JPS6244198A - 有用タンパク質の生産方法 - Google Patents
有用タンパク質の生産方法Info
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- JPS6244198A JPS6244198A JP18392685A JP18392685A JPS6244198A JP S6244198 A JPS6244198 A JP S6244198A JP 18392685 A JP18392685 A JP 18392685A JP 18392685 A JP18392685 A JP 18392685A JP S6244198 A JPS6244198 A JP S6244198A
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-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/555—Interferons [IFN]
- C07K14/56—IFN-alpha
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- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は組換えＤＮＡ技術により形質転換された大腸菌
を用いて有用タンパク質を生産する方法に関する。
を用いて有用タンパク質を生産する方法に関する。
近年、急速に発展しつつある組換えＤＮＡ技術により、
有用タンパク質も大腸菌を用いて生産することが可能に
なった（Ｉｔａｋｕｒａ、に、ｅｔ ａｌ、。
有用タンパク質も大腸菌を用いて生産することが可能に
なった（Ｉｔａｋｕｒａ、に、ｅｔ ａｌ、。
５ｃｉｅｎｃｅ、１９８．１０５６−１０６３（１９７
７）、Ｇｏｅｄｄｅｌ、Ｄ、Ｖ、ｅｔ ａｌ、、 Ｎａ
ｔｕｒｅ、 ２８７．４１） （１９８０）、 Ｔａｎ
ｉｇｕｃｈｉ。
７）、Ｇｏｅｄｄｅｌ、Ｄ、Ｖ、ｅｔ ａｌ、、 Ｎａ
ｔｕｒｅ、 ２８７．４１） （１９８０）、 Ｔａｎ
ｉｇｕｃｈｉ。
Ｔ、ｅｔ ａｌ、、Ｐｒｏｃ、Ｊｐｎ、、Ａｃａｄ、Ｂ
、 旦４６４（１９７９））。
、 旦４６４（１９７９））。
インターフェロン、インターロイキン２のような有用タ
ンパク質の利用を考える場合、生産量の向上は重要であ
る。生産量の向上には、プラスミドの改良と、培養方法
の改良等が考えられる。プラスミドの改良による生産量
向上にはいくつかの報告がある（Ｇｏｅｄｄｅｌ、Ｄ、
Ｖ、ｅｔ ａｌ、、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃ１ｄｓ Ｒｅ
ｓ、、８．４０５７−４０７４．１９８０）が培養方法
の改良による生産性向上は未だ十分でな（、該改良によ
る生産性の向上が望まれている。
ンパク質の利用を考える場合、生産量の向上は重要であ
る。生産量の向上には、プラスミドの改良と、培養方法
の改良等が考えられる。プラスミドの改良による生産量
向上にはいくつかの報告がある（Ｇｏｅｄｄｅｌ、Ｄ、
Ｖ、ｅｔ ａｌ、、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃ１ｄｓ Ｒｅ
ｓ、、８．４０５７−４０７４．１９８０）が培養方法
の改良による生産性向上は未だ十分でな（、該改良によ
る生産性の向上が望まれている。
本発明は、大腸菌を用いて有用タンパク質を生産するに
際し、培養方法による生産量の向上を目的とするもので
ある。
際し、培養方法による生産量の向上を目的とするもので
ある。
上記の目的は以下の本発明により達成される。
すなわち本発明は、有用タンパク質をコードするＤＮＡ
断片が組み込まれた発現プラスミドにより形質転換され
た大腸菌株を培養して、有用タンパク質を生産するに際
し、培地中にアミノ酸を添加することを特徴とする有用
タンパク質の生産方法である。
断片が組み込まれた発現プラスミドにより形質転換され
た大腸菌株を培養して、有用タンパク質を生産するに際
し、培地中にアミノ酸を添加することを特徴とする有用
タンパク質の生産方法である。
本発明の有用タンパク質とは、組換えＤＮＡ技術により
生産できるものであれば特に限定されないが、たとえば
α−９β−１γ−インターフェロン、インターロイキン
