JPS6249258A - 液体試料中の各種抗体の免疫定量方法 - Google Patents
液体試料中の各種抗体の免疫定量方法Info
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- JPS6249258A JPS6249258A JP61013598A JP1359886A JPS6249258A JP S6249258 A JPS6249258 A JP S6249258A JP 61013598 A JP61013598 A JP 61013598A JP 1359886 A JP1359886 A JP 1359886A JP S6249258 A JPS6249258 A JP S6249258A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野一
本発明は単数又は複数の抗原に対する各種の型の抗体の
免疫学的定量方法に関する。更に詳細には本発明はＩｇ
Ｍ抗体、ＩｇＧ抗体及び恐らくその他の型例えばＩｇＡ
、 ｉｇｎ 、 ＩｇＥを含有する液体試料例えば生
物学的・流体の中のＩｇＭ抗体の免疫学的定量方法に関
する。
免疫学的定量方法に関する。更に詳細には本発明はＩｇ
Ｍ抗体、ＩｇＧ抗体及び恐らくその他の型例えばＩｇＡ
、 ｉｇｎ 、 ＩｇＥを含有する液体試料例えば生
物学的・流体の中のＩｇＭ抗体の免疫学的定量方法に関
する。
頓才α皮街−幻ｌｌ穎県
ヒトがバクテリア又はウィルスに感染し７た場合には該
病原ｉ戒生物の殺滅のために−・般には各種の型の抗体
を産生ずる。
病原ｉ戒生物の殺滅のために−・般には各種の型の抗体
を産生ずる。
木質的に抗体は主としてＩｇＭ型抗体であるがやがてＩ
Ｆ、、Ｇが優勢となり多年にわたり存続する。抗体の
存在をｊｉ″Ｌに測定することば感染の有無の診断にと
って有用でないことが屡々であるけれどもヒトが免疫性
を有するか否か、又は残る特別な型の感染に対して抵抗
性を有するか否かの測定に＋９いてかなり価値あるもの
である。しかり、なから最初に形成された抗体即ちＩｇ
）Ｉが検出され、ｉ、（ｃに比較された相対的濃度が測
定されるならば、感染が最近起ったものなのか又Ｌ７１
′古い時期に起ったものなのかを知り得るのである。か
ような測定は例えば各種のバクテリア、プロ１−シア及
びウィルスによる感染が胎児にまで及んだ場合の〒朋妊
娠時において極めて重要である。
Ｆ、、Ｇが優勢となり多年にわたり存続する。抗体の
存在をｊｉ″Ｌに測定することば感染の有無の診断にと
って有用でないことが屡々であるけれどもヒトが免疫性
を有するか否か、又は残る特別な型の感染に対して抵抗
性を有するか否かの測定に＋９いてかなり価値あるもの
である。しかり、なから最初に形成された抗体即ちＩｇ
）Ｉが検出され、ｉ、（ｃに比較された相対的濃度が測
定されるならば、感染が最近起ったものなのか又Ｌ７１
′古い時期に起ったものなのかを知り得るのである。か
ような測定は例えば各種のバクテリア、プロ１−シア及
びウィルスによる感染が胎児にまで及んだ場合の〒朋妊
娠時において極めて重要である。
該測定に伴・う困難性はＩｇＧとＩｇＭとの濃度の相違
にある。分子？農度に関してはヒ１〜血清中のＩｇＧは
ＩｇＨの例えば１０倍以上で存在することが予期される
。Ｉｇ）１又はＩｇＧの通常２％以下のＩｇＨ抗体又は
ＩｇＧ抗体の比率が期待され、これは双方の免疫グロブ
リンにとって同様であろう。
にある。分子？農度に関してはヒ１〜血清中のＩｇＧは
ＩｇＨの例えば１０倍以上で存在することが予期される
。Ｉｇ）１又はＩｇＧの通常２％以下のＩｇＨ抗体又は
ＩｇＧ抗体の比率が期待され、これは双方の免疫グロブ
リンにとって同様であろう。
ＩｇＧからＩｇＭ抗体を区別する多くの方法が文献に記
載されている（参考書： Ｃｈａｎｔｌｅｒ ａｎｄ
Ｄｉｍｅｎｔ。
載されている（参考書： Ｃｈａｎｔｌｅｒ ａｎｄ
Ｄｉｍｅｎｔ。
Ｃｕｒｒｅｎｔ ５ｔａｔｕｓ ｏｆ ５ｐｅｃｉｆｉ
ｃ ＩｇＭ ａｎｔｉｂｏｄｙ ａｓｓａｙｓ（１９８
１） １４１７＋ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏ−ａｓｓａｙｓ
ｆｏｒｔｈｅ ８０ ’ｓ、 Ｍ、 Ｔ、 Ｐ、 Ｐ
ｒｅｓｓ Ｌｉｍ１ｔｅｄ、 Ｌａｎｃａｓｔｅｒ。
ｃ ＩｇＭ ａｎｔｉｂｏｄｙ ａｓｓａｙｓ（１９８
１） １４１７＋ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏ−ａｓｓａｙｓ
ｆｏｒｔｈｅ ８０ ’ｓ、 Ｍ、 Ｔ、 Ｐ、 Ｐ
ｒｅｓｓ Ｌｉｍ１ｔｅｄ、 Ｌａｎｃａｓｔｅｒ。
Ｉｌ、 Ｋ、 ）。
赤血球凝望法（Ｃｏｏｍｂｓ ｅｔ ａｔ、： Ｌａｎ
ｃｅｔ （１９６８）２．１１１５）を除くすべての方
法は選択された抗体を選択的に吸着するためのｉ故量滴
定板（ｍｉｃｒｏｔｉｔ、ｒａｔｉｏｎ ｐｌａｔｅ）
の管又は凹井（ｗｅｌ＋）の壁に付着（結合）した抗原
又は抗体に依存する。該管又は門外を洗って望ましから
ぬ免疫グロブリン又は他の存在可能な妨害物を除去しζ
からＩＢＭ（又はＩｇＧ ）抗体を標識する方法を適用
し、かようにして被検抗体量を測定する〔例えば記載文
献（Ｏｒｇａｎｏｎ Ｔｅｋｎｉｋａ、 Ｏｓｓ、 Ｈ
ｏ１ｌａｎｄ、 ｏｆ ｔｈｅｉｒ“Ｔｏｘｏｒ＋０ｓ
ｔｉｋａ ＩｇＨ ａｎｄ Ｔ（（Ｇ Ｍｉｃｒｏｅｌ
ｉｓａ″ｓｙｓｔｅｍ）を参照されたい）。該方法は゛
多くの手作業Ｉ！ｎち非結合抗体からの結合抗体の物理
的分別、洗浄及び長期間の恒温保持を必要とする。最も
多くの試験法における主な妨害物は“リウマチ因イ（ｒ
ｈｅｕｍａ−ｔｏｉｄ ｆａｃｔｏｒ）”又は”ＲＦ″
とよばれる抗体である。該ＲＦは多価抗原と反応したＩ
Ｐ、Ｇ又は物理的もしくは化学的過程により凝集したＩ
ｇＧと結合したＩｇＭであってすべての被検試料中で大
比率に存在する。更に多くの試験法は半定量的であるに
過ぎず即ち試験結果は重量であられされ得ない。
ｃｅｔ （１９６８）２．１１１５）を除くすべての方
法は選択された抗体を選択的に吸着するためのｉ故量滴
定板（ｍｉｃｒｏｔｉｔ、ｒａｔｉｏｎ ｐｌａｔｅ）
の管又は凹井（ｗｅｌ＋）の壁に付着（結合）した抗原
又は抗体に依存する。該管又は門外を洗って望ましから
ぬ免疫グロブリン又は他の存在可能な妨害物を除去しζ
からＩＢＭ（又はＩｇＧ ）抗体を標識する方法を適用
し、かようにして被検抗体量を測定する〔例えば記載文
献（Ｏｒｇａｎｏｎ Ｔｅｋｎｉｋａ、 Ｏｓｓ、 Ｈ
ｏ１ｌａｎｄ、 ｏｆ ｔｈｅｉｒ“Ｔｏｘｏｒ＋０ｓ
ｔｉｋａ ＩｇＨ ａｎｄ Ｔ（（Ｇ Ｍｉｃｒｏｅｌ
ｉｓａ″ｓｙｓｔｅｍ）を参照されたい）。該方法は゛
多くの手作業Ｉ！ｎち非結合抗体からの結合抗体の物理
的分別、洗浄及び長期間の恒温保持を必要とする。最も
多くの試験法における主な妨害物は“リウマチ因イ（ｒ
ｈｅｕｍａ−ｔｏｉｄ ｆａｃｔｏｒ）”又は”ＲＦ″
とよばれる抗体である。該ＲＦは多価抗原と反応したＩ
Ｐ、Ｇ又は物理的もしくは化学的過程により凝集したＩ
ｇＧと結合したＩｇＭであってすべての被検試料中で大
比率に存在する。更に多くの試験法は半定量的であるに
過ぎず即ち試験結果は重量であられされ得ない。
−灸■９月−吟
従って本発明の［１的は従来既知の定量法におｌｄる上
記の諸欠点を改善すると共に少くともひとっ（７）Ｊｊ
’ｉ：原に対し、ｒＩＸＭ 、ＩｇＧ Ｊｊ’ｆｆ体を
含有すルノ２ｉならず恐らく他の型の抗体例えばＩ、、
Ｉｔ 、 １ｇ＋１ 、１ｇ１シをも含有する液体試料
例えば生物学的流体中のＩＩ′りＩ抗体を著しく迅速に
、６０分間以上を要−りすに定量的に測定する免疫試験
法を提供するに在る。
記の諸欠点を改善すると共に少くともひとっ（７）Ｊｊ
’ｉ：原に対し、ｒＩＸＭ 、ＩｇＧ Ｊｊ’ｆｆ体を
含有すルノ２ｉならず恐らく他の型の抗体例えばＩ、、
Ｉｔ 、 １ｇ＋１ 、１ｇ１シをも含有する液体試料
例えば生物学的流体中のＩＩ′りＩ抗体を著しく迅速に
、６０分間以上を要−りすに定量的に測定する免疫試験
法を提供するに在る。
本発明方法はＭｔｌ＋定に当りＴＨＧ抗体から、又は血
清から、又は体内の流体からの【ｇＭ抗体の物理的分別
を全く必要とし２（い。更に本方法は例えばＩｇＭ抗体
及び他の型の抗体を含む液体試料中の１１′−ＩｇＨ抗
体の量的測定を可能とする。他方法とは異り本発明方法
ば又完全に自動化され得る。
清から、又は体内の流体からの【ｇＭ抗体の物理的分別
を全く必要とし２（い。更に本方法は例えばＩｇＭ抗体
及び他の型の抗体を含む液体試料中の１１′−ＩｇＨ抗
体の量的測定を可能とする。他方法とは異り本発明方法
ば又完全に自動化され得る。
一定−ＩｊＪＪ （７）−開−示
本発明に従い上記目的達成のために、抗原の少くともひ
