JPS62434A - Novel compound ss7313a, production thereof and immunological regulator containing said compound - Google Patents

Abstract

NEW MATERIAL:A compound SS7313A expressed by the formula. USE:A remedy for autoimmune diseases, e.g. chronic rheumarthritis or systemic lupus erythematosus, etc. PREPARATION:SS7313 strain belonging to the genus Streptomyces (FERM-P No.7357) is inoculated in a culture medium containing a nutrient source and aerobically cultivated to afford the aimed compound SS7313A expressed by the formula.

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、新規化合物ＳＳ７３１３Ａ及びその製造法並
びにこれを含有する免疫調節剤に関する。。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION [Industrial Application Field] The present invention relates to a novel compound SS7313A, a method for producing the same, and an immunomodulator containing the same. .

〔従来の技術及びその問題点〕[Conventional technology and its problems]

従来、数多くの免疫Ａｓ作用を有する化合物が天然物中
から単離され、また合成によって製造されている。Conventionally, a large number of compounds having immune As activity have been isolated from natural products and also produced synthetically.

しかし慢性関節リウマチや全身性エリテマトーデスなど
の自己免疫疾患に対して、満足できる効果を示す医薬は
未だ得られていない。However, no drug has yet been obtained that shows satisfactory effects on autoimmune diseases such as rheumatoid arthritis and systemic lupus erythematosus.

本発明者らは新規で有用な物質を得べく、天然の土壌か
ら数多くの微生物を単離し、その生産物について種々研
究を行なった結果、福岡県北九州市の土壌から分離した
菌株が抗腫瘍作用を有する抗生物質ＳＳ７３１３Ｂを生
産することを見出し、先に特許出願した（４？願昭５８
−２３２５９５号）。In order to obtain new and useful substances, the present inventors isolated numerous microorganisms from natural soil and conducted various studies on their products. He discovered that he could produce an antibiotic SS7313B with
-232595).

〔問題点を解決するための手段〕[Means for solving problems]

本発明者らは、上記菌株の培養液について更に検討を行
なっていたところ、この中に３８７３１３Ｂとは全く異
なった新規な化合物ＳＳ７３１３Ａが存在すること、そ
して、この新規化合物が優れた免疫調節作用を有し、医
薬として有用であることを見出し、本発明を児成した。The present inventors further investigated the culture solution of the above-mentioned bacterial strain and found that there was a new compound SS7313A, which is completely different from 387313B, and that this new compound has an excellent immunomodulatory effect. The present invention was based on the discovery that the present invention is useful as a medicine.

すなわち、本発明は次の式 で表わされる化合物ＳＳ７３１３Ａ及びその製造法並び
にこれを含有する免疫調節剤を提供するものである。That is, the present invention provides compound SS7313A represented by the following formula, a method for producing the same, and an immunomodulator containing the same.

本発明のＳＳ７３１３Ａを産生する８７３１３株は次の
ような菌学的性質を有する。The 87313 strain producing SS7313A of the present invention has the following mycological properties.

（１）形態 胞子形成菌糸は気菌糸より単純分枝し、車軸分枝は認め
られない。気菌糸の先端部は直状又は波状である。胞子
のう、帽毛胞子、菌核はいずれも認められない。また基
中菌糸の分断も認められない。電子顕微鏡観察によると
、胞子の表面は平滑であり、形は円筒形である。胞子の
大きさは０．５〜０．７　Ｘ　Ｏ，７〜０．９　ｐｍで
あり、通常５０個以上が連鎖している。(1) Morphology Spore-forming hyphae are more simply branched than aerial hyphae, and no axillary branching is observed. The tips of aerial hyphae are straight or wavy. No sporangia, capspores, or sclerotia are observed. Also, no division of basal hyphae was observed. According to electron microscopy, the spores have a smooth surface and a cylindrical shape. The size of the spores is 0.5-0.7 x O, 7-0.9 pm, and usually 50 or more are chained together.

（２各種培地における生育状態（２７℃、１４日間培養
） ８７３１３株の各種培地上での生育状態は次表のとおり
である。(2) Growth status on various media (27°C, 14 days culture) The growth status of strain 87313 on various media is as shown in the following table.

以下余白 ■　生理的性質 ■生育温度範囲（酵母エキス・麦芽エキス寒天培地、１
４日培養） 生育可能温度　８〜３７℃ 生育至適温度　２７〜３０℃ ■ゼラチンの液化　　　陽性 ■澱粉の加水分解　　　陽性 ■脱脂牛乳の凝固　　　陰性 ■脱脂牛乳のペプトン化　陽性 ■メラニン様色素の生成　陽性 ■硝酸塩の還元　　　　陽性 ■セルロースの分解　　陰性 （滲炭素源の利用　（プリドハム・ゴドリーブ寒天培地
、２７℃、１４日培養） ■Ｄ−グルコース　　　　＋ ■Ｌ−アラビノース　　　− ■シュクロース　　　　　− ■Ｄ−キシロース　　　　＋ ■イノシトール　　　　　− ■、Ｄ−マンニトール　　　士 ■Ｄ−フラクトース　　　＋ ■Ｌ−ラムノース　　　　− ■ラフィノース　　　　　− ０ガラクトース　　　　　士 ■サリシン　　　　　　　　＋ Ｃ注）　十は利用する、−は利用しない。Space below ■ Physiological properties ■ Growth temperature range (yeast extract/malt extract agar medium, 1
4-day culture) Temperature for growth: 8-37℃ Optimum temperature for growth: 27-30℃ ■ Liquefaction of gelatin Positive ■ Hydrolysis of starch Positive ■ Coagulation of skim milk Negative ■ Peptonization of skim milk Positive ■ Production of melanin-like pigments Positive ■Nitrate reduction Positive■Cellulose decomposition Negative (Use of exudate carbon source (Pridham-Godelive agar, 27℃, 14 days culture) ■D-glucose + ■L-arabinose − ■Sucrose − ■D-xylose + ■ Inositol - ■, D-Mannitol ■D-Fructose + ■L-Rhamnose - ■Raffinose - 0 Galactose ■Salicin + C Note) 10 means use, - means do not use.

