JPS63119427A - 抗アレルギ−剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は新規な抗アレルギー剤に関する。

〔従来の技術〕

人体におけるアレルギー症状は多様であり、一般に■〜
■型に分類されている。その中でもアトピー型、アナフ
ィラキシ−型アレルギーは即時型（■型）アレルギーに
属し、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、気管支喘
息、枯草熱等の病態を発現することが知られている。

これらの症状発現の機構については詳しく研究されてお
り、その結果、抗アレルギー剤、抗ヒスタミン剤等の多
数の医薬品が開発されている。

〔発明が解決しようとする問題点〕

しかしながら、これらの薬剤には、呼吸器系、消化器系
、肝機能、過敏症の誘発等多方面にわたる副作用があシ
、より安全な抗アレルギー剤の開発が望まれていた。

〔問題点を解決するだめの手段〕

そこで本発明者らは、アレルギー疾患に対し有効に作用
し、かつ安全性の高い医薬を開発すべく研究してきたと
ころ、マンナンが優れた抗アレルギー作用、血小板活性
化因子拮抗作用、抗ヒスタミン作用等を有し、かつ安全
性も高いことを見い出し、本発明を完成した。

すなわち、本発明はマンナンを有効成分とする抗アレル
ギー剤を提供するものである。

本発明で使用するマンナンとは、マンノースを主な構成
成分とする多糖類をいい、例えばその由来、構成等によ
り分類して示せば以下のものが挙げられる。

（１）微生物由来のマンナン サツカロミセス　セルピシア（５ａｃｃｈ轟ｒｏｍｙｅ
＊ａｃｅｒ＠ｖｉｓｉａｅ　）　、サツカロミセス　ダ
イレンシス（Ｓａｅｅｈａｒｏｍｙａｅｓ　ｄａｌｒ＊
ｎｓｌ虐）、サツカロミセスエクスゲス（Ｓａｃｃｈａ
ｒｏｍｙｅｅｓ　ｅｘｌｇｕｕｓ　）　、サツカロミセ
ス　クル１ベリ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｅｅｓ　ｋｌｕ
ｙｖｅｒｉ　）、サツカロミセス　　セルＪシイ（Ｓａ
ｃｃｈａｒｏｍｙｅｅｓ８・ｒｖ息ｚｚｌｉ　）　、サ
ツカロミセス　チルリス（Ｓａｅｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ
　ｔｅｌｌｕｒｌｍ　）　％サツカロミセスユニスぜラ
ス（５ａｃｅｈａｒｏｒｎｙｃｅｓ　ｕｎｉｓｐｏｒｏ
ｕｓ　）等のサツカロミセス属に属する酵母：ロドトル
ラグルチニス（Ｒｈａｄｏｔｏｒｕｌａ　ｇｌｕｔｌｎ
ｉｍ　）等の赤色酵母；バチルス　−リミキサ（Ｂａｃ
ｉｌｌｕｓｐｏｌｙｍｙｘａ　）　、スカルシナ　７ラ
バ（５ｅａｒｃｌｎａｆｌａｖａ　）等の細菌などの菌
体あるいは培養液から得られるマンナン。

（２）植物由来のマンナン ゾウダヤシマンナンＡ１ゾウグヤシマンナｙＢ、紅ｉ％
マンナン、緑藻マンナン、ラン科植物塊根中のサレツゾ
マンナ／、コーヒーマメマンナン、南アフリカ産植物ｈ
ｕａｃｒａ　ｐｏｎａｐｍｌｍ　　マンナン、ツクネイ
モマンナン、ヤマイモマンナン等。

（３）　　グルコマンナン コンニャクイモ、ユリ、スイセン、ヒガンバナ等の地下
茎から得られるマンノースの他ニクルコースを含有する
マンナン。

（４）　　ガラクトマンナン ローカストビーンガム、ダイズ種皮由来のンイピーンフ
ル、タムタンガム、皮膚糸状菌由来の糸状菌ガラクトマ
ンノグリカン、グアーガム等のマンノースの他にガラク
トースを含有するマンナン。

