JPS62201826A - 血小板凝集抑制剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は血小板凝集抑制剤に関し、詳しくはヒト組織型
プラスミノーゲン活性化因子を有効成分とする血小板凝
集抑制剤に関する。

〔従来の技術〕

最近、心筋梗塞、冠動脈血栓、肺塞栓症、胸部静脈血栓
症、末梢動脈閉塞症などの血管内に形成された血栓が原
因となっている疾患が増加しつつある。これらの病気を
ひきおこすと考えられる血栓の形成機序については、数
多くの研究があるが、動脈硬化、炎症、血流の変化など
の原因により生じた血管内膜の異常部位または損傷部位
に血小板が粘着、′＆Ｅ集することが最初の段階である
とされている（文献１〜５）。

すなわち、血小板の粘着、凝集を阻害もしくは抑制する
ことができれば、血栓を原因とする疾患を相当に予防で
きるようになるものと考えられる。

このため血小板の凝集を抑制する物質に関する研究、そ
の薬剤としての開発も盛んになされてｐｓる（文献６〜
８）。現在までに血小板凝集抑制作用があるとして研究
、報告されているものには、アデノシン、プロスタグラ
ンジンＥ１、プロスタグランジン■２、アスピリン、塩
化チクロピジンなどがあり、代表的には塩化チクロピジ
ン製剤がある。しかしながらこれらの既知の薬剤はそれ
ぞれ、化学的に不安定（プロスタグランジン■２；文献
９．１０）　、出血・肝機能障害等の副作用（塩化チク
ロピジン；文献１１）などの欠点があり臨床的に満足で
きるような血小板凝集抑制剤は得られていない。

〔発明が解決しようとする問題点〕

本発明の目的は、上述のような欠点のない血小板凝集抑
制剤を提供することにある。

〔問題点を解決するための手段〕

そこで本発明者らは、副作用が少なく安定な血小板凝集
抑制作用をもつ物質について鋭意研究をかさねた結果、
血栓溶解作用をもつヒト組織型プラスミノーゲン活性化
因子（以下ｔ−ＰＡと称す）が新規な薬理作用として血
小板凝集抑制作用をもつことを見いだし、本発明を完成
するに到った。

ｔ−ＰＡは、血栓の主要構成成分であるフィブリン（繊
維素）を分解する酵素プラスミンの不活性前駆体プラス
ミノーゲンを活性体であるプラスミンに変換する作用を
有する公知の酵素である。

ウロキナーゼやストレプトキナーゼにくらべてフィブリ
ンに対する親和性が高いので出血の副作用が極めて少な
いという特徴から次世代の血栓溶解剤として近年注目さ
れてきている（文献１２．１３）。

本発明は、ｔ−ＰＡをを効成分とする血小板凝集抑制剤
である。

ｔ−ＰＡが血小板凝集抑制作用をもつものであればウロ
キナーゼも同様の効果をもつことが想定され併せて研究
を行なったが、ｔ−ＰＡに比べ効果は低かった。

現在市販されている塩化チクロピジン製剤との比較にお
いては、その作用機序が異なるものと考えられ対照とは
しなかった。すなわち塩化チクロピジン製剤が血小板の
アデニレートシクラーゼ活性を増強して血小板内ｃＡＭ
Ｐ産生を高め、血小板凝集・放出能を抑制するもので、
血液凝固・線溶系には影響しないものと考えられる（文
献１４）のに対し、ｔ−ＰＡが血液凝固・線溶系の中で
重要な役割を呈する生体内物質そのものであることによ
る。

また塩化チクロピジンは出血・肝機能障害の副作用があ
り臨床上十分な留意が必要である。一方ｔ−ＰＡは、フ
ィブリンに対する親和性が強く副作用は少ないことが知
られている（文献１３．１５）。

本発明の血小板凝集抑制剤は、血管内、特に血栓を生じ
た部位に投与することもできるが、通常は静脈内投与す
るのが適切である。組成物の添加物としては、マンニッ
ト、アルブミン、ゼラチン、亜硫酸水素ナトリウム等の
安定剤、塩化ナトリウム、マンニット、ブドウ糖等の等
張引剤が適切である。

静脈内投与の方法としては注射による投与が望ましいが
、点滴静注、点滴注射も可能である。

以下に本発明の作用及び効果（薬効）について実験例に
基づいて説明する。

（１）血小板凝集能測定方法 血小板凝集メーター（クロノログ社；　Ｍｏｄｅ１５５
０）を用い、血しょう（Ｐｌａｔｅｌｅｔ　ｒｉｃｈ　
ｐｌａｓｍａ）　８００μｌ　ニｔ　−Ｐ　Ａ溶液２０
０．ｃｒｙを加え３７℃、２〜３分インキュベート後、
血小板凝集因子の誘発因子であるコラーゲン（ｃｏｌｌ
ａｇｅｎ）　（以下コラーゲンと称す）２０μ！　（最
終濃度１０μｇ／−）あるいは血小板凝集因子であるア
デノシン２リン酸（ａｄｅｎｏｓｉｎｅｄｉｐｈｏｓｐ
ｈａｔｅ；以後ＡＤＰと称す）２０μｌ　（最終濃度１
０μ旧を添加し、２本の電極間に凝集する血小板の抵抗
値を増幅してペンレコーダーで記録した。