とつに対するＩｇＭ 、ＩＢＧ抗体を含むと共に他の型
のもの例えばＴ、、Ａ 、 Ｔ、Ｄ 、 Ｉ８Ｆをも含
む可能＋＜＋のある液体試料をｆＧに対する抗体と反応
させ、該試料が該抗原のひとつに対するＩｇＡ抗体を含
む場合（ＩｇＤ抗体及びＩｇＲ抗体は一般に無視され得
る量で含まれる）にはＩｇＡに対する抗体と反応させる
。微細粒子群例えばラテックス粒子群又は赤血球細胞群
と結合する該抗原及び結合抗原と同型の遊離抗原を主文
において得られた反応生成物に対しｙで加え、該微細粒
子群の凝集度又は非凝集度を測定する。ＩｇＭ抗体量ば
該非凝集微細粒子群量に反比例する。
とつに対するＩｇＭ 、ＩＢＧ抗体を含むと共に他の型
のもの例えばＴ、、Ａ 、 Ｔ、Ｄ 、 Ｉ８Ｆをも含
む可能＋＜＋のある液体試料をｆＧに対する抗体と反応
させ、該試料が該抗原のひとつに対するＩｇＡ抗体を含
む場合（ＩｇＤ抗体及びＩｇＲ抗体は一般に無視され得
る量で含まれる）にはＩｇＡに対する抗体と反応させる
。微細粒子群例えばラテックス粒子群又は赤血球細胞群
と結合する該抗原及び結合抗原と同型の遊離抗原を主文
において得られた反応生成物に対しｙで加え、該微細粒
子群の凝集度又は非凝集度を測定する。ＩｇＭ抗体量ば
該非凝集微細粒子群量に反比例する。
本発明の特別態様に従うと、ＩｇＧに対する抗体及びＴ
ｇＡに対する抗体であり得る抗体を加えた後に、及びそ
の結果得られた溶液を恒温保持しまた後に、リウマチ因
子による影響を中和するために、及び抗−ｒｇＧ抗体及
び遊離抗原により完全には中和されなかったＩＰ、Ｇ抗
体にもとづく凝集の強化を阻止するために、凝集したＩ
ｇＧを添加する。
ｇＡに対する抗体であり得る抗体を加えた後に、及びそ
の結果得られた溶液を恒温保持しまた後に、リウマチ因
子による影響を中和するために、及び抗−ｒｇＧ抗体及
び遊離抗原により完全には中和されなかったＩＰ、Ｇ抗
体にもとづく凝集の強化を阻止するために、凝集したＩ
ｇＧを添加する。
本発明の特別態様に従えば、生成されたサスペンシコン
中の凝集−又は非凝集−＝微細粒子」Ｙ量を、比濁法或
は濁度法（ｎｅｐｈｅｌｏｍｅｔｒｉｃ ｏｒ ｔｕｒ
ｂｉｄｉ−ｍｅｔｒｉｃ ｅｆｆｅｃｔ）によるか又は
凝集−或は非凝集−粒子故旧算法によって測定する。
中の凝集−又は非凝集−＝微細粒子」Ｙ量を、比濁法或
は濁度法（ｎｅｐｈｅｌｏｍｅｔｒｉｃ ｏｒ ｔｕｒ
ｂｉｄｉ−ｍｅｔｒｉｃ ｅｆｆｅｃｔ）によるか又は
凝集−或は非凝集−粒子故旧算法によって測定する。
本発明は又ＩｇＨ抗体、ＩｇＧ抗体及びＴｇＡ抗体を含
む液体試料例えば生物学的流体の中のＩｇＧ抗体プラス
１．Ａ抗体の免疫定量法に関するものであり、この定量
法によれば該液体試料中のｒｇＭ抗体量を一、！＝記方
法によって先ず第一に測定し、次に該ＩｇＡ抗体量を１
．Ｍ抗体プラスＩｇＧ抗体プラス１（ＨＡ抗体の総量か
ら差引き、かようにしてＩｇＧ抗体プラスＩｇＡ抗体量
を得る。全抗体活性量は例えば抗原被覆ラテックスを抗
体によって凝集さ一ヒる方法にもとづくか又は多くの文
献〔例えばＭａｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ、：ｔ”ａｒｔｉ
ｃｌｅ Ｃｏｕｎｔｉｎｇ Ｉｍｍｕｎｏ Ａｓ５
ａｙ（ｒ’ＡｃＩＡ） ｉｎＭｅｔｈｏｄｓ ｉｎ
Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ （１９８１） 、 ７４゜
１０６Δｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ ）の記載のごと
き凝集粒子数計算法にもとづくものである。
む液体試料例えば生物学的流体の中のＩｇＧ抗体プラス
１．Ａ抗体の免疫定量法に関するものであり、この定量
法によれば該液体試料中のｒｇＭ抗体量を一、！＝記方
法によって先ず第一に測定し、次に該ＩｇＡ抗体量を１
．Ｍ抗体プラスＩｇＧ抗体プラス１（ＨＡ抗体の総量か
ら差引き、かようにしてＩｇＧ抗体プラスＩｇＡ抗体量
を得る。全抗体活性量は例えば抗原被覆ラテックスを抗
体によって凝集さ一ヒる方法にもとづくか又は多くの文
献〔例えばＭａｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ、：ｔ”ａｒｔｉ
ｃｌｅ Ｃｏｕｎｔｉｎｇ Ｉｍｍｕｎｏ Ａｓ５
ａｙ（ｒ’ＡｃＩＡ） ｉｎＭｅｔｈｏｄｓ ｉｎ
Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ （１９８１） 、 ７４゜
１０６Δｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ ）の記載のごと
き凝集粒子数計算法にもとづくものである。
本発明方法の特徴的態様はｒｇＭ抗体の凝集活性の制限
にあり、その結果として他の抗体即ちＩＰ、Ｇ及び恐ら
（ＩｇＡの存在下のＩｇＭ抗体の存在■を正確に測定す
る確立された凝集技術の使用にある。
にあり、その結果として他の抗体即ちＩＰ、Ｇ及び恐ら
（ＩｇＡの存在下のＩｇＭ抗体の存在■を正確に測定す
る確立された凝集技術の使用にある。
周知の通りラテックス“Ｌｘ”を抗原“ＡＰ、” （こ
の抗原は例えば病原性バクテリア又は病原性ウィルスか
らみちびかれ抗体生成へみちびく）で被覆し該Ｌ ｘ
Ａ ｇを細胞４４数器へ通過さ□ｌ！ると申−・のｌ、
ｘＡｇ粒子群の濃度と正比例するピークを醪える。７ｇ
Ｍクラス（ＩｇＭａｈ）の抗体をＬｘＡｇと接触さ・υ
ると該抗体はＬｘＡｇ凝集を起して遊離のＬ ｘ Ａ
ｇ粒子数を減するので該ＬｘＡｇの濃度を減する。この
減少度は被検試料中の全抗体量（ＩｇＧＡｂ及びＩｇＡ
計及び多分子ｇＡＡｂ）に直接的に正比例する。
の抗原は例えば病原性バクテリア又は病原性ウィルスか
らみちびかれ抗体生成へみちびく）で被覆し該Ｌ ｘ
Ａ ｇを細胞４４数器へ通過さ□ｌ！ると申−・のｌ、
ｘＡｇ粒子群の濃度と正比例するピークを醪える。７ｇ
Ｍクラス（ＩｇＭａｈ）の抗体をＬｘＡｇと接触さ・υ
ると該抗体はＬｘＡｇ凝集を起して遊離のＬ ｘ Ａ
ｇ粒子数を減するので該ＬｘＡｇの濃度を減する。この
減少度は被検試料中の全抗体量（ＩｇＧＡｂ及びＩｇＡ
計及び多分子ｇＡＡｂ）に直接的に正比例する。
ＩｇＧＡｂを凝集させる物質の添加によってＩｇＧＡｂ
の反応を省略すること、従ってラテックスとの反応から
除去すること、そして単に１．ＭＡｈとの反応を残すこ
とが可能であることはギスベン等の記載ＣＧ１５ｐｅｎ
ｅｔ ａｌ、： Ｃ１１ｎ、 Ｐｘｐ、Ｉｍｍｕｎｏ
ｌｏｇｙ ［１９７５）２２．３２１）又はシュミツ等
の記載（Ｓｃｈｍ ｉ ｔｚａｔ ａｌ、 ： Ｊ、
Ｃｌ１ｎ、旧ｃｒｏｂｌｏ１． （１９７５） １
゜１３２〕のように理論的であると思われる。
の反応を省略すること、従ってラテックスとの反応から
除去すること、そして単に１．ＭＡｈとの反応を残すこ
とが可能であることはギスベン等の記載ＣＧ１５ｐｅｎ
ｅｔ ａｌ、： Ｃ１１ｎ、 Ｐｘｐ、Ｉｍｍｕｎｏ
ｌｏｇｙ ［１９７５）２２．３２１）又はシュミツ等
の記載（Ｓｃｈｍ ｉ ｔｚａｔ ａｌ、 ： Ｊ、
Ｃｌ１ｎ、旧ｃｒｏｂｌｏ１． （１９７５） １
゜１３２〕のように理論的であると思われる。
ＩｇＡ （ＩｇＡＡｂ）抗体をも又含有する被検液の場
合には該抗体を凝集させる物質の添加によってラテック
スとの反応物から該抗体をも分離し得る。本発明に従い
ＩｇＧの全部を分離する特異的試薬としてヤギからの抗
血清を選択する。該抗血清はヒトのＩｇＧのいわゆるＦ
ｃ域（抗−Ｐｃ）は対して指向されていてヒ１〜のＩｇ
Ｇ抗体をｉ！択的に６４集するものとして公知である。
合には該抗体を凝集させる物質の添加によってラテック
スとの反応物から該抗体をも分離し得る。本発明に従い
ＩｇＧの全部を分離する特異的試薬としてヤギからの抗
血清を選択する。該抗血清はヒトのＩｇＧのいわゆるＦ
ｃ域（抗−Ｐｃ）は対して指向されていてヒ１〜のＩｇ
Ｇ抗体をｉ！択的に６４集するものとして公知である。
ジチオスレイトール（Ｄ Ｔ Ｔ）はＩｇＧ抗体を破壊
しないがこのｒｌＴＴとの処理によ−２て全ＩｇＨ抗体
を不活性化すると１、ｘＡｇ（７１１凝集が達成される
が但Ｕ７その程度はより少い。ＩｇＧ抗体を凝集さ・０
゛るために該ザスベンシ９ンに対し抗−Ｆｃ抗体を添加
してもちはや１．、ｘ Ａ Ｂの凝集は認められない。
しないがこのｒｌＴＴとの処理によ−２て全ＩｇＨ抗体
を不活性化すると１、ｘＡｇ（７１１凝集が達成される
が但Ｕ７その程度はより少い。ＩｇＧ抗体を凝集さ・０
゛るために該ザスベンシ９ンに対し抗−Ｆｃ抗体を添加
してもちはや１．、ｘ Ａ Ｂの凝集は認められない。
従ってＩｇＧ抗体によるラテックスの凝集ばＩｇＧに対
する抗体に３Ｌって阻害されると考えられる。思いがし
