JPS6225978A - Production of amylase g4 - Google Patents

Abstract

PURPOSE:To obtain industrially and advantageously the titled compound useful as a substrate for a food extender, measuring activity of diagnostic amylase, etc., by cultivating a microorganism, belonging to the genus Bacillus and capable of producing amylase G4 and collecting the resultant product from the culture. CONSTITUTION:A microorganism, belonging to the genus Bacillum and capable of producing amylase G4, e.g. Bacillus circulans G4 (FERM-P No.820), is inoculated into a nutrient culture medium sterilized at 120 deg.C for 10min and cultivated at 30 deg.C for 4 days by shaking. After the cultivation, the culture is centrifuged to give a supernatant liquid, and the resultant product is then collected therefrom to give the aimed amylase G4, which is added to saccharify starch, amylopectin, glycogen, etc., liquefied with an acid and afford maltotetraose.

Description

【発明の詳細な説明】 〔技術分野〕 ｔ１５）をグルご１−スあるいはマルトースに分解する
グルコアミラーゼ。[Detailed Description of the Invention] [Technical Field] Glucoamylase that decomposes t15) into glucose or maltose.

β−アミラーゼやα−アミラーゼは自然界に広く存在す
ることが知られているが、より分子量の大きい、例えば
、マルトトリオース（Ｇ３）。It is known that β-amylase and α-amylase exist widely in nature, but those with larger molecular weights, such as maltotriose (G3).

マルトテトラオース（Ｇ４）、マルトペンタオース（Ｇ
５）マルトヘキサオース（Ｇ６）などのオリゴ糖単位で
切断するアミラーゼについての報告は少ない。Maltotetraose (G4), Maltopentaose (G
5) There are few reports on amylases that cleave at oligosaccharide units such as maltohexaose (G6).

これらオリが糖は、食品の増量剤、賦形剤あるいは１↑
味調整剤として注目されている。特に、０４〜Ｇ７の各
オリゴ糖は、診断用アミラーゼの活性測定用基質として
も注目されている。These sugars are food fillers, excipients, or 1↑
It is attracting attention as a taste adjuster. In particular, each oligosaccharide 04 to G7 is attracting attention as a substrate for measuring the activity of diagnostic amylase.

〔目的及び効果） 本発明者は、これらオリゴ抛の製法を確立することを目
的とと７で、広く自然界より微生物の検索を行ってきた
結果、アミｌ−１−ス、アミロペクチン、澱粉などのα
−グルカンを特異的にフル１テトラオース（Ｇ４）トモ
ナス　ス・ンツエリ　（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　　５
ｔｕｚｅｒｉ）の生産するアミラーゼが、アミロースや
アミロペクチンの非還元性末端からマルトトリオー しかし、この酵素はアミロペクチンやグＩＪ　：Ｉ−リ
ーンからは高分７−１のりミントデキストリンを残すと
報告されている。〔アーカイブ　バイオケミス１−リ　
　アン１　ハイオフィジクス（ＡｒｃｈｉＶｅＢｉｏｃ
ｈｅｍｉｓｔｒｙ　　ａｎｄ　　Ｆｌ＋ｏｐｌ＋ｙｓｉ
ｃｓ）１４５巻１０５頁（１９７１））。そして、この
酵素による澱粉からのマルトテトラオースの収量は約５
５％−アミロペクチンからの収量は５２％、と報告され
ている〔アメリカ合衆国特許ＩＪＳＰ３．６５４．０８
２．　　（１９７２）、アミラーゼ　シンポジウム、６
巻、３１＠（１９７１））。[Purpose and effect] With the aim of establishing a method for producing these oligosaccharides, the present inventor has extensively searched for microorganisms in the natural world, and as a result, has found that amyl-1-se, amylopectin, starch, etc. α
- specific glucan full 1 tetraose (G4) Pseudomonas ntseri (Pseudomonas 5
It has been reported that amylase produced by A. tuzeri converts maltotriole from the non-reducing end of amylose and amylopectin, but leaves a high-7-1 paste mint dextrin from amylopectin and glycan. [Archive Biochemis 1-Re
Anne 1 High Physics (ArchiVeBioc
hemistry and Fl+opl+ysi
cs) Vol. 145, p. 105 (1971)). The yield of maltotetraose from starch by this enzyme is approximately 5
The yield from 5%-amylopectin is reported to be 52% [US Patent IJSP 3.654.08]
2. (1972), Amylase Symposium, 6
Volume, 31 @ (1971)).