（５）その他 キサンタンガム等のマンノース以外に２種以上の糖を含
むマンナン。

これらのマンナン中、（１）微生物由来のマンナンおよ
び（２）植物由来のマンナン、特に酵母由来のマンナン
、すなわち酵母２マンナンが好ましい。

マンナンは従来多くの生理活性を示すことが報告されて
いる。すなわち、免疫促進作用（特開昭５１−２９２１
５号）、抗腫瘍作用（特開昭５４−９７６９２号、同５
８−１２１２１６号）、抗感染作用（特開昭５８−１０
９４２３号）、インターフェロン誘導活性（Ｅ、Ｍａｔ
ｌｓｏｖｉ　ａｔ　ａｌ。

Ａｃｔａ、Ｖｉｒｏｌ、、　１４　、１　（１９７０）
　）　、マクロファージ遊走阻止活性（Ｍ、５ｕｚｕｋ
ｉ　＆　Ｙ、Ｈａｙａｓｈｌ。

Ｊａｐａｎ　Ｊ、　Ｍｌｃｒｏｂｌｏｌ、、　１９　、
３５５　（１９７５）などを有することが報告されてい
る。しかしこれらの報告には、マンナンの抗アレルギー
作用に関する記載は全く存しない０ 本発明に用いるマンナンは１種々の微生物１植物等から
自体公知の方法で採取することができるが、また市販の
もの（例えばシグマ社、東京化成等から入手できる）で
もよい。例えば酵母マンナンは、酵母菌の細胞壁に存在
するので、酵母菌を各々の菌学的性状に合致した培養条
件で培養し、菌体を集め、得られた培養菌体から抽出す
ることができる。

培養菌体から酵母マンナンを抽出するには、例えば菌体
をオートクレーブ加熱処理して上清（オートクレーブ抽
出液）を得、■マンナンが多糖であることからフェーリ
ング試薬を用いて、マンナン−銅複合体を形成せしめる
ことにより抽出する方法又は、■塩酸を利用した除蛋白
方法によシ実施することができる〇また、市販の酵母エ
キス（例えば、ディフコ社、タケダ薬品工業、大工栄養
等により販売されている。）には、酵母マンナンが含有
されているので、オートクレーブ抽出液の代わりにこれ
を用いることもできる。

オートクレーブ抽出液は、　　Ｈａｗｏｒｔｈらの方法
（Ｊ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｅ、、　１９３７．７８４　）、
Ｐｅａｔらの方法（Ｊ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｅ、、　１９６
１．３８６１　）に従い、製造される。すなわち、培養
菌体をクエン酸緩衝液（０，０２Ｍ　、　ｐＨ７，０）
に懸濁し、１２１℃、９０分間オートクレーブ中で加熱
する。冷却後遠心分離を行い、上清部を集める。再度沈
澱部にクエン酸緩衝液を加え、同様の操作を行い、得ら
れた上清部を合わせることにより得られる。

フェーリング試薬を用いる抽出・精製法は、次の如くし
て実施される０すなわち、オートクレーブ抽出液又は、
酵母エキスに攪拌しながら同量のフェーリング試薬を加
える。ここでマンナン−銅複合体の沈澱が生じてぐる。

沈澱部を希塩酸に溶解し、これをメタノール−酢酸混液
（８：ＩＶ／Ｙ）中にゆつくシと滴下する。数時間放置
してマンナンの沈澱を集め、銅の色がなくなるまでこの
操作を繰り返す。沈澱をガラスフィルターで集め、メタ
ノール、エーテル等で洗浄し、粗マンナンを得る。グル
カンを除くために粗マンナンを水に溶解した後７エーリ
ング試薬を加え、さらに上記操作を繰り返すことにより
精製マンナンが得られる。またマンナン−銅複合体の沈
澱を得た後、強酸型イオン交換樹脂、例えばアンバーラ
イトｌＲ１２０％　同ｒＲ１２１、同ｌＲ１１８等を用
いて脱銅することもできる。

