JPS63248321A - 組織培養による薬用人参の大量生産方法 - Google Patents
組織培養による薬用人参の大量生産方法Info
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- JPS63248321A JPS63248321A JP62083641A JP8364187A JPS63248321A JP S63248321 A JPS63248321 A JP S63248321A JP 62083641 A JP62083641 A JP 62083641A JP 8364187 A JP8364187 A JP 8364187A JP S63248321 A JPS63248321 A JP S63248321A
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Landscapes
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
〈産業上の利用分野〉
この発明は、組織培養により薬用人参（オタ不ニンジン
、チクセツニンジン、アメリカニンジン。
、チクセツニンジン、アメリカニンジン。
三七ニンジンなど）の植物体の一部（たとえば１生長点
１葉、茎、根９種子等）由来のカルスから植物体を再生
して薬用人参を大量生産する方法に関するものである。
１葉、茎、根９種子等）由来のカルスから植物体を再生
して薬用人参を大量生産する方法に関するものである。
〈発明の背景および従来の技術〉
薬用人参（オタネニンジン、チクセツニンジン。
アメリカニンジン、三七ニンジンなど、以下同じ）は、
古来より強壮強精を中心に万能高貴薬として珍重されて
きている。従来の薬用人参組織培養物の培養法として、
特開昭５９−１６９４８６号、特開昭５９−１６９４８
７号、特開昭５９−１６９４８８号等があるが、いずれ
も薬用人参の特定の細胞を組織培養して増殖させる点に
関するものである。
古来より強壮強精を中心に万能高貴薬として珍重されて
きている。従来の薬用人参組織培養物の培養法として、
特開昭５９−１６９４８６号、特開昭５９−１６９４８
７号、特開昭５９−１６９４８８号等があるが、いずれ
も薬用人参の特定の細胞を組織培養して増殖させる点に
関するものである。
〈発明が解決しようとする問題点〉
薬用人参の植物体の一部を組織培養して得られる培養細
胞に含まれる構成成分は、栽培した植物体に含まれる構
成成分と相異することが多い。たとえ培養細胞に有効成
分が含まれていたとしても、その含有量は少ない場合が
多い。また、培養細胞に含まれる薬効成分等が仮に抽出
・分離されたとしても、我国の関連法規では薬物として
認められない。また、一般に薬効成分は二次代謝産物に
多いといわれている。しかし、組織培養法は、−次代謝
産物を得るのには優れた手段となり得るが、薬効成分等
の二次代謝産物を得るには不適当であるという問題があ
る。
胞に含まれる構成成分は、栽培した植物体に含まれる構
成成分と相異することが多い。たとえ培養細胞に有効成
分が含まれていたとしても、その含有量は少ない場合が
多い。また、培養細胞に含まれる薬効成分等が仮に抽出
・分離されたとしても、我国の関連法規では薬物として
認められない。また、一般に薬効成分は二次代謝産物に
多いといわれている。しかし、組織培養法は、−次代謝
産物を得るのには優れた手段となり得るが、薬効成分等
の二次代謝産物を得るには不適当であるという問題があ
る。
ところで、薬用人参は、その種子を蒔いてから収穫まで
５〜６年を要する。薬用人参の種子を蒔く時期も限定さ
れ四季を通じて短期間であり、しかも種子が発芽し生長
させる条件作りおよび栽培が困難であるという問題があ
る。
５〜６年を要する。薬用人参の種子を蒔く時期も限定さ
れ四季を通じて短期間であり、しかも種子が発芽し生長
させる条件作りおよび栽培が困難であるという問題があ
る。
さらに、栽培薬用人参は固体差が大きく、栽培条件の他
に固体差によってもたとえばサポニン類等の有効成分の
質的および量的変異が大きく、産地による品質の不均一
性が大きいという問題がある。したがって、薬用人参の
有効成分の構成物およびその含量が安定した品質の植物
体を得るのが至難である。
に固体差によってもたとえばサポニン類等の有効成分の
質的および量的変異が大きく、産地による品質の不均一
性が大きいという問題がある。したがって、薬用人参の
有効成分の構成物およびその含量が安定した品質の植物
体を得るのが至難である。
この発明は、上記問題点を解決すべく薬用人参の植物体
の一部由来のカルスから植物体を再生することにより、
均一の性質を有するなど品質の安定した優良品種の薬用
人参を四季を問わず、〜年中安定して大量に供給する方
法を確立提供し、もって薬用人参の優良品種の育成と増
殖とを図り資源確保を目的とする。
の一部由来のカルスから植物体を再生することにより、
均一の性質を有するなど品質の安定した優良品種の薬用
人参を四季を問わず、〜年中安定して大量に供給する方
法を確立提供し、もって薬用人参の優良品種の育成と増
殖とを図り資源確保を目的とする。
く問題点を解決するための手段〉
この発明は、上記目的を達成するために、所定の基準培
地を用いて薬用人参の植物体の一部を組織培養して当該
カルスから植物体を再生する方法であって、 （ａ） 前記薬用人参の植物体の一部を植物生長調節