しかるに、本発明のバシルス属細菌の生産するアミラー
ゼは、澱粉から約６５％〜７５％の極めて高い収量でマ
ルトテトラオースを生成することが認められた。マルト
テトラオースの収電は、使用する澱粉の種類、液化度（
ＤＦ’：）、酵素量などにより影響されるが、ｊｍ常、
グルコース１〜５％、”ンルトース５〜１５％ 第１表 マル］・トリオース５〜１５％、マルトテトラオース６
５〜７５％、マル１、ペンタオース１〜５％、その他の
糖類１〜１５％テアル。However, the amylase produced by the Bacillus bacterium of the present invention was found to produce maltotetraose from starch at an extremely high yield of about 65% to 75%. The electric charge of maltotetraose depends on the type of starch used and the degree of liquefaction (
DF':), although it is affected by the amount of enzyme etc.,
Glucose 1-5%, ``Lutose 5-15% Table 1] Triose 5-15%, Maltotetraose 6
5-75%, mal 1, pentaose 1-5%, other sugars 1-15% theal.

たとえば、ＤＥ４２％のポテトスターチを使用したとき
の糖組成は第１表に示すｉｆ！ｌりである。For example, when using potato starch with a DE of 42%, the sugar composition is shown in Table 1 if! It's lil.

表から明らかなように、本発明の酵素は、＃粉に作用さ
一１！たとき、１′、Ｊｉ分子り士のリミノトデキス１
リンを殆ど残すことなく、澱わ）からフル１テトラオー
スを極めて高い収量で生成する。As is clear from the table, the enzyme of the present invention acts on #1 powder! When, 1', Ji Molecule Liminotodex 1
Produces full 1-tetraose in extremely high yields from lees, leaving almost no phosphorus behind.

これは、本発明の酵素がシュー１モナス　スウッ１りの
酵素と（１１−１２，Ｌ質性異性において著しく異なっ
た酵素ということができる。この他、本発明の酵素はシ
ュードモナス　スツツエリの酵素に比べ、最適作用ｐＨ
〔構　成〕 本発明ｔ、ｌ、バシルス属に属し、アミラーゼに４を生
成する微生物を１７１゜養し、培養物からアミラ　ゼＧ
４を採取ずイ１、ことを、特徴とするバシルス属アミラ
−１！Ｇ４の製造方法に関するものである。This means that the enzyme of the present invention is significantly different from the enzyme of Pseudomonas suiichii (11-12, L-isomerism). , optimal working pH
[Constitution] In the present invention, microorganisms belonging to the genus Bacillus and producing amylase 4 are cultivated at 171°C, and amylase G is extracted from the culture.
Bacillus Amyra, which is characterized by 1, without collecting 4! This relates to a method for manufacturing G4.

以下に、本発明の内容を、更に具体的に説明する。The contents of the present invention will be explained in more detail below.

本発明により／Ｖ産される酵素は、Ｆ記の酵素的性質を
４１する。The enzyme produced by the present invention exhibits the enzymatic properties listed in F.

＋１１　　作用；アミＩ」　ス、アミロペクチン、グリ
コーゲンなどのα−グルカンをマルトテトラオースを主
成分とする分解物に分解する。+11 Action: Decomposes α-glucans such as amyl, amylopectin, and glycogen into decomposition products whose main component is maltotetraose.

本酵素はエンド型の分解様式を持つα−アミラーゼの一
種であり、液化ｔｉ粉に作用させるとき約６５〜７５％
の収量でマルトテトラオースが得られる。This enzyme is a type of α-amylase that has an endo-type decomposition mode, and when it acts on liquefied Ti powder, approximately 65-75%
Maltotetraose is obtained with a yield of .