塩酸を利用した除蛋白による抽出・精製法は、次の如く
して実施される。すなわち、オートクレーブ抽出液又は
酵母エキスに３Ｎ塩酸を添加し、ｐＨを３．５とした後
生ずる沈澱を除去し、上清部に３倍容の冷却メタノール
を加える。沈澱を集め、水に懸濁し、ＩＮ苛性ソーダに
てｐＨ７，０に調整し、不溶物を除去する。この操作を
繰り返し％ＰＨ２，５で沈澱が生じないことを確かめ、
終濃度０．５　Ｎとなるように水酸化カリウムを加え、
３７℃１〜２時間放置する。ｐＨを３．５とし、冷メタ
ノールを３倍容加え沈澱を水に懸濁しｐＨ７，Ｑにｒ：
Ｊ！４整する。この液をイオン交換水に対し、−昼夜透
析を行う。蛋白、核酸の除去が不完全な場合には、ノロ
ナーゼ（長潮産業）、リダヌクレアーゼ、デオキシリボ
ヌクレアーゼ（シグマ社）、を添加し、分解後、セパラ
グ抽出法によシ酵素蛋白を除去し、イオン交換水に対し
透析を行う。

上記方法により抽出されたマンナンは、さらにダルｆ過
法（バイオグルＰ−３００、バイオダル人−０，５ｍ　
、セファデックスＧ−２００等）や陰イオン交換クロマ
トグラフィー　（ＤＥＡＥ−セファデックスＡ　−５０
，ＤＥＡＥ−セルロース、ＤＩＡＩ　−／ｅイオグル等
）４ＶＣよって分画ｎ＃！することができる。この精製
は例えば、大久保らの方法（Ｊ、Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ。

１３６．６３（１９７８））に従って行なわれる。

上記抽出法のうち、銅を用いることが廃液処理等に問題
があるため、塩酸を利用する方法が好ましい。

以下にサツカロミセス　セルビシア由来の酵母エキス（
ディフコ社）よシ塩酸を利用する方法にて得られた酵母
マンナン（以下酵母マンナンＡと略す）及び市販の酵母
マンナン（シグマ社、以下酵母マンナンＢと略す）の薬
理作用ならびに安全性について検討した結果を示す。

■　薬理作用 （１）　　抗アレルギー作用 抗アレルギー作用は、ラットにおける受身皮膚アナフィ
ラキシ−（ＰＣＡ　）反応を用いて試験を行った。

く試験方法〉 ＳＤ系ラットを用い、水酸化アルミニウム、百日咳ワク
チンをアゾユバンドとして卵白アルブミンで感作し、１
４日後に採血して抗血清を得た。この希釈液（６４０倍
）をあらかじめバリカンを用いて背部の毛を刈っておい
た同系ラット（９週齢、雄）に４ケ所０．１　ｍｌずつ
皮肉注射した。５時間放置した後、酵母マンナン人又は
Ｂを尾静脈内へ注入した（５．１０ｍｇ／に９）。静注
直後卵白アルブミンと色素エバンスブルーの混合液を尾
静脈へ注入し、３０分後に生じた青色のス？ットの面積
を求め、コントロールの面積に対する抑制率を求めた。

尚、？ゾティプコントロールとしてクロモグリク酸ナト
リウムを用いた。

く結果〉 結果を表１に示す。酵母マンナン人文はＢはクロモグリ
ク酸ナトリウムの１／３程度の抗アレルギー作用を示し
た。

表　　１ （２）血小板活性化因子拮抗作用 血小板活性化因子拮抗作用は、血小板活性化因子（ＰＡ
Ｆ）投与時に血管外遊出される蛋白によって生ずる膨疹
に対する抑制率をもって判定した。

