JPS63112603A - Activated particulate carrier - Google Patents

Abstract

PURPOSE:To obtain the title carrier which is excellent in redispersibility and long-term storage stability and can immobilize a physiologically active protein in high activity yields, by reacting a latex containing specified polymer particles with an aminodisulfide compound and lyophilizing this latex. CONSTITUTION:A latex (A) containing polymer particles having 0.1-60mumol/m<2> of COOH groups on the surface and a specific gravity of 0.9-1.5 (e.g., emulsion copolymer particles of a monomer mixture containing an acrylic acid derivative and a fluoroalkyl acrylate derivative) is reacted with an amino disulfide compound (B) of the formula [wherein R<a-b> are each a (COOH-substituted) 1-6C alkylene and Y is H, NH2 or OH] in the presence of a water-soluble condensing agent to form amide bonds with the COOH groups of component A. This latex is lyophilized at -70--80 deg.C and the water is removed in vacuo from the lyophilization product to obtain the title carrier in which the number of the disulfide groups is below 20% of the number of the COOH groups of component A.

Description

【発明の詳細な説明】 童栗上亘机ユ氷訃 本発明は、重合体粒子がその表面にジスルフィド結合又
はチオール基を有する活性化ラテックスのための重合体
粒子からなる担体に関し、詳しくは、ジスルフィド結合
交換反応によって、ジスルフィド結合又はチオール基を
有する酵素や抗体等の生化学反応を行なう生理活性なタ
ンパク質をその表面に容易に固定化することができると
共に、再分散性にすぐれる活性化粒子担体に関する。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION The present invention relates to a carrier consisting of polymer particles for activated latex, in which the polymer particles have disulfide bonds or thiol groups on the surface thereof, and more specifically, Activated particles that can easily immobilize physiologically active proteins that perform biochemical reactions, such as enzymes and antibodies that have disulfide bonds or thiol groups, on their surfaces by disulfide bond exchange reaction, and have excellent redispersibility. Regarding the carrier.

ｌ米鬼及班 酵素や抗体等の生理活性タンパク質は、近年、その特異
且つ選択的な生物学的反応を利用して、種々の分野で利
用されている。その代表例として、酵素を水不溶性の担
体に固定化させてなる固定化酵素や、免疫活性物質を固
定化させてなる免疫学的診断試薬が知られている。In recent years, physiologically active proteins such as enzymes and antibodies have been used in various fields by taking advantage of their specific and selective biological reactions. Typical examples thereof include immobilized enzymes in which enzymes are immobilized on water-insoluble carriers, and immunological diagnostic reagents in which immunologically active substances are immobilized.

このように、酵素や抗体等の生理活性タンパク質を共有
結合によって固定化するための担体粒子として、従来、
その表面にカルボキシル基、アミノ基、水酸基等の官能
基を導入した粒子が知られている。このような担体粒子
にタンパク質を固定化する方法として、例えば、担体粒
子表面又はタンパク質中のカルボキシル基をカルボジイ
ミドにて活性化した後、これをタンパク質又は担体粒子
表面のアミノ基と反応させて、ペプチド結合を形成させ
る方法や、或いは担体粒子表面の水酸基を臭化シアンに
てイミドカルボナール誘導体に変換した後、これをタン
パク質の存するアミノ基と反応させる方法等が知られて
いる。しかし、かかる方法によれば、タンパク質の有す
るカルボキシル基やアミン基は、何らの選択性なしに固
定化の反応に関与するので、例えば、酵素の基質に対す
る活性部位や抗体の抗原結合部位の高次構造が破壊され
ることがあり、その結果、固定化された生理活性タンパ
ク質の活性が低下する。In this way, conventional carrier particles have been used as carrier particles for covalently immobilizing physiologically active proteins such as enzymes and antibodies.
Particles having functional groups such as carboxyl groups, amino groups, and hydroxyl groups introduced onto their surfaces are known. As a method for immobilizing proteins on such carrier particles, for example, the carboxyl groups on the surface of the carrier particles or in the protein are activated with carbodiimide, and then this is reacted with the amino groups on the surface of the protein or carrier particles to immobilize the peptide. A method of forming a bond or a method of converting a hydroxyl group on the surface of a carrier particle into an imidocarbonal derivative with cyanogen bromide and then reacting this with an amino group present in a protein are known. However, according to such methods, the carboxyl groups and amine groups of proteins participate in the immobilization reaction without any selectivity. The structure may be destroyed, resulting in a decrease in the activity of the immobilized bioactive protein.

また、酵素や抗体を固定化するための別の一つの方法と
して、従来、ジスルフィド結合交換反応を用いる方法が
知られている。この方法によるときは、タンパク質は、
それが有するジスルフィド結合又はチオール基の反応に
よってのみ担体に固定化されるので、上記したような酵
素や抗原における高次構造が破壊されることがない。Furthermore, as another method for immobilizing enzymes and antibodies, a method using a disulfide bond exchange reaction is conventionally known. When using this method, the protein is
Since it is immobilized on the carrier only by the reaction of its disulfide bonds or thiol groups, the higher-order structures of enzymes and antigens as described above are not destroyed.

従来、このようなジスルフィド結合又はこのジスルフィ
ド結合が還元された形態であるチオール基を粒子表面に
有する粒子担体として、例えば、アガロース誘導体に次
の基 Ｃ００）１ 一０ＣＯＮＨＣＨＣＣＨｚ）　ｚｃＯＮ）ＩＣ）ＩＣ）
Ｉ　２５）１Ｃ０ＮＨＣＨｚＣＯＯＨ を結合した活性化チオールセファロース４Ｂ（ファーマ
シア・ファイン・ケミカルズ社製）や、アクリルアミド
ゲルに次の基 −Ｃ）＋２ｃＨｃＯＮＨｃＨｃＨ２ｓＨＯＯＨ を結合したエンザクリル（Ｅｎｚａｃｒｙｌ）・ポリチ
オール（コツホ−ライト・ラボラトリーズ社製）、ガラ
スピーズにチオール基を含む置換基を結合したもの等が
知られている。しかしながら、上記したような担体粒子
は、主として、アフイニテイ・クコマドグラフィー用の
充填剤として用いられるものであるので、元来、粒子は
水性媒体中で分散安定性をもたない。Conventionally, as a particle carrier having such a disulfide bond or a thiol group which is a reduced form of this disulfide bond on the particle surface, for example, an agarose derivative has the following group C00)1-0CONHCHCCHz)zcON)IC)IC)
I25) Activated thiol Sepharose 4B (manufactured by Pharmacia Fine Chemicals) bound with 1C0NHCHZCOOH or Enzacryl polythiol (manufactured by Kotzholite Laboratories) bound with the following group -C)+2cHcONHcHcH2sHOOH to acrylamide gel. (manufactured by) and glass beads with a substituent containing a thiol group bonded to them. However, since the above-mentioned carrier particles are mainly used as fillers for affinity cucomatography, the particles inherently do not have dispersion stability in an aqueous medium.

従って、上記のような従来の担体粒子は、分散安定性が
要求される用途には用いることが困難である。かかる分
散安定性が要求される用途として、例えば、粒子に抗体
等を固定化した後、血清、尿等の検体と混合して、抗原
抗体反応を起こさせ、その凝集の程度から診断を行なう
診断用検査薬や、粒子に酵素を固定化した後、水性媒体
中に分散させて、基質と反応させる酵素反応等を挙げる
ことができる。Therefore, it is difficult to use conventional carrier particles as described above in applications requiring dispersion stability. Applications that require such dispersion stability include, for example, diagnostics in which antibodies, etc. are immobilized on particles and then mixed with a sample such as serum or urine to cause an antigen-antibody reaction, and diagnosis is made based on the degree of agglutination. For example, an enzyme reaction in which an enzyme is immobilized on particles, dispersed in an aqueous medium, and reacted with a substrate can be mentioned.

他方、２種以上の単量体成分を選択して乳化共重合を行
なう等の方法によって、分散安定性にすぐれる重合体粒
子を得ることができることは既に知られている。しかし
、適当な単量体が見当たらないところから、表面にジス
ルフィド結合やチオール基を有する重合体粒子は、直接
、乳化重合等の方法によって製造することは困難である
。また、乳化重合等によって得られた重合体粒子に後反
応を施すことによって、重合体粒子にジスルフィド結合
やチオール基を導入することができても、−般には、こ
のようにして得られる重合体粒子は、その分散安定性が
著しく損なわれて、長期保存安定性に劣ることが多い。On the other hand, it is already known that polymer particles with excellent dispersion stability can be obtained by methods such as selecting two or more types of monomer components and carrying out emulsion copolymerization. However, since suitable monomers are not available, it is difficult to directly produce polymer particles having disulfide bonds or thiol groups on the surface by methods such as emulsion polymerization. Furthermore, although it is possible to introduce disulfide bonds and thiol groups into polymer particles by subjecting the polymer particles obtained by emulsion polymerization etc. to a post-reaction, in general, the polymer particles obtained in this way are In many cases, the dispersion stability of the combined particles is significantly impaired, resulting in poor long-term storage stability.

更に、仮にジスルフィド結合又はチオール基を導入した
後の重合体粒子がすぐれた分散安定性を有していても、
−ａには、酵素や抗体等を固定化した後は、その分散安
定性が損なわれる場合が多い。他方、一般に、チオール
基を表面にもつ重合体粒子は、水性媒体中で保存される
間にチオール基が酸化される結果、保存期間が長期間に
わたる場合は、チオール基数が減少し、或いは遂には消
滅する。Furthermore, even if the polymer particles after introducing disulfide bonds or thiol groups have excellent dispersion stability,
-a, after immobilizing enzymes, antibodies, etc., its dispersion stability is often impaired. On the other hand, in general, polymer particles having thiol groups on the surface are oxidized during storage in an aqueous medium, resulting in a decrease in the number of thiol groups or eventually Disappear.

−日が”ン　しようとするｔ　点 本発明は、従来のジスルフィド結合又はチオール基を粒
子表面に有する粒子担体及びその製造における問題を解
決するためになされたものであって、表面にジスルフィ
ド結合を有し、且つ、保存性及び再分散性にすぐれる活
性化粒子担体の製造方法を提供することを目的とする。The present invention was made in order to solve problems in conventional particle carriers having disulfide bonds or thiol groups on the particle surface and their production. It is an object of the present invention to provide a method for producing an activated particle carrier that has the following properties and has excellent storage stability and redispersibility.