（２）作用温度範囲及びＨ連作用温度；１％可溶性澱粉
、０．０５Ｍリン酸緩衝液の下で作用させたとき約７５
℃まで作用し、最適作用温度は約５０℃である。（第１
図（ａ））。(2) Action temperature range and H-coupled action temperature: Approximately 75% when acting under 1% soluble starch and 0.05M phosphate buffer
℃, with an optimum working temperature of about 50℃. (1st
Figure (a)).

（３）作用ｐＨ範囲及び最適作用ｐＨ；約４〜約１２の
広い範囲に作用ず１　る。最適作用ｐ　Ｔ（は６〜８，
５である（０．０５Ｍ酢酸またはリン酸緩「　　□ １、＋衝′液、１％可溶性澱粉下で作用、第１図ｂ）。(3) Action pH range and optimum action pH: It works over a wide range of about 4 to about 12. Optimal action p T (is 6 to 8,
5 (worked under 0.05M acetic acid or phosphoric acid buffer solution, 1% soluble starch, Figure 1b).

、５０℃、１０分間の加熱で約４０％失活し、５５℃、
１０分間の加で約８５％失活した〔第１図（Ｃ）〕。, about 40% deactivated by heating at 50°C for 10 minutes, 55°C,
Approximately 85% of the activity was inactivated after 10 minutes [Figure 1 (C)].

（５１ｐＨ安定性；０．ＩＭ緩衝液の下で、室温（２５
℃）で３時間放置後、残存活性を測定した。その結果、
ｐ　Ｈ６〜９範囲で安定であった〔第１図（ｄ）〕。(51 pH stability; under 0.IM buffer at room temperature (25
℃) for 3 hours, residual activity was measured. the result,
It was stable in the pH range of 6 to 9 [Figure 1(d)].

（６）安定化；カルシウムイオンが存在するとき、熱安
定性の増加が認められた〔第１図（Ｃ）の破線〕。(6) Stabilization: When calcium ions were present, an increase in thermal stability was observed [dashed line in FIG. 1(C)].

（７）阻害側；本酵素は、５Ｘ１０−”ＭのＨｇＣ１，
、Ｃｕ５Ｏａ　、ＺｎＳＯ４、ＡｇＮ０＋により、それ
ぞれ、約１００％、約９５％、約５０％、約３０％阻害
された。(7) Inhibition side; this enzyme has 5×10-”M HgC1,
, Cu5Oa, ZnSO4, and AgN0+ inhibited it by about 100%, about 95%, about 50%, and about 30%, respectively.

（８）精製方法；本酵素は、液体培養物の遠心−１澄液
から、硫安分画、ｒ）ＥＡＥ−セファ１コース（Ｓｅｐ
ｈａｒｏｓｅ）カラム　り１．１７１グラフイーとバイ
オゲル（Ｂｉ　ｏｇｅ　Ｉ）Ａｏ、５ｒｎカラム　り「
１７１−グラフィー及び同ゲルによる再クロマトグラフ
ィーにより電気泳動的に均一まで精製することができる
。(8) Purification method: This enzyme is purified by ammonium sulfate fractionation from centrifugation-1 clear liquid culture, r) EAE-Sepha 1 course (Sep.
Harose) column 1.171 Graphie and Biogel (Bioge I) Ao, 5rn column
It can be electrophoretically purified to homogeneity by 171-graphy and rechromatography using the same gel.