−２等のリンホカイン；インシュリン、ヒト生長ホルモ
ン、ソマトスタチン等のホルモン；ジヒドロ葉酸還元酵
素、ウロキナーゼ等の酵素などが挙げられる。
生産できるものであれば特に限定されないが、たとえば
α−９β−１γ−インターフェロン、インターロイキン
−２等のリンホカイン；インシュリン、ヒト生長ホルモ
ン、ソマトスタチン等のホルモン；ジヒドロ葉酸還元酵
素、ウロキナーゼ等の酵素などが挙げられる。
零発°明の発現プラスミドは、有用タンパク質が大腸菌
内で生産されるように該タンパク質をコードするＤＮＡ
断片が翻訳開始信号とともに、プロモーター制御下に組
み込まれているプラスミドであり、このプラスミドは公
知の方法（たとえば、Ｇｏｅｄｄｅｌ、Ｄ、Ｖ、ｅｔ
ａｌ、、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃ１ｄｓＲｅｓ、、８．４
０５７（１９８０））により作成することができる。
内で生産されるように該タンパク質をコードするＤＮＡ
断片が翻訳開始信号とともに、プロモーター制御下に組
み込まれているプラスミドであり、このプラスミドは公
知の方法（たとえば、Ｇｏｅｄｄｅｌ、Ｄ、Ｖ、ｅｔ
ａｌ、、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃ１ｄｓＲｅｓ、、８．４
０５７（１９８０））により作成することができる。
該発現プラスミドにより大腸菌を形質転換する方法とし
ては、たとえばＭａｎｄｅｌ＋Ｍ、＆ Ｈａｇａ、Ａ、
、−Ｊ、Ｍｏ１．Ｂｉｏｌ、＋５３．１５４ （１９７
０）等の方法を採用することができる。
ては、たとえばＭａｎｄｅｌ＋Ｍ、＆ Ｈａｇａ、Ａ、
、−Ｊ、Ｍｏ１．Ｂｉｏｌ、＋５３．１５４ （１９７
０）等の方法を採用することができる。
宿主である大腸菌の種類は特に限定されないが、Ｌ−メ
チオニン、Ｌ−セリン、Ｌ−チロシンまたはＬ−アルギ
ニンを栄養要求としないものが好ましく、具体的にはに
一１２系のＣ−６００゜ＨＢＩＯＩ等が挙げられる。
チオニン、Ｌ−セリン、Ｌ−チロシンまたはＬ−アルギ
ニンを栄養要求としないものが好ましく、具体的にはに
一１２系のＣ−６００゜ＨＢＩＯＩ等が挙げられる。
形質転換された大腸菌を、培地に接種し、続いて培養す
ることにより目的とする有用タンパク質を産生させるこ
とができる。培地としてはグルコースグリセリンなどの
炭素源、アンモニア、硫酸アンモニウム、塩化アンモニ
ウム、硝酸アンモニウムなどの窒素源、酵母エキス、肉
エキス、麦芽エキス、カゼイン分解物及びペプトンなど
の有機栄養源リン酸塩−などの無機塩、マグネシウム、
カリウム、鉄、その他微量金属等を適宜含有する産生培
地が使用される。具体的にはＬＢ（酵母エキス０．５％
、バクトドリプトン１．０％、食塩０．５％、グルコー
ス０゜２％、ｐＨ７，０〜７．１）を代表とする天然培
地、およびＭ９ （リン酸１カリ０．３％、リン酸２ナ
トリウム０．６％、塩化ナトリウム０．５％、塩化アン
モニウム０．１％、グルコース、硫酸マグネシウム０．
０２％） 、Ｄａｖｉｓの培地、Ｖｏｇｅｌ ＆ Ｖｏ
ｎｎｅｒ培地などの合成培地と、更にそれにカザミノ酸
、酵母エキスなどを加えた半合成培地等が挙げられるが
特にこれに限定されるものではない。
ることにより目的とする有用タンパク質を産生させるこ
とができる。培地としてはグルコースグリセリンなどの
炭素源、アンモニア、硫酸アンモニウム、塩化アンモニ
ウム、硝酸アンモニウムなどの窒素源、酵母エキス、肉
エキス、麦芽エキス、カゼイン分解物及びペプトンなど
の有機栄養源リン酸塩−などの無機塩、マグネシウム、
カリウム、鉄、その他微量金属等を適宜含有する産生培
地が使用される。具体的にはＬＢ（酵母エキス０．５％
、バクトドリプトン１．０％、食塩０．５％、グルコー
ス０゜２％、ｐＨ７，０〜７．１）を代表とする天然培
地、およびＭ９ （リン酸１カリ０．３％、リン酸２ナ
トリウム０．６％、塩化ナトリウム０．５％、塩化アン
モニウム０．１％、グルコース、硫酸マグネシウム０．
０２％） 、Ｄａｖｉｓの培地、Ｖｏｇｅｌ ＆ Ｖｏ
ｎｎｅｒ培地などの合成培地と、更にそれにカザミノ酸
、酵母エキスなどを加えた半合成培地等が挙げられるが
特にこれに限定されるものではない。
本発明は、これらの産生培地にアミノ酸を添加すること
を特徴とする。