問題点を解決するための手 本発明による活性化粒子担体の第１は、表面にカルボキ
シル基を有する粒径０．０３〜３μｍの重合体粒子を含
むラテックスに、一般式 ％式％（） （式中、Ｉ？”及びＲｂはそれぞれ独立に炭素数１〜６
のアルキレン基を示し、このアルキレンは置換基として
カルボキシル基を有していてもよく、Ｙは水素、アミノ
基又は水酸基を示す。）で表わされるアミノジスルフィ
ド化合物を反応させて、上記アミノジスルフィド化合物
を上記カルボキシル基とアミド結合を形成させて結合し
、次いで、ラテックスを凍結乾燥してなることを特徴と
する。The first activated particle carrier according to the present invention is a latex containing polymer particles having a particle size of 0.03 to 3 μm and having a carboxyl group on the surface. In the formula, I?'' and Rb each independently have 1 to 6 carbon atoms.
This alkylene group may have a carboxyl group as a substituent, and Y represents hydrogen, an amino group, or a hydroxyl group. ) is reacted with the amino disulfide compound to form an amide bond with the carboxyl group, and then the latex is freeze-dried.

また、本発明による活性化粒子担体の第２は、上記の方
法において、重合体粒子に上記アミノジスルフィド化合
物を上記カルボキシル基とアミド結合を形成させて結合
し、この後、ジスルフィド結合をチオール基に還元し、
次いで、ラテックスを凍結乾燥してなることを特徴とす
るものである。Further, in the second activated particle carrier according to the present invention, in the above method, the amino disulfide compound is bonded to the polymer particles by forming an amide bond with the carboxyl group, and then the disulfide bond is bonded to the thiol group. give back,
Then, the latex is freeze-dried.

上記水溶性アミノジスルフィド化合物としては、例えば
、式 ％式％ で表わされるシスタミン、弐 で表わされるシスチン、式 で表わされるホモシスチン、式 ＨＯＯＣＧＨｚ　　にｌｌ＋ で表わされるペニシラミンジスルフィド、式で表わされ
るペニシラミンシスナインジスルフィド等を挙げること
ができるが、特に、水への溶解度が大きいシスタミンが
好ましく用いられる。Examples of the water-soluble amino disulfide compounds include cystamine represented by the formula %, cystine represented by 2, homocystine represented by the formula, penicillamine disulfide represented by ll+ in the formula HOOCGHZ, and penicillamine cysine disulfide represented by the formula Among them, cystamine, which has a high solubility in water, is particularly preferably used.

重合体粒子を含むラテックスにアミノジスルフィド化合
物を反応させて、重合体粒子にアミノジスルフィド化合
物をアミド結合にて結合させるには、ラテックスに水溶
性脱水縮合剤の存在下にアミノジスルフィド化合物を反
応させる。ここに、上記水溶性脱水縮合剤としては、例
えば、ｌ−エチル−３−（Ｎ、Ｎ〜ジメチルアミノ）プ
ロピルカルボジイミド、１−シクロへキシル−３−（２
−モルホリノエチル）カルボジイミド−メソ−ｐ−トル
エンスルホネート等を挙げることができる。このような
水溶性カルボジイミドを用いて、ラテックス粒子にアミ
ノジスルフィド化合物を結合させるには、従来より知ら
れている通常の方法及び条件によることができる。In order to bond the amino disulfide compound to the polymer particles through an amide bond by reacting the amino disulfide compound with the latex containing the polymer particles, the amino disulfide compound is reacted with the latex in the presence of a water-soluble dehydration condensation agent. Here, as the water-soluble dehydration condensation agent, for example, 1-ethyl-3-(N,N-dimethylamino)propylcarbodiimide, 1-cyclohexyl-3-(2
-morpholinoethyl)carbodiimide-meso-p-toluenesulfonate. The amino disulfide compound can be bonded to the latex particles using such a water-soluble carbodiimide by conventional methods and conditions known in the art.

このようにして得られるジスルフィド結合を有する粒子
は、そのジスルフィド結合を適宜の還元剤にて還元する
ことによってチオール基とすることができ、かくして、
チオール基を有する担体粒子を得ることができる。粒子
上のジスルフィド結合を還元するには、特に、限定され
るものではないが、例えば、担体粒子のラテックス中に
、例えば、２−メルカプトエチルアミン、２−メルカプ
トエタノール、ジチオスライトール等のような還元剤を
加え、混合して、放置した後、遠心分離し、上澄み液を
捨て、生成した沈殿に水性媒体を加えて、これを再分散
させ、この後、遠心分離と再分散とを繰り返せばよい。The particles having disulfide bonds obtained in this way can be converted into thiol groups by reducing the disulfide bonds with an appropriate reducing agent, and thus,
Carrier particles having thiol groups can be obtained. To reduce the disulfide bonds on the particles, in particular, but not limited to, reducing agents such as, for example, 2-mercaptoethylamine, 2-mercaptoethanol, dithiothreitol, etc., in the latex of the carrier particles. Add the agent, mix, leave to stand, centrifuge, discard the supernatant, add an aqueous medium to the resulting precipitate, redisperse it, and then repeat centrifugation and redispersion. .

本発明においては、後述するように、重合体粒子にアミ
ノジスルフィド化合物を結合させた後、ラテックスを凍
結乾燥し、又は重合体粒子にアミノジスルフィド化合物
を結合させ、次いで、上記のようにして、このジスルフ
ィド結合を還元した後、ラテックスを凍結乾燥して、粉
状の粒子担体を得、この粉体を水性媒体中に再分散させ
て、所要の用途に供する。従って、本発明においては、
粉体としての粒子担体を水性媒体に再分散させたときに
すぐれた分散性を有するように、重合体粒子は、当初、
即ち、アミノジスルフィド化合物が結合される前は、そ
の表面に０．１〜６０μｍｏｌ／ｍ”のカルボキシル基
数を有することが好ましい。特に好ましくは０．７〜３
０μｍｏｌ／ｍ”の範囲である。In the present invention, as described below, after bonding the amino disulfide compound to the polymer particles, the latex is freeze-dried or the amino disulfide compound is bonded to the polymer particles, and then the amino disulfide compound is bonded to the polymer particles as described above. After reducing the disulfide bonds, the latex is freeze-dried to obtain a powdered particulate carrier, which is redispersed in an aqueous medium for the desired application. Therefore, in the present invention,
The polymer particles were initially dispersed so that they had good dispersibility when the particle carrier as a powder was redispersed in an aqueous medium.
That is, before the amino disulfide compound is bonded, it is preferable that the number of carboxyl groups is 0.1 to 60 μmol/m" on the surface. Particularly preferably 0.7 to 3
It is in the range of 0 μmol/m”.

重合体粒子の有するカルボキシル基数が余りに少ないと
きは、再分散性に劣ると共に、十分な量のアミノジスル
フィド化合物を粒子に固定化することができず、延いて
は、得られる粒子担体に十分な量の生理活性なタンパク
賞を固定化することができない。他方、重合体粒子の有
するカルボキシル基数が余りに多いときは、再分散させ
たときに水性媒体中にて凝集し、或いは生理活性タンパ
ク質を固定化したときに、その生化学的反応を阻害する
おそれがあるからである。When the number of carboxyl groups in the polymer particles is too small, the redispersibility is poor and a sufficient amount of the amino disulfide compound cannot be immobilized on the particles, and as a result, a sufficient amount of the amino disulfide compound cannot be immobilized on the resulting particle carrier. bioactive proteins cannot be immobilized. On the other hand, if the number of carboxyl groups in the polymer particles is too large, there is a risk that they will aggregate in an aqueous medium when redispersed or inhibit the biochemical reaction of bioactive proteins when they are immobilized. Because there is.

更に、本発明においては、粒子担体が水性媒体中での再
分散性にすぐれるように、粒子担体は、アミノジスルフ
ィド化合物の結合後、又はこのジスルフィド結合をチオ
ール基に還元した後にも、その表面に尚、カルボキシル
基を有することが必要である。本発明においては、重合
体粒子に上記のようにアミノジスルフィド化合物又はチ
オール基を導入した後に、これらジスルフィド結合数又
はチオール基数は、上記当初のカルボキシル基数の２０
％以下であることが好ましい。活性化粒子担体における
ジスルフィド結合数又はチオール基数が重合体粒子の有
する当初のカルボキシル基数の２０％を越えるときは、
得られる粒子担体が水性媒体中での分散安定性において
著しく劣り、例えば、このような粒子担体に酵素を固定
化した場合、粒子が凝集して、酵素活性が低下したり、
或いは抗体を固定化してラテックス診断試薬とした場合
に、自然凝集が生じて、正確な診断が困難となるからで
ある。特に、本発明においては、活性化粒子担体の存す
るジスルフィド結合又はチオール基の数は、上記当初の
カルボキシル基数の１０％以下であることが好ましい。Furthermore, in the present invention, in order to ensure that the particle carrier has excellent redispersibility in an aqueous medium, the particle carrier has a surface that remains intact even after bonding with an amino disulfide compound or after reducing this disulfide bond to a thiol group. Furthermore, it is necessary to have a carboxyl group. In the present invention, after introducing an amino disulfide compound or a thiol group into the polymer particles as described above, the number of these disulfide bonds or the number of thiol groups is 20% of the initial number of carboxyl groups.
% or less. When the number of disulfide bonds or thiol groups in the activated particle carrier exceeds 20% of the initial number of carboxyl groups in the polymer particles,
The resulting particulate carrier has significantly poor dispersion stability in an aqueous medium, and for example, when an enzyme is immobilized on such a particulate carrier, the particles may aggregate, resulting in a decrease in enzyme activity.
Alternatively, when antibodies are immobilized to form a latex diagnostic reagent, spontaneous aggregation occurs, making accurate diagnosis difficult. In particular, in the present invention, the number of disulfide bonds or thiol groups present in the activated particle carrier is preferably 10% or less of the above-mentioned initial number of carboxyl groups.

