JPS62169837A - 大孔質粒子の製造方法 - Google Patents
大孔質粒子の製造方法Info
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- JPS62169837A JPS62169837A JP61243321A JP24332186A JPS62169837A JP S62169837 A JPS62169837 A JP S62169837A JP 61243321 A JP61243321 A JP 61243321A JP 24332186 A JP24332186 A JP 24332186A JP S62169837 A JPS62169837 A JP S62169837A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
分子の分離は、当該分子と交互作用をする配位子が結合
しているマトリックスの助けによって大部分行なわれる
。これらの配位子はイオン状、疎水性または親和性配位
子でもよい。寸法、ゲル濾過によって分子を分離すると
きは、相互に異なる多孔度を有する電気的に中性なマト
リックスが使用される。これらのマトリックスは、良好
な流れ特性を与えるために通常回転楕円面の形状である
。
しているマトリックスの助けによって大部分行なわれる
。これらの配位子はイオン状、疎水性または親和性配位
子でもよい。寸法、ゲル濾過によって分子を分離すると
きは、相互に異なる多孔度を有する電気的に中性なマト
リックスが使用される。これらのマトリックスは、良好
な流れ特性を与えるために通常回転楕円面の形状である
。
分離系の流れ特性はまた、存在する粒子の寸法によって
も決まる;粒子が小さければ圧力低下もそれに応じて高
く、流速を遅らせることになる。分子が迅速に分離され
るように、高い流速が得られることは工業的用途には望
ましいことである。使用される粒子に関する他の重要な
パラメーターは、該粒子によって示される全比表面積で
ある。粒子の比表面積が大きければ、それに応じて分子
はマトリックス中に迅速に浸透することができ、そして
、配位子と相互作用をすることができる。この比表面積
は、粒子の寸法を減少させることによって増加させるこ
とができる。
も決まる;粒子が小さければ圧力低下もそれに応じて高
く、流速を遅らせることになる。分子が迅速に分離され
るように、高い流速が得られることは工業的用途には望
ましいことである。使用される粒子に関する他の重要な
パラメーターは、該粒子によって示される全比表面積で
ある。粒子の比表面積が大きければ、それに応じて分子
はマトリックス中に迅速に浸透することができ、そして
、配位子と相互作用をすることができる。この比表面積
は、粒子の寸法を減少させることによって増加させるこ
とができる。
この反対命題は、通常中間経路、すなわち、分離系統の
流れ特性または比表面積のいずれに関しても最適でない
比較的大きい粒子寸法を使用することによって解決され
ている。
流れ特性または比表面積のいずれに関しても最適でない
比較的大きい粒子寸法を使用することによって解決され
ている。
本発明者等は、粒子の高い速度が得られ、かつ非常に大
ぎい比表面積が得られる寸法を付与することができるよ
うに多数の空洞(cavity)を内蔵する粒子を製造
することによって前記の反対命題を克服した。提供され
る粒子の極めて大きい表面積は、分子の分離に加えて固
定依存性細胞(anchorage dependen
t cells )の培養にも使用できる。この方法に
おいては、固定依存性細胞は栄養素中に懸濁されている
粒子の表面上、マイクロキャリヤー(m1crocar
rier)上で生長できる。
ぎい比表面積が得られる寸法を付与することができるよ
うに多数の空洞(cavity)を内蔵する粒子を製造
することによって前記の反対命題を克服した。提供され
る粒子の極めて大きい表面積は、分子の分離に加えて固
定依存性細胞(anchorage dependen
t cells )の培養にも使用できる。この方法に
おいては、固定依存性細胞は栄養素中に懸濁されている
粒子の表面上、マイクロキャリヤー(m1crocar
rier)上で生長できる。
この粒子の内部も細胞培養法に使用できるため、利用で
きる表面積ははるかに大きく、培養工程の間細胞に対す
る機械的保護も与えられる。
きる表面積ははるかに大きく、培養工程の間細胞に対す
る機械的保護も与えられる。
これらの大孔質粒子は、空洞生成用化合物と、マトリッ
クス形成用化合物を混合することによって製造される。
クス形成用化合物を混合することによって製造される。
