JPS62126197A - 新規な血漿キニノゲナーゼ測定用化合物 - Google Patents
新規な血漿キニノゲナーゼ測定用化合物Info
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- JPS62126197A JPS62126197A JP60265389A JP26538985A JPS62126197A JP S62126197 A JPS62126197 A JP S62126197A JP 60265389 A JP60265389 A JP 60265389A JP 26538985 A JP26538985 A JP 26538985A JP S62126197 A JPS62126197 A JP S62126197A
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- plasma kallikrein
- plasma
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
- C12Q1/37—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving peptidase or proteinase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
- C07K5/0205—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -NH-(X)3-C(=0)-, e.g. statine or derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2337/00—N-linked chromogens for determinations of peptidases and proteinases
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- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/802—Chromogenic or luminescent peptides
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〈産業上の利用分野〉
本発明は、血漿カリクレイン及び血漿カリクレイン様酵
素に対する新規発色性、■１つ蛍光ＨｇＢ質に関する。
素に対する新規発色性、■１つ蛍光ＨｇＢ質に関する。
本発明の基質は、従来、報告されている基質に比して、
掘めて選択性がよく、血漿カリクレインの定Ｍを行う事
が出来、血漿カリクレインが形成、阻害又は消費される
反応の研究、又はそれ等に関与する因子の測定、例えば
、血漿プレカリクレイン、血漿カリクレイン・インヒビ
ター、及び第ｘ■因子の測定に特に適している。
掘めて選択性がよく、血漿カリクレインの定Ｍを行う事
が出来、血漿カリクレインが形成、阻害又は消費される
反応の研究、又はそれ等に関与する因子の測定、例えば
、血漿プレカリクレイン、血漿カリクレイン・インヒビ
ター、及び第ｘ■因子の測定に特に適している。
〈従来の技術〉
凝固、線溶反応に於ける合成基質の導入は、１９５４年
Ｓ、 ５ｈｅｒｎ＋ｙ等（Ｊ、Ｅ３．Ｃ，，２０８８５
１０５（１９５４））の合成した「ＡＭＣ（Ｔｏｓ−Ａ
ｒ（１−ＯＭｅ）等のアルギニンエステルが、基質とし
てＩ・ロンビンのニステラーぜ活性の測定に使用された
のに始まるが、エステル氷解活性が凝固活性と一致Ｕず
、基質の特異性や感度が低い等の問題があった。しかし
、最近のペプチド化学の進歩から、フィブリノーゲンの
１〜ロンピンによる解裂部のアミノ酸構造に類似したペ
プチド基質、Ｂ Ｚ −Ｐ ｈｅ −Ｖ ａ ｌ −Ａ
ｒ Ｑ −ＰＮＡ （Ｓ−Ｚｌ ６０）が、ＢＩ６ｍ
ｔ＋ａｃｈ （ｒｈｒｏｍｂ。
Ｓ、 ５ｈｅｒｎ＋ｙ等（Ｊ、Ｅ３．Ｃ，，２０８８５
１０５（１９５４））の合成した「ＡＭＣ（Ｔｏｓ−Ａ
ｒ（１−ＯＭｅ）等のアルギニンエステルが、基質とし
てＩ・ロンビンのニステラーぜ活性の測定に使用された
のに始まるが、エステル氷解活性が凝固活性と一致Ｕず
、基質の特異性や感度が低い等の問題があった。しかし
、最近のペプチド化学の進歩から、フィブリノーゲンの
１〜ロンピンによる解裂部のアミノ酸構造に類似したペ
プチド基質、Ｂ Ｚ −Ｐ ｈｅ −Ｖ ａ ｌ −Ａ
ｒ Ｑ −ＰＮＡ （Ｓ−Ｚｌ ６０）が、ＢＩ６ｍ
ｔ＋ａｃｈ （ｒｈｒｏｍｂ。
Ｒｅ５ｅａｒｃｈ１ ２６７〜２７８ （１９７２）
）らにより合成され、Ｍ素反応を受けて遊離したバラニ
］・ロアニリン（ＰＮＡ）の黄色の発色による酵素化学
的分光分析の容易な事、試薬調整の容易さなどから次第
に、研究検査に用いられるに至った。
）らにより合成され、Ｍ素反応を受けて遊離したバラニ
］・ロアニリン（ＰＮＡ）の黄色の発色による酵素化学
的分光分析の容易な事、試薬調整の容易さなどから次第