本発明において、ラテックスの凍結乾燥方法は、特に、
限定されるものではないが、通常は、ラテックスを一７
０℃から一８０℃の温度で凍結乾燥させる。この後、減
圧下に水分を除去することによって、本発明による活性
化粒子担体を得ることができる。In the present invention, the latex freeze-drying method particularly includes:
Usually, but not exclusively, the latex is
Lyophilize at a temperature of 0°C to -80°C. Thereafter, the activated particle carrier according to the present invention can be obtained by removing water under reduced pressure.

本発明において、重合体粒子は、その平均粒径が０．０
３〜３μｍ、好ましくは０．０５〜１．５μｍである。In the present invention, the polymer particles have an average particle size of 0.0
It is 3 to 3 μm, preferably 0.05 to 1.5 μm.

粒径が小さすぎると、例えば、これを担体とする固定化
酵素を水中に分散させて酵素反応を行なわせた後の回収
が困難となり、一方、粒径が大きすぎると、単位体積当
りの粒子表面積が小さくなり、例えば、酵素の固定化量
が少な（なると共に、水中に分散させるのが困難となる
ので好ましくない。If the particle size is too small, for example, it will be difficult to recover an immobilized enzyme using this carrier as a carrier after dispersing it in water and performing an enzyme reaction.On the other hand, if the particle size is too large, the number of particles per unit volume will be This is not preferable because the surface area becomes small, for example, the amount of enzyme immobilized becomes small (and it becomes difficult to disperse it in water).

また、重合体粒子の比重は０．９〜１．５の範囲にある
ことが好ましい。比重が０．９よりも小さいときは、例
えば、酵素反応において、粒子が分散液媒体表面に浮遊
し、分散安定性に劣るようになり、また、酵素活性も低
下し、一方、１．５よりも太きいときは、粒子が分散液
媒体中に沈降、凝集し、粒子の自由度が失われて、例え
ば、酵素活性が低下するからである。Moreover, it is preferable that the specific gravity of the polymer particles is in the range of 0.9 to 1.5. When the specific gravity is smaller than 0.9, for example, in an enzyme reaction, particles float on the surface of the dispersion medium, resulting in poor dispersion stability and enzyme activity is also reduced; This is because if the diameter is too large, the particles will settle and aggregate in the dispersion medium, and the degree of freedom of the particles will be lost, resulting in, for example, a decrease in enzyme activity.

本発明においては、重合体粒子は、上記した条件を満た
すものであれば、特に限定されるものではないが、しか
し、以下に述べるように、特に、アクリル酸誘導体とア
クリル酸フルオロアルキルエステル誘導体とを含む単量
体混合物を乳化共重合して得られる重合体粒子が好まし
く用いられる。In the present invention, the polymer particles are not particularly limited as long as they satisfy the above-mentioned conditions, but as described below, in particular, acrylic acid derivatives and acrylic acid fluoroalkyl ester derivatives are used. Polymer particles obtained by emulsion copolymerization of a monomer mixture containing these are preferably used.

かかる重合体粒子は、 ｆａ）一般式 ％式％ （但し、Ｒ１は水素、低級アルキル基又はカルボキシル
基を示し、Ｒ２は水素又は低級アルキル基を示し、Ｒ１
が水素又は低級アルキル基のときは、Ｒ２はカルボ低級
アルコキシ基であってもよい。）で表わされるアクリル
酸誘導体０．１〜２０重景％重量び （ｂ）一般式 ％式％ （但し、Ｒ３は水素又は低級アルキル基を示し、Ｒ４は （ＣＨ２）、、ｌ−又は−（ＣＨ２）　、　−ＣＩ　−
（ＣＩ＋□）、−ＯＲ’ （但し、ｍはＯ〜１２の整数を示し、ｘ＋ｙ＝ｍ−１で
あり、Ｒ５は水素又はアセチル基を示す。）を示し、Ａ
はそれぞれ独立に水素、フッ素又はＣＦ＋を示し、ｎは
Ｏ〜１２の整数を示す。）で表わされるアクリル酸フル
オロアルキルエステル誘導体と、上記アクリル酸誘導体
を除くラジカル共重合性ビニル単量体との混合物であっ
て、この混合物に基づいて上記アクリル酸フルオロアル
キルエステル誘導体が１〜１００重景％で重量混合物９
９．９〜８０重量％ からなる単量体混合物を水性媒体中で乳化共重合させて
得ることができる。Such polymer particles have the following formula: fa) General formula % Formula % (However, R1 represents hydrogen, a lower alkyl group, or a carboxyl group, R2 represents hydrogen or a lower alkyl group, and R1
When is hydrogen or a lower alkyl group, R2 may be a carbo-lower alkoxy group. ) 0.1 to 20 weight% of the acrylic acid derivative represented by (b) general formula% formula% (However, R3 represents hydrogen or a lower alkyl group, and R4 represents (CH2), , l- or -( CH2), -CI-
(CI+□), -OR' (where m represents an integer of O to 12, x+y=m-1, R5 represents hydrogen or an acetyl group), and A
each independently represents hydrogen, fluorine or CF+, and n represents an integer of O to 12. ) and a radically copolymerizable vinyl monomer other than the acrylic acid derivative, wherein the acrylic acid fluoroalkyl ester derivative has 1 to 100 polymers based on the mixture. Mixture by weight 9%
It can be obtained by emulsion copolymerizing a monomer mixture consisting of 9.9 to 80% by weight in an aqueous medium.

上記アクリル酸誘導体としては、例えば、アクリル酸、
メタクリル酸、イタコン酸、クロトン酸、マレイン酸、
フマル酸、モノアルキルマレイン酸、モノアルキルフマ
ル酸、モノアルキルイタコン酸等を好ましい例として挙
げることができるが、特に、アクリル酸、メタクリル酸
及びイタコン酸の１種又は２種以上の混合物が好ましく
用いられる。Examples of the acrylic acid derivatives include acrylic acid,
Methacrylic acid, itaconic acid, crotonic acid, maleic acid,
Preferred examples include fumaric acid, monoalkyl maleic acid, monoalkyl fumaric acid, monoalkyl itaconic acid, etc., and in particular, one type or a mixture of two or more of acrylic acid, methacrylic acid, and itaconic acid is preferably used. It will be done.

また、上記アクリル酸フルオロアルキルエステル誘導体
は、好ましくは、一般式 ％式％（ （但し、Ｒ３、Ｒ’、　ｍ及びｎは前記と同じである。Further, the above acrylic acid fluoroalkyl ester derivative preferably has the general formula % (where R3, R', m and n are the same as above).

）で表わされ、従って、特に、好ましく用いることがで
きるアクリル酸フルオロアルキルエステル誘導体の具体
例として、例えば、 ＣＨｚ＝Ｃ（Ｃｆｌｉ）ＣＯＯＣＨｚＣＦ：＋　　　　
　　　　　　　（５１ＣＨｚ＝Ｃ（ＣＨ：＋）ＣＯＯＣ
Ｈｚ（Ｃｈ）ｚＨ（６）ＣＨｚ＝Ｃ（Ｃ！ｂ）ＣＯＯＣ
Ｈｚ（ＣＦｚ）　４Ｈ（７）ＣＨ２＝Ｃ（ＣＨ：Ｉ）Ｃ
ｏｏ（ＣＨ２）　！　（ＣＦＺ）　ＩＩＦ　　　　　　
　（８）等を例示することができる。), and therefore, can be particularly preferably used as a specific example of the acrylic acid fluoroalkyl ester derivative, for example, CHz=C(Cfli)COOCHzCF:+
(51CHz=C(CH:+)COOC
Hz(Ch)zH(6)CHz=C(C!b)COOC
Hz (CFz) 4H(7)CH2=C(CH:I)C
oo(CH2)! (CFZ) IIF
(8) etc. can be exemplified.

前記アクリル酸エステル誘導体は、乳化共重合時の重合
安定性にすぐれ、また、水性媒体中での分散安定性にす
ぐれる水分散型高分子重合体粒子を得るためのみならず
、得られる重合体粒子に前記アミノジスルフィド化合物
をアミド結合にて結合し、固定化するためのカルボキシ
ル基を付与するために必要な単量体であり、単量体組成
において、少なくとも０．１重量％を必要とする。しか
し、過多に共重合単量体成分として用いるときは、却っ
て重合安定性と、得られる重合体粒子の分散安定性を損
なうので、２０重量％以下の範囲で用いる。特に好まし
い範囲は、０．５〜１０重景％重量る。The acrylic acid ester derivative is used not only to obtain water-dispersible polymer particles having excellent polymerization stability during emulsion copolymerization and excellent dispersion stability in an aqueous medium, but also to improve the polymer obtained. A monomer necessary for bonding the amino disulfide compound to particles with an amide bond and imparting a carboxyl group for immobilization, and requires at least 0.1% by weight in the monomer composition. . However, when used in excess as a copolymerization monomer component, the polymerization stability and the dispersion stability of the resulting polymer particles are impaired, so it is used within a range of 20% by weight or less. A particularly preferred range is 0.5 to 10% by weight.

また、前記アクリル酸フルオロアルキルエステル誘導体
は、得られる重合体粒子への前記アミノジスルフィド化
合物の固定化時や分散系において、重合体粒子が水性媒
体中で安定な分散性を保つ効果を有する。特に、重合体
粒子において、アクリル酸フルオロアルキルエステル誘
導体単ｆｆ１体成分は、塩や有機質物質を含む水溶液中
において、例えば、重合体粒子への有害物質の吸着や被
覆を防止する効果を有する。このような効果を有効に得
るためには、アクリル酸フルオロアルキルエステル誘導
体は、単量体組成において９９．９〜８０重量％、好ま
しくは９９．５〜９０重量％の範囲で用いられる。Further, the acrylic acid fluoroalkyl ester derivative has the effect of maintaining stable dispersibility of the polymer particles in an aqueous medium when the amino disulfide compound is immobilized on the resulting polymer particles or in a dispersion system. In particular, in polymer particles, the acrylic acid fluoroalkyl ester derivative single ff1 component has the effect of preventing, for example, adsorption or coating of harmful substances onto the polymer particles in an aqueous solution containing salts or organic substances. In order to effectively obtain such effects, the acrylic acid fluoroalkyl ester derivative is used in a monomer composition in an amount of 99.9 to 80% by weight, preferably 99.5 to 90% by weight.