空洞生成用化合物は、固体、液体または気体でもよい。
次いで、得られた混合物を水不溶性分散媒中に分散させ
、その中に粒子を形成する。次いで、この系を冷III
することによって、共有架橋結合によって、または、重
合によって水に不溶性にする。空洞生成用化合物を除去
後に、得られた大孔質粒子を誘導体にするか直接所期目
的に使用することができる。
、その中に粒子を形成する。次いで、この系を冷III
することによって、共有架橋結合によって、または、重
合によって水に不溶性にする。空洞生成用化合物を除去
後に、得られた大孔質粒子を誘導体にするか直接所期目
的に使用することができる。
マトリックス形成用化合物は、蛋白質、多糖類または合
成ポリマーから選ばれる。使用できる化合物の例は: 蛋白質−ゼラチン、アルブミン 多糖類−デキストラン、アガロース 合成ポリマー−ポリアクリルアミド である。
成ポリマーから選ばれる。使用できる化合物の例は: 蛋白質−ゼラチン、アルブミン 多糖類−デキストラン、アガロース 合成ポリマー−ポリアクリルアミド である。
空洞生成用固体化合物の例は、炭酸カルシウムであり、
これは水不溶性分散媒中に混合物を分散させることによ
って粒子をtJ mし、マトリックスを水不溶性にした
後に、その系を酸で処理することによって除去できる。
これは水不溶性分散媒中に混合物を分散させることによ
って粒子をtJ mし、マトリックスを水不溶性にした
後に、その系を酸で処理することによって除去できる。
使用される空洞生成用化合物が液体のときは、乳化剤の
添加が必要である。水不溶性空洞生成用液体化合物を、
水不溶性乳化剤(HLB−値が89より大きいことを特
徴とする)と混合する。系をかく拌しながら水不溶性乳
化剤(8より低いHLB値を特徴とする)を9右する空
洞生成用化合物をマトリックスの水性溶液に連続的に添
加することによって、空洞生成用化合物の小滴が形成さ
れる:かく拌がはげしければそれに応じて小さい小滴が
形成される。空洞生成用化合物を、マトリックス物質の
水性溶液を飽和させるのに十分な間で添加したとき、そ
れ以上の添加はマトリックス溶液が空洞生成用化合物の
過剰mの小滴を形成するであろう。安定な分散体が19
られるような乳化剤の選択によって、空洞生成用化合物
の小滴を含有するマトリックス物質の粒子が得られ、そ
の後、マトリックス物質を水に不溶性にする。次いで、
空洞生成用化合物を溶剤で洗浄除去する。大部分の有機
溶剤(水に不溶性の)は、植物油または鉱油と同様に空
洞生成用化合物として使用できる。
添加が必要である。水不溶性空洞生成用液体化合物を、
水不溶性乳化剤(HLB−値が89より大きいことを特
徴とする)と混合する。系をかく拌しながら水不溶性乳
化剤(8より低いHLB値を特徴とする)を9右する空
洞生成用化合物をマトリックスの水性溶液に連続的に添
加することによって、空洞生成用化合物の小滴が形成さ
れる:かく拌がはげしければそれに応じて小さい小滴が
形成される。空洞生成用化合物を、マトリックス物質の
水性溶液を飽和させるのに十分な間で添加したとき、そ
れ以上の添加はマトリックス溶液が空洞生成用化合物の
過剰mの小滴を形成するであろう。安定な分散体が19
られるような乳化剤の選択によって、空洞生成用化合物
の小滴を含有するマトリックス物質の粒子が得られ、そ
の後、マトリックス物質を水に不溶性にする。次いで、
空洞生成用化合物を溶剤で洗浄除去する。大部分の有機
溶剤(水に不溶性の)は、植物油または鉱油と同様に空
洞生成用化合物として使用できる。
好適な乳化剤の例は、スパン(St)an) 85、ア
ルラセル(^rlacel ) 83 (水に不溶性)
およびツイーン(Tween ) 80、トライトン(
TritOn) X−100(水溶性)である。
ルラセル(^rlacel ) 83 (水に不溶性)
およびツイーン(Tween ) 80、トライトン(
TritOn) X−100(水溶性)である。
使用される空洞生成用化合物が気体形態のときは、水溶
性乳化剤を含有するマトリックスの水性溶液中に高圧下
で前記の気体を吹込んで系内に安定な気泡を生成させる
。次いで、この混合物を水不溶性分散媒中に分散させて
粒子を生成させる。
性乳化剤を含有するマトリックスの水性溶液中に高圧下
で前記の気体を吹込んで系内に安定な気泡を生成させる
。次いで、この混合物を水不溶性分散媒中に分散させて
粒子を生成させる。
この分散媒には安定な分散体をIS7るために水溶性乳
化剤も添加される。乳化剤および分散媒は粒子を水に不
溶性にした優に除去する。
化剤も添加される。乳化剤および分散媒は粒子を水に不
溶性にした優に除去する。