Ｊないこととして該ＬｘＡｇ凝集物は、゛′抗−ＦＣ抗
体によって凝集された１、ＧＡｈ ”に対して公知の比
較的高潤度のＩｇＨＡｂ （１） Ｉ） Ｔ処理・已ず
）を添加したときに、予期以トに弱い。このことばラテ
ックス上のＡｇ抗原はＩｇＧＡｂ−抗−Ｐｃ、複合体に
よってマスク（被包）されていると推測される。
する抗体に３Ｌって阻害されると考えられる。思いがし
Ｊないこととして該ＬｘＡｇ凝集物は、゛′抗−ＦＣ抗
体によって凝集された１、ＧＡｈ ”に対して公知の比
較的高潤度のＩｇＨＡｂ （１） Ｉ） Ｔ処理・已ず
）を添加したときに、予期以トに弱い。このことばラテ
ックス上のＡｇ抗原はＩｇＧＡｂ−抗−Ｐｃ、複合体に
よってマスク（被包）されていると推測される。
次にＴＨＧ抗体とＬｘＡＨ抗体との反応をブロック（阻
１ト）するためにこの・す“スペンションに対して遊Ａ
１［抗原“ＡＰ、”を加える。該抗原はＩ（ＨＭ抗体（
ラテックスをｔＪｉ隼さ一１！得る（）Ｔ、体）をも又
ブＩ７ソクするであろ・うと考えられるかも１−２れな
い。とごろが驚くべきことに遊離抗原濃度が過度で４（
れれば該ブ１−１、ッキングは起らない。全ＩｇＧ抗体
を凝集さ・ｌするために遊離抗原ＡＰ、と抗−Ｐｃ抗体
とを共用することにより遊離粒子群濃度はＩｇＭ抗体の
みによる凝集の場合と明らかに同じである。、−の）１
１実の発１．！、はぞの効果の点で驚異に（ｌｆｆする
＆−１れどもこれし、１双方の抗体の既知の特性と一１
ｉすることなのである。
１ト）するためにこの・す“スペンションに対して遊Ａ
１［抗原“ＡＰ、”を加える。該抗原はＩ（ＨＭ抗体（
ラテックスをｔＪｉ隼さ一１！得る（）Ｔ、体）をも又
ブＩ７ソクするであろ・うと考えられるかも１−２れな
い。とごろが驚くべきことに遊離抗原濃度が過度で４（
れれば該ブ１−１、ッキングは起らない。全ＩｇＧ抗体
を凝集さ・ｌするために遊離抗原ＡＰ、と抗−Ｐｃ抗体
とを共用することにより遊離粒子群濃度はＩｇＭ抗体の
みによる凝集の場合と明らかに同じである。、−の）１
１実の発１．！、はぞの効果の点で驚異に（ｌｆｆする
＆−１れどもこれし、１双方の抗体の既知の特性と一１
ｉすることなのである。
Ｔ ｇ Ｍ Ａ ｂはＩｇＧＡｂよりも弱い親和力を有
する、−とが普通である。けれどもその多結合価（１０
結合価）にもとづき、ＩｇＭΔ１〕は繰返しの抗Ｉ串決
定Ｗを有する抗原と優先的に反応する。ラテックスに対
するＡｇのカップリングは八ｇを反復性のものとするの
で従ってＩｇＭＡｂとの反応性を高めど）。従って低温
度の遊離抗原はＩｇＧ抗体の全結合能を飽和させるがこ
れに対してμ；だしく高濃度のｉ！ｌγ離ＡＨ（（１１
１，これは繰返し２の抗原決定基をイ１していない）番
、１、Ｉ Ｐ、Ｍ抗体を飽和させることを必要とずろで
あろう。
する、−とが普通である。けれどもその多結合価（１０
結合価）にもとづき、ＩｇＭΔ１〕は繰返しの抗Ｉ串決
定Ｗを有する抗原と優先的に反応する。ラテックスに対
するＡｇのカップリングは八ｇを反復性のものとするの
で従ってＩｇＭＡｂとの反応性を高めど）。従って低温
度の遊離抗原はＩｇＧ抗体の全結合能を飽和させるがこ
れに対してμ；だしく高濃度のｉ！ｌγ離ＡＨ（（１１
１，これは繰返し２の抗原決定基をイ１していない）番
、１、Ｉ Ｐ、Ｍ抗体を飽和させることを必要とずろで
あろう。
結論とし一ζ本発明方法＋１１、例えばＴＡＧ に対す
る抗−Ｐｃ抗体の使用により、及び被検液体試才″１が
７Ｆ、Ａ抗体、“既ｊ４夕の通り無視可能の量で一般に
存在するＩｇＤ抗体°及びＩｇｎ抗体を含む場合には明
らかにＩｇｌｌに対する抗体の使用により、ＩｇＨ抗体
活性の測定を可能にする。該ＩｇＧ抗体は事実遊離抗原
と結合し、該抗原点の結合はＩｇＧ抗体及び恐らくはＩ
ｇＡ抗体の不活性化を達成する。
る抗−Ｐｃ抗体の使用により、及び被検液体試才″１が
７Ｆ、Ａ抗体、“既ｊ４夕の通り無視可能の量で一般に
存在するＩｇＤ抗体°及びＩｇｎ抗体を含む場合には明
らかにＩｇｌｌに対する抗体の使用により、ＩｇＨ抗体
活性の測定を可能にする。該ＩｇＧ抗体は事実遊離抗原
と結合し、該抗原点の結合はＩｇＧ抗体及び恐らくはＩ
ｇＡ抗体の不活性化を達成する。
本発明方法は既述の通りｒｇＭ抗体、ＩｇＧ抗体及びＩ
ｇＡ抗体含有液体試料中のＩｇＧ抗体プラスＴｇＡ抗体
の定量を可能とするものであって該方法に従うと被検液
体試料中のＩＢＭ抗体量を−１−述の方法によって先ず
測定し、次に該１ｇＭ抗体量をＩｇＭ抗体＋ｉＨＧ抗体
＋ｆＡ抗体の全量から差引き、かようにしてＩｇＧ抗体
＋ＩｇＡ抗体量を得る。ＩｇＧ抗体量の測定のためには
反応混合物に対して抗−ＴｇＡ抗体を加えることで充分
であることが明かであり、同様にしてＴｇＡ抗体量を定
めるためには反応混合物に対し抗−ＩｇＧ抗体を加える
ことで充分であることが明かである。
ｇＡ抗体含有液体試料中のＩｇＧ抗体プラスＴｇＡ抗体
の定量を可能とするものであって該方法に従うと被検液
体試料中のＩＢＭ抗体量を−１−述の方法によって先ず
測定し、次に該１ｇＭ抗体量をＩｇＭ抗体＋ｉＨＧ抗体
＋ｆＡ抗体の全量から差引き、かようにしてＩｇＧ抗体
＋ＩｇＡ抗体量を得る。ＩｇＧ抗体量の測定のためには
反応混合物に対して抗−ＴｇＡ抗体を加えることで充分
であることが明かであり、同様にしてＴｇＡ抗体量を定
めるためには反応混合物に対し抗−ＩｇＧ抗体を加える
ことで充分であることが明かである。
従前技術の多くの方法を誤った陽性の結果にみちび（ひ
とつの問題はりウマチ因子（ＲＦ）によって起るｆ渉（
妨害）であった。ＲＦ Ｉｆ大部分のＩ ｇ Ｇ Ａ
ｂ −Δｇ複合体と結合しているＩｇＨ抗体である。
とつの問題はりウマチ因子（ＲＦ）によって起るｆ渉（
妨害）であった。ＲＦ Ｉｆ大部分のＩ ｇ Ｇ Ａ
ｂ −Δｇ複合体と結合しているＩｇＨ抗体である。
本発明によれば該リウマチ因子の影響は凝集したＩｇＧ
の添力ｌによって中和される。この中和工程の結果はＩ
ｇＧに対する抗体及び“ＴｇＡに対する抗体であり得る
抗体”の添加の後に“著しく高濃度のりウマチ因子を含
むがＩｇＭＡｂを欠如する血清”を添加し、かようにし
て得られた混合物を恒温保持することにより試験された
。実質Ｉ−異る結果を得た場合はなかった。
の添力ｌによって中和される。この中和工程の結果はＩ
ｇＧに対する抗体及び“ＴｇＡに対する抗体であり得る
抗体”の添加の後に“著しく高濃度のりウマチ因子を含
むがＩｇＭＡｂを欠如する血清”を添加し、かようにし
て得られた混合物を恒温保持することにより試験された
。実質Ｉ−異る結果を得た場合はなかった。
ｒｇＭＡｂの特異的測定のためのラテックス凝集試験に
ついて記載された最近の報告（Ｊ、Ｓ、Ｒｅｍｉｎｇｔ
ｏｎｅｔ ａｌ、： Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｒｍ
ｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｍ ａｎｔｉｈｏｉｅｓｗ
ｉｔｈ ａｎｔｉｇｅｎ ｔａｇｇｅｄ １ａｔ
ｅｘ ｐａｓｔｉｃｌｅｓ ｉｎ ａｎｉｍｍｕ
ｎｏｓｏｒｂｅｎｔ ａｓＳａｙ、 Ｊ、 ＣｌＩｎ、
Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ（１９８３） Ｖｏｌ、 １
７． ｍ、５．９３９）に注意すべきである。はとんど
すべての既往の試験における通りヒトのＩｇＨ抗体に対
する抗体は微量滴定板の開弁（ｗｅｌ＋＞の壁に結合す
る。血清を加えると全Ｉｇ＋１の一部（ＩｇＭ抗体を含
む）が壁に付着する。
ついて記載された最近の報告（Ｊ、Ｓ、Ｒｅｍｉｎｇｔ
ｏｎｅｔ ａｌ、： Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｒｍ
ｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｍ ａｎｔｉｈｏｉｅｓｗ
ｉｔｈ ａｎｔｉｇｅｎ ｔａｇｇｅｄ １ａｔ
ｅｘ ｐａｓｔｉｃｌｅｓ ｉｎ ａｎｉｍｍｕ
ｎｏｓｏｒｂｅｎｔ ａｓＳａｙ、 Ｊ、 ＣｌＩｎ、
Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ（１９８３） Ｖｏｌ、 １
７． ｍ、５．９３９）に注意すべきである。はとんど
すべての既往の試験における通りヒトのＩｇＨ抗体に対
する抗体は微量滴定板の開弁（ｗｅｌ＋＞の壁に結合す
る。血清を加えると全Ｉｇ＋１の一部（ＩｇＭ抗体を含
む）が壁に付着する。
この反応の完結の後に抗原被覆ラテックス粒］薯ＩＹを
加える。数１ｌｌｉ、 １ｊｉｌ後己こ微Ｂ＋滴定板に
結合したううソクス量を測定し２、既知流度のＩＦ、Ｍ
抗体使用６１１ Ｊ、り得られた結果と札中１６ Ｌ、
