JPS6219531A - Stable human angiotensin agent - Google Patents

Abstract

PURPOSE:To provide the titled drug preparation containing human-type angiotensin in combination with a specific stabilizing agent and useful as a hypertensive agent. CONSTITUTION:The objective human-type angiotensin agent contains (A) human- type angiotensin and (B) one or more stabilizers selected from gelatin, albumin, acidic polysaccharide (e.g. chondroitin sulfate, dextran sulfate, heparin, etc.), acidic amino acid (e.g. glutamic acid, aspartic acid, etc.) and organic acid (e.g. citric acid, lactic acid, tartaric acid, malic acid, etc.). The amounts of gelatin and albumin are preferably 1-1,000pts.wt., and the amounts of the other components are 1-500pts.wt. each per 1pt.wt. of angiotensin. EFFECT:Since the decomposition of angiotensin in the dissolved solution is suppressed and the stability of angiotensin is improved remarkably, the agent is convenient for production, treatment and storage.

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は安定なヒト型アンギオテンシン製剤に関する。[Detailed description of the invention] The present invention relates to stable human angiotensin formulations.

アンギオテンシンは、腎昇圧系として知られるレニンー
アンギオテンシン系を形成する重要なペプチドホルモン
であり、既知物質の中では最も強力な昇圧活性を示すと
いわれている。そのため従来からショック状態の患者の
治療に用いられてきたが、近年癌化学療法の進歩にとも
ない新治療法の１つである昇圧癌化学療法における昇圧
剤としても汎用されるようになり、臨床的にも重要な治
療薬となりつつある。Angiotensin is an important peptide hormone that forms the renin-angiotensin system, known as the renal pressor system, and is said to exhibit the strongest pressor activity among known substances. For this reason, it has traditionally been used to treat patients in a state of shock, but in recent years, with advances in cancer chemotherapy, it has come to be widely used as a vasopressor agent in vasopressor cancer chemotherapy, which is one of the new treatment methods, and has been used clinically. It is also becoming an important therapeutic drug.

アンギオテンシンは種々の動物の生体成分であるが、動
物種により構成アミノ酸の１部が異なり、例えばヒトと
ウシでは５位のアミノ酸が異なっている。従来治療薬と
してはウシ型アンギオテンシン及びその誘導体が用いら
れてきたが、ヒトの治療薬としてヒト型アンギオテンシ
ンが最も好ましい。Angiotensin is a biological component of various animals, but some of the constituent amino acids differ depending on the animal species; for example, the amino acid at position 5 differs between humans and cows. Although bovine angiotensin and its derivatives have been used as conventional therapeutic agents, human angiotensin is most preferred as a therapeutic agent for humans.

アンギオテンシンは生体内で速やかに代謝され不活化さ
れるため、通常注射剤として提供される。あらかじめ溶
解しておく注射液とすることもできるが、アンギオテン
シンは溶液中で徐々に分解するため、冷所に保存するか
、なるべく速やかに使用する必要がある。そのため用時
溶解して使用する凍結乾燥製剤とするのが好まし℃・。Since angiotensin is rapidly metabolized and inactivated in vivo, it is usually provided as an injection. It can also be prepared as an injection solution that has been dissolved in advance, but since angiotensin gradually decomposes in the solution, it must be stored in a cool place or used as soon as possible. Therefore, it is preferable to use a lyophilized preparation that is dissolved before use.

しかしアンギオテンシンは極めて強力な昇圧活性を有す
るため、１回の使用量は微量であり（１ダ以下）、凍結
乾燥製剤とするためには適当な賦形剤を添加する必要が
ある。しかし凍結乾燥製剤の賦形剤として通常用いられ
ているマンニトール、ぶどう糖などの糖類を添加してア
ンギオテンシンの凍結乾燥製剤を調製し、保存試験を行
ったところアンギオテンシンの充分な安定性が得られな
かった。However, since angiotensin has extremely strong pressor activity, the amount used at one time is very small (less than 1 da), and it is necessary to add appropriate excipients to form a freeze-dried preparation. However, when a freeze-dried preparation of angiotensin was prepared by adding sugars such as mannitol and glucose, which are commonly used as excipients for freeze-dried preparations, and a storage test was conducted, sufficient stability of angiotensin was not obtained. .