以上の性状、及び細胞壁組成としてＬＬ−ジアミノピメ
リン酸を含むことより、８７３１３株がストレプトミセ
ス属に属することは明らかである。From the above properties and the fact that the cell wall composition contains LL-diaminopimelic acid, it is clear that strain 87313 belongs to the genus Streptomyces.

さらに同菌株の閑学的件状をワッンスマン著［ジ・アク
テノミセテス（Ｔｈｅ　Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ　
）　Ｊ第２巻（１９６１年）、シャーりングとゴツトリ
ーブのＩＳＰ報告［インターナショナル・ジャーナル・
オブ・システマテイック・バクテリオロジ−（Ｉｎｔｅ
ｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｓｙｓｔ
ｅｍａｔｉｃ　Ｂａｃｔｅ−ｒｉｏｌｏｇｙ　）　Ｊ第
１８巻、６９頁、２７９頁（１９６８年）、同第１９巻
、３９１頁（１９６９年）、同第２２巻、２６５頁（１
９７２年）及び［バーシーズ・マニュアル・オブ・デイ
ターミネイティブ・バクテリオロジー（Ｂｅｒｇｅｙ’
ｓ　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　Ｄｅｔｅｒ−ｍ１ｎａｔｉｖ
ｅ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ　）　Ｊ第８版（１９７
４年）よ、９８７３１３株の近縁種を検索すると８７３
１３株のように気菌糸の色がイエロー・カラー・シリー
ズ、胞子鎖が直状又は波状で５０個以上の胞子が連鎖し
、胞子表面が平滑で、メラニン様色素を生成する株とし
ては、ストレプトミセス・カポウレンシス（Ｓｔｒｅｐ
ｔｏｍｙｃｅｓ　ｃａｖｏｕｒｅｎｓｉｓ　）とストレ
プトミセスーグリセオブルネウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙ
ｃｅｓｇｒｉｓｅｏｂｒｕｎｅｕｓ　）等の種が認めら
れる。次に８７３１３株と上記２種の標準株との比較を
行なった結果を示すと次宍のとおりである。Furthermore, the clinical condition of the same strain was described by Wansmann [The Actinomycetes].
) J Volume 2 (1961), Scharring and Gottlieb ISP Report [International Journal
of Systematic Bacteriology (Inte
rnational Journal of Syst
Bacte-riology) J Vol. 18, pp. 69, 279 (1968), Vol. 19, pp. 391 (1969), Vol. 22, pp. 265 (1969)
972) and [Bergey's Manual of Determinative Bacteriology (Bergey's Manual of Determinative Bacteriology)
s Manual of Deter-m1nativ
e Bacteriology) J 8th edition (197
4th year), searching for related species of strain 987313 yields 873.
Strains such as Strain 13, which have yellow color series of aerial mycelium, have straight or wavy spore chains with more than 50 spores, and have a smooth spore surface, producing melanin-like pigments are Streptococcus. Mrs. Kapoulensis (Strep)
tomyces cavourensis) and Streptomyces griseobruneus (Streptomyces cavourensis).
Species such as cesgriseobruneus) are recognized. Next, the results of a comparison between strain 87313 and the two types of standard strains described above are as follows.

以下余白 上表にみられるように８７３１３株とストレプトミセス
・グリセオブルネウスとは、気菌糸の色調、裏面の色調
、可溶性色素の点で異なる。他方、ストレプトミセス・
カボウレンシスとは裏面の色調、可溶性色素がやや異な
るがその他の菌学的性状で両者はよく一致する。したが
って、８７３１３株はストレプトミセス会力ボウレンシ
スに属する一菌株であると同定した。As shown in the table above in the margin below, strain 87313 and Streptomyces griseobruneus differ in the color tone of the aerial mycelia, the color tone of the underside, and soluble pigment. On the other hand, Streptomyces
Although the color tone and soluble pigments on the underside are slightly different from those of Cabourensis, other mycological properties are similar. Therefore, strain 87313 was identified as a strain belonging to Streptomyces spp.