物質の添加した前記基準培地で培養してカルスを誘導す
るカルス誘導工程と、 山） 誘導された前記カルスを一定期間毎に植物化長調
Ｗ＠質の添加した前記基準培地で継代培養して不定胚を
形成させる不定胚形成工程と、最終生産物（再生植物体
）の増大を図るために、必要ならば植物生長調節物質の
無添加または低濃度添加の液体基準培地中で前記不定胚
を増殖させた後、 ｆｃｌ 増殖させた不定胚を前記基準培地または基準
培地の無機塩濃度を減少さ廿た改良培地に植物生長調節
物質をそれぞれ添加した培地で培養して前記不定胚を茎
葉分化さ廿る茎葉分化工程と、（ｄｌ 茎葉分化した
前記茎葉固体を植物生長＃Ｉ１１節物質の添加した基準
培地に移植して発根させる発根工程 とを含ませることとした。
地を用いて薬用人参の植物体の一部を組織培養して当該
カルスから植物体を再生する方法であって、 （ａ） 前記薬用人参の植物体の一部を植物生長調節
物質の添加した前記基準培地で培養してカルスを誘導す
るカルス誘導工程と、 山） 誘導された前記カルスを一定期間毎に植物化長調
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形成させる不定胚形成工程と、最終生産物（再生植物体
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無添加または低濃度添加の液体基準培地中で前記不定胚
を増殖させた後、 ｆｃｌ 増殖させた不定胚を前記基準培地または基準
培地の無機塩濃度を減少さ廿た改良培地に植物生長調節
物質をそれぞれ添加した培地で培養して前記不定胚を茎
葉分化さ廿る茎葉分化工程と、（ｄｌ 茎葉分化した
前記茎葉固体を植物生長＃Ｉ１１節物質の添加した基準
培地に移植して発根させる発根工程 とを含ませることとした。
この発明で使用できる前記基準培地としては、ムラシゲ
アンドスクーグ（Ｍｕｒａｓｈｉｇｅ ＆Ｓｋｏｏｇ氏
培地（以下ｒＭＳＭＳ培地いう）、リンスマイヤーアン
ドスクーグ（Ｌｉｎｓｍａｉｅｒ ＆Ｓｋｏｏｇ）氏培
地（以下「ＬＳ培地」という）、ホワイト（Ｗｈｉｔｅ
）氏培地（以下「Ｗ培地」という）。
アンドスクーグ（Ｍｕｒａｓｈｉｇｅ ＆Ｓｋｏｏｇ氏
培地（以下ｒＭＳＭＳ培地いう）、リンスマイヤーアン
ドスクーグ（Ｌｉｎｓｍａｉｅｒ ＆Ｓｋｏｏｇ）氏培
地（以下「ＬＳ培地」という）、ホワイト（Ｗｈｉｔｅ
）氏培地（以下「Ｗ培地」という）。
ガウスレット（Ｇａｕｔｈｅｒｅｔ ）氏培地（以下
「 □Ｇ培地」という）、チュレッケ（Ｔｕｌ
ｅｃｋａ ）氏培地（以下「Ｔ培地」という）、モー
レル（Ｍｏｒｅｌ ）氏培地（以下「Ｍ培地」という）
、ヒルデブラント（Ｈ３ｌｄｅｂｒａｎｄｔ ）氏培地
（以下「Ｈ培地」という）等々が利用できる。なかで
もＭＳ培地、ＬＳ培地およびＷ培地等が好適であり、特
に、ＭＳ培地、ＬＳ培地１等が最適である。
「 □Ｇ培地」という）、チュレッケ（Ｔｕｌ
ｅｃｋａ ）氏培地（以下「Ｔ培地」という）、モー
レル（Ｍｏｒｅｌ ）氏培地（以下「Ｍ培地」という）
、ヒルデブラント（Ｈ３ｌｄｅｂｒａｎｄｔ ）氏培地
（以下「Ｈ培地」という）等々が利用できる。なかで
もＭＳ培地、ＬＳ培地およびＷ培地等が好適であり、特
に、ＭＳ培地、ＬＳ培地１等が最適である。
また、この発明にかかる組織培養で利用できる植物生長
調節物質として、種々のオーキシン、サイトカイニン等
その他が利用できる。この植物生長調節物質の濃度は、
通常使用される濃度範囲の１０＝ｓｇ／ １〜１０２ｍ
Ｂ７ Ｎで利用できる。
調節物質として、種々のオーキシン、サイトカイニン等
その他が利用できる。この植物生長調節物質の濃度は、
通常使用される濃度範囲の１０＝ｓｇ／ １〜１０２ｍ
Ｂ７ Ｎで利用できる。
以下この発明にかかる組織培養による薬用人参の大量生
産方法を説明する。
産方法を説明する。
この発明にかかる組織培養による薬用人参の大量生産方
法の大要は、薬用人参の植物体の一部（たとえば生長点
１葉、茎、根１種子など）由来のカルスを誘導し２ こ
のカルスを縫代培養して不定胚に形成させ、さらに必要
ならばこの不定胚を増殖させた後、茎葉分化させ、この
茎葉分化した茎葉固体を発根させて最終的には植物体を
再生するものである。
法の大要は、薬用人参の植物体の一部（たとえば生長点
１葉、茎、根１種子など）由来のカルスを誘導し２ こ
のカルスを縫代培養して不定胚に形成させ、さらに必要
ならばこの不定胚を増殖させた後、茎葉分化させ、この
茎葉分化した茎葉固体を発根させて最終的には植物体を
再生するものである。
まず、薬用人参〔オタネニンジン（Ｐａｎａ−ｘ−７ｇ
二ｊｎ８刈ユＩＬＣ，八、門ＥＹＥＩ？ ） 、チクセ
゛ンニンジン（ム促、ｘ−ｊ町刈Ｉ皿ｍ Ｃ，Ａ、門
ＥＹＥＲ＞ 、アメリカニンジン（ＰａｕＬ １頂１
硯ｍｌ舅ユ叩−Ｌ、）、三七ニンジン（Ｐａｎａｘ
胚豆訂Ｍ堕ｌ Ｆ、Ｈ・Ｃ）！ＥＮ） 等〕の植物
体の一部（たとえば、生長点。
二ｊｎ８刈ユＩＬＣ，八、門ＥＹＥＩ？ ） 、チクセ
゛ンニンジン（ム促、ｘ−ｊ町刈Ｉ皿ｍ Ｃ，Ａ、門
ＥＹＥＲ＞ 、アメリカニンジン（ＰａｕＬ １頂１
硯ｍｌ舅ユ叩−Ｌ、）、三七ニンジン（Ｐａｎａｘ
胚豆訂Ｍ堕ｌ Ｆ、Ｈ・Ｃ）！ＥＮ） 等〕の植物
体の一部（たとえば、生長点。
葉、茎、根１種子など）由来のカルスを誘導する。
すなわち、このカルスの誘導には、前記基準培地に添加
