JPS62195387A - Novel bonded body of vinblastine and derivative of same, manufacture and medicinal composition - Google Patents
Novel bonded body of vinblastine and derivative of same, manufacture and medicinal compositionInfo
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。(57) [Summary] This bulletin contains application data before electronic filing, so abstract data is not recorded.
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はインドール−ジヒドロインドール型のビンカア
ルカロイドとタンパク質またはタンパク質フラグメント
との、医薬特性、殊に細胞増殖抑制活性を有する新規結
合体に関する。インドール−ジヒドロインドール型のビ
ンカアルカロイド、殊にビンブラスチン、ビンクリスチ
ンおよびビンデシンは癌の治療に使用される。しかし、
これらの誘導体の化学療法使用はそれらの副作用により
その有効性が限定される。このため、これらの副作用を
低下するために多くの誘導体が合成された。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION The present invention relates to novel conjugates of vinca alkaloids of the indole-dihydroindole type and proteins or protein fragments having pharmaceutical properties, in particular cytostatic activity. Vinca alkaloids of the indole-dihydroindole type, especially vinblastine, vincristine and vindesine, are used in the treatment of cancer. but,
Chemotherapeutic uses of these derivatives are limited in their effectiveness by their side effects. Therefore, many derivatives have been synthesized to reduce these side effects.
ビンブラスチンおよびその誘導体の若干、殊にビンクリ
スチンまたはビンデシンが既にタンパク質例えばアルブ
ミンまたは種々の免疫グロブリンに結合された。これは
結合体（ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）として知られるカップリ
ング生成物または化合物を生ずる。Vinblastine and some of its derivatives, especially vincristine or vindesine, have already been conjugated to proteins such as albumin or various immunoglobulins. This produces a coupling product or compound known as a conjugate.
発明者は殊に次の参照文献を文献中に認める：チールほ
か（Ｊ、 Ｄ、Ｔｅａｌｅ、 ＪａｃｑｕｅｌｉｎｅＭ
、 Ｃｌｏｕｇｈ ａｎｄ Ｖ、 Ｍａｒｋｓ）、ブリ
ティッシュ・ジャーナル・オフ・クリニカル・ファルマ
コロジ−（Ｂｒ、Ｊ、Ｃｌ１ｎ、Ｐｈａｒｍａｃ、）、
４．１６ ！Ｊ−１７２。The inventor specifically acknowledges the following references in the literature: Teale et al.
, Clough and V, Marks), British Journal of Clinical Pharmacology (Br, J, Cl1n, Pharmac,),
4.16! J-172.
１９７７、
フォードはか（Ｃ０Ｈ，、Ｊ、Ｆｏｒｄ、 Ｃ，巳、
ＮｅＷｍａｎ。1977, Ford Haka (C0H,, J, Ford, C, Snake)
Newman.
Ｊ、Ｒ，Ｊｏｈｎｓｏｎ、 Ｃ０Ｓ、Ｗｏｏｄｈｏｕｓ
ｅ、 Ｔ、 Ａ、Ｒｅｅｄｅｒ。J, R, Johnson, COS, Woodhouse
e, T, A, Reeder.
Ｇ、 Ｆ、 Ｒｏｗｌａｎｄ ａｎｄ ＲｏＧ
、Ｓｉｍｍｏｎｄｓ）、ブリティッシュ・ジャーナル・
オフ・カンサー（Ｂｒ、Ｊ。G, F, Rowland and RoG
, Simmons), British Journal
Off Cancer (Br, J.
Ｃａｎｃｅｒ）、 ４７．３５〜４２． Ｌ ９８３、
エンブレトンほか（Ｍ、 Ｊ、Ｂｍｂｌｅｔｏｎ、
Ｇ、 Ｆ。Cancer), 47.35-42. L 983,
Bmbleton et al. (M, J, Bmbleton,
G, F.
Ｒｏｗｌａｎｄ、 Ｒ，Ｇ、Ｓｉｍｍｏｎｄｓ、 Ｅ、
Ｊａｃｏｂｓ、 Ｃ，ＨｏＭａｒｓｄｅｎ ａｎｄ
Ｒ，Ｗ、 Ｂａｌｄｗｉｎ）、 ブリティア ’／
ユ’ジャーナル・オフ・カンサー（Ｏｒ、 Ｊ、 Ｃ
ａｎｃｅｒ）。Rowland, R.G., Simmons, E.
Jacobs, C., HoMarsden and
R, W, Baldwin), Britia'/
You' Journal of Cancer (Or, J, C
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４７．４３〜４９．１９８３、
ジョンソンはか（Ｊ、ＲｏＪｏｈｎｓｏｎ、 Ｃ，Ｈｌ
Ｊ、Ｆｏｒｄ。47.43-49.1983, RoJohnson (J, RoJohnson, C, Hl
J.Ford.
Ｃ，Ｅ、Ｎｅｗｍａｎ、 Ｃ０Ｓ、Ｗｏｏｄｈｏｕｓｅ
、 Ｇ、Ｆ、Ｒｏｗｌａｎｄａｎｄ Ｒ９Ｇ、 Ｓｉｍ
ｍｏｎｄｓ）、ブリティッシニ’ジャーナル・オフ・カ
ンサー（Ｄｒ、Ｊ、 Ｃａｎｃｅｒ）、 ４４ 。C, E, Newman, COS, Woodhouse
, G, F, Rowland and R9G, Sim
monds), Britissini's Journal of Cancer (Dr. J. Cancer), 44.
４７２〜４７５．１９８１、
リリー（Ｅｌｉ Ｌｉ１ｌｙ）、欧州特許願、公表第５
６．３２２号（２１，・０７．８２）、
コンラフトほか（Ｒ，Ａ、 Ｃｏｎｒａｄ、 Ｇ、Ｊ、
Ｃｕ１ｌｉｎａｎ。472-475.1981, Eli Li1ly, European Patent Application, Publication No. 5
6.322 (21,・07.82), Conrad et al. (R, A, Conrad, G, J,
Cullinan.
Ｋ、 Ｇｅｒｚｏｎ ａｎｄ Ｇ、 Ａ、 Ｐｏｏｒ
ｅ）＋ジャーナル０オブ・メデイシナル・ケミストリー
（Ｊ、Ｍｅｄ、 Ｃｈｅａ＋、Ｃ２２，３９１，１９７
９、
リリー（Ｅｌｆ Ｌｉ１ｌｙ ）、英国特許願公表第
２．１３７．２１０号（０３，１１，８４）、オムニケ
ム（Ｏｍｎｉｃｈｅｍ ）＋ 欧州特許願公表第１２
４．５０２号（０７，１１，８４）。K, Gerzon and G, Poor
e) + Journal 0 of Medicinal Chemistry (J, Med, Chea+, C22, 391, 197
9. Elf Li1ly, UK Patent Application Publication No. 2.137.210 (03,11,84), Omnichem + European Patent Application Publication No. 12
No. 4.502 (07, 11, 84).
これらのインドール−ジヒドロインドール二量体のカッ
プリングは新免疫試薬の開発目的のみでなく、また殊に
一層選択性で低毒性である一層活性な抗腫瘍物質を製造
する目的に試みられた。Coupling of these indole-dihydroindole dimers has been attempted not only for the purpose of developing new immunoreagents, but also in particular for the production of more active antitumor substances with greater selectivity and lower toxicity.
これまでに２つの型のカップリングが意図された：
（ａ） アジ化物誘導体を経るＣ】におけるカップリ
ング（欧州特許願公表第５６，３２２号）、（ｂｌ
ビンカアルカロイド骨格の炭素４上のヒドロキシル基か
ら誘導されたエステル基を経由するＣ４におけるカップ
リング（英国特許願公表第２．１３７，２１０号；欧州
特許願第１２４，５０２号）。Two types of couplings have hitherto been contemplated: (a) Coupling in C via azide derivatives (European Patent Application No. 56,322), (bl
Coupling at C4 via an ester group derived from the hydroxyl group on carbon 4 of the vinca alkaloid backbone (UK Patent Application No. 2.137,210; European Patent Application No. 124,502).
本発明は、カップリングが同様にビンカアルカロイド骨
格の炭素４上のヒドロキシル基から誘導されるエステル
基を経て行なわれるインドール−ジヒドロインドール型
のビンカアルカロイドとタンパク質またはタンパク質フ
ラグメントとの結合体である新規生成物に関する。The present invention discloses new products which are conjugates of vinca alkaloids of the indole-dihydroindole type with proteins or protein fragments, in which the coupling is likewise carried out via an ester group derived from the hydroxyl group on carbon 4 of the vinca alkaloid backbone. relating to things.
より詳しくは本発明の目的は一般式、
〔式中、
Ｒ３はタンパク質またはタンパク質フラグメントを示し
、
Ｒ２はＣｏｏ （Ｃ＋〜３アルキル）またはｃｏ−ｐｔ
（式中、Ｒ１はＮＨ，またはアミノ酸エステルまたはペ
プチドエステルである）であり、Ｒ３はＨＳＣＨ３また
はＣＨＯであり、Ｒ１およびＲ６は別々にされたときに
Ｒ，はＨであり、Ｒ４およびＲ３の１つはエチルであっ
て他はＨまたはＯＨであり、
Ｒ２およびＲ４はそれらが結合している炭素原子と一緒
にしたときにそれらはオキシラン環を形成してＲ４はエ
チルであり、
Ａはマレオイルアミノ酸またはマレオイルペプチドまた
はマレオイルフェノキシ型の三官能有機誘導体の残基で
ある〕
に相応スるインドール−ジヒドロインドール型のビンカ
アルカロイドのタンパク質またはタンパク質フラグメン
トとの結合体からなる。More specifically, the object of the present invention is to provide the general formula: [wherein R3 represents a protein or protein fragment and R2 represents Coo (C+~3 alkyl) or co-pt
(wherein R1 is NH, or an amino acid ester or a peptide ester), R3 is HSCH3 or CHO, R, is H when R1 and R6 are taken separately, and one of R4 and R3 is one is ethyl and the other is H or OH; when R2 and R4 are taken together with the carbon atoms to which they are attached they form an oxirane ring and R4 is ethyl; A is maleoyl; It consists of a conjugate of a vinca alkaloid of the indole-dihydroindole type with a protein or protein fragment, corresponding to an amino acid or a residue of a trifunctional organic derivative of the maleoyl peptide or maleoyl phenoxy type.
これらの結合体において、本発明によればタンパク質ま
たはタンパク質フラグメントは、４−デアセチル−イン
ドール−ジヒドロインドールビンカアルカロイドと一般
式、
のマレオイルアミノ酸型またはマレオイルペプチド型の
二官能有機誘尋体との前縮合による腕を経てビンカ化合
物に結合する。In these conjugates, according to the invention, the protein or protein fragment comprises a 4-deacetyl-indole-dihydroindole vinca alkaloid and a bifunctional organic derivative of the maleoyl amino acid or maleoyl peptide type of the general formula It binds to the vinca compound via a precondensation arm.
式中、
−マレオイルアミノ酸の場合に、
Ｘは１〜１２個の炭素原子の線状アルキレン鎖、２〜５
個の炭素原子の枝分れアルキレン鎖、３〜６個の炭素原
子のシクロアルキレン鎖、または３〜６個の炭素原子の
フェニレン鎖を示す。where - in the case of a maleoyl amino acid, X is a linear alkylene chain of 1 to 12 carbon atoms, 2 to 5
represents a branched alkylene chain of 3 to 6 carbon atoms, a cycloalkylene chain of 3 to 6 carbon atoms, or a phenylene chain of 3 to 6 carbon atoms.
さらに、三官能誘導体がマレオイルアミノ酸型であると
きにＸは上記意味に加えて天然アミこの最後の場合に基
Ｒ−ＣＨが官能性置換基をもつときに後者はペプチド合
成に普通に使用される保護基により保護されていること
ができる。Furthermore, when the trifunctional derivative is of the maleoyl amino acid type, X is a natural amino acid in addition to the above meaning, and in this last case when the group R-CH carries a functional substituent, the latter is commonly used in peptide synthesis. may be protected by a protecting group.
−マレオイルペプチドの場合に、
Ｘはペプチド鎖のフラグメント
−（Ｘ、−ＮＨ−Ｃｏ）ｌ、−ｘ、−
（式中、ｎ−１，２，３または４であり、Ｘ＋ は上記
Ｘと同じ意味を有する）を示す。- In the case of a maleoyl peptide, have the same meaning).
−Ｘはまたフェニル基を示すことができる・。-X can also represent a phenyl group.
上記三官能誘導体が不斉中心を含むとき、それはそのラ
セミ形態で、またはその光学活性形態の１つで使用する
ことができる。When the above trifunctional derivative contains an asymmetric center, it can be used in its racemic form or in one of its optically active forms.
より詳しくは、本発明の結合体は次式により示すことが
できる：
式中、
Ｒ，はタンパク質またはタンパク質フラグメントを示し
、
Ｘは前記のとおりであり、
Ｒ２はＣｏｏ （Ｃ＋ 〜ｘアルキル）またはＣｏ−Ｒ
？ （式中、Ｒ１はＮＨ２またはアミノ酸エステルま
たはペプチドエステルである）であり、Ｒ３はＨ，ＣＨ
３またはＣＨＯであり、ＲｓおよびＲ６は別々にされた
ときにＲ４はＨであり、Ｒ４およびＲ２の１つはエチル
であって他はＨまたはＯＨであり、
Ｒ３およびＲ６はそれらが結合している炭素原子と一緒
にしたときにそれらはオキシラン環を形成してＲ４はエ
チルである。More specifically, the conjugates of the invention can be represented by the following formula: where R, represents a protein or protein fragment, X is as defined above, and R2 is Coo (C+ ~x alkyl) or Co -R
? (wherein R1 is NH2 or an amino acid ester or a peptide ester), and R3 is H, CH
3 or CHO, R4 is H when Rs and R6 are taken separately, one of R4 and R2 is ethyl and the other H or OH, and R3 and R6 are When taken together with the carbon atoms present, they form an oxirane ring and R4 is ethyl.
上式を有する化合物は一般に、
Ｒ２がＣ００ＣＲ３であり、Ｒ３がメチルテあり、Ｒ４
がヒドロキシルであり、Ｒ３がエチルであり、Ｒ６が水
素であるビンブラスチン誘導体、Ｒ２がＣｏ ＮＨｚ
であり、Ｒｓ 、Ｒ４、ＲｓおよびＲ８がビンブラスチ
ン誘４体に対して記載した意味を有するビンデシン誘導
体、
Ｒ２がＣｏ Ｒ？ （Ｒ？はアミノ酸エステルまた
はペプチドエステルである）であり、Ｒ１、Ｒ４、Ｒ６
およびＲ６がビンブラスチンｍ１１体に対して記載した
意味を有する２３−ビンプラスチノイルアミノ酸誘導体
、
Ｒ２がＣ００ＣＨｚであり、Ｒ１がホルミルであり、Ｒ
４がヒドロキシルであり、Ｒｓがエチルであり、Ｒ６が
水素であるビンクリスチン誘ｉ４、Ｒ２がＣＯＯＣＨｚ
であり、Ｒ３がメチルであり、Ｒ４がエチルであり、Ｒ
６がヒドロキシルであり、Ｒ５が水素であるロイロジン
誘導体、Ｒ２がＣ００ＣＨ，＋であり、Ｒ８がメチルで
あり、Ｒ４およびＲ６が水素であり、Ｒ３がエチルであ
る４−デオキシ−ＶＬＢ“Ａ”の誘導体、Ｒ２がＣＯＯ
ＣＨｚであり、Ｒ３がメチルであり、Ｒ４がエチルであ
り、Ｒ３およびＲ６が水素である４−デオキシ−ＶＬＢ
“Ｂ”の誘４体および
Ｒ２がＣＯＯＣＨ２テあり、Ｒ１がメチルテあり、Ｒ４
がエチルであり、ＲＳおよびＲ６が一緒にエポキシド連
鎖を形成するロイロジン誘導体、と記載することができ
る。Compounds having the above formula generally include R2 is C00CR3, R3 is methylte, R4
is hydroxyl, R3 is ethyl and R6 is hydrogen, R2 is Co NHz
and a vindesine derivative in which Rs, R4, Rs and R8 have the meanings described for vinblastine derivative 4, R2 is CoR? (R? is an amino acid ester or a peptide ester), R1, R4, R6
and a 23-vinplastinoyl amino acid derivative in which R6 has the meaning described for the vinblastine m11 form, R2 is C00CHz, R1 is formyl, and R
Vincristine derivative i4 where 4 is hydroxyl, Rs is ethyl and R6 is hydrogen, R2 is COOCHz
, R3 is methyl, R4 is ethyl, R
Leurodine derivatives in which 6 is hydroxyl and R5 is hydrogen, 4-deoxy-VLB "A" in which R2 is C00CH, +, R8 is methyl, R4 and R6 are hydrogen, and R3 is ethyl. derivative, R2 is COO
4-deoxy-VLB, where R3 is methyl, R4 is ethyl, and R3 and R6 are hydrogen
The derivative of “B” and R2 have COOCH2te, R1 has methylte, R4
is ethyl and RS and R6 together form an epoxide linkage.