本発明者らは８７３１３株を公知の菌株と区別するため
にストレプトミセス・カボウレンシスＳ７３１３　（５
ｔｏｒｅｐｔｏｒｎｙｃｅｓ　ｃａｖｏｕｒｅｎｓｉｓ
　８７３１３）と命名し、工業技術院微生物工業技術研
究所に受託番号微工研菌寄第７３５７号（ＦＦＲＭ　　
Ｐ−７３５７）として寄託した。In order to distinguish the 87313 strain from known strains, the present inventors investigated Streptomyces cabourensis S7313 (5
toreptornyces cavourensis
87313) and was given accession number 7357 (FFRM) to the Institute of Microbiology, Agency of Industrial Science and Technology.
P-7357).

本発明の化合物ＳＳ７３１３Ａは、上記菌株を栄養源含
有培地に接種し、好気的に培養することにより製造され
る。ＳＳ７３１３Ａ生産株としては上記８７３１３株は
もとより、その人工変異株あるいは自然変異株であって
もＳＳ７３１３Ａを生産する能力を有するものであれば
、すべて本発明に使用することができる。上記８７３１
３株の人工変異株は、他の放線菌同様、例えば紫外線、
コバルト６０照射、化学変異誘起剤等により容易に得る
ことができる。Compound SS7313A of the present invention is produced by inoculating the above strain into a nutrient-containing medium and culturing it aerobically. As SS7313A producing strains, not only the above-mentioned 87313 strain, but also any artificial mutants or natural mutants can be used in the present invention as long as they have the ability to produce SS7313A. 8731 above
The three artificial mutant strains are similar to other actinomycetes, such as ultraviolet rays,
It can be easily obtained by cobalt-60 irradiation, chemical mutagenic agents, etc.

次にＳＳ７３１３Ａの製造における菌株の培養について
説明する。すなわち、ストレプトミセス属に属するＳＳ
７３１３Ａ生産菌株の培養には通常の放線菌の培養法が
用いられる。Next, culturing of the bacterial strain in the production of SS7313A will be explained. That is, SS belonging to the genus Streptomyces
A normal actinomycete culture method is used to culture the 7313A producing strain.

栄養培地としては、資化しうる炭素源、窒素源、無機物
などを適当に含有する限り合成培地１、半合成培地ある
いは天然培地のいずれでも使用可能である。As the nutrient medium, any synthetic medium 1, semi-synthetic medium, or natural medium can be used as long as it contains appropriate amounts of assimilable carbon sources, nitrogen sources, inorganic substances, etc.

炭素源としては、例えばグルコース、フラクトース、キ
シロース、ガラクトース、澱粉、グリセリン、デキスト
リン、糖蜜等が単独または組合せて用いられる。さらに
菌の資化性によっては炭化水素、アルコール類、有機酸
等も用い得る。窒素源としては、無機もしくは有機窒素
化合物、例えば塩化アンモニウム、ｔＬ酸アンモニウム
、硝酸アンモニウム、尿素、硝酸ソーダ、グルタミン酸
ン−ダなど、または天然物、例えば大豆抽出物、大豆粉
、酵母エキス、乾燥酵母、綿実粕、ベジタブル・プロテ
ィン、ンイトン等が単独または組合せて用いられる。無
機物としては、例えば炭酸カルシウム、塩化ナトリウム
、硫酸銅、塩化マンガン、硫酸亜鉛等が単独または組合
せて用いられる。その他、８７３１３株の発育を助けＳ
Ｓ７３１３Ａの生産を促進する物質あるいはシリコン油
又はアデカノール（商品名）等の一般的消泡剤を適宜培
地に添加することもできる。As the carbon source, for example, glucose, fructose, xylose, galactose, starch, glycerin, dextrin, molasses, etc. are used alone or in combination. Furthermore, depending on the assimilation ability of the bacteria, hydrocarbons, alcohols, organic acids, etc. may also be used. Nitrogen sources include inorganic or organic nitrogen compounds, such as ammonium chloride, ammonium tLate, ammonium nitrate, urea, sodium nitrate, glutamate, etc., or natural products, such as soybean extract, soybean flour, yeast extract, dried yeast, etc. Cottonseed meal, vegetable protein, niton, etc. are used alone or in combination. As the inorganic substance, for example, calcium carbonate, sodium chloride, copper sulfate, manganese chloride, zinc sulfate, etc. are used alone or in combination. In addition, it helps the growth of 87313 stocks.
A substance that promotes the production of S7313A or a general antifoaming agent such as silicone oil or Adekanol (trade name) can also be added to the medium as appropriate.

培養法としては一般の放勝閑の培養に用いられる方法が
採用されるが、通常は液体培地による振盪培養あるいは
深部通気培養が好ましい。培ｔは好気的粂件下で行なわ
れ、培企に適当な湿度は２５〜３０℃であるが一般に２
７℃付近で培養するのが好ましい。ＳＳ７３１３Ａは振
盪培養、深部通気培養のいずれの場合もその生産量は２
〜６日間の培養で最高に達する。ＳＳ７３１３Ａは、通
常、菌体及び培養液中に存在するので、その分離、精製
は培養物を濾過または遠心分離などによって菌体と培養
涙液に分けた後、菌体及び培養Ｆ液から通常の分離法、
例えば、溶媒抽出法、沈殿法、イオン交換樹脂法、ゲル
ｐ過法、吸着または分配カラムクロマト法、透析法等の
方法を適宜組合せて行なうのが良い。As a culture method, a method generally used for culture in Hokkatsukan is employed, but shaking culture using a liquid medium or deep aeration culture is usually preferred. Cultivation is carried out under aerobic conditions, and the appropriate humidity for cultivation is 25 to 30°C, but generally 25°C to 30°C.
It is preferable to culture at around 7°C. SS7313A has a production volume of 2 in both shaking culture and deep aeration culture.
Maximum reached after ~6 days of culture. SS7313A normally exists in bacterial cells and culture solution, so its isolation and purification can be carried out by separating the culture into bacterial cells and cultured tear fluid by filtration or centrifugation, and then separating the bacterial cells and culture F fluid into normal separation method,
For example, a suitable combination of methods such as solvent extraction, precipitation, ion exchange resin, gel p-filtration, adsorption or distribution column chromatography, and dialysis may be used.