前記のような状況にかんがみ、本発明者らはアンギオテ
ンシンの安定な製剤を得るために鋭意研究した結果、ア
ンギオテンシン水溶液に特定の化合物を添加することに
より、水溶液中、凍結乾燥製剤中及び凍結乾燥製剤を溶
解後の溶液中のアンギオテンシンの安定性が著しく増大
することを見出した。In view of the above situation, the present inventors conducted intensive research to obtain a stable preparation of angiotensin. By adding a specific compound to an aqueous solution of angiotensin, the present inventors found that by adding a specific compound to an aqueous solution of angiotensin, it was possible to obtain a stable preparation of angiotensin. We found that the stability of angiotensin in solution increases significantly after dissolving it.

本発明は、ヒト型アンギオテンシンとゼラチン、アルブ
ミン、酸性多糖、酸性アミノ酸及び有機酸よりなる群か
ら選ばれた１種以上の安定化剤を含有することを特徴と
する、ヒト型アンギオテンシン製剤である。The present invention is a human angiotensin preparation containing human angiotensin and one or more stabilizers selected from the group consisting of gelatin, albumin, acidic polysaccharides, acidic amino acids, and organic acids.

アンギオテンシンにはアンゼオテンシン１１アンギオテ
ンシン■及びアンギオテンシンＩがあるが、主要な生理
活性物質はアンギオテンシン■である。アンギオテンシ
ンＩは変換酵素によってアンギオテンシン■となり昇圧
活性を示すが、アンギオテンシン１はほとんど活性を示
さない。したがって本発明に用いられるアンギオテンシ
ンはＡＳＩ）　−Ａｒｇ　−Ｖａｌ　−Ｔｙｒ　−１１
ｅｕ　−Ｈｌｓ　−Ｐｒｏ　−Ｐｈｅ　−Ｈｉｓ　−Ｌ
ｅｕで表わされるヒト型アンギオテンシン！、Ａｓｐ　
−Ａｒｇ　−Ｖａｌ　−Ｔｙｒ　−１１ｅｕ　−Ｈｉｓ
　−Ｐｒｏ　−Ｐｈｅで表わされるヒト型アンギオテン
シンｎ及びそれらのＮ末端のＡｓｐをβ−ＡＳｐｓβ−
Ｄ　−ＡＧｐ、　ＡＳｐ（ＮＨ２）などとしたヒト型ア
ンギオテンシン■及びアンギオテンシン■の誘導体であ
る。Angiotensin includes angiotensin 1, angiotensin ■, and angiotensin I, and the main physiologically active substance is angiotensin ■. Angiotensin I is converted to angiotensin ■ by a converting enzyme and shows pressor activity, but angiotensin 1 shows almost no activity. Therefore, the angiotensin used in the present invention is ASI) -Arg -Val -Tyr -11
eu -Hls -Pro -Phe -His -L
Human angiotensin expressed as eu! , Asp.
-Arg -Val -Tyr -11eu -His
-Pro -Phe human angiotensin n and their N-terminal Asp are β-ASpsβ-
They are derivatives of human angiotensin (2) and angiotensin (2) such as D-AGp and ASp (NH2).

本発明に用いられるゼラチンは動物の骨などを酸又はア
ルカリで処理してコラーゲンとしたのち、水で加熱抽出
して得られるもののほか、それらを再重合させたものな
ど医薬用に供されるものであれば特に限定されないが、
分子量２０００〜１００００のものが好ましい。アルブ
ミンとしてはウシアルブミン、卵アルブミン、ヒトアル
ブミンなどを用いることができるが、抗原性の問題から
ヒトアルブミンが好ましい。The gelatin used in the present invention is obtained by treating animal bones etc. with acid or alkali to produce collagen and then heating and extracting it with water, as well as those obtained by repolymerizing them and other products used for pharmaceutical purposes. There is no particular limitation if
Those having a molecular weight of 2,000 to 10,000 are preferred. As albumin, bovine albumin, egg albumin, human albumin, etc. can be used, but human albumin is preferred from the viewpoint of antigenicity.

ゼラチン及びアルブミンの使用量は、アンギオテンシン
１重量部に対し、１〜１０００重量部が好ましい。The amount of gelatin and albumin used is preferably 1 to 1000 parts by weight per 1 part by weight of angiotensin.