ス　スツツエリのマルトテトラオース生成アミラーゼと
比較するとｆ１１最適作用ｐ　［−１は、本発明の酵素
はｐＨ６〜８．５の広いｐｌ＋範囲にあるのに対し、シ
ュードモナス　スツツエリの酵素はｐ　ｕ　８　（Ｊｊ
！Ｆにあること、（２）本発明の酵素を澱粉に作用させ
たとき、約６５〜７５％の収量でマルトテトラオースが
得られるのに対し、シュードモナス　ヌウツエリの酵素
の場合は約５５％であること、（３）本発明の酵素の分
子量は１万前後にあるのに対し、シュードモナス　スツ
ツエリの酵素は、４８．０００と５８，０００にある〔
パイオゲミヌトリ−アン１′　バイＡフィジクス　アク
タ（＋３ｉｏｃｈｅｍｉｓＬｒｙ　　ａｎｄｆ（ｉｏｐ
ｈｙｓｉｃｓ　　ＡＣｔａ）　５６６巻、　８８ｉ　（
１９７９）　）など、本発明の酵素とシｆ−１士ナス　
ス・ンツエリの酵素上は、ｒｊ粉からのマルトテトラオ
ースの収量、最適作用ｐｌ＋、分子〜１などのｌｐｌ質
において、顕著な違いのあるものであり、新規な酵素と
いうことができる。When compared with the maltotetraose-producing amylase of Pseudomonas stutzeri, the f11 optimal action p[-1 is found that the enzyme of the present invention has a wide pl+ range of pH 6 to 8.5, whereas the enzyme of Pseudomonas stutzeri has a p u 8 (Jj
! (2) When the enzyme of the present invention is applied to starch, maltotetraose is obtained with a yield of approximately 65 to 75%, whereas in the case of the Pseudomonas noutzeri enzyme, the yield is approximately 55%. (3) The enzyme of the present invention has a molecular weight of around 10,000, whereas the enzyme of Pseudomonas stutzeri has a molecular weight of 48,000 and 58,000.
Piochemis Lry andf(iop
hysics ACta) Volume 566, 88i (
1979) ), etc., and the enzyme of the present invention.
The enzymes of Su.

本発明の酵素を生産する例示菌として、バチルス　サー
キュランス：　　（ｒ３ａｃｉｌｌｕｓ　　ｃｉｒｃｕ
ｌａｎｓ）Ｇ−４を挙げる。本閑の閘門 ″甲的性質は下記に示す通りであり、微−「研条寄第８
２０号としてＴ果枝、’！ｒ院倣ノ［物Ｔ果枝術研究所
に寄託されている。As an exemplary bacterium that produces the enzyme of the present invention, Bacillus circulans:
lans) G-4. The characteristics of Honkan's lock gate "A" are as shown below.
T Kae as No. 20,'! Rin Imitation No. [Deposited at the Monotaka Branch Jutsu Research Institute.]

・；、＋（１）形態；桿菌、巾０．５〜１×５〜６ｉｔ
、運動（４なし、ダラム陰性。・;, + (1) Form; Bacillus, width 0.5-1 x 5-6 it
, exercise (4 none, Durham negative.

“、１．ｉ ｆ、：Ｉ　２　＞１了　ＩｆＩ中　未菊近くに１個　胞
了嚢θ真くりみは・″めりわムし釦肉汁；混濁、沈降す
る。", 1. if, : I 2 > 1 If in IfI, 1 near Mikiku. The sac θ Makurimi is..." Meat juice; turbid and sediments.

（４）肉１１寒天；住育良好、淡黄〜淡褐色、周辺及び
表面凹凸あり。(4) Meat 11 Agar: Good growth, light yellow to light brown, with unevenness on the periphery and surface.

（５）グルコース肉汁寒天；生育良好、淡黄〜淡褐色。(5) Glucose juice agar; good growth, light yellow to light brown.

（６）グルコース硝酸寒天；生育悪い。(6) Glucose nitrate agar; poor growth.

（７）ポテト；生育良好、乳白色に生育。(7) Potato: Good growth, milky white.

（８）グル：ノース・アスパラギン寒天；生Ｉあまり良
くない。淡黄〜黄褐色。(8) Glue: North asparagine agar; Fresh I is not very good. Pale yellow to yellowish brown.

（９）チロシン寒天；良く生育する、わずかに褐色。(9) Tyrosine agar; grows well, slightly brown.

（１０）ミルク；ゆっくり凝固、ペプトン化。(10) Milk; slow coagulation, peptonization.

（ＩＩ）　−インｌ　ル；生成しない。(II) -Inl; not produced.

（１２）カタラーゼ；生成する。(12) Catalase; produced.

（１３）アセチルメチルカルビノール°；４１ミ成しな
い。(13) Acetyl methyl carbinol °; 41 min does not form.

（１４）硫化水素；生成しない。(14) Hydrogen sulfide: Not generated.

（１５）クエン酸；利用する。(15) Citric acid: Use.

（１６）硝酸塩の還元；陰性。(16) Nitrate reduction; negative.