する植物生長調節物質としては、２，４−ジクロロフェ
ノキシ酸！（以下ｒ２，４− Ｄ Ｊという）。
する植物生長調節物質としては、２，４−ジクロロフェ
ノキシ酸！（以下ｒ２，４− Ｄ Ｊという）。
ナフタリン酢酸（以下ｒＮＡＡＪという）、インドール
酪酸（以下ｒｒＢＡＪという）、インドール酢酸（以下
ｒＩ ＡＡＪという）等が利用できる。
酪酸（以下ｒｒＢＡＪという）、インドール酢酸（以下
ｒＩ ＡＡＪという）等が利用できる。
なかでも、２．４−Ｄ、ＮＡＡが特に好適である。また
サイトカイニンとして、力・イネチン、ベンジルアデニ
ン（以下ｒＢＡＪという）、ゼアチン（以下ｒＺＪとい
う）などが利用できる。カイネチンを２．４−Ｄまたは
ＩＡＡと組み合わせて使用するか。
サイトカイニンとして、力・イネチン、ベンジルアデニ
ン（以下ｒＢＡＪという）、ゼアチン（以下ｒＺＪとい
う）などが利用できる。カイネチンを２．４−Ｄまたは
ＩＡＡと組み合わせて使用するか。
またはＢＡｔ−ＮＡＡまたはｒＢＡと組み合わせて使用
するか、２を２．４−ＤまたはＩＡＡまたはＩＢＡまた
はＮＡＡと組み合わせて使用すると、前記薬用人参（オ
タネニンジンはか）のカルス誘導が促進される。
するか、２を２．４−ＤまたはＩＡＡまたはＩＢＡまた
はＮＡＡと組み合わせて使用すると、前記薬用人参（オ
タネニンジンはか）のカルス誘導が促進される。
このカルス誘導工程で使用される前記植物生長調節物質
の濃度は、通常使用される濃度範囲の１０＝ｍｇ／ｊ！
〜１０” ｍｇ／ Ｉｔが適当である。この発明にがか
るカルス誘導工程では、２．４−Ｄおよびカイネチンを
それぞれの濃度範囲を０．１ｍｇ／ｆｆ〜１０ｍｇ／Ｉ
！添加したとき最良の効果を得る。もっとも、カイネチ
ン、ベンジルアデニン（ＢＡ）、ゼアチン（Ｚ）は必須
の植物ホルモンではないが、これらを付加的に添加する
とカルスの誘導が促進される。必須の植物ホルモンとし
ては、２．４−Ｄ、 ＮＡＡ、ＩＡＡ、ＩＢＡのうちの
少なくともいずれか一種が存在すれば薬用人参（オタネ
ニンジンなど）の植物体の一部由来のカルスは誘導され
る。
の濃度は、通常使用される濃度範囲の１０＝ｍｇ／ｊ！
〜１０” ｍｇ／ Ｉｔが適当である。この発明にがか
るカルス誘導工程では、２．４−Ｄおよびカイネチンを
それぞれの濃度範囲を０．１ｍｇ／ｆｆ〜１０ｍｇ／Ｉ
！添加したとき最良の効果を得る。もっとも、カイネチ
ン、ベンジルアデニン（ＢＡ）、ゼアチン（Ｚ）は必須
の植物ホルモンではないが、これらを付加的に添加する
とカルスの誘導が促進される。必須の植物ホルモンとし
ては、２．４−Ｄ、 ＮＡＡ、ＩＡＡ、ＩＢＡのうちの
少なくともいずれか一種が存在すれば薬用人参（オタネ
ニンジンなど）の植物体の一部由来のカルスは誘導され
る。
カルス誘導の基本的な操作手順は、薬用人参（オタネニ
ンジン、アメリカニンジン、チクセツニンジン１三七ニ
ンジン等）の植物体の一部（たと記植物生長調節物質（
２，４−Ｄ、ＮＡＡ、ＩＢＡまたはＩＡＡ（以上の４種
類は必須の植物生長調節物質）と、必要に応じてカイネ
チン、ベンジルアデニンまたはゼアチンなど〕を添加し
た基準寒天培地に置床し、１５〜３０℃、明所または暗
所で数週間（通常３週間〜６週間程度）培養してカルス
を誘導することができる。
ンジン、アメリカニンジン、チクセツニンジン１三七ニ
ンジン等）の植物体の一部（たと記植物生長調節物質（
２，４−Ｄ、ＮＡＡ、ＩＢＡまたはＩＡＡ（以上の４種
類は必須の植物生長調節物質）と、必要に応じてカイネ
チン、ベンジルアデニンまたはゼアチンなど〕を添加し
た基準寒天培地に置床し、１５〜３０℃、明所または暗
所で数週間（通常３週間〜６週間程度）培養してカルス
を誘導することができる。
つぎに、前記誘導カルスから不定胚を形成させる。すな
わち、薬用人参（オタネニンジンなど））の植物体の一
部から誘導したカルスを、前記基準培地に必須の植物生
長調節物質として２．４−Ｄ。
わち、薬用人参（オタネニンジンなど））の植物体の一
部から誘導したカルスを、前記基準培地に必須の植物生
長調節物質として２．４−Ｄ。
ＩＢＡ、ＩＡＡ、ＮＡＡの４種類のうちの少なくとも一
つを添加（濃度範囲＝１０＝ｍｇ／ｌ〜１０ｍｇ ／ｌ
程度）した固体培地に、約１５〜２５℃、明所下で一定
期間ごと（約４週間毎〜約８週間毎）に継代培養し、一
定期間（約１年間、４８週間〜５４週間）継代培養を繰
り返して前記誘導カルスを不定胚に形成させる。その後
、最終生産物である再生植物体の増大を図るために、必
要に応じてこの不定胚は、植物生長調節物質無添加また
は低濃度添加（約１Ｏ−２ａ＋ｇ／ｊ！〜１０−’ ｔ
ａｇ／ Ａ’程度）の液体基準培地に移植して、１５〜
２５℃、明所下、約２０日間振盪（回転または往復）培
養してこの不定胚を増殖させる。この場合、誘導カルス
を前記液体培地で培養した方が固体培地で培養するより
も、増殖を促進することができる。
つを添加（濃度範囲＝１０＝ｍｇ／ｌ〜１０ｍｇ ／ｌ
程度）した固体培地に、約１５〜２５℃、明所下で一定
期間ごと（約４週間毎〜約８週間毎）に継代培養し、一
定期間（約１年間、４８週間〜５４週間）継代培養を繰
り返して前記誘導カルスを不定胚に形成させる。その後
、最終生産物である再生植物体の増大を図るために、必
要に応じてこの不定胚は、植物生長調節物質無添加また
は低濃度添加（約１Ｏ−２ａ＋ｇ／ｊ！〜１０−’ ｔ