しかも、かかる単量体成分の所定の割合の混合物を用い
ることにより、特に乳化剤を用いることなく、凝集物の
発生なしに安定に乳化共重合させ得て、粒径が均一であ
り、且つ、水性媒体中で分散状態が安定に保持される水
分散型高分子重合体粒子を得ることができる。Moreover, by using a mixture of such monomer components in a predetermined ratio, it is possible to carry out stable emulsion copolymerization without using any emulsifier, without generating aggregates, and having a uniform particle size. Water-dispersed polymer particles whose dispersed state is stably maintained in a medium can be obtained.

前記アクリル酸フルオロアルキルエステル誘導体の一部
は、前記アクリル酸誘導体を除（ラジカル共重合性ビニ
ル単量体に置換されてもよい。A part of the acrylic acid fluoroalkyl ester derivative may be replaced with a radical copolymerizable vinyl monomer.

かかるラジカル共重合性ビニル単量体としては、例えば
、それ自体の単独重合体が水不溶性である疎水性単量体
を挙げることができる、具体例として、エチレン、プロ
ピレン、塩化ビニル等のα−オレフィン又はそのハロゲ
ン置換体、スチレン、メチルスチレン、エチルスチレン
、ビニルトルエン、クロロスチレン等のアルケニルベン
ゼン、ブタジェン、イソプレン等の共役ジオレフィン、
（メタ）アクリロニトリル、（メタ）アクリル酸メチル
、（メタ）アクリル酸エチル、（メタ）アクリル酸プロ
ピル、（メタ）アクリル酸ブチル、（メタ）アクリル酸
ヘキシル、（メタ）アクリル酸オクチル等の（メタ）ア
クリル酸エステル、酢酸ビニル、プロピオン酸ビニル等
を挙げることができる。上記したラジカル共重合性ビニ
ル単量体のうちでは、特に、メタクリル酸メチルやメタ
クリル酸イソブチル等の（メタ）アクリル酸エステルが
好ましく用いられる。このような単量体は、得られる重
合体粒子の比重を調整し、又は前記したアクリル酸エス
テル誘導体とアクリル酸フルオロアルキルエステル誘導
体との共重合反応性を調整するために好適に用いられる
。Examples of such radical copolymerizable vinyl monomers include hydrophobic monomers whose homopolymers themselves are insoluble in water. Specific examples include α- Olefin or its halogen substituted product, alkenylbenzene such as styrene, methylstyrene, ethylstyrene, vinyltoluene, chlorostyrene, conjugated diolefin such as butadiene, isoprene,
(meth)acrylonitrile, methyl (meth)acrylate, ethyl (meth)acrylate, propyl (meth)acrylate, butyl (meth)acrylate, hexyl (meth)acrylate, octyl (meth)acrylate, etc. ) Acrylic acid ester, vinyl acetate, vinyl propionate, etc. can be mentioned. Among the radical copolymerizable vinyl monomers described above, (meth)acrylic acid esters such as methyl methacrylate and isobutyl methacrylate are particularly preferably used. Such a monomer is suitably used to adjust the specific gravity of the obtained polymer particles or to adjust the copolymerization reactivity of the above-mentioned acrylic acid ester derivative and acrylic acid fluoroalkyl ester derivative.

また、必要に応じて、それ自体の単独重合体が水溶性又
は水膨潤性である親水性単量体も用いることができる。Furthermore, if necessary, a hydrophilic monomer whose homopolymer itself is water-soluble or water-swellable can also be used.

かかる単量体の具体例として、例えば、ヒドロキシメチ
ル（メタ）アクリレート、ヒドロキシエチル（メタ）ア
クリレート、ヒドロキシプロピル（メタ）アクリレート
等のヒドロキシアルキル（メタ）アクリレート、　（メ
タ）アクリルアミド、グリシジル（メタ）アクリレート
等を挙げることができる。Specific examples of such monomers include hydroxyalkyl (meth)acrylates such as hydroxymethyl (meth)acrylate, hydroxyethyl (meth)acrylate, and hydroxypropyl (meth)acrylate, (meth)acrylamide, and glycidyl (meth)acrylate. etc. can be mentioned.

しかし、上記したラジカル共重合性ビニル単量体は、余
りに多量に使用すると、重合安定性を損じるのみならず
、得られる重合体粒子が水分散安定性に劣るようになる
ので、本発明においては、アクリル酸フルオロアルキル
エステルＲ’Ｊ一体と上記ラジカル共重合性ビニル単量
体との混合物において、アクリル酸フルオロアルキルエ
ステル誘導体を少なくとも１重量％用いることが必要で
ある。However, if the above-mentioned radical copolymerizable vinyl monomer is used in too large a quantity, it not only impairs polymerization stability but also results in the resulting polymer particles having poor water dispersion stability. It is necessary to use at least 1% by weight of the acrylic acid fluoroalkyl ester derivative in the mixture of the acrylic acid fluoroalkyl ester R'J and the above-mentioned radical copolymerizable vinyl monomer.

即ち、本発明においては、上記ラジカル共重合性ビニル
単量体は、このラジカル共重合性ビニル単量体とアクリ
ル酸フルオロアルキルエステル誘導体との混合物の重量
に基づいて、９９重重量以下、好ましくは９７重量％以
下の範囲で用いられる。有効量の下限は特に制限されず
、目的に応じて適宜に選ばれるが、通常、アクリル酸フ
ルオロアルキルエステル誘導体とこのアクリル酸アルキ
ルエステル誘導体の混合物の重量に基づいて１重量％以
上である。That is, in the present invention, the radical copolymerizable vinyl monomer has a weight of 99 wt or less, preferably 99 wt or less, based on the weight of the mixture of the radical copolymerizable vinyl monomer and the acrylic acid fluoroalkyl ester derivative. It is used in a range of 97% by weight or less. The lower limit of the effective amount is not particularly limited and is appropriately selected depending on the purpose, but is usually 1% by weight or more based on the weight of the mixture of the acrylic acid fluoroalkyl ester derivative and this acrylic acid alkyl ester derivative.

更に、重合体粒子の製造において、単量体成分として、
内部架橋用官能性単量体を用いることができる。この内
部架橋用多官能性単量体は、重合体に架橋構造を導入す
るので、存在する場合には好ましくない水溶性重合体の
生成を抑制すると共に、得られる重合体粒子のガラス転
移温度を高めることができる。更に、内部架橋剤は、重
合体粒子を非膨潤化して、重合体粒子の水性媒体中での
分散安定性を高めるのに効果がある。Furthermore, in the production of polymer particles, as a monomer component,
Internal crosslinking functional monomers can be used. This internal crosslinking polyfunctional monomer introduces a crosslinked structure into the polymer, so when present, it suppresses the formation of undesirable water-soluble polymers and also lowers the glass transition temperature of the resulting polymer particles. can be increased. Further, the internal crosslinking agent is effective in non-swelling the polymer particles and increasing the dispersion stability of the polymer particles in an aqueous medium.

かかる多官能性内部架橋用単量体としては、例えば、脂
肪族多価アルコールのポリ　（メタ）アクリレートが好
ましく用いられる。具体例として、例えば、エチレング
リコールジメタクリレート、ジエチレングリコールジメ
タクリレート、トリエチレングリコールジメタクリレー
ト、ジプロピレングリコールジメタクリレート、１．３
−ブチレングリコールジメタクリレート、トリエチレン
グリコールジアクリレート、トリメチロールプロパント
リメタクリレート、トリメチロールプロパントリアクリ
レート、テトラメチロールメタンテトラアクリレート等
が好ましく用いられる。また、ジビニルベンゼンやＮ、
Ｎ”−メチレンビスアクリルアミド等も多官能性内部架
橋用単量体として用いることができる。As such a polyfunctional internal crosslinking monomer, for example, poly(meth)acrylate of aliphatic polyhydric alcohol is preferably used. Specific examples include ethylene glycol dimethacrylate, diethylene glycol dimethacrylate, triethylene glycol dimethacrylate, dipropylene glycol dimethacrylate, 1.3
-Butylene glycol dimethacrylate, triethylene glycol diacrylate, trimethylolpropane trimethacrylate, trimethylolpropane triacrylate, tetramethylolmethanetetraacrylate, etc. are preferably used. Also, divinylbenzene, N,
N''-methylenebisacrylamide and the like can also be used as a polyfunctional internal crosslinking monomer.

内部架橋用多官能性単量体は、必要な場合は、通常、単
量体組成において、０．１重量％以上が用いられるが、
しかし、過多に使用するときは、却って重合安定性と得
られる重合体粒子の水性媒体中での分散安定性を損なう
ので好ましくなく、通常、２０重量％以下の範囲で用い
られる。好ましくは０．２〜１０重量％の範囲である。The polyfunctional monomer for internal crosslinking is usually used in an amount of 0.1% by weight or more in the monomer composition, if necessary.
However, if it is used in excess, it is not preferable because it will impair the polymerization stability and the dispersion stability of the obtained polymer particles in an aqueous medium, and it is usually used in a range of 20% by weight or less. Preferably it is in the range of 0.2 to 10% by weight.

また、個々の単量体の具体的な種類は、得られる共重合
体のガラス転移点が０℃以上、好ましくは室温以上とな
るように選ばれる。重合体粒子のガラス転移点が０℃よ
りも低いときは、重合体粒子の相互の融着や凝集が生じ
やすく、分散液の分散安定性が低下する傾向があるから
である。Further, the specific type of each monomer is selected so that the glass transition point of the resulting copolymer is 0° C. or higher, preferably room temperature or higher. This is because when the glass transition point of the polymer particles is lower than 0° C., mutual fusion and aggregation of the polymer particles tend to occur, and the dispersion stability of the dispersion liquid tends to decrease.