（２）血しょう調製方法 健康正常人男子の静脈血およびベントパルビタールナト
リウム麻酔下の雌正常成熟家兎（体重２．４〜２．８ｋ
ｇ）の動脈血を用い、採血には３．２％クエン酸ナトリ
ウム溶液を抗凝固剤として１／１０容量添加しておこな
い、１１０００ｒｐ、　　１５分遠心して分離した血し
ょう　（ｐｌａｔｅｌｅｔ　ｒｉｃｈ　ｐｌａｓｍａｘ
通常血小板数３−４１１０／μｍ）を調製し、採血後４
時間以内に実験に供した。

（３）ウサギ血小板凝集抑制効果 １０本の調製したウサギ血しょう（８００μｌ／本）に
精製ｔ−ＰＡを各々最終濃度４６１Ｕ／ｍｆ、９２　Ｉ
Ｕ／−１１８４１０／　ｄ、３６８　ＩＵ／ｍＺ、　　
７３６　ＩＵ／ｍＺになるように添加し、２本づつ５組
調製した。１分後に各組ごとに各々ＡＤＰ（１０μＭ）
またはコラーゲン（１０μｓ／ｍｆ）を添加し経時的に
抵抗値を測定した。

尚、調製したウサギ血しょうにＡＤＰまたはコラーゲン
のみを加えたものを測定しコントロールとした。

ｔ−ＰＡは、ＡＤＰあるいはコラーゲン倉皇しょうにお
いて抵抗値を小さくさせ、顕著な抑制効果を示した。代
表的な例として精製ｔ−ＰＡ濃度３６８１Ｕ／ｍｆの結
果を第１図、第２図に示す。

ウロキナーゼも同様に１８．７５．１５０．３００．６
００Ｉｌｌ／−添加して測定した。

これらのデータから容量反応曲線（Ｄｏｓｅ−ｒｅｓｐ
。

ｎｓｅ　ｃｕｒｖｅ）を求めた（第５図および第６図参
照）。

この結果をもとに５０％抑制率（１，Ｃ，５０）を求め
るとｔ−ＰＡの場合ＡＤＰ含血倉皇うでは４８０　ＩＵ
／ｍｌを示し、コラーゲン倉皇しょうにおいては１９０
ＩＵ／ｍ／を示し血小板凝集抑制効果が証明された（表
＝１参照）。同様にウロキナーゼでも血小板凝集抑制能
をもつことが判明したがｔ−ＰＡと比べて低い効果であ
った。

一方、ＡＤＰおよびコラーゲン各々の誘発凝集に対する
ｔ−ＰＡの抑制効果比較に関しては、ＡＤＰにくらべて
コラーゲン誘発凝集に対する抑制効果の方が約２．５倍
強かった（表−１参照）。

以下余白 表−１ 涜ｍ果　　　　　、ＬＪｆ！ｌ　　　　１．Ｃ，５０八
ＤＰ誘発血小板凝集　　ｔ−ｐ八　　　４８０１１１／
ｍＺ（八〇Ｐ　　１０ｃｒＭ）　　　　　ウロキナーゼ
　　　　　９５０　１０／ｍ／ゴラーゲン誘発血小板凝
集　ｔ−ｐＡ　　　　１９０１１Ｊ／ｄ（Ｃｏｌｌａｇ
ｅｎ　　１０１１ｇ／ｍ＃）　　　　ウロキナーゼ　　
　　　３８０　１Ｕ／ｍ１（４）ヒト血小板凝集抑制効
果 ヒト血しょうにおける血小板凝集抑制効果を調べた。

調製したヒト血しょう（８００μＮ）に精製ｔ−ｐ八を
最終濃度３６８　ＩＵ／ａｔｅになるように２本調製し
、続いて１分後にＡＤＰ（１０μＭ）またはコラーゲン
（１０μｇ／ｍｆ）を各々加え、血小板凝集メーター（
クロノログ社；　Ｍｏｄｅ　１５５０）で抵抗値を経時
的に測定した。なお、調製したヒト血しょうにＡＤＰ（
１０μＭ）またはコラーゲン（１０μｓ／ｄ）だけを加
えたものを測定しコントロールとした。

その結果、顕著な血小板凝集抑制効果を示した（第３図
、第４図および表２参照）。

表−２ 凝集率（＊１） 旧主ｌ果　　策剋　上圀盪主立汰主分後＾ＤＰ誘発　　
　ｔ−ＰＡ　　　　５５％　　５３％　　５２％％血小
板凝集 コラ−ケン　誘発　　　　ｔ−ＰＡ　　　　　　　６１
％　　　　５３％　　　　５６％血小板凝集 （＊１〉凝集率はｔ−ＰＡを添加しないでＡＤＰまたは
コラーゲンのみを添加した時の凝集メーターの抵抗値を
１００とした時の割合を示す。