ａｇ／ Ａ’程度）の液体基準培地に移植して、１５〜
２５℃、明所下、約２０日間振盪（回転または往復）培
養してこの不定胚を増殖させる。この場合、誘導カルス
を前記液体培地で培養した方が固体培地で培養するより
も、増殖を促進することができる。
つぎに、この不定胚を茎葉分化さセる。すなわち、基準
培地または基準培地の無機塩の含量を減少（１／１未満
１／２０以上）させた改良培地に植物生長調節物質をそ
れぞれ添加した固体培地（基準培地または改良培地）に
この増殖させた不定胚を移植し、一定の条件下（約１５
〜２５℃、明所下。
培地または基準培地の無機塩の含量を減少（１／１未満
１／２０以上）させた改良培地に植物生長調節物質をそ
れぞれ添加した固体培地（基準培地または改良培地）に
この増殖させた不定胚を移植し、一定の条件下（約１５
〜２５℃、明所下。
３週間〜６週間程度）で培養して前記不定胚を茎葉分化
させる。なお、この茎葉分化工程で使用できる植物生長
調節物質としては、ジベレリン酸（以下「ＧＡ」という
）、とベンジルアデニン（ＢＡ）との組合せ、ＮＡＡと
ＢＡとの組合せ、ＩＢＡとＢＡとの組合せ、またはＩＡ
ＡとＢＡとの組合せの以上４［Ｊｌの組合せ群から選択
されるいずれかの組合せが利用できる。特に、前記ＧＡ
とＢＡとの組合せは、薬用人参（オタネニンジンなど）
の増殖不定胚を茎葉分化させるのに好適である。
させる。なお、この茎葉分化工程で使用できる植物生長
調節物質としては、ジベレリン酸（以下「ＧＡ」という
）、とベンジルアデニン（ＢＡ）との組合せ、ＮＡＡと
ＢＡとの組合せ、ＩＢＡとＢＡとの組合せ、またはＩＡ
ＡとＢＡとの組合せの以上４［Ｊｌの組合せ群から選択
されるいずれかの組合せが利用できる。特に、前記ＧＡ
とＢＡとの組合せは、薬用人参（オタネニンジンなど）
の増殖不定胚を茎葉分化させるのに好適である。
また、この茎葉分化工程で使用する植物生長調節物質の
添加量は、それぞれの添加１ｌ１０−２ｎｉ／ １〜１
０ｍｇ／ｌ程度が好適できる。
添加量は、それぞれの添加１ｌ１０−２ｎｉ／ １〜１
０ｍｇ／ｌ程度が好適できる。
つぎに、前記茎葉分化した固体を発根させる。
すなわち、前記茎葉分化した固体を、植物生長調節物質
を添加した基準固体培地に移植して約１５〜２０℃、明
所下で一定期間（約４週間〜１０週間程度）培養する。
を添加した基準固体培地に移植して約１５〜２０℃、明
所下で一定期間（約４週間〜１０週間程度）培養する。
この茎葉分化した固体の発根工程中に使用される植物生
長調節物質としては、インドール酪酸（ＩＢＡ）、ナフ
タリン酢酸（ＮＡＡ）。
長調節物質としては、インドール酪酸（ＩＢＡ）、ナフ
タリン酢酸（ＮＡＡ）。
インドール酢酸（ＩＡＡ）またはジベレリン酸（ＧＡ）
から選択されるいずれかの植物生長調節物質が利用でき
る。特に、前記ＩＢＡおよびＮＡＡは好適である。また
、前記植物生長調節物質の基準培地への添加量は、通常
に用いられる範囲すなわち１０’ ｍｇ／ ｌ〜１０嘴
ｇ／ｌが好適である。
から選択されるいずれかの植物生長調節物質が利用でき
る。特に、前記ＩＢＡおよびＮＡＡは好適である。また
、前記植物生長調節物質の基準培地への添加量は、通常
に用いられる範囲すなわち１０’ ｍｇ／ ｌ〜１０嘴
ｇ／ｌが好適である。
〈実施例〉
（１）この発明にかかる薬用人参の大量培養方法におい
て、まずムラシゲアンドスクーグ（Ｍｕｒａｓｈｉｇｅ
＆ Ｓｋｏｏｇ ／ＭＳ）氏培地を基準培地として
使用した場合の実施例について述べる。
て、まずムラシゲアンドスクーグ（Ｍｕｒａｓｈｉｇｅ
＆ Ｓｋｏｏｇ ／ＭＳ）氏培地を基準培地として
使用した場合の実施例について述べる。
（ａ） カルス誘導の実施例
薬用人参（オタネニンジン、 Ｐａｎａｘ幻ｌ狙邸−
（：、Ａ、ＭＥＹＥＲ）の根からカルスを誘導する場合
の実施例はつぎのとおりである。
（：、Ａ、ＭＥＹＥＲ）の根からカルスを誘導する場合
の実施例はつぎのとおりである。
薬用人参（オタネニンジン、 Ｐａｎａｘ員μ咀邦−
Ｃ，Ａ、ＭＥＹＥＲ）の根ヲ無菌的にコルクポーラ−で
打抜き、これを約２〜３Ｉ１１−の厚さにメスで切断し
て円盤状の外植片を調製する。
Ｃ，Ａ、ＭＥＹＥＲ）の根ヲ無菌的にコルクポーラ−で
打抜き、これを約２〜３Ｉ１１−の厚さにメスで切断し
て円盤状の外植片を調製する。
一方、植物生長調節物質として２．４−Ｄおよびカイネ
チン（Ｋｉｎｅｔｉｎ ）の濃度が、 ０．０ 。
チン（Ｋｉｎｅｔｉｎ ）の濃度が、 ０．０ 。
０．１ 、１．０ 、１０ 剛ｇ／ｌ各４種類のもの
を組み合わせて添加した合計１６種類のＭＳ固定培地を
調製する。そして、この固定培地上に前記薬用人参の円
盤状の外植片を置床しく第１図）、２５℃、明所下で６
週間培養を行いオタネニンジンの根由来のカルスを誘導
する。（第２図）このカルス誘導での成績は、第１表に
示すとおりである。第１表から明らかなように２．４−
Ｄおよびカイネチンがそれぞれ１．０ ｍｇ／ｌの組
合せの添加区のカルス形成が最適である。
を組み合わせて添加した合計１６種類のＭＳ固定培地を
調製する。そして、この固定培地上に前記薬用人参の円
盤状の外植片を置床しく第１図）、２５℃、明所下で６
週間培養を行いオタネニンジンの根由来のカルスを誘導
する。（第２図）このカルス誘導での成績は、第１表に
示すとおりである。第１表から明らかなように２．４−
Ｄおよびカイネチンがそれぞれ１．０ ｍｇ／ｌの組