（１９）炭水化物の利用；Ｄ−グルコース、Ｄ−フラク
トース、Ｄ−マンノース、Ｌ−アラビノース、Ｄ−リホ
−ス、マルＩ・−ス、シューり［１−ス、澱粉などから
酸を生成するが、ガスの生成はない。(19) Utilization of carbohydrates; acids are produced from D-glucose, D-fructose, D-mannose, L-arabinose, D-rehose, mal-I-su, sucrose, starch, etc. , no gas production.

１）−−キシロース、■、−ラムノース、　　Ｉ−ソル
ボースの利用性は良くない。1) The availability of xylose, -rhamnose, and I-sorbose is not good.

（２０）最適キ育温度；２６℃前後。(20) Optimal growth temperature: around 26°C.

（２１）最高生育温度；約６０℃ （２２）死滅温度；１００℃で３０分間加熱しても死滅
しない。(21) Maximum growth temperature: about 60°C (22) Death temperature: Will not die even if heated at 100°C for 30 minutes.

１ソ１−の菌学的性質について、ハージエイス　マニュ
アル　オブ　デタミネーティブ　ハクテリオロジー（Ｂ
ｅｒｇｅｙ“　ｓ　　Ｍａｎｎｕａｌｏｆ　　ｎｅｔｅ
ｒｍｔｎａｔｉｖｅ　　Ｂａｃｔａｎｊｏｌｏｇｙ）の
第７版及び第８版〔ザ　カイリアムス　アンド　ゥ・イ
ルギンス　カンパニー（Ｔｈａ　　Ｗｉｌｌｉａｍｓ　
　ａｎｄ　　ＷｉｌｋｉｎｓＣｏｍｐａｎｙ）、（１９
５７年及び１９７４年）を参照し、本菌をバチルス　ザ
ー半ユランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　　ｃｉｒｃｕｌａｎ
ｓ）の一種と同定し、バチルス　サーキュランスＧ−４
と命名した。Regarding the mycological properties of
ergey's Manual of nete
rmtnative Bactanjology) 7th and 8th editions [The Kailiams and Illgins Company (Tha Williams
and Wilkins Company), (19
1957 and 1974), and this bacterium was classified as Bacillus circulans (Bacillus circulans).
It was identified as a type of Bacillus circulans G-4.
It was named.

本発明によるアミラーゼＧ４を生産するための培養は、
窒素源として肉エキス、ペブ］ン、酵母エキス、カビイ
ン、コーン・ステイープ・リカー、大豆粕など、ｉｌｌ
常、微生物の培養に月し良く用いられる有機窒素、に び朱養源として、無機窒素源、リン酸塩、マグネシウム
塩と各種金属塩を斗む培地が使用される。培養はｐＨ５
〜９、温度２０〜６０°Ｃで好気釣行われる。The culture for producing amylase G4 according to the present invention includes:
Nitrogen sources include meat extract, pebun, yeast extract, kabiin, corn steep liquor, soybean meal, etc.
Usually, a medium containing inorganic nitrogen sources, phosphates, magnesium salts, and various metal salts is used as an organic nitrogen source, which is often used for culturing microorganisms. Culture at pH 5
~9. Aerobic fishing is carried out at temperatures of 20 to 60°C.

アミラーゼＧ４は、菌体外に生産される酵素であるので
、培養終了後、濾過または遠心分離により除菌し、−上
澄液を回収する。必要により濃縮し、硫安、硫酸ナトリ
ウムによる塩析によるか、または、アセトン、イソプロ
パツール、エタノール、メタノールなどの有機溶媒を加
えて、酵素を沈澱物として収得し、乾燥、保存する。Since amylase G4 is an enzyme produced outside the bacterial cells, after completion of the culture, bacteria are removed by filtration or centrifugation, and the supernatant is collected. If necessary, the enzyme is concentrated and salted out with ammonium sulfate or sodium sulfate, or an organic solvent such as acetone, isopropanol, ethanol, methanol, etc. is added to obtain the enzyme as a precipitate, which is then dried and stored.

アミラーゼＧ４を用いて、澱粉を糖化する反応は次のよ
うにして行う。The reaction of saccharifying starch using amylase G4 is carried out as follows.