好ましい分離、精製法の例としては次の方法が挙げられ
る。すなわち、まず培養物を遠心分離に付し、菌体及び
培養Ｐ液を得る。培養涙液は有機溶媒、例えば酢酸エチ
ルを用いて抽出する。菌体はメチルアルコール、アセト
ンなどの親水性溶媒で抽出し、この抽出液を減圧譲縮し
、残留物を水溶液とし、これを酢酸エチルなどを用いて
抽出し、培養ｐ液の酢酸エチル抽出液と合わせる。こう
して得られた抽出液を減圧留去し、残渣をクロロホルム
のシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付す。得られ
た活性画分を減圧留去し、残渣をさらに、酢酸エチルの
シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、活性
画分を集め、減圧嬢縮すると、無色油状のＳＳ７３１３
Ａが得られる。Examples of preferred separation and purification methods include the following methods. That is, first, the culture is subjected to centrifugation to obtain bacterial cells and culture P solution. Cultured tear fluid is extracted using an organic solvent such as ethyl acetate. The bacterial cells are extracted with a hydrophilic solvent such as methyl alcohol or acetone, this extract is concentrated under reduced pressure, the residue is made into an aqueous solution, this is extracted using ethyl acetate, etc., and the ethyl acetate extract of the culture p liquid is extracted. Match with. The extract thus obtained was distilled off under reduced pressure, and the residue was subjected to chloroform silica gel column chromatography. The obtained active fraction was distilled off under reduced pressure, and the residue was further purified by silica gel column chromatography using ethyl acetate. The active fractions were collected and condensed under reduced pressure to obtain SS7313 as a colorless oil.
A is obtained.

以上のようにして得られたＳＳ７３１３Ａは、次のより
な理化学的性質を有する。SS7313A obtained as described above has the following physical and chemical properties.

〈理化学的性質〉 ■　分子量及び分子式 ％式％ ■　紫外線吸収スペクトル 第１図 λＭｅＯＨｎｍ（ε）：　２７６　（２５，７００）ｎ
ａｘ ■　赤外線吸収スペクトル（′ｔＬ１１１法）第２図 ■　’Ｈ−ＮＭＲスペクトル（９０ＭＨｚ　）第３図 重クロロホルム溶液中、Ｔ　Ｍ　Ｓを基準物質として測
定した。<Physical and chemical properties> ■ Molecular weight and molecular formula % Formula % ■ Ultraviolet absorption spectrum Figure 1 λMeOHnm (ε): 276 (25,700)n
ax ■ Infrared absorption spectrum ('tL111 method) Figure 2 ■ 'H-NMR spectrum (90 MHz) Figure 3 Measurements were carried out in deuterium chloroform solution using TMS as a reference substance.

■　１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（２２，５ＭＨｚ　）夏
クロロホルム浴液中、ＴＭＳを基準物質として測定した
。(2) 13C-NMR spectrum (22.5 MHz) Measured in a summer chloroform bath using TMS as a reference substance.

δｐｐｒｎ：　２０４．６（ｓ　）、１４３．８（ｄ　
）、１４１．１（ｄ　）　、　１３０．１　（ｄ　）　
、　１２６．８（ｄ　）　、　７２．８（ｄ）。δpprn: 204.6 (s), 143.8 (d
), 141.1(d), 130.1(d)
, 126.8(d), 72.8(d).

６０．７（ｔ　）、４９．３ｆａ）、３５．１ｔ　）、
１８．６（（１）、１３．９（ｑ） ■　溶解性 クロロホルム、アセトン、メタノールに可溶。60.7(t), 49.3fa), 35.1t),
18.6 ((1), 13.9 (q) ■ Solubility Soluble in chloroform, acetone, and methanol.

ｎ−へキサンに不沼。Nonuma to n-hexane.

■　塩基性、酸性、中性の区別 中性 ［相］　物質の色及び性状 無色　油状 ■　呈色反応 バニリン−硫酸で黄色を呈する。■ Distinction between basic, acidic, and neutral neutral [Phase] Color and properties of the substance colorless oily ■ Color reaction Vanillin - gives a yellow color with sulfuric acid.