を特徴とする。
上記培地には通常、微Ｉｔ （０，１ｇ／ １程度）の
アミノ酸が含まれているが、本発明のアミノ酸添加とは
培地成分以外に、粗精製もしくは精製されたアミノ酸を
添加することをいう。
アミノ酸が含まれているが、本発明のアミノ酸添加とは
培地成分以外に、粗精製もしくは精製されたアミノ酸を
添加することをいう。
本発明のアミノ酸は上記培地中で消費量の最も多いアミ
ノ酸であり、具体的にはＬ−メチオニン、Ｌ−セリン、
Ｌ−チロシン、Ｌ−アルギニン等である。これらの少な
くとも一種以上を添加する。
ノ酸であり、具体的にはＬ−メチオニン、Ｌ−セリン、
Ｌ−チロシン、Ｌ−アルギニン等である。これらの少な
くとも一種以上を添加する。
アミノ酸の添加量は、基本とする培地組成、培養条件、
アミノ酸の種類により一多少異なるが、添加量が通常１
０ｍｇ７１以上であり、特に００．０３〜ｌＯｇ／ｌが
好ましい。
アミノ酸の種類により一多少異なるが、添加量が通常１
０ｍｇ７１以上であり、特に００．０３〜ｌＯｇ／ｌが
好ましい。
個々のアミノ酸の添加量はＬ−メチオニンの場合は０．
０５〜０．６ｇ／ｌ、Ｌ−セリンの場合は１．０〜７．
０ｇ／ｌ、Ｌ−チロシンの場合は０．０３〜０．５ｇ／
ｌ、Ｌ−アルギニンの場合は１．０〜３．０ｇ／ｌが好
ましい。
０５〜０．６ｇ／ｌ、Ｌ−セリンの場合は１．０〜７．
０ｇ／ｌ、Ｌ−チロシンの場合は０．０３〜０．５ｇ／
ｌ、Ｌ−アルギニンの場合は１．０〜３．０ｇ／ｌが好
ましい。
添加方法としては、培養の初期に添加する初発添加でも
良いし、断続的もしくは連続的に添加する遂次添加でも
良く、またこれらを組合せて添加する方法でも良い。
良いし、断続的もしくは連続的に添加する遂次添加でも
良く、またこれらを組合せて添加する方法でも良い。
培養は、好ましくはｐＨは５〜８程度、培養温度は２０
〜３７℃程度、培養時間は１〜４日程度で行う。
〜３７℃程度、培養時間は１〜４日程度で行う。
本発明方法は、有用タンパク質の生産性を著しく向上さ
せることができ、実施例からも明らかな様に、アミノ酸
を添加しない培地に比ベインターフェロンの場合は生産
量を２〜４倍量にすることができる。
せることができ、実施例からも明らかな様に、アミノ酸
を添加しない培地に比ベインターフェロンの場合は生産
量を２〜４倍量にすることができる。
以下に実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明する
が、これにより本発明の有用性が限定されるものではな
い。
が、これにより本発明の有用性が限定されるものではな
い。
実施例１
ヒトβ型インターフェロン発現プラスミドを保持する大
腸菌ＨＢＩＯＩ／ｐＫＭ６を、２．５１容ミニジヤーを
用いて培養した。ｐＫＭ６は、プラスミドｐＫＴ１−９
の５Ｄ−ＡＴＣ間の塩基配列を修飾することにより得た
。
腸菌ＨＢＩＯＩ／ｐＫＭ６を、２．５１容ミニジヤーを
用いて培養した。ｐＫＭ６は、プラスミドｐＫＴ１−９
の５Ｄ−ＡＴＣ間の塩基配列を修飾することにより得た
。
ｐＫＴｌ−９は、ｔｕｆＢプロモーター支配下にヒトイ
ンターフェロンβポリペプチドをコードするＤＮＡ断片
が組み込まれた発現プラスミドｐ ＴｕＢｒＦＮ−β−
５（呑口、生化学５４，３６３（１９８２） ）を、Ｅ
ｃｏＲＩ とＣＩａＩで処理し、ｔｕｆＢプロモーター
断片を除去した後、その部分に入ｔｒｐＮＭ７７Ｂ−６
（Ａ、Ｓ、Ｈｏｐｋｉｎｓ ｅｔ ａｌ、、Ｊ、Ｍｏ１
．８ｉｏ１．１０７．５４９（１９７６））由来のＴｒ
ｐプロモーター、ＳＯ配列を含むＥｃｏ ＲＩ−Ｔａｇ
ｌ断片を挿入することにより得た。ｐＫＴｌ−９のＳＤ
−＾ＴＧ間塩基配列は、ＡＧＧＴＡＴＣＴＡＣＡＴＧで
ある−が、本配列について合成りＮＡオリゴマーを用い
て修飾を加え、ＡＧＧＴＴＴＧＡＡＡＴＣＧＡＴＧとし
たものがｐＫＭ６である。
ンターフェロンβポリペプチドをコードするＤＮＡ断片
が組み込まれた発現プラスミドｐ ＴｕＢｒＦＮ−β−
５（呑口、生化学５４，３６３（１９８２） ）を、Ｅ
ｃｏＲＩ とＣＩａＩで処理し、ｔｕｆＢプロモーター
断片を除去した後、その部分に入ｔｒｐＮＭ７７Ｂ−６
（Ａ、Ｓ、Ｈｏｐｋｉｎｓ ｅｔ ａｌ、、Ｊ、Ｍｏ１
．８ｉｏ１．１０７．５４９（１９７６））由来のＴｒ
ｐプロモーター、ＳＯ配列を含むＥｃｏ ＲＩ−Ｔａｇ
ｌ断片を挿入することにより得た。ｐＫＴｌ−９のＳＤ