以上のような各単量体を水性媒体中にて、水溶性のラジ
カル重合開始剤を用いて、通常の方法にて乳化共重合さ
せることにより、水不溶性共重合体からなる水性分散液
、即ち、ラテックスを得ることができるが、得られるラ
テックス中に乳化剤が遊離の状態で、或いは重合体粒子
に吸着された状態にて存在するとき、前述したように、
特に、その使用に際して種々の有害な影響が現れること
があるので、乳化共重合に際しては乳化剤を用いないの
が好ましい。前記単量体組成によれば、乳化剤を要せず
して安定に共重合させることができると共に、得られる
ラテックス分散状態が安定に保持される。しかし、前述
したように、重合体粒子を緩衝液や生理食塩水に分散さ
せた場合にも、重合体粒子の凝集や沈降が起こらず、更
には、固定化された生理活性タンパク質の位化学的反応
が妨害されない範囲において、乳化剤を用いることは何
ら妨げられず、また、用途によって乳化剤が有害な影響
を与えないときは、必要に応じて、乳化剤を用いてもよ
い。By carrying out emulsion copolymerization of each of the above monomers in an aqueous medium using a water-soluble radical polymerization initiator in a conventional manner, an aqueous dispersion consisting of a water-insoluble copolymer, i.e. , a latex can be obtained, but when the emulsifier is present in the obtained latex in a free state or in a state adsorbed on polymer particles, as mentioned above,
In particular, it is preferable not to use emulsifiers in emulsion copolymerization, since various harmful effects may occur upon their use. According to the above monomer composition, stable copolymerization can be performed without the need for an emulsifier, and the resulting latex dispersion state can be stably maintained. However, as mentioned above, even when polymer particles are dispersed in a buffer solution or physiological saline, aggregation and sedimentation of the polymer particles do not occur, and furthermore, the positional chemistry of the immobilized physiologically active protein is There is no hindrance to the use of an emulsifier as long as the reaction is not hindered, and if the emulsifier does not have a harmful effect depending on the intended use, an emulsifier may be used as necessary.

上記のような乳化共重合において、単量体成分混合物の
水性媒体中での濃度は、得られる分散液における重合体
粒子の平均粒径とも関連するが、通常、１〜４０重量％
の範囲である。In the above emulsion copolymerization, the concentration of the monomer component mixture in the aqueous medium is related to the average particle size of the polymer particles in the resulting dispersion, but is usually 1 to 40% by weight.
is within the range of

重合開始剤としては、水溶性ラジカル重合開始剤が用い
られる。通常、過硫酸カリウム、過硫酸ナトリウム、過
硫酸アンモニウム等の過硫酸塩や、これら過硫酸塩とチ
オ硫酸ナトリウム、チオ硫酸カリウム、チオ硫酸水素ナ
トリウム等のようなチオ硫酸塩、又は亜硫酸ナトリウム
、亜硫酸カリウム、亜硫酸水素ナトリウム等のような亜
硫酸塩とのレドックス系重合開始剤が好ましく用いられ
るが、これらに限定されるものではない。これら重合開
始剤の使用量は、単量体混合物に対して０１０１〜１重
景％の範重量好適である。重合の雰囲気も、特に制限さ
れないが、好ましくは酸素を除いた不活性ガス雰囲気が
用いられる。また、重合温度は、特に制限されないが、
通常、２０〜１００℃、好ましくは４０〜９０°Ｃの範
囲である。As the polymerization initiator, a water-soluble radical polymerization initiator is used. Usually, persulfates such as potassium persulfate, sodium persulfate, ammonium persulfate, these persulfates and thiosulfates such as sodium thiosulfate, potassium thiosulfate, sodium hydrogen thiosulfate, etc., or sodium sulfite, potassium sulfite. Redox polymerization initiators with sulfite such as sodium bisulfite and the like are preferably used, but are not limited thereto. The amount of these polymerization initiators to be used is preferably in the range of 0.1 to 1% by weight based on the monomer mixture. The atmosphere for polymerization is also not particularly limited, but preferably an inert gas atmosphere excluding oxygen is used. In addition, the polymerization temperature is not particularly limited, but
Usually, the temperature is in the range of 20 to 100°C, preferably 40 to 90°C.

本発明によるジスルフィド結合を有する粉状の活性化粒
子担体は、これを水性媒体中に再分散し、この後、必要
に応じてジスルフィド結合をチオール基に還元すること
によって、或いはチオール基を有する粉状の活性化粒子
担体を水性媒体中に再分散し、そのままにてジスルフィ
ド結合又はチオール基を有するタンパク質と混合するの
みで、ジスルフィド結合交換反応によって容易にタンパ
ク質を粒子担体に固定化することができる。The powdered activated particle carrier having disulfide bonds according to the present invention can be prepared by redispersing it in an aqueous medium and then optionally reducing the disulfide bonds to thiol groups, or by preparing powdered particles having thiol groups. Proteins can be easily immobilized on particle carriers by a disulfide bond exchange reaction by simply redispersing activated particle carriers in an aqueous medium and mixing them as they are with proteins having disulfide bonds or thiol groups. .

発明の効果 以上のように、本発明の活性化粒子担体は凍結乾燥され
てなる粉状であるので、その保存や運搬が便利であるう
えに、水性媒体への再分散性にすぐれるので、そのまま
、水性媒体中に再分散させれば、ジスルフィド結合交換
反応によって、ジスルフィド結合又はチオール基を有す
るタンパク質の固定化に用いることができる。Effects of the Invention As described above, since the activated particle carrier of the present invention is in the form of a freeze-dried powder, it is not only convenient to store and transport, but also has excellent redispersibility in an aqueous medium. If it is redispersed in an aqueous medium as it is, it can be used to immobilize proteins having disulfide bonds or thiol groups by disulfide bond exchange reaction.

しかも、本発明の活性化粒子担体は、長期間にわたる保
存後にも、ジスルフィド結合交換反応によるタンパク質
の固定化機能を有する。Furthermore, the activated particle carrier of the present invention has the function of immobilizing proteins by disulfide bond exchange reaction even after long-term storage.

また、粒子担体を構成するための重合体粒子として、ア
クリル酸誘導体とアクリル酸フルオロアルキルエステル
誘導体とからなる共重合体を用いるとき、得られる粒子
担体がその粒径分布において狭く、均一であり、且つ、
水性媒体中での分散性に著しくすぐれるので、生理活性
タンパク質を固定化するに際して、高い活性収率を得る
ことができ、更に、このようにして得られる固定化生理
活性タンパク質においては、反応系に存在する外来の有
機物質の表面への吸着や被覆による表面汚染が実質的に
生じないので、その生理活性が長期間にわたって高く保
持される。Furthermore, when a copolymer consisting of an acrylic acid derivative and an acrylic acid fluoroalkyl ester derivative is used as the polymer particles for constituting the particle carrier, the particle carrier obtained is narrow and uniform in its particle size distribution, and,
Because it has extremely good dispersibility in aqueous media, it is possible to obtain a high activity yield when immobilizing physiologically active proteins. Since there is virtually no surface contamination due to adsorption or coating of foreign organic substances present on the surface, its physiological activity is maintained at a high level for a long period of time.

実施例 以下に実施例を挙げて本発明を説明するが、本発明はこ
れら実施例により何ら限定されるものではない。EXAMPLES The present invention will be explained below with reference to Examples, but the present invention is not limited to these Examples in any way.

実施例１ （重合体粒子の製造） メチルメタクリレート７９重量％、ＩＨ，ＩＩ（、５Ｈ
−オクタフルオロベンチルメタクリレ−８１フ重量％、
アクリル酸３重量％、トリエチレングリコールジメタク
リレート１重量％よりなる単量体混合物９０ｇを蒸留水
３５０ｇに加え、次いで、過硫酸アンモニウム０．３６
　ｇを蒸留水１０ｇに溶解した水溶液を７０℃の温度で
窒素気流下に加え、２５０ｒｐｍで撹拌しつつ、７時間
重合させて、重合率９９％にて平均粒径０．２５μｍの
重合体粒子の水性ラテックスを得た。Example 1 (Production of polymer particles) Methyl methacrylate 79% by weight, IH, II (, 5H
- Octafluorobentyl methacrylate - 81% by weight,
90g of a monomer mixture consisting of 3% by weight of acrylic acid and 1% by weight of triethylene glycol dimethacrylate was added to 350g of distilled water, and then 0.36% of ammonium persulfate was added.
An aqueous solution prepared by dissolving 10 g of distilled water in 10 g of distilled water was added under a nitrogen stream at a temperature of 70°C, and polymerized for 7 hours while stirring at 250 rpm to form polymer particles with an average particle size of 0.25 μm at a polymerization rate of 99%. An aqueous latex was obtained.

このラテックスを遠心分離し、０．０１　ｍｏｌ／Ｉホ
ウ酸緩衝液（ｐＨ７，０）にて５回洗浄した後、０．０
Ｉｍｏｌ／１ホウ酸緩衝液（ｐＨ７，０）に再分散させ
た。This latex was centrifuged, washed five times with 0.01 mol/I borate buffer (pH 7,0), and then
It was redispersed in Imol/1 borate buffer (pH 7,0).

このラテックス粒子の表面のカルボキシル基数は電導度
滴定法にて定量したところ、７．３Ｘ１０−’ｍｏｌ／
ｍ２であった。The number of carboxyl groups on the surface of these latex particles was determined by conductivity titration, and was found to be 7.3X10-'mol/
It was m2.

（重合体粒子へのシスタミンの結合による粒子担体の製
造） 上記ラテックス（固形分５重量％）１００ｍｌとシスタ
ミン水溶液（０，０３ｍｏｌ／１）　　１００ｍｌとを
混合し、ＩＮ水酸化ナトリウム水溶液にてｐＨを７゜０
に調整した。０．０１　ｍｏｌ／１ホウ酸緩衝液（ｐＨ
７゜０）に溶解させた１−エチル−３−（３−ジメチル
アミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩溶液（３８■／
ｍｌ）　　２０ｍｌを上記シスタミンを含むラテックス
に加え、２５℃の温度で５時間、攪拌下に反応させた。(Production of particle carrier by binding cystamine to polymer particles) 100 ml of the above latex (solid content 5% by weight) and 100 ml of cystamine aqueous solution (0.03 mol/1) were mixed, and the pH was adjusted with IN sodium hydroxide aqueous solution. 7゜0
Adjusted to. 0.01 mol/1 borate buffer (pH
1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride solution (38μ/
ml) was added to the cystamine-containing latex, and reacted with stirring at a temperature of 25° C. for 5 hours.