かようにＵ２て抗体０着￥をａ（測する。この方法ｔ、
ｌ： ”１′定量的測定のみに限られる。この測定法４
Ｊ１．Ｍ抗体のみを測イ）ものであり、恒温保持に長時
間を要し、妨害物の洗去を要し、作業は集約的である６
更に患者のＩｇＭ免疫グ１１プリンが高量であるならば
結合１ｇＭＡｈの比率は減少し、従−３て感作能を減じ
、陽性結果を誤り得る危険をもたらす。
加える。数１ｌｌｉ、 １ｊｉｌ後己こ微Ｂ＋滴定板に
結合したううソクス量を測定し２、既知流度のＩＦ、Ｍ
抗体使用６１１ Ｊ、り得られた結果と札中１６ Ｌ、
かようにＵ２て抗体０着￥をａ（測する。この方法ｔ、
ｌ： ”１′定量的測定のみに限られる。この測定法４
Ｊ１．Ｍ抗体のみを測イ）ものであり、恒温保持に長時
間を要し、妨害物の洗去を要し、作業は集約的である６
更に患者のＩｇＭ免疫グ１１プリンが高量であるならば
結合１ｇＭＡｈの比率は減少し、従−３て感作能を減じ
、陽性結果を誤り得る危険をもたらす。
このＬｌ的のために本発明方法で使用される恒温保持時
間は短いことに注目されねばなｒ）ない。従ってＩｆ！
Ｇに対する抗体及び“Ｉ Ｐ、、 Ａに対する抗体であ
り得る抗体”の添加後に、得られた溶液を約１〜１５分
間、温度約３７℃において攪拌Ｆに恒温保持する。他方
において、ｒｉｉｋ細粒子結合抗原及び遊離抗原を加え
た後に、（（Ｉられたサスペンションをも又約１〜１５
分間、）話度約３７℃において攪拌下に恒温保持する。
間は短いことに注目されねばなｒ）ない。従ってＩｆ！
Ｇに対する抗体及び“Ｉ Ｐ、、 Ａに対する抗体であ
り得る抗体”の添加後に、得られた溶液を約１〜１５分
間、温度約３７℃において攪拌Ｆに恒温保持する。他方
において、ｒｉｉｋ細粒子結合抗原及び遊離抗原を加え
た後に、（（Ｉられたサスペンションをも又約１〜１５
分間、）話度約３７℃において攪拌下に恒温保持する。
この同（〉恒温保持時間は、リウマチ因子による影響の
中和に使用される凝隼したＩｇＧの可能な添５．ｎ＋の
後０こ必要であると思われる。
中和に使用される凝隼したＩｇＧの可能な添５．ｎ＋の
後０こ必要であると思われる。
実施セ１１
本発明方法はいかなる感染症例えばトキソプラズマ症、
勺イトメガロウイルス、庖疹、風疹型及び類似型の感染
症に対して適用され／ｊ）るけれどもＦ文において、−
力ではブルセラ了ボルタス（Ｂｒｕｅｅｌｌａ ａｂｏ
ｒｔｕｓ）、他方では１−キソブラスマ、ゴンジイ （
Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ） Ｌニ一対する
ＩｇＧ抗体及びＩｇＭ抗体の測定について記載される。
勺イトメガロウイルス、庖疹、風疹型及び類似型の感染
症に対して適用され／ｊ）るけれどもＦ文において、−
力ではブルセラ了ボルタス（Ｂｒｕｅｅｌｌａ ａｂｏ
ｒｔｕｓ）、他方では１−キソブラスマ、ゴンジイ （
Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ） Ｌニ一対する
ＩｇＧ抗体及びＩｇＭ抗体の測定について記載される。
ブラセラ抗原はりボボリザソカライＦ （Ｉ−、、Ｐ
Ｓ）であった。
Ｓ）であった。
３＃１−
一！２−即ｊｑ世製
ウェスｌファル等の方法（Ｗｅｓｔｐｈａｌ ｅｔ ａ
ｌ、 ：Ｍｅｔｈｏｄ ｉｎ Ｃｏｒｂｏｈｙｄｒａｔ
ｅ Ｃｈｅｍｉｓｔ、ｒｙ＋ Ｖｏｌ、 ５（１９
６５） ＋ ｐ、 ８３． Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｉ
’ｒｅｓｓｚ Ｎ、Ｙ、）の水−フコ。ノール操作法（
こ従ってブルセラＬＰＳを抽出した。次にモレノ等の記
載（Ｍｏｒｅｎｏ ｅｔ ａｌ、：Ｊ、 Ｒａｃｔｅ
ｒｉｏｌｏｇｙ （１９７９） 、 ３６１． １３
８゜Ｉｔ、 ２ ）の通りにし゛ζフェノール相を３容
）Ｊｉ（７）″メタノール試薬”により沈殿させＮａｌ
中のジメチルスルフォキザイド（５ザイクル）で処理し
た。次に該リボポリ４ノソカライド（Ｉ、Ｉ）Ｓ）を脱
イオン水に対して透析し°ζから凍結乾燥させた。
ｌ、 ：Ｍｅｔｈｏｄ ｉｎ Ｃｏｒｂｏｈｙｄｒａｔ
ｅ Ｃｈｅｍｉｓｔ、ｒｙ＋ Ｖｏｌ、 ５（１９
６５） ＋ ｐ、 ８３． Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｉ
’ｒｅｓｓｚ Ｎ、Ｙ、）の水−フコ。ノール操作法（
こ従ってブルセラＬＰＳを抽出した。次にモレノ等の記
載（Ｍｏｒｅｎｏ ｅｔ ａｌ、：Ｊ、 Ｒａｃｔｅ
ｒｉｏｌｏｇｙ （１９７９） 、 ３６１． １３
８゜Ｉｔ、 ２ ）の通りにし゛ζフェノール相を３容
）Ｊｉ（７）″メタノール試薬”により沈殿させＮａｌ
中のジメチルスルフォキザイド（５ザイクル）で処理し
た。次に該リボポリ４ノソカライド（Ｉ、Ｉ）Ｓ）を脱
イオン水に対して透析し°ζから凍結乾燥させた。
ラーテッー久−不ニー抗原−（１，に１．、−ｒ”−！
５）−（ト）町竪５倍希釈ＧＢＳ （ｄＧＢｓ） ［
但しＣＢＳはｐｌ＋９．２のグリシン緩衝食塩溶液であ
る〕の０．４ ｍ ｌ！中にとかされたＳＯｐｇのｒ、
ｐ ｓに対し５０μｐのラテックス（１０％ ｗ／
ｖ） （Ｋ １０９ 、 Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎ
ｃｅ、 Ｃｏｕｒｂｅｖｏｉｅ、 Ｆｒａｎｃｅ）を添
加してからこの混合物を１分間３０ワットにおいて音波
処理（ｓｏｒｒｉｃａｔｅ３（Ｍｏｄｅｌ Ｂ１２５ｏ
ｎｉｆｌｅｒ、 Ｒｒａｎｓｏｎ。
５）−（ト）町竪５倍希釈ＧＢＳ （ｄＧＢｓ） ［
但しＣＢＳはｐｌ＋９．２のグリシン緩衝食塩溶液であ
る〕の０．４ ｍ ｌ！中にとかされたＳＯｐｇのｒ、
ｐ ｓに対し５０μｐのラテックス（１０％ ｗ／
ｖ） （Ｋ １０９ 、 Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎ
ｃｅ、 Ｃｏｕｒｂｅｖｏｉｅ、 Ｆｒａｎｃｅ）を添
加してからこの混合物を１分間３０ワットにおいて音波
処理（ｓｏｒｒｉｃａｔｅ３（Ｍｏｄｅｌ Ｂ１２５ｏ
ｎｉｆｌｅｒ、 Ｒｒａｎｓｏｎ。
Ｄａｎｈｕｒｙ、 ＣＴ、 ０６８１０） シた。１
０分間後にＧＢＳの中の１００ ｔｔ ｇのヒＩ・血清
アルブミン（Ｈ３Ａ。
０分間後にＧＢＳの中の１００ ｔｔ ｇのヒＩ・血清
アルブミン（Ｈ３Ａ。
Ｒｅｈｒｉｎｇｗｅｒｋｅ、 Ｍａｒｂｕｒｙ／Ｌａｈ
ｎ、 Ｆ ＲＧ）を加えてからこのサスペンションを再
び音波処理した。室温下の恒温保持２０分間及び遠心回
転器（ＳＳ ３４ｒｏｔｏｒ ｏｆ ａ ５ｏｒｖａｌ
ｌ Ｒ５ＣＤ ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ）中での１０００
０ ｒｅｖ／ｍｉｎにおける１０分間の処理の後に該ラ
テックスを１ｍ７！の水性Ｆデシル硫酸す１−リウム中
に再懸濁化し、音波処理１．てから３７℃で１時間恒温
保持した。該ラテックスを１ｍ７！のＧＢＳで２回洗浄
してから１ ｍ ｅのＥ］’ｌ”ｌ’Ａ（エチレンジア
ミンテトラ耐酸）−ＧＢＳ〜Ｔ３ Ｓ Ａ（ウシ血清ア
ルブミン）中に再懸濁化させた。温度−２０℃に冷凍貯
蔵又は凍結乾燥した該ラテ・ノクスは少くとも６力月間
にわたり安定であることが見出された。Ｌ ｘ Ｌ Ｐ
Ｓを凍結乾燥ｔ、２だ後に融解させ又は再懸濁化させ
てから３０ワットにおいて１５秒間音波処理した。使用
後に１．ｘ Ｌ Ｐ ＳをＩＥＤＴＡ−ＧＢＳ−ＢＳＡ
中で１００倍に希釈しノζ。
ｎ、 Ｆ ＲＧ）を加えてからこのサスペンションを再
び音波処理した。室温下の恒温保持２０分間及び遠心回
転器（ＳＳ ３４ｒｏｔｏｒ ｏｆ ａ ５ｏｒｖａｌ
ｌ Ｒ５ＣＤ ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ）中での１０００
０ ｒｅｖ／ｍｉｎにおける１０分間の処理の後に該ラ
テックスを１ｍ７！の水性Ｆデシル硫酸す１−リウム中
に再懸濁化し、音波処理１．てから３７℃で１時間恒温
保持した。該ラテックスを１ｍ７！のＧＢＳで２回洗浄
してから１ ｍ ｅのＥ］’ｌ”ｌ’Ａ（エチレンジア
ミンテトラ耐酸）−ＧＢＳ〜Ｔ３ Ｓ Ａ（ウシ血清ア
ルブミン）中に再懸濁化させた。温度−２０℃に冷凍貯
蔵又は凍結乾燥した該ラテ・ノクスは少くとも６力月間
にわたり安定であることが見出された。Ｌ ｘ Ｌ Ｐ
Ｓを凍結乾燥ｔ、２だ後に融解させ又は再懸濁化させ
てから３０ワットにおいて１５秒間音波処理した。使用
後に１．ｘ Ｌ Ｐ ＳをＩＥＤＴＡ−ＧＢＳ−ＢＳＡ
中で１００倍に希釈しノζ。
抗−７−、ｐｃ抗体
セロチニ等（Ｃｅｒｏｔ、ｊ、ｉｎｉ ｅｔ ａｔ、：
Ｊ 、Ｔｍｎ＋ｔ＋ｎｏｌｏｇｙ（１９６８）１０１
．４３３）の方法に従いパパイン消化によりヒトＩｇＧ
のＦｃフラグメントを羽製し、た。フロイントの完全ア