く試験方法〉 ＳＤ系ラット（９適齢−９雄）に、酵母マンナン人又は
Ｂを尾静脈よシ注入しく５，１０η／に９）、２０分後
に２．５％牛血清アルブミン溶液に２５　ｎｆのＰＡＦ
を溶解したもの０．０２５ｙｔｌをあらかじめ毛を刈っ
ておいた背部４ケ所に皮肉注射した。生じた膨疹の面積
を求め、コントロールの面積に対する抑制率を求めた。

尚、−ゾテイプコントロールとして塩酸プロメタシンを
用いた。

く結果〉 結果を表２に示す０酵母マンナン人又はＢは塩酸ゾロメ
タシンと同等のＰＡＦ拮抗作用を示した。

表　　２ （３）　　抗ヒスタミン作用 抗ヒスタミン作用は、ヒスタミン投与時に起こる膨疹に
対する抑制率をもって判定した。

く試験方法〉 ＳＤ系ラット（９週齢、雄）に酵母マンナン人又はＢを
尾静脈より注入しく５，１１０１ｎ／ｋｐ）、１０分後
にヒスタミン溶液０．０５　ｙｔｌ（３（１１ｇ）を皮
肉注射した。生じた膨疹の面積を求め、コントロールに
対する抑制率を求めた０尚、ボゾテイプコントロールと
して塩酸シフエンヒドラミンを用いた。

く結果〉 結果を表３に示す。酵母マンナンＡ又はＢは塩酸シフエ
ンヒドラミンよりも優れた抗ヒスタミン作用を示した。

以トゴＪ１０ 表　　３ ■　安全性試験 ｄｄＹ系マウス（雄、４週齢）を用い、酵母マンナン人
およびＢの急性毒性試験を行った。

酵母マンナン人又はＢを静脈内又は経口的に投与し、２
４時間後の急性毒性を観察した。

その結果、酵母マンナンＡ、ＨのＬＤ、。値は、ともに
静注で５００ｆｆ１ｇ／に９以上、経口で６９／ｋｊ以
上であった。

本発明の抗アレルギー剤は静脈内投与用製剤、錠剤、カ
プセル剤、顆粒剤、細粒剤等の経口投与用製剤とするこ
とができる。これらの製剤化にあたっては、医薬として
通常使用される賦形剤、滑沢剤、結合剤等の他、吸収を
向上させるための添加剤等を添加することができる。投
与量は、投与方法、症状、体重等によって異なるが通常
成人式対し、１０〜５ｏｏｍｇ７日が好ましく、投与に
あたってこれを１〜数回に分けて投与することが好まし
い０ 〔発明の効果〕 本発明の抗アレルギー剤は、優れた抗アレルギー作用、
血小板活性化因子拮抗作用、抗ヒスタミン作用を有する
とともに安全性が極めて高いので、種々のアレルギー症
状例えばアトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、気管支
喘息、枯草熱などの治療に用いることができる。

〔実施例〕

次に実施例を挙げて本発明を説明する。

実施例１ 酵母エキス（ディフコ社）ＬＯＯＰを７００−のイオン
交換水に溶解し、３Ｎ塩酸を用いてｐＨ３，５に調整し
た。この時に生じた不溶物を遠心分離（３０００ｒ、ｐ
、ｍ　、　１０分）にて除去し、得られた上清に３倍量
の冷却メタノールを添加し、約１５分間静置した。生じ
た沈澱を遠心分離（３０００ｒ＋ｐ、ｍ　、　１０分）
にて集め、約５０ｍ１のイオン交換水に懸濁した。この
液をＩＮ−苛性ソーダでｐｌ’ｌ　７．　Ｏに調整し、
不溶物を遠心分離（１８，００Ｏｒ、ｐ、ｍ　。