マレオイルアミノ酸型の三官能誘導体はＮ−アルコキシ
マレイミドとアミノ酸（天然または他の）との縮合から
生ずることができ、グリシンとの縮合の場合にＸ＝ＣＨ
，；アラニンとの場合にＸ”ＣＨＣＨＩ ｉβ−アラ
ニンとの場合にＸ＝ （ＣＨｚ）ｚ ；フェニルアラ
ニンとの場合にＸ＝ＣＨＣＨｚ Ｃｈ Ｈｓ ；α
−アミノ酪酸との場合にＸ＝ＣＨＣＨｚ ＣＨｓ；バ
リンとの場合にＸ＝ＣＨＣＨ−（ＣＨｓ ）ｚ；ノルバ
リンとの場合にＸ＝ＣＨ−ＣＨｚ ＣＨｚ −ＣＨ５
；ロイシンとの場合に
Ｘ＝−ＣＨ−ＣＨｚ ＣＨ（ＣＨｚ）ｇ ；イソロ
イシンとの場合に
ｔＨｓ
Ｘ＝−ＣＨ−ＣＨ
ＣＨ。Trifunctional derivatives of the maleoyl amino acid type can result from the condensation of N-alkoxymaleimides with amino acids (natural or other), and in the case of condensation with glycine, X=CH
, ; In case of alanine, X” CHCHI i In case of β-alanine, X = (CHz)z ; In case of phenylalanine, X = CHCHz Ch Hs ; α
- with aminobutyric acid, X=CHCHz CHs; with valine, X=CHCH-(CHs)z; with norvaline, X=CH-CHz CHz -CH5
; with leucine, X=-CH-CHz CH(CHz)g ; with isoleucine, tHs X=-CH-CH CH.
ノルロイシンとの場合に
Ｘ＝ＣＨ（ＣＨｚ ）３−ＣＨ３； ６−アミノカプロ
ン酸との場合にＸ ＝ （ＣＨｚ）ｓ ； １１−ア
ミノウンデカン酸との場合にＸ＝ （ＣＨＩ ）＋。；
および１２−アミノデカン酸との場合にＸ＝ （ＣＨｚ
） ｌ＋である。With norleucine, X=CH(CHz)3-CH3; with 6-aminocaproic acid, X=(CHz)s; with 11-aminoundecanoic acid, X=(CHI)+. ;
and with 12-aminodecanoic acid X= (CHz
) is l+.
マレオイルペプチド型の三官能誘導体もまたＮ−アルコ
キシ−マレイミドとジペプチドまたはトリペプチドとの
縮合から生ずることができ、誘導体−（Ｘ、−ＮＨ−Ｇ
ｏ−） 、ｌＸＩ （式中、Ｘ。Trifunctional derivatives of the maleoyl peptide type can also result from the condensation of N-alkoxy-maleimides with dipeptides or tripeptides, and the derivatives -(X, -NH-G
o-), lXI (wherein, X.
は上記Ｘと同じ意味を有することができる）を与える。can have the same meaning as X above).
有利に使用できるタンパク質は殊にウシまたはヒト血清
アルブミン、あるいはフェチュインまたは免疫グロブリ
ンである。Proteins which can be advantageously used are in particular bovine or human serum albumin, or fetuin or immunoglobulins.
用いるタンパク質または選択的に変性するために処理す
ることができる。これらの変態は、それらを治療に用い
るときに一定組織例えば肝臓に優先的に濃縮されるタン
パク質結合体を得ることを可能にする。従って、ビンカ
アルカロイド誘導体とタンパク質との縮合前に後者をガ
ラクトシル化することができる。The proteins used or can be treated to selectively denature. These transformations make it possible to obtain protein conjugates that are preferentially concentrated in certain tissues, such as the liver, when they are used therapeutically. Therefore, before the condensation of the vinca alkaloid derivative and the protein, the latter can be galactosylated.
悪性細胞表面抗原に対する特異的免疫グロブリン、およ
び免疫動物の血清から、または単クローン性抗体を分泌
するハイブリドーマの培養によりそれらを生成させる技
術はよく知られている。本発明における使用に好ましい
型の抗体はヒト由来の１ｇ０種の免疫グロブリンである
。Specific immunoglobulins against malignant cell surface antigens and techniques for producing them from the serum of immunized animals or by culturing hybridomas secreting monoclonal antibodies are well known. A preferred type of antibody for use in the present invention is the 1g0 immunoglobulin of human origin.
しかし、他種の免疫グロブリンもまた本発明に含まれる
。若干の代表的な免疫グロブリンは次のとおりであるニ
ー癌胎児性抗原で免疫したヤギまたはヒツジのＩｇ；−
ウサギ抗−ＬＬＡＩｇ；
一種々のサル抗ＬＬＡ、抗ＬＭＡ、抗ＬＬＣ１抗ＬＭＣ
Ｉｇニ
ー肺の癌腫の膜で免疫したヤギまたはヒツジのＩｇ；−
ヒト結腸直腸癌腫に対する抗体を分泌するマウスハイブ
リドーマからの単りローン性Ｉｇ；−ヒト黒色腫に対す
る抗体を分泌するマウスハイブリドーマからの単りロー
ン性Ｉｇ；
−ヒト白血病細胞と反応する抗体を分泌するマウスハイ
ブリドーマからの単りローン性Ｉｇ；−ヒト神経芽腫細
胞と反応する抗体を分泌するマウスハイブリドーマから
の単りローン性■ｇ；−ヒト乳癌抗原と反応する抗体を
分泌するマウスハイブリドーマからの単りローン性■ｇ
；−ヒト卵巣癌細胞と反応する抗体を分泌するマウスハ
イブリドーマからの単りローン性■ｇ；−ヒト骨肉腫細
胞と反応する抗体を分泌するマウスハイブリドーマから
の単クローン性Ｉｇ；およ一肺癌に対する抗体を分泌す
るマウスハイブリドーマからの単クローン性１ｇ。However, immunoglobulins of other species are also included in the invention. Some representative immunoglobulins are: goat or sheep Ig immunized with carcinoembryonic antigen;-
Rabbit anti-LLAIg; Monkey anti-LLA, anti-LMA, anti-LLC1 anti-LMC
Ig of goat or sheep immunized with lung carcinoma membrane;-
A monoclonal Ig from a mouse hybridoma secreting antibodies against human colorectal carcinoma; - a monoclonal Ig from a mouse hybridoma secreting antibodies against human melanoma; - a mouse secreting antibodies reactive with human leukemia cells Single clone Ig from a hybridoma; - Single clone from a mouse hybridoma that secretes antibodies that react with human neuroblastoma cells; - Single clone from a mouse hybridoma that secretes antibodies that react with human breast cancer antigens. loan sex g
- a monoclonal Ig from a mouse hybridoma that secretes antibodies that react with human ovarian cancer cells; - a monoclonal Ig from a mouse hybridoma that secretes antibodies that react with human osteosarcoma cells; and one against lung cancer. Monoclonal 1g from mouse hybridoma secreting antibodies.
結合体はまた、タンパク質分解酵素で消化することによ
り抗体から得られる免疫グロブリンフラグメント、すな
わち、Ｆａｂ 、 Ｆａｂ ’またはＦ（ａｂ’）ｚ
フラグメント、あるいはモノマーＩｇＭで製造するこ
とができる。Conjugates also include immunoglobulin fragments obtained from antibodies by digestion with proteolytic enzymes, i.e., Fab, Fab' or F(ab')z
It can be produced from fragment or monomeric IgM.
本発明の結合体は第１段階においてマレオイルアミノ酸
またはマレオイルペプチドと式■の４−デアセチル−イ
ンドール−ジヒドロインドールビンカアルカロイドの０
４−ヒドロキシルとを縮合させて弐■の誘導体を与える
ことにより得られる：（式中、Ｘ、Ｒｚ 、Ｒ３、Ｒ４
、ＲｓおよびＲ６は前記の意味を有する）
第２段階において、４−カルボキシ−マレオイルビンカ
誘４体■は次いでタンパク質またはタンパク質フラグメ
ントと、タンパク質の遊離チオール基または遊離アミノ
基、例えばタンパク質のりシン残基から誘導されるアミ
ノ基のマイクル（Ｍｉｃｈａｅｌ）型付加機構〔ミーン
ズほか（Ｍｅａｎｓ 。The conjugate of the present invention comprises, in the first step, a maleoyl amino acid or a maleoyl peptide and a 4-deacetyl-indole-dihydroindole vinca alkaloid of formula (1).
It can be obtained by condensation with 4-hydroxyl to give the derivative of
, Rs and R6 have the meanings given above) In the second step, the 4-carboxy-maleoyl vinca derivative 4 is then combined with the protein or protein fragment and a free thiol group or free amino group of the protein, such as a protein glue residue. Michael-type addition mechanism of amino groups derived from groups [Means et al.
Ｇ、 Ｅ、 ａｎｄ Ｆｅｅｎｅｙ＋Ｒ，Ｅ、） ；タ
ンパク質の化学修飾（ｃｈｅｍｉｃａｌ ｍｏｄｉｆｉ
ｃａＨｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ Ｌ１９７１．１
１０〜１３８頁、ホルデン・ディ社（Ｈｏ１ｄｅｎ Ｄ
ａｙ Ｉｎｃ、、 Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ））に
従い、マレイミドのオレフィン二重結合に対する付加に
より縮合させると結合体Ｉが得られる。G, E, and Feeney+R, E,); chemical modification of proteins
caHon of proteins L1971.1
Pages 10-138, Ho1den D
ay Inc., San Francisco)), condensation by addition of maleimide to the olefinic double bond gives conjugate I.
化学的観点によると：
マレオイルアミノ酸またはマレオイルペプチドの製造は
ケラ−はか（０，Ｋｅｌｌｅｒ ａｎｄＪ、 Ｒｕｄｉ
ｎｇｅｒ、 ヘルベチカ（Ｈｅｌｖ、）、 ５８ 、
５３１（１９７５）、リッチはか（Ｄ、 Ｈ，Ｒｉｃｈ
。From a chemical point of view: The production of maleoyl amino acids or maleoyl peptides has been described by Keller and J.
nger, Helvetica (Helv,), 58,
531 (1975), Rich Haka (D, H, Rich
.
Ｐ、 Ｄ、 Ｇｅ５ｓｅｌｃｈｅｎ 、 Ａ、 Ｔｏｎ
ｇ ＋ Ａ、 Ｃｈｅｕｎｇ ａｎｄＣ，Ｋ、 Ｂｕｃ
ｋｎｅｒ）、ジャーナル・オプ・メデイシナル・ケミス
トリー（Ｊ、 Ｍｅｄ、Ｃｈｅｍ、） 、±８．１００
４（１９７５）およびサトーほか（Ａ、 ５ａｔｏ ａ
ｎｄＭ、 Ｎａｋａｏ Ｌ ジャーナル・オフ・バイオ
ケミストリー（Ｊ、 Ｂｉｏｃｈｅｍ、 ）、９０．
１１１７ （１９８１）により記載された方法に従っ
て行なわれる。P, D, Ge5selchen, A, Ton
g + A, Cheung and C, K, Buc
Kner), Journal of Medicinal Chemistry (J, Med, Chem,), ±8.100
4 (1975) and Sato et al.
ndM, Nakao L Journal of Biochemistry (J, Biochem, ), 90.
1117 (1981).
マレオイル誘導体とビンカアルカロイドとの縮合は常法
で、クロロギ酸アルキル、好ましくはクロロギ酸エチル
またはクロロギ酸イソブチルで、アミン塩基例えばトリ
エチルアミン、Ｎ−メチルピペリジンまたはＮ−メチル
モルホリンの存在下に有機溶媒例えば酢酸エチル、テト
ラヒドロフランまたは塩化メチレン中で行なうことがで
きる。The condensation of maleoyl derivatives with vinca alkaloids is carried out in a conventional manner with an alkyl chloroformate, preferably ethyl chloroformate or isobutyl chloroformate, in the presence of an amine base such as triethylamine, N-methylpiperidine or N-methylmorpholine in an organic solvent such as acetic acid. It can be carried out in ethyl, tetrahydrofuran or methylene chloride.
得られた誘導体は反応媒質から分離し、化学に使用され
る古典的方法により情調する。The derivative obtained is separated from the reaction medium and conditioned by classical methods used in chemistry.
ビンカアルカロイドとの縮合を行なうマレオイルアミノ
酸またはマレオイルペプチドのカルボキシル基を活性化
する任意の他の方法、殊にペプチド化学に使用される方
法はこの型の縮合に適用できる。Any other method of activating the carboxyl group of the maleoyl amino acid or maleoyl peptide that undergoes the condensation with the vinca alkaloid is applicable to this type of condensation, especially those used in peptide chemistry.
殊に、Ｘがフェニルである場合に、縮合はアルカワ（Ｔ
、 Ａｌｋａｗａ） ＋ジャーナル・オフ・バイオケミ
ストリー（Ｊ、 Ｂｉｏｃｈｅｍ、）、 ７９． ２
３３（１９７６）およびオサリバン（Ｍ、 Ｊ。In particular, when X is phenyl, the condensation is carried out with alkawa (T
, Alkawa) + Journal of Biochemistry (J, Biochem, ), 79. 2
33 (1976) and O'Sullivan (M, J.
０°５ｕｌｌｉｖａｎ ）ほか、アナリティカル・バイ
オケミストリー（Ａｎａｌ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、）、
１００． １００（１９７９）により記載された方法に
より得られたＮ−スクシンイミジル３−マレイミド安息
香酸エステルで行なわれる。0°5ullivan) and others, analytical biochemistry (Anal, Biochem,),
100. 100 (1979) with N-succinimidyl 3-maleimidobenzoic acid ester.
結合体の製造はタンパク質、多クローン性または単クロ
ーン性抗体を式■のビンカ化合物と、古典的条件下に、
例えば水性媒質中、４〜４０℃の温度で７．５〜９．５
のｐｎで反応させることにより行なうことができる。The production of conjugates involves combining a protein, polyclonal or monoclonal antibody with a vinca compound of formula ■ under classical conditions.
7.5 to 9.5 at a temperature of 4 to 40°C in an aqueous medium, for example.
This can be carried out by reacting with a pn of
結合する残基の敗は試薬の濃度、および反応時間に依存
することができるが、しかし平均数は一般に５〜２０で
ある。The number of residues bound can depend on the concentration of reagents, and reaction time, but the average number is generally 5-20.
例えば、化合物■の有機溶媒例えばジオキサン中の溶液
をタンパク質の例えばｐＨ８，２における０、１Ｍリン
酸塩緩衝液中の緩衝した溶液に滴下する。混合物を室温
で一装置いた後結合体をゲル濾過により分離し、限外濾
過により濃縮（、滅菌する。タンパク質含量はローリ−
（Ｌｏｗｒｙ）法により測定し、アルカロイド含量は放
射能の測定により評価される。For example, a solution of compound 1 in an organic solvent such as dioxane is added dropwise to a buffered solution of the protein, eg in 0.1M phosphate buffer at pH 8.2. After the mixture was incubated at room temperature, the conjugate was separated by gel filtration and concentrated (and sterilized) by ultrafiltration.
(Lowry) method, and the alkaloid content is evaluated by measuring radioactivity.
本発明の化合物の抗腫瘍活性を示すために行なった「試
験管内」および「生体内」試験は、マレオイル連鎖
がｏ−ｃｏ−ｘ−ｃｏ一連鎖よりも一層有利であること
ができることを示す。The "in vitro" and "in vivo" tests carried out to demonstrate the antitumor activity of the compounds of the invention show that maleoyl chains can be more advantageous than o-co-x-co mono-chains.
実際にマレオイル連鎖はタンパク質またはタンパク質フ
ラグメントの遊離アミノ基およびチオール基の両方の結
合を可能にする。さらに、リソソーム酵素による消化は
ビンカアルカロイドをマレオイル連鎖の場合に非常に高
度に遊離することを示す。結合体はまた血清中および酸
性ｐＨで安定である。In fact, maleoyl chains allow the attachment of both free amino groups and thiol groups of proteins or protein fragments. Furthermore, digestion with lysosomal enzymes is shown to liberate vinca alkaloids to a very high degree in the case of maleoyl chains. The conjugate is also stable in serum and at acidic pH.
本発明の化合物を、Ｐ３８８白血病を腹腔内に移植した
ＢＤＦ、マウスで試験した。最初の結果は、生存時間の
増加を誘発するのでこれらの化合物がこの試験モデルに
対して有意な活性を示すことを示す。Compounds of the invention were tested in BDF mice implanted intraperitoneally with P388 leukemia. Initial results show that these compounds exhibit significant activity against this test model as they induce an increase in survival time.
本発明の新規結合体は殊に有利で、ヒトの療法に使用で
きる抗腫瘍性を示す。The novel conjugates of the invention are particularly advantageous and exhibit antitumor properties that can be used in human therapy.