に、研究検査に用いられるに至った。
カリクレインは、血中のα２−グロブリン分画中に存在
するギニノーゲンに助いてキニンを遊離させるいわゆる
キニン遊離酵素である。血漿カリクレインは、正常時に
は、不活性な面駆体であるプレカリクレインとして存在
し、ヒト血漿中のプレカリクレインｒＲは、通常一定し
ていて比較的個人差が少ない。特定の病気、例えば重症
の急性用炎、慢性消化器疾患、慢性腎炎、アジソン氏病
、交感神経系の異緊張症等で減少が見られる。又、増加
が見られるのは、急性膵炎の初期、急性感染症、クツシ
ング氏病等である。このように病気の場合には、血中の
プレカリクレイン１；ｌは−・時的、あるいは永久的な
変化が見られるので、血漿プレカリクレインを簡単かつ
正確な方法ぐ測定できることは大きなＱａがある。
するギニノーゲンに助いてキニンを遊離させるいわゆる
キニン遊離酵素である。血漿カリクレインは、正常時に
は、不活性な面駆体であるプレカリクレインとして存在
し、ヒト血漿中のプレカリクレインｒＲは、通常一定し
ていて比較的個人差が少ない。特定の病気、例えば重症
の急性用炎、慢性消化器疾患、慢性腎炎、アジソン氏病
、交感神経系の異緊張症等で減少が見られる。又、増加
が見られるのは、急性膵炎の初期、急性感染症、クツシ
ング氏病等である。このように病気の場合には、血中の
プレカリクレイン１；ｌは−・時的、あるいは永久的な
変化が見られるので、血漿プレカリクレインを簡単かつ
正確な方法ぐ測定できることは大きなＱａがある。
カリクレインの活性測定法に関しては、既に多くの方法
が開発されており、プレカリクレインの測定はアクチベ
ーターで活性化後、生成したカリクレインを測定する事
により行なわれている。、ｌ！ｌＪら、プレカリクレイ
ンをトリプシンやハーゲマン因子で活性化して生じたカ
リクレインを、１．生物学的に、２１合成基質を用いて
化学的に測定する。前者には、頚功脈血圧下降磨測定法
、血流増加測定法、摘出平滑筋による方法などがあり、
信頼性の高い測定法ではあるが、’Ｑ１度の技術と経験
を要するという欠点がある。後者の化学的測定法は、Ｂ
ＡＥＥ （ｒ３ｚ−Ａｒｇ−ＯＥｔ）やＴＡＭＥ （１
’ｏｓ−ＡｒＱ−ＯＭｅ）等の合成基Ｖ（を用いてニス
テラーＵ活性を測定するもので、測定操作は簡便で応用
範囲一す広い。
が開発されており、プレカリクレインの測定はアクチベ
ーターで活性化後、生成したカリクレインを測定する事
により行なわれている。、ｌ！ｌＪら、プレカリクレイ
ンをトリプシンやハーゲマン因子で活性化して生じたカ
リクレインを、１．生物学的に、２１合成基質を用いて
化学的に測定する。前者には、頚功脈血圧下降磨測定法
、血流増加測定法、摘出平滑筋による方法などがあり、
信頼性の高い測定法ではあるが、’Ｑ１度の技術と経験
を要するという欠点がある。後者の化学的測定法は、Ｂ
ＡＥＥ （ｒ３ｚ−Ａｒｇ−ＯＥｔ）やＴＡＭＥ （１
’ｏｓ−ＡｒＱ−ＯＭｅ）等の合成基Ｖ（を用いてニス
テラーＵ活性を測定するもので、測定操作は簡便で応用
範囲一す広い。
る良好な溶解性、及び分解物の易検出性の４点を満足す
る事が重要である。
る事が重要である。
このうちでも、測定しようとづる酵素に対する高い特異
性は特に重要である。
性は特に重要である。
一般に血漿中のプレカリクレイン、或いはカリクレイン
・インヒビター等を発色性［を利用して測定しにうとす
る場合、血漿中に存在すると予測されるカリクレイン以
外の蛋白質分解酵素ぐあるプラスミン、トロンビン、第
）（ａ因子、ウロキナーピ、飽性カリクレイン等と交差
反応を起ずと、正確な測定が期しがたい。
・インヒビター等を発色性［を利用して測定しにうとす
る場合、血漿中に存在すると予測されるカリクレイン以
外の蛋白質分解酵素ぐあるプラスミン、トロンビン、第
）（ａ因子、ウロキナーピ、飽性カリクレイン等と交差
反応を起ずと、正確な測定が期しがたい。
従来、開発されて来た最良の血漿カリクレイン用合成基
質としては、Ｈ−ｎ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ −ＡｒＱ−ＰＮ
Ａ （Ｓ−２３０２Ｋａｂｉ） （Ｃｌａｅｓｏｎ。
質としては、Ｈ−ｎ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ −ＡｒＱ−ＰＮ
Ａ （Ｓ−２３０２Ｋａｂｉ） （Ｃｌａｅｓｏｎ。
Ｇ、 ｅｔ ａｌ、、ｌｌａｅｍｏｓｔａｓｉｓ ７
６２ （１９７８） ）があげられるが、基質特異性の
点において、必ずしも満足出来るものではない。ずなわ
ら、蛋白質分ＶＮ１４′ｇ素のうら、血漿カリクレイン
以外にプラスミン、トロンビン、第Ｘａ因子、飽性カリ
クレインとも可成り反応する事が解っている。
６２ （１９７８） ）があげられるが、基質特異性の
点において、必ずしも満足出来るものではない。ずなわ
ら、蛋白質分ＶＮ１４′ｇ素のうら、血漿カリクレイン
以外にプラスミン、トロンビン、第Ｘａ因子、飽性カリ
クレインとも可成り反応する事が解っている。
又、上記基質の如く、生成り゛るｐ−ニトロアニリンの