１０分）で除去した。上清部を３Ｎ−塩酸にてｐＨ３，
５に調整し、同様の操作を５回繰り返した。

最終的に得られた水溶液３Ｑｍ／に対し、リボ核酸分解
酵素（ＲＮａｓｅ　Ｔ（：約２５　Ｑ　ｕｎｉｔｓ　）
を加え２５℃で一昼夜反応させた。この液にクロロホル
ム／メタノール（２５／１）混液３Ｑｍを加え、よく振
盪させメタノール−水層を分取した。これに水酸化カリ
ウム０．８５２を加え、溶解後３７℃で１時間振盪した
。

３Ｎ塩酸でｐＨを３．５とし３倍量の冷却メタノールを
添加し、沈澱物を遠心分離（３，０００ｒ、ｐ、ｍ　、
　１０分）し集めた。これを水に懸濁し、ＩＮ−苛性ソ
ーダでｐＨ７，０とした後イオン交換水に対し１昼夜透
析を行った。透析内液を凍結乾燥し、さらに少量のイオ
ン交換水に溶解後バイオダルＡ　−０，５ｍダル口過カ
ラムへかけた。溶出液は０．ＩＮ塩化カジカリウム溶液
い、マンナンの溶出をフェノール硫酸法にて定量した。

その他２６０．２８０ｎｍによる吸収も測定した。フェ
ノール硫酸により発色するフラクションを集め、イオン
交換水に対し一昼夜透析後、凍結乾燥を行った。以上一
連の操作により約２２の酵母マンナン人を得た。

このようにして得られた酵母マンナンＡと市販の酵母マ
ンナン（シグマ社、酵母マンナンＢと略す）の分析値を
以下に示す。

表　　４ 表４中、糖はフェノール硫酸法、蛋白はローリ−法、リ
ンはＡＭＥＳらの方法にょシ定量した。

ＩＲＭｒｒｌ、、＋ｔ−’　：３４５０（Ｓ）、　２９
６０（Ｍ）、　１６６０（Ｍ）。

１１５０（Ｍ）、１０６０（Ｓ）、８３０（Ｍ）（第１
図） ’Ｈ−ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ、Ｄ、Ｏ中）δｐｐｍ　：
　５．６〜５．９（アノメリック水素）４．１〜４．９
（マンノース由来の水素）（第２図） ”　Ｃ−ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ　、　ＤｔＯ中）δｐｐ
ｍ：９８．８〜１０３（マンノシル結合炭素）６２〜７
９（マンノース由来の炭素） （第３図） また酵母マンナン人を２Ｎ三フツ化酢酸中、１００℃、
１２時間加水分解を行い、ホウ素化水素ナトリウムで還
元した後、ビリシン−無水酢酸中でアセチル化した。該
アセチル体をガスクロマトグラフィー（３％ＥＣＮ５　
Ｓ−Ｍカラム、カラム温度１９０℃、検出器ＦＩＤ　）
にて分析したところ、保持時間２９．４６分にマンニト
ールのアセチル体に相当する単一一−クとして出現した
（第４図）。

これらの結果より、酵母マンナンＡは、マンノースを主
成分とする酵母マンナンであるととを確認した。

実施例２ 酵母マンナン人又はＢ１１を生理食塩水１００ｒｎｌに
溶解し、滅菌後、ｌｘＪずつアングルに分注し、注射剤
を製造した。

実施例３ 次の成分を均一に混合し、滅菌後、１ｍｌずつアンプル
に分注し、注射剤を製造した。

酵母マンナン人又はＢ　　　　　３１ 注射用蒸留水　　　　　　　　２０ｔｔｔｌボリンルベ
ート　　　　　　　０．５？落花生油　　　　　　　　
　　８０ｎ／

【図面の簡単な説明】

第１図は実施例１で得られた酵母マンナン人の赤外線吸
収スペクトル、第２図はその′Ｈ核磁気共鳴スペクトル
、第３図はそのＩＩＣ核磁気共鳴スペクトルをそれぞれ
示す図面である。第４図は酵母マンナン人を加水分解・
還元・アセチル化して得られた生成物のガスクロマトグ
ラフを示す図面である。 以上

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １、マンナンを有効成分とする抗アレルギー剤。