酸性多糖としては多糖類の硫酸エンチルが好ましく、コ
ンドロイチン硫酸、ヘパリンなどの天然物のほか、デキ
ストランを硫酸化したデキストラン硫酸などを用いるこ
とができる。これらの酸性多糖は通常ナトリウム塩とし
て用いられるが、カリウム塩などの他の塩でもよいし、
遊離の酸であってもよい。その使用量は、アンギオテン
シン１重量部に対し、１〜５００重量部が好ましい。As the acidic polysaccharide, the polysaccharide ethyl sulfate is preferred, and in addition to natural products such as chondroitin sulfate and heparin, dextran sulfate obtained by sulfating dextran can be used. These acidic polysaccharides are usually used as sodium salts, but other salts such as potassium salts may also be used.
It may be a free acid. The amount used is preferably 1 to 500 parts by weight per 1 part by weight of angiotensin.

酸性アミノ酸としてはグルタミン酸、アスパラギン酸な
どが好ましく、通常ナトリウム塩として用いられるが、
カリウム塩などの他の塩でもよいし、遊離のアミノ酸で
あってもよい。その使用量はアンギオテンシン１重量部
に対し、１〜５００重量部が好ましい。Preferred acidic amino acids include glutamic acid and aspartic acid, which are usually used as sodium salts.
Other salts such as potassium salts may be used, or free amino acids may be used. The amount used is preferably 1 to 500 parts by weight per 1 part by weight of angiotensin.

有機酸としてはくえん酸、乳酸、酒石酸、りんご酸なと
のオキシ酸が好ましく、これらは遊離の酸でもよいし、
ナトリウムなどとの塩であってもよい。その使用量はア
ンギオテンシン１重量部に対し、１〜５００重量部が好
ましい。As the organic acid, oxyacids such as citric acid, lactic acid, tartaric acid, and malic acid are preferable, and these acids may be free acids,
It may also be a salt with sodium or the like. The amount used is preferably 1 to 500 parts by weight per 1 part by weight of angiotensin.

なお本発明の製剤には、凍結乾燥製剤の賦形剤として通
常使用されるぶどう糖、果糖、マンニトール、ソルビト
ール、キシリトール、デキストランなどを添加すること
ができる。また塩化ナトリウムなどの等張化剤、燐酸塩
等の各種緩衝剤、塩酸、酢酸、水酸化ナトリウムなどの
ｐＨ調整剤を加えることもできる。水溶液のｐＨは２．
０〜８．０特にｐＨ４，０〜ＺＯが好ましい。Note that glucose, fructose, mannitol, sorbitol, xylitol, dextran, etc., which are commonly used as excipients for freeze-dried preparations, can be added to the preparation of the present invention. It is also possible to add isotonizing agents such as sodium chloride, various buffering agents such as phosphates, and pH adjusting agents such as hydrochloric acid, acetic acid, and sodium hydroxide. The pH of the aqueous solution is 2.
0 to 8.0, particularly pH 4.0 to ZO.

本発明の製剤を製造するには、アンギオテンシン、安定
化剤、緩衝剤及び必要に応じて賦形剤などを注射用蒸留
水に溶解し、ｐＨを調整して無菌濾過したのち、アンプ
ルなどに充填して注射剤とするか、この溶液を通常の方
法で凍結乾燥し、凍結乾燥製剤とすればよい。To manufacture the formulation of the present invention, angiotensin, a stabilizer, a buffer, and excipients as necessary are dissolved in distilled water for injection, the pH is adjusted, sterile filtered, and then filled into ampoules etc. The solution may be prepared as an injection, or this solution may be freeze-dried using a conventional method to obtain a freeze-dried preparation.

こうして得られたアンギオテンシン製剤は、水溶液中、
凍結乾燥製剤中及び凍結乾燥製剤を溶解後の溶液中のア
ンギオテンシンの分解が抑制され安定性が著しく改善さ
れるため、生産工程、治療及び保存等におけるアンギオ
テンシンの使用上きわめて好都合である。The angiotensin preparation thus obtained is in an aqueous solution,
Since the decomposition of angiotensin in the lyophilized preparation and in the solution after dissolving the lyophilized preparation is suppressed and the stability is significantly improved, it is extremely convenient for the use of angiotensin in production processes, treatment, storage, etc.