ジュバント中の１００μｇのヒトのＦｃを３週間毎にヤ
ギに皮肉注射した。
Ｊ 、Ｔｍｎ＋ｔ＋ｎｏｌｏｇｙ（１９６８）１０１
．４３３）の方法に従いパパイン消化によりヒトＩｇＧ
のＦｃフラグメントを羽製し、た。フロイントの完全ア
ジュバント中の１００μｇのヒトのＦｃを３週間毎にヤ
ギに皮肉注射した。
最終注射から１５日後に血清を集め免疫グロプリンを抽
出しその抗−Ｆｃ特異性を検査した後にＣＢＳ中で希釈
（１■／ｍ＃）Ｌ、た状態で使用した。
出しその抗−Ｆｃ特異性を検査した後にＣＢＳ中で希釈
（１■／ｍ＃）Ｌ、た状態で使用した。
操−ゴｔ
ＣＢＳで５０＝１に希釈されたヒト血清の５０μｐに対
し２５ ｐ ｅの抗−ＰＣを添加した。この混合物を渦
動下に２分間３７℃に恒温保持した。次に２５μβの凝
集したヒトＩｇＧ免疫グロブリンを濃度２５＋ｎｇ／ｍ
ｆｆで加え、この混合物を更に１０分間３７℃で恒温保
持した。最後にこの混合物に対し、遊離抗原（ＬＰＳ）
と濃度５ｐｇ／ｍｅにおいて混合された２５１１ρの１
．ｘＬＰＳを加えてから更に１０分間３７℃で恒温保持
を継続した。２ｍ７！のＧ Ｂ Ｓの添加によってこの
反応を停止させてから得られた混合物を光学的細胞計数
器へ通過さ・Ｕて非凝集Ｉ Ｘ Ｌ ＰＳの濃度を測定
した。ＩｇＭ抗体の濃度は遊離ラテックス粒子群濃度と
逆比例する。
し２５ ｐ ｅの抗−ＰＣを添加した。この混合物を渦
動下に２分間３７℃に恒温保持した。次に２５μβの凝
集したヒトＩｇＧ免疫グロブリンを濃度２５＋ｎｇ／ｍ
ｆｆで加え、この混合物を更に１０分間３７℃で恒温保
持した。最後にこの混合物に対し、遊離抗原（ＬＰＳ）
と濃度５ｐｇ／ｍｅにおいて混合された２５１１ρの１
．ｘＬＰＳを加えてから更に１０分間３７℃で恒温保持
を継続した。２ｍ７！のＧ Ｂ Ｓの添加によってこの
反応を停止させてから得られた混合物を光学的細胞計数
器へ通過さ・Ｕて非凝集Ｉ Ｘ Ｌ ＰＳの濃度を測定
した。ＩｇＭ抗体の濃度は遊離ラテックス粒子群濃度と
逆比例する。
凝集１．ｘ Ｌ Ｐ Ｓの量を直接計測することも可能
であり、光学的手段と異る他方法例えば電気抵抗器を粒
子群の計測に使用することも可能であることは明かであ
る。Ｔ［１Ｍ抗体の過剰濃度にもとづく過誤を避げるた
め乙こ１．００／１及び２００／１希釈血清を用いてこ
の操作をくり返す。
であり、光学的手段と異る他方法例えば電気抵抗器を粒
子群の計測に使用することも可能であることは明かであ
る。Ｔ［１Ｍ抗体の過剰濃度にもとづく過誤を避げるた
め乙こ１．００／１及び２００／１希釈血清を用いてこ
の操作をくり返す。
本発明における他の変法に従うとＩＢＭ抗体及びＩｇＧ
抗体の濃度が比較的高い場合に濁度計によりラテックス
の凝集度を測定し得る。ＣＢＳ中の同量のヒト血清及び
抗−Ｆｃを渦動下に２分間３７℃で恒温保持した。次に
上記濃度乙こおける２５μｐの凝集したし）ＩＢＧを加
えてからこの混合物を１時間恒温保持し、その後に濃度
０．０２％において３０ｐρの１、ｘ ｔ、Ｐ Ｓを加
えた。この混合物を短時間渦動下に保ち、その後に６２
０ｎｍ及び４０５ｎ１１１において濁度を測定した。６
２０ｎｍの波長は基線を構成する。次にこの混合物を２
時間恒温保持した後に上記の２種の波長において該混合
物の濁度を再測定した。６２０ｎｍと４０５ｎｍとにお
ける最初の測定値と２時間恒温保持後の測定値との間の
差の減少は残留遊離粒子群に逆比例する。得られたサス
ペンションの中の凝集又は非凝集の微細粒子量を濁度計
以外の光学的密度測定器例えば比濁計によって計測する
ことも又可能である。
抗体の濃度が比較的高い場合に濁度計によりラテックス
の凝集度を測定し得る。ＣＢＳ中の同量のヒト血清及び
抗−Ｆｃを渦動下に２分間３７℃で恒温保持した。次に
上記濃度乙こおける２５μｐの凝集したし）ＩＢＧを加
えてからこの混合物を１時間恒温保持し、その後に濃度
０．０２％において３０ｐρの１、ｘ ｔ、Ｐ Ｓを加
えた。この混合物を短時間渦動下に保ち、その後に６２
０ｎｍ及び４０５ｎ１１１において濁度を測定した。６
２０ｎｍの波長は基線を構成する。次にこの混合物を２
時間恒温保持した後に上記の２種の波長において該混合
物の濁度を再測定した。６２０ｎｍと４０５ｎｍとにお
ける最初の測定値と２時間恒温保持後の測定値との間の
差の減少は残留遊離粒子群に逆比例する。得られたサス
ペンションの中の凝集又は非凝集の微細粒子量を濁度計
以外の光学的密度測定器例えば比濁計によって計測する
ことも又可能である。
全抗体活性即ちＩＢＭ抗体＋ＩｇＧ抗体（例えば−ヒ文
中に例示されたｒｇ＾抗体不含有の血清）の活性の定量
法に関し、抗−Ｆｃ抗体の代りにＣｌ５Ｓ緩衝液のみを
使用し、ＬｘＬｒ’Ｓ ＋Ｌ Ｐ ３０代りにＬ ｘ
１．、Ｐ Ｓを使用する。ＩｇＧ抗体？ａ度のみの測定
のためには、試料のＩｇＨ抗体が試料のジチオスレイト
ール（口ＴＴ）による予備処理の際に破壊される事実を
除外して、全抗体活性の測定に同じ操作を使用する。
中に例示されたｒｇ＾抗体不含有の血清）の活性の定量
法に関し、抗−Ｆｃ抗体の代りにＣｌ５Ｓ緩衝液のみを
使用し、ＬｘＬｒ’Ｓ ＋Ｌ Ｐ ３０代りにＬ ｘ
１．、Ｐ Ｓを使用する。ＩｇＧ抗体？ａ度のみの測定
のためには、試料のＩｇＨ抗体が試料のジチオスレイト
ール（口ＴＴ）による予備処理の際に破壊される事実を
除外して、全抗体活性の測定に同じ操作を使用する。
ＣＢＳによる希釈の以前の５０ ｔｌｌの血清に対し、
ＣＢＳ中５０ミリモル濃度のｐｌ＋９．２を有する１
７０ｔｔｌ）のＥＤＴＡを加えた。この混合物に対し水
中１０■／ｍβの濃度における１５μｐのＤＴＴを加え
てから全混合物を３０分間３７℃に恒温保持し、その後
に１５μｌの０．２％過酸化水素溶液の添加によってＤ
ＴＴの反応を停止させた。
ＣＢＳ中５０ミリモル濃度のｐｌ＋９．２を有する１
７０ｔｔｌ）のＥＤＴＡを加えた。この混合物に対し水
中１０■／ｍβの濃度における１５μｐのＤＴＴを加え
てから全混合物を３０分間３７℃に恒温保持し、その後
に１５μｌの０．２％過酸化水素溶液の添加によってＤ
ＴＴの反応を停止させた。
次に既述のように操作してから得られた溶液を１／１０
．１／２０及び１／４０に希釈して」二記の定量操作に
供した。
．１／２０及び１／４０に希釈して」二記の定量操作に
供した。
添付図面の第１図はブルセラアボルクスに感染した患者
の血清（上文中に用いられた血清と同じ血清）のＩｇＭ
抗体濃度を示し、該濃度は約１年間にわたり（１分間当
り計測値における）放射免疫測定法（ＲＩ Ａ）により
得られ、及び（観測凝集単位における）本発明方法によ
り得られた。
の血清（上文中に用いられた血清と同じ血清）のＩｇＭ
抗体濃度を示し、該濃度は約１年間にわたり（１分間当
り計測値における）放射免疫測定法（ＲＩ Ａ）により
得られ、及び（観測凝集単位における）本発明方法によ
り得られた。
該両者の曲線は類似しており、これは本発明の定量方法
が信頼され得ることの証明であることが理解され得る。
が信頼され得ることの証明であることが理解され得る。
例−一？。
一１ｇＧ−及Ｕｊ−−」ゴ１゛右ズヌ−チ−ンん抗一体
Δ測定−し；−／ ７”う不ｊメク人抗１１く一上−±
又杭原ｙ−Φ−調−製Ｔ、ゴンジイの胞子土類に予め３
日間感染させたマウスの腹膜浸出物からトキソブラスモ
シス抗原を調製した。腹膜腔を３〜５ｍｊ！の滅菌生理
的食塩水で２〜３回洗浄して洗浄物を貯留させた。
Δ測定−し；−／ ７”う不ｊメク人抗１１く一上−±
又杭原ｙ−Φ−調−製Ｔ、ゴンジイの胞子土類に予め３
日間感染させたマウスの腹膜浸出物からトキソブラスモ
シス抗原を調製した。腹膜腔を３〜５ｍｊ！の滅菌生理
的食塩水で２〜３回洗浄して洗浄物を貯留させた。
このサスペンションの１ｍｎに対し０．０５ｍｎの抗生
物質ペントレキシル（Ｐｅｎ ｔｒｅｘｙ ｌ）及び１
０ｊｐ位のヘパリンを加えこれを円錐形底部をもつ管の
中で１／２時間室温に保持した。次に該管を６００ｒｐ
ｍで４分間遠心処理し、と澄を除き、ペレットを食塩水
中に再懸濁化させ４℃において４０００ｒｐｍで１／２
時間再び遠心処理した。ベレ・７トにｔ＝ＩＵ、 ２
ｍ ／！のＩＭ Ｎｉｌ、ｌを加えて赤血球を？’８
１１１Ｌ処理してから４℃において＝１． ＯＯＯｒｐ
ｍで再び遠心処理し、食塩水を用いてペレットを３回洗
浄してから４℃Ｃ１４０００ｒｐで１／２時間再び遠心
処理した。
物質ペントレキシル（Ｐｅｎ ｔｒｅｘｙ ｌ）及び１
０ｊｐ位のヘパリンを加えこれを円錐形底部をもつ管の
中で１／２時間室温に保持した。次に該管を６００ｒｐ
ｍで４分間遠心処理し、と澄を除き、ペレットを食塩水
中に再懸濁化させ４℃において４０００ｒｐｍで１／２
時間再び遠心処理した。ベレ・７トにｔ＝ＩＵ、 ２
