JPS63294779A - ハイブリドマ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、広義には、新規な交雑細胞ライン（ｈｙｂｒ
ｉｄ　　ｃｅｌｌ　　１ｉｎｅ）さらに詳しくはすべて
の正常なヒトＴ細胞に見い出されるある抗原に対するモ
ノクローナル抗体の生成のための交雑細胞ラインに関す
る。

１９７５年におけるＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔａｉ
ｎによる免疫されたマウスからの脾細胞へのマウスの骨
髄腫の融合（ｆｕｓｉｏｎ）　　［Ｎａｔｕｒｅ　２５
６．４９５−４９７　（１９７５）］は、均質な（いわ
ゆる「モノクローナル」）抗体をつくる連続な細胞ライ
ンを得ることができることを初めて証明した。この基本
の研究以来、種々の交雑細胞［いわゆる［ハイブリドマ
類（ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ）　Ｊ　］の生成およびこれ
らのハイブリドマ類によりつくられた抗体の種々の科学
的研究への使用について多くの努力が向けられてきた。

たとえば、次の文献を参ｙｔｅ　　Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ
ｓ”　、　Ｆ、　Ｍｅｌｃｈｅｒｓ、　　Ｍ、　Ｐｏｔ
ｔｅｒ、およびＮ　、　Ｗａｒｎｅｒ、　　Ｅ　ｄｉｔ
ｏｒｓ、　　Ｓ　ｐｒｉｎｇｅｒ　−Ｖｅｒｌａｇ＋　
　１９７８、およびそこに含まれる参考文献；　Ｃ，Ｊ
、　Ｂａｒｎｓｔａｂｌｅ、　　ｅｔ　　ａｔ、、　Ｃ
ｅ１ｌ。

１４．９−２０　（Ｍａｙ、　　１９７８）　　；　Ｐ
、　Ｐａｒｈａｍ及びＷ、　Ｆ　、　Ｂｏｄｎ＋ｅｒ、
　　Ｎａｔｕｒｅ　　２７６．３９７−３９９　（Ｎｏ
ｖｅｍｂｅｒ、　　ｌ　９７８）　　；Ｈａｎｄｂｏｏ
ｋ　　ｏｆ　　Ｅ　ｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　　Ｉ　ｍ
ｍｕｎ−ｏ１ｏｇｙ＋　　Ｔ　ｈｉｒｄ　　Ｅｄｉｔｉ
ｏｎ　　Ｖｏｌｕａ＋ａ　　２、Ｄ、　Ｍ、　Ｗｉｅｒ
。

Ｅ　ｄｉｔｏｒ、　　Ｂ　ｌａｃｋｗｅｌｌ、　　１９
７　ｇ、Ｃｈａｐｔｅｒ２５；およびＣｈｅ＋５ｉｃａ
ｌ　　ａｎｄ　　Ｅ　ｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＮｅｗｓ、
　Ｊａｎｕａｒｙ　　１　ｓ　　１９７９．１５−１７
゜これらの文献は同時にハイブリドマ類からモノクロナ
ール抗体を生成する試みによって得られる利益および複
雑さを示している。一般的技術は概念的によく理解され
ているが、各特定の場合に多くの困難に出会い、そして
変更が要求される。事実、一定のハイブリドマを生成し
ようと試みる前には、所望のハイブリドマが得られるか
、得られた場合抗体を生成するか、あるいはそのように
生成された抗体が所望の特異性をもつか、を確かめるこ
とができない。成功の程度は、主として、使用する抗原
のタイプおよび所望のハイブリドマを単離するために使
用する選択技術によって影響を受ける。

人間のリンパ球細胞表面の抗原に対するモノクローナル
抗原を生成する試みは、数例報告されて６６−６９およ
び１６４−１６９参照。これらの報告された実験におい
て使用されている抗原は、培養したリンパ芽球性白血病
およびヒト慢性リンパ球性白血病の細胞ラインであった
。得られた多くのハイブリドマ類は、全てのヒト細胞の
種々の抗原に対して抗体を生成するように思われた。ハ
イブリドマ類はいずれも、ヒトのリンパ球の前もって定
めたクラスに対して抗体を生成しなかった。

人間および動物の免疫系に含まれるリンパ球に２つの主
なりラスが存在することを理解すべきである。これらの
うちの第１クラス（胸腺誘導細胞、すなわち、Ｔ細胞）
は、ヘモポイエチン幹細胞から胸腺において分化されて
いる。胸腺内にある間、分化する細胞は「胸腺細胞」と
名づけられる。成熟したＴ細胞は胸腺から出、そして組
織、リンパ管、および血流の間を循環する。これらのＴ
細胞は、再循環する小さいリンパ球の貯留（ｐｏｏ　ｌ
　）の大きい比率を形成する。それらは免疫額的特異性
を有し、そして細胞介在免疫応答（組織移植注入のはう
な）においてエフェクター（ｅｆｆｅｃｔｏｒ）細胞と
して直接関与する。Ｔ細胞は液性抗体を分泌しないが、
後述するリンパ球の第２クラスによるこれらの抗体の分
泌に時々要求される。Ｔ細胞のいくつかの型は免疫系の
他の面において調節機能をはたす。この細胞共働の過程
の機構はまだ完全には理解されていない。

リンパ球の第２クラス（骨髄誘導細胞、すなわち、Ｂ細
胞）は、抗体を分泌するものである。それらもまたへモ
ボイエチン幹細胞から発生するが、それらの分化は胸腺
によって決定されない。鳥類において、それらはファブ
リキウス嚢（Ｂ　ｕｒｓａｏｆ　　Ｆ　ａｂｒｉｃｉｕ
ｓ）と呼ばれる胸腺に類似する器官において分化されて
いる。しかし、哺乳動物においては、同等の器官は発見
されておらず、そしてこれらのＢ細胞は骨髄内で分化す
ると考えられる。

ここで、Ｔ細胞は「ヘルパー（ｈｅｌｐｅｒ）　Ｊ、「
抑制体（Ａ　ｕｐｐｒａｓｓｏｒ）　Ｊ及び「キラー（
ｋｉｌｌｅｒ）　Ｊ　Ｔ細胞と呼ばれる、少なくとも幾
らかのサブタイプに分１すられ、それらは（それぞれ）
反応を促進し、反応を抑制し、あるいは異種細胞を殺す
（分離する）機能を有することが認められた。

これらのサブクラスはネズミの系統についてよく理解さ
れているが、それぞれ人間の系についてわずかに最近記
載されただけである。たとえば、次の文献を参照：　Ｒ
，Ｌ、　Ｅｖａｎｓ、　　ｅｔ　　ａｌ、。

Ｊ　ｏｕｒｎａｌ　　ｏｆ　　Ｅ　ｘｐｅｒｉｍｅｎＬ
ａｌ　　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ。