−＾ＴＧ間塩基配列は、ＡＧＧＴＡＴＣＴＡＣＡＴＧで
ある−が、本配列について合成りＮＡオリゴマーを用い
て修飾を加え、ＡＧＧＴＴＴＧＡＡＡＴＣＧＡＴＧとし
たものがｐＫＭ６である。
１）の生産培地（リン酸１カリウム０．３％、リン酸２
ナトリウム０．６％、塩化ナトリウム０．５％、塩化ア
ンモニウム０．１％、グリコース０．５％、カザミノ酸
０．５％、硫酸マグネシウム１ａｅＭ、ビタミン８．
６μｇ ／ ｍ １ 、アンピシリン５０μｇ／ｍｌり
に各種アミノ酸を添加し、２．５１容ミニジヤーに仕込
んだ。アミノ酸は、Ｌ−セリン、し−メチオニン、Ｌ−
チロシンを各々使用した。
ナトリウム０．６％、塩化ナトリウム０．５％、塩化ア
ンモニウム０．１％、グリコース０．５％、カザミノ酸
０．５％、硫酸マグネシウム１ａｅＭ、ビタミン８．
６μｇ ／ ｍ １ 、アンピシリン５０μｇ／ｍｌり
に各種アミノ酸を添加し、２．５１容ミニジヤーに仕込
んだ。アミノ酸は、Ｌ−セリン、し−メチオニン、Ｌ−
チロシンを各々使用した。
ミニジャーは、攪拌数６００ｒｐａｇ：通気ｉｔｌＶＶ
Ｍ、２５℃の条件で運転した。トリプトファンオペロン
の誘導物質であるインドールアクリル酸を加え、グリコ
ースとカザミノ酸混液を添加しながら６０時間培養した
。
Ｍ、２５℃の条件で運転した。トリプトファンオペロン
の誘導物質であるインドールアクリル酸を加え、グリコ
ースとカザミノ酸混液を添加しながら６０時間培養した
。
菌体濃度は最終的にＯＤ５５０ｎｍで３０〜４０に到達
した。菌体を１０，０００ｘｇ、５分間の遠心分離によ
り集め、生理食塩水で１回洗浄した。
した。菌体を１０，０００ｘｇ、５分間の遠心分離によ
り集め、生理食塩水で１回洗浄した。
集めた菌体を、リゾチームＥＤＴＡを含むトリス−塩酸
緩衝液（ｐＨ７，５）に懸濁し、水中で６０分間放置し
た。
緩衝液（ｐＨ７，５）に懸濁し、水中で６０分間放置し
た。
凍結融解を２回くり返し菌体を破砕した後、３０、ｏｏ
ｏｘｇ、２０分間の遠心分離により細胞残滓を除去した
ものをインターフェロン定量用抽出液とした。
ｏｘｇ、２０分間の遠心分離により細胞残滓を除去した
ものをインターフェロン定量用抽出液とした。
ヒトβ型インターフェロンの定量は、ヒト羊膜由来ＦＬ
細胞、Ｖｅｓｉｃｕｌｅｒ ｓｔｏｍａｔｉｓ ｖｉｒ
ｕｓを用いたＣＰＥ５０法を用いた。結果を第１表に示
す。
細胞、Ｖｅｓｉｃｕｌｅｒ ｓｔｏｍａｔｉｓ ｖｉｒ
ｕｓを用いたＣＰＥ５０法を用いた。結果を第１表に示
す。
第１表
実施例２
ヒトβ型インターフェロン発現プラスミドを保持する大
腸菌ＨＢＩ ０１／ｐＫＭ６を、２．５１容ミニジヤー
を用いて実施例１と同様に培養した。
腸菌ＨＢＩ ０１／ｐＫＭ６を、２．５１容ミニジヤー
を用いて実施例１と同様に培養した。
培地は、実施例１と同様の生産培地を使用し、各種アミ
ノ酸を連続的に添加した。
ノ酸を連続的に添加した。
アミノ酸は、Ｌ−セリン６．４ｇ／ｉ、Ｌ−メチオニン
３．２ｇ／ｌ、をそれぞれ単独添加ｍｇ／ｌ、Ｌ−チロ
シン１９０ｍｇ／ｌ、ｔ、−アルギニン１．６ｇ／ｌ０
４種のアミノ酸を組みあわせて添加した。菌体からのヒ
トβ型インターフェロンの抽出方法、及び定量方法は実
施例１に従った。結果は第２表に示す。
３．２ｇ／ｌ、をそれぞれ単独添加ｍｇ／ｌ、Ｌ−チロ
シン１９０ｍｇ／ｌ、ｔ、−アルギニン１．６ｇ／ｌ０
４種のアミノ酸を組みあわせて添加した。菌体からのヒ
トβ型インターフェロンの抽出方法、及び定量方法は実
施例１に従った。結果は第２表に示す。
第２表
実施例３
ヒトβ型インターフェロン発現プラスミドを保持する大
腸菌ＨＢＩＯＩ／ｐＫＭ６を、実施例１に示す生産培地
１）を、２．５１容ミニジヤーに仕込み培養した。
腸菌ＨＢＩＯＩ／ｐＫＭ６を、実施例１に示す生産培地
１）を、２．５１容ミニジヤーに仕込み培養した。
培養は実施例１と同様に行った。アミノ酸は、初発にＬ
−セリフ１．２ｇ／ｌを添加し同時に、Ｌ−セリン５．
４ｇ／ｌ、Ｌ−メチオニン０．４８ｇ／！、Ｌ−チロシ
ン０．１９ｇ／ｊ！を連続的に添加した。菌体からのヒ
トβ型インターフェロンの抽出方法、及び定量方法は、
実施例１と同様に行った。結果は第３表に示す。
−セリフ１．２ｇ／ｌを添加し同時に、Ｌ−セリン５．
４ｇ／ｌ、Ｌ−メチオニン０．４８ｇ／！、Ｌ−チロシ