実施例１ ヒト型アンギオテンシンｌ１１０ｍ９ ゼラチン　　　　　　　　　　　　　　５００ｍ９０．
０２Ｍ燐酸塩緩衝液（１）Ｈ５，５）　　　全量１００
ｍ／！前記の組成の水溶液を調製して無菌濾過したのち
、バイアルに１ｍｌずつ充填して凍結乾燥し、凍結乾燥
製剤を得る。Example 1 Human angiotensin l110m9 Gelatin 500m90.
02M phosphate buffer (1) H5,5) Total volume 100
m/! After preparing an aqueous solution with the above composition and sterile filtration, it is filled in 1 ml portions into vials and freeze-dried to obtain a freeze-dried preparation.

実施例２〜７の組成の水溶液を調製し、実施例１と同様
にして凍結乾燥製剤を得る。Aqueous solutions having the compositions of Examples 2 to 7 are prepared, and freeze-dried preparations are obtained in the same manner as in Example 1.

実施例２ ヒト型アンギオテンシンＩ　　　　　　　　　１０■ゼ
ラチン　　　　　　　　　　　　　　　５ｏｏｒｎ９グ
ルタミン酸　　　　　　　　　　　　　　　５０■水酸
化ナトリウム　　　　　　　　　　　　適量注射用蒸留
水　　　　　　　　　　　全量１ｏＯｍｌｐＨ５，５ 実施例３ ヒト型アンギオテンシンＩＩ　　　　　　　　　１０〜
ゼラチン　　　　　　　　　　　　　　５００■くえん
酸　　　　　　　　　　　　　　　２０（１■水酸化ナ
トリウム　　　　　　　　　　　　適量注射用蒸留水　
　　　　　　　　　　全量１００ゴｐＨ５，０ 実施例４ ヒト型アンギオテンシンＩＩ　　　　　　　　１０■デ
キストラン硫酸ナトリウム　　　　　１２５０”’ｌ；
’ｌ；用蒸留水　　　　　　　　　　　全量１００ｍＪ
ｐＨ６，０ 実施例５ ヒト型アンギオテンシン田１１０１ｎ ヘパリンナトリウム　　　　　　　　　　５００〜注射
用蒸留水　　　　　　　　　　　全量１００ゴｐＨ６，
５ 実施例６ ヒト型アンギオテンシンｌ　　　　　　　　１０７Ｗｌ
；１くえん酸　　　　　　　　　　　　　　　２００１
ｎ９マンニトール　　　　　　　　　　　１２５０■水
酸化ナトリウム　　　　　　　　　　　　適量注射用蒸
留水　　　　　　　　　　　全量１００ｍＪｐＨ５，０ 実施例７ ヒト型アンギオテンシンＩＩ　　　　　　　　　１０■
コンドロイチン硫酸ナトリウム５ｏｏ１ｎ９くえん酸　
　　　　　　　　　　　　　　　２００７Ｑマンニトー
ル　　　　　　　　　　　　１２５ｏｒｎ９水酸化ナト
リウム　　　　　　　　　　　　　適量注射用蒸留水　
　　　　　　　　　　全量１００ｍ１ｐＨ５，０ 実施例８ ヒト型アンギオテンシンＩｔ　　　　　　　　　１０〜
ゼラチン　　　　　　　　　　　　　　　１０ｏｒｒｕ
ｙ食塩　　　　　　　　　　　　　　　　８５０■０．
０２Ｍ酢酸塩緩衝液（１）Ｈ５，５）　　　　全量１０
０ｍ／前記の組成の水溶液を調製して無菌濾過したのち
、アンプルに１　ｍｌずつ充填して溶閉し、注射液とす
る。Example 2 Human angiotensin I 10 ■ Gelatin 5 oor 9 Glutamic acid 50 ■ Sodium hydroxide Appropriate amount Distilled water for injection Total volume 1 o Oml pH 5,5 Example 3 Human angiotensin II 10 ~
Gelatin 500 ■ Citric acid 20 (1 ■ Sodium hydroxide Appropriate amount Distilled water for injection
Total amount 100g pH5.0 Example 4 Human angiotensin II 10 ■ Sodium dextran sulfate 1250"'l;
'l; Distilled water total amount 100mJ
pH 6,0 Example 5 Human angiotensin field 1101n Sodium heparin 500 ~ Distilled water for injection Total amount 100 pH 6,
5 Example 6 Human angiotensin l 107Wl
;1 Citric acid 2001
n9 Mannitol 1250 ■ Sodium hydroxide Adequate amount Distilled water for injection Total amount 100 mJ pH 5,0 Example 7 Human angiotensin II 10 ■
Sodium chondroitin sulfate 5oo1n9 citric acid
2007Q Mannitol 125orn9 Sodium hydroxide Appropriate amount Distilled water for injection
Total volume 100ml pH 5.0 Example 8 Human angiotensin It 10~
Gelatin 10orru
y Salt 850■0.
02M acetate buffer (1) H5,5) Total volume 10
After preparing an aqueous solution with the above composition and sterile filtration, fill ampoules with 1 ml each and melt and seal to obtain an injection solution.