Ｖｏｌｕｍｅ　　　１　４５、２２１−２３２、１　９
７７　　；及びり、ＣｈｅｓｓおよびＳ　、　Ｆ　、　
Ｓｃｈｌｏｓｓｍａｎ　−“Ｆｕｎｃｔｔｏｎａｌ　　
　Ａｎａｌｕｓｉｓ　　ｏｆ　　　Ｄｉｓｔｉｎｃｔ　
　　Ｈｕｍａｎ　　Ｔ　−Ｃｅ１ｆ　　　Ｓ　ｕｂｓｅ
ｔｓ　　　Ｂｅａｒｉｎｇ　　ＵｎｉｑｕｅＤｉｆｆｅ
ｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　　Ａｎｔｉｇｅｎｓ”　　“Ｃ
ｏｎｔｅｍｐｏｒａｒｙ　　Ｔｏｐｉｃｓ　　ｉｎ　　
　Ｉ　ｍｍｕｎｂｉｏｌｇｙ　　″　、Ｏ，Ｓｔｕｔｍ
ａｎ、　　　Ｅｄｉｔｏｒ、　　　Ｐ　ｌｅｎｕｍ　　
Ｐｒｅｓｓ、　　　１　９７７、Ｖｏｌｕ＋＋＋ａ　　
　７、３６３−３７９゜Ｔ細胞のクラスまたはサブクラ
スを同定または抑制することができることは、種々の免
疫調節の不調まｔｑは状態の診断または処置にとって重
要である。

たとえば、ある種の白血病およびりンパ臘は、それ等が
Ｂ細胞またはＴ細胞のいずれを源とするかによって、異
なる予後を有する。こうして、病気の予後の評価はこれ
らのリンパ球の２つのクラスを区別することに依存する
。たとえば、次の文献を参照＝　Ａ　、　Ｃ、Ａ　１ｓ
ｅｎｂｅｒｙおよびＪ、Ｃ。

Ｌｏｎｇ、　　Ｔｈｅ　　Ａｍｅｒｉｃａｎ　　Ｊｏｕ
ｒｎａｌ　　ｏｆ　　ＭｅｄｉＢｅｌｐｏｔｓｍｅ、　
　ａｔ　　ａｌ、、　　　Ｉ＋＋＋＋ｕｎｏｌｏｉｃａ
ｌ　　Ｄｉａｎｏｓｉｓ　　ｏｆ　　　Ｌｅｕｋｅ＋ｗ
ｉａｓ　　ａｙｍｄ　　　Ｌｕｍｈｏｍａｓ、　　　Ｓ
。

Ｔｈ１ｅｒｆｅｌｄｅｒ、　　ｅｔ　　ａｌ、、　　Ｅ
ｄｉｔｏｒｓ、　　Ｓｐｒｉｎｇｅｒ、　　Ｈｅｄｅｌ
ｂｅｒｇ、　　ｌ　９７７．３３−４５　；およびり、
　Ｂｅ１ｐｏａ＋ｍｅ、　ｅｔ　ａｌ、、　Ｂｒ１ｔｉ
ｓｈ　Ｊｏｕｒｎａｔ　　ｏｆ　　Ｈａｅｍａｔｏｌｏ
　　＋　　１９７８．３８，８５゜ある種の病気の状態
（たとえば、若年性リウマトイド関節炎およびある種の
白血病）は、Ｔ細胞のサブクラスの不釣合いに関連する
。自己免疫の病気は一般に「ヘルパーＪＴ細胞の過剰ま
たはある種の「抑制体」Ｔ細胞の欠乏に関連するが、悪
性の病気は一般に「抑制体」Ｔ細胞の過剰に関連するこ
とが示唆された。ある種の白血病において、過剰のＴ細
胞は発育の停止した状態において生成される。＃断はこ
うしてこの不釣合い、すなわち、過剰を検知することが
できることに依存しうるであろう。たとえば、次の文献
を参照：Ｊ、Ｋｅｒｓａｙ、　　ａｔ　　ａｌ、、　　
“Ｓ　ｕｒｆａｃｅ　　Ｍ　ａｒｋｅｒｓ　　Ｄ　ｅｆ
　１ｎｅＨｕ＋５ｐａｎ　　Ｌｙｍｐｈｏｉｄ　　Ｍａ
ｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ　　ｗｉｔｈＤｉｆｆｅｒｉｎｇ
Ｐｒｏｇｎｏｓｅｓ”、　　Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇ　　
　ａｎｄＢ　ｆｏｏｄ　　Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ、　
　Ｖｏｌｕｍｅ　　２０　＊　　Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖ
ｅｒｌ ａｇ、１９７７、ｌ　７−２４、およびその中に含まれ
る参考文献。

治療サイドにおいて、まだ明確に証明さていないが、Ｔ
細胞のサブタイプに対する抗体を過剰量で投与すること
は自己免疫の病気または悪性の病気において治療上有益
であるという、いくらかの示唆がある。ヒトＴ細胞の全
クラス（いわゆる抗ヒト胸腺細胞にグロブリン、すなわ
ち、ＡＴＧ）に対する抗血清は、移植組織を受ける患者
において治療上有用であると報告されている。細胞介在
免疫応答（移植組織を拒否する機構）はＴ細胞に依存す
るので、Ｔ細胞に対する抗体を投与すると、この拒否の
過程を防止または遅延する。たとえば、次の文献を参照
：　Ｃｏ５１ｍ１．　　ｅｔ　　ａｌ、、“Ｒａｎｄｏ
ｍｉｚｅｄ　　Ｃ１１ｎｉｃａｌ　　Ｔｒｉａｌ　　ｏ
ｆ　　ＡＴＧ　ｉｎ　　Ｃａｄａｖｅｒ　　Ｒｅｎａｌ
　　Ａｌｌｇｒａｆｔ　　Ｒｅｃｉｐｉｅｎｔｓ：　Ｉ
＋＋ｐｏｒｔａｎｃｅ　　ｏｆ　　Ｔ　　Ｃｅ１ｌ　Ｍ
ｏｎｉｔｏｒｉｎｇ”　、Ｓｕｒｇｅｒｙ４０：１５５
−１６３　（１９７６）およびその中に含まれる参考文
献。

ヒト細胞のクラスおよびサブクラスの同定および抑制は
、従来、動物をヒト細胞で免疫し、その動物を出血させ
て血清を取り、そしてこの抗血清を（たとえば）地元（
ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ）であるが、異種ではないＢ細胞
で吸着して望まない反応性をもつ抗体を除去することに
よって得た、ヒトＴ細胞のための自発性自己抗体または
選択的抗血清を使用することによって達成された。これ
らの抗血清の製造は、とくに吸着および精製の工程にお
いて、極めて困難である。吸着され且つ精製された抗血
清でさえ、所望の抗体に加えて、いくつかの理由で、多
くの不純物を含有する。第１に、血清は、Ｔ細胞で免疫
する前に数百刃の抗体分子を含有する。ｔＪ２に、この
免疫法は注入したすべてのヒトＴ細胞について見い出さ
れる種々の抗原に対する抗体を生成させる。単一の抗原
に対する抗体は選択的に生成されない。だい３にこのよ
うな方法で得られた特異性抗体の力価は通常極めて低く
（たとえば、Ｉｇｌｏｏより大きい希釈度において不活
性）そして非特異性抗体に対する比はｌ／１０’より小
である。

たとえば、前述のＣｈｅｓｓおよびＳ　ｃｈｌｏｓｓｍ
ａｎの文献（３６５ページ以降参照）および前述のＣｈ
ｅａ＋１ｃａｌ　　ａｎｄ　　Ｅ　ｎｇｉｎｅｅｒｉｎ
ｇ　　Ｎ　ｅｗｓを参照。