合せの添加区のカルス形成が最適である。
第１表ニオタネニンジンの根のカルス誘導成績（基準培
地：ＭＳ培地） 植物生長調節物質としてＩＡＡ、ＮＡＡまたはＩＢＡと
カイネチンとのそれぞれの組合せを用いた場合の前記カ
ルス誘導成績は、はぼおなし傾向を示す。この場合のカ
ルス誘導成績は、第２表に示すとおりである。
地：ＭＳ培地） 植物生長調節物質としてＩＡＡ、ＮＡＡまたはＩＢＡと
カイネチンとのそれぞれの組合せを用いた場合の前記カ
ルス誘導成績は、はぼおなし傾向を示す。この場合のカ
ルス誘導成績は、第２表に示すとおりである。
第２表ニオタネニンジンの根のカルス誘導成績（基準培
地二ＭＳ培地） （各濃度単位：ｍｇ／１） （ｂｌ 前記誘導カルスからの不定胚形成の実施例。
地二ＭＳ培地） （各濃度単位：ｍｇ／１） （ｂｌ 前記誘導カルスからの不定胚形成の実施例。
前記（ａ）で誘導したカルスを植物生長調節物質として
２．４−Ｄを１．０ｍｇ／ ｌ 、カイネチンを０．０
ｍｇ／ｐ、添加したＭＳ培地（固体培地）に移植し、２
０℃、明所下で６週間毎に約１年間（約４８週間〜５４
週間）継代培養を繰り返す。誘導当初は淡白色の軟らか
いカルスは、この約１年間の継代培養により不定胚の黄
色の部分が次第に認められるようになる。（第３図） このようにして得られる不定胚は、植物生長調節物質無
添加または低濃度添加（約１０−２１１ｇ／ｌ〜１０’
ｍｇ／ １ ）のＭＳ培地（液体培地）に移植し、２
５℃、明所下で回転振盪培養（１１０−１１５ｒｐｔａ
）または往復振盪培養（１１０〜１３０往復／分）の
条件で約２０日間培養して、不定胚を増殖させる。
２．４−Ｄを１．０ｍｇ／ ｌ 、カイネチンを０．０
ｍｇ／ｐ、添加したＭＳ培地（固体培地）に移植し、２
０℃、明所下で６週間毎に約１年間（約４８週間〜５４
週間）継代培養を繰り返す。誘導当初は淡白色の軟らか
いカルスは、この約１年間の継代培養により不定胚の黄
色の部分が次第に認められるようになる。（第３図） このようにして得られる不定胚は、植物生長調節物質無
添加または低濃度添加（約１０−２１１ｇ／ｌ〜１０’
ｍｇ／ １ ）のＭＳ培地（液体培地）に移植し、２
５℃、明所下で回転振盪培養（１１０−１１５ｒｐｔａ
）または往復振盪培養（１１０〜１３０往復／分）の
条件で約２０日間培養して、不定胚を増殖させる。
第２表は、植物生長調節物質に２．４−Ｄ、 ＨＡＡ
、ＩＢＡ、ＮＡＡを用いた場合の不定胚の形成成績を対
比して示す。
、ＩＢＡ、ＮＡＡを用いた場合の不定胚の形成成績を対
比して示す。
〔本頁以下余白〕
（各濃度単位：ｍｇ／ｊｌり
（Ｃ） 前記不定胚の茎葉分化の実施例。
前記（ｂ）で得た不定胚を、ＭＳ培地またはＭＳ培地の
含有無機塩の濃度を１／１未満１／２０以上の濃度に減
少させたＭＳ改良培地に植物生長調節物質としてジベレ
リン酸（ＧＡ）をＯ，Ｏｎ＋ｇ／ １． １．０ｍｇ／
１．５．０ ｍｇ／ Ｌ １０．０ｍｇ／ ７！およ
びベンジルアデニン（ＢＡ）を０゜Ｑｍｇ ／ ｆ！
。
含有無機塩の濃度を１／１未満１／２０以上の濃度に減
少させたＭＳ改良培地に植物生長調節物質としてジベレ
リン酸（ＧＡ）をＯ，Ｏｎ＋ｇ／ １． １．０ｍｇ／
１．５．０ ｍｇ／ Ｌ １０．０ｍｇ／ ７！およ
びベンジルアデニン（ＢＡ）を０゜Ｑｍｇ ／ ｆ！
。
０．１ｍｇ／ １２ 、１．０ ｍｇ／ Ｉ！、 ｌｏ
、ｏｎ＋ｇ／ Ｉ！をそれぞれ組み合わせて添加した合
計１６種類の各固体培地に移植して、２０℃、明所下で
３０日間培養し、前記（ｂ）で得た不定胚を茎葉分化さ
せる。（第４図） 第４表は、植物生長調節物質の各試験濃度に対する不定
胚の茎葉分化成績を示す。
、ｏｎ＋ｇ／ Ｉ！をそれぞれ組み合わせて添加した合
計１６種類の各固体培地に移植して、２０℃、明所下で
３０日間培養し、前記（ｂ）で得た不定胚を茎葉分化さ
せる。（第４図） 第４表は、植物生長調節物質の各試験濃度に対する不定
胚の茎葉分化成績を示す。
（各濃度単位：ｒａｇ／ｊ）
第４表の結果より、ＧＡを１．０ｍｇ／ １〜５．０ｍ
ｇ／７！、ＢＡを０．１ ｍｇ／ １〜１．０ ｍｇ／
Ａそれぞれ添加したものが好適であることがわかる。
ｇ／７！、ＢＡを０．１ ｍｇ／ １〜１．０ ｍｇ／
Ａそれぞれ添加したものが好適であることがわかる。
なお、植物生長調節物質として、ＮＡＡ、ＩＡＡまたは
ＩＢＡの３種類とＢＡとのそれぞれの組合せを用いた場
合、前記不定胚の茎葉分化の成績はいずれもほぼ似た１
項向を示す。第５表は、この場合の不定胚の茎葉分化成
績を示している。
ＩＢＡの３種類とＢＡとのそれぞれの組合せを用いた場
合、前記不定胚の茎葉分化の成績はいずれもほぼ似た１
項向を示す。第５表は、この場合の不定胚の茎葉分化成
績を示している。
（各濃度単位：ｍｇ／ｌ）
第６表は、培地の無機塩の含有濃度を基準培地（ＭＳ培
地）の無機塩濃度組成の１／１〜１／３０にしたときの
それぞれの組成に対する不定胚の茎葉分化成績を示す。
地）の無機塩濃度組成の１／１〜１／３０にしたときの
それぞれの組成に対する不定胚の茎葉分化成績を示す。
ただし、植物生長調節物質の添加量は、ＧＡが１．０ｍ
ｇ／ ｌ 、 Ｂ Ａが０．１ｍｇ／ｊ！のときの成績
結果を示す。
ｇ／ ｌ 、 Ｂ Ａが０．１ｍｇ／ｊ！のときの成績
結果を示す。
第６表：不定胚の茎葉分化成績
なお、この茎葉分化した固体の一部には、茎葉分化と同
時に発根するものが認められるが、茎葉分化にとどまる