■　薄層クロマトグラフィー 担体ニジリカゲルプレー”　２５４　’ノル２社製）上
記の理化学的性質から、ＳＳ７３１３Ａは、次式 で示される新規化合物であり、その化学名は、（６Ｅ、
８Ｚ）１．３−ジヒドロキシ−４−メチル−６，８−デ
カジエン−５−オンである。■ Thin layer chromatography carrier Nijiri Gel Play" 254 'manufactured by Nor 2) Based on the above physical and chemical properties, SS7313A is a new compound represented by the following formula, and its chemical name is (6E,
8Z) 1,3-dihydroxy-4-methyl-6,8-decadien-5-one.

また、本発明の５８７３１３Ａは次のような生物学的性
質を有する。Furthermore, 587313A of the present invention has the following biological properties.

■　マクロファージの貴食能抑制作用 ＳＳ７３１３Ａのマウス腹腔内マクロファージの寅食能
に対する抑制効果を下記方法により試験した。結果を第
１表に示す。なお、表中の抑制率は、ＳＳ７３１３Ａ無
投与群の責食能（Ｃ）及び投与群の賓食能（Ｔ）から、
次式により求めた百分率を以って表わした。(2) Inhibitory effect on the phagocytic ability of macrophages The inhibitory effect of SS7313A on the phagocytic ability of mouse intraperitoneal macrophages was tested by the following method. The results are shown in Table 1. The inhibition rate in the table is calculated from the phagocytic ability (C) of the SS7313A non-administered group and the phagocytic ability (T) of the administered group.
It was expressed as a percentage determined by the following formula.

貫食能抑制率Ｃ％）＝（１−Ｃ−）ｘｔｏ。Eating ability inhibition rate C%) = (1-C-)xto.

実験方法： ＣＤＦＩ　　マウスに２ｄのチオグリコレート培地を腹
腔内に注射して、腹腔内マクロファージの遊出を惹起し
、３日後ｏ、４ｗｑ／Ｋｑ−＋ｏｏｍｙ／初のＳＳ７３
１３Ａを腹腔内に投与した。１５時開俵ダルベツコリン
酸緩衝液で各群の腹腔内マクロファージを採取し、それ
をプラスチックシャーレに５×１０個／ゴ分注し、酵母
（ｌａｃｃｈａｒｏｒｎｙｃｅｓ　ｃｅｒｖｉｓｉａｅ
　）の菌液を加えた。Experimental method: CDFI mice were intraperitoneally injected with 2d thioglycollate medium to induce intraperitoneal macrophage migration, and 3 days later, 4wq/Kq-+oomy/first SS73
13A was administered intraperitoneally. At 3:00 p.m., the intraperitoneal macrophages of each group were collected using Dulbets choline buffer, and 5 x 10 macrophages were dispensed into a plastic petri dish.
) was added.

４５分培養した後洗浄し、ギムザ染色を施し顕微鏡下、
酵母を賓食しているマクロファージの細胞数を算定し、
食食能とした。After incubating for 45 minutes, the cells were washed, stained with Giemsa, and examined under a microscope.
Calculate the number of macrophage cells that are phagocytosing yeast,
It was considered as edible ability.

第１表 ■　マクロファージのスーパーオキサイド産生の抑制作
用 ＳＳ７３１３Ａのマウス腹腔内マクロファージのスーパ
ーオキサイド産生の抑制効果を下記方法により試験した
。結果を第２表に示す。なお表中の抑制率は、ＳＳ７３
１３Ａ無処理群口及び処理群（Ｔ）のスーパーオキサイ
ド産生量から次式により求めた百分率を以って表わした
。Table 1: Inhibitory effect on superoxide production by macrophages The inhibitory effect of SS7313A on superoxide production by mouse intraperitoneal macrophages was tested by the following method. The results are shown in Table 2. The suppression rate in the table is SS73
It was expressed as a percentage determined from the superoxide production amounts of the 13A untreated group and the treated group (T) using the following formula.

スーパーオキサイド産生の抑制率（％）＝（１−ｃ−）
Ｘ１００実験方法： ＣＤＦ、　マウスに２−のチオグリコレート培地を腹腔
内に注射して腹腔内マクロファージの遊出を惹起し、４
日後ダルベツコリン酸緩衝液で、腹腔内マクロファージ
を採取した。マクロファージ５　Ｘ　１０５個／　ｍｅ
に対し、ＳＳ７３１３Ａを０、１μ２／−〜１００μｙ
／ｍｔの終濃度になるよう添加し、５％炭酸ガス培養器
中で、３７℃、２．５時間培養後、６５μＭのチトクロ
ームＣを添加し、再び８分間培養する。次いでサイトカ
ラシンＢを４０μ？加えた後コンカナバリンＡを２００
μ？添加し、最終反応液量を２．０　ａｔとした。マク
ロファージから産生されるスーパーオキサイドによるチ
トクロームＣの還元をダブルビーム比色計を用い測定し
、スーパーオキサイドの産生量を算定した。Suppression rate of superoxide production (%) = (1-c-)
X100 experimental method: CDF, mice were intraperitoneally injected with 2-thioglycollate medium to induce intraperitoneal macrophage migration,
Days later, intraperitoneal macrophages were collected with Dulbets choline buffer. Macrophages 5 x 105/me
In contrast, SS7313A is 0, 1μ2/-~100μy
/mt, and after culturing in a 5% carbon dioxide incubator at 37°C for 2.5 hours, 65 μM cytochrome C was added and cultured again for 8 minutes. Next, cytochalasin B was added at 40μ? After adding concanavalin A 200
μ? was added to make the final reaction liquid volume 2.0 at. The reduction of cytochrome C by superoxide produced from macrophages was measured using a double beam colorimeter, and the amount of superoxide produced was calculated.