ここは選考技術の抗血清の欠点およびモノクローナル抗
体の利点が記載されている。

今回、本質的にすべての正常なヒト末梢Ｔ細胞について
見い出される抗原に対する新規なモノクローナル抗体を
生成できる新規なハイブリドマが見出された。そのよう
に生成された抗体は正常なヒトＴ細胞について単一の決
定因子に対して単一特異性（ＩＩＩＨ０５ｐｅｃｉｆｉ
ｃ）であり、そして他の抗ヒト免疫グロブリンを本質的
に含有しないが、これと対照的に選考技術の抗血清は多
数のヒト抗原に対して反応性の抗体で本来汚染されてお
り、そして先行技術モノクローナル抗体はヒトＴ細胞の
抗原について単一特異性ではない。その上、このハイブ
リドマは培養して抗体を生成することができる。この場
合動物を免疫し、殺し、次いで先行技術の不純の抗血清
を得るときにさえ、必要な長たらしい吸着および精製の
工程を実施することを要しない。

したがって、本発明の１つの目的は、本質的にすべての
正常なヒトＴ細胞について見い出される抗原に対する抗
体を生成するハイブリドマ類を提供することである。

本発明のさらに別の面において、これ等のハイブリドマ
類を製造する方法を提供する。

本発明の他の目的は、本質的にすべての正常なヒトＴ細
胞について見い出される抗原に対する本質的に均質な抗
体を提供することである。

さらに他の目的は、これらの抗体を用いる病気の識別方
法を提供することである。

本発明のその他の目的および利益は、本発明の開示を検
討すると明らかになるであろう。

前述の目的および利益は達成するため、本発明によれば
、本質的にすべての正常なヒトＴ細胞について見い出さ
れる抗原に対する新規な抗体を生Ａｌｌ＆　９　ＱＷｍ
／！”４　／ソｒｗ、　Ｑ　Ｖ）　ｍ　％　＜　ｒＬ　
目％、およびこの抗体を用いる診断および治療の方法が
提供される。該ハイブリドマはＭｉｌｓｔｅｉｎ　ｉ；
よびＫｏｈｌｅｒの方法に一般に従って製造される。

正常のＥロゼツト（「ｏｓｅｔｔｅ）陽性のヒトＴ細胞
でマウスを免疫した後、免疫したマウスの脾細胞をマウ
スの骨髄腫ラインからの細胞と融合し、そして得られた
ハイブリドマ類を正常のＥロゼツト陽性のヒトＴ細胞に
選択的に結合する抗体を含有する上澄液を用いてそれら
について選別した。所望のハイブリドマ類を引き統いて
クローニングし、特性づけた。その結果、本質的に全て
の正常なヒトＴ細胞についての抗原に対する抗体（ＯＫ
ＴＩと表示する）を生成するハイブリドマが得られた。

この抗体は本質的にすべての正常なヒト末梢Ｔ細胞と反
応するが、他の正常な末梢の血液のリンパ様細胞と反応
しない。更に、この抗体により認識される細胞表面の抗
原は成熟した胸腺抗原についてのみ検出され、そして正
常なヒト胸腺細胞の９０％より多くはこの抗原を完全に
欠いている。

先行技術において示された困難および抗原として悪性の
細胞ラインを用いて報告された成功の不足を見ると、本
発明の方法が所望のハイブリドマを提供したことは驚く
べきことであった。交雑細胞のこの予測されえない性質
は１つの抗原または細胞ラインから他のものへの補外（
ａｘｔｒａｐｏｌａｔｅ）を許さないことに注意すべき
である。事実、本発明者らは、抗原としてＴ細胞の悪性
細胞ラインを用いると、所望の抗体を生成しないハイブ
リドマ類が形成することを見い出した。細胞表面から分
離した精製した抗原を使用する試みも不成功に終った。

このハイブリドマおよび生ずる抗体の製造および特性は
、以下の説明および実施例から一層理解できるであろう
。

ハイブリドマを製造する方法は一般に次の工程からなる
： Ａ、Ｅロゼツト陽性の精製した正常なヒト末梢Ｔ細胞で
マウスを免疫する。メスのＢａ１ｂ／ｃＪマウスが好ま
しいことがわかったが、他のマウスの系統を使用できる
と考えられる。免疫スケジュールおよびＴ細胞の濃度は
、有効量の適当に準備した牌細胞を生成するようなもの
であるべきである。Ｑ、２ｍ４のリン酸塩緩衝食塩液中
の２Ｘ　Ｉ　Ｏ７細胞／ヤウス／注射を用いて、１４日
の間隔で、３回免疫を行なことは有効であることがわか
った。

Ｂ、免疫したマウスから肺臓を除去し、適当な媒体中の
牌懸濁液を調製する。約１ｎ（１／牌臓の媒体で十分で
ある。これらの実験の技術はよく知られている。

Ｃ０懸濁した牌細胞を適当な細胞ラインからのマウスの
骨髄腫の細胞と、適当な融合媒体の使用により融合する
。牌細胞対骨髄腫細胞の好ましい比は５対ｌである。約
ｌＯ８この牌細胞について合計約０．５〜１．ＯｍＭの
融合媒体は適当である。

多くのマウスの骨髄腫の細胞は知られており、そして一
般に学問的共同体のメンバーまたは種々の寄託機関、た
とえば、ザ・ソーク・インスチチュート・セル・デイス
トビューシ鍾ン串センター（ｔｈｅ　　５ａｌｋ　　　
Ｉ　ｎ５ｔｉｔｕｔｅ　　Ｃｅ１ｆ　　Ｄ　１ｓｔｒｉ
ｂｕｔｉｏｎ　　Ｃｅｎｔｅｒ、　　Ｌａ　　Ｊｏｌｌ
ａ、　　ＣＡ）から入手できる。使用する細胞ラインは
好ましくはいわゆる「薬物抵抗性ｊ型であって、未融合
の骨髄腫細胞が選択した媒体中で生存せず、一方交雑細
胞が生存するようにすべきである。最も普通の群は８−
アザグアニン抵抗性の細胞ラインであり、これは酵素ヒ
ポキサンチン・グアニン争ホホリボシル・トランスフェ
ラーゼ（ｐｈｏｐｈｏｒｉｂｏｓｙｌ　　ｔｒａｎｓｆ
ｅｒａｓｅ）を欠き、それゆえＨＡＴ　（ヒボキサンチ
ン、アミノプテリン、およびチミジン）媒体により支持
されない。また、使用する骨髄腫細胞ラインはいわゆる
「非分泌」塁である、すなわち、それはそれ自体抗原体
を生成しないことが一般的に好ましいが、分泌をを使用
できる。しかしながら、ある場合において、分泌する骨
髄腫ラインは好ましいことがある。好ましい融合促進剤
は平均分子量が約１０００〜約４０００であるポリエチ
レングリコール（商業的にＰＥＧ１００Ｏなどとして入
手できる）が好ましいが、この公費において知られてい
る他の融合促進剤を使用できる。

Ｄ、別の容器内において、未融合の牌細胞、未融合の骨
髄腫細胞、および融合した細胞の混合物を、未融合の骨
髄腫細胞を支持しない選択的媒体中で希釈し、未融合の
細胞を死亡させるのに十分な時間（約１時間）培養する
。この希釈は限定されたものの型であることができ、こ
の希釈において希釈剤の体積は統計的に計算して各別々
の容器［たとえば、マイクロタイタープレートの各ウェ
ル］中である数の細胞（たとえば、１〜４）を単離する
。媒体は薬物抵抗性（たとえば、８−アザグアニン抵抗
性）で未融合の骨髄腫細胞ラインを支持しないもの（た
とえば、ＨＡＴ媒体）である。