それらの療法における適用のために、本発明の化合物は
好ましくは非経口的に投与され、製剤に許容される溶媒
に溶解される。生理食塩水または他の、例えばリン酸塩
で緩衝された溶液は適当な溶媒である。活性物質は一般
に５０ｏ＋ｇ〜数ｇで変えることができる用量で投与さ
れる。For their therapeutic applications, the compounds of the invention are preferably administered parenterally and dissolved in a formulation-acceptable solvent. Physiological saline or other, eg, phosphate buffered solutions are suitable solvents. The active substances are generally administered in doses that can vary from 50+g to several grams.
本発明の化合物はさらに他の抗腫傷薬と組合せて使用で
きる。The compounds of the invention may further be used in combination with other anti-tumor agents.
以下の実施例は限定を意味することなく本発明の化合物
を導く方法を例示する。The following examples illustrate, without being meant as a limitation, how to derive the compounds of the invention.
実施例１：
Ｎ−カルボメトキシマレイミド
トリエチルアミン３．８ｇ（０，０４モル）および４ｇ
（０，０４モル）の酢酸エチル１５０ｍ１中の溶液に０
℃で、酢酸エチル２０ｍ１に溶解したクロロギ酸メチル
３ｍｌ （０，０４モル）を添加する。Example 1: 3.8 g (0.04 mol) and 4 g of N-carbomethoxymaleimidotriethylamine
(0.04 mol) in a solution of 150 ml of ethyl acetate
At °C, 3 ml (0.04 mol) of methyl chloroformate dissolved in 20 ml of ethyl acetate are added.
１時間かくはんした後沈殿を濾過し、酢酸エチルで洗浄
した。有機相を合せて水で洗浄し、無水硫酸ナトリウム
上で乾燥し、真空下に蒸発乾固する。After stirring for 1 hour, the precipitate was filtered and washed with ethyl acetate. The combined organic phases are washed with water, dried over anhydrous sodium sulphate and evaporated to dryness under vacuum.
残留物を酢酸エチル／イソプロピルエーテル混合物で結
晶化するとＮ−カルボメトキシマレイミド４．１９ ｇ
が得られる。The residue was crystallized from an ethyl acetate/isopropyl ether mixture to yield 4.19 g of N-carbomethoxymaleimide.
is obtained.
ＮＭＲスペクトル： （ＣＤＣｌ３ 、 ６）、６．
７５ （２Ｈ，ｓ） 、３．９ （３Ｈ，ｓ）。NMR spectrum: (CDCl3, 6), 6.
75 (2H, s), 3.9 (3H, s).
実施例２：
Ｎ−マレオイル−Ｌ−アーニン
Ｌ−アラニン２．３ ｇ （０，０２５モル）の飽和炭
酸水素ナトリウム溶液１５０ｍ１中の溶液に０℃で激し
くか（はんしなからＮ−カルボメトキシマレイミド３．
８７ ｇ （０，０２５モル）を加える。Example 2: N-Maleoyl-L-arnin A solution of 2.3 g (0,025 mol) of L-alanine in 150 ml of saturated sodium bicarbonate solution was added to a solution of N-carbomethoxy Maleimide 3.
Add 87 g (0,025 mol).
１時間後溶液を水２０Ｏｎ＋４！で希釈し、４０℃で１
時間かくはんする。次いで溶液のｐ）ｌ（８，２）を濃
硫酸の添加により６．４にする。次いで溶液を１００Ｉ
Ｉ＋１に濃縮し、１Ｍ硫酸の添加によりｐＨ２に酸性化
し、酢酸エチルで３回抽出する。有機相を合せて無水硫
酸ナトリウム上で乾燥し、真空下に蒸発乾固する。After 1 hour, add 20 ons of water + 4 to the solution! diluted with
Stir for a while. The p)l(8,2) of the solution is then brought to 6.4 by addition of concentrated sulfuric acid. The solution was then diluted with 100I
Concentrate to I+1, acidify to pH 2 by addition of 1M sulfuric acid and extract three times with ethyl acetate. The organic phases are combined and dried over anhydrous sodium sulfate and evaporated to dryness under vacuum.
得られた残留物をシリカカラム上のクロマトグラフィー
（溶離：クロロホルム／酢酸、９５：５）により精製す
る。Ｎ−マレオイル−Ｌ−アラニン１．２ｇがこの方法
で得られる。The residue obtained is purified by chromatography on a silica column (elution: chloroform/acetic acid, 95:5). 1.2 g of N-maleoyl-L-alanine are obtained in this way.
収率：４８％。Yield: 48%.
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ）ａｍ−’：
ｆｆ４００．３１００．２９３０．１７８０．１７４０
．１７００．１４６０゜１４２０、１３９０．１３７０
．１３４５．１２２０．１１７５．１１１８゜１０Ｂ０
．１０６８．１０１５． ９７０． ８３５．７００゜
ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣｌ２．δ）：６．７ （２Ｈ
，ｓ）；４．８ （ＩＨ，ｇ）；１．６５ （３Ｈ，
ｄ）
実施例３：
Ｎ−マレオイル−６−アミノカプロン
６−アミノカプロン酸４．２ｇ（３２，３ミリモル）の
飽和炭酸水素ナトリウム溶液１６３ａ＋４２中の溶液に
０℃で、激しくかくはんしなからＮ−カルボメトキシマ
レイミド５ｇ（３２，３ミリモル）を加える。１時間後
溶液を水２５６ｍＪで希釈し、室温で１時間かくはんす
る。次いで溶液のｐＨ（８，２）を濃硫酸の添加により
６．４にする。次いで溶液を１００＋＋１に濃縮し、１
Ｍ硫酸の添加によりｐ１１２に酸性化し、酢酸エチルで
３回抽出する。有機相を合せて無水硫酸ナトリウム上で
乾燥し、真空下に蒸発乾固する。残留物をシリカカラム
上のクロマトグラフィー（溶離：クロロホルム／酢酸、
９５：５）により精製する。この方法でＮ−マレオイル
−６−アミノカプロン酸４．７ｇが得られる。IR spectrum (KBr) am-': ff400.3100.2930.1780.1740
．． 1700.1460°1420, 1390.1370
．． 1345.1220.1175.1118°10B0
．． 1068.1015. 970. 835.700° NMR spectrum (CDCl2.δ): 6.7 (2H
, s); 4.8 (IH, g); 1.65 (3H,
d) Example 3: N-Carbomethoxy is added to a solution of 4.2 g (32.3 mmol) of N-maleoyl-6-aminocaproic acid in saturated sodium bicarbonate solution 163a+42 at 0° C. with vigorous stirring. Add 5 g (32.3 mmol) of maleimide. After 1 hour, the solution is diluted with 256 mJ of water and stirred for 1 hour at room temperature. The pH of the solution (8.2) is then brought to 6.4 by addition of concentrated sulfuric acid. The solution was then concentrated to 100++1
Acidify to p112 by addition of M sulfuric acid and extract three times with ethyl acetate. The organic phases are combined and dried over anhydrous sodium sulfate and evaporated to dryness under vacuum. The residue was chromatographed on a silica column (elution: chloroform/acetic acid,
95:5). 4.7 g of N-maleoyl-6-aminocaproic acid are obtained in this way.
収率：５１％。Yield: 51%.
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ／ａｍ−重）：３．０９０：
２，９４０； ２．８８０； １．７７０；
１．７１０；１．４７０： １．４５０； １．３
８０： １，３７０； １．３４０：１．３１５；
１．２６０； １．２１０； １．１３５；
１，１１０；１．１４０： １，１００； １．
０１５； １．０００； ８１５：８４０；
７３５； ７００゜実施例４：
Ｎ−マレオイル−Ｌ −クルクミンＭｒ −メチルエス
テル
Ｌ−グルタミン酸１ｇ（６，２ミリモル）の飽和炭酸水
素ナトリウム溶液３１．２ｍｌ中の溶液に０℃で激しく
かくはんｃなからＮ−カルボメトキシマレイミド９６１
ｍｇ（６，２ミリモル）を加える。IR spectrum (KBr/am-heavy): 3.090:
2,940; 2.880; 1.770;
1.710; 1.470: 1.450; 1.3
80: 1,370; 1.340: 1.315;
1.260; 1.210; 1.135;
1,110; 1.140: 1,100; 1.
015; 1.000; 815:840;
735; 700° Example 4: A solution of 1 g (6.2 mmol) of N-maleoyl-L-curcumin Mr-methyl ester L-glutamic acid in 31.2 ml of saturated sodium bicarbonate solution at 0° C. with vigorous stirring. N-carbomethoxymaleimide 961
mg (6.2 mmol) is added.
１時間後溶液を水１２６ｎ／！で希釈し、４０℃で１時
間かくはんする。次いで溶液のｐｔｌ（８，２）を濃硫
酸の添加により６．４にする。次いで溶液を５０ｆｆ１
１に濃縮し、１Ｍ硫酸の添加によりｐＨ２に酸性化し、
酢酸エチルで３回抽出する。有機相を合わせ無水硫酸ナ
トリウム上で乾燥し、真空下に蒸発乾固する。得られた
残留物をシリカカラム上のクロマトグラフィー（溶離：
クロロホルム／酢酸、９５：５）により精製する。この
方法で純生成物９５６ｍｇが得られる。After 1 hour, add 126 n/! of water to the solution. Dilute with water and stir at 40°C for 1 hour. The ptl(8,2) of the solution is then brought to 6.4 by addition of concentrated sulfuric acid. Then add 50ff1 of the solution
1 and acidified to pH 2 by addition of 1M sulfuric acid,
Extract three times with ethyl acetate. The organic phases are combined, dried over anhydrous sodium sulphate and evaporated to dryness under vacuum. The resulting residue was chromatographed on a silica column (elution:
Purify by chloroform/acetic acid, 95:5). 956 mg of pure product are obtained in this way.
収率：４９％。Yield: 49%.
ＮＭＲスペクトル ６０ニ
ア、９（ｓ、酸 Ｈ） ；６．５ （ｓ、マレイミ
ド）：４．６ （ｍ、 ＣＨ” ） ； ３．５
（ｓ、ＯＣＨ３） ；２、３ （ｍ、 ｇＬ
ｕ ＣＨ２）ＩＲスペクトル（ＫＢ ｒ） ｃｍ−’
：３．４７０． ３，１１０． ２，９６０． ２，
６００． Ｌ７７５゜１．７５０−１．６９０． １
，４４０． １，４１０． １，２６５−１．１５０゜
１．０９０． １，０１５． ８３０． ７００゜
実施例５：
Ｎ−マレオイル−Ｌ−イソロイシン
実施例２の手順に従い、Ｌ−イソロイシン４２４ｍｇ（
３，２２ミリモル）をＮ−カルボメトキシマレイミド５
００ＩＩＩｇ （３，２ミリモル）で処理することによ
りＮ−マレオイル−Ｌ−イソロイシンが得られる。NMR spectrum 60 near, 9 (s, acid H); 6.5 (s, maleimide): 4.6 (m, CH"); 3.5
(s, OCH3) ;2,3 (m, gL
u CH2) IR spectrum (KB r) cm-'
:3.470. 3,110. 2,960. 2,
600. L775°1.750-1.690. 1
,440. 1,410. 1,265-1.150°1.090. 1,015. 830. 700° Example 5: N-Maleoyl-L-isoleucine Following the procedure of Example 2, 424 mg of L-isoleucine (
3,22 mmol) as N-carbomethoxymaleimide 5
Treatment with 00IIIg (3.2 mmol) gives N-maleoyl-L-isoleucine.
収率：２０％。Yield: 20%.
質量スペクトル（ＣＤ１．イソブタン）：４２３ （２
Ｍ ＋１）、３５２，２７０゜２１２ （Ｍ” ＋
１）、１８８，１６６゜１３２、 １２３゜
ＮＭＲスペクトル（ＣＤ ＣＬ３．） ：８．５５（
肩、ＯＨ）；
６．８５ （２，ｓ、マレイミド 二重結合）；４．６
５ （１，ｄ、 Ｃ“Ｈ）；
２．６ （ｍ、１．ＣＨ）； １．２Ｂ （ｄ、ＣＨ３
）；１．１ （ｍ、 ＣＨ３） 。Mass spectrum (CD1.isobutane): 423 (2
M +1), 352,270°212 (M” +
1), 188, 166° 132, 123° NMR spectrum (CD CL3.): 8.55 (
shoulder, OH); 6.85 (2,s, maleimide double bond); 4.6
5 (1, d, C“H); 2.6 (m, 1.CH); 1.2B (d, CH3
); 1.1 (m, CH3).
実施例６：
Ｎ−マレオイル−Ｌ−アスパラギン酸
α−ベンジルエステル
Ｌ−アスパラギン酸α−ベンジルエステル１ｇ（４，４
８ミリモル）の飽和炭酸水素ナトリウム溶液２２．５ｍ
ｊ２中の溶液に０℃で、激しくかくはんしなからＮ−カ
ルボメトキシマレイミド６９４ｍｇ（４，４８ミリモル
）を加える。Example 6: N-Maleoyl-L-aspartic acid α-benzyl ester L-aspartic acid α-benzyl ester 1 g (4,4
22.5 m of a saturated sodium bicarbonate solution (8 mmol)
694 mg (4.48 mmol) of N-carbomethoxymaleimide are added to the solution in C.j2 at 0.degree. C. while stirring vigorously.
１時間後溶液を水９１ｍ１で希釈し、４０℃で１時間か
くはんする。次いで溶液のｐＨ（８，２）を濃硫酸の添
加により６．４にする。次いで溶液を５０１１１１に濃
縮し、１Ｍ硫酸の添加によりｐＨ２に酸性化し、酢酸エ
チルで３回抽出する。After 1 hour, the solution is diluted with 91 ml of water and stirred for 1 hour at 40°C. The pH of the solution (8.2) is then brought to 6.4 by addition of concentrated sulfuric acid. The solution is then concentrated to 501111, acidified to pH 2 by addition of 1M sulfuric acid and extracted three times with ethyl acetate.
有機相を合せ、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空下
で蒸発乾固する。The organic phases are combined, dried over anhydrous sodium sulfate and evaporated to dryness under vacuum.
得られた残留物をシリカカラム上のクロマトグラフィー
（溶離：クロロホルム／酢酸、９５：５）により精製す
る。この方法で純生酸物２６７ｍｇ：６Ｃ得られる。The residue obtained is purified by chromatography on a silica column (elution: chloroform/acetic acid, 95:5). This method yields 267 mg of pure raw acid: 6C.
収率：２０％。Yield: 20%.
ＮＭＲスペクトル（ＣＤａＯＤ、 ６０ ＭＨ２，ｐｐ
ｌｌ）ニア、１ （５Ｈ，ｍ、ベンジル Ｈ）；６．
６ （２Ｈ，ｓ、マレイミド ａｂ）；５ （２Ｈ
，ｓ、ベンジル ＣＨｚ）３、１ （２Ｈ，ｍ、
ＣＨｚ ） 。NMR spectrum (CDaOD, 60 MH2, pp
ll) Near, 1 (5H, m, benzyl H); 6.
6 (2H,s, maleimide ab); 5 (2H
,s, benzyl CHz)3,1 (2H,m,
Hz).
ＩＲスペクトル（Ｋｉ３ｒ、 ａｍ−’） ：３０６
０、１７６５．１７４５．１？２０．１４１０．１２７
０゜８３０、 ７４０． ７５０゜
実施例７：
Ｎ−マレオイル−１１−アミノウンデカン無水マレイン
酸（２，４ｇ、２４．８ミリモル）の酢酸１０．１ｍｌ
中の溶液を１１−アミノウンデカン酸（５ｇ、２４．８
ミリモル）の酢酸３０ｍ１中の溶液に加え、混合物を室
温で３時間激しくかくはんして維持する。IR spectrum (Ki3r, am-'): 306
0, 1765.1745.1?20.1410.127
0°830, 740. 750° Example 7: N-Maleoyl-11-aminoundecane maleic anhydride (2.4 g, 24.8 mmol) in 10.1 ml of acetic acid
The solution in 11-aminoundecanoic acid (5 g, 24.8
mmol) in 30 ml of acetic acid and the mixture is kept at room temperature with vigorous stirring for 3 hours.
白色沈殿を濾過し、冷酢酸で洗浄し、乾燥する（６，３
ｇ、２１．１ミリモル、８５％）。沈殿３ｇ（１０，０
０ミリモル）を乾燥トルエン（３００ｎｌ）に溶解し、
トリエチルアミン（２ｇ、２２．２ミリモル）を加える
。The white precipitate is filtered, washed with cold acetic acid and dried (6,3
g, 21.1 mmol, 85%). 3g of precipitate (10,0
0 mmol) was dissolved in dry toluene (300 nl),
Add triethylamine (2 g, 22.2 mmol).
溶液をディーン・アンド・スターク（Ｄｅａｎ ａｎｄ
Ｓｔａｒｋ ）装置中で激しくかくはんしながらトルエ
ンが蒸発するまで還流する。生成物をシリカカラム上で
精製する（溶離：クロロホルム／酢酸、９５：５）。こ
の方法でＮ−マレオイル−１１−アミノウンデカン酸１
．０６ｇが得られる。The solution was prepared by Dean and Stark.