ｍ ／！のＩＭ Ｎｉｌ、ｌを加えて赤血球を？’８
１１１Ｌ処理してから４℃において＝１． ＯＯＯｒｐ
ｍで再び遠心処理し、食塩水を用いてペレットを３回洗
浄してから４℃Ｃ１４０００ｒｐで１／２時間再び遠心
処理した。
該ベレットを２ｍ７！の蒸留水の中に再３脈濁化させて
からドライアイスアセトンを用いて凍結と融解とをくり
返し、その都度該溶液を超音波混合処理に付した。１０
分間３００ Ｏｒｐｍで遠心処理した後に上澄を採りＰ
Ｂ Ｓ −ＮａＣＩ （Ｌ Ｍ）で平衡化されたウ
ルＩ・ロゲル（ｔｌｌｔｒｏＲｅｌ） ３−４のコラム
を通過させた。各フラクションについてこれらをラテ・
２クス−Ｆ（ａｂ’）２抗−１−キソプスモシスに対し
て試験し、ラテックスを凝集さ−Ｖたフラクションを貯
留し、？農縮し、−２０℃に貯蔵した。
からドライアイスアセトンを用いて凍結と融解とをくり
返し、その都度該溶液を超音波混合処理に付した。１０
分間３００ Ｏｒｐｍで遠心処理した後に上澄を採りＰ
Ｂ Ｓ −ＮａＣＩ （Ｌ Ｍ）で平衡化されたウ
ルＩ・ロゲル（ｔｌｌｔｒｏＲｅｌ） ３−４のコラム
を通過させた。各フラクションについてこれらをラテ・
２クス−Ｆ（ａｂ’）２抗−１−キソプスモシスに対し
て試験し、ラテックスを凝集さ−Ｖたフラクションを貯
留し、？農縮し、−２０℃に貯蔵した。
ラテン外友二Ｔｈ；、’ｚａ１ｍりび↓９靭）−Φ−班
製力ルボキシ化ラうンクス（１，０％ Ｗ ／ Ｖ ）
（１，に）の２５０ ｐ ｅに対し２ｒｎ （！のハル
ビト−ル緩衝化食塩水（ＤＢＳ）（０，０２Ｍ、ｐＨ８
，１）を加え１１００００ｒｐで１０分間遠心処理した
。−１４澄をとり２５０ メ１ρＢＢＳを加えて４℃に
冷却した。次（こ２５ｍｇのカルボジイミド（ＣＩ）Ｉ
）を含有するＢＢＳの２５０７ｚ７！を加えて１０呵の
Ｃ［ＩＴ／１００μ１．Ｌｘの混合物を仕成さ・Ｉ！、
この溶液を新たに調製して４ ’ｃに保ち、４℃におい
て渦動下に１時間恒温保持した。
製力ルボキシ化ラうンクス（１，０％ Ｗ ／ Ｖ ）
（１，に）の２５０ ｐ ｅに対し２ｒｎ （！のハル
ビト−ル緩衝化食塩水（ＤＢＳ）（０，０２Ｍ、ｐＨ８
，１）を加え１１００００ｒｐで１０分間遠心処理した
。−１４澄をとり２５０ メ１ρＢＢＳを加えて４℃に
冷却した。次（こ２５ｍｇのカルボジイミド（ＣＩ）Ｉ
）を含有するＢＢＳの２５０７ｚ７！を加えて１０呵の
Ｃ［ＩＴ／１００μ１．Ｌｘの混合物を仕成さ・Ｉ！、
この溶液を新たに調製して４ ’ｃに保ち、４℃におい
て渦動下に１時間恒温保持した。
遠心処理を１． ＯＯ００ｒｐｍにおいて４℃で１０間
行った後にＱ、 ５ ｍ ｅの冷ＢＢＳを力１１えた。
行った後にＱ、 ５ ｍ ｅの冷ＢＢＳを力１１えた。
この混合物を水浴中に保持したまま超音波振動にかけて
から４ ’ｃにおいてＢＢＳ （容積（０，５ｍ １り
中の１−キソ抗原の溶液（１，５■）に対して添加した
。
から４ ’ｃにおいてＢＢＳ （容積（０，５ｍ １り
中の１−キソ抗原の溶液（１，５■）に対して添加した
。
次にこの溶液を４℃で渦動下に２〜４時間又は回転器−
１−で１６時間恒温保持した。
１−で１６時間恒温保持した。
該ラテックスサスペンションを１％ＣＢ Ｓを用いて３
回洗浄し、その都度３回遠心処理した後に超音波により
混合した。
回洗浄し、その都度３回遠心処理した後に超音波により
混合した。
貯蔵１／２０希釈、冷凍又は凍結乾燥。
抗二ＶＩ九一体−
リＡ
ヒ１〜ＩＰ、Ｇθ汗ＣフラグメンＩ・をセロチニ等の方
法（Ｊ、 Ｔｍｍｕｎｏｌｏｇｙ （１９６８３１０
１，４３３）に従いパパイン消化により調製した。完全
フロインＩ・アジュバント中の１００μｇのヒトＰｃを
３週間毎にヤギに列し皮内汁１・Ｊシた。最後の注射か
ら１５日後に血清を集めて免疫グＩ−７プリンを抽出し
その抗−Ｐｃ特異性を検査した後に０．９％食塩水中（
１２■／ ｍ １ ）で使用した。
法（Ｊ、 Ｔｍｍｕｎｏｌｏｇｙ （１９６８３１０
１，４３３）に従いパパイン消化により調製した。完全
フロインＩ・アジュバント中の１００μｇのヒトＰｃを
３週間毎にヤギに列し皮内汁１・Ｊシた。最後の注射か
ら１５日後に血清を集めて免疫グＩ−７プリンを抽出し
その抗−Ｐｃ特異性を検査した後に０．９％食塩水中（
１２■／ ｍ １ ）で使用した。
１」−作
ＧＢＳ／Ｉ％＋３ＳＡ中で５０／］（又は２５／１）に
希釈されたヒト血清の５０ ｐ （ｌの試料に対し２５
μβの抗−Ｆｃ溶液（０，９％食塩水中１２■／ ｍ
ｎ ）を加えてから３７℃に１０分間恒温保持した。次
にこの混合物に対し０．９％食塩水中１０■／ ｍ ｅ
の濃度の凝集ヒトＩｇＧの溶液（ＩｇＧを６３℃で３分
Ｏ間加熱することによる）の２５μβを加えてから３７
℃に１０分間再び恒温保持した。
希釈されたヒト血清の５０ ｐ （ｌの試料に対し２５
μβの抗−Ｆｃ溶液（０，９％食塩水中１２■／ ｍ
ｎ ）を加えてから３７℃に１０分間恒温保持した。次
にこの混合物に対し０．９％食塩水中１０■／ ｍ ｅ
の濃度の凝集ヒトＩｇＧの溶液（ＩｇＧを６３℃で３分
Ｏ間加熱することによる）の２５μβを加えてから３７
℃に１０分間再び恒温保持した。
最後に濃度０．１μｇ ／ ｍ ７！で遊離トキソプラ
スモシス抗原を含有するＬｘｔｏｘｏの５０ ｔｔ １
を加えた。
スモシス抗原を含有するＬｘｔｏｘｏの５０ ｔｔ １
を加えた。
３７℃で３０分間更に恒温保持を続けてから２．０ｍ１
４のＣＢＳの添加により反応を停止させた。得られた混
合物を光学的細胞計数器へｊｍ過させて非凝集ラテック
ス粒子群のみを数えた。その濃度ばＩｇＭ抗体に逆比例
する。
４のＣＢＳの添加により反応を停止させた。得られた混
合物を光学的細胞計数器へｊｍ過させて非凝集ラテック
ス粒子群のみを数えた。その濃度ばＩｇＭ抗体に逆比例
する。
別法として遊離ラテックス粒子群濃度を濁度計により計
測し得る。この場合にＴ ｇ Ｍ Ａ ｂ 濃度又はＩ
ｇＧＡｂ濃度は比較的高い。
測し得る。この場合にＴ ｇ Ｍ Ａ ｂ 濃度又はＩ
ｇＧＡｂ濃度は比較的高い。
ＣＢＳ中のヒト血清、抗−Ｆｃ、の同量を渦動下に３７
゛Ｃで２分間恒温保持した。次に上記？農度の凝集し）
ＩｇＧの２５７７１を添加し２てこの混合物を１時間
恒温保持し、その後に濃度０，０２％のＬ ｘ Ｔ ｏ
ｘ ｏの３０ ｐ Ａを加えた。この混合物を短時間
渦動下に保持してから６２０μｍ及び４０５μｍにおけ
る濁度を測定した。６２０μｍが基線を構成した。
゛Ｃで２分間恒温保持した。次に上記？農度の凝集し）
ＩｇＧの２５７７１を添加し２てこの混合物を１時間
恒温保持し、その後に濃度０，０２％のＬ ｘ Ｔ ｏ
ｘ ｏの３０ ｐ Ａを加えた。この混合物を短時間
渦動下に保持してから６２０μｍ及び４０５μｍにおけ
る濁度を測定した。６２０μｍが基線を構成した。
次にこの混合物を２時間恒温保持し、その後に該混合物
について上記２種の波長におりる読みを再び測定した。
について上記２種の波長におりる読みを再び測定した。
６０５μｍ及び４０５μｍにおける始めと終りについて
の測定値間の差の減少は遊離粒子群残留数に逆比例する
。
の測定値間の差の減少は遊離粒子群残留数に逆比例する
。
全抗体活性の測定のために抗−Ｐｃ０代りにｒｕｎｓ緩
衝液のみを用い、遊離１〜１−ソ抗原を使用せずにＬｙ
ｔｏｘｏを使用した。
衝液のみを用い、遊離１〜１−ソ抗原を使用せずにＬｙ
ｔｏｘｏを使用した。
ＩｇＧ抗体のみの測定のために、ジチ；（スレイト−ル
（ｒ）ＴＴ）を用いる試料の予備処理による試１’ｌ中
の１．Ｍの破壊を除き、全抗体のために同じ操作を用い
た。
（ｒ）ＴＴ）を用いる試料の予備処理による試１’ｌ中
の１．Ｍの破壊を除き、全抗体のために同じ操作を用い
た。
ＣＢ Ｓによって希釈する以前の血清の５０ 、ｆｌ
＃に対しＧ Ｂ Ｓ ’ｌ’ Ｙ農度５０ミリモル、ｐ
ｌ＋９．２のＥＩＩＴＡの１７０μｌを加えた。この混
合物に対し濃度１０ｎｖ／ｍｐのＤ Ｔ Ｔ水？容液の
１５μｐを力１１え、次に全混合物を３７℃に３０分間
恒温保持し２、その後に１５μｐの０．２％過酸化水素
溶液の添加によってＤ Ｔ Ｔの反応を停止させた。次
に既述の通りに操作して得られた溶液を上記の定量操作
のために１／１０．１／２０及び１／４０に希釈し７だ
。
＃に対しＧ Ｂ Ｓ ’ｌ’ Ｙ農度５０ミリモル、ｐ
ｌ＋９．２のＥＩＩＴＡの１７０μｌを加えた。この混
合物に対し濃度１０ｎｖ／ｍｐのＤ Ｔ Ｔ水？容液の
１５μｐを力１１え、次に全混合物を３７℃に３０分間
恒温保持し２、その後に１５μｐの０．２％過酸化水素
溶液の添加によってＤ Ｔ Ｔの反応を停止させた。次
に既述の通りに操作して得られた溶液を上記の定量操作
のために１／１０．１／２０及び１／４０に希釈し７だ
。
第２図番才血清希釈の関数としてＴ［ＧＡｈ及びＩ 、
、Ｍ Ａ ＋１の２種血清（１／２５希釈）中の相対濃