第２表 ■　抗体産生の抑制作用 ＳＳ７３１３Ａのマウス牌細胞培養による羊赤血球に対
する抗体産生の抑制効果を下記方法により試験した。結
果を第３表に示す。なお、表中の抑制率はＳＳ７３１３
Ａ無処理群（Ｃ）及び処理群（Ｔ）の抗体産生細胞数か
ら次式によシ求めた百分率を以って表わした。Table 2 (1) Inhibitory effect on antibody production The inhibitory effect of SS7313A on antibody production against sheep red blood cells in mouse tile cell culture was tested by the following method. The results are shown in Table 3. In addition, the suppression rate in the table is SS7313
A was expressed as a percentage determined from the number of antibody-producing cells in the untreated group (C) and the treated group (T) using the following formula.

Ｔ 抗体産生抑制率（％）＝（１−、−）Ｘ１００実験方法
： 培養マウス牌細胞１．５　Ｘ　１０　個に、ＳＳ７３１
３Ａを０，０１μｔ　／　ａｔ〜１０μ２／−の終濃度
になるよう添加し、１．５　Ｘ　１０’個の羊赤血球と
ともに５％炭酸ガス培養器中で３７℃で培養し、４日後
、各培養層細胞中の抗体産生細胞数を算定した。T Antibody production inhibition rate (%) = (1-,-)X100 Experimental method: 1.5 x 10 cultured mouse tile cells were injected with SS731.
3A was added to a final concentration of 0.01 µt/at to 10 µ2/- and cultured with 1.5 x 10' sheep red blood cells in a 5% carbon dioxide incubator at 37°C. After 4 days, each culture The number of antibody-producing cells in the layer cells was calculated.

第３表 ■　急性毒性 ＳＳ７３１３Ａの急性毒性（マウス、腹腔内投与）は、
４０（ＩＦ７に９投与で死亡例が見られず、ｔ、ｎｓｏ
値は、４００　Ｗ／Ｋｆ以上であった。Table 3 ■ Acute toxicity The acute toxicity of SS7313A (mouse, intraperitoneal administration) is as follows:
40 (no deaths were observed after 9 administrations to IF7, t, nso
The value was 400 W/Kf or more.

ＳＳ７３１３Ａは、上記の生物学的性質から明らかな如
く、医薬品、特に慢性関節リウマチ、全身性エリテマト
ーデスなどの自己免疫疾患を予防あるいは治療するため
の免疫調節剤として使用できる。As is clear from the above-mentioned biological properties, SS7313A can be used as a pharmaceutical, especially an immunomodulator for preventing or treating autoimmune diseases such as rheumatoid arthritis and systemic lupus erythematosus.

ＳＳ７３１３Ａをヒトに投与するにあたっては、それ自
体おるいは適宜の薬理的に許容される担体、賦形剤、希
釈剤と混合し、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、シロ
ップ剤、注射剤などの剤型で経口的、または非経口的に
投与することができる。When administering SS7313A to humans, it can be administered by itself or mixed with appropriate pharmacologically acceptable carriers, excipients, and diluents, such as powders, granules, tablets, capsules, syrups, injections, etc. It can be administered orally or parenterally in the following dosage form.

投与量は、対象疾患、症状、投与対象、投与方法によっ
て異なるが、通常、成人において１日約１０〜１０００
１９を１〜数回に分けて投与される。The dosage varies depending on the target disease, symptoms, subject, and method of administration, but is usually about 10 to 1,000 doses per day for adults.
19 is administered in one to several divided doses.

ＳＳ７３１３Ａの製剤化は、公知の方法によってなし得
る。すなわち、ＳＳ７３１３Ａを、デンプン、乳糖、マ
ンニトール等の賦型剤；β−サイクロデキストリン等の
包接化剤：カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒ
ドロキシプロピルセルロース等の結合剤；結晶セルロー
ス、カルボキシメチルセルロースカルシウム等の崩壊剤
；タルク、ステアリン酸マグネシウム等の滑沢剤；軽質
無水ケイ酸等の流動性向上剤等を適宜組み合せて処方す
ることによシ、散剤、顆粒剤、錠剤又はカプセル剤を製
造することができる。また、非経口製剤、例えば注射剤
を製造するには、ＳＳ７３１３Ａを例えば、ツイーン６
０、ポリソルベート８０等の非イオン界面活性剤を用い
て、水、生理食塩水等に溶解させ、注射剤として製造す
ることができる。SS7313A can be formulated by known methods. That is, SS7313A is combined with excipients such as starch, lactose, and mannitol; inclusion agents such as β-cyclodextrin; binders such as sodium carboxymethyl cellulose and hydroxypropyl cellulose; disintegrants such as crystalline cellulose and calcium carboxymethyl cellulose; Powders, granules, tablets, or capsules can be produced by appropriately combining lubricants such as talc and magnesium stearate; fluidity improvers such as light anhydrous silicic acid, and the like. In addition, to produce parenteral preparations, such as injections, SS7313A may be used, for example, with Tween 6.
It can be prepared as an injection by dissolving it in water, physiological saline, etc. using a nonionic surfactant such as 0.0 or polysorbate 80.