Reflux with vigorous stirring in a Stark) apparatus until the toluene evaporates. The product is purified on a silica column (elution: chloroform/acetic acid, 95:5). In this method, N-maleoyl-11-aminoundecanoic acid 1
．． 06g is obtained.
収率：３７％。Yield: 37%.
ＮＭＲスペクトル（６０ＭＨｚ ＣＤＣｊ！３ 、ｐ
ｐｍ） ：８．８ （ｂｐ、Ｃ００Ｈ）；
６．５ （２Ｈ，Ｓ、 ？レイミド ｄｂ）Ｃ３，４（
２Ｈ＋ ｍ、ＣＨｚ ） Ｃ２，３（２Ｈ，ｍ、ＣＨ
ｚ ）；
１．２ （１６Ｈ，ｂ ｐ、 ８ ＧＨｚ ） 。NMR spectrum (60MHz CDCj!3, p
pm) :8.8 (bp, C00H); 6.5 (2H,S, ?reimide db)C3,4(
2H+ m, CHz) C2,3(2H,m,CH
z); 1.2 (16H, b p, 8 GHz).
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ、 ｃｌｌ−’） ：３４５
０、３１００．２９１０．２８５０．１７７０．１７０
０．１６１０゜１５９０、１４７０．１４５０．１４２
０．１３７５．１３４０．１３１０゜１２８帆 １２４
０． １１８０． １１２５．８４０．７００゜実施例
８：
Ｎ−マレオイル−１２−アミノドデカン無水マレイン酸
（２，２８ｇ、 ２３．２２ミリモル）の酢酸９．６
ｍｊｉ中の溶液を１２−アミノドデカン酸（５ｇ、２３
．２２ミリモル）の酢酸２８ｍ１中の溶液に加え、混合
物を室温で３時間激しくかくはんして維持する。IR spectrum (KBr, cll-'): 345
0, 3100.2910.2850.1770.170
0.1610°1590, 1470.1450.142
0.1375.1340.1310°128 sail 124
0. 1180. 1125.840.700° Example 8: N-Maleoyl-12-aminododecane maleic anhydride (2.28 g, 23.22 mmol) in acetic acid 9.6
The solution in mji was mixed with 12-aminododecanoic acid (5 g, 23
．． 22 mmol) in 28 ml of acetic acid and the mixture is kept at room temperature with vigorous stirring for 3 hours.
白色沈殿を濾過し、冷酢酸で洗浄し、乾燥する（６．２
ｇ、２０．９ミリモル、８６％）。沈殿４．９ｇ（１５
，９ミリモル）を乾燥トルエン（５００ｎｌに溶解し、
トリエチルアミン（４，９ｍｊ！、 ３５分）で処理
する。溶液をディーン・アンド・スターク装置中で激し
くかくはんしながらトルエンが蒸発するまで還流する。The white precipitate is filtered, washed with cold acetic acid and dried (6.2
g, 20.9 mmol, 86%). Precipitate 4.9g (15
, 9 mmol) in dry toluene (500 nl),
Treat with triethylamine (4,9 mj!, 35 min). The solution is refluxed in a Dean and Stark apparatus with vigorous stirring until the toluene evaporates.
生成物をシリカカラム上で精製する（溶離：クロロホル
ム／酢酸、９５：５）。The product is purified on a silica column (elution: chloroform/acetic acid, 95:5).
この方法で、Ｎ−マレオイル−１２−アミノドデカン酸
１．３８ｇが得られる。In this way 1.38 g of N-maleoyl-12-aminododecanoic acid are obtained.
収率：２９％。Yield: 29%.
ＮＭＲスペクトル（６０ＭＨｚ、 ＣＤＣ１’ ：ｌ
、 ｐｐｍ） ：６．５２ （２Ｈ，ｓ、マレイミド
ｃｔｂ）；３．４２ （２Ｈ，ｍ、 ＣＨｔ ）
；２．３ （２Ｈ，ｍ、ＣＨｔ ） ；１．
２５（１８Ｈ，ブロードピーク、９−ＣＨ２−）ＩＲス
ペクトル（Ｋ Ｂ ｒ 、 ｅｌｍ−’）：３４５０、
３０８０． ２９２０． ２８２５． １７７０．
１４７０゜１４５０、 １４４０． １４１５． １３
８０． １３４０． １３００゜１２６０、 １２５０
． １２０５． １１２０． ９２０． ８４０゜
７００゜
実施例９：
４−（Ｎ−マレオイル−Ｌ−アラニル）互ｙ１コじ（Ｌ
乙−一一一一一一一一一一クロロギ酸イソブチル１．１
７ ｃａｌ！ （０，００９モル）の酢酸エチル５ ｒ
ａｌｌ中の溶液をＮ−マレオイルアラニン１．５２ ｇ
（０，００９モル）およびトリエチルアミン１．２５
ｍｌ（０，００９モル）の酢酸エチル１０ｎ＋ｆｆｉ
中の０℃に冷却した溶液に滴加する。混合物を１時間３
０分０℃でかくはんし、酢酸エチル２０ｍｊ！中に溶解
した０４−デアセチルビンブラスチン２．３ ｇ （０
，００３モル）を、温度を０℃に保ちながら加える。次
いで混合物を室温に戻し、１０時間かくはんする。酢酸
エチル５０ｒａ１および１０％濃度の炭酸ナトリウム水
溶液５０ｍｊ！を加える。混合物をかくはんし、有機相
をデカントして分離する。水相を酢酸エチルで３回抽出
する。有機相を合せて水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウ
ム上で乾燥し、真空下に蒸発乾固する。得られた残留物
をシリカカラム上のクロマトグラフィー（溶離ニジクロ
ロメタン／メタノール、９２：８）により精製する。そ
れにより純生成物１、８６ ｇが得られる。NMR spectrum (60 MHz, CDC1': l
, ppm): 6.52 (2H,s, maleimide
ctb); 3.42 (2H, m, CHt)
;2.3 (2H,m,CHt) ;1.
25 (18H, broad peak, 9-CH2-) IR spectrum (KBr, elm-'): 3450,
3080. 2920. 2825. 1770.
1470°1450, 1440. 1415. 13
80. 1340. 1300°1260, 1250
．． 1205. 1120. 920. 840° 700° Example 9: 4-(N-maleoyl-L-alanyl)
B-11111111 Isobutyl chloroformate 1.1
7 cal! (0,009 mol) of ethyl acetate 5 r
1.52 g of N-maleoylalanine solution in all
(0,009 mol) and triethylamine 1.25
ml (0,009 mol) of ethyl acetate 10n+ffi
Add dropwise to the solution cooled to 0°C. mix for 1 hour 3
Stir at 0℃ for 0 minutes and add 20mj of ethyl acetate! 2.3 g of 04-deacetylvinblastine (0
,003 mol) is added while maintaining the temperature at 0°C. The mixture is then brought to room temperature and stirred for 10 hours. Ethyl acetate 50ra1 and 10% aqueous sodium carbonate solution 50mj! Add. The mixture is stirred and the organic phase is decanted and separated. The aqueous phase is extracted three times with ethyl acetate. The combined organic phases are washed with aqueous solution, dried over magnesium sulphate and evaporated to dryness under vacuum. The residue obtained is purified by chromatography on a silica column (eluent dichloromethane/methanol, 92:8). This gives 1.86 g of pure product.
収率：６７．６％。Yield: 67.6%.
質量スペクトル（ＣＤＩ、 イソブタン）：９３５
（Ｍ＋１４）、９２２ （Ｍ＋１）。Mass spectrum (CDI, isobutane): 935
(M+14), 922 (M+1).
９２１ （Ｍ）、７５１，６９３，５１９゜４４５．
３７１，１３３゜
ＮＭＲスペクトル（ＣＤ Ｃｊ！ ３ 、３６０ Ｍｌ
ｌｚ 、ｐｐｍ） ：８ （ＮＨ，ＩＨ）；
７．５−７ （４＋１，１１−９’ 、１１−１０’
、Ｈ−１１’ 、Ｈ−１２’）；６．７（２Ｈ，酸無水
物）；
６．５５ （ＩＨ，Ｈ−１４） ｉ６．０５ （
ＬＨ，Ｈ−１７） ｉ５．８５ （ＬＨ，Ｈ−７）
；
５．４５ （Ｉｆ（、Ｈ−４） ；５．１５ （
ＩＨ，Ｈ−６） ；
４．８ （ｌ）ｉ、ＣＨ“ ） ；３．９５ （
ＩＨ，Ｈ−１７’） ；３．８５ （３Ｈ，−ＯＭ
ｅ） ；３．７８ （３Ｈ，−ＯＭｅ） ；３．
７ （ＩＨ，Ｈ−２） ；
３．６ （３Ｈ，−ＯＭｅ） ；２．７ （
３Ｈ，ＮＭｅ） ；
１．７２（３Ｈ，アラニン ＣＨｓ）；０．９−０．８
（６Ｈ，ＣＨ，ｌ−２１，ＣＨｓ−２１’）。921 (M), 751,693,519°445.
371,133° NMR spectrum (CD Cj! 3, 360 Ml
lz, ppm): 8 (NH, IH); 7.5-7 (4+1, 11-9', 11-10'
, H-11', H-12'); 6.7 (2H, acid anhydride); 6.55 (IH, H-14) i6.05 (
LH, H-17) i5.85 (LH, H-7)
; 5.45 (If (, H-4) ; 5.15 (
IH, H-6); 4.8 (l)i, CH“); 3.95 (
IH,H-17') ;3.85 (3H,-OM
e);3.78 (3H,-OMe);3.
7 (IH, H-2); 3.6 (3H, -OMe); 2.7 (
3H, NMe); 1.72 (3H, alanine CHs); 0.9-0.8
(6H, CH, l-21, CHs-21').
実施例１０：
４−（Ｎ−マレオイル−６−アミノカプロイル）ピンブ
ースチン
クロロギ酸イソブチル３７１μＪ（２，８６１ミリモル
）の酢酸エチルｌ ｌ１ｌｌ中の溶液をＮ−マレオイル
−６−アミノカプロン酸６０４■（２，８６１ミリモル
）およびＮ−メチルモルホリン５１４μｌ（４，６５ミ
リモル）の酢酸エチル４ ｍｌ中の０℃に冷却した溶液
に滴加する。混合物を０℃で３分間かくはんし、次いで
酢酸エチルＩ ｌｌｌ１ｌに溶解した０４−デアセチル
ビンブラスチン５５０■（０，７１５ミリモル）を、温
度を０℃に保ちながら加える。次いで混合物を室温に戻
し、１０時間かくはんする。溶液を濾過し、酢酸エチル
相を真空下に蒸発乾固する。得られた残留物をシリカカ
ラム上のクロマトグラフィー（溶離ニジクロロメタン／
メタノール、９６：４）により精製する。それにより純
生成物２６３■が得られる。Example 10: 4-(N-Maleoyl-6-aminocaproyl) pinboustin A solution of 371 μJ (2,861 mmol) of isobutyl chloroformate in 111 ml of ethyl acetate was added to 604 μl of N-maleoyl-6-aminocaproic acid ( 2,861 mmol) and 514 μl (4.65 mmol) of N-methylmorpholine in 4 ml of ethyl acetate, cooled to 0° C., are added dropwise. The mixture is stirred for 3 minutes at 0 DEG C. and then 550 μm (0,715 mmol) of 04-deacetyl vinblastine dissolved in 111 liters of ethyl acetate are added while maintaining the temperature at 0 DEG C. The mixture is then brought to room temperature and stirred for 10 hours. The solution is filtered and the ethyl acetate phase is evaporated to dryness under vacuum. The resulting residue was chromatographed on a silica column (eluent dichloromethane/
methanol, 96:4). This gives 263 .mu. of pure product.
収率：２３％。Yield: 23%.
質量スペクトル（ＤＣｌ、 イソブタン）：９９３；９
７９；９６５ （Ｍ” ＋４）；９６３（Ｍ’″＋２）
；９６１ （Ｍ”）；９４６； ９３３：
９２０； ９０６；８１２； ７５４； ６９３
゜
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ、 ｃｌｌｌ−’） ：３
．４００ ； ３．０５０； ２．９４０ｉ
１．７４０； １．７００：１．６１５ ； １
．５００； １．４６０； １．４４０；１，４１
０；１．３７０ ； １．２２０； １，１７０
； １，０４０゜ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣｆｆ１３
、３６０ ＭＨｚ 、 ｐｐｍ）ニア、４７−７．１
２（４１（、ｍ、）ｌ”’ 、Ｈ”’ 、ＩＩ３’ 、
Ｈ”’）；６．６５ （２Ｈ，ｓ、マレイミド ｄｂ）
；６．５５ （１４，ｓ、 Ｈ”） 霊６．０５
（ＩＨ，ｓ、 ＨＩ３） ；５．８２ （Ｉ
Ｈ，ｍ、 Ｈ’ ） ；５．４２ （ＩＨ，ｓ
、 Ｈ’ ） ；５．２５ （ＩＨ，ｍ、
Ｈｂ ） ；３．９２ （ＬＨ，ｍ、 Ｈ”’）
；３、７７ （６Ｈ、ｓ 、 ＯＣＨ３、Ｃ”
’ ＯＯＣＨ３） ；３．７０ （ＩＨ，ｓ、Ｈ”
） ；３．６ （３Ｈ，ｓ、 Ｃ”’０Ｏ
ＣＨ：＋） ；２．７ （３Ｈ，ｓ、ＮＣＨ３）
；２．３２（ｍ、アミノカプロン ＣＨｚ）；１．
６２（ｍ、アミノカプロン ＣＨｚ）ｉｏ、９−０．８
（６Ｈ，ｔ、ＣＨｉ−２１＋ＣＨｚ−２１’）。Mass spectrum (DCl, isobutane): 993; 9
79;965 (M"+4);963(M'"+2)
;961 (M”);946;933:
920; 906; 812; 754; 693
゜IR spectrum (KBr, cllll-'): 3
．． 400; 3.050; 2.940i
1.740; 1.700:1.615; 1
．． 500; 1.460; 1.440; 1,41
0; 1.370; 1.220; 1,170
; 1,040° NMR spectrum (CDCff13
, 360 MHz, ppm) Near, 47-7.1
2(41(,m,)l"', H"', II3',
H"'); 6.65 (2H,s, maleimide db)
;6.55 (14,s, H”) Spirit 6.05
(IH,s, HI3) ;5.82 (I
H, m, H'); 5.42 (IH, s
, H') ;5.25 (IH,m,
Hb); 3.92 (LH, m, H"')
;3,77 (6H,s, OCH3,C"
'OOCH3) ;3.70 (IH,s,H"
) ;3.6 (3H,s, C”'0O
CH:+);2.7 (3H,s,NCH3)
;2.32 (m, aminocapron CHHz);1.
62 (m, aminocapron CHz) io, 9-0.8
(6H, t, CHi-21+CHz-21').
実施例１１：
４−（Ｎ−マレオイル−Ｌ−グルタミル）ビンブラスチ
ンγ−メチルエスール
クロロギ酸イソブチル１５２μｍ（１，１７０ミリモル
）の酢酸エチルＩＩＩＩｌ中の溶液を、Ｎ−マレオイル
−Ｌ−グルタミン酸Ｔ−メチルエステル２８２■（１，
１７０ミリモル）およびトリエチルアミン１６３μｊ！
（１，１７０ミリモル）の酢酸エチル１．４ｍｍ！中の
０℃に冷却した溶液に滴加する。Example 11: A solution of 152 μm (1,170 mmol) of 4-(N-maleoyl-L-glutamyl)vinblastine γ-methylethyl isobutyl chloroformate in ethyl III acetate is added to T-methyl N-maleoyl-L-glutamic acid. Esther 282■ (1,
170 mmol) and triethylamine 163 μj!
(1,170 mmol) of ethyl acetate 1.4 mm! Add dropwise to the solution cooled to 0°C.
混合物を０℃で４分間かくはんし、次いで酢酸エチルＩ
ｌ１ｌｌに溶解した０４−デアセチルビンブラスチン
３００■（０，３９０ミリモル）を、温度を０℃に保ち
ながら加える０次いで混合物を室温に戻して１０時間か
くはんする。溶液を濾過し、存機相を減圧下に濃縮する
。得られた残留物をシリカカラム上のクロマトグラフィ
ー（溶離：エタノール／酢酸エチル、３０：９０）によ
り精製する。The mixture was stirred at 0 °C for 4 min, then ethyl acetate I
300 μm (0,390 mmol) of 04-deacetylvinblastine dissolved in 11 liters are added while maintaining the temperature at 0° C. The mixture is then brought to room temperature and stirred for 10 hours. The solution is filtered and the remaining organic phase is concentrated under reduced pressure. The residue obtained is purified by chromatography on a silica column (elution: ethanol/ethyl acetate, 30:90).
それにより純生成物２２２■が得られる。This gives 222 .mu. of pure product.