度即ち全抗体（曲線１ ） 、ＩｇＧＡｂ（曲線２）Ｉ
ｇＭ八［）（曲線３）に関する相対濃度を示すと共に最
後にＤ Ｔ Ｔ （ＩｇＭ抗体に対する）及び抗−Ｆｃ
ｌｊＣ体（ＩＰ、Ｇ抗体に対する）の添加（こより阻害
された全抗体活１！１（曲線４）茫示す。
、Ｍ Ａ ＋１の２種血清（１／２５希釈）中の相対濃
度即ち全抗体（曲線１ ） 、ＩｇＧＡｂ（曲線２）Ｉ
ｇＭ八［）（曲線３）に関する相対濃度を示すと共に最
後にＤ Ｔ Ｔ （ＩｇＭ抗体に対する）及び抗−Ｆｃ
ｌｊＣ体（ＩＰ、Ｇ抗体に対する）の添加（こより阻害
された全抗体活１！１（曲線４）茫示す。
第３１２１はｒ：ＬＴｓＡザン１′イ・ノチ試験及びＦ
Ｌ Ｉ Ｓへ捕穫試験から得られた成績と比Φ合Ｌ７た
ＩＭｌ’ＡＣＴ （登録商標名）系と対ブルレラＩｇＭ
抗体測定との間の相関を示す、該相関は前者について相
関係数０．９２、後者について相関係数０．９１を与え
た。
Ｌ Ｉ Ｓへ捕穫試験から得られた成績と比Φ合Ｌ７た
ＩＭｌ’ＡＣＴ （登録商標名）系と対ブルレラＩｇＭ
抗体測定との間の相関を示す、該相関は前者について相
関係数０．９２、後者について相関係数０．９１を与え
た。
第４図ば１−ギソプラスモシス（１こ対するＩ Ｐ、Ｍ
抗体の測定のためのＥＬＴＳＡ捕獲技法とＴＭＰＡＣＴ
（登録商標名）との間の相関を示す。相関係数−〇、
９６゜本発明ばＩ−述の態様に限定されず、本発明の範
囲を逸脱することなく多くの変改を施されｌ）る、こと
が理解されるべきである。
抗体の測定のためのＥＬＴＳＡ捕獲技法とＴＭＰＡＣＴ
（登録商標名）との間の相関を示す。相関係数−〇、
９６゜本発明ばＩ−述の態様に限定されず、本発明の範
囲を逸脱することなく多くの変改を施されｌ）る、こと
が理解されるべきである。
既述の通り微細粒子群としてラテックス粉子ｊ＋Ｙの代
りに赤血球群を使用し得る。ｌｎ ｃｊ：、 ｉ；を自
明である。
りに赤血球群を使用し得る。ｌｎ ｃｊ：、 ｉ；を自
明である。
添（」図面の第１図はブルセラアボルタスζ、＝感染し
た患者の血清ＩｇＭ抗体？ｍ度を示し２、第２図は面？
？を希釈０：）関数トｂ テ１ｇＧＡｂ 及？ＪＩｇＨ
Ａｈ （７） ２挿１ｆｌＬ ？ｎ中の相対濃度を示す
。曲線ｌは全抗体、曲線２１．；ｉｌ ＩＰ、ＧＡｂ 、曲線３はＩｇＨＡｂ ４こ関する相対
濃度を示ず。 曲線４はＤ Ｔ Ｔ及び抗−Ｆｃ抗体の添加により阻害
された全抗体活性を示す。第３図はＦＬＴＳＡ ４Ｊン
ドイソヂ試験及びＥＬＴＳＡ ｔｄｉ獲試験から得られ
た成績と比較したＩＭＩＩＡＣＴ系と対ブルセラＩｇＨ
抗体測定との間の相関を示す。第４閾はトキソプラスモ
シスに対するＩｇＨ抗体の測定のたぬのＥＬ、ＩＳＡ捕
獲技法とＩＭＦ’ＡＣＴとの間の相関を示す。 イムバグＰＡ、Ｕ、 （増万ｙ・）茅佐）釦０
１０００ １５００ ２０００ＥＬＩＳＡ
（ザントイ、／ヴ） Ａ、Ｕ。 ’９ＭＡｂ稚マ゛ルゼヅ １１− ’ｅ ７ ） Ａ、Ｕ、 ＜ＭＬ ）
”ｇ”Ｊ ヤイ叫）ＥＬＩＳＡ （→ｆｌ；）ｉ＞ Ａ
、Ｕ。 Ｆｉｇ、３゜ 手続補正書（方式） １．事件の表示 昭和６１年特許願第１３５９８号２
、発明の名称 液体試料中の各種抗体の免疫定量方法
３、補正をする者 事件との関係 出願人 ４、代理人
た患者の血清ＩｇＭ抗体？ｍ度を示し２、第２図は面？
？を希釈０：）関数トｂ テ１ｇＧＡｂ 及？ＪＩｇＨ
Ａｈ （７） ２挿１ｆｌＬ ？ｎ中の相対濃度を示す
。曲線ｌは全抗体、曲線２１．；ｉｌ ＩＰ、ＧＡｂ 、曲線３はＩｇＨＡｂ ４こ関する相対
濃度を示ず。 曲線４はＤ Ｔ Ｔ及び抗−Ｆｃ抗体の添加により阻害
された全抗体活性を示す。第３図はＦＬＴＳＡ ４Ｊン
ドイソヂ試験及びＥＬＴＳＡ ｔｄｉ獲試験から得られ
た成績と比較したＩＭＩＩＡＣＴ系と対ブルセラＩｇＨ
抗体測定との間の相関を示す。第４閾はトキソプラスモ
シスに対するＩｇＨ抗体の測定のたぬのＥＬ、ＩＳＡ捕
獲技法とＩＭＦ’ＡＣＴとの間の相関を示す。 イムバグＰＡ、Ｕ、 （増万ｙ・）茅佐）釦０
１０００ １５００ ２０００ＥＬＩＳＡ
（ザントイ、／ヴ） Ａ、Ｕ。 ’９ＭＡｂ稚マ゛ルゼヅ １１− ’ｅ ７ ） Ａ、Ｕ、 ＜ＭＬ ）
”ｇ”Ｊ ヤイ叫）ＥＬＩＳＡ （→ｆｌ；）ｉ＞ Ａ
、Ｕ。 Ｆｉｇ、３゜ 手続補正書（方式） １．事件の表示 昭和６１年特許願第１３５９８号２
、発明の名称 液体試料中の各種抗体の免疫定量方法
３、補正をする者 事件との関係 出願人 ４、代理人
Claims (11)
- （１）少くともＩｇＭ及びＩｇＧを含有する液体試料例
えば生物学的流体の中の少くともひとつの抗原に対する
Ｉｇｎ抗体の免疫定量方法において、少くともひとつの
抗原に対するＩｇＨ抗体、ＩｇＧ抗体及び恐らくＩｇＡ
抗体をも含有する液体試料をＩｇＧに対する抗体と反応
させ、及び該試料がＩｇＡ抗体を含有する場合にはＩｇ
Ａに対する抗体と反応させ、微細粒子群と結合している
該抗原及び該結合抗原と同型の遊離抗原を上記反応に、
よって得られた生成物に対して添加し、これらの微細粒
子群の凝集度又は非凝集度を測定すること、ＩｇＭ抗体
量が該非凝集微細粒子群量と逆比例することを特徴とす
る前記の方法。 - （２）ＩｇＧに対する抗体及びＩｇＡに対する抗体であ
り得る抗体を添加した後に得られた溶液を攪拌下に約３
７℃の温度で約１〜１５分間恒温保持する特許請求の範
囲第１項記載の方法。 - （３）微細粒子群と結合した抗原及び遊離抗原を添加し
た後に、得られたサスペンションを攪拌下に約３７℃の
温度で約１〜１５分間恒温保持する特許請求の範囲第１
項記載の方法。 - （４）ＩｇＧに対する抗体及びＩｇＡに対する抗体であ
り得る抗体を添加した後、及びその後に得られた溶液を
恒温保持した後に、リウマチ因子によって起される影響
を中和するために該溶液に対して凝集したＩｇＧを添加
する特許請求の範囲第２項記載の方法。 - （５）恒温保持後に得られた溶液に凝集ＩｇＧを添加し
た後に該溶液を攪拌下に約３７℃の温度で約１〜１５分
間再び恒温保持する特許請求の範囲第４項に記載の方法
。 - （６）得られたサスペンションの中の凝集又は非凝集の
微細粒子群量を比濁計によって測定する特許請求の範囲
第１項記載の方法。 - （７）得られたサスペンションの中の凝集又は非凝集の
微細粒子群量を濁度測定によって計測する特許請求の範
囲第１項記載の方法。 - （８）得られたサスペンションの中の凝集又は非凝集の
微細粒子群量を凝集粒子数又は非凝集粒子数の計測によ
り測定する特許請求の範囲第１項記載の方法。 - （９）微細粒子群としてラテックス粒子群又は赤血球群
を使用する特許請求の範囲第１項記載の方法。 - （１０）ＩｇＧ抗体に対する抗体がＩｇＧの抗−Ｆｃ抗
体であり、抗原がブルセラから由来するリボポリサッカ
ライドである特許請求の範囲第１項記載の方法。 - （１１）ＩｇＭ抗体、ＩｇＧ抗体及びＩｇＡ抗体を含有
する液体試料例えば生物学的流体の中のＩｇＧ抗体＋Ｉ
ｇＡ抗体の免疫定量方法において、該液体試料中のＩｇ
Ｍ抗体量を特許請求の範囲第１項記載の方法によって測
定し、かようにして得られたＩｇＭ抗体量をＩｇＭ抗体
＋ＩｇＧ抗体＋ＩｇＡ抗体の総量から差引くことによっ
てＩｇＧ抗体＋ＩｇＡ抗体量を得ることを特徴とする前
記の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| BE214388 | 1985-01-24 | ||
| BE0/214388A BE901567A (fr) | 1985-01-24 | 1985-01-24 | Procede de dosage immunologique d'anticorps de diverses classes dans un echantillon liquide. |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6249258A true JPS6249258A (ja) | 1987-03-03 |
| JPH0565029B2 JPH0565029B2 (ja) | 1993-09-16 |
Family
ID=3843850
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61013598A Granted JPS6249258A (ja) | 1985-01-24 | 1986-01-24 | 液体試料中の各種抗体の免疫定量方法 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4829012A (ja) |
| EP (1) | EP0189389B1 (ja) |
| JP (1) | JPS6249258A (ja) |
| CA (1) | CA1273571A (ja) |