比較例 ヒト型アンギオテンシンＩＩ’　　　　　　　　ｌ０ｍ
９マンニトール　　　　　　　　　　　　１２５０ｍ９
０．０２Ｍ燐酸塩緩衝液（ｐＨ５，５）　　　　全量１
００ｍ／前記の組成−水溶液を調製し、実施例１と同様
へ にして凍結乾燥製剤を得る。Comparative example human angiotensin II' l0m
9 Mannitol 1250m9
0.02M phosphate buffer (pH 5,5) total volume 1
00m/Above composition - An aqueous solution is prepared and treated in the same manner as in Example 1 to obtain a lyophilized preparation.

試験例 実施例１〜７の製剤及び比較例の製剤を４０℃で６力月
間又は５０℃で６力月間保存したのち、ヒト型アンギオ
テンシン■の残存率を高速液体クロマトグラフィ法によ
り求めた。その結果を下記表に示す。本発明の製剤は比
較製剤に比べきわめて安定であることが知られる。Test Examples The preparations of Examples 1 to 7 and the preparations of Comparative Example were stored at 40°C for 6 months or at 50°C for 6 months, and then the residual rate of human angiotensin (III) was determined by high performance liquid chromatography. The results are shown in the table below. The formulations of the present invention are known to be extremely stable compared to comparative formulations.

出願人　トーアエイヨー株式会社 代理人　弁理士　　小　　林　　正　　雄外１名 手続補正書（自発　） 昭和６１年１０月ニア日Applicant: Toa Eiyo Co., Ltd. Agent: Patent attorney: Tadashi Ko Hayashi, 1 Yugai Procedural amendment (voluntary) Near day October 1986

Claims (1)

【特許請求の範囲】 １、ヒト型アンギオテンシンとゼラチン、アルブミン、
酸性多糖、酸性アミノ酸及び有機酸よりなる群から選ば
れた１種以上の安定化剤とを含有することを特徴とする
、ヒト型アンギオテンシン製剤。 ２、酸性多糖がコンドロイチン硫酸、デキストラン硫酸
及び／又はヘパリンである特許請求の範囲第１項に記載
のヒト型アンギオテンシン製剤。 ３、酸性アミノ酸がグルタミン酸及び／又はアスパラギ
ン酸である特許請求の範囲第１項に記載のヒト型アンギ
オテンシン製剤。 ４、有機酸がくえん酸、乳酸、酒石酸及び／又はりんご
酸である特許請求の範囲第１項に記載のヒト型アンギオ
テンシン製剤。[Claims] 1. Human angiotensin, gelatin, albumin,
A human angiotensin preparation comprising one or more stabilizers selected from the group consisting of acidic polysaccharides, acidic amino acids, and organic acids. 2. The human angiotensin preparation according to claim 1, wherein the acidic polysaccharide is chondroitin sulfate, dextran sulfate and/or heparin. 3. The human angiotensin preparation according to claim 1, wherein the acidic amino acid is glutamic acid and/or aspartic acid. 4. The human angiotensin preparation according to claim 1, wherein the organic acid is citric acid, lactic acid, tartaric acid and/or malic acid.