ものが多い。
時に発根するものが認められるが、茎葉分化にとどまる
ものが多い。
（ｄ） 茎葉分化固体の発根の実施例。
前記（ｅ）で茎葉分化した固体を、ＭＳ培地に植物生長
調節物質としてインドール酪酸（ＩＢＡ）、ナフタリン
酸（ＮＡＡ）、 インドール酢酸（ＩＡＡ）、 ジベレ
リン酸（ＯＡ）をそれぞれ添加した固体培地に移植し、
２０ｔ、明所下で８迎間培養して、前記茎葉分化した固
体の発根させる。（第５図）その後、発根した前記植物
体を必要に応じて土壌に移植する。（第６図）第７表は
、前記ＩＢＡ添加培地、ＮＡＡ添加培地、ｒＡＡ添加培
地に対する茎葉分化した固体の発根成績を示す。
調節物質としてインドール酪酸（ＩＢＡ）、ナフタリン
酸（ＮＡＡ）、 インドール酢酸（ＩＡＡ）、 ジベレ
リン酸（ＯＡ）をそれぞれ添加した固体培地に移植し、
２０ｔ、明所下で８迎間培養して、前記茎葉分化した固
体の発根させる。（第５図）その後、発根した前記植物
体を必要に応じて土壌に移植する。（第６図）第７表は
、前記ＩＢＡ添加培地、ＮＡＡ添加培地、ｒＡＡ添加培
地に対する茎葉分化した固体の発根成績を示す。
（２） この発明に利用できる基準培地について、前
記（１）の（ａ）カルスの誘導から（ｄ）茎葉分化した
固体の発根にいたる薬用人参の大量生産方法の各工程の
試験結果は、第８表に示すとおりである。
記（１）の（ａ）カルスの誘導から（ｄ）茎葉分化した
固体の発根にいたる薬用人参の大量生産方法の各工程の
試験結果は、第８表に示すとおりである。
なお、試験にかかる基準培地は、前記ＭＳ培地のほか、
リンスマイヤーアンドスクーグ培地（Ｌｉｎｓｍａｉｅ
ｒ ＆ Ｓｋｏｏｇ氏培地−ＬＳ培地）。
リンスマイヤーアンドスクーグ培地（Ｌｉｎｓｍａｉｅ
ｒ ＆ Ｓｋｏｏｇ氏培地−ＬＳ培地）。
ホワイ！・培地（Ｗｈｉｔｅ氏培地・Ｗ培地）、ガウス
レット培地（Ｇａｕｔｈｅｒｅｔ氏培地−Ｇ培地）。
レット培地（Ｇａｕｔｈｅｒｅｔ氏培地−Ｇ培地）。
チュレッケ培地（Ｔｕｌｅｃｋｅ氏培地・Ｔ培地）。
モーレル培地（Ｍｏｒｅ１氏培地・Ｍ培地）、ヒルデブ
ラント培地（Ｈｉｌｄｅｂｒａｎｄｔ氏培地・Ｈ培地）
について試験する。
ラント培地（Ｈｉｌｄｅｂｒａｎｄｔ氏培地・Ｈ培地）
について試験する。
また、茎葉分化に用いた基準培地の無機塩の濃度は、各
基準培地の１／２の濃度のものを利用する。
基準培地の１／２の濃度のものを利用する。
第８表：基準培地の試験結果
〔本頁以下余白〕
〈発明の効果〉
薬用人参（オタネニンジン、チクセツニンジン。
アメリカニンジン、三七ニンジンなど）の植物体の一部
由来カルスから植物体を再生したので、四季に関係なく
品質の安定した優良品種の薬用人参を大量に得ることが
でき、しかも１つの植物体から大量の植物体が再生でき
るから、再生された植物体に固体差が殆どなく品質の安
定した薬用人参を大量に得ることができ、薬用人参の優
良品種の育成と増殖による資源確保が図れる等々、発明
目的を達成する顕著な効果を奏する。
由来カルスから植物体を再生したので、四季に関係なく
品質の安定した優良品種の薬用人参を大量に得ることが
でき、しかも１つの植物体から大量の植物体が再生でき
るから、再生された植物体に固体差が殆どなく品質の安
定した薬用人参を大量に得ることができ、薬用人参の優
良品種の育成と増殖による資源確保が図れる等々、発明
目的を達成する顕著な効果を奏する。
第１図はオタネニンジンの根切片を基準（固体）培地に
置床したときの図、第２図はオタネニンジンの根から誘
導したカルス、第３図はオタネニンジンの根カルスから
形成した不定胚、第４図はオタネニンジンの不定胚から
分化した茎葉、第５図はオタネニンジンの分化した茎葉
を発根させた幼植物、第６図はオタネニンジンの根由来
のカルスから得た幼植物を土壌へ移植した植物体。 第１図ニオタネニンジンの根切片を固体培地上に置床し
た図。 Ｘ＾）へ−へ−〜 第２図ニオタネニンジンの根から誘導したカルス。 第３図ニオタネニンジンの根カルスから形成した不定胚
。 Ｊシー＋＋（Ｖへ＾１情−＾い１ｑ１シｎ〜マ心−）４
−−”” −” ＃−′％ Ｉｌ＋ ／ ／ Ｋ ７
”’ ＞ ’＊：ｌ” ｌ ’、、” ’、ｌ、ｒ
ｌ： ’：’、、’、ｌ’、：：’、’：、Ｌ・・−一
一ゝ−−′第４図ニオタネニンジンの不定胚から分化し
た茎叱第５図ニオタネニンジンの分化した茎葉を発根さ
せた珈１九 ψｖ１）１１ 第６図ニオタネニンジンの根由来カルスから得た幼植物
を土壌へ移植した再生植物体。 Ｊハノ 、−手続ネ市正書（方力 １１訃０６２年０７月ｂｇ口 １、事件の表示 昭和６２年特許願第８３６４１
号２、発明の名称 組織培養による薬用人参の大
■生産方法３、 ７Ｊｉ正をする者 ゛１丁件との（又Ｉ（系 特許出■臥住 所
〒９３６ 富山県滑用市清水町１２番１５８−・１
１代理人 〒５３０ 人反市北区西天満３丁目１１番９号−５、
禄１正命令のロイ’ｔ ＩＩ鼾ｎ ６２年０６月０
３８（発送口： 昭和６２年０６月３０日）６、 ？
ｌｌｉ＋Ｔ：の対架 ■ イリ１１潅を証明する
書面■ 明８旺許中、「図面の簡単な説明の欄、：■
図面 ７、補正の内容 ■代理権を証明する書面は、昭和６γ問４月２４日付手
続補正書く自発〉の提出とシ窪こ委任状（全員の分：合
計４名分−４通〕を提出致しました。ご確認の４、図面
の簡単な説明 第１図はオタネニンジンの根切片を基′９（固体）培地