それゆえ、これらの骨髄腫細胞は死ぬ。未融合の牌細胞
は非悪性であるので、有限の数の世代をもつだけである
。こうして、ある期間（約１時間）後、これらの未融合
の牌細胞は再生しない。融合した細胞は、これに対して
、骨髄腫の親の悪性をもち、そして牌細胞の親の選択的
媒体中で生存できるので、再生し続ける。

Ｅ、ハイブリドマを含有する各容１）（ウェル）中の上
澄液を、Ｅロゼツト陽性の精製したヒトＴ細胞に対する
抗体について評価する。

Ｆ、所望の抗体を生成するハイブリドマを選択しくたと
えば、限定希釈により）そしてクローニングする。

いったん所望のハイブリドマを選択し、クローニングす
ると終結の抗体は２つの方法の１つで生成させることが
できる。最も純粋なモノクローナル抗体は、所望のハイ
ブリドマを適当な媒体中で適当な長さの時間試験内で培
養し、次いで所望の抗体を上澄液から回収することによ
って生成される。適当な媒体及び適当な培養時間の長さ
は、既知であるか、あるいは決定容易である。この試験
管内技術は、他の特異性の抗ヒト免疫グロブリンを本質
的に含まない、単一特異性モノクローナル抗体を本質的
に生成する。媒体は外因性血清（たとえば、胎児の子牛
の血清）を含有するので、少量の他の免疫グロブリンが
存在する。しかしながら、この試験管内の方法は、モノ
クローナル抗体の濃度がわずかに約５０μｇ　／　ｍ　
Ｑであるので、十分な量または濃度を生成できない。

非常に多きい濃度のわずかに純度に劣るモノクローナル
抗体を生成させるため、所望のハイブリドマをマウス、
好ましくは先天性または生先天性のマウスに注射できる
。ハイブリドマは適当な潜伏時間抜抗体生成の腫腸を形
成させ、その結果宿主マウスの血流および腹膜滲出液（
腹水）中に高濃度の所望とする抗体（約５〜２０ｍｇ／
ｍＱ）が生ずる。これらの宿主マウスの正常の抗体を血
流および腹水中に有するが、これらの正常な抗体の濃度
はモノクローナル抗体濃度のわずかに約５％であるにす
ぎない。その上、これらの正常の抗体は特異性が抗ヒト
でないので、収穫した腹水または血清から得たモノクロ
ーナル抗体は汚染する抗ヒト免疫グロブリンを本質的に
含有しない。このモノクローナル抗体は力価が高く（１
：３０．０００以上の希釈で活性である）そして特異性
免疫グロブリン対非特異性免疫プロプリンの比が高い（
約１／２０）。Ｋ軽量の骨髄腫鎖を組込んだ生成した免
疫グロブリンは非特異性の「無意味な」ペプチド類であ
り、これらはモノクローナル抗体をその特異性を減じ得
ないで単に希釈するだけである。

実施例　■ メスのＢ　ａ　Ｉ　ｂ　／　ｃ　Ｊマウス（Ｊ　ａｃｋ
ｓｏｎ研究所；生まれてから６週間）を、０．２　ｍＱ
のリン酸塩緩衝食塩溶液中の２Ｘ１０’のＥロゼツト精
製したＴ細胞で腹膜内的に１４日の間隔で免疫した。

第３回目の免疫後、牌をマウスから取り出し、そしてス
テンレス鋼の鋼に組織を通すことによって単一細胞の懸
濁液をつくった。

細胞の融合を　ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔａｉｎの
方法に従って実施し？＝、＋１ｘｌＯ’の牌細胞を、Ｒ
ＰＭＩ１６４０媒体（Ｇ　１ｂｃｏ、　　Ｇ　ｒａｎｄ
　　Ｉ　ｓｌａｍｄ。

ＮＹ）中の３５％のポリエチレングリコール（ＰＥＧ１
００Ｏ）と５％のジメチルスルホキシドとからなる融合
媒体の０−５ｍ４中において、２×１０’のＰ３Ｘ６３
Ａｇ８Ｕ１骨髄腫細胞（Ｂｒ。

Ｍ、　　５ｃｈａｒｆｆ、　　　Ａｌｂｅｒｔ　　Ｅｉ
ｎｓｔｅｉｎ　　ＣｏｌｌＣｏ１１ｅ　　Ｍｅｄｉｃｉ
ｎｅ、　　Ｂ　ｒｏｎｘ、　　Ｎ　Ｙにより供給）と融
合した。これらの骨髄腫細胞はＩｇＧ１にＬ鎖（ｌｉｇ
ｈｔ　　ｃｈａｉｎｓ）を分泌する。

Ｂ、ハイブリドマの選択および成長 細胞の融合後、細胞をＨＡＴ媒体（ハイポキサンチン。

アミノブチリン、およびチミジン」中で３７℃において
５％のＣＯ３を使用して湿ったふん囲気中で培養した。

数週間後、ハイブリドマ類を含有する培養液から４０〜
１００μＱの上澄液を、Ｍｅｎｄｅｓ　（Ｊ　、　　Ｉ
ｍｍｕｎｏｌ、　　ｌ　ｌ　ｌ　：　８６０．１９７３
）が記載するように健康なヒトの供与者の血液から調製
した、Ｅロゼツト陽性（Ｅつ個体群とＥロゼツト陰性（
Ｅ−）個体群とに分けｔ；１０’の末梢リンパ球のベレ
ットに加えた。これらの細胞へ結合するマウスのハイブ
リドマ抗体の検出は、ラジオイムノアセイおよび／また
は間接免疫蛍光法により決定した。第１の方法において
、細胞は初め１００μａの親和性精製した１１１　（山
羊の抗マウスＩｇＧ　（１０’ｃｐｍ／μｇ；５００μ
ｇ／μｇ）の１００μｇと反応させた（山羊の抗マウス
のヨウ素化の詳細はＫｕｎｇ、　　ａｔ　　ａｌ、、　
Ｊ　。

Ｂｉｏｌ、　　Ｃｈｅｅｐ、　　２５１　（８）：２３
９９．１９７６に記載されている）。別法として、培養
液の上澄液で培養した細胞を蛍光を付与した山羊の抗マ
ウスＩ　ｇＧ　（Ｇ／Ｍ　　Ｆ　Ｉ　ＴＣ）　　（Ｍａ
ｌａｙ研究所、Ｓｐｒｉｎｇｆｉｄｌｄ、　　ＶＡ　：
　Ｆ／Ｐ＝２．５）で染色し、この蛍光性抗体被覆細胞
を引き続いてシトフルオログラフ（Ｃｙｔｏｆｉｕｏｒ
ｏｇｒａｆ）　Ｆ　Ｃ２００／　４８００　Ａ　（Ｏｒ
ｔｈｏ　　Ｉ　ｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ。

Ｗｗｓｔｗｏｏｄ、　　Ｍ　Ａ　）について実施例■に
記載するように分析した。Ｅ＋リンパ球（Ｔ細胞）と特
異的に反応する抗体を含有するハイブリドマ培養液を選
択し、クローニングした。引き続いて、クローンを２．
６，１０．１４−テトラメチルペンタデカン（Ａ　Ｉｄ
ｒｉｃｈ　　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　　Ｃｏｍｐａｎｙから
商品名Ｐ　ｒｉｓｔｉｓｔｉｎｅで市販されている）で
準備したＢａ１ｂ／ｃＪマウスに一定のクローンのｌ×
１０７細胞（０，２ｍＱの体積）を注射することによっ
て、腹膜内に移植した。ついでこれらのマウスからの悪
性腹水を使用して、実施例■において後述するように、
リンパ球を特性つけた。主題の交雑抗体０ＫＴＩは、標
準の技術によりサブクラスＩｇＧ１であると証明された
。