〔発明の効果〕〔Effect of the invention〕

本発明のＳＳ７３１３Ａは、免疫系の異常に重要な役割
を果すマクロファージの賞食能、スーパーオキサイド産
生能を抑制し、更に抗体産生をも抑制し、安全性も高い
ことから免疫調節剤として有用である。SS7313A of the present invention suppresses the phagocytic ability and superoxide production ability of macrophages, which play an important role in immune system abnormalities, as well as suppresses antibody production, and is highly safe, making it useful as an immunomodulator. be.

また、ＳＳ７３１３Ａを含有する免疫調節剤は、慢性関
節リウマチ、全身性エリテマトーデス等の自己免疫疾患
を予防あるいは治療用として有用である。Furthermore, immunomodulators containing SS7313A are useful for preventing or treating autoimmune diseases such as rheumatoid arthritis and systemic lupus erythematosus.

〔実施例〕〔Example〕

次に、実施例を挙げ、本発明を更に具体的に説明する。 Next, the present invention will be explained in more detail with reference to Examples.

実施例ｌ ＳＳ７３１３Ａの生産菌ストレプトミセス・カポウレン
シス８７３１３（微工研菌寄第７３５７号）を、グリセ
リン１．５％、綿実粕１．５％、塩化ナトリウム０．３
％、Ｌ−アスパラギン０．２％（ｐＨ７，０）の液体培
地に接種し、２８℃で２日間振盪　−培養して、種培養
液を調製した。次いで、グリセリン１．５％、グルコー
ス１％、綿実粕１．５％、塩化ナトリウム０．３％、Ｌ
−アスパラギン０．２％、　　　□炭酸カルシウム０．
３％（ｐ）（７，０）の液体培地１６ｔを、３０を容の
ジャーファーメンタ−中に仕込み、この培地中に前記の
種培養液２００　ｍｌを接種し、通気量１６ｔ／分、攪
拌数４　Ｑ　Ｑ　ｒ、ｐ、ｍ、培養温度２８℃の条件下
で５日間培養した。培養終了後、培養液を遠心分離し、
得られたＦ液（１３Ｌ）に７を容の酢酸エチルを加え、
３回抽出した。Example 1 SS7313A producing strain Streptomyces capourensis 87313 (Feikoken Bibori No. 7357) was mixed with 1.5% glycerin, 1.5% cottonseed meal, and 0.3% sodium chloride.
%, L-asparagine 0.2% (pH 7.0) and cultured with shaking at 28° C. for 2 days to prepare a seed culture. Next, 1.5% glycerin, 1% glucose, 1.5% cottonseed meal, 0.3% sodium chloride, L
-Asparagine 0.2%, □Calcium carbonate 0.
16 t of 3% (p) (7,0) liquid medium was placed in a 30 ml jar fermenter, 200 ml of the above seed culture was inoculated into this medium, and the aeration rate was 16 t/min with stirring. The cells were cultured for 5 days under conditions of number 4 Q Q r, p, m and a culture temperature of 28°C. After culturing, centrifuge the culture solution and
Add 7 volumes of ethyl acetate to the obtained solution F (13 L),
Extracted three times.

この抽出液を減圧濃縮し、得られた油状残渣に少量のク
ロロホルムを加え、不溶物を除去した後シリカゲルカラ
ムクロマトグラフィーに供した。あらかじめクロロホル
ムで充填したキーゼルゲル６０（メルク社製）のカラム
（直径４　ｃｍ　：長さ３０ｍ）に前記のクロロホルム
溶液を通導し、クロロホルムで溶出した。溶出画分のう
ち、５８７３１３Ａの含まれる両分を集め、減圧濃縮し
、粗ＳＳ７３１３Ａの淡黄色の油状物質２．８ｆを得た
。次いでこの油状物質を、酢酸エチルのシリカゲルカラ
ムに供した。あらかじめ酢酸エチルで充填したキーセル
ゲル６００カラム（直径３　ｃｍ　：長さ５０　ｃｍ　
）　Ｋ　＃Ａ　Ｓ　Ｓ　７３１３　Ａの酢酸エチル哨戒
を通導し、酢酸エチルで両川した。溶出画分のうち、Ｓ
Ｓ７３１３Ａの含まれる両分を集め、これを減圧濃縮し
、ＳＳ７３１３Ａの無色油状物質２．１２を得た。This extract was concentrated under reduced pressure, and a small amount of chloroform was added to the obtained oily residue to remove insoluble materials, and then subjected to silica gel column chromatography. The above chloroform solution was passed through a column (diameter 4 cm, length 30 m) of Kieselgel 60 (manufactured by Merck & Co., Ltd.) filled with chloroform in advance, and eluted with chloroform. Of the eluted fractions, both fractions containing 587313A were collected and concentrated under reduced pressure to obtain 2.8 f of a pale yellow oily substance of crude SS7313A. This oil was then applied to an ethyl acetate silica gel column. Kieselgel 600 column (diameter 3 cm: length 50 cm) prefilled with ethyl acetate
) K #A SS 7313 A's ethyl acetate patrol was conducted and both rivers were flushed with ethyl acetate. Among the eluted fractions, S
Both fractions containing S7313A were collected and concentrated under reduced pressure to obtain 2.12 of SS7313A as a colorless oil.