次に、０．０１　ｍｏｌ／Ｉホウ酸緩衝液（ｐＨ７，０
）にて３回遠心分離洗浄して、シスタミンを結合させた
ラテックス粒子を得、これを０．０１　ｍｏ！／１ホウ
酸緩衝液（ｐＨ７，０）に再分散させた。Next, 0.01 mol/I borate buffer (pH 7.0
) was centrifuged and washed three times to obtain cystamine-bound latex particles, which were mixed into 0.01 mo! /1 borate buffer (pH 7,0).

このラテックスを固形分５重量％にて凍結乾燥し、室温
で所定期間放置した後、０．０１　ｍｏｌ／ｌホウ酸緩
衝液（ｐＨ７，０）中に再分散させ、ラテックス粒子の
分散状態を光学顕微鏡（３００倍）にて観察した。結果
を第１表に示す。ラテックス粒子は均一であって、凝集
は全く認められず、再分散安定性が極めてすぐれている
ことが確認された。This latex was freeze-dried at a solid content of 5% by weight, left at room temperature for a predetermined period of time, and then redispersed in 0.01 mol/l borate buffer (pH 7.0), and the dispersion state of the latex particles was optically examined. Observation was made using a microscope (300x magnification). The results are shown in Table 1. It was confirmed that the latex particles were uniform and no agglomeration was observed, indicating that the redispersion stability was extremely excellent.

また、この再分散させた後のラテックス粒子のジスルフ
ィド結合を２−メルカプトエチルアミンにて完全にチオ
ール基に還元した後、これを５，５゛−ジチオビス（２
−ニトロ安息香酸）にて定量した。結果を第１表に示す
。Further, after completely reducing the disulfide bonds of the latex particles after redispersion to thiol groups with 2-mercaptoethylamine, this was converted into 5,5゛-dithiobis(2
-Nitrobenzoic acid). The results are shown in Table 1.

実施例２ 実施例工において得たラテックス（５重量％）５０ｍｌ
に、凍結乾燥する前に、２−メルカプトエチルアミン水
溶液（１ｍｏｌ／ｌ　）　　３５ｍｌを加え、攪拌下に
２５℃で２時間反応させた後、０．０１　ｍｏｌ／１ホ
ウ酸緩衝液（ｐＨ７，０）にて５回遠心分離洗浄して、
表面にチオール基を有する粒子を含むラテックスを得た
。Example 2 50 ml of latex (5% by weight) obtained in the example process
Before freeze-drying, 35 ml of 2-mercaptoethylamine aqueous solution (1 mol/l) was added, and after reacting at 25°C for 2 hours with stirring, 0.01 mol/1 boric acid buffer (pH 7,0) was added. Centrifuged and washed 5 times at
A latex containing particles having thiol groups on the surface was obtained.

このラテックスを直ちに固形分５重量％にて凍結乾燥し
、室温にて所定期間放置した後、０．Ｏ１ｍｏｌ／ｌホ
ウ酸緩衝液（ｐＨ７，０）に再分散させて、粒子の分散
状態を前述したのと同じ方法にて観察した。また、同時
に、前記と同様にして、再分散させた後のラテックス粒
子のチオール基を５．５’　−ジチオビス（２−ニトロ
安息香酸）にて定量した。This latex was immediately freeze-dried at a solid content of 5% by weight, left at room temperature for a predetermined period of time, and then dried at a solid content of 5% by weight. The particles were redispersed in O1 mol/l boric acid buffer (pH 7,0), and the dispersion state of the particles was observed in the same manner as described above. At the same time, the thiol groups of the redispersed latex particles were determined using 5,5'-dithiobis(2-nitrobenzoic acid) in the same manner as above.

結果を第２表に示す。The results are shown in Table 2.

比較例１ 実施例２において、チオール基を有するラテックス粒子
を凍結乾燥することなしに、分散状態のままで所定期間
室温で放置した後、その分散状態とチオール基数とを実
施例２と同じ方法にて調べた。結果を第２表に示す。Comparative Example 1 In Example 2, the latex particles having thiol groups were left in a dispersed state at room temperature for a predetermined period of time without being freeze-dried, and then the dispersed state and the number of thiol groups were changed in the same manner as in Example 2. I looked it up. The results are shown in Table 2.

再分散状態が経時的に悪くなると共に、粒子上のチオー
ル基数が著しく減少することが確認された。It was confirmed that as the redispersion state worsened over time, the number of thiol groups on the particles decreased significantly.

実施例３ 実施例２において得た表面にチオール基を存する粒子担
体を含むラテックスの凍結乾燥品を室温にて所定期間放
置した後、これを固形分５重量％となるように０．０１
　ｍｏｌ／１ホウ酸緩衝液（ｐＨ７，０）に再分散させ
た。Example 3 After the freeze-dried latex containing the particle carrier having thiol groups on the surface obtained in Example 2 was left at room temperature for a predetermined period, it was diluted with 0.01% solids to give a solid content of 5% by weight.
It was redispersed in mol/1 borate buffer (pH 7,0).

このラテックス４ｍｌにβ−Ｄ−ガラクトシダーセ（４
ａｒ／ｍｌ、ベーリンガー・マンハイム社製）３ｍｌを
加え、５℃で１０時間、攪拌下に反応させた。次いで、
０．０１　ｍｏｌ／１ホウ酸緩衝液（ｐＨ７，０）に分
散させ、かくして、β−Ｄ−ガラクトシダーゼがジスル
フィド結合によって担体粒子に固定化されてなるラテッ
クスを得た。Add β-D-galactosidase (4ml) to 4ml of this latex.
ar/ml, manufactured by Boehringer Mannheim) was added thereto, and the mixture was reacted at 5° C. for 10 hours with stirring. Then,
It was dispersed in 0.01 mol/1 borate buffer (pH 7.0), thus obtaining a latex in which β-D-galactosidase was immobilized on carrier particles by disulfide bonds.

β−Ｄ−ガラクトシダーゼの固定化量及び活性収率を第
３表に示す。ここに、活性収率とは、酵素の活性の理論
量に対する実際の活性の割合として定義されるものであ
って、ラクトースを基質としてＮ　Ａ　Ｄ及びガラクト
ースデヒドロゲナーゼの共存下で反応させて、生成した
ＮＡＤＨを３４０ｎｍの吸光度から酵素活性を測定し、
これと等しい活性を有する遊離の酵素量を酵素固定化量
で除して求めた。結果を第３表に示す。Table 3 shows the immobilized amount and activity yield of β-D-galactosidase. Here, the activity yield is defined as the ratio of the actual activity to the theoretical amount of enzyme activity, and is the amount of enzyme produced by reacting with lactose as a substrate in the coexistence of NAD and galactose dehydrogenase. Measure the enzyme activity of NADH from absorbance at 340 nm,
The amount of free enzyme having the same activity was divided by the amount of immobilized enzyme. The results are shown in Table 3.

第３表 本発明の粒子担体によれば、粒子表面のチオール基が６
か月後においても酵素の固定化のために有効に機能する
ことが確認された。Table 3 According to the particle carrier of the present invention, the thiol group on the particle surface is 6
It was confirmed that it functions effectively for enzyme immobilization even after several months.

比較例２ （重合体粒子の製造） メチルメタクリレート９８．２重量％、アクリル酸０．
８重量％、トリエチレングリコールジメタクリレー）１
重量％よりなる単量体混合物９０ｇを蒸留水３５０ｇに
加え、次いで、過硫酸アンモニウム０．３６ｇを蒸留水
１０ｇに溶解した水溶液を７０℃の温度で窒素気流下に
加え、２５Ｏｒｐｍで攪拌しつつ、７時間重合させて、
重合率９９％にて平均粒径０，２９μｍの重合体粒子の
水性ラテックスを得た。Comparative Example 2 (Production of polymer particles) 98.2% by weight of methyl methacrylate, 0.0% by weight of acrylic acid.
8% by weight, triethylene glycol dimethacrylate) 1
90 g of a monomer mixture consisting of % by weight was added to 350 g of distilled water, and then an aqueous solution of 0.36 g of ammonium persulfate dissolved in 10 g of distilled water was added at a temperature of 70° C. under a nitrogen stream, and while stirring at 25 Orpm, Polymerize for a while,
An aqueous latex of polymer particles having an average particle diameter of 0.29 μm was obtained at a polymerization rate of 99%.

このラテックスを遠心分離し、０．０１　ｍｏｌ／１ホ
ウ酸緩衝液（ｐＨ７，０）にて３回、次いで、０．０１
ｍｏｌ／１ホウ酸緩衝液（ｐＨ５，５）で２回洗浄した
後、同緩衝液（ｐＨ５，５）に再分散させた。このラテ
ックス粒子の表面のカルボキシル基量は、電導度滴定法
にて定量したところ、２．　Ｉ　Ｘ　１０−’ｍｏｌ／
ｍ”であった。This latex was centrifuged and diluted with 0.01 mol/1 borate buffer (pH 7.0) three times, then 0.01 mol/1 borate buffer (pH 7.0).
After washing twice with mol/1 boric acid buffer (pH 5,5), it was redispersed in the same buffer (pH 5,5). The amount of carboxyl groups on the surface of the latex particles was determined by conductivity titration and was found to be 2. I X 10-'mol/
It was "m".

（重合体粒子へのシスタミンの結合） このラテックス（固形分５重量％）１００ｍｌとシスタ
ミン水溶液（０，２０ｍｏｌ／Ｉ）　　１００ｍｌとを
混合し、ｐＨを５．５に調整した後、０．０１　ｍｏｌ
／１ホウ酸緩衝液（ｐＨ５，５）に溶解させた１−エチ
ル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミ
ド塩酸塩溶液（２５０ｍｇ／ｍｌ）　２０　ｍｌを加え
て、２５℃で１５時間、攪拌下に反応させた。(Binding of cystamine to polymer particles) 100 ml of this latex (solid content 5% by weight) and 100 ml of cystamine aqueous solution (0.20 mol/I) were mixed, the pH was adjusted to 5.5, and then 0.01 mol
Add 20 ml of 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride solution (250 mg/ml) dissolved in /1 borate buffer (pH 5,5) and stir at 25°C for 15 hours. I reacted below.