収率：３８％。Yield: 38%.
質量スペクトル（ＤＣｌ、 イソブタン）：１．０３６
． １，０２２． １，００９．９９５ （Ｍ” ＋
４） 。Mass spectrum (DCl, isobutane): 1.036
．． 1,022. 1,009.995 (M”+
4).
９９２ （Ｍ” ＋１） 、 ９３７． ８８
５． ８１１． ７５１゜６９４、 ６３５． ５４１
゜
ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣｊ！ ２．３６０ ＨＩ２
、ｐｐｍ ） ：９．４ （ＩＨ，ｍ、ＯＨ）
；
８ （ＩＨ，ｓ、ｉｎｄ ＮＨ） ；７．５−
７．１０ （４８，ｍ、Ｈ” ’ 、Ｈ”’ 、Ｈ′３
’ 、Ｉ”’）；６．７ （２Ｈ，ｓ、マレイミド ｄ
ｂ）；６．５８ （ＩＨ，ｓ、Ｈ”） ；６．０５
（ＬＨ，ｓ、ＨＩ３） ；５．８０ （ＬＨ，
ｍ、Ｈ’ ） ；５．４８ （ＩＨ，ｓ、Ｈ’ ）
；５．２５ （ＩＨ，ｍ、Ｈ’ ） ；４．７
３ （１８，ｍ、ＧＬｕＣＨ” ） ；３．９５
（ＩＨ，ｍ、Ｈ”’） ；３．８５ （３Ｈ，ｓ
、 ａ ｒ ０ＣＨ２） ？３．７５ （３
Ｈ，ｓ、Ｃ”０ＯＣＨｓ ）’；３．６３ （３Ｈ，
ｓ、Ｃ”’ ０ＯＣＨ３） ；３．５８ （３Ｈ，
ｓ、ＧＬｕＯＣＨ３） ；２．８０ （３Ｈ，ｓ、
ＮＣＨｓ ） ；２．３８ （ｍ、 ＧＬ
ｕＣＨｚ ） ；０．９−０．８（６Ｈ，ｔ、ＣＨ
Ｉ”＋ＣＨ３旧′）。992 (M”+1), 937.88
5. 811. 751°694, 635. 541
゜NMR spectrum (CDCj! 2.360 HI2
, ppm): 9.4 (IH, m, OH)
; 8 (IH, s, ind NH); 7.5-
7.10 (48, m, H"', H"', H'3
' , I"'); 6.7 (2H,s, maleimide d
b); 6.58 (IH, s, H”); 6.05
(LH, s, HI3) ;5.80 (LH,
m, H'); 5.48 (IH, s, H')
;5.25 (IH, m, H') ;4.7
3 (18, m, GLuCH"); 3.95
(IH, m, H"'); 3.85 (3H, s
, a r 0CH2)? 3.75 (3
H,s,C"0OCHs)'; 3.63 (3H,
s, C"'0OCH3); 3.58 (3H,
s, GLuOCH3); 2.80 (3H, s,
NCHs); 2.38 (m, GL
uCHz);0.9-0.8(6H,t,CH
I"+CH3 old').
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ）ｃｍ−’：
３．４３０． １，７４０． １，７１５． １，６１
５． １，５００゜１．４６０． １，４３０． １，
４０５． １，３８５． １，２５０゜１．２２５．
１，０３０． １，００５． ８２５゜実施例１２
：
４−（Ｎ−マレオイル−Ｎ−イソロイシル）ピンブース
チン
クロロギ酸イソブチル９２μｆ （０，７１０９ミリモ
ル）の酢酸エチル１１１１中の溶液を、Ｎ−マレオイル
−Ｌ−イソロイシン１５０■（０，７１０９ミリモル）
およびトリエチルアミン９９μｇ （０，７１０９ミ
リモル）の酢酸エチル１ ｍｆ中の０℃に冷却した溶液
に滴加する。混合物を０℃で３分間かくはんし、次いで
酢酸エチルｌ ｍｊ！に溶解した。４−デアセチルビン
ブラスチンを、温度を０℃に保ちながら加える。次いで
混合物を室温に戻し、１０時間かくはんする。溶液を濾
過し、酢酸エチル相を真空下に蒸発乾固する。得られた
残留物をシリカカラム上のクロマトグラフィー（溶離：
エタノール／酢酸エチル、３０：９０）により情調する
。IR spectrum (KBr) cm-': 3.430. 1,740. 1,715. 1,61
5. 1,500°1.460. 1,430. 1,
405. 1,385. 1,250°1.225.
1,030. 1,005. 825° Example 12
: A solution of 4-(N-maleoyl-N-isoleucine) pinboustine isobutyl chloroformate 92 μf (0,7109 mmol) in ethyl acetate 150 μf (0,7109 mmol)
and triethylamine (0.7109 mmol) in 1 mf of ethyl acetate cooled to 0° C. are added dropwise. The mixture was stirred at 0°C for 3 minutes, then ethyl acetate l mj! dissolved in. 4-Deacetylvinblastine is added keeping the temperature at 0°C. The mixture is then brought to room temperature and stirred for 10 hours. The solution is filtered and the ethyl acetate phase is evaporated to dryness under vacuum. The resulting residue was chromatographed on a silica column (elution:
Condition with ethanol/ethyl acetate, 30:90).
それにより純生成物１３３■が得られる。This gives 133 .mu. of pure product.
収率：４０％。Yield: 40%.
ｔｆｆｉスペクトル（ＤＣＩ、 アセトン）：１．０３
９ ； ９６３ （Ｍ” ＋２） ； ９０４
；８１２；７６９ ； ７２８；６３７；５９３
； ５４９゜ＩＲスペクトル（ＫＢｒ、 ｃｎ−
’） ：３．４８０−３．４００ ：２．９６０
；２．９２０； ２，８８０゜１．７７５ ；１
．７４０ ；１．７１０ 、 １．６１０； １
．５００；１．４６０ ；１，４３０ ；１．３８
０ ； １．２５０； １，２２０；１．０４０
；１．０００ ； ８３０ 、 ７４０゜
ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣＩ２３．３６０ ｍＨｚ 、
ｐｐｍ ） ：９．４ （ｍ、ＯＨ）。tffi spectrum (DCI, acetone): 1.03
9; 963 (M”+2); 904
;812;769;728;637;593
; 549° IR spectrum (KBr, cn-
') :3.480-3.400 :2.960
;2.920; 2,880°1.775 ;1
．． 740; 1.710, 1.610; 1
．． 500; 1.460; 1,430; 1.38
0; 1.250; 1,220; 1.040
; 1.000; 830, 740° NMR spectrum (CDCI23.360 mHz,
ppm): 9.4 (m, OH).
７．５−７．１（４Ｈ，ｍ、ａｒｏｍ、 Ｃ１ｌ １１
’ −１２’ −１３’ −１４’ ） ；６．６５
（２Ｈ，ｓ、ｄ マレイミド 二重結合）；６．６
（ＩＨ，ｓ、Ｃ”−Ｈ）；
６．０５ （Ｉ Ｈ，ｓ、 Ｃ”−Ｈ） ；５．８
（ＩＨ，ｓ、Ｃ’−Ｈ）；
５．４５ （ＩＨ，ｓ、Ｃ’−Ｈ）；
５．２５ （ＬＨ，ｍ、 Ｃ’ −Ｈ） ；４
．５ （ＩＨ，ｄ、 Ｃ−Ｈ） ｉ３．９５
（ＩＨ，ｍ、’Ｈ”’） ；３．８ （３Ｈ＋
ｓ、ＯＣＨ３ａｒ） ；３．７５ （３Ｈ，ｓ
、Ｃ”０ＯＣＨｓ ） ；３．７ （ＬＨ，ｓ、
Ｈ” ） ；３．６ （３Ｈ，ｓ、 Ｃ”’
０ＯＣＨｓ ） ；２．６５ （３Ｈ，ｓ、
ＮＣＨ３） ；１．１ （ｄ、 ３Ｈ，イソロ
イシン ＣＨ３）；０．９−０．８（９Ｈ，ｍ、イソロ
イシンＣＩ３ ＋ ＣＩ２ −２１ ’ ＋ ＣＨｚ
２１）。7.5-7.1 (4H, m, arom, C1l 11
'-12'-13'-14'); 6.65
(2H, s, d maleimide double bond); 6.6
(IH, s, C”-H); 6.05 (I H, s, C”-H); 5.8
(IH, s, C'-H); 5.45 (IH, s, C'-H); 5.25 (LH, m, C'-H); 4
．． 5 (IH, d, C-H) i3.95
(IH, m, 'H"') ;3.8 (3H+
s, OCH3ar); 3.75 (3H, s
, C”0OCHs ) ;3.7 (LH,s,
H” ); 3.6 (3H,s, C”'
0OCHs) ;2.65 (3H,s,
NCH3); 1.1 (d, 3H, isoleucine CH3); 0.9-0.8 (9H, m, isoleucine CI3 + CI2 -21' + CHz
21).
実施例１３：
４−（Ｎ−マレオイル−Ｌ−アスパルチル）ビンブラス
チンα−ベンジルエステル
クロロギ酸イソブチル１１４μｍ （０，８８ミリモル
）の酢酸エチル１ ｍｌｌ中の溶液Ｉ Ｎ−マレオイル
−Ｌ−アスパラギン酸α−ベンジルエステル２６７■（
０，８８ミリモル）およびトリエチルアミン１１８μＪ
（０，８８ミリモル）の酢酸エチル１ ｍｌｔ中の０℃
に冷却した溶液に滴加する。Example 13: 4-(N-Maleoyl-L-aspartyl)vinblastine α-benzyl ester A solution of 114 μm (0,88 mmol) of isobutyl chloroformate in 1 ml of ethyl acetate I α-benzyl N-maleoyl-L-aspartate Esther 267 ■ (
0.88 mmol) and triethylamine 118 μJ
(0.88 mmol) in 1 ml of ethyl acetate at 0 °C
Add dropwise to the cooled solution.
混合物を０℃で４分間か（はんし、次いで酢酸エチル１
ｍｌに溶解した０４−デアセチルビンブラスチン２２
７■（０，２９ミリモル）を、温度を０℃に保ちながら
加える。次いで混合物を室温に戻、して−夜か（はんす
る。Heat the mixture at 0°C for 4 minutes, then add 1 ounce of ethyl acetate.
04-deacetylvinblastine 22 dissolved in ml
7■ (0.29 mmol) are added while maintaining the temperature at 0°C. The mixture is then brought to room temperature and allowed to stand overnight.
溶液を濾過し、有機相を減圧下に濃縮する。得られた残
留物をシリカカラム上のクロマトグラフィー（溶離：エ
タノール／酢酸エチル、３０：９０）により精製する。The solution is filtered and the organic phase is concentrated under reduced pressure. The residue obtained is purified by chromatography on a silica column (elution: ethanol/ethyl acetate, 30:90).
それにより純生成物１０５■が得られる。This gives 105 .mu. of pure product.
収率：３４％。Yield: 34%.
ＮＭＲスペクトル（ＣＤ（Ｊ ３ 、３６０ ＭＨｚ、
ｐｐｍ ）：８．０５ （Ｉ Ｈ，ｓ、 ｉｎｄ
１ｈ’ ＮＨ）；７．５−７．１７ （４Ｈ，ｔａ、
Ｈ” ’Ｈ”’Ｉｆ”’ＨＩ４’）；７．３７−７．
３ （５Ｈ，ｍ、ベンジル Ｈ）；６．７５ （２Ｈ，
ｓ、マレイミド ｄｂ）。NMR spectrum (CD (J3, 360 MHz,
ppm): 8.05 (I H,s, ind
1h'NH); 7.5-7.17 (4H, ta,
H"'H"'If"'HI4'); 7.37-7.
3 (5H, m, benzyl H); 6.75 (2H,
s, maleimide db).
６．６０ （ＬＨ，ｓ、８１′）；
６．１０ （ＩＨ，ｓ、Ｈ１７）；
５．８７ （ＩＨ，ｍ、Ｈ’ ）；
５．４５ （ＩＨ，ｓ、Ｈ’ ）；
５．３０ （ＩＨ，ｍ、Ｈ６） ；５−２０ （
２Ｈ，ｍ、 ベンジル ＣＨ，）；３．９５ （ＬＨ
，ｍ、 Ｈ′７′） ？３．８２−３．７５（６Ｈ
，ｓ、 ○Ｃｌ（、＋ ＣＯＯＣＨ，”）。6.60 (LH, s, 81'); 6.10 (IH, s, H17); 5.87 (IH, m, H'); 5.45 (IH, s, H'); 5.30 (IH, m, H6) ;5-20 (
2H,m, benzyl CH,); 3.95 (LH
, m, H'7')? 3.82-3.75 (6H
,s, ○Cl(,+COOCH,”).
３．７０ （ＬＨ，ｓ、Ｈｚ） ；３．６２ （
３Ｈ，ｓ、 Ｃ”’ ０ＯＣＩ（３） ；２．６０
（３Ｈ，ｓ、ＮＣＨ，） ；０．９−０．８（６
Ｈ，ｔ、 ＣＨ３−２１＋ ＣＨ３−２１′）。3.70 (LH, s, Hz); 3.62 (
3H,s, C"'0OCI(3); 2.60
(3H,s,NCH,) ;0.9-0.8(6
H, t, CH3-21+ CH3-21').
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ、 ａｍ−’）３４６０、
３０３０． ２９６０． ２８８０． １７７０． １
？４０゜１７１５、 １６１０． １５００． １４６
０． １４３０． １４１０゜１３Ｂ０． １２６０．
１２２０． １１７５． １１１０． １０２５゜９
１０、 ８００． ７３０． ７００゜質量スペ
クトル（ＤＣＩ、イソブタン）：１０８５、 １０７１
． １０５７． １０５４． １０３９． １０２３゜
１０１３、 ７６８． ７０８． ５４２． １５８゜
実施例１４：
４−（Ｎ−マレオイル−１１−アミノ
文ｙ９）し仕仁弘り旦ｙ１］ｊ鷺り乙−一クロロギ酸イ
ソブチル２１８μｆ（１，６９ミリモル）の酢酸エチル
１ ｍｊ！中の溶液を、Ｎ−マレオイル−１１−アミノ
ウンデカン酸４７６■（１，６９ミリモル）およびＮ−
メチルモルホリン３２６μｍ（２，８ミリモル）の酢酸
エチル３ ｍｌ中の０℃に冷却した溶液に滴加する。混
合物を０℃で３分間かくはんし、次いで酢酸エチル１−
１に溶解した０４−デアセチルビンブラスチン４３３■
（０，５６ミリモル）を、温度を０℃に保ちながら加え
る。次いで混合物を室温に戻して一夜かくはんする。
・
溶液を濾過し、酢酸エチル相を真空下に蒸発乾固する。IR spectrum (KBr, am-') 3460,
3030. 2960. 2880. 1770. 1
? 40°1715, 1610. 1500. 146
0. 1430. 1410°13B0. 1260.
1220. 1175. 1110. 1025°9
10, 800. 730. 700° mass spectrum (DCI, isobutane): 1085, 1071
．． 1057. 1054. 1039. 1023°1013, 768. 708. 542. 158゜Example 14: 4-(N-maleoyl-11-amino y9) ethyl acetate 1 mj of isobutyl monochloroformate 218 μf (1,69 mmol)! The solution was mixed with 476 μm (1,69 mmol) of N-maleoyl-11-aminoundecanoic acid and N-
Add dropwise to a solution of 326 μm (2.8 mmol) of methylmorpholine in 3 ml of ethyl acetate cooled to 0°C. The mixture was stirred at 0°C for 3 minutes, then ethyl acetate 1-
04-Deacetylvinblastine 433■ dissolved in 1
(0.56 mmol) is added while maintaining the temperature at 0°C. The mixture is then allowed to come to room temperature and stirred overnight.
- Filter the solution and evaporate the ethyl acetate phase to dryness under vacuum.
得られた残留物をシリカカラム上のクロマトグラフィー
（溶離：エタノール／酢酸エチル、３０：９０）により
精製する。それにより純生成物２４０■が得られる。The residue obtained is purified by chromatography on a silica column (elution: ethanol/ethyl acetate, 30:90). This gives 240 ml of pure product.
収率：４１％。Yield: 41%.
ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣｌ１ｓ 、３６０ ＭＨｚ
ｔｐｐ＋ｎ ）：８ （ＩＨ，ｓ、ｉｎｄ ”’ＮＨ）
；７．５−７．１３（４Ｈ１ｍ＋８” ’ １１２ ’
１１１３ ’ ｌ（” ’ ）：６．６８ （２Ｈ，
ｓ、マレイミド ｄｂ）；６．６３ （ＩＨ，ｓ、Ｈ
１４） ；６．１０ （ＩＨ，ｓ、Ｈ”） ；５
．８３ （ＩＨ，ｍ、Ｈ’ ） ；５．４８ （
ＩＨ，ｓ、 Ｈ’ ） ；５．２５ （ＩＨ，
ｍ、Ｈ’ ） ；３．９５ （ＩＨ，ｍ、Ｈ”’）
；３．８０ （６Ｈ１ａ＋０ｃＨ３”ｃ”０ＯＣ
Ｈｓ）；３．７３ （ＩＨ，ｓ、Ｈ”） ；３−６
（３ＨＴ ｓ 、Ｃ”ＯＯＣＨｓ ） ｓ
２．７ （３Ｈ，ｓ、ＮＣＨ３） ；１．２８（
１６Ｈ，ブロードピーク、ＣＨｚ ）；０．８８−０
．８ （６Ｈ，ｔ、 ＣＨａ−２１＋δＣＨ３−２１
’ ）ＩＲスペクトル（ＫＢｒ、 ｃｍ−’）３４３
０、 ３０４０． ２９３０． ２Ｂ６０． １７７０
． １７３５゜１？１０． １６１５． １５０５．
１４６０． １４１帆 １３７０゜１２３０− １２５
０． １０００− １１００゜質量スペクトル（ＤＣｌ
、イソブタン）：１０８９、 １０６４． １０４８．
１０３４． １０００゜９９０、 ９７６、 ９６０
゜
実施例１５：
４−（Ｎ−マレオイル−１２−アミノ
ドデカノイル）ビンブラスチン
クロロギ酸イソブチル３０７μｍ （２，３７ミリモル
）の酢酸エチルｌｌｌ１１中の溶液を、Ｎ−マレオイル
−１２−アミノドデカン酸６９９■（２，３７ミリモル
）およびＮ−メチルモルホリン４３３μ！（３，９５ミ
リモル）の酢酸エチル４．２ｍ１ｌ中の０℃に冷却した
溶液に滴加する。NMR spectrum (CDCl1s, 360 MHz
tpp+n): 8 (IH, s, ind "'NH)
;7.5-7.13 (4H1m+8"'112'
1113 ' l ('' ): 6.68 (2H,
s, maleimide db); 6.63 (IH, s, H
14);6.10 (IH,s,H”);5
．． 83 (IH, m, H'); 5.48 (
IH, s, H'); 5.25 (IH,
m, H'); 3.95 (IH, m, H"')
;3.80 (6H1a+0cH3"c"0OC
Hs); 3.73 (IH, s, H”); 3-6
(3HTs, C”OOCHs)s
2.7 (3H,s, NCH3); 1.28(
16H, broad peak, CHz); 0.88-0
．． 8 (6H, t, CHa-21+δCH3-21
) IR spectrum (KBr, cm-') 343
0, 3040. 2930. 2B60. 1770
．． 1735°1?10. 1615. 1505.
1460. 141 sail 1370°1230-125
0. 1000-1100° mass spectrum (DCl
, isobutane): 1089, 1064. 1048.
1034. 1000°990, 976, 960
Example 15: A solution of 307 μm (2,37 mmol) of isobutyl 4-(N-maleoyl-12-aminododecanoyl) vinblastine chloroformate in 11 ml of ethyl acetate was added to 699 μm of N-maleoyl-12-aminododecanoic acid ( 2,37 mmol) and N-methylmorpholine 433 μ! (3.95 mmol) in 4.2 ml of ethyl acetate cooled to 0° C. is added dropwise.
混合物を０℃で３分間かくはんし、次いで酢酸エチルｌ
ｍｌｌに溶解した０４−デアセチルビンブラスチン６
０７■（０，７９ミリモル）を、温度を０℃に保ちなが
ら加える。次いで混合物を室温に戻して一夜かくはんす
る。The mixture was stirred at 0 °C for 3 min, then ethyl acetate
04-deacetylvinblastine 6 dissolved in ml
07■ (0.79 mmol) is added while maintaining the temperature at 0°C. The mixture is then allowed to come to room temperature and stirred overnight.
溶液を濾過し、酢酸エチル相を真空下に蒸発乾固する。The solution is filtered and the ethyl acetate phase is evaporated to dryness under vacuum.
得られた残留物をシリカカラム上のクロマトグラフィー
（溶離：エタノール／酢酸エチル、３０：９０）により
精製する。それにより純生成物２７１ｍｇが得られる。The residue obtained is purified by chromatography on a silica column (elution: ethanol/ethyl acetate, 30:90). This gives 271 mg of pure product.
収率：３３％。Yield: 33%.
ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣｊ！ ３．３６０ Ｍｌｌｚ
、ｐｐｍ ） ：８ （ＩＨ，ｓ、ｉｎｄ １
ｈ’ＮＨ） ；７．５−７．１０（４Ｈ，ｍ、Ｈ”
’ Ｈ” ’ Ｈ” ’ ＨＩ４’ ）；６．６５ （
２Ｈ，Ｓ、 ？レイミド ｃｔｂ）；６．６０ （Ｉ
Ｈ，ｓ、 Ｈ”） ；６．０８ （ＩＨ，ｓ、
Ｈ’）） ；５．８３ （ＬＨ，ｍ、Ｈ’ ）
；５．４８ （ＩＨ，ｓ、Ｈ’ ） ；５．２
５ （ＩＨ，ｄ、Ｈｂ ） ；３．９５ （ＩＨ
，ｍ、 Ｈ”’） ：３．７８ （６Ｈ，ｓ、−
０ＣＨ３＋Ｃ２３００ＣＨ，ｌ）３．７３ （ＬＨ，
ｓ、Ｈ” ） ；３．６ （３Ｈ２ｓ、Ｃ”’
０ＯＣＨ３） ；２．７ （３Ｈ，ｓ、ＮＣＨ３
） ：１．２５（２０Ｈ，ｍ、 ＣＨｔ−）；０
．９−０．８（６Ｈ，ｔ、ＣＨｉ−２１＋ＣＨｚ−２１
’）ＩＲスペクトル（ＫＢｒ、 ｃｍ一つ３４６０、
３０４０． ２９３０． ２８６０． １７３５．
１７００゜１６１０、 １５００． １４６０． １４
３０． １４１０． １３６５゜１２４５、 １２２０
゜
質量スペクトル（ＤＣＩ、 イソブタン）：１０６３
、 １０１０４６（＋１） 、 １０３７． １０２８
゜１０１６、 ３１２． １１７゜
実施例１６：
４−（Ｎ−マレオイル−Ｌ−アラニル）リシルビンブラ
スチンエチルエステル
４−（Ｎ−マレオイル−Ｌ−アラニル）ビンブラスチン
１５０■（０，１６３ミリモル）のエタノール１ ｍｌ
ｌ中の溶液を、リシンエチルエステルＨ（１４０，２６
■（０，１６３ミリモル）およびトリエチルアミン１５
０μＪ（０，９７８ミリモル）の無水エタノール１．５
ｒ＠Ｉｌ中の溶液に滴加する。NMR spectrum (CDCj! 3.360 Mllz
, ppm ) : 8 (IH, s, ind 1
h'NH);7.5-7.10(4H,m,H"
'H'''H''HI4'); 6.65 (
2H, S, ? Reimide ctb); 6.60 (I
H, s, H”); 6.08 (IH, s,
H')) ;5.83 (LH,m,H')
;5.48 (IH, s, H') ;5.2
5 (IH, d, Hb); 3.95 (IH
, m, H"'): 3.78 (6H, s, -
0CH3+C2300CH,l)3.73(LH,
s, H"); 3.6 (3H2s, C"'
0OCH3) ;2.7 (3H,s, NCH3
): 1.25 (20H, m, CHt-); 0
．． 9-0.8 (6H, t, CHi-21+CHz-21
') IR spectrum (KBr, cm one 3460,
3040. 2930. 2860. 1735.
1700°1610, 1500. 1460. 14
30. 1410. 1365°1245, 1220
゜Mass spectrum (DCI, isobutane): 1063
, 101046 (+1) , 1037. 1028
゜1016, 312. 117° Example 16: 4-(N-maleoyl-L-alanyl)lysylvinblastine ethyl ester 4-(N-maleoyl-L-alanyl)vinblastine 150 μm (0,163 mmol) in 1 ml of ethanol
The solution in l was dissolved in lysine ethyl ester H (140,26
■ (0,163 mmol) and triethylamine 15
0 μJ (0,978 mmol) of absolute ethanol 1.5
Add dropwise to the solution in r@Il.
混合物を室温で一夜かくはんし、次いで溶液を蒸発させ
る。得られた残留物をシリカカラム上のクロマトグラフ
ィー（溶離：エーテル中の１４％ＭｅＯＨ／ＮＨ３）に
より精製する。それにより純生成物１０１．２１Ｔ１ｒ
が得られる。The mixture is stirred at room temperature overnight, then the solution is evaporated. The residue obtained is purified by chromatography on a silica column (elution: 14% MeOH/NH3 in ether). Thereby the pure product 101.21T1r
is obtained.
収率：６７％。Yield: 67%.
ｔｆｆｉスペクトル（ＤＣＩ、 イソブタン） ：１
．０９５（Ｍ’″ ＋２） ；１，０９４（Ｍ” ＋
１） ；１．０３７；９２１ ；８３９ ；７６
９ ； ６９３ ；６ｔ５； ５７４ ；５３
２゜ＩＲスペクト／Ｉ／ （Ｋ Ｂｒ） ｃｍ−’
：３．４６０ ；２．９４０ ；１．７４０ ；
１．７１０ ；１．６１５ ；１．５００ ；１
．４６０ ；１，４３０ ；１．５９０ ；１．
２５０ ；１．２２５ ；１．１２０ ；１．０
１０ ； ７３５゜ＮＭＲＸベクトル（Ｃ［１Ｃ１
ｓ 、３６０ ＮＨ２、ｐｐｍ ） ：８ （ＩＨ
，ＮＨ，１６１；
７．５−７．０４Ｈ，Ｈ” ’、Ｈ” ’、Ｈ” ’、
Ｈ１４’）；６．６ （ＩＨ，ｓ、ＨＩ３）；
６．０８ （ＩＨ，ｓ、Ｈ”）；
５．８ （ＩＨ，ｍ、Ｈ７）；
５．４５ （ＩＨ，ｓ、Ｈ’ ）；５．３ （
ＩＨ，ｍ、Ｈ’ ）；４．８ （ＬＨ，ｍ、ＣＨ
” ）；４．１８ （２Ｈ，ｑ、−０ＣＨ２）；３
．８３ （３Ｈ，ｓ、ＯＣＨ３）：３．７８ （３
Ｈ，ｓ、ＯＣＨ３）；３．６ （３Ｈ，ｓ、ＯＭｅ
）；
２．６８ （３Ｈ，ｓ、ＮＣＨ３）：１．６５ （
３Ｈ，ｄ、 ａＬａ ＣＨａ ） ；１．４３
（２Ｈ，ｓ） ；
１．２８ （ＣＨ３，０ＣＨｚ ＣＨ３） ；０
．９−０．８（６Ｈ，ＣＨ３−２１＋ ＣＨ３−２１’
） 。tffi spectrum (DCI, isobutane): 1
．． 095 (M''' + 2); 1,094 (M''' +
1);1.037;921;839;76
9; 693; 6t5; 574; 53
2゜IR spectrum/I/ (K Br) cm-'
:3.460;2.940;1.740;
1.710; 1.615; 1.500; 1
．． 460; 1,430; 1.590; 1.
250; 1.225; 1.120; 1.0
10; 735°NMRX vector (C[1C1
s, 360 NH2, ppm): 8 (IH
, NH, 161; 7.5-7.04H, H"', H"', H"',
H14'); 6.6 (IH, s, HI3); 6.08 (IH, s, H''); 5.8 (IH, m, H7); 5.45 (IH, s, H'); 5.3 (
IH, m, H'); 4.8 (LH, m, CH
” ); 4.18 (2H, q, -0CH2); 3
．． 83 (3H, s, OCH3): 3.78 (3
H, s, OCH3); 3.6 (3H, s, OMe
); 2.68 (3H, s, NCH3): 1.65 (
3H, d, aLa CHa ); 1.43
(2H,s) ; 1.28 (CH3,0CHz CH3) ;0
．． 9-0.8 (6H, CH3-21+ CH3-21'
).
実施例１７；
４−（Ｎ−マレオイル−Ｌ−アラニル）ビンブラスチン
とガラクトシル化ヒト
アルブミン（ＨＡｇａｊり とのカップリング、 （Ｖ
４−ＡＩ！ａ Ｍａｉｌ ＨＡ ）４−（Ｎ−
マレオイル−し−アシエル）ビンブラスチン４４■をジ
オキサン１ ｔａｇに溶解する。Example 17; Coupling of 4-(N-maleoyl-L-alanyl)vinblastine with galactosylated human albumin (HAgajri), (V
4-AI! a Mail HA )4-(N-
44 ml of vinblastine (maleoyl-aciel) is dissolved in 1 tag of dioxane.
ＨＡｇａ１５０ｍｇの０．２Ｍリン酸塩緩衝液ｐＨ８，
５，５ｍｌ中の溶液を別個に調製する。４−（Ｎ−マレ
オイル−Ｌ−アラニル）ビンブラスチンの溶液をＨＡｇ
ａｌの溶液に加える。混合物を室温で一夜かくはんし、
０．９％濃度のＮａＣＪ！溶液ｐ）１７．５に平衡させ
たセファデックス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ） Ｇ −２５（
２，６Ｘ９６ｃｍ＞上のゲル濾過により精製する。150 mg of HAga in 0.2 M phosphate buffer pH 8,
Separately prepare solutions in 5.5 ml. A solution of 4-(N-maleoyl-L-alanyl)vinblastine was added to HAg
Add to the al solution. Stir the mixture overnight at room temperature;
0.9% concentration of NaCJ! Sephadex G-25 (solution p) equilibrated in 17.5
Purify by gel filtration over 2,6 x 96 cm.
排出ピークを捕集しく９６＋ｓＪり、限外濾過により濃
縮し、滅菌する。The emission peak is collected at 96+sJ, concentrated by ultrafiltration, and sterilized.
タンパク賞含量をローリ−法により測定し、アルカロイ
ド含量を放射能の測定により評価する。The protein content is measured by the Lowry method, and the alkaloid content is evaluated by measuring radioactivity.
得られた結合体はガラクトモル化ヒトアルブミン毎モル
１３．５モルのアルカロイドを含む。The resulting conjugate contains 13.5 moles of alkaloid per mole of galactomolated human albumin.
実施例１８：
４−（Ｎ−マレオイル−６−アミノカプロイル）ビンブ
ラスチンとガラクトシル化ヒトアルブミン（ＨＡｇａｊ
りとのカップリング、
（ｖ４−ｃ、−Ｍａｌ−ＨＡ ）
４−（Ｎ−マレオイル−６−アミノカプロイル）ビンブ
ラスチン２３４■をジオキサン１ ｍｉｌに溶解する。Example 18: 4-(N-maleoyl-6-aminocaproyl)vinblastine and galactosylated human albumin (HAgaj
Coupling with Ri, (v4-c, -Mal-HA) 234 ml of 4-(N-maleoyl-6-aminocaproyl)vinblastine is dissolved in 1 mil of dioxane.
ＨＡｇａｊ！５０■の０．２Ｍリン酸塩緩衝液ｐＨ８，
５，５ｗａｌｌ中の溶液を別個に調製する。４−（Ｎ−
マレオイル−６−アミノカプロイル）ビンブラスチンの
溶液をＨＡｇａｌの溶液に加える。混合物を室温で一夜
かくはんし、次いで０．９％濃度のＮａＣ１溶液ｐＨ７
，５に平衡させたセファデックスＧ −２５（２，６Ｘ
９６ａａ）上のゲル濾過により精製する。排出ピーク
を捕集しく１００ｍｊ２）、限外濾過により濃縮し、滅
菌する。タンパク質含量をローリ−法により測定し、ア
ルカロイド含量を放射能の測定により評価する。得られ
た結合体はガラクトシル化ヒトアルブミン毎分子１２．
７モルのアルカロイドを含む。HAgaj! 50μ of 0.2M phosphate buffer pH 8,
5. Prepare solutions in 5 walls separately. 4-(N-
Add the solution of vinblastine (maleoyl-6-aminocaproyl) to the solution of HAgal. The mixture was stirred overnight at room temperature and then added with 0.9% NaCl solution pH 7.
Sephadex G-25 (2,6X
Purify by gel filtration over 96aa). Collect the discharge peak (100 mj2), concentrate by ultrafiltration, and sterilize. The protein content is determined by the Lowry method, and the alkaloid content is evaluated by measuring radioactivity. The resulting conjugate contains 12.0% of galactosylated human albumin per molecule.
Contains 7 moles of alkaloid.