に置床したときの生物形態を示す写真、第２図はオタネ
ニンジンの根から誘導したカルスの生物形態を示す写真
、第３図はオタネニンジンの根カルスから形成した不定
胚の生物形態を示す写真、第４図はオタネニンジンの不
定胚から分化した茎葉の生物形態を示す写真、第５図は
オタネニンジンの分化した草葉を発根させた幼ＩＬケ物
の生物形態を示す写真、第６図はオタネニンジンの恨由
来のカルスから得た幼植物を土壌へ移ｔｒｒ したｔＭ
’ｔ”Ｊ体の生物形態を示す写真である。 以上 第１図 第２図 第３図 第４図 Ｉ ； 第５図 雰 第６図
置床したときの図、第２図はオタネニンジンの根から誘
導したカルス、第３図はオタネニンジンの根カルスから
形成した不定胚、第４図はオタネニンジンの不定胚から
分化した茎葉、第５図はオタネニンジンの分化した茎葉
を発根させた幼植物、第６図はオタネニンジンの根由来
のカルスから得た幼植物を土壌へ移植した植物体。 第１図ニオタネニンジンの根切片を固体培地上に置床し
た図。 Ｘ＾）へ−へ−〜 第２図ニオタネニンジンの根から誘導したカルス。 第３図ニオタネニンジンの根カルスから形成した不定胚
。 Ｊシー＋＋（Ｖへ＾１情−＾い１ｑ１シｎ〜マ心−）４
−−”” −” ＃−′％ Ｉｌ＋ ／ ／ Ｋ ７
”’ ＞ ’＊：ｌ” ｌ ’、、” ’、ｌ、ｒ
ｌ： ’：’、、’、ｌ’、：：’、’：、Ｌ・・−一
一ゝ−−′第４図ニオタネニンジンの不定胚から分化し
た茎叱第５図ニオタネニンジンの分化した茎葉を発根さ
せた珈１九 ψｖ１）１１ 第６図ニオタネニンジンの根由来カルスから得た幼植物
を土壌へ移植した再生植物体。 Ｊハノ 、−手続ネ市正書（方力 １１訃０６２年０７月ｂｇ口 １、事件の表示 昭和６２年特許願第８３６４１
号２、発明の名称 組織培養による薬用人参の大
■生産方法３、 ７Ｊｉ正をする者 ゛１丁件との（又Ｉ（系 特許出■臥住 所
〒９３６ 富山県滑用市清水町１２番１５８−・１
１代理人 〒５３０ 人反市北区西天満３丁目１１番９号−５、
禄１正命令のロイ’ｔ ＩＩ鼾ｎ ６２年０６月０
３８（発送口： 昭和６２年０６月３０日）６、 ？
ｌｌｉ＋Ｔ：の対架 ■ イリ１１潅を証明する
書面■ 明８旺許中、「図面の簡単な説明の欄、：■
図面 ７、補正の内容 ■代理権を証明する書面は、昭和６γ問４月２４日付手
続補正書く自発〉の提出とシ窪こ委任状（全員の分：合
計４名分−４通〕を提出致しました。ご確認の４、図面
の簡単な説明 第１図はオタネニンジンの根切片を基′９（固体）培地
に置床したときの生物形態を示す写真、第２図はオタネ
ニンジンの根から誘導したカルスの生物形態を示す写真
、第３図はオタネニンジンの根カルスから形成した不定
胚の生物形態を示す写真、第４図はオタネニンジンの不
定胚から分化した茎葉の生物形態を示す写真、第５図は
オタネニンジンの分化した草葉を発根させた幼ＩＬケ物
の生物形態を示す写真、第６図はオタネニンジンの恨由
来のカルスから得た幼植物を土壌へ移ｔｒｒ したｔＭ
’ｔ”Ｊ体の生物形態を示す写真である。 以上 第１図 第２図 第３図 第４図 Ｉ ； 第５図 雰 第６図
Claims (8)
- （１）所定の基準培地を用いて薬用人参の植物体の一部
を組織培養して当該カルスから植物体を再生する方法で
あって、 前記薬用人参の植物体の一部を植物生長調節物質の添加
した前記基準培地に培養してカルスを誘導するカルス誘
導工程と、 誘導された前記カルスを一定期間毎に植物生長調節物質
の添加した前記基準培地で継代培養して不定胚を形成さ
せる不定胚形成工程と、増殖させた不定胚を前記基準培
地または基準培地の無機塩濃度を減少させた改良培地に
植物生長調節物質をそれぞれ添加した培地で培養して前
記不定胚を茎葉分化させる茎葉分化工程と、茎葉分化し
た前記茎葉固体を植物生長調節物質の添加した基準培地
に移植して発根させる発根工程と を含むことを特徴とする組織培養による薬用人参の大量
生産方法。 - （２）前記薬用人参は、オタネニンジン（￥Ｐａｎａｘ
￥￥ｇｉｎｓｅｎｇ￥Ｃ．Ａ．ＭＥＹＥＲ）またはチク
セツニンジン（￥Ｐａｎａｘ￥ ￥ｊａｐｏｎｉｃｕｍ
￥Ｃ．Ａ．ＭＥＹＥＲ）またはアメリカニンジン（￥Ｐ
ａｎａｘ￥ ￥ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍ￥Ｌ．）または三七ニン
ジン（￥Ｐａｎａｘ￥ ￥ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ￥Ｆ
．Ｈ．ＣＨＥＮ）である特許請求の範囲第１項記載の組
織培養による薬用人参の大量生産方法。 - （３）前記基準培地は、ムラシゲアンドスクーグ培地、
リンスマイヤーアンドスクーグ培地、ガウスレット培地
、チュレッケ培地、モーレル培地ヒルデブラント培地の
うちから選択されたいずれかの培地である特許請求の範
囲第１項記載の組織培養による薬用人参の大量生産方法
。 - （４）前記カルス誘導工程で基準培地に添加する植物生
長調節物質は、２，４−ジクロロフェノキシ酢酸、ナフ
タリン酢酸、インドール酢酸およびインドール酪酸のう
ちから選択されるいずれかの化合物である特許請求の範
囲第１項記載の組織培養による薬用人参の大量生産方法
。 - （５）前記不定胚形成工程で基準培地に添加する植物生
長調節物質は、２，４−ジクロロフェノキシ酢酸、ナフ
タリン酢酸、インドール酢酸またはインドール酪酸のう
