪ＜ｓｏｓ
、４９４（Ｍ−ＨＣＯ２１１１０％、２４８（ベースピ
ーク）、２０３　（４０％）、１８９（１５％）、５．２６　（ＬＨ，ｔ、ビニル）　、４．９９（ＬＨ，
ｔ　−ｄ　−Ｊ＝２、０１　（３Ｈ，Ｃ）ｌ、［：０□
）　、１．１０（３１１，Ｓ、ＣＨ，）、０、９５　（
３Ｈ，ｄ、　ＣＨ３）、０．８５　（３Ｈ，ｄ、　ＣＨ
３）、０、８４　（３）１．　Ｓ、　ＣＨ３）、０．８
２　（３Ｈ，Ｓ、　Ｃ）ｌ、）。(Physical properties of [A]) m, I], : L 67.3-169.0°C (', t
i e Recrystallized from OH, fine crystal) MS: m/Z; 540 (M”) CsJ<sos
, 494 (M-HCO21110%, 248 (base peak), 203 (40%), 189 (15%), 5.26 (LH, t, vinyl), 4.99 (LH,
t −d −J=2,01 (3H,C)l,[:0□
), 1.10(311,S,CH,),0,95(
3H, d, CH3), 0.85 (3H, d, CH
3), 0, 84 (3)1. S, CH3), 0.8
2 (3H,S,C)l,).

実施例２？４られた化合物［Ａ］ｌ、５ｍｇに５％ＫＯＨ−Ｍｅ
Ｏ）１１ｍ７！を加え、室温で９０分間攪拌し、蒸留水
を加え希１１Ｃｊ２でｐＨ３にした後、ＥｔＯＡｃで抽
出、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥後、減圧ａ縮し、ＩＩＰＬＣ（
ヌクレオシル５〇−５，８φ×３００胴、ヘキサン：Ｅ
ｔＯＡｃ　＝　２　：１）で精製し、ブルメル酸（４−
ｄｅｍｅｔｈｙｌ　−４，２３−ｄｅｈｙｄｒｏ　−２
ａ　−ｈｙｄｒｏｘｙ　ｕｒｓｏｌｉｃ　ａｃｉｄ）〔
１２１，３１１１ｇを得た。Example 2? 5% KOH-Me to 5 mg of compound [A]
O) 11m7! was added, stirred at room temperature for 90 minutes, added distilled water, adjusted to pH 3 with diluted 11Cj2, extracted with EtOAc, dried over Na2SO4, concentrated under reduced pressure, and analyzed by IIPLC (
Nucleosil 50-5, 8φ x 300 body, hexane: E
tOAc = 2:1) and purified with brumeric acid (4-
demethyl-4,23-dehydro-2
a-hydroxy ursolic acid) [
121,3111 g was obtained.

実施例３結晶Ｍ（３，０ｍｇ）にＣＨ２Ｎ２　／Ｅｔ、０を加え
、常法によりメチルエステル化し、ＨＰＬＣ（ヌクレオ
シル５０−５．８φＸ３００ｍｍ、ヘキサン：ＥｔＯＡ
Ｃ＝１：１）にて分離・精製し、ブルメル酸メチル（ｍ
ｅｔｈｙｌ　−４−ｄｅｍｅｔｈｙｌ　−４，２３−ｄ
ｅｈｙｄｒｏ　−２ａ　−ｈｙｄｒｏｘｙ　ｕｒｓｏｌ
ａｔｅ）　　（ＩＩ）　２．４ｍｇを得た。Example 3 CH2N2/Et, 0 was added to crystal M (3.0 mg), methyl esterified by a conventional method, and HPLC (Nucleosil 50-5.8φ x 300 mm, hexane:EtOA
Methyl brumerate (m
ethyl-4-demethyl-4,23-d
ehydro-2a-hydroxy ursol
ate) (II) 2.4 mg was obtained.

製剤例１（注射・点滴剤）本発明化合物〔Ｉ〕又はＣＩＩ〕１０ｍｇを含有するよ
うに粉末ぶどうＰ５ｇを加えてバイアルに無菌的に分配
し、密封した上、窒累、ヘリウム等の不活性ガスを封入
して冷暗所に保存したｃ使用前にエタノールに溶解し、
０．８５％生理的食塩水１００ｒＩＴｌを添加して静脈
内注射剤とし、１日、１０〜１００ｄを症状に応じて静
脈内注射又は点滴で投与する。Formulation Example 1 (Injection/Drop) 5 g of powdered grape P was added to contain 10 mg of the compound of the present invention [I] or CII, and the vials were aseptically dispensed, sealed, and inert with nitrogen, helium, etc. Filled with gas and stored in a cool dark place.C Dissolved in ethanol before use.
Add 100 rITl of 0.85% physiological saline to make an intravenous injection, and administer 10 to 100 d per day by intravenous injection or drip depending on the symptoms.

製剤例２（注射・点滴剤）本発明化合物〔Ｉ〕又はＣＩＩＥ　２ｍｇを用いて、製
剤例１と同様の方法により軽症用静脈内注射剤とし、１
日、１０〜１００−を症状に応じて静脈内注射又は点滴
で投与する。Formulation Example 2 (Injection/Drop) Using 2 mg of the compound [I] of the present invention or CIIE, an intravenous injection for mild symptoms was prepared in the same manner as in Formulation Example 1.
Administer 10 to 100 doses per day by intravenous injection or infusion depending on the symptoms.

製剤例３（腸溶性カプセル剤）本発明化合物〔■〕又は〔ＩＩ）５ｇ、乳糖２．４６ｇ
及びヒドロキシプロピルセルロース０、０４　ｇを各々
とり、よく混合した後、常法に従って粒状に成形し、こ
れをよく乾燥して篩別してビン、ヒートシール包装など
に適したマ頁粒剤を製造した。次に、酢酸フタル酸セル
ロース０．５ｇ及びヒドロキシプロピルセルロースフタ
レート０．５ｇを溶解して被覆基材となし、前記顆粒を
浮遊流動させつつこの基材を被覆して腸溶性の頚粒材と
した。この組成物をカプセルに充填して腸溶性カプセル
製剤１００個を製造する。Formulation example 3 (enteric-coated capsule) 5 g of the compound of the present invention [■] or [II], 2.46 g of lactose
After thoroughly mixing 0.04 g of hydroxypropyl cellulose and 0.04 g of hydroxypropyl cellulose, the mixture was formed into granules according to a conventional method, thoroughly dried, and sieved to produce mapage granules suitable for bottles, heat-seal packaging, etc. Next, 0.5 g of cellulose acetate phthalate and 0.5 g of hydroxypropyl cellulose phthalate were dissolved to form a coating base material, and the granules were coated with this base material while floating and flowing to obtain an enteric neck granule material. . This composition is filled into capsules to produce 100 enteric-coated capsule preparations.

試験例（制癌活性試験）本発明化合物を用い、前記試験法により書出肉腫細胞の
増殖抑制率（％）を算出したところ、第１表に示す結果
が得られた。Test Example (Anticancer Activity Test) When the growth inhibition rate (%) of written sarcoma cells was calculated using the compound of the present invention according to the test method described above, the results shown in Table 1 were obtained.

なお、比較例として、プルメリア・アクティフォリア・
ボイルより抽出された他のトリテルペン化合ｍ（公知化
合物）である下記の化合物を用いた。In addition, as a comparative example, Plumeria actifolia
The following compound, which is another triterpene compound m (known compound) extracted from Boil, was used.

０化合物〔■〕　ニオレアノール酸（ｏｌｅａｎｏｌｉ
ｃ　ａｃｉｄ）（参考文献：“Ｔｈｅ　Ｍｅｒｃｋ　Ｉ
ｎｄｅｘ　　Ｎ１ｎｅｔｈ　ｅｄ、ｐ８８７）０化合物
〔■〕　：ウルソール酸（ｕｒｓｏｌｉｃ　ａｃｉｄ）
（参考文献：“Ｔｈｅλ１ｅｒｃｋ　Ｉｎｄｅｘ″Ｎ１
ｎｅｔｈ　ｅｄ、、　ｐ１２６９）０化合物〔■〕　：
ラバオール（ｕｖａｏｌ）（参考文献：Ｗ、Ｈ，Ｈｕｉ
　ａｎｄ　！Ｊ、！、１．Ｌｉ、　Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍ
ｉｓｔｒｙ０化合物〔■〕　：クラテゴール酸（ｃｒａ
ｔａｅｇｏｌｉｃ　ａｃｉｄ）（参考文献：Ａ、Ｙａｇ
ｉ、　Ｎ、Ｏｋａｍｕｒａ、　Ｙ、Ｈａｒａｇｕｃｈｉ
。0 compound [■] Nioleanolic acid (oleanoli
c acid) (Reference: “The Merck I
ndex N1neth ed, p887) 0 Compound [■]: Ursolic acid
(Reference: “Theλ1erck Index”N1
neth ed,, p1269) 0 compound [■]:
uvaol (References: W, H, Hui
and! J,! , 1. Li, Phytochem
istry0 compound [■]: Crategolic acid (cra
taegolic acid) (References: A, Yag
i, N, Okamura, Y, Haraguchi
.

Ｋ、Ｎｏｄａ　ａｎｄ　Ｎ１５ｈｉｏｋａ、　Ｃｈｅｍ
、　Ｐｈａｒｍ、Ｂｕｌｌ、、２６０化合物〔■］２α
−ヒドロウルソル酸（２α−ｈｙｄｒｏｘｙｕｒｓｏｌ
ｉｃ　ａｃｉｄ）（参考文献：Ａ、Ｆ、Ｔｈｏｍａｓ　
ａｎｄ　Ｂ、Ｗｉｌｌｈａｌｍ。K, Noda and N15hioka, Chem
, Pharm, Bull, , 260 compounds [■] 2α
-Hydroursolic acid (2α-hydroxyursol)
ic acid) (References: A, F, Thomas
and B, Willhalm.

Ｔｅｔｒｏｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔｅｒｓ、　３１７７
（１９６４）　）手続補正書特許庁長官　黒　１）明　雄　殿り事件の表示　　　昭和６１年特許願第２０２８９７号
２、発明の名称　　　トリテルペン化合物及び制癌剤３
、補正をする者事件との関係　　出願人名称　（６７９）理化学研究所４、代理人ｆ、油止の円谷 ■、　特許請求の範囲を別紙のとおり訂正する。Tetrohedron Letters, 3177
(1964) ) Procedural amendment Commissioner of the Patent Office Black 1) Indication of Yu Akira Tonori case 1985 Patent Application No. 202897 2, Title of invention Triterpene compound and anticancer agent 3
, Relationship with the case of the person making the amendment Applicant name (679) RIKEN 4, Agent F, Tsuburaya of Yutome ■ The scope of the claims is amended as shown in the attached sheet.

２．　明細書第６頁の構造式を、以下の如く訂正する。2. The structural formula on page 6 of the specification is corrected as follows.

「ｑｌ＋・赴３、　同第４頁第２行の“Ｐｌｕｍｅ・・・Ｐａ１ｒ”
をｒＰＩｕｍｅｒｉａ　ａｃｔｉｆｏ’ｌｉａ　Ｐｏ１
ｒ　Ｊと訂正する。"ql+・Go3, "Plume...Pa1r" on page 4, line 2
rPIumeria actifo'lia Po1
r Correct as J.

４、　同第４頁第３行の”Ｋｅｍｂｏｄ、ｉａ　Ｐｕｔ
ｉｎ“をｒＫｅｍｂｏｄｊａ　Ｐｕｔｉｈ　Ｊと訂正す
る。4. "Kembod, ia Put" on page 4, line 3.
in" is corrected as rKembodja Putih J.

５、　同第１５頁第１９行の“ヌクレオシル５Ｏ−５”
を「ヌクレオシル５Ｏ−５ｊと訂正する。5. “Nucleosil 5O-5” on page 15, line 19
is corrected to ``Nucleosil 5O-5j.''

特許請求の範囲（１）構造式：（但し、式中Ｒは水素原子又はメチル基を示す。）で示
されるトリテルペン化合物。Claims (1) A triterpene compound represented by the structural formula: (wherein R represents a hydrogen atom or a methyl group.)

（２）Ｒが水素原子である特許請求の範囲第（１）項記
載の化合物。(2) The compound according to claim (1), wherein R is a hydrogen atom.

（３）Ｒがメチル基である特許請求の範囲第（１〕項記
載の化合物。(3) The compound according to claim (1), wherein R is a methyl group.

（４）構造式：（但し、式中、Ｒは水素原子又はメチル基を示す。）で示されるトリテルペン化合物を有効成分とする制癌剤
。(4) An anticancer agent containing a triterpene compound represented by the following structural formula: (wherein, R represents a hydrogen atom or a methyl group) as an active ingredient.

Claims

【特許請求の範囲】[Claims]

（１）構造式： ▲数式、化学式、表等があります▼ （但し、式中Ｒは水素原子又はメチル基を示す。）で示
されるトリテルペン化合物。(1) Structural formula: ▲There are mathematical formulas, chemical formulas, tables, etc.▼ (However, in the formula, R represents a hydrogen atom or a methyl group.) A triterpene compound represented by the following.

（３）Ｒがメチル基である特許請求の範囲第（１）項記
載の化合物。(3) The compound according to claim (1), wherein R is a methyl group.

（４）構造式： ▲数式、化学式、表等があります▼ （但し、式中、Ｒは水素原子又はメチル基を示す。）で示されるトリテルペン化合物を有効成分とする制癌剤
。(4) Structural formula: ▲There are mathematical formulas, chemical formulas, tables, etc.▼ (However, in the formula, R represents a hydrogen atom or a methyl group.) An anticancer agent containing a triterpene compound as an active ingredient.