実施例２ 錠剤 下記の成分を常法（湿式法）に従って打錠し、１錠当り
１７５＋＋ｖの錠剤を製造した。Example 2 Tablet The following ingredients were compressed into tablets according to a conventional method (wet method) to produce tablets with a weight of 175++v per tablet.

ＳＳ７３１３Ａ　　　　　　　　　　　５０（重量部）
軽質無水ケイ酸　　　　　　　　４０ 乳糖　　　　　　　　　　　　　４８ カルボキシメチルセルロースカルシウム　２５ヒドロキ
シプロピルセルロース　７．５タルク　　　　　　　　
　　　　　４ ステアリン酸マグネシウム　　　０．５計　１７５（重
量部） 実施例３ カプセル剤 下記の成分を常法に従って散剤とした後、３号カプセル
に充填し、１カプセル当り２００■のカプセル剤を製造
した。SS7313A 50 (parts by weight)
Light silicic anhydride 40 Lactose 48 Carboxymethyl cellulose calcium 25 Hydroxypropyl cellulose 7.5 Talc
4 Magnesium stearate 0.5 total 175 (parts by weight) Example 3 Capsule The following ingredients were made into a powder according to a conventional method and filled into No. 3 capsules to produce 200 square capsules per capsule.

ＳＳ７３１３Ａ　　　　　　　　　　５０　　（重量部
）軽質無水ケイ酸　　　　　　　４０ バレイシヨデンプン　　　　　５７．５乳糖　　　　　
　　　　　　　５０ タルク　　　　　　　　　　　　２．５計２００　（ｉ
ｉｔ部） 実施例４ 顆粒剤 下記の成分を常法に従い押し出し造粒機にて、顆粒とな
し、１包当り１０１００Ｏの顆粒剤を製造した。SS7313A 50 (parts by weight) Light silicic anhydride 40 Potato starch 57.5 Lactose
50 Talc 2.5 total 200 (i
IT part) Example 4 Granules The following ingredients were made into granules using an extrusion granulator according to a conventional method to produce granules of 10,100 O per package.

Ｓ　Ｓ　７３１３　Ａ　　　　　　　　　　１００←重
を部）軽質無水ケイ酸　　　　　　　　８０ 結晶セルロース　　　　　　　２００ 乳糖　　　　　　　　　　　　６０５ ヒドロキシプロピルセルロース　　　１５計　１０００
（重量部） 実施例５ 注射剤 下記の成分で、ＳＳ７３１３Ａを可溶化し、注射剤を製
造した。S S 7313 A 100← parts by weight) Light silicic anhydride 80 Crystalline cellulose 200 Lactose 605 Hydroxypropyl cellulose 15 total 1000
(Parts by weight) Example 5 Injection SS7313A was solubilized with the following ingredients to produce an injection.

ＳＳ７３１３Ａ　　　　　　　　１００ｔｌｉボリンル
ベート８０　　　　　６００■プロピレングリコール　
　　　５００■ブドウ糖　　　　　　　　　　　２００
η注射用蒸留水にて、全量を５−とする。SS7313A 100tli borine rubate 80 600 ■ Propylene glycol
500 ■Glucose 200
η Adjust the total amount to 5- with distilled water for injection.

【図面の簡単な説明】[Brief explanation of drawings]

第１図は免疫調節物質ＳＳ７３１３Ａの紫外線吸収スペ
クトル、第２図は同、赤外線吸収スペクトル、第３図は
同’Ｈ−ＮＭＲスペクトルをそれぞれ示す図面である。 以上Figure 1 shows the ultraviolet absorption spectrum of the immunomodulator SS7313A, Figure 2 shows its infrared absorption spectrum, and Figure 3 shows its 'H-NMR spectrum. that's all

Claims (1)

【特許請求の範囲】 １、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表わされる化合物ＳＳ７３１３Ａ。 ２、ストレプトミセス属に属するＳＳ７３１３Ａ生産菌
を培養し、その培養物からＳＳ７３１３Ａを採取するこ
とを特徴とするＳＳ７３１３Ａの製造法。 ３、ＳＳ７３１３Ａ生産菌がストレプトミセス・カボウ
レンシスＳ７３１３（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｃａ
ｖｏｕｒｅｎｓｉｓＳ７３１３）株である特許請求の範
囲第２項記載の製造法。 ４、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表わされる化合物ＳＳ７３１３Ａを含有する免疫調節
剤。[Claims] 1. Compound SS7313A represented by the formula ▲ Numerical formulas, chemical formulas, tables, etc. are available. 2. A method for producing SS7313A, which comprises culturing SS7313A-producing bacteria belonging to the genus Streptomyces and collecting SS7313A from the culture. 3. The SS7313A producing bacterium is Streptomyces cabourensis S7313 (Streptomyces ca
vourensis S7313) strain according to claim 2. 4. An immunomodulator containing the compound SS7313A represented by the formula ▲There are mathematical formulas, chemical formulas, tables, etc.▼.