〔発明の効果〕

以上のように、本発明の血小板凝集抑制剤は、副作用が
少なく安定な血小板凝集抑制作用を持ち、臨床的に満足
できるものである。

参考文献 文献１　、　Ｋｗａａｎ、　Ｈ，Ｃ，「Ｒｏｌｅ　ｏｆ
　Ｐｌａｔｅｌｅｔｓ　１ｎＦｉｂｒｉｎｏｌｙｓｉｓ
Ｊ　Ｊｏｈｎｓｏｎ、　Ｓ、Ａ、ｅｄ、ｐ３９５−４１
３Ａｃａｄｅｍｉｃ　　Ｐｒｅｓｓ、　　Ｎｅｗ　　Ｙ
ｏｒｋ　　ａｎｄ　　Ｌｏｎｄｏｎ（１９２、Ｔｈｏｒ
ｓｏｎ、Ｓ　　ｅｔ、ａｌ。

Ａ　Ｃｒ１ｔｉｃａｌ　　Ｒｅｖｉｅｗｓ、Ｈｅｍａｔ
ｏｌｏｇｉｃ　　Ｒｅｖｉｅｗｓ。

３、Ｋｏｗａｌｓｋｉ　　ｅｔ、ａｌ。

Ｔｈｒｏｍ、Ｄｉａｔｈ、ｌＩａｅｍｏｒｒｈ、１０４
０６−４２３　　（１９６４）４、ＫｏｗａＬｓｋｉ Ｓｅｍｉｎｏｒ　Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ、５４５−５
９（１９６８）５．８ａｒｎｈａｒｔ　　ｅｔ、ａｌ。

Ｔｈｒｏｍ、Ｄｉａｔｈ、Ｈａｅｍｏｒｒｈ、１７　７
８−９８（１９６７＞６、日本国特願昭５８−３６６２
５ 小野薬品工業 プロスタグランジン類似化合物、その製造方法およびそ
の化合物を有効成分として含有する治療剤 ７、日本国特願昭５８−１６８３６８ 津村順天堂　　抗血小板ＩＩＥ集剤 ８、日本国特願昭５８−２２３３１８ 帝人 ７−チアプロスタグランジンＥ１ｇ製剤用組成物 ９．　Ｋｏｂａｙａｓｈｉ　Ｎ Ｔｈｅ　Ｓａｉｓｈｉｎ−ｉｇａｋｕ　４０（１０）２
０１１−２０２０（１９８５）１０、　Ｍｏｎｃａｄａ
　ｅｔ、ａｌ。

Ｎａｔｕｒｅ　２６３６６３−６６５（１９７６）１１
、　Ｋｅｌｔｏｎ　ｅｔ、ａｌ。

Ｊ、Ｃｌ１ｎ、１ｎｖｅｓｔ、　６２８９２−８９５（
１９７８）１２、　Ｒｉｊｋｅｎ　ｅｔ、ａｌ。

Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、　２５６７０３５−７０４１
（１９８１）１３、　Ｂ、ｔｉ、５ｏｂｅｌ　ｅｔ、ａ
ｌ。

Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ、　８
２４２５８−４２６２１４、　Ａｓ１ａ、Ｓ　ｅ’ｔ、
ａｌ、Ｔｈｒｏｍｂｏｓ、Ｈａｅｍｏｓｔａｓ、　４１
１５、　Ｍ、Ｖｅｔｓｔｒａｅｔｅ　ｅｔ、ａｌ。

Ｔｈｅ　Ｌａｎｃｅｔ　Ａｐｒｉｌ　１３８４２−８４
７（１９８５）

【図面の簡単な説明】

第１図は、ＡＤＰ誘発ウサギ血小板凝集時におけるｔ−
ＰＡの抑制効果を血小板凝集メーターで測定した結果を
示す図。 第２図は、コラーゲン誘発ウサギ血小板凝集時における
ｔ−ＰＡの抑制効果を血小板凝集メーターで測定した結
果を示す図。 第３図は、ＡＤＰ誘発ヒト血小板凝集時におけるｔ−Ｐ
Ａの抑制効果を血小板凝集メーターで測定した結果を示
す図。 第４図は、コラーゲン誘発ヒト血小板凝集時におけるｔ
−ＰＡの抑制効果を示す図。 第５図は、ＡＤＰ誘発ウサギ血小板凝集時におけるｔ−
ＰＡの抑制効果の容量反応曲線を示す図。 第６図は、コラーゲン誘発ウサギ血小板凝集時における
ｔ−ＰＡの抑制効果の容量反応曲線を示す図。 代理人　弁理士　平　木　祐　輔 栴１図 鴎Ｆｔｌ　　（４＋） 第２図 第３図 第４図 第５図 添加濃度ＩＵ／ｍｌ 鋼６図 添加浸度　ＩＬＩ／ｍｌ 手わ１ε千市正書（方式） 昭和６１年６月２０日

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. ヒト組織型プラスミノーゲン活性化因子を有効成分とす
   る血小板凝集抑制剤。