実施例１９：
４−（Ｎ−マレオイル−し−グルタミル）ビンブラスチ
ンγ−メチルエステルとガラクトシル化ヒトアルブミン
（ＨＡｇａＪ）とのカップリング、
（Ｖ４ ＧＬｕｒＭＥ ＭａＩｌ−ＨＡ ）４−
（Ｎ−マレオイル−Ｌ−グルタミル）ビンブラスチンγ
−メチルエステル２４■をジオキサン１ ｍｌに溶解す
る。ＨＡｇａ１５ＯＮの０．２Ｍリン酸塩緩衝液ｐＨ８
，５，５ｍｌ中の溶液を別個に調製する。４−（Ｎ−マ
レオイル−Ｌ−グルタミル）ビンブラスチンγ−メチル
エステルの溶液をＨＡｇａｌの溶液に加える。混合物を
室温で一夜かくはんし、０．９％濃度のＮａＣｌｌ溶液
ｐＨ７，５に平衡させたセファデックスＧ−２５（２６
Ｘ９６ａ１１）上のゲル濾過により精製する。排出ピー
クを捕集し、（１００ｍｌ）、限外濾過により濃縮し、
滅菌する。タンパク質含量をローリ−法により測定し、
アルカロイド含量を放射能の測定により評価する。結合
体はガラクトモル化ヒトアルブミン毎モル１１．８モル
のアルカロイドを含有する。Example 19: Coupling of 4-(N-maleoyl-shi-glutamyl)vinblastine γ-methyl ester with galactosylated human albumin (HAgaJ), (V4GLurMEMaIl-HA)4-
(N-maleoyl-L-glutamyl)vinblastine γ
-Dissolve 24 ml of methyl ester in 1 ml of dioxane. HAga15ON 0.2M phosphate buffer pH 8
, 5. Separately prepare solutions in 5 ml. A solution of 4-(N-maleoyl-L-glutamyl)vinblastine γ-methyl ester is added to the solution of HAgal. The mixture was stirred overnight at room temperature and then washed with Sephadex G-25 (26
Purify by gel filtration on X96a11). The emission peak was collected (100 ml), concentrated by ultrafiltration,
Sterilize. Protein content was measured by the Lowry method,
The alkaloid content is assessed by measuring radioactivity. The conjugate contains 11.8 moles of alkaloid per mole of galactomolated human albumin.
実施例２０：
４−（Ｎ−マレオイル−Ｌ−イソロイシル）ビンブラス
チンとガラクトシル化ヒトアルブミン（ＨＡｇａｌ）と
のカップリング、（Ｖ、−Ｉ Ｒｅ −Ｍａｌ−ＨＡｇ
）４−（Ｎ−マレオイル−Ｌ−イソロイシル）ビンブラ
スチン２５０ｍｇをジオキサン２０−に溶解する。Example 20: Coupling of 4-(N-maleoyl-L-isoleucyl)vinblastine with galactosylated human albumin (HAgal), (V, -I Re -Mal-HAg
) 250 mg of 4-(N-maleoyl-L-isoleucyl)vinblastine are dissolved in dioxane 20-.
ＨＡｇａＩ１５９１ｍｇの０．４Ｍリン酸塩緩衝液ｐＨ
−８，５，１６，５ｍ１ｉ中の溶液を別個に調製する。1591 mg of HAgaI in 0.4 M phosphate buffer pH
- Separately prepare solutions in 8,5,16,5m1i.
４−（Ｎ−マレオイル−Ｌ−インロイシル）ビンブラス
チンの溶液をＨＡｇａｉ’の溶液に加える。Add the solution of 4-(N-maleoyl-L-inleucyl)vinblastine to the solution of HAgai'.
混合物を室温で一夜かくはんし、０．９％濃度のＮａＣ
１溶液ｐＨ７，５に平衡させたセファデックスＧ−２５
（２，６Ｘ９６ｃｍ）上のゲル濾過により精製する。排
出ピークを捕集しく１８０ｍｆｌ）、限外濾過により濃
縮し、滅菌する。The mixture was stirred overnight at room temperature and then added with 0.9% NaC.
Sephadex G-25 equilibrated to 1 solution pH 7.5
Purify by gel filtration on (2,6×96 cm). Collect the emission peak (180 mfl), concentrate by ultrafiltration, and sterilize.
タンパク質含量をローリ−法により測定し、アルカロイ
ド含量を放射能の測定により評価する。The protein content is determined by the Lowry method, and the alkaloid content is evaluated by measuring radioactivity.
得られた結合体はガラクトモル化ヒトアルブミン毎モル
８．８モルのアルカロイドを含有する。The resulting conjugate contains 8.8 moles of alkaloid per mole of galactomolated human albumin.
実施例２１：
４−（Ｎ−マレオイル−Ｌ−アスパルチル）ビンブラス
チンα−ベンジルエステルとガラクトシル化ヒトアルブ
ミン（ＨＡｇａＪ）とのカンプリング、
ＣＶａ Ａｓ αＢＥ−ＭａＩｔ−ＨＡ ）４−（
Ｎ−マレオイル−し−アスパルチル）ビンブラスチンα
−ベンジルエステル１０５■をジオキサン７．９ｍｊ！
に溶解する。Example 21: Camping of 4-(N-maleoyl-L-aspartyl)vinblastine α-benzyl ester with galactosylated human albumin (HAgaJ), CVa As αBE-MaIt-HA ) 4-(
N-maleoyl-shi-aspartyl) vinblastine α
- 105cm of benzyl ester and 7.9mj of dioxane!
dissolve in
ＨＡｇａｌ２２６１Ｗの０．４ Ｍリン酸塩緩衝液ｐ１
１８．５．６．３ｍ＋１中の溶液を別個に調製する。HAgal2261W 0.4 M phosphate buffer p1
18. Separately prepare solutions in 5.6.3m+1.
４−（Ｎ−マレオイル−Ｌ−アスパルチル）ビンブラス
チンベンジルエステルの溶液をＨＡｇａｊ！の溶液に加
える。混合物を室温で一夜か（はんし、０、９％濃度の
ＮａＣＩｔ溶液ｐＨ７，５に平衡させたセファデックス
Ｇ−２５（２，６Ｘ９６ａｎ）上のゲル濾過により精製
する。排出ピークを捕集（６０ｍｌ）し、限外濾過によ
り濃縮し、滅菌する。A solution of 4-(N-maleoyl-L-aspartyl) vinblastine benzyl ester is HAgaj! Add to the solution. The mixture is purified by gel filtration on Sephadex G-25 (2,6×96an) equilibrated with 0.9% NaCIt solution pH 7.5 overnight at room temperature. The emission peak is collected ( 60 ml), concentrated by ultrafiltration, and sterilized.
タンパク質含量をローリ−法により測定し、アルカロイ
ド含量を放射能の測定により評価する。The protein content is determined by the Lowry method, and the alkaloid content is evaluated by measuring radioactivity.
得られた結合体はガラクトモル化ヒトアルブミン毎モル
５．７モルのアルカロイドを含有する。The resulting conjugate contains 5.7 moles of alkaloid per mole of galactomolated human albumin.
実施例２２：
４−（Ｎ−マレオイル−１１−アミノ
ウンデカノイル）ビンブラスチンと
ガラクトシル化ヒトアルブミン
（ＨＡｇａＪ）とのカップリング、
（Ｖ４ Ｃ−Ｍａｊ！ ＨＡ ）４−（Ｎ−マ
レオイル−１１−アミノウンデカノイル）ビンブラスチ
ン４４０■をジオキサン４６ｍｊｔに溶解する。Example 22: Coupling of 4-(N-maleoyl-11-aminoundecanoyl)vinblastine with galactosylated human albumin (HAgaJ), (V4C-Maj!HA)4-(N-maleoyl-11-amino Undecanoyl) vinblastine 440 ml is dissolved in dioxane 46 mjt.
ＨＡｇａｌ ９６ ！３ｇの０．４ Ｍリン酸塩緩衝液
ｐＨ８，５，２１ｖｓｌｌ中の溶液を別個に調製する。HAgal 96! A solution of 3 g of 0.4 M phosphate buffer pH 8, 5, 21 vsll is prepared separately.
４−（Ｎ−マレオイル−１１−アミノウンデカノイル）
ビンブラスチンの溶液をＨＡｇａｊ！の溶液に加える。4-(N-maleoyl-11-aminoundecanoyl)
HAgaj the vinblastine solution! Add to the solution.
混合物を４０℃で５時間かくはんし、０．９％濃度のＮ
ａＣＩｌ溶液ｐＨ７，５に平衡させたトリスアクリル（
Ｔｒｉｓａｃｒｙｌ） （５，６Ｘ ５０３）上のゲル
濾過により精製する。排出ピークを捕集しく２５０ｍｊ
り、限外濾過により濃縮し、滅菌する。The mixture was stirred at 40 °C for 5 h and then treated with 0.9% concentration of N.
Tris acrylic (
Purify by gel filtration on Trisacryl (5,6X 503). 250mj to collect emission peaks
Concentrate by ultrafiltration and sterilize.
タンパク質含量をローリ゛−法により測定し、アルカロ
イド含量を放射能の測定により評価する。The protein content is determined by the Lowry method, and the alkaloid content is evaluated by measuring radioactivity.
得られた結合体はガラクトモル化ヒトアルブミン毎モル
１０．２モルのアルカロイドを含有する。The resulting conjugate contains 10.2 moles of alkaloid per mole of galactomolated human albumin.
実施例２３：
４−（Ｎ−マレオイル−１２−アミノ
ドデカノイル）ビンブラスチンとガラ
クトシル化ヒトアルブミン（ＨＡｇａｊりとのカップリ
ング、
（Ｖ４ Ｃｒｔ Ｍａｌ−ＨＡ ）４−（Ｎ−マ
レオイル−１２−アミノドデカノイル）ビンブラスチン
１２０■をジオキサン１６ｍｇに溶解する。Example 23: Coupling of 4-(N-maleoyl-12-aminododecanoyl)vinblastine with galactosylated human albumin (HAgaj), (V4CrtMal-HA)4-(N-maleoyl-12-aminododecanoyl) ) Dissolve 120 ml of vinblastine in 16 mg of dioxane.
ＨＡｇａｌ ３３９ｔｎｚの０．４ Ｍリン酸塩緩衝液
ｐＨ８，５，９，４ｖａｌｌ中の溶液を別個に調製する
。A solution of HAgal 339tnz in 0.4 M phosphate buffer pH 8, 5, 9, 4 vall is prepared separately.
４−（Ｎ−マレオイル−１２−アミノドデカノイル）ビ
ンブラスチンの溶液をＨＡｇａｌの溶液に加える。混合
物を４０℃で６時間かくはんし、０．９％濃度のＮａＣ
１溶液ＰＨ７，５に平衡させたトリスアクリル（５，６
Ｘ５０ｃｍ）上のゲル濾過により精製する。排出ピーク
（２４０ｍｊりを捕集し、限外濾過により濃縮し、滅菌
する。Add the solution of 4-(N-maleoyl-12-aminododecanoyl)vinblastine to the solution of HAgal. The mixture was stirred at 40 °C for 6 h and then treated with 0.9% NaC.
Trisacrylic (5,6
Purify by gel filtration on 50 cm x 50 cm. The effluent peak (240 mj) is collected, concentrated by ultrafiltration, and sterilized.
タンパク質含量をローリ−法により測定し、アルガロイ
ド含量を放射能の測定により評価する。The protein content is determined by the Lowry method, and the algaroid content is evaluated by measuring radioactivity.
得られた結合体はガラクトモル化ヒトアルブミン毎モル
９モルのアルカロイドを含有する。The resulting conjugate contains 9 moles of alkaloid per mole of galactomolated human albumin.
実施例２４：
４−（Ｎ−マレオイル）−Ｌ−アラニルビンブラスチン
と非特異的免疫グロブリン（ＩｇＧ）とのカップリング
、
（Ｖａ Ａ ｌａ Ｍａｌ Ｉ Ｇ）４−（Ｎ−マ
レオイル）−Ｌ−アラニルビンブラスチン４■をエタノ
ール１９３μＥに溶解する。Example 24: Coupling of 4-(N-maleoyl)-L-alanylvinblastine with non-specific immunoglobulin (IgG), (Va A la Mal I G) 4-(N-maleoyl)-L-Ala Dissolve nirvinblastin 4 in 193 μE of ethanol.
一方、リン酸塩緩衝液０．４ Ｍ、 ｐＨ８，５，３５
７μｌおよび水４４７μｌ中のＩｇＧ１０■（６２６μ
ｌ）の溶液（７ｎｗ ｐｒｏｔ ／１ ｍｆ）を調製す
る。４−（Ｎ−マレオイル）−Ｌ−アラニルビンブラス
チンの溶液をＩｇＧ溶液に加える。混合物を３５℃で一
夜かくはんし、リン酸塩緩衝液０．２ Ｍ、 ｐＨ７，
５中で平衡させたデュポン（Ｄｕｐｏｎｔ ｄｏ Ｎｅ
ｍｏｕｒｓ ）ＧＦ４５０＋２５０のカラム上のＨＰＬ
Ｃ（ゲル濾過）により精製する。On the other hand, phosphate buffer 0.4 M, pH 8,5,35
IgG10■ (626μl) in 7μl and 447μl water
Prepare a solution of l) (7 nw prot /1 mf). Add a solution of 4-(N-maleoyl)-L-alanylvinblastine to the IgG solution. The mixture was stirred overnight at 35°C and diluted with phosphate buffer 0.2 M, pH 7.
DuPont do Ne
HPL on column of GF450+250
Purify by C (gel filtration).
排出ピークを捕集し、量を測定する。Collect the emission peak and measure the amount.
タンパク質含量をローリ−法により測定し、アルカロイ
ド含量を放射能の測定により評価する。The protein content is determined by the Lowry method, and the alkaloid content is evaluated by measuring radioactivity.
得られた結合体は免疫グロブリン毎モル６．６モルのア
ルカロイドを含有する。The resulting conjugate contains 6.6 moles of alkaloid per mole of immunoglobulin.
本発明の化合物を薬理学的研究に供した。Compounds of the invention were subjected to pharmacological studies.
［１） リソソーム酵素に対する感受性結合体のりソ
ソーム酵素に対する感受性は、これらの結合体を３７℃
で４８時間、５ｍＭのりソソーム、４０ｍＭの酢酸塩緩
衝液およびリソソーム酵素の存在下に培養することによ
り調べた。[1] Sensitivity of conjugates to lysosomal enzymes.
for 48 hours in the presence of 5mM lysosomes, 40mM acetate buffer, and lysosomal enzymes.
４８時間の培養後血清アルブミン５■をアセトニトリル
２容量とともに加えた後非分解タンパク賞を沈殿させる
。After 48 hours of incubation, 5 ml of serum albumin is added together with 2 volumes of acetonitrile to precipitate the undegraded proteins.
試料を４℃で４０分間培養し、３＋００Ｏｒｐｍで４０
分間遠心分離した後、上澄みの放射能をアリコート部分
の液体シンチレーション計数により評価する。可溶物放
射能は結合体の消化の尺度である。Samples were incubated for 40 min at 4°C and incubated at 3+00 rpm for 40 min.
After centrifugation for a minute, the radioactivity of the supernatant is assessed by liquid scintillation counting of aliquots. Soluble radioactivity is a measure of conjugate digestion.
得られた消化パーセントの値は次のとおりで ゛ある
。The obtained digestion percentage values are as follows.
Ｖ４−Ａｆａ −Ｍａｉｌ−ＨＡｇ ： ９２％Ｖ４
Ｃａ Ｍａｃ−ＨＡｇ ： １００％Ｖ４−ｒ
ｉｔｅ−Ｍａｆ−ＨＡｇ： ７５％Ｖａ Ｃ＋＋
ＭａＩｌ ＨＡｇ ： ７９％Ｖａ −ＣＩｚ
Ｍａｉｌ ＨＡｇ ： ９２％（２）血清中
の安定性
結合体の血清存在下の安定性を、結合体を６２％ウシ胎
児血清の存在下に３７℃で４８時間培養することにより
調べた。V4-Afa-Mail-HAg: 92%V4
Ca Mac-HAg: 100%V4-r
ite-Maf-HAg: 75% Va C++
MaIlHAg: 79% Va-CIz
Mail HAg: 92% (2) Stability in serum The stability of the conjugate in the presence of serum was investigated by incubating the conjugate in the presence of 62% fetal calf serum for 48 hours at 37°C.
４８時間の培養後非分解タンパク質をトリクロロ酢酸（
４０％濃度ＴＣＡ）１容積の添加により沈殿させる。試
料を４℃で１時間培養後、後者を遠心分離し、上澄みの
放射能をアリコート部分の液体シンチレーション計数に
より評価する。After 48 hours of incubation, undegraded proteins were extracted with trichloroacetic acid (
Precipitate by adding 1 volume of 40% strength TCA). After incubating the samples for 1 hour at 4°C, the latter are centrifuged and the radioactivity of the supernatant is evaluated by liquid scintillation counting of aliquots.
可溶物放射能は結合体の消化の尺度である。Soluble radioactivity is a measure of conjugate digestion.
結果は結合体が４８時間中安定であることを示す。The results show that the conjugate is stable for 48 hours.
（３） 酸性ｐＨにおける安定性
酸性ｐＨにおける結合体の安定性を、結合体を４０ｍＭ
酢酸塩緩衝液ｐＨ４，５の存在下に３７℃で４８時間培
養することによ゛り調べた。消化はＴＣＡ沈殿法により
評価する。(3) Stability at acidic pH The stability of the conjugate at acidic pH was determined by
This was investigated by culturing at 37° C. for 48 hours in the presence of acetate buffer pH 4.5. Digestion is assessed by TCA precipitation.