ン０．１９ｇ／ｊ！を連続的に添加した。菌体からのヒ
トβ型インターフェロンの抽出方法、及び定量方法は、
実施例１と同様に行った。結果は第３表に示す。
第３表
Claims (3)
- （１）有用タンパク質をコードするＤＮＡ断片が組み込
まれた発現プラスミドにより形質転換された大腸菌を培
養して有用タンパク質を生産するに際し、培地中にアミ
ノ酸を添加することを特徴とする有用タンパク質の生産
方法。 - （２）アミノ酸が、Ｌ−メチオニン、Ｌ−セリン、Ｌ−
チロシンおよびＬ−アルギニンからなる群から選ばれる
１種以上である特許請求の範囲第（１）項記載の生産方
法。 - （３）アミノ酸の添加量が、１０ｍｇ／ｌ以上である特
許請求の範囲第（１）項記載の生産方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18392685A JPS6244198A (ja) | 1985-08-23 | 1985-08-23 | 有用タンパク質の生産方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18392685A JPS6244198A (ja) | 1985-08-23 | 1985-08-23 | 有用タンパク質の生産方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6244198A true JPS6244198A (ja) | 1987-02-26 |
Family
ID=16144225
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP18392685A Pending JPS6244198A (ja) | 1985-08-23 | 1985-08-23 | 有用タンパク質の生産方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6244198A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5473964A (en) * | 1988-02-03 | 1995-12-12 | Kanzaki Kokyukoki Mfg. Co., Ltd. | Axle driving apparatus |
| FR2729972A1 (fr) * | 1995-01-31 | 1996-08-02 | Sanofi Sa | Procede d'extraction de proteines periplasmiques de microorganismes procaryotes en presence d'arginine |
| WO2001085945A1 (fr) * | 2000-05-10 | 2001-11-15 | Suntory Limited | Procede permettant d'inhiber la formation de produits secondaires dans la production d'un polypeptide genetiquement modifie |
| US6938718B1 (en) | 1988-02-03 | 2005-09-06 | Kanzaki Kokyukoki Mfg. Co., Ltd. | Axle driving apparatus |
-
1985
- 1985-08-23 JP JP18392685A patent/JPS6244198A/ja active Pending
Cited By (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5694816A (en) * | 1988-02-03 | 1997-12-09 | Kanzaki Kokyukoki Mfg. Co., Ltd. | Axle driving apparatus |
| US5655417A (en) * | 1988-02-03 | 1997-08-12 | Kanzaki Kokyukoki Mfg. Co. Ltd. | Axle driving apparatus |
| US6938718B1 (en) | 1988-02-03 | 2005-09-06 | Kanzaki Kokyukoki Mfg. Co., Ltd. | Axle driving apparatus |