実施例1
熱ゲル化(空洞生成用液体化合物)
ゼラチンを水中で加熱して10%(W/V)の濃度に溶
解させ、100dのゲル化溶液に63の乳化剤(ツイー
ン80)を添加した。次いで、30gの乳化剤(スパン
85)を含有するトルエン500!dをかく拌しながら
前記の溶液に添加した。所望の寸法のビーズが形成され
たとき、分散液をゼラチンの凝固温度より低い温度に冷
却した。上記の方法によってトルエンの小滴によって飽
和されたゼラチンのビーズが形成される。これらのトル
エンの小滴はビーズをエタノールおよびアセトンによる
洗浄によって除去でき、それによって、空洞で満された
ゼラチンビーズが生成する。
解させ、100dのゲル化溶液に63の乳化剤(ツイー
ン80)を添加した。次いで、30gの乳化剤(スパン
85)を含有するトルエン500!dをかく拌しながら
前記の溶液に添加した。所望の寸法のビーズが形成され
たとき、分散液をゼラチンの凝固温度より低い温度に冷
却した。上記の方法によってトルエンの小滴によって飽
和されたゼラチンのビーズが形成される。これらのトル
エンの小滴はビーズをエタノールおよびアセトンによる
洗浄によって除去でき、それによって、空洞で満された
ゼラチンビーズが生成する。
次いで、ゼラチンビーズを例えばグルタルアルデヒドで
架橋させて安定性をさらに増加させることができる。
架橋させて安定性をさらに増加させることができる。
実施例2
熱ゲル化(空洞生成用 令
5gの乳化剤(トライトンX−100)を10C)+t
eのゼラチン溶液(10%W/V)に添加した。
eのゼラチン溶液(10%W/V)に添加した。
次いで、空気を加圧下で前記溶液中に吹込み、その中に
多数の気泡を形成した。系をかく拌しながら前記の溶液
を、30gの乳化剤(スパン85)を含有する500I
rtlのトルエン/クロロホルム(73/27、W/V
)中に分散させてビーズを形成した。所望寸法のビーズ
を生成させた後、分散液を冷却させてゼラチンを凝固さ
せた。エタノールおよびアセトンで洗浄することによっ
て有機溶剤を除去した。次いで、得られたビーズを例え
ばグルタルアルデヒドでさらに架橋させることもできる
。
多数の気泡を形成した。系をかく拌しながら前記の溶液
を、30gの乳化剤(スパン85)を含有する500I
rtlのトルエン/クロロホルム(73/27、W/V
)中に分散させてビーズを形成した。所望寸法のビーズ
を生成させた後、分散液を冷却させてゼラチンを凝固さ
せた。エタノールおよびアセトンで洗浄することによっ
て有機溶剤を除去した。次いで、得られたビーズを例え
ばグルタルアルデヒドでさらに架橋させることもできる
。
実施例3
熱ゲル化(空洞生成用固体化合物)
1C1の炭酸カルシウムを100dゼラチン溶液(10
%W/V)に添加し、その後に実施例3のようにビーズ
を生成させた。ビーズを酸で処理して炭酸カルシウムを
溶解させ、それによってビーズ中に空洞を形成した。
%W/V)に添加し、その後に実施例3のようにビーズ
を生成させた。ビーズを酸で処理して炭酸カルシウムを
溶解させ、それによってビーズ中に空洞を形成した。
実施例4
1塗
アクリルアミド(179)およびビスアクリルアミド(
1,2g)をトリス(Tris)−緩衝液(100m、
0.05M、pt−17)中に溶解させた。過流酸アン
モニウム(0,59/mfl。
1,2g)をトリス(Tris)−緩衝液(100m、
0.05M、pt−17)中に溶解させた。過流酸アン
モニウム(0,59/mfl。
0.25ae)iよび乳化剤(トライトンX−100,
6g)を前記の七ツマー溶液に添加した。次いで、乳化
剤(スパン85.30g)を含有する500neのトル
エンをかく痒しながら系に添加した。次いで、TEME
D (助媒体、1.3d)をこの系に添加した。重合反
応の終了後にエタノールおよびアセトンで有機溶剤を洗
浄除去した。
6g)を前記の七ツマー溶液に添加した。次いで、乳化
剤(スパン85.30g)を含有する500neのトル
エンをかく痒しながら系に添加した。次いで、TEME
D (助媒体、1.3d)をこの系に添加した。重合反
応の終了後にエタノールおよびアセトンで有機溶剤を洗
浄除去した。
実施例5
規1」は[周令
デキストランの水性溶液(10%、w/v、100成)
に、水酸化す]−リウム(0,7g)および乳化剤(ツ
イーン80.6g)を添加した。乳化剤(スパン85.
30g)およびエピクロロヒドリン(1,5g)を溶解
させたトルエン(500fd)を、かく拌しながら前記
の系に添加した。
に、水酸化す]−リウム(0,7g)および乳化剤(ツ
イーン80.6g)を添加した。乳化剤(スパン85.