次に、０．０１　ｍｏｌ／１ホウ酸緩衝液（ｐＨ７，０
）にて３回遠心分離洗浄して、シスタミンを結合させた
ラテックス粒子を得た。このラテックス粒子の表面のジ
スルフィド結合の数を実施例１と同じ方法にて定量した
ところ、５．２　Ｘ　１０　””ｍｏｌ／ｍ”であって
、これはカルボキシル基数の２４．８％に相当する。Next, 0.01 mol/1 borate buffer (pH 7,0
) and centrifuged and washed three times to obtain cystamine-bound latex particles. When the number of disulfide bonds on the surface of this latex particle was quantified using the same method as in Example 1, it was found to be 5.2 x 10 mol/m, which corresponds to 24.8% of the number of carboxyl groups. .

このラテックスを固形分５重量％にて凍結乾燥したもの
、及び上記ラテックス（固形分５重量％）５０ｍｌに２
−メルカプトエチルアミン水溶液（１ｍｏｌ／ｌ　）　
３５ｍｌを加え、攪拌下に２５℃で２時間反応させた後
、０．０１　ｍｏｌ／ｌホウ酸緩衝液（ｐＨ７゜０）に
て５回遠心分離洗浄して、利他担体上のジスルフィド結
合をチオール基に還元した後、凍結乾燥したものをそれ
ぞれ０．０１　ｍｏｌ／ｌホウ酸緩衝液（ｐＨ７，０）
中に再分散させたところ、いずれの場合も、肉眼にて明
瞭な凝集が認められた。This latex was freeze-dried at a solid content of 5% by weight, and 2
-Mercaptoethylamine aqueous solution (1 mol/l)
After adding 35 ml of the altruistic carrier and reacting for 2 hours at 25°C with stirring, the disulfide bond on the altruistic carrier was removed by thiol. After reducing the lyophilized product to 0.01 mol/l borate buffer (pH 7,0),
In all cases, clear aggregation was observed with the naked eye.

比較例３ （重合体粒子の製造） メチルメタクリレート９６重量％、アクリル酸３重量％
及びトリエチレングリコールジメタクリレート１重量％
よりなる単量体混合物９０ｇを蒸留水３５０ｇに加え、
次いで、過硫酸アンモニウム０．３６　ｇを蒸留水１０
ｇに溶解した水溶液を７０℃の温度で窒素気流下に加え
、２５０ｒｐｍで攪拌しつつ、７時間重合させて、重合
率１００％にて平均粒径０．２８μｍの重合体粒子の水
性ラテックスを得た。Comparative Example 3 (Production of polymer particles) Methyl methacrylate 96% by weight, acrylic acid 3% by weight
and 1% by weight of triethylene glycol dimethacrylate
Add 90 g of a monomer mixture consisting of the following to 350 g of distilled water,
Next, 0.36 g of ammonium persulfate was added to 10 g of distilled water.
Add an aqueous solution dissolved in 50 g under a nitrogen stream at a temperature of 70 ° C. and polymerize for 7 hours while stirring at 250 rpm to obtain an aqueous latex of polymer particles with an average particle size of 0.28 μm at a polymerization rate of 100%. Ta.

このラテックスを遠心分離し、０．０１　ｍｏｌ／１ホ
ウ酸緩衝液（ｐＨ７，０）にて５回洗浄した後、同じ緩
衝液（ｐＨ７，０）に再分散させた。このラテックス粒
子の表面のカルボキシル基量は、電導度滴定法にて定量
したところ、７．８　Ｘ　１０−’ｍｏｌ／ｍ”であっ
た。This latex was centrifuged, washed five times with 0.01 mol/1 borate buffer (pH 7.0), and then redispersed in the same buffer (pH 7.0). The amount of carboxyl groups on the surface of the latex particles was determined by conductivity titration to be 7.8 x 10-'mol/m''.

（重合体粒子へのシスタミンの結合） このラテックス（固形分５重量％）粒子に実施例１と同
じ方法にてシスタミンを結合させた後、０、０１　ｍｏ
ｌ／１ホウ酸緩衝液（ｐ）Ｉ　７．０　）に再分散させ
た。(Binding of cystamine to polymer particles) Cystamine was bonded to the latex (solid content 5% by weight) particles in the same manner as in Example 1, and then 0.01 mo
It was redispersed in 1/1 borate buffer (p)I 7.0).

このシスタミン結合ラテックスを固形分５重量％にて凍
結乾燥し、室温で所定期間放置した後、０、０１　ｍｏ
ｌ／１ホウ酸緩衝液（ｐＨ７，０）に再分散させ、その
分散状態を光学顕微鏡（３００倍）にて観察した。結果
を第４表に示す。This cystamine-bound latex was freeze-dried at a solid content of 5% by weight, and after being left at room temperature for a predetermined period of time, 0.01 mo
It was redispersed in 1/1 borate buffer (pH 7.0), and the dispersion state was observed using an optical microscope (300x magnification). The results are shown in Table 4.

比較例４ （重合体粒子の製造） メチルメタクリレート６５重量％、ＬＨ，ＩＨ，５Ｈ−
オクタフルオロペンチルメタクリレート１７重量％、ア
クリル酸１７重量％及びトリエチレングリコールジメタ
クリレート１重量％よりなる単量体混合物９０ｇを蒸留
水３５０ｇに加え、次いで、過硫酸アンモニウム０．３
６ｇを蒸留水１０ｇに溶解した水溶液を７０℃の温度で
窒素気流下に加え、２５０ｒｐｍで攪拌しつつ、７時間
重合させて、重合率９１％にて平均粒径０．２２μｍの
重合体粒子の水性ラテックスを得た。Comparative Example 4 (Production of polymer particles) Methyl methacrylate 65% by weight, LH, IH, 5H-
90 g of a monomer mixture consisting of 17% by weight of octafluoropentyl methacrylate, 17% by weight of acrylic acid and 1% by weight of triethylene glycol dimethacrylate was added to 350 g of distilled water, and then 0.3% of ammonium persulfate was added.
An aqueous solution of 6 g dissolved in 10 g of distilled water was added under a nitrogen stream at a temperature of 70°C, and polymerized for 7 hours while stirring at 250 rpm to form polymer particles with an average particle size of 0.22 μm at a polymerization rate of 91%. An aqueous latex was obtained.

このラテックスを遠心分離し、Ｏ，Ｏｔ　ｍｏｌ／１ホ
ウ酸緩衝液（ｐＨ７，０）にて５回洗浄した後、０．０
１　ｍｏｌ／１ホウ酸緩衝液（ｐＨ７，０）に再分散さ
せた。This latex was centrifuged, washed five times with O, Ot mol/1 borate buffer (pH 7,0), and then
It was redispersed in 1 mol/1 borate buffer (pH 7,0).

このラテックス粒子の表面のカルボキシル基数は、電導
度滴定法にて定量したところ、３６．ＯＸｌｏ−ｈｍｏ
ｌ／ｍ”であった。The number of carboxyl groups on the surface of this latex particle was determined by conductivity titration to be 36. OXlo-hmo
l/m".

（重合体粒子へのシスタミンの結合による粒子担体の製
造） 実施例１と同じ方法にて、上記ラテックス（固形分５重
量％）にシスタミンを結合させた後、これを０．０１　
ｍｏ＋／１ホウ酸緩衝液（ｐＨ７，０’）に再分散させ
た。(Production of particle carrier by binding cystamine to polymer particles) After binding cystamine to the above latex (solid content 5% by weight) in the same manner as in Example 1, 0.01% of this was
It was redispersed in mo+/1 borate buffer (pH 7,0').

固形分５重量％にて凍結乾燥し、室温にて１か月間放置
した後、０．０１　ｍｏｌ／ｌホウ酸緩衝液（ｐＨ７，
０）に再分散させて、ラテックスの分散状態を観察した
ところ、肉眼にても凝集を認めることができた。After freeze-drying at a solid content of 5% by weight and leaving it at room temperature for one month, 0.01 mol/l borate buffer (pH 7,
0) and observed the dispersion state of the latex, aggregation could be observed with the naked eye.

比較例５ （重合体粒子の製造） メチルメタクリレート８１．９重量％、ＩＩ（、ＩＨ，
５Ｈ−オクタフルオロペンチルメタクリレート１７重量
％、アクリル酸０．１重量％及びトリエチレングリコー
ルジメタクリレート１重量％よりなる単量体混合物９０
ｇを蒸留水３５０ｇに加え、次いで、過硫酸アンモニウ
ム０．３６　ｇを蒸留水１０ｇに溶解した水溶液を７０
℃の温度で窒素気流下に加え、２５０ｒｐｍで撹拌しつ
つ、７時間重合させて、重合率９６％にて平均粒径０．
２７μｍの重合体粒子の水性ラテックスを得た。Comparative Example 5 (Production of polymer particles) Methyl methacrylate 81.9% by weight, II (, IH,
Monomer mixture 90 consisting of 17% by weight of 5H-octafluoropentyl methacrylate, 0.1% by weight of acrylic acid and 1% by weight of triethylene glycol dimethacrylate
g was added to 350 g of distilled water, and then an aqueous solution of 0.36 g of ammonium persulfate dissolved in 10 g of distilled water was added to 70 g of distilled water.
C. under a nitrogen stream and polymerized for 7 hours while stirring at 250 rpm, resulting in a polymerization rate of 96% and an average particle size of 0.
An aqueous latex of 27 μm polymer particles was obtained.

このラテックスを遠心分離し、０．０１　ｍｏｌ／１ホ
ウ酸緩衝液（ｐＨ７，０）にて５回洗浄した後、０．０
１　ｍｏｌ／１ホウ酸緩衝液（ｐＨ７，０）に再分散さ
せた。This latex was centrifuged, washed five times with 0.01 mol/1 borate buffer (pH 7.0), and then
It was redispersed in 1 mol/1 borate buffer (pH 7,0).

このラテックス粒子の表面のカルボキシル基数は、電導
度滴定法にて定量したところ、０．３Ｘ１０−６ｎｏｔ
／ｍ”であった。The number of carboxyl groups on the surface of this latex particle was determined by conductivity titration and was found to be 0.3X10-6not
/m”.