澱粉は、酸または、α−アミラーゼにより液化される。Starch is liquefied by acid or alpha-amylase.

液化度はマルトテトラオースの収量に影響するので、望
ましくはＤＢ２０以下の液化澱粉が使用される（Ｔ）Ｅ
は固形分中の還元力をグルコースとして表した百分率）
。基質濃度は、通常、５〜４０％で行われる。反応ｐｔ
ｒは、ｉｌｌｌｌ−９、温度は４０〜６０℃である。本
酵素は、カルシウムイオンの存在により、著しく熱安定
化されるので、糖化反応に際して、５ＸＩＯ−’〜２　
Ｘ　１０−２Ｍ程度のカルシウム塩が添加される。Since the degree of liquefaction affects the yield of maltotetraose, liquefied starch with a DB of 20 or less is preferably used (T)E
is the percentage of reducing power expressed as glucose in the solid content)
. The substrate concentration is usually 5-40%. reaction pt
r is illll-9, and the temperature is 40 to 60°C. This enzyme is significantly thermostabilized by the presence of calcium ions, so during the saccharification reaction, 5XIO-' to 2
Calcium salts of the order of X 10-2M are added.

ポリペプトン１％、リン＃Ｉ２カリ０．３％、硫酸マグ
ネシウム（７水塩）０．１％、可溶性澱粉１％からなる
培地３０ｍ１を２００ｍ１容三角フラスコに入れ、１２
０℃で１０分間殺菌したのち、バチルス・サーキュラン
スＧ４（倣工研条寄第８２０号）を接種し、３０℃で４
日間振盪培養（１６０ｒｐｍ）した。Pour 30 ml of a medium consisting of 1% polypeptone, 0.3% phosphorus #I2 potassium, 0.1% magnesium sulfate (heptahydrate), and 1% soluble starch into a 200 ml Erlenmeyer flask,
After sterilizing at 0°C for 10 minutes, Bacillus circulans G4 (Simikoken Joyori No. 820) was inoculated, and sterilized at 30°C for 4 minutes.
The cells were cultured with shaking (160 rpm) for days.

培養後、遠心分離して得た上澄液について生産されたア
ミラーゼＧ４を測定した結果、培地ｉｍｎ当たり６．４
単位であった。As a result of measuring amylase G4 produced in the supernatant obtained by centrifugation after culturing, it was found to be 6.4 per medium imn.
It was a unit.

実施例　２ 実施例１で得られた酵素液を使用して、澱粉の糖化を行
った。Example 2 Using the enzyme solution obtained in Example 1, starch was saccharified.

Ｗ質としζは、ＤＢ４．２の液化澱粉１００ｍｇ（固形
分）に、塩化カルシウム５ＸＩＯ−３ＭとアミラーゼＧ
４を第２表に記載の通り、基質１ｇ当たり０．５〜４単
位加え、全量１ｍｆｆとして、５０°Ｃで４４時間反応
した。反応後、生成したマルトテトラオースを、高速液
体クロマトグラフ法により定置した結果は第２表に示ず
ｊｆｆｉりであった。W quality ζ is 100 mg (solid content) of liquefied starch of DB4.2, calcium chloride 5XIO-3M and amylase G.
As shown in Table 2, 0.5 to 4 units of 4 were added per 1 g of substrate, the total amount was 1 mff, and the reaction was carried out at 50°C for 44 hours. After the reaction, the produced maltotetraose was subjected to high performance liquid chromatography, and the results were not shown in Table 2.

酵素量４ｕ／ｇ基質で、４４時間目における糖化物の糖
組成は、グルコース０．０％、マルトース４．６％、マ
ルトトリオース０．０％、マルトテトラオース７２．６
％、その他の１店２２．８％であった。With an enzyme amount of 4 u/g substrate, the sugar composition of the glycated product at 44 hours was 0.0% glucose, 4.6% maltose, 0.0% maltotriose, and 72.6% maltotetraose.
%, and 22.8% for one other store.