| US5598748A (en) * | 1988-02-03 | 1997-02-04 | Kanzaki Kokyukoki Mfg. Co., Ltd. | Axle driving apparatus |
| US5473964A (en) * | 1988-02-03 | 1995-12-12 | Kanzaki Kokyukoki Mfg. Co., Ltd. | Axle driving apparatus |
| US5647249A (en) * | 1988-02-03 | 1997-07-15 | Kanzaki Kokyukoki Mfg. Co. Ltd. | Axle driving apparatus |
| US5950500A (en) * | 1988-02-03 | 1999-09-14 | Kanzaki Kokyukoki Mfg. Co., Ltd. | Axle driving apparatus |
| US5664465A (en) * | 1988-02-03 | 1997-09-09 | Kanzaki Kokyukoki Mfg. Co., Ltd. | Axle driving apparatus |
| US5636555A (en) * | 1988-02-03 | 1997-06-10 | Kanzaki Kokyukoki Mfg. Co. Ltd. | Axle driving apparatus |
| US5752417A (en) * | 1988-02-03 | 1998-05-19 | Kanzaki Kokyukoki Mfg. Co. Ltd. | Axle driving apparatus |
| US5700665A (en) * | 1995-01-31 | 1997-12-23 | Sanofi | Method for the extraction of periplasmic proteins from prokaryotic microorganisms in the presence of arginine |
| FR2729972A1 (fr) * | 1995-01-31 | 1996-08-02 | Sanofi Sa | Procede d'extraction de proteines periplasmiques de microorganismes procaryotes en presence d'arginine |
| EP0725140A1 (fr) * | 1995-01-31 | 1996-08-07 | Sanofi | Procédé d'extraction de protéines périplasmiques de microorganismes procaryotes en présence d'arginine |
| WO2001085945A1 (fr) * | 2000-05-10 | 2001-11-15 | Suntory Limited | Procede permettant d'inhiber la formation de produits secondaires dans la production d'un polypeptide genetiquement modifie |
| AU783954B2 (en) * | 2000-05-10 | 2006-01-05 | Asubio Pharma Co., Ltd. | Method of inhibiting the formation of by-product in the production of genetically modified polypeptide |
| US7547529B1 (en) | 2000-05-10 | 2009-06-16 | Asubio Pharma Co., Ltd. | Methods for reducing the formation of by-products in the production of recombinant polypeptides |
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