30g)およびエピクロロヒドリン(1,5g)を溶解
させたトルエン(500fd)を、かく拌しながら前記
の系に添加した。
この系の温度を2時間で40℃に上昇させ、次いで、1
2時間の間に70℃に上昇させた。得られたビーズをエ
タノールおよびアセトンで洗浄してFi機溶剤を除去し
た。使用するデキストランおよびエビクロロヒドリンの
渚を変化させることによって、形成されるビーズの性質
を変えることができる。
2時間の間に70℃に上昇させた。得られたビーズをエ
タノールおよびアセトンで洗浄してFi機溶剤を除去し
た。使用するデキストランおよびエビクロロヒドリンの
渚を変化させることによって、形成されるビーズの性質
を変えることができる。
実施例6
共右架槓結合
キトサンを蟻酸(5%、W/V)中に溶解させて30q
/1の濃度にした。100Inlの溶液を乳化剤(ツイ
ーン80.6g)と混合し、系をかく拌しながら乳化剤
〈スパン80.30g>を含有するトルエン(500d
)と混合した。所望の寸法のビーズが形成された後にこ
の系にホルムアルデヒド(20d)を添加した。得られ
たビーズを1時間経過復メタノールで洗浄した。
/1の濃度にした。100Inlの溶液を乳化剤(ツイ
ーン80.6g)と混合し、系をかく拌しながら乳化剤
〈スパン80.30g>を含有するトルエン(500d
)と混合した。所望の寸法のビーズが形成された後にこ
の系にホルムアルデヒド(20d)を添加した。得られ
たビーズを1時間経過復メタノールで洗浄した。
Claims (8)
- (1)多数の空洞を内蔵するポリマーマトリックスが配
合されていることを特徴とする大孔質粒子。 - (2)前記の粒子が、10〜500μの寸法を有し、前
記の空洞が1〜50μの直径を有することを特徴とする
特許請求の範囲第1項に記載の粒子。 - (3)前記の粒子が約200μの寸法を有し、そして、
前記の空洞が約10〜20μの直径を有することを特徴
とする特許請求の範囲第2項に記載の粒子。 - (4)前記のポリマーマトリックスが、蛋白質、多糖類
または合成ポリマーから成る特許請求の範囲第1〜第3
項の任意の1項に記載の粒子。 - (5)多数の空洞を内蔵するポリマーマトリックスが配
合されている大孔質粒子の製造方法において、(A)マ
トリックス物質のための水性溶剤中に、ポリマーまたは
重合性モノマーから選ばれるマトリックス物質を溶解さ
せ; (B)水溶性乳化剤を添加し; (C)(a)系をかく拌しながら、分散媒中に溶解する
乳化剤を含有する水不溶性分散媒を添加することをによ
って、または、 (b)前記の溶液中に高圧下で気体を吹込むことによっ
て、または、 (c)空洞生成用固体化合物を添加することによって、
前記のマトリックス物質中に空洞を形成し、 (D)分散媒に可溶性の乳化剤を含有する前記の過剰の
水不溶性分散媒中に前記のマトリックス物質を分散させ
、該マトリックス物質の粒子を生成させ、 (E)冷却によって、共有架橋結合によって、または重
合によって、前記のマトリックス物質を水不溶性にし、
そして、 (F)存在する前記の分散媒および任意の空洞生成用固
体化合物を洗浄除去する ことを特徴とする前記の方法。 - (6)前記のマトリックス物質に負の基、正の基、疎水
性基または親和性配位子を結合させることを特徴とする
特許請求の範囲第5項によって製造された大孔質粒子の
改質。 - (7)前記のマトリックス物質を、蛋白質、多糖類また
は重合性モノマーから成る群から選ぶことを特徴とする
特許請求の範囲第5項または第6項に記載の方法。 - (8)多数の空洞を内蔵するポリマーマトリックスが配
合されている大孔質粒子の、ゲル濾過、疎水クロマトグ
ラフィ、アフィニティクロマトグラフィーにおけるイオ
ン交換剤として、または細胞培養方法におけるマイクロ
キャリヤーとしての使用。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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SE8504764-5 | 1985-10-15 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS62169837A true JPS62169837A (ja) | 1987-07-27 |
JPH0830124B2 JPH0830124B2 (ja) | 1996-03-27 |
Family
ID=20361735
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP61243321A Expired - Lifetime JPH0830124B2 (ja) | 1985-10-15 | 1986-10-15 | 大孔質粒子の製造方法 |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US4935365A (ja) |
EP (1) | EP0222718B1 (ja) |
JP (1) | JPH0830124B2 (ja) |
DE (1) | DE3689327T2 (ja) |
SE (1) | SE464816B (ja) |
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