実施例　■ 人間の末梢血液の単核細胞を、健康な志願者の提供者（
１５〜４０才）から、Ｂ　ｏｙｕｍ、、　　Ｓ　ｃａｎ
ｄ。

Ｊ、　Ｃ１１ｎ、　　Ｌａｂ、　　Ｉｎｖｅｓｔ、　２
１　（Ｓｕｐｐｌ。

９７）ニア７．１９６８の技術に従い、フィコール−ハ
イバック（Ｆ　１ｃｏｌｌ　−Ｈｙｐａｑｕｅ）密度勾
配遠心分離（Ｐ　ｈａｒｍａｃｉａ　　Ｆ　ｉｎｅ　　
Ｃｈｅｎｉｃａｌｓ、　Ｐ　ｉｓｃａｔａｗａｙ、　　
Ｎ　Ｊ　）により単離した。分別しない単核細胞を、Ｃ
ｈｅｓｓ、　　ｅｔ　　ａｌ、、　Ｊ　、　　Ｉ　ｍｍ
ｎｕｏｌ。

１１３：１１１３（１９７４）にすでに記載されティる
ように、Ｓ　ｅｐｈａｄｅｘ　　Ｇ　−２００抗（ａ　
ｂ　’）ｚカラムクロマログラフイーにより、表面１　
ｇ　＋（Ｂ）およびＩｇ−（ＴプラスＮｕｌｌ）の個体
群に分離した。Ｔ細胞はＩｇ−個体群を５％の羊の赤血
球（Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　　Ａｓ５ｏｃｉ
ａｔｅｓ、　　Ｂｅｔｈｅｓｄａ、　　Ｍ　Ｄ　）でＥ
ロゼツト化することによって回収した。ロゼツト化した
混合物をフィコール−ハイバック（Ｆ　１ｃｏｌ　１−
　Ｈｙｐａｗｑｕｅ）上で層状にし、回収したいＥ＋ペ
レットを０．１５５モルのＮＨ，１（１０ｍＩ２／１０
”細胞）で処理した。このようにして得られたＴ細胞の
個体群は、標準法により決定して、く２％ＥＡＣロゼツ
ト陽性および〉９５％Ｅロゼツト陽性であった。さらに
、非ロゼツトＩ　ｇ−（Ｎｕｌｌ細胞）個体群をフィコ
ール表面から収穫した。この後者の個体群はく５％Ｅ”
および≦２％ｓ１ｇ＋であった。表面Ｉｇ”（Ｂ）個体
群は、前述のようにＳ　ｅｐｈａｄｅｘ　　Ｇ　−２０
０カラムクロマトグラフイーおよび引き続く正常なヒト
・ガンマグロブリンによる溶離から得られた。この個体
群は〉９５％表面１ｇ＋および〈５％Ｅ＋であった。

正常なヒト大食細胞は、ポリスチレンへの付着により、
単核個体群から得た。こうして、単核細胞を最終培地（
ＲＰＭ１１６４０．２．５ミリモルのＨＥＰＳ　［４−
（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンプロパンス
ルホン酸］　緩衝剤、０．５％の重炭酸ナトリウム、２
００ミリモルのし一グルタミン、および１％ペニシリン
−ストレプトマイシンからなり、２０％の熱失活したヒ
トＡＢ血清を補足した）中に２ＸＩＯ’細胞濃度で再懸
濁し、プラスチックのペトリ皿（１００ｘ２０ｍｍ）　
　（Ｆａｌｃｏｎ　　Ｔｉ５ｓｕｅ　　Ｃｕ１ｔｕｒｅ
　　Ｄｉｓｈ　；　Ｆ　ａｌｃｏｎ、　　Ｏｘｎａｒｄ
、　　ＣＡ　）中で３７℃において一夜培養した。よく
洗って非付着性細胞を除去した後、２．５ミリモルのＤ
ＴＡを含有する冷たい血清不合媒体で強く洗い、時々使
い捨て注射器のプランジャーのゴムの先端で引っかいて
、付讃した固体群を脱着した。８５％より多い細胞個体
群は、ラテックス粒子を摂取することができ、そしてラ
イトーギエムサ（Ｗｒｉｇｈｔ　−Ｇ　ｉｅｍｓａ）染
色により単球の形態学的特性を有した。

Ｂ、正常な胸腺 正常人の胸腺を２月〜１４才の年令の患者から、心臓の
矯正手術のもとに得た。胸腺の新しく得た部分を媒体１
９９　（Ｇｉｂｃｏ）中の５％胎児の子牛の血清中に直
ちに入れ、鉗子とはさみで小さく切り、引き続いて金網
を通してプレスすることによって単細胞の懸濁液にした
。細胞を次に前節Ａで説明したように、フィコール−ハ
イパツクで層状にし、回し、洗浄した。このようにして
得られた胸腺細胞は〉９５％生活力があり、そして≧９
０ロゼツト陽性であった。

Ｃ８細胞ライン（Ｃｅｌｌ　　１ｉｎｅｓ正常な４個体
からエプスタイン−パールウィルス（Ｅｐｓｔｅｉｎ　
−Ｂａｒｒ　　Ｖｉｒｕｓ）　　（Ｅ　Ｂ　Ｖ）変形し
た細胞ラインを前述のように調製した。Ｔ細胞ラインＣ
ＥＭ’Ｈ５Ｂ−２、及びＨＪＤ−１は、Ｄ　ｒ、　　Ｈ
、Ｌ　ａｚａｒｕｓ　（Ｓ　１ｄｎｅｙ　　Ｆ　ａｒｂ
ｅｒ　　Ｃａｎｃｓｒ　　Ｉ　ｎ５ｔｉＬｕｔｅ、　　
Ｂ　ｏｓｔｏｎ、　Ｍ　Ａ　）により提供された。

上記細胞を調製するに当って、確立したリンパ芽球細胞
ラインへのヒトリパ球の形質転換は、エプスタイン−バ
ールウィルスの生物学的性質としてよく知られている。

このような細胞の形質転換は、度々文献に記載され例え
ばジェイ・エイチ・ポペ、エム・ケイ・ホーンおよびダ
ブリュ・スエットがインターナショナル・ジャーナル・
オプ・カンサー３号８５７８６７頁［Ｐｏｐｅ、　　Ｊ
　、　Ｈ，。

Ｍ、　Ｋ、　Ｈｏｒｎｓ　　ａｎｄ　　Ｗ＝　５ｃｏｔ
ｔ　　ｉｎ　　Ｉｎｔ。

Ｊ、　Ｃａａｎｃｅｒ、　　３　；　８５７−８６７、
（１９６８）、］における“ヘルペス様ウィルスを含有
するヒト白血球細胞ラインから口別したものによる試験
管内においてヒト胎児リンパ球の形質転換”［“Ｔ　ｒ
ａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ　　ｏｆ　　Ｆ　ｅｔａｌ　
　Ｈｕｍａｎ　　Ｌ　ｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ　　Ｉ　ｎ
　−Ｖ　１ｔｒｏ　　Ｂ　ｙ　　Ｆ　１ｌｔｒａｔｅｓ
ｏｆ　　ａ　　Ｈｕｍａｎ　　Ｌｅｕｋｅｍｉｃ　　Ｃ
ｅ１ｌ　　Ｌｉｎｅ　　Ｃａｎｔａｉｎｉｎｇ　　Ｈｅ
ｒｐｅｓ−Ｌｉｋｅ　　Ｖｉｒｕｓ”ｌ　という標題の
論文に詳細に説明されている。。