黄色を比色する方法は、血漿成分の影響を免かれる事は
出来ない。
黄色を比色する方法は、血漿成分の影響を免かれる事は
出来ない。
〈発明が解決しようとしている問題点〉本発明考等は、
かかる点を改良１べく、新規な血漿カリクレイン川基質
の開発ω１究を行った結果、上記の欠点を苔しく改良し
、前述の４条付を満足させる優れた性質を右する基質を
見出した。
かかる点を改良１べく、新規な血漿カリクレイン川基質
の開発ω１究を行った結果、上記の欠点を苔しく改良し
、前述の４条付を満足させる優れた性質を右する基質を
見出した。
〈問題点を解決するための手段〉
本発明ににる新規な発色性且つ蛍光性基質は、次の一般
式 ｉ ｃ＝ Ｏ＝ＯＡ （へ へ ＝ ： 工 Ｑ Ｑ ’ Ｚ ＝ 口 ０≦ 〔式中ｎは３〜４の整数を、Ｒ１は Ｉ Ｒ２は、メヂル、ブチル、プロピル、ブチル、ペンチル
などのＣ−０６の分枝をイＴ ｔＪることらあす る低級アルキル基あるいはフェニル、ベンジル基又はＩ
−リル基を示す。〕 で表わされ、特に発色基として、３−カルボキシ−４−
ヒドロキシ−アニリドを用いる事を特徴とづる。本基質
は、発色基にヒドロキシル基、カルボキシルリと言う撓
めて親水性の基を１もつために卓越した水に対する溶解
特性を持っている。代表的な用途としては、（Ｉ）基質
を、血漿カリクレイン測定用基質として用いることにあ
り、モの測定原理は主として生成する３−カルボキシ−
４−ヒドロキシ−アニリンをペンタシアノアミンフェロ
■−ト法や適当なカプラーと酸化縮合させた着色物質に
導きこれを比色定検することによるが、又、励起波長３
２８旧口、蛍光波長５４ＯｎＩｎにて蛍光分析法により
定量することにより血漿カリクレイン活性を特異的に測
定することも可能である。
式 ｉ ｃ＝ Ｏ＝ＯＡ （へ へ ＝ ： 工 Ｑ Ｑ ’ Ｚ ＝ 口 ０≦ 〔式中ｎは３〜４の整数を、Ｒ１は Ｉ Ｒ２は、メヂル、ブチル、プロピル、ブチル、ペンチル
などのＣ−０６の分枝をイＴ ｔＪることらあす る低級アルキル基あるいはフェニル、ベンジル基又はＩ
−リル基を示す。〕 で表わされ、特に発色基として、３−カルボキシ−４−
ヒドロキシ−アニリドを用いる事を特徴とづる。本基質
は、発色基にヒドロキシル基、カルボキシルリと言う撓
めて親水性の基を１もつために卓越した水に対する溶解
特性を持っている。代表的な用途としては、（Ｉ）基質
を、血漿カリクレイン測定用基質として用いることにあ
り、モの測定原理は主として生成する３−カルボキシ−
４−ヒドロキシ−アニリンをペンタシアノアミンフェロ
■−ト法や適当なカプラーと酸化縮合させた着色物質に
導きこれを比色定検することによるが、又、励起波長３
２８旧口、蛍光波長５４ＯｎＩｎにて蛍光分析法により
定量することにより血漿カリクレイン活性を特異的に測
定することも可能である。
〈発明の効果〉
本基質の特徴は、前述した如くその血漿カリクレインに
対する優れた駐質特異性にある。新規基質ＰＳ−２２０
３（１」束結）とＳ−２３０２（力ご：参考例）及び参
考のため合成したＦ記新規基質と同じアミノ酸配列でＰ
ＮＡを発色基としくＰＳ−２２０３Ｎ Ｚ−ｏ−
Ｏｒｎ−一 Ｆ） ｈ ｅ −ＡｒＯ−ＰＮＡ
（参考例）と各凝固・線溶に関する酵素である。血漿カ
リクレイン（＋−１１） Ｋ ） 、ト［−ｌンビン（
−１−１１＞、プラスミン（ＰＬ）、第Ｘａ因子（ＦＸ
ａ） 、飽性カリクレイン（ＨＧＫ＞、ウロキナーゼ（
ＵＫ）等との相対反応性をＰ Ｓ −２２０３Ｎ Ｚ
−ｎ−Ｏｒｎ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−１） Ｎ Ａを１００
として示すと表１の如くなり、トロンビン、プラスミン
、第Ｘａ因子、飽性カリクレイン等に対する反応性が０
１−１Δ系の新ノ、１２基質のく 場合は、著しく低Ｖ、トロンビンは２％、プラスミン１
４％、第）（ａ因子４％、飽性カリクレイン１５％しか
反応せず、又、Ｓ−２３０２の１−ロンビン２６９％、
プラスミン４８％、第Ｘ ａ囚子１６９％、原性カリク
レン１６９％、つ１コキナーぜ５０％と比較して著しく
選択性が改良されている事が解る。
対する優れた駐質特異性にある。新規基質ＰＳ−２２０
３（１」束結）とＳ−２３０２（力ご：参考例）及び参
考のため合成したＦ記新規基質と同じアミノ酸配列でＰ
ＮＡを発色基としくＰＳ−２２０３Ｎ Ｚ−ｏ−
Ｏｒｎ−一 Ｆ） ｈ ｅ −ＡｒＯ−ＰＮＡ
（参考例）と各凝固・線溶に関する酵素である。血漿カ
リクレイン（＋−１１） Ｋ ） 、ト［−ｌンビン（
−１−１１＞、プラスミン（ＰＬ）、第Ｘａ因子（ＦＸ
ａ） 、飽性カリクレイン（ＨＧＫ＞、ウロキナーゼ（
ＵＫ）等との相対反応性をＰ Ｓ −２２０３Ｎ Ｚ
−ｎ−Ｏｒｎ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−１） Ｎ Ａを１００
として示すと表１の如くなり、トロンビン、プラスミン
、第Ｘａ因子、飽性カリクレイン等に対する反応性が０
１−１Δ系の新ノ、１２基質のく 場合は、著しく低Ｖ、トロンビンは２％、プラスミン１