結果は結合体がこれらの条件のもとて安定であることを
示す。The results show that the conjugate is very stable under these conditions.
（４）白血病Ｐ３８８に対する化学療法活性中間誘導体
および結合体の化学療法活性を、メスＢＤＦＩマウスに
ｉｐ投与した白血病Ｐ３８８について評価した：１０ｂ
腫瘍細胞を０日にｉｐ接種する。結合体は第１日にｉｐ
投与する。(4) Chemotherapeutic activity against leukemia P388 The chemotherapeutic activity of intermediate derivatives and conjugates was evaluated on leukemia P388 administered ip to female BDFI mice: 10b
Tumor cells are inoculated ip on day 0. The conjugate was ip
Administer.
ＩＬＳ値は非処置マウスの生存期間と比較した処置マウ
スの生存期間パーセントを示す。ILS values represent the percent survival of treated mice compared to survival of untreated mice.
モル比はガラクトシル化ヒトアルブミン毎モル当りのア
ルカロイドのモル数を示す。The molar ratio indicates the number of moles of alkaloid per mole of galactosylated human albumin.
第６０日におけるマウス生存数並びにアルカロイドおよ
びタンパク質のｍｇ／ｋｇにおける用量が示される。The number of mice alive on day 60 and the dose of alkaloids and protein in mg/kg are shown.
３．１ 生−肌一誘一！一体
生成物 用量 ＩＬＳ 生存数
■／ｋｇ／日 ％ 第６０日
ＶＢＬ （ヒンブラスチン） ３ ７７
ｏ／１゜ＶＣＲ（ビンクリスチン’Ｊ
２．７ ６４ ０／１１Ｖ４−Ａｌａ−Ｍａｌ
（実施例９） ２５ １００ ０／７
Ｖ４−ＧｌｕｒＭＥ−Ｍａｌ（Ｅｘ １１）
５０ ８８ ０／ ｌ ０Ｖ、−１１ｅ−Ｍａ
ｔ （実施例１２） ５０ １４８ ０
／７Ｖ４−Ｃ，Ｊｌａｌ （実施例１０）
２５ １０２ ０／８ｖ４−Ｃ＋＋−Ｍａｌ （
実施例１４） ５０ ３７ １／７Ｖ
ａ−ＣＢ−Ｍａｌ （実施例１５） ２５
１８５ １１５５０ ＞６３３ ６／８
３．２ 級−一金一一孫
ＶＢＬ ３
７７ ０／１０ＶＣＲ２，７６４０／１１3.1 Raw-skin one-to-one! Integral Product Dose ILS Survival ■/kg/day % Day 60 VBL (Himblastine) 3 77
o/1°VCR (vincristine'J
2.7 64 0/11V4-Ala-Mal
(Example 9) 25 100 0/7
V4-GlurME-Mal (Ex 11)
50 88 0/l 0V, -11e-Ma
t (Example 12) 50 148 0
/7V4-C, Jlal (Example 10)
25 102 0/8v4-C++-Mal (
Example 14) 50 37 1/7V
a-CB-Mal (Example 15) 25
185 11550 >633 6/8 3.2 Class-Ichikin Ichiichison VBL 3
77 0/10VCR2, 7640/11
Claims (12)
カロイドとタンパク質またはタンパク質フラグメントの
結合体であって、一般式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、 Ｒ＿１はタンパク質またはタンパク質フラグメントを示
し、 Ｒ＿２はＣＯＯ（Ｃ＿１＿〜＿３アルキル）またはＣＯ
−Ｒ＿７（式中、Ｒ＿７はＮＨ＿２またはアミノ酸エス
テルまたはペプチドエステルである）であり、 Ｒ＿３はＨ、ＣＨ＿３またはＣＨＯであり、Ｒ＿５およ
びＲ＿６は別々にされたときにＲ＿６はＨであり、Ｒ＿
４およびＲ＿５の１つはエチルであって他はＨまたはＯ
Ｈであり、 Ｒ＿５およびＲ＿６はそれらが結合している炭素原子と
一緒にしたときにそれらはオキシラン環を形成してＲ＿
４はエチルであり、 Ａはマレオイルアミノ酸またはマレオイルペプチドまた
はマレオイルフエノキシ型の二官能有機誘導体である〕 に相応する結合体。(1) A conjugate of indole-dihydroindole type vinca alkaloid and protein or protein fragment, with the general formula: ▲ Numerical formula, chemical formula, table, etc. ▼ [In the formula, R_1 represents a protein or protein fragment, R_2 is COO (C_1_~_3 alkyl) or CO
-R_7, where R_7 is NH_2 or an amino acid ester or a peptide ester, R_3 is H, CH_3 or CHO, and R_6 is H when R_5 and R_6 are taken separately;
One of 4 and R_5 is ethyl and the other is H or O
H, and when R_5 and R_6 are taken together with the carbon atoms to which they are attached, they form an oxirane ring and R_
4 is ethyl and A is a maleoyl amino acid or a maleoyl peptide or a bifunctional organic derivative of the maleoyl phenoxy type.
、２〜５個の炭素原子の枝分れアルキレン鎖、３〜６個
の炭素原子のシクロアルキレン鎖、３〜６個の炭素原子
のフェニレン鎖、または天然アミノ酸 ▲数式、化学式、表等があります▼；の基Ｒ−ＣＨ、 型−（Ｘ＿１−ＮＨ−ＣＯ）ｎ−Ｘ＿１（式中、ｎは１
、２、３または４であり、Ｘ＿１は１〜１２個の炭素原
子の線状アルキレン鎖２〜５個の炭素原子の枝分れアル
キレン鎖、３〜６個の炭素原子のシクロアルキレン鎖、
３〜６個の炭素原子のフエニレン鎖、または天然アミノ
酸の基Ｒ−ＣＨである）のペプチド鎖フラグメント、あ
るいはフエニル基を示す〕、そのラセミ形態またはその
光学活性形態の１つに相応する、特許請求の範囲第（１
）項記載の結合体。(2) A is a general formula, ▲ There are mathematical formulas, chemical formulas, tables, etc. ▼ [In the formula, X is a linear alkylene chain of 1 to 12 carbon atoms, a branched alkylene chain of 2 to 5 carbon atoms , a cycloalkylene chain of 3 to 6 carbon atoms, a phenylene chain of 3 to 6 carbon atoms, or a natural amino acid ▲Formula, chemical formula, table, etc.▼; Group R-CH, type -(X_1-NH -CO)n-X_1 (where n is 1
, 2, 3 or 4, and X_1 is a linear alkylene chain of 1 to 12 carbon atoms, a branched alkylene chain of 2 to 5 carbon atoms, a cycloalkylene chain of 3 to 6 carbon atoms,
a phenylene chain of 3 to 6 carbon atoms, or a peptide chain fragment of a natural amino acid radical R-CH), or a phenyl group], corresponding to its racemic form or one of its optically active forms; Claim No. 1
).
または基類ＲＣＨにより支持された官能性置換基が公知
保護基により保護されている、特許請求の範囲第（１）
項記載の結合体。(3) Claim (1), wherein the functional substituent supported by the natural amino acid group or groups RCH represented by X or X_1 is protected by a known protecting group.
Conjugates as described in Section.
ンあるいはフエチユインまたは免疫グロブリンである、
特許請求の範囲第（１）項〜第（３）項のいずれか一項
に記載の結合体。(4) protein R_1 is bovine or human serum albumin or fetuin or immunoglobulin;
The conjugate according to any one of claims (1) to (3).
求の範囲第（１）項〜第（４）項のいずれか一項に記載
の結合体。(5) The conjugate according to any one of claims (1) to (4), wherein protein R_1 is selectively processed.
Ｉｇ； −肺の癌腫の膜で免疫したヤギまたはヒツジのＩｇ； −ヒト結腸直腸癌腫に対する抗体を分泌するマウスハイ
ブリドーマからの単クローン性Ｉｇ；−ヒト黒色腫に対
する抗体を分泌するマウスハイブリドーマからの単クロ
ーン性Ｉｇ； −ヒト白血病細胞と反応する抗体を分泌するマウスハイ
ブリドーマからの単クローン性Ｉｇ；−ヒト神経芽腫細
胞と反応する抗体を分泌するマウスハイブリドーマから
の単クローン性Ｉｇ；−ヒト乳癌と反応する抗体を分泌
するマウスハイブリドーマからの単クローン性Ｉｇ； −ヒト卵巣癌細胞と反応する抗体を分泌するマウスハイ
ブリドーマからの単クローン性Ｉｇ；−ヒト骨肉腫細胞
と反応する抗体を分泌するマウスハイブリドーマからの
単クローン性Ｉｇ；および −肺癌に対する抗体を分泌するマウスハイブリドーマか
らの単クローン性Ｉｇ； からなる群から選ばれる免疫グロブリン、あるいはタン
パク質分解酵素で消化することにより抗体から得られる
免疫グロブリンフラグメント、すなわち、Ｆａｂ、Ｆａ
ｂ′またはＦ（ａｂ′）＿２、あるいはモノマーＩｇＭ
である、特許請求の範囲第（１）項〜第（５）項のいず
れか一項に記載の結合体。(6) R_1 is - goat or sheep Ig immunized with carcinoembryonic antigen; - rabbit anti-LLAIg; - various monkey anti-LLA, anti-LMA, anti-LLC, anti-LMC;
- Ig of a goat or sheep immunized with lung carcinoma membranes; - Monoclonal Ig from a mouse hybridoma secreting antibodies against human colorectal carcinoma; - Monoclonal Ig from a mouse hybridoma secreting antibodies against human melanoma; Clonal Ig; - Monoclonal Ig from a mouse hybridoma that secretes antibodies that react with human leukemia cells; - Monoclonal Ig from a mouse hybridoma that secretes antibodies that react with human neuroblastoma cells; - Monoclonal Ig from a mouse hybridoma that secretes antibodies that react with human leukemia cells; Monoclonal Ig from a mouse hybridoma that secretes antibodies that react with human ovarian cancer cells; - Monoclonal Ig from a mouse hybridoma that secretes antibodies that react with human ovarian cancer cells; - Mouse hybridoma that secretes antibodies that react with human osteosarcoma cells. and - a monoclonal Ig from a mouse hybridoma secreting antibodies against lung cancer; or an immunoglobulin fragment obtained from the antibody by digestion with a proteolytic enzyme; That is, Fab, Fa
b' or F(ab')_2, or monomer IgM
The conjugate according to any one of claims (1) to (5).
質フラグメントとの、式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼ I （式中、Ｒ＿１、Ｒ＿２、Ｒ＿３、Ｒ＿４、Ｒ＿５、Ｒ
＿６およびＸは特許請求の範囲第（１）項および第（２
）項に記載した意味を有する） に相応する結合体の製造方法であって、式、▲数式、化
学式、表等があります▼ のマレオイルアミノ酸またはマレオイルペプチドを一般
式（II）、 ▲数式、化学式、表等があります▼II （式中、Ｒ＿２、Ｒ＿３、Ｒ＿４、Ｒ＿５、Ｒ＿６およ
びＸは前記の意味を有する） の化合物のＣ＾４−ヒドロキシルと縮合させ、得られた
中間体生成物をタンパク質またはタンパク質フラグメン
トと縮合させることを含む方法。(7) Formula (I) of vinca alkaloid and protein or protein fragment ▲There are mathematical formulas, chemical formulas, tables, etc.▼ I (In the formula, R_1, R_2, R_3, R_4, R_5, R
_6 and X are claims (1) and (2).
A method for producing a conjugate corresponding to the formula (having the meaning given in paragraph ), which has the formula, ▲mathematical formula, chemical formula, table, etc., by converting the maleoyl amino acid or maleoyl peptide of , chemical formulas, tables, etc.▼II (In the formula, R_2, R_3, R_4, R_5, R_6 and A method comprising condensing with a protein or protein fragment.
クロロギ酸エチルまたはイソプロピル、により、アミン
塩基、例えばトリエチルアミン、Ｎ−メチルピペリジン
またはＮ−メチルモルホリン、の存在下に、有機溶媒例
えば酢酸エチル、テトラヒドロフランまたは塩化メチレ
ン中で行なわれ、得られた中間体化合物が反応媒質から
分離され、それが精製され、第２縮合階段が常法で水性
媒質中で４〜２５℃の温度および７．５〜９．５のｐＨ
で行なわれる、特許請求の範囲第（７）項記載の方法。(8) The first condensation step is carried out with an alkyl chloroformate, preferably ethyl or isopropyl chloroformate, in the presence of an amine base, such as triethylamine, N-methylpiperidine or N-methylmorpholine, in an organic solvent such as ethyl acetate, tetrahydrofuran. or carried out in methylene chloride, the intermediate compound obtained is separated from the reaction medium, it is purified and a second condensation step is carried out in a conventional manner in an aqueous medium at a temperature of 4 to 25 °C and 7.5 to 9 pH of .5
The method according to claim (7), which is carried out in the method described in claim (7).
びＸは特許請求の範囲第（１）項および第（２）項に記
載した意味を有する） の化合物。(9) Intermediate compounds include general formula (III), ▲mathematical formula, chemical formula, table, etc.▼III (in the formula, R_2, R_3, R_4, R_5, R_6 and (having the meaning given in paragraph (2)).
（６）項のいずれか一項に記載の結合体を、製剤に許容
される担体および賦形剤と結合せて、５０ｍｇ〜数ｇで
変化する単位用量に従い、場合により他の活性物質と組
合せて含む製剤組成物。(10) 50 mg to Pharmaceutical compositions containing according to unit doses varying in several grams, optionally in combination with other active substances.
れか一項に記載の結合体を、製剤に許容される溶媒例え
ば生理食塩水またはリン酸塩緩衝液により緩衝された溶
液中に溶解した状態で含む、特許請求の範囲第（１０）
項記載の製剤組成物。(11) The conjugate according to any one of claims (1) to (6) is prepared in a formulation-acceptable solvent buffered with a physiological saline or a phosphate buffer. Claim No. (10), which includes in a dissolved state in a solution.
The pharmaceutical composition described in .
れか一項に記載の結合体の、抗腫瘍および細胞増殖抑制
活性を有する薬剤の製造に対する使用。(12) Use of the conjugate according to any one of claims (1) to (6) for the production of a drug having antitumor and cell proliferation inhibitory activity.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| LU86212A LU86212A1 (en) | 1985-12-16 | 1985-12-16 | NOVEL CONJUGATES OF VINBLASTINE AND DERIVATIVES THEREOF, PROCESS FOR THEIR PREPARATION AND PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS CONTAINING THEM |
| LU86212 | 1985-12-16 | ||
| LU86515 | 1986-07-16 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62195387A true JPS62195387A (en) | 1987-08-28 |
Family
ID=19730605
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61299788A Pending JPS62195387A (en) | 1985-12-16 | 1986-12-16 | Novel bonded body of vinblastine and derivative of same, manufacture and medicinal composition |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS62195387A (en) |
| DD (1) | DD262998A5 (en) |
| LU (1) | LU86212A1 (en) |
| ZA (1) | ZA869320B (en) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2001500133A (en) * | 1996-09-11 | 2001-01-09 | フェリックス クラッツ | Antitumor conjugate of transferrin, albumin and polyethylene glycol |
| JP2006511526A (en) * | 2002-12-13 | 2006-04-06 | イミューノメディクス、インコーポレイテッド | Immunoconjugates with cleavable linkages in cells |
| US7303749B1 (en) | 1999-10-01 | 2007-12-04 | Immunogen Inc. | Compositions and methods for treating cancer using immunoconjugates and chemotherapeutic agents |
| US7601354B2 (en) | 1999-10-01 | 2009-10-13 | Immunogen Inc. | Compositions and methods for treating cancer using immunoconjugates and chemotherapeutic agents |
| US10844135B2 (en) | 2003-10-10 | 2020-11-24 | Immunogen, Inc. | Method of targeting specific cell populations using cell-binding agent maytansinoid conjugates linked via a non-cleavable linker, said conjugates and methods of making said |
-
1985
- 1985-12-16 LU LU86212A patent/LU86212A1/en unknown
-
1986
- 1986-12-10 ZA ZA869320A patent/ZA869320B/en unknown
- 1986-12-15 DD DD86297644A patent/DD262998A5/en not_active IP Right Cessation
- 1986-12-16 JP JP61299788A patent/JPS62195387A/en active Pending
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| USRE43899E1 (en) | 1999-10-01 | 2013-01-01 | Immunogen Inc. | Compositions and methods for treating cancer using immunoconjugates and chemotherapeutic agents |
| USRE44704E1 (en) | 1999-10-01 | 2014-01-14 | Immunogen Inc. | Compositions and methods for treating cancer using immunoconjugates and chemotherapeutic agents |
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Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DD262998A5 (en) | 1988-12-21 |
| LU86212A1 (en) | 1987-07-24 |
| ZA869320B (en) | 1987-08-26 |
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