白血病細胞は１２人のＴ−ＡＬＬの患者から得た。これ
らの固体の細胞は、Ｓ　ｃｈｌｏｓｓ■ａｎ、　　ｅｔ
ａｌ、Ｐｒｏｃ、　　Ｎａｄ、　　Ａｃａｄ、　　Ｓｃ
ｉ、　　　７３　　：　　１２８８　（１９７６）によ
るすでに記載され得いるように、羊の赤血球との自発ロ
ゼツト形成（〉２０％Ｅつ、およびＴ細胞特異性異質抗
血清、抗ＨＴＬ　（抗−Ｂ、に、　）およびＡ９９との
反応性によりＴ細胞結合をもつとすでに決定された。

３固体からの腫瘍細胞はウサギおよび／または馬の抗Ｔ
Ｈ，と反応性（Ｔ　Ｈ＊っであったが、残る９個体から
の細胞は非反応性であった（Ｔ）！、つ。

ウサギおよび／または馬抗ＴＨ，は、特有の機能特性“
ＴＨ！！”を有する、Ｔ細胞個体群の特殊なサブセット
と結合するウサギまたは馬から誘導された異種抗血清の
ことである。このことは下記の文献に述べられている。

イー・エル・エフ・ラインヘルツとニス・エフ・シュロ
スマン［Ｒｅｉｎｈｅｌｚ、　　Ｅ、　Ｌ、　Ｎ、　、
　５ｃｈｌｏｒｓａ＋ａｎｎ、　　Ｓ、　Ｆ、　］のＪ
　ｏｕｒｎａｌ　　ｏｆ　　Ｉ　ｍｍｕｎｏｌｏｇｙ　
　１２２．１３３５−１３４１　（１９７９）。Ｔ　Ｈ
！−’ｒ　−ＣＬ　Ｌの２人の患者からの白血病細胞も
使用した。両方の急性および慢性の白血病細胞を１０％
のジメチルスルホキシドおよび２０％のＡＢヒト血清中
の一１９６℃の蒸気相液体窒素中で、表面特性づけの時
間まで、凍結保存した。分析した腫瘍個体群は、すべて
の場合においてライトーギュムサ（Ｗｒｉｇｎｔ　−Ｇ
　ｉｅ＋５ｓａ）形態学により〉９０％芽細胞であった
。

実施例　■ すべての細胞個体群のシトフルオログラフ分析を、シト
フルオログラフ（Ｃｙｔｉｆｌｕｏｒｏｇｒａｆ）　Ｆ
Ｃ２００／４８００Ａ　（Ｏｒｔｈｏ　　Ｉｎ５ｔｒｕ
ａ＋ｅｎｔｓ）で蛍光共役した羊の抗マウスＩｇＧ（Ｇ
／Ｍ　　ＦＩＴＣ）　　（Ｍｅｌｏｙ　　Ｌａｂｏｒａ
ｔｏｒｉｅｓ）を用いて間接免疫蛍光法により実施した
。要約すると、１〜２Ｘ１０’細胞を０−１５ｍ（ｌに
０ＫＴＩで１＝１０００希釈において処理し、４℃で３
０分間培養し、２回洗浄した。次いで細胞をＯ−１５ｍ
ｎのｌ：４０希釈のＧ／Ｍ　　ＦＩＴＣ：で４℃におい
て３０分間反応させ、遠心分離し、３回洗浄した。

次いでこれらの細胞をシトフルオログラフで分析した。

蛍光の強さ／細胞をパルス高さ分析器に記録した。同様
な反応性のパターンはｌ：３０．０００の希釈で観察さ
れたが、これよりさらに希釈すると反応性は失なわれた
。バックグラウンドの染色は、非生虞***雑分校系で腹
膜的に免疫したＢ　ａ　１　ｂ　／　ｃ　Ｊ　マウスか
らのｌ：１０００腹水のＯ−１５ｍＱ部分を代わりに使
用することによって得た。

０ＫＴＩ”細胞および０ＫＴｌ−細胞を分離するように
設計した実験において、１００ＸＩＯ・の未分別単核細
胞または胸腺細胞を、４ｍＱのｌ：１０００希釈の０Ｋ
ＴＩで標識付し、Ｇ／Ｍ　　ＦＩＴＯで現像した。同一
の染色アプローチを用いて、前記実施例ｍＡにおけるよ
うに単離したヒトＴ細胞を調製した。蛍光で活性化した
細胞分類体（ＦＡＣ５−１）　　（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉ
ｃｋｉｎｓｏｎ、　　Ｍｏｕｎｔａｉｎ　　Ｖ　ｆｅｗ
、　ＣＡ　）を用いて、リンパ球を０ＫＴｌ　＋固体群
と０ＫＴ１−個体群とに分離し、および／またはＴ細胞
を弱反応性０ＫＴ１”Ｔ細胞（蛍光の２０％より小）お
よび強反応性０ＫＴＩ”Ｔ細胞（蛍光の２０％以上）に
分別した。後の種類の生活力はすべての場合においてト
リパン（Ｔ　ｒｙｐａｎ）ブルー排除により〉９５％で
あった。

すべての分離した個体群の純度は≧９５％であった。

実施例　■ 機能的研究 未分離およびＦＡＣ３分別のリンパ様細胞の有光応答を
、Ｃｈｅｓｓ、　　ａｔ　　ａｌによりすでに記載され
たように、微量培養において、コンカナバリン（Ｃｏｎ
ｃａｎａｖａｌ　ｉｎ）　Ａ　（Ｃｏｎ　Ａ　）　　（
Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ。

Ｌａ　　Ｊｏｌｌａ、　　ＣＡ）およびフィトヘマグク
ルチニン（ｐｈｙｔｏｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ）　
　（Ｐ　ＨＡ　）の最適投与に対して試験した。異種抗
原増殖応答を、これらの同じ個体群について、マイトマ
イシン処理Ｌａｚ１５６、刺激としてＤ　ｒ　、　Ｈ、
Ｌａ５ａｒｕｓから得られたＥＢＶ変形したヒトＢリン
パ芽球様細胞ラインを用いて、同時に測定した。破傷風
トキソイド（Ｍ　ａｓｓａｃｈｕｓａｔｔｓ　　Ｄ　ｅ
ｐａｒｔｓ＋ｅｎｔ　　ｏｆ　　Ｐ　ｕｂｌｉｃ　　　
Ｈｅａｌｔｈ　　　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　　　Ｌａｂ
ｏｒａｔｏｒｉｅｓ。

Ｂ　ｏｓｔｏｎ、　　Ｍ　Ａ　）に対する増殖を、Ｅｖ
ａｎｓ、　ｅｔ−ａｌ、　　（Ｊ、　　Ｉｎｎｕｎｏｌ
、　　ｌ　２９　：　１４２３．１９７８）によりすで
に記載されているように、ｌＯｐｇ／ｍ１２の最終濃度
を用いて試験した。上に記載される方法で得られた５％
の大食細胞を、すべての個体群に試験管内培養の開始時
に加えた。