実施例３ 実施例２において、アミラーゼＧ４の他に、クレブシラ
（ＫｌｅＩ）ｓｉｅｌ！ａ）、属のプルラナーゼ（天野
製薬製）の共存下で反応を行った。得られた結果を第３
表に示す第３表 表から明らかなように、アミラーゼＧ４を用いて澱粉を
’ｔｔＭ化するに際し、プルラナーゼを共存させて反応
を行うと、糖化が促進され、マルトテトラオース含量の
高い糖化物が得られた。Example 3 In Example 2, in addition to amylase G4, Klebsiella (KleI) siel! a), the reaction was carried out in the presence of pullulanase of the genus (manufactured by Amano Pharmaceutical). The results obtained in the third
As is clear from Table 3, when amylase G4 is used to convert starch into 'ttM, when pullulanase is present in the reaction, saccharification is promoted and a saccharified product with a high maltotetraose content is produced. Obtained.

【図面の簡単な説明】[Brief explanation of the drawing]

第１図（ａ）、　　（ｂ）、　　（ｃ）と（ｄ）はそれ
ぞれ、アミラーゼＧ４の最適作用温度、最適作用ｐＨ１
熱安定性とｐＨ安定性を示す。 第２図は、高速液体クロマトグラフにより分離した糖化
物の糖組成を示す。１；グルコース、２；マルトース、
３；マルトトリオース、４；マルトテトラオース。 特許出願人　　　工業技術院長　　　等々力　　　達タ
λ皿 官庁出願 手続（甫正書（自発） 昭和６１年８月２２日 ｌ、事件の表示　　　昭和６０年特許願第　　１４３５
１９号２、発明の名称 アミラーゼＧ４の製造法 ３、補正をする者 ６、補正により増加する発明の数　　な　し７、補正の
対象　　明細書の１特許請求の範囲」及び［発明の詳細
な説別紙 １．特許請求の範囲を次の通り訂正する。 特許請求の範囲 「バシルス属に属し、アミラーゼＧ４を生産する微生物
を培養し、培養物からアミラーゼＧ４を易！することを
特徴とするパ」ソμ属アミラーゼＧ４の製造法。−ｊ ２、発明の詳細な説明を次の通り訂正する。 （１）明細書第１頁第１０行目の１バチルス」を「バシ
ルス」に訂正する。 （２）明細書筒３頁丁未より第２行目の「ＤＥ４２％」
をｒＤＥ４．２％」に訂正する。 （３）明細書第５頁第１４行目のｒ　ｐ　Ｈ６〜９」を
ｒ　ｐ　Ｈ６〜９の」に訂正する。Figure 1 (a), (b), (c) and (d) are the optimum action temperature and optimum action pH 1 of amylase G4, respectively.
Shows thermal stability and pH stability. FIG. 2 shows the sugar composition of glycated products separated by high performance liquid chromatography. 1; glucose, 2; maltose,
3; maltotriose; 4; maltotetraose. Patent Applicant: Director of the Agency of Industrial Science and Technology Tatsuta Todoroki Office Application Procedures (Hoshosho (spontaneous) August 22, 1985 l, Incident Indication: 1985 Patent Application No. 1435
No. 19 No. 2, Title of the invention Process for producing amylase G4 3, Person making the amendment 6, Number of inventions increased by the amendment None 7, Subject of the amendment 1. Claims in the description and [Detailed description of the invention] Attachment 1. The scope of claims is amended as follows. Claims: ``A method for producing amylase G4 of the genus Pasco, which comprises culturing a microorganism belonging to the genus Bacillus and producing amylase G4, and producing amylase G4 from the culture. -j 2. The detailed description of the invention is amended as follows. (1) "Bacillus 1" on page 1, line 10 of the specification is corrected to "Bacillus." (2) “DE42%” on the second line from page 3 of the statement cylinder
is corrected to ``rDE4.2%''. (3) "r p H6-9" on page 5, line 14 of the specification is corrected to "r p H6-9".

Claims (1)

【特許請求の範囲】[Claims] バシルス属に属し、アミラーゼＧ４を生産する微生物を
培養し、培養物からアミラーゼＧ４を採集することを特
徴とするバチルス属アミラーゼＧ４の製造法。A method for producing amylase G4 belonging to the genus Bacillus, which comprises culturing a microorganism that produces amylase G4 belonging to the genus Bacillus, and collecting amylase G4 from the culture.