| DE (1) | DE3662730D1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2010026758A1 (ja) * | 2008-09-05 | 2010-03-11 | 積水メディカル株式会社 | モノクローナル抗体及びこれを用いた免疫学的測定方法 |
Families Citing this family (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2604526B1 (fr) * | 1986-09-30 | 1990-12-21 | Indicia Ste Civile Etu Rech | Procede et dispositif de dosage de substances d'interet clinique reactives immunologiquement |
| DE3717401A1 (de) * | 1987-05-23 | 1988-12-08 | Behringwerke Ag | Einschritt-immuntest zur bestimmung von antigen-spezifischen antikoerpern aus einer der immunglobulin-klassen a, m, d oder e und dazu geeignetes mittel |
| GB8717863D0 (en) * | 1987-07-28 | 1987-09-03 | Acade Diagnostic Systems Sa Nv | Determination of antibodies |
| GB8724549D0 (en) * | 1987-10-20 | 1987-11-25 | Coombs R R A | Immunoassay |
| JP3127449B2 (ja) * | 1989-07-28 | 2001-01-22 | 三菱化学株式会社 | 抗体の測定法 |
| ATE139845T1 (de) * | 1989-08-23 | 1996-07-15 | Canon Kk | Methode zur messung eines immunologisch aktiven materials und vorrichtung, die dazu geeignet ist |
| AU643454B2 (en) * | 1989-08-23 | 1993-11-18 | Canon Kabushiki Kaisha | Method for measuring an immunologically active material and apparatus suitable for practicing said method |
| US5413911A (en) * | 1990-12-14 | 1995-05-09 | Abbott Laboratories | Determination of tricyclic antidepressant drugs in the presence of interfering substances |
| ATE197504T1 (de) * | 1991-12-13 | 2000-11-11 | Abbott Lab | Bestimmung trizyklischer antidepressiva in gegenwart störender substanzen |
| JPH0636168U (ja) * | 1992-10-06 | 1994-05-13 | 株式会社ゼクセル | スイッチ機構 |
| US5556759A (en) * | 1993-08-02 | 1996-09-17 | Beach; Peter G. | Assay and method for determining newborn risk for sudden infant death syndrome |
| US5561045A (en) * | 1994-01-04 | 1996-10-01 | Intracel Corporation | Detection reagent, article, and immunoassay method |
| US5547833A (en) * | 1994-01-04 | 1996-08-20 | Intracel Corporation | Radial flow assay, delivering member, test kit, and methods |
| DE69931600T2 (de) * | 1998-01-08 | 2007-05-03 | Chugai Seiyaku K.K. | Neues gen mit einem revers-transkriptase-motiv |
| CA2283597C (en) | 1998-10-02 | 2008-02-05 | Ortho-Clinical Diagnostics, Inc. | Reduced cortisol conjugates |
| US6689571B1 (en) | 2002-11-13 | 2004-02-10 | Board Of Trustees Of Michigan State University | Assay method and kit for pythium insidiosum antibodies |
| FR2917173B1 (fr) | 2007-06-08 | 2009-07-31 | Bio Rad Pasteur Sa | Procede multiplexe de detection d'une infection |
| CN104714028B (zh) * | 2015-03-02 | 2017-01-25 | 深圳市凯瑞德生物技术有限公司 | 一种检测IgM抗体的免疫检测方法 |
| WO2023076832A1 (en) * | 2021-10-25 | 2023-05-04 | Singular Genomics Systems, Inc. | Manipulating and detecting biological samples |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3600494A (en) * | 1967-11-06 | 1971-08-17 | Fujizokiseiyaku Kk | Serological test for syphilis |
| US4092114A (en) * | 1976-10-20 | 1978-05-30 | Fisher Scientific Company | Indirect latex test for determination of immunoglobulins |
| ES471585A1 (es) * | 1977-07-15 | 1979-01-16 | Behringwerke Ag | Procedimiento para la determinacion de reactivos fc |
| US4204837A (en) * | 1978-03-14 | 1980-05-27 | Beckman Instruments, Inc. | Method of rate immunonephelometric analysis |
| DE2918342A1 (de) * | 1979-05-07 | 1980-11-20 | Behringwerke Ag | Latex-reagenz |
| US4434227A (en) * | 1982-02-08 | 1984-02-28 | Abbott Laboratories | Immunoassay for class specific immunoglobulin antibodies |
| JPS5931453A (ja) * | 1982-07-14 | 1984-02-20 | Fujirebio Inc | 梅毒抗体の測定方法 |
-
1986
- 1986-01-21 DE DE8686870009T patent/DE3662730D1/de not_active Expired
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2010026758A1 (ja) * | 2008-09-05 | 2010-03-11 | 積水メディカル株式会社 | モノクローナル抗体及びこれを用いた免疫学的測定方法 |
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