ちから選択されるいずれかの化合物である特許請求の範
囲第１項記載の組織培養による薬用人参の大量生産方法
。 - （６）前記茎葉分化工程で基準培地または改良培地に添
加する植物生長調節物質は、ジベレリン酸とベンジルア
デニンとの組合せ、ナフタリン酢酸とベンジルアデニン
との組合せ、インドール酢酸とベンジルアデニンとの組
合せ、およびインドール酪酸とベンジルアデニンとの組
合せからなる組合群より選択されるいずれかの組合せで
ある特許請求の範囲第１項記載の組織培養による薬用人
参の大量生産方法。 - （７）前記茎葉分化工程で使用する無機塩濃度を減少さ
せた改良培地は、当該培地の無機塩濃度が前記基準培地
の無機塩の含有組成の１／１未満１／２０以上である特
許請求の範囲第１項記載の組織培養による薬用人参の大
量生産方法。 - （８）前記発根工程で使用する基準培地に添加する植物
生長調節物質は、ナフタレン酢酸、インドール酪酸、イ
ンドール酢酸およびジベレリン酸のうちから選択される
いずれかの化合物である特許請求の範囲第１項記載の組
織培養による薬用人参の大量生産方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62083641A JPS63248321A (ja) | 1987-04-03 | 1987-04-03 | 組織培養による薬用人参の大量生産方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62083641A JPS63248321A (ja) | 1987-04-03 | 1987-04-03 | 組織培養による薬用人参の大量生産方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63248321A true JPS63248321A (ja) | 1988-10-14 |
| JPH0430809B2 JPH0430809B2 (ja) | 1992-05-22 |
Family
ID=13808075
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62083641A Granted JPS63248321A (ja) | 1987-04-03 | 1987-04-03 | 組織培養による薬用人参の大量生産方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS63248321A (ja) |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6416582A (en) * | 1987-07-11 | 1989-01-20 | Wakunaga Pharma Co Ltd | Culture and production of root-like tissue of plant of panax genus |
| CN102067849A (zh) * | 2011-02-11 | 2011-05-25 | 吉林农业大学 | 氯化胆碱、苄氨基嘌呤和吲哚丁酸混用促进人参根生长的方法 |
| CN104126394A (zh) * | 2014-07-25 | 2014-11-05 | 普定县银丰农业科技发展有限公司 | 一种三七的种植方法 |
| WO2017020769A1 (zh) * | 2015-08-05 | 2017-02-09 | 广西壮族自治区药用植物园 | 一种提高三七中三七皂苷r1含量的方法 |
| CN107409690A (zh) * | 2017-06-20 | 2017-12-01 | 合肥卓畅农业科技有限公司 | 一种三七的高产种植方法 |
| CN108029491A (zh) * | 2018-02-12 | 2018-05-15 | 丽江滇西本草药业有限公司 | 一种高海拔三七种植方法 |
| CN109964771A (zh) * | 2019-03-21 | 2019-07-05 | 文山高田三七中药饮片有限公司 | 一种三七的种植方法 |
| CN109964770A (zh) * | 2019-03-21 | 2019-07-05 | 文山高田三七中药饮片有限公司 | 一种改善三七连作障碍的种植方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS62151117A (ja) * | 1985-08-29 | 1987-07-06 | 武田薬品工業株式会社 | オタネニンジンの再生植物作出方法 |
| JPS63133922A (ja) * | 1986-11-27 | 1988-06-06 | 日本鉱業株式会社 | オタネニンジンの組織培養方法 |
-
1987
- 1987-04-03 JP JP62083641A patent/JPS63248321A/ja active Granted
Patent Citations (2)
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Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0430809B2 (ja) | 1992-05-22 |
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