（重合体粒子へのシスタミンの結合による粒子担体の製
造） 実施例１と同じ方法にて、上記ラテックス（固形分５重
量％）にシスタミンを結合させ、これを０、０１　ｍｏ
ｌ／１ホウ酸緩衝液（ｐＨ７，０）に再分散させた０次
いで、固形分５重量％にて凍結乾燥し、室温にて１か月
間放置した後、０．０１　ｍｏｌ／１ホウ酸緩１）酸液
１ｐＨ７，０）に再分散させることを試みたが、分散性
が著しく悪く、分散液を得ることができなかった。(Production of particle carrier by bonding cystamine to polymer particles) Cystamine was bonded to the latex (solid content 5% by weight) in the same manner as in Example 1, and this was
0.01 mol/1 boric acid buffer solution (pH 7.0) was then lyophilized at a solid content of 5% by weight, left at room temperature for 1 month, and then dissolved in 0.01 mol/1 boric acid buffer 1) An attempt was made to redisperse it in an acid solution (pH 7.0), but the dispersibility was extremely poor and a dispersion could not be obtained.

Claims (6)

【特許請求の範囲】[Claims] （１）表面にカルボキシル基を有する粒径０．０３〜３
μｍの重合体粒子を含むラテックスに、一般式 ＮＨ＿２−Ｒ＾ａ−Ｓ−Ｓ−Ｒ＾ｂ−Ｙ　（ I ）（式
中、Ｒ＾ａ及びＲ＾ｂはそれぞれ独立に炭素数１〜６の
アルキレン基を示し、このアルキレンは置換基としてカ
ルボキシル基を有していてもよく、Ｙは水素、アミノ基
又は水酸基を示す。）で表わされるアミノジスルフィド
化合物を反応させて、上記アミノジスルフィド化合物を
上記カルボキシル基とアミド結合を形成させて結合し、
次いで、ラテックスを凍結乾燥してなることを特徴とす
る活性化粒子担体。(1) Particle size 0.03 to 3 with carboxyl groups on the surface
A latex containing polymer particles of μm in size has the general formula NH_2-R^a-S-S-R^b-Y (I) (wherein R^a and R^b each independently have a carbon number of 1 to 6). This alkylene may have a carboxyl group as a substituent, and Y represents hydrogen, an amino group, or a hydroxyl group. bonded by forming an amide bond with the carboxyl group,
Next, an activated particle carrier is obtained by freeze-drying the latex. （２）重合体粒子がアミノジスルフィド化合物を結合さ
れる前に０．１〜６０μｍｏｌ／ｍ＾２のカルボキシル
基を有し、活性化粒子担体の有するジスルフィド結合の
数が上記カルボキシル基数の２０％以下であることを特
徴とする特許請求の範囲第１項記載の活性化粒子担体。(2) The polymer particles have 0.1 to 60 μmol/m^2 of carboxyl groups before being bonded with the amino disulfide compound, and the number of disulfide bonds in the activated particle carrier is 20% or less of the above number of carboxyl groups. Activated particle carrier according to claim 1, characterized in that: （３）重合体粒子が （ａ）一般式 Ｒ＾１ＣＨ＝ＣＲ＾２ＣＯＯＨ （但し、Ｒ＾１は水素、低級アルキル基又はカルボキシ
ル基を示し、Ｒ＾２は水素又は低級アルキル基を示し、
Ｒ＾１が水素又は低級アルキル基のときは、Ｒ＾２はカ
ルボ低級アルコキシ基であつてもよい。） で表わされるアクリル酸誘導体０．１〜２０重量％、及
び （ｂ）一般式 ＣＨ＿２＝ＣＲ＾３ＣＯＯＲ＾４（ＣＦ＿２）＿ｎＣＦ
Ａ＿２（但し、Ｒ＾３は水素又は低級アルキル基を示し
、Ｒ＾４は −（ＣＨ＿２）ｍ−又は▲数式、化学式、表等がありま
す▼ （但し、ｍは０〜１２の整数を示し、ｘ＋ｙ＝ｍ−１で
あり、Ｒ＾５は水素又はアセチル基を示す。）を示し、
Ａはそれぞれ独立に水素、フッ素又はＣＦ＿３を示し、
ｎは０〜１２の整数を示す。） で表わされるアクリル酸フルオロアルキルエステル誘導
体と、上記アクリル酸誘導体を除くラジカル共重合性ビ
ニル単量体との混合物であつて、この混合物に基づいて
上記アクリル酸フルオロアルキルエステル誘導体が１〜
１００重量％である混合物９９．９〜８０重量％ からなる単量体混合物を水性媒体中で乳化共重合させて
なる水分散型高分子重合体粒子であることを特徴とする
特許請求の範囲第１項記載の活性化粒子担体。(3) The polymer particles have (a) the general formula R^1CH=CR^2COOH (wherein R^1 represents hydrogen, a lower alkyl group, or a carboxyl group, and R^2 represents hydrogen or a lower alkyl group,
When R^1 is hydrogen or a lower alkyl group, R^2 may be a carbo-lower alkoxy group. ) 0.1 to 20% by weight of an acrylic acid derivative represented by (b) general formula CH_2=CR^3COOR^4(CF_2)_nCF
A_2 (However, R^3 represents hydrogen or a lower alkyl group, R^4 is -(CH_2)m- or ▲ Numerical formula, chemical formula, table, etc.▼ (However, m represents an integer from 0 to 12, x+y=m-1, R^5 represents hydrogen or an acetyl group),
A each independently represents hydrogen, fluorine or CF_3,
n represents an integer of 0 to 12. ) A mixture of an acrylic acid fluoroalkyl ester derivative represented by
100% by weight of a mixture of 99.9 to 80% by weight of a monomer mixture that is emulsion copolymerized in an aqueous medium. Activated particle carrier according to item 1. （４）表面にカルボキシル基を有する粒径０．０３〜５
μｍの重合体粒子を含むラテックスに、一般式 ＮＨ＿２−Ｒ＾ａ−Ｓ−Ｓ−Ｒ＾ｂ−Ｙ　（ I ）（式
中、Ｒ＾ａ及びＲ＾ｂはそれぞれ独立に炭素数１〜６の
アルキレン基を示し、このアルキレンは置換基としてカ
ルボキシル基を有していてもよく、Ｙは水素、アミノ基
又は水酸基を示す。）で表わされるアミノジスルフィド
化合物を反応させて、上記アミノジスルフィド化合物を
上記カルボキシル基とアミド結合を形成させて結合し、
この後、ジスルフィド結合をチオール基に還元し、次い
で、ラテックスを凍結乾燥してなることを特徴とする活
性化粒子担体。(4) Particle size 0.03-5 with carboxyl group on the surface
A latex containing polymer particles of μm in size has the general formula NH_2-R^a-S-S-R^b-Y (I) (wherein R^a and R^b each independently have a carbon number of 1 to 6). This alkylene may have a carboxyl group as a substituent, and Y represents hydrogen, an amino group, or a hydroxyl group. bonded by forming an amide bond with the carboxyl group,
An activated particle carrier characterized in that the disulfide bonds are then reduced to thiol groups, and the latex is then freeze-dried. （５）重合体粒子がアミノジスルフィド化合物を結合さ
れる前に０．１〜６０μｍｏｌ／ｍ＾２のカルボキシル
基を有し、活性化粒子担体の有するジスルフィド結合の
数が上記カルボキシル基数の２０％以下であることを特
徴とする特許請求の範囲第４項記載の活性化粒子担体。(5) The polymer particles have 0.1 to 60 μmol/m^2 of carboxyl groups before being bonded with the amino disulfide compound, and the number of disulfide bonds in the activated particle carrier is 20% or less of the number of carboxyl groups mentioned above. Activated particle carrier according to claim 4, characterized in that: （６）重合体粒子が （ａ）一般式 Ｒ＾１ＣＨ＝ＣＲ＾２ＣＯＯＨ （但し、Ｒ＾１は水素、低級アルキル基又はカルボキシ
ル基を示し、Ｒ＾２は水素又は低級アルキル基を示し、
Ｒ＾１が水素又は低級アルキル基のときは、Ｒ＾２はカ
ルボ低級アルコキシ基であつてもよい。） で表わされるアクリル酸誘導体０．１〜２０重量％、及
び （ｂ）一般式 ＣＨ＿２＝ＣＲ＾３ＣＯＯＲ＾４（ＣＦ＿２）＿ｎＣＦ
Ａ＿２（但し、Ｒ＾３は水素又は低級アルキル基を示し
、Ｒ＾４は −（ＣＨ＿２）＿ｍ−又は▲数式、化学式、表等があり
ます▼ （但し、ｍは０〜１２の整数を示し、ｘ＋ｙ＝ｍ−１で
あり、Ｒ＾５は水素又はアセチル基を示す。）を示し、
Ａはそれぞれ独立に水素、フッ素又はＣＦ＿３を示し、
ｎは０〜１２の整数を示す。） で表わされるアクリル酸フルオロアルキルエステル誘導
体と、上記アクリル酸誘導体を除くラジカル共重合性ビ
ニル単量体との混合物であつて、この混合物に基づいて
上記アクリル酸フルオロアルキルエステル誘導体が１〜
１００重量％である混合物９９．９〜８０重量％ からなる単量体混合物を水性媒体中で乳化共重合させて
なる水分散型高分子重合体粒子であることを特徴とする
特許請求の範囲第４項記載の活性化粒子担体。(6) The polymer particles have (a) the general formula R^1CH=CR^2COOH (wherein R^1 represents hydrogen, a lower alkyl group, or a carboxyl group, and R^2 represents hydrogen or a lower alkyl group,
When R^1 is hydrogen or a lower alkyl group, R^2 may be a carbo-lower alkoxy group. ) 0.1 to 20% by weight of an acrylic acid derivative represented by (b) general formula CH_2=CR^3COOR^4(CF_2)_nCF
A_2 (However, R^3 represents hydrogen or a lower alkyl group, R^4 is -(CH_2)_m- or ▲ Numerical formula, chemical formula, table, etc.▼ (However, m represents an integer from 0 to 12, x+y=m-1, R^5 represents hydrogen or an acetyl group),
A each independently represents hydrogen, fluorine or CF_3,
n represents an integer of 0 to 12. ) A mixture of an acrylic acid fluoroalkyl ester derivative represented by
100% by weight of a mixture of 99.9 to 80% by weight of a monomer mixture that is emulsion copolymerized in an aqueous medium. Activated particle carrier according to item 4.