４％、第）（ａ因子４％、飽性カリクレイン１５％しか
反応せず、又、Ｓ−２３０２の１−ロンビン２６９％、
プラスミン４８％、第Ｘ ａ囚子１６９％、原性カリク
レン１６９％、つ１コキナーぜ５０％と比較して著しく
選択性が改良されている事が解る。
基質として、極めＵｌれている事を示しＣいる。
本発明の化合物の用途は、既に述べた通り血漿カリクレ
イン活性測定用の基質であるが、その場合、当該基質を
ｐＨ８，ｏ〜９．０間の緩画液中で血漿カリクレインに
作用さけ、生成する３−カルボキシ−４−ヒドロキシア
ニリンを適当な着色物に導きこれを比色定量することに
よるか、又、励起波長３２８ｎｎ＋、蛍光波長５４０
ｎｍにて蛍光分析法により、宙吊することにより血漿カ
リクレイン活性を測定する事が出来る。
イン活性測定用の基質であるが、その場合、当該基質を
ｐＨ８，ｏ〜９．０間の緩画液中で血漿カリクレインに
作用さけ、生成する３−カルボキシ−４−ヒドロキシア
ニリンを適当な着色物に導きこれを比色定量することに
よるか、又、励起波長３２８ｎｎ＋、蛍光波長５４０
ｎｍにて蛍光分析法により、宙吊することにより血漿カ
リクレイン活性を測定する事が出来る。
着色物に導く方法としては、ペンタシアノアミンフェロ
エート法やカプラーと酸化縮合させる法がある。カプラ
ーとしては、酸性側での発色の場合は、アニリン系化合
物、例えば、Ｎ、Ｎ−ジエチルアニリン、又、アルカリ
側では、フェノール、ナフトール、０−クレゾール、〇
−エチルフェノール等が用いられる。
エート法やカプラーと酸化縮合させる法がある。カプラ
ーとしては、酸性側での発色の場合は、アニリン系化合
物、例えば、Ｎ、Ｎ−ジエチルアニリン、又、アルカリ
側では、フェノール、ナフトール、０−クレゾール、〇
−エチルフェノール等が用いられる。
又、酸化縮合の酸化剤として、過酸化水素、過ｌ１Ｉｉ
！酸等、種々のものが用いられるが、メタ過ヨウ索酸が
ｔｒ適である。
！酸等、種々のものが用いられるが、メタ過ヨウ索酸が
ｔｒ適である。
３−カルボキシ−４−ヒドロキシアニリンを適当ｔ；着
色物に導くことにより極大吸収波長が、５６０〜７７０
ｎ１１１中に分布するが、呈色の温度による変動は極め
て少く安定で、血漿カリクレイン活性測定に適している
。更に発色感度を比べてみても、Ｐ−ニトロアニリンの
場合、−・船側定波長４０５ ｎｌＲにてε＝１０，６
００であるのに対し、ペンタアミンフェロエート法では
、λ＝７００ｎｍでε＝２１．ｂｏｏ１酸化縮今による
発色に於ては、〇−エチルフェノールの場合、λ＝ ６
４５ ｎｍでε＝２９，０００．２・６−キシレノール
の場合、λ＝６１５ｎｍでε−２１，６００、ぐ極めて
吸光度が大きく、この点に於いても測定上極めて有利で
ある。
色物に導くことにより極大吸収波長が、５６０〜７７０
ｎ１１１中に分布するが、呈色の温度による変動は極め
て少く安定で、血漿カリクレイン活性測定に適している
。更に発色感度を比べてみても、Ｐ−ニトロアニリンの
場合、−・船側定波長４０５ ｎｌＲにてε＝１０，６
００であるのに対し、ペンタアミンフェロエート法では
、λ＝７００ｎｍでε＝２１．ｂｏｏ１酸化縮今による
発色に於ては、〇−エチルフェノールの場合、λ＝ ６
４５ ｎｍでε＝２９，０００．２・６−キシレノール
の場合、λ＝６１５ｎｍでε−２１，６００、ぐ極めて
吸光度が大きく、この点に於いても測定上極めて有利で
ある。
又、本発明の特徴の一つとしフキ生体試料中の夾雑物に
よる測定上の影響をほとノυど受けないこ力で とＹあるが、これは、Ｐ−ニトロアニリド系化合物に於
ては、５６０ ｒｖ以下の波長で測定するのに対して、
本発明では、５６０ｎｍ以上の波長で測定する為、試料
中の夾雑物の影響を受けず、基質本来の高特異性と（Ｊ
ｌぼで、ｉＥ ｌｆｌ［なぶり定結果が得られる。
よる測定上の影響をほとノυど受けないこ力で とＹあるが、これは、Ｐ−ニトロアニリド系化合物に於
ては、５６０ ｒｖ以下の波長で測定するのに対して、
本発明では、５６０ｎｍ以上の波長で測定する為、試料
中の夾雑物の影響を受けず、基質本来の高特異性と（Ｊ
ｌぼで、ｉＥ ｌｆｌ［なぶり定結果が得られる。
以上の通り本発明の化合物は、血漿カリクレイン活性測
定用基質として、従来のらのに比べて、非常に優れてい
ることが明らかである。
定用基質として、従来のらのに比べて、非常に優れてい
ることが明らかである。
（Ｉ）で表わされる本発明の化合物は、ペプチド化学に
おいて、Ｊ：り知られる方法により合成される。
おいて、Ｊ：り知られる方法により合成される。
α−アミノ保：ｌＩ！ＪＪとしては、カルボベンゾキシ
、又ｔＪ ｔ−ブチルオキシカルボニル、又は、だれに
関連する基、例えば、（）−メトキシ、Ｐ−ニトロ、又
４．ｔ Ｐ−メトキシフェニルアゾールカルボベンゾキ
シ等を用いるのが有利である、。
、又ｔＪ ｔ−ブチルオキシカルボニル、又は、だれに
関連する基、例えば、（）−メトキシ、Ｐ−ニトロ、又
４．ｔ Ｐ−メトキシフェニルアゾールカルボベンゾキ
シ等を用いるのが有利である、。
アルギニンのδ−グアニジル丼の保護には、二１・ロ基
ヤプロｊ−ン化を用いるのが右利である。２個のアミノ
酸カッグリング、又はジペプチドとアミノ酸のカップリ
ングは、α−カルボ４．シル基の活性化により行われる
。例えば、Ｎ−ヒドロキシリクシニックイミド、Ｐ−シ
トロフェノール、トリクロロフェノール、４．６−ジメ
ヂルビリミジルー２−チオ、問合酸無水物等が利用でき
る。前述のエステル誘導体への活性化は、カルボジイミ
ド、例えば、Ｎ、Ｎ−ジシクロヘキシルカルボジイミド
（ＤＣＣ）の存在下で行うのが有利であり、又混合酸無
水物では、炭酸モノアルキルエステル塩化物、例えば、
イソブチルクロロフオルメ−１〜を用いるのが有利であ
る。
ヤプロｊ−ン化を用いるのが右利である。２個のアミノ
酸カッグリング、又はジペプチドとアミノ酸のカップリ
ングは、α−カルボ４．シル基の活性化により行われる
。例えば、Ｎ−ヒドロキシリクシニックイミド、Ｐ−シ
トロフェノール、トリクロロフェノール、４．６−ジメ
ヂルビリミジルー２−チオ、問合酸無水物等が利用でき
る。前述のエステル誘導体への活性化は、カルボジイミ
ド、例えば、Ｎ、Ｎ−ジシクロヘキシルカルボジイミド
（ＤＣＣ）の存在下で行うのが有利であり、又混合酸無
水物では、炭酸モノアルキルエステル塩化物、例えば、
イソブチルクロロフオルメ−１〜を用いるのが有利であ
る。
基質合成は、最初、発色基を）１ルギニル阜に結合さけ
逐次的にカップリングしていく方法によることが出来る
が、或いは、Ｎ−末端ジペブヂドフラグメント自体を合
成し、それに次いで、発色基を有するアルギニル基に結
合する事も可能である。
逐次的にカップリングしていく方法によることが出来る
が、或いは、Ｎ−末端ジペブヂドフラグメント自体を合
成し、それに次いで、発色基を有するアルギニル基に結
合する事も可能である。
尚、本発明の化合物は、酸付加塩の形′Ｃム使用可能で
あるが、それらの酸付加塩形成酸としては、塩酸、硫酸
などの鉱酸、酢酸などの有機酸が好ましい。
あるが、それらの酸付加塩形成酸としては、塩酸、硫酸
などの鉱酸、酢酸などの有機酸が好ましい。
本発明を以下実施例により詳細に説明するが、本発明は
、これら実施例に限定されるらのではない。
、これら実施例に限定されるらのではない。
■略号
ＡｒＧ−アルギニン
Ｐｈｅ＝フェニルアラニン
Ｌｙｓ−リジン
０ｒｎ＝オルニブーン
Ｚ−ベンジルオキシカルボニル
ＢＯＣ＝ｔ−ブブールオキシカルボニルｉ −ＢＯＣ＝
ｉ−ブチルオキシカルボニルＭＯＣ＝メチルオキシカ
ルボニル ＳＢＺ ＝ベンゼンスルフォニル ’ｒ ｏ ｓ ＝ Ｐ −ｈルエンスルフオニル０ＳＵ
＝コハク酸イミドエステル −ｐＮＡ＝Ｐ−二１−ロアニリド ーＣトＩΔ＝３−カルボキシ−４−ヒドロキシアニリド ＤＭＦ＝ジメチルホルムアミド ＮＥＭ＝Ｎ−エチルモルホリン ＴＬＣ＝薄層クロマトグラフィー ＭｅＯＨ＝メタノール Ａ ｃ ＯＨ＝酢酸 ［３ｕ ＯＨ＝ ｎ−ブタノール ＡＣＯＥ を−酢酸エチル ＧＰＣ＝ゲル濾過クロマトグラフィー （注 アミノ酸は特にことわらなければし一体を示ず） ■薄層クロマトグラフィーの条件等 Ｔ Ｌ Ｃ分析は、シリカゲル１：（メルク￥Ｊ）プレ
ー１−を使用 溶媒は、 Ｒｎ−Ｂｕｏｌｌ：Ａｃ０１−１：Ｈ２Ｏ−４：１：Ｉ Ｒ（２ｎ−１３ｕＯ１−１： Ａｃ０１−１ ：
Ｈ２０＝４：１ ：２ Ｒｎ−ＢｕＯＨ：Ａｃ０１−１ ： Ｈ２０＝「３ ４：１：５ ■ゲル濾過には、東洋ＶＩ達工業株式会社のポリごニー
ルグル、トーヨーバールト１Ｗ４０Ｆ（商品名）を使用
した。
ｉ−ブチルオキシカルボニルＭＯＣ＝メチルオキシカ
ルボニル ＳＢＺ ＝ベンゼンスルフォニル ’ｒ ｏ ｓ ＝ Ｐ −ｈルエンスルフオニル０ＳＵ
＝コハク酸イミドエステル −ｐＮＡ＝Ｐ−二１−ロアニリド ーＣトＩΔ＝３−カルボキシ−４−ヒドロキシアニリド ＤＭＦ＝ジメチルホルムアミド ＮＥＭ＝Ｎ−エチルモルホリン ＴＬＣ＝薄層クロマトグラフィー ＭｅＯＨ＝メタノール Ａ ｃ ＯＨ＝酢酸 ［３ｕ ＯＨ＝ ｎ−ブタノール ＡＣＯＥ を−酢酸エチル ＧＰＣ＝ゲル濾過クロマトグラフィー （注 アミノ酸は特にことわらなければし一体を示ず） ■薄層クロマトグラフィーの条件等 Ｔ Ｌ Ｃ分析は、シリカゲル１：（メルク￥Ｊ）プレ
ー１−を使用 溶媒は、 Ｒｎ−Ｂｕｏｌｌ：Ａｃ０１−１：Ｈ２Ｏ−４：１：Ｉ Ｒ（２ｎ−１３ｕＯ１−１： Ａｃ０１−１ ：
Ｈ２０＝４：１ ：２ Ｒｎ−ＢｕＯＨ：Ａｃ０１−１ ： Ｈ２０＝「３ ４：１：５ ■ゲル濾過には、東洋ＶＩ達工業株式会社のポリごニー
ルグル、トーヨーバールト１Ｗ４０Ｆ（商品名）を使用
した。
実施例１
Ｚ −ｎ −Ｏｒ ｎ −Ｐ ｈ ｅ −Ａ ｒ −
ＣＩ−Ｉ Ａの八１、ＢＯＣ−△ｒｃ）−ＣＩＡ−１１
ｃｊ！ＢＯＣ−Ａｒｑ−Ｏｆ−１−ＨＣＪ−８２０３８
１、１ｇ（１，１６ｍｏｌ ）をＤＭＦ１３９２ｄに溶
解し、ＮＥＭ１５１！１１を加え、これに−２０℃にて
イソブチルクロロホルメ−］・１５２．３ｍｆ！を滴下
りる。１０分間反応後、５−アミンサリチル酸・塩酸塩
２１９．１３ｐ（１，１６ｍｏｌ ）とＮＥＭ３０１．
ｅ５ｎｄ！、のＤＭＦ９２８−溶液を上記反応液に−１
５〜−１０℃にて滴下りる。滴下後、同温度にて３時間
反応させ、さらに室温にて１５時間反応ざＵる。反応後
、ＤＭＦを減圧留去し、残渣をＭ ｅ ＯＩ−１４６４
ａｉ！とｎ −Ｂ ｕ ＯＨ３３２ｍｉに溶解する。八
Ｃ０１−１３３００ｄを加え、食塩を飽和させた冷５％
塩酸２１６０ａｉ！に一７２回洗浄後、無水＆？ｔ ｌ
！ｆ マグネシウムにて乾燥する。乾燥後硫酸マグネシ
ウムを嘘別して溶媒を減圧留去すると、Ｂ ＯＣ−Ａ
ｒ Ｑ −ＣトＩＡ−）−ＩＣｚ４６４． ８９
（８９，９％ ） を （イる。
ＣＩ−Ｉ Ａの八１、ＢＯＣ−△ｒｃ）−ＣＩＡ−１１
ｃｊ！ＢＯＣ−Ａｒｑ−Ｏｆ−１−ＨＣＪ−８２０３８
１、１ｇ（１，１６ｍｏｌ ）をＤＭＦ１３９２ｄに溶
解し、ＮＥＭ１５１！１１を加え、これに−２０℃にて
イソブチルクロロホルメ−］・１５２．３ｍｆ！を滴下
りる。１０分間反応後、５−アミンサリチル酸・塩酸塩
２１９．１３ｐ（１，１６ｍｏｌ ）とＮＥＭ３０１．
ｅ５ｎｄ！、のＤＭＦ９２８−溶液を上記反応液に−１
５〜−１０℃にて滴下りる。滴下後、同温度にて３時間
反応させ、さらに室温にて１５時間反応ざＵる。反応後
、ＤＭＦを減圧留去し、残渣をＭ ｅ ＯＩ−１４６４
ａｉ！とｎ −Ｂ ｕ ＯＨ３３２ｍｉに溶解する。八
Ｃ０１−１３３００ｄを加え、食塩を飽和させた冷５％
塩酸２１６０ａｉ！に一７２回洗浄後、無水＆？ｔ ｌ
！ｆ マグネシウムにて乾燥する。乾燥後硫酸マグネシ
ウムを嘘別して溶媒を減圧留去すると、Ｂ ＯＣ−Ａ
ｒ Ｑ −ＣトＩＡ−）−ＩＣｚ４６４． ８９
（８９，９％ ） を （イる。
Ｊ１＝０．６４ ｍ、ｐ、２２５．０℃（分解）（１
−１０，７° （Ｃ＝ １ 、Ｍ ｅ ０１−１ ）元
素分析 Ｃｌ８Ｈ２８Ｎ５０６Ｃ１・Ｈ２０ＣＨＮ 測定値 ４６．７１ ６゜６０ １４．９０計算値
４６．６０ ６．５２ １５．１０■、ＢＯＣ−Ｐｈ
ｅ−ＡｒＱ−ＣＩ−ＩＡ ・ １−ＩＣｊ！８０Ｇ−八
ｒＱ−ＣＩＩＡ−ＨＣ１２４３，７９（０，５５ｍｏｌ
）を２ Ｎ ｌ−Ｉ Ｃ１／ Ａ ｃ Ｏ１−１１
０９３Ｉｄと少量のＭ ｅ ＯＨに溶解して、１時間室
温にて反応させる。反応終了後、イソプロパツール１０
９．Ｍを加え、ＡＣＯＥ を中に再沈Ｊる。
−１０，７° （Ｃ＝ １ 、Ｍ ｅ ０１−１ ）元
素分析 Ｃｌ８Ｈ２８Ｎ５０６Ｃ１・Ｈ２０ＣＨＮ 測定値 ４６．７１ ６゜６０ １４．９０計算値
４６．６０ ６．５２ １５．１０■、ＢＯＣ−Ｐｈ
ｅ−ＡｒＱ−ＣＩ−ＩＡ ・ １−ＩＣｊ！８０Ｇ−八
ｒＱ−ＣＩＩＡ−ＨＣ１２４３，７９（０，５５ｍｏｌ
）を２ Ｎ ｌ−Ｉ Ｃ１／ Ａ ｃ Ｏ１−１１
０９３Ｉｄと少量のＭ ｅ ＯＨに溶解して、１時間室
温にて反応させる。反応終了後、イソプロパツール１０
９．Ｍを加え、ＡＣＯＥ を中に再沈Ｊる。
析出結晶を濾取・乾燥するとＨ−Ａ ｒ Ｑ −ＣＨΔ
・２ＨＣＪ！１５６．２９ （７４，３％）を得る。
・２ＨＣＪ！１５６．２９ （７４，３％）を得る。
Ｒｆ３＝ｏ、１５ ｍ、ｐ、２４０．５℃（分解）〔
（ｘ］２０ ｏ ＋５３．５℃（Ｃ＝１、Ｉ＋２０＞１−ｋＡ ｒ
（Ｊ−ＣＨＡ −２ＨＣｊ！ １４６．８９（０，３
ε３Ｉｏｌ ）をＤＭＦ／１１２．７とＮＥＭ９９．
８ｄ（０，７７ｍｏｌ ＞に溶解し、０−５°ＣにてＢ
ＯＣ−Ｐ ｈ ｅ −Ｓ Ｄ Ｐを加え、１８．１１
．１間室温にて反応する。反応後、溶媒を減圧留去し、
残渣を少量のＭ ｅ ＯＨとＡＣＯ［Ｅｔｌ、５Ａに溶
解して、冷５％塩１！２（飽和食塩＞１．５ｊ！で３回
、飽和食ｊ−水１．５１で２回洗浄後、無水ｒｔｉ！ｌ
酸マグネシウムと活性炭にて脱色乾燥する。乾燥ｊｐ、
硫酸マグネシウムと活性炭を濾別して、溶媒を減圧留去
すると１３００− Ｐ ｈ ｅ −Ａ ｒ ａ −ＣＩ
−Ｉ Ａ ・ＨＣｊ！２２４．２ｇｒ（９９，５％、フ
オーム状）を得る。
（ｘ］２０ ｏ ＋５３．５℃（Ｃ＝１、Ｉ＋２０＞１−ｋＡ ｒ
（Ｊ−ＣＨＡ −２ＨＣｊ！ １４６．８９（０，３
ε３Ｉｏｌ ）をＤＭＦ／１１２．７とＮＥＭ９９．
８ｄ（０，７７ｍｏｌ ＞に溶解し、０−５°ＣにてＢ
ＯＣ−Ｐ ｈ ｅ −Ｓ Ｄ Ｐを加え、１８．１１
．１間室温にて反応する。反応後、溶媒を減圧留去し、
残渣を少量のＭ ｅ ＯＨとＡＣＯ［Ｅｔｌ、５Ａに溶
解して、冷５％塩１！２（飽和食塩＞１．５ｊ！で３回
、飽和食ｊ−水１．５１で２回洗浄後、無水ｒｔｉ！ｌ
酸マグネシウムと活性炭にて脱色乾燥する。乾燥ｊｐ、
硫酸マグネシウムと活性炭を濾別して、溶媒を減圧留去
すると１３００− Ｐ ｈ ｅ −Ａ ｒ ａ −ＣＩ
−Ｉ Ａ ・ＨＣｊ！２２４．２ｇｒ（９９，５％、フ
オーム状）を得る。
Ｒ，２＝０．６１
（１−１４，８° （ＭｅＯＨ，Ｃ＝１ ）口
元素分析 ＣＨＮ ＯＳｃＪ・３／４ Ｎ、、 ０７
３７Ｇ７ ＣトＩ Ｎ測定値 ５３
．４ｉ２ ６．６９ １３．５５計算値 ５３．４６
６．４０ １３．ε３５ｍ、Ｚ−ｏ−Ｏｒｎ （８
０Ｇ）−Ｐｈｃ−ＡｒＧ−ＣＨＡ−１（ＣＩ ＢＯＧ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−ＣＩ−（Ａ−）ＩＣｊ！７９
、 ８ ｇ （０，１３ｍｏｌ ） を
２ Ｎ Ｆ＋Ｃ１／Ａ ｃ ０１−１５３８ ｔ
ｄに溶解して、１時間室温にて反応させる。反応浸析出
物を濾取し、Ａ ＣＯ＋−１、Ｅｔｈｅｒ洗浄後、乾燥
するとｌ−１−１−）ｈｅ −ＡｒＱ−Ｃ）ＩＡ”
２ｌ−１ｃＪ！４１． ８９ （５８，７％）を
得る。
３７Ｇ７ ＣトＩ Ｎ測定値 ５３
．４ｉ２ ６．６９ １３．５５計算値 ５３．４６
６．４０ １３．ε３５ｍ、Ｚ−ｏ−Ｏｒｎ （８
０Ｇ）−Ｐｈｃ−ＡｒＧ−ＣＨＡ−１（ＣＩ ＢＯＧ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−ＣＩ−（Ａ−）ＩＣｊ！７９
、 ８ ｇ （０，１３ｍｏｌ ） を
２ Ｎ Ｆ＋Ｃ１／Ａ ｃ ０１−１５３８ ｔ
ｄに溶解して、１時間室温にて反応させる。反応浸析出
物を濾取し、Ａ ＣＯ＋−１、Ｅｔｈｅｒ洗浄後、乾燥
するとｌ−１−１−）ｈｅ −ＡｒＱ−Ｃ）ＩＡ”
２ｌ−１ｃＪ！４１． ８９ （５８，７％）を
得る。
Ｒ「２＝０゜３６ ｍ、ｐ、＝２４０．５〜２４２．
５℃ Ｇ （α） −９，０” （ＭｅＯＨ１Ｃ＝１）０
ＨＮ 測定値 ４７．１９ ５．７０ １４．９０計算値
４７．４９ ′５．９８ １５．１０Ｉｔ −Ｐｈ
ｅ−Ａｒｇ−ＣトＩＡ ・ ２ＨＣｊ！２． ３１
Ｊｒ（４，３ｍ ｍｏｌ ）を１．５Ｎ ＮＥＭ／Ｄ
ＭＦ５、７ｄ （８，６ｌ１ｍｏｆ ）に溶解し、０−
５°ＣにてＺ−ｏ−Ｏｒｎ （ＢＯＣ）−０Ｓｘ２．Ｏ
ｇｒ（４，３ｍ ｍｏｌ ）を加え、１８時間室ｄ４に
て反応する。反応後、溶媒を減圧留去し、残渣をＭｅｏ
ｌ−１４，３ｄとＡＣＯＥｔ４３ｄに溶解して、冷５％
塩酸（飽和食塩）２０ｄで２回洗浄すると、徐々に結晶
が析出するため、ＡＣＯＥ を層を一晩冷却放置する。
５℃ Ｇ （α） −９，０” （ＭｅＯＨ１Ｃ＝１）０
ＨＮ 測定値 ４７．１９ ５．７０ １４．９０計算値
４７．４９ ′５．９８ １５．１０Ｉｔ −Ｐｈ
ｅ−Ａｒｇ−ＣトＩＡ ・ ２ＨＣｊ！２． ３１
Ｊｒ（４，３ｍ ｍｏｌ ）を１．５Ｎ ＮＥＭ／Ｄ
ＭＦ５、７ｄ （８，６ｌ１ｍｏｆ ）に溶解し、０−
５°ＣにてＺ−ｏ−Ｏｒｎ （ＢＯＣ）−０Ｓｘ２．Ｏ
ｇｒ（４，３ｍ ｍｏｌ ）を加え、１８時間室ｄ４に
て反応する。反応後、溶媒を減圧留去し、残渣をＭｅｏ
ｌ−１４，３ｄとＡＣＯＥｔ４３ｄに溶解して、冷５％
塩酸（飽和食塩）２０ｄで２回洗浄すると、徐々に結晶
が析出するため、ＡＣＯＥ を層を一晩冷却放置する。
析出結晶を濾取、乾燥Ｊると７−ｏ−Ｏｒｎ （ＢＯＣ
）−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−ＣＩ−（Ａ−１−１Ｇ１３．２ｏ
ｒ（８８，８％）を得る。
）−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−ＣＩ−（Ａ−１−１Ｇ１３．２ｏ
ｒ（８８，８％）を得る。
Ｒ「２＝０．８１ １１１．Ｄ、＝ １９１〜２２０℃
（分解） （１−１１，０° （ＭｅＯＨ，Ｃ＝１ ）元素分析
Ｃ４ｏ１１．３Ｎ８０１ｏＣ１・Ｈ２０ＣトＩ
Ｎ測定値 ５６．０６ ６．５
４ １２．８１尉ｑ値 ５５．９０ ６．４５ １３
．０４ＩＶ、Ｚ−ｏ−Ｏｒｎ−ｐｈｅ−Ａｒ（７−ＣＨ
Ａ ・２ＨＣＩ Ｚ−ｎ−Ｏｒｎ、（ＢＯＣ）−Ｐｈｅ−ＡｒＧ −ＣＨ
Ａ・ＨＣｊ！ ２．３（Ｊｒ（２，６＋＋＋ ｍｏｌ
）を２ＮＨＣ，１／ △ ｃｏ ト１５． ２ｍ
ｌ！ （１０，１＋ ｍｏｌ ） に溶解し
て、２時間室温にて反応する。反応後乾燥エーテルに再
沈し、析出結晶を減数・乾燥すると、粗製のＺ−ｏ−Ｑ
ｒｎ−Ｐｈｅ−ＡｒＱ−ＣＨＡ・２’ ＨＣ１を１ｉす
る。これを展開溶媒３０％Δｃｏ＋−１の１−一ヨーバ
ールＨＷ４０Ｆカラムにて精製すると１．５２９ （７
４，９％）のＺ−ｏ −Ｑ ｒ ｎ −Ｐ ｈ ｃ −
Ａ ｒ Ｑ −ＣＩ−１△−２１−Ｉ ＣＩを得る。
（分解） （１−１１，０° （ＭｅＯＨ，Ｃ＝１ ）元素分析
Ｃ４ｏ１１．３Ｎ８０１ｏＣ１・Ｈ２０ＣトＩ
Ｎ測定値 ５６．０６ ６．５
４ １２．８１尉ｑ値 ５５．９０ ６．４５ １３
．０４ＩＶ、Ｚ−ｏ−Ｏｒｎ−ｐｈｅ−Ａｒ（７−ＣＨ
Ａ ・２ＨＣＩ Ｚ−ｎ−Ｏｒｎ、（ＢＯＣ）−Ｐｈｅ−ＡｒＧ −ＣＨ
Ａ・ＨＣｊ！ ２．３（Ｊｒ（２，６＋＋＋ ｍｏｌ
）を２ＮＨＣ，１／ △ ｃｏ ト１５． ２ｍ
ｌ！ （１０，１＋ ｍｏｌ ） に溶解し
て、２時間室温にて反応する。反応後乾燥エーテルに再
沈し、析出結晶を減数・乾燥すると、粗製のＺ−ｏ−Ｑ
ｒｎ−Ｐｈｅ−ＡｒＱ−ＣＨＡ・２’ ＨＣ１を１ｉす
る。これを展開溶媒３０％Δｃｏ＋−１の１−一ヨーバ
ールＨＷ４０Ｆカラムにて精製すると１．５２９ （７
４，９％）のＺ−ｏ −Ｑ ｒ ｎ −Ｐ ｈ ｃ −
Ａ ｒ Ｑ −ＣＩ−１△−２１−Ｉ ＣＩを得る。
Ｒ，２＝０．４４ ｍ、ｐ、＝１６５−１９２℃（（
２） −７，Ｏｏ （Ｍ ｅ Ｏｌ−１、Ｃ＝０
．５） 元素分析 ＣＨＮ ＯＣｊ！ ・Ｈ２Ｏ（〕１−Ｉ
Ｎ ｉ１１１１定値 ５３．１１ ６．３０ １３．７４
計算値 ５２．８３ ６．０８ １４．０８実施例２ Ｉ−Ｔｏｓ−ｏ７ＬＶｓ （ＢＯＣ）−Ｐｈｅ−八ｒ
（］ −ＣＩ−Ｉ Ａ −１−Ｉ ＣＪＺ −ｏ −Ｌ
Ｖ Ｓ （Ｂ ＯＣ＞ −Ｐ Ｆｌ ｅ −Ａ ｒ
ｇ −ＣＩ−ＩＡ −ＨＣｊ！８． ９９ （１０
，４ｍ ｍｏｌ ン をＭｅＯＨ７５ｄに溶解し、
パラジウム黒１ａｒを加え、３０℃にて８時間接触還元
をする。反応後、触媒を濾別して溶媒を減圧留去すると
、１１− ｏ−ＬＶＳ （ＢＯＣ） −Ｐｒ）
ｅ−Ａｒｑ−ＣＨＡ ・２ＨＣｊ！６．４９ｒ（８
５，３％フオーム状）を得る。
２） −７，Ｏｏ （Ｍ ｅ Ｏｌ−１、Ｃ＝０
．５） 元素分析 ＣＨＮ ＯＣｊ！ ・Ｈ２Ｏ（〕１−Ｉ
Ｎ ｉ１１１１定値 ５３．１１ ６．３０ １３．７４
計算値 ５２．８３ ６．０８ １４．０８実施例２ Ｉ−Ｔｏｓ−ｏ７ＬＶｓ （ＢＯＣ）−Ｐｈｅ−八ｒ
（］ −ＣＩ−Ｉ Ａ −１−Ｉ ＣＪＺ −ｏ −Ｌ
Ｖ Ｓ （Ｂ ＯＣ＞ −Ｐ Ｆｌ ｅ −Ａ ｒ
ｇ −ＣＩ−ＩＡ −ＨＣｊ！８． ９９ （１０
，４ｍ ｍｏｌ ン をＭｅＯＨ７５ｄに溶解し、
パラジウム黒１ａｒを加え、３０℃にて８時間接触還元
をする。反応後、触媒を濾別して溶媒を減圧留去すると
、１１− ｏ−ＬＶＳ （ＢＯＣ） −Ｐｒ）
ｅ−Ａｒｑ−ＣＨＡ ・２ＨＣｊ！６．４９ｒ（８
５，３％フオーム状）を得る。
Ｒ［２＝０．４９ ｍ、ｐ、＝１８０．５−２０５°
０Ｈ−ｏ−１ｙｓ （ＢＯＣ）−Ｐｈｅ−ＡｒＣＪ
−ＣＨＡ−２）−ＩＣｊ！１． Ｏ’Ｊ （１，８ｍｍ
ｏｌ ）をＤＭＦＳ−とトリエチルアミン０．５７ｍ（
４，１ｍ ｍｏｌ ）に溶解し、０−５°にてＰ−トル
エンスルフォニルクロライド０．２８ｏｒ（１，４５ｍ
ｍｏｌ ）を加え、１８時間室温にて反応する。反応
後、溶媒を減圧留去し、残漬をＭｅＯＨｌ、３ｄとＡ
ＣＯ［ｔ １３ ｌ１１１！に溶解して、冷５％塩酸（
飽和食塩）５ｒｎ１で２回、飽和食塩水で２回洗浄後、
無水硫酸マグネシウムと活性炭にて脱色乾燥する。乾燥
復、硫酸マグネシウムと活性虜を濾別して、？８媒を減
圧留去すると粗製のＴ’ｏｓ−ｒ）−１ｙｓ （ＢＯＣ
）−Ｐｈｅ−△ｒｇ−ＣＩ−ＩＡ−ＨＣ１１，３（ｌｒ
を（ｑる。これを展開溶媒Ｍ Ｑ Ｏｌ−１の１・−ヨ
ーバールＨＷ４０Ｆカラムにて精ｒＴＩＪｔルト１．０
ｇ（９１、４％＞ （７）ｌ’ｏｓ −１３−Ｌｙｓ
（ＢＯＣ）−Ｐ、ｈｅ−ＡｒＱ−ＣＩ−（Ａ・トＩＣ１
を１！ｌる。
０Ｈ−ｏ−１ｙｓ （ＢＯＣ）−Ｐｈｅ−ＡｒＣＪ
−ＣＨＡ−２）−ＩＣｊ！１． Ｏ’Ｊ （１，８ｍｍ
ｏｌ ）をＤＭＦＳ−とトリエチルアミン０．５７ｍ（
４，１ｍ ｍｏｌ ）に溶解し、０−５°にてＰ−トル
エンスルフォニルクロライド０．２８ｏｒ（１，４５ｍ
ｍｏｌ ）を加え、１８時間室温にて反応する。反応
後、溶媒を減圧留去し、残漬をＭｅＯＨｌ、３ｄとＡ
ＣＯ［ｔ １３ ｌ１１１！に溶解して、冷５％塩酸（
飽和食塩）５ｒｎ１で２回、飽和食塩水で２回洗浄後、
無水硫酸マグネシウムと活性炭にて脱色乾燥する。乾燥
復、硫酸マグネシウムと活性虜を濾別して、？８媒を減
圧留去すると粗製のＴ’ｏｓ−ｒ）−１ｙｓ （ＢＯＣ
）−Ｐｈｅ−△ｒｇ−ＣＩ−ＩＡ−ＨＣ１１，３（ｌｒ
を（ｑる。これを展開溶媒Ｍ Ｑ Ｏｌ−１の１・−ヨ
ーバールＨＷ４０Ｆカラムにて精ｒＴＩＪｔルト１．０
ｇ（９１、４％＞ （７）ｌ’ｏｓ −１３−Ｌｙｓ
（ＢＯＣ）−Ｐ、ｈｅ−ＡｒＱ−ＣＩ−（Ａ・トＩＣ１
を１！ｌる。
Ｒｆ２＝０． ７９ ｍ、Ｄ、＝ １９８ ２０６℃
（分解） ２° ＋−１５，０° （ＭｅＯＨｌ（（Ｘ ） 、
） Ｃ＝１ ） 元素分析 Ｃ４０Ｈ５５Ｎ Ｂ Ｏｉｏｓ Ｃ１”３／
２ Ｈ２Ｏ ＣＩ−Ｉ Ｎ 測定値 ５３．２１ ６．３２ １２．４０計算値
５３．２３ ６．４８ １２．４２Ｈ，Ｔｏｓ−Ｄ−
Ｌｙｓ−Ｐｔ）ｅ−Ａｒ’Ｃｊ −ＣＨＡ ・ ２ Ｉ
Ｉ Ｃ１ ｒｏｓ−ｏ−１−ｙｓ （ＢＯＣ）−Ｐｈｅ −Ａ
ｒＱ−ｃＨＡ−１−１ｃｆ ｏ、 ７７ｙ
（０，Ｂ ε３ｍｍｏｌ）を２Ｎ ＨＣｊ！／Ａｃ
０）−１１，７ｒｄ（３，５ｍ ｍｏｌ ）に溶解し、
２時間室温にて反応させる。反応後乾燥エーテルに再沈
し、析出結晶を濾取・乾燥すると、粗製−「ｏｓ−ｎ−
ＬＶＳ〜Ｐｈｅ−Ａｒｑ−ＣＨＡ−２ＨＣＪ！０．
７０ ｇ を得る。これを１３！間溶媒３０％ＡＣＯ
Ｈの１−−ヨーバールｌ−Ｉ Ｗ ４０ Ｆカラムにて
精製すると、０．４８７ （６７，６％）のＴＯＳ −
０−Ｌ ｙＳ−Ｐ ｈ ｅ−Ａ ｒ ａ −ＣＩ−Ｉ
Ａ ・２１−Ｉ Ｇ ｊ！をｖ、する。
（分解） ２° ＋−１５，０° （ＭｅＯＨｌ（（Ｘ ） 、
） Ｃ＝１ ） 元素分析 Ｃ４０Ｈ５５Ｎ Ｂ Ｏｉｏｓ Ｃ１”３／
２ Ｈ２Ｏ ＣＩ−Ｉ Ｎ 測定値 ５３．２１ ６．３２ １２．４０計算値
５３．２３ ６．４８ １２．４２Ｈ，Ｔｏｓ−Ｄ−
Ｌｙｓ−Ｐｔ）ｅ−Ａｒ’Ｃｊ −ＣＨＡ ・ ２ Ｉ
Ｉ Ｃ１ ｒｏｓ−ｏ−１−ｙｓ （ＢＯＣ）−Ｐｈｅ −Ａ