糸状体（ｍｉｔｏｇｅｎ）刺激された培養を４日後０．
２μＣｉのトリチウム化サイミジン（ｔｒｉｔｉａｔｅ
ｄｔｈｙｍｉｄｉｎｅ）　　（１、９Ｃｉ　／ミリモル
の比活性；Ｓｃｈｗａｒｔｚ−Ｍａｎｎ　　Ｄｉｖｉｓ
ｉｏｎ　　ｏｆ　　Ｂｅｃｔｏｎ　−Ｄ　１ｃｋｉｎｓ
ｏｎ、　　Ｏｒａｎｇｅｂｕｒｇ、　　Ｎ　Ｙ　）でパ
ルスし、１８時間後ＭＡＳＨＩ［装置（Ｍ　ｉｃｒｏｂ
ｉｏｌｏｇｉｃａｌＡｓｓｏｃｉａｔａｓ、、、Ｂｅｔ
ｈｅｓｄａ、　　ＭＤ）で収穫した。

トリチウム化サイミジンの結合をパラカード・シンチレ
ーシヨン・カウンター（Ｐ　ａｃｋａｒｄ　　Ｉ　ｎｓ
ｔｒｕｍｅｎｔ　　Ｃｏｍｐａｎｙ、　　Ｄｏｖｎａｒ
’ｓ　　Ｇｒｏｖｅ、　　ＩＬ）で測定した。バックグ
ラウンドのトリチウム化サイミジンの結合は、有糸体の
かわりに媒体を用いて得た。破傷風トキソイド刺激培養
物および異種抗原刺激培養物を、５日後、前述のように
、トリチウム化サイミジンで１８時間パルスし、収穫し
、計数した。

ハイブリドマの生成、および生ずるモノクローナル抗体
の生成および特性づけは、上の実施例におけるように実
施した。大量の主題の抗体を、主題のハイブリドマのマ
ウスへの腹膜的注射及び悪性腹水の収穫により調製した
が、ハイブリドマは試験管内でこの分野においてよく知
られた技術により培養し、抗体を上澄液から取り出すこ
とができることは、明らかに考えられる。

主題のハイブリドマの試料は、アメリカン・タイプ・カ
ルチャー・コレクシ履ン（１２３０１Ｐａｒｋｌａｗｎ
　　Ｄｒｉｖｅ、　　Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、　ＭＤ、　
２０８５２）に１９７９年３月１３日に寄託され、ＡＴ
ＣＣ番号ＣＲＬ８０００が付された。

第１図に示すように、一定の正常な個体の全ヒト末梢血
液Ｔ細胞の個体群は０ＫＴｌと反応性であるが、これに
対して同じ個体から単離された全Ｂ細胞、無特徴細胞お
よび大−食細胞の個体群は０ＫＴＩと非反応性である。

他の正常な１５個体からのリンパ球の個体群について同
様な結果が得られた。こうしてモノクローナル抗体は、
本質的にすべての正常なヒト末梢Ｔ細胞の表面上に含有
される抗原と反応性であるが、第１図に示す他の３つの
細胞の塁の表面上の抗原と非反応性であると、特性づけ
られる。この特異の反応性は、主題の抗体０ＫＴ１を検
出でき、そして他の抗体と区別できる１つの試験である
。

第２図に示すよう内、６力月の乳児からの正常なヒト胸
腺細胞のほとんど大部分は０ＫＴＩと完全に非反応性で
あるが、胸腺細胞の約５〜ｌＯ％は反応性である。この
発見の意味は、幹細胞が成熟したＴ細胞に変わる分化過
程の間、胸腺細胞がある段階で、０ＫＴｌと反応性であ
る、Ｔ細胞上に見い出される同じ表面の抗原を獲得する
ということにある。これらの胸腺細胞は、胸腺から血流
中へ出る直前の分化の後の段階にあると信じられる。２
力月〜１９才の年令の正常な個体からの６つの追加の胸
腺の試料を用いて、同様な結果（５〜ｌＯ％の反応性）
が得られた。第２図における反応性のパターンは、主題
の抗体０ＫＴＩを検出し、それを他の抗体と区ｆｌ１１
する第２の方法を提供する。

主題の抗体の診断的使用は第３図に図解されており、こ
の図においてＴ急性リンパ芽球性白血病（Ｔ−ＡＬＬ）
患者からの白血病細胞はＯＫＴ　ｌと非反応性であるが
、これに対してＴ慢性リンパ芽球性白血病（Ｔ−ＣＬＬ
）患者からの白血病細胞は０ＫＴＩと反応性であったこ
とが示される。

したがって主題の抗体は、白血病の２種の白血病の間を
区別する方法を提供する。Ｔ−ＡＬＬおよびＴ−ＣＬＬ
のある段階の間を区別することは困難であり、そして予
後および処置の養生法の両方はこれらの２種の白血病の
間で実質的に相違するので、主題の抗体を使用して提供
された２種の間を区別する直接的方法は優位の進歩であ
ることを理解できる。

主題の抗体０ＫＴＩのほかの特性づけは、第４図に図解
される種々のヒトＴ細胞ラインに対する反応によって示
される。この図かられかるように、主題の抗原のヒトＴ
細胞ラインに対する反応性は不均質であり、ラインＨＪ
Ｄ−１について強く、ラインＯＥＭについて中程度であ
り、ラインＨ５Ｂ−２について不存在である。このＯＫ
Ｔ　１の種々の入手容易なヒトＴｍ胞ラインに対する特
異の反応性は、主題の抗体を特性づけかつ説明するなお
他の方法を提供する。

第５図は、０ＫＴｌとヒトＴ細胞ラインＬａｚ００７と
の反応性の欠乏を図解する。試験した他のＥＢＶ変形Ｂ
ｍ胞ラインについて同一のパターンが得られた。これは
、正常なヒト個体群の末梢血液から得られたＢ１ｍ胞と
の０ＫＴｌの反応性の欠乏をさらに確認し、そして主題
の抗体ＯＫＴ　１を特性づけかつ区別するなお他の方法
を提供する。

機能的研究を、蛍光活性化細胞セパレーター（ＦＡＣ５
）分離したリンパ様個体群について実施した。これらの
研究の結果は下表Ｉ〜■に示されており、そして主題の
モノクローナル抗体の前述の特性づけを裏書きする。

表工に示すように、Ｐ　ＨＡ　ｓ　Ｃｏｎ　Ａ　Ｘ可溶
性抗原、および混合リンパ球培養物中の異種抗原への応
答の本質的にすべては０ＫＴＩに対して応答性の細胞の
個体群に帰する。０ＫＴＩに非反応性の個体群はこれら
のＴ細胞機能のいずれをも生じないように思われ、わず
かの応答は０ＫＴＩ”細胞による起こりうる汚染による
ものと考えられる。

これらの機能の研究がさらに明らかにするように０ＫＴ
Ｉが反応性である抗原はＴ細胞上に存在し、その理由は
そのような反応性の個体群がＴ細胞の機能を示すが、そ
のように反応性ではない個体群はこれらのＩｌ能のいず
れをも示さないことにある。

表Ｈは、ＦＡＣ５で分離された強＜ＯＫＴ１反応性Ｔｍ
胞と弱＜ＯＫＴ１反応性Ｔ細胞との間に有光応答または
異種抗原応答において機能的差異が存在しないことを明
らかに示している。両者の個体群は等しくよく、かつ分
別しないＴｍＭ！１（１１体群と同じ方法で増殖した。

表■が示唆するように、ＭＬＣ検定における全範囲の胸
腺細胞の活性は０ＫＴＩと反応性の胸腺細胞の個体群の
部分にほとんど完全に帰因するので、０ＫＴＩが反応す
る表面抗原は成熟した胸腺細胞上にのみ存在する。また
、表１１１１１０ＫＴｌ”リンパ球と０ＫＴＩ＋末梢Ｔ
細胞との間の機能的差異を示し、この差異は前者が有光
応答性を欠くからである。

本発明によれば、本質的にすべての正常なヒトＴ細胞上
に見い出される抗原に対する抗体を生成できるハイブリ
ドマ、このハイブリドマを生成する方法。本質的にすべ
てのヒトＴ細胞上に見い出さられる抗原に対するモノク
ローナル抗体、この抗体を生成する方法、およびこの抗
体を用いる病気の処置または診断の方法が提供される。

ヒトＴ細胞の抗原に対する単一のモノクローナル抗体を
生成する単一のハイブリドマだけを説明してきたが、本
発明はここに説明する特性を示すすべてのモノクローナ
ル抗体を包含すると考えられる。主題の抗体０ＫＴｌは
ねずみのＩｇＧの４つのサブクラスの１つであるサブク
ラスＩｇＧＩに属することが決定された。免疫プロプリ
ンＧのこれらのサブクラスは互いにいわゆる「固定され
た」領域において異なるが、特定の抗原に対する抗体は
いわゆる「可変の」領域をもち、この領域は免疫クロプ
リンＧのどのサブクラスがそれに属するかに無関係に機
能的に同一である。すなわち、ここに説明した特性を示
すモノクローナル抗体はサブクラスＩｇＧ１．１ｇ　Ｇ
ｘ’Ｌｓ　　Ｉ　ｇ　Ｇｌｂ、またはＩｇＧ、、あるい
はクラスＩｇＭ％　ＩｇＡ。

あるいは他の既知のクラスＩｇであることができる。こ
れらのクラスまたはサブクラスの間の差異は抗体の反応
パターンの選択性に影響を及ぼさないが、抗体と他の物
質、たとえば、相補助的抗体または抗マウス抗体とのほ
かの反応に影響を及ぼすことがあるであろう。主題の抗
体はＩ　ｇＧ、に特定したが、ここに例示した反応性の
パターンを有する抗体類はそれらが属する免疫グロブリ
ンのクラスまたはサブクラスに無関係に本発明の範囲内
に包含されると考えられる。

さらに、本発明の範囲内に、ここに例示したノ１イブリ
ドマの技術を用いて前述のモノクローナル抗体を生成す
る方法が包含される。ノ為イブリドマすることができる
。

のただ１つの例をここに記載したが、当業者はここに提
供した免疫法、融合法および選択法に従い、ここに説明
した反応性の特性を有する抗体類を生成しうる他のハイ
ブリドマ類をうろことができると考えられる。マウスの
既知の種からの既知の骨髄腫細胞系統から生成した個々
のハイブリドマはこのハイブリドマにより生成された抗
体を参照する以外それ以上同定できないので、前述の反
応性の特性を有する抗体を生成するすべてのハイブリド
マ類は本発明の範囲内に包含され、これらのハイブリド
マを用いるこの抗体をつくる方法も同様に包含されると
、考えられる。

本発明のほかの面は、モノクローナル抗体０ＫＴｌまた
はここに明らかにした反応性のパターンを示す他のモノ
クローナル抗体を用いて病気を処理または診断する方法
である。上に考察しＩ；ように、主題の抗体によれば、
Ｔ細胞の慢性リンパ芽球性白血病とＴ細胞の急性リンパ
芽球性白血病を判別することができ、そして器官の移植
を受けた患者を処置して移植組織の拒否を減少または排
除ＦＡＣ５で分離したＯＫＴ 増殖刺激　　　　　　　　　　　全体の単核Ｃｏ　ｎ　
Ａ　　　　　　　　　　　　１４６．０３２±１．５５
６Ｐ　ＨＡ　　　　　　　　　　　　　３２．００１±
２．６５９Ｍ　Ｌ　Ｃ１２２，９５８±２，３１５破傷
風トキソイド　　　　　　　２５．８２１±４，１３２
培地　　　　　　　　　　　　　　４８２土　　１６対
照 表　　　Ｉ ■＋および０ＫＴｌ−末棺リンバ球の機能的比較１３７
．２２９±３．６００　　　　　１３３．５５７±６．
０８８　　　　９，４５４±１．０８０３６．３２６±
３．３１１　　　　　　２９．８７７　＋　１．０４３
　　　　　８．０５８±　８６９１３６．１４１±１．
０５６　　　　　１４８．２３５±２．６６６　　　　
　８．１２５±１．０３３２８．７５６±１．５２６　
　　　　　３０．１８４±　５６３　　　　　２．１２
４±　４３６７３４±　　６５　　　　　　　５３３±
　　８７　　　　　　７５７土　１０８

【図面の簡単な説明】

第１図は、示す細胞個体群を、１：１０００の希釈で０
ＫＴ１．および０７Ｍ　　ＦＩＴＣと反応させた後、シ
トフルオログラフで°得た蛍光パターンを示す。 第２図は、ヒト胸腺細胞を０ＫＴＩおよび０７Ｍ　　Ｆ
ＩＴＣと反応させた後、シトフルオログラフで得られた
蛍光パターンを示す。 第３図は、急性リンパ芽球様白血病患者および慢性リン
パ芽球様白血病患者の両方からの白血病細胞を０ＫＴｌ
および０７Ｍ　　ＦＩＴＣと反応させた後、シトフルオ
ログラフで得た蛍光パターンである。 第４図は、ヒトＴ細胞系統を０ＫＴＩおよび０７Ｍ　　
ＦＩＴＣと反応させた後、シトフルオログラフで得た蛍
光パターンを示す。　　　　゛第５図は、Ｂ細胞のリン
パ芽球様系統のＬａｚ００７を０ＫＴ１および０７Ｍ　
　ＦＩＴＣと反応させた後、シトフルトログラフで得た
蛍光パターンを示す。 Ｖ！丸の３：ｆ、３ ψもの狼さ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、ａ）本質的にすべての正常なヒト末梢Ｔ細胞と反応
   するが、正常なヒト末梢Ｂ細胞、無特徴細胞または大食
   細胞と反応せず、 ｂ）正常なヒト胸腺細胞の約５％〜約 １０％と反応し、 ｃ）Ｔ細胞の慢性リンパ芽球性白血病を もつヒトからの白血病の細胞と反応するが、Ｔ細胞の急
   性リンパ芽球性白血病をもつヒ トからの白血病の細胞と反応せず、そして ｄ）エプスタイン−バールのウィルス変 形したヒトＢ細胞系統と反応しない、 ＩｇＧモノクローナル抗体を生成することを特徴とする
   、ヒトＴ細胞で前もって免疫されたマウスから脾細胞と
   マウスの骨髄腫ラインからの細胞との融合により形成さ
   れたハイブリドマ。 ２、生成する抗体がサブクラスＩｇＧ＿１である特許請
   求の範囲第１項記載のハイブリドマ。 ３、Ｐ３×６３ＡｇＵ１骨髄腫細胞とＥロゼット精製し
   たヒトＴ細胞で前もって免疫したＢａＩｆ／ｃＪマウス
   からの脾細胞との融合によって形成された特許請求の範
   囲第１項記載のハイブリドマ。 ４、ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ８０００の同定特性を有する特
   許請求の範囲第１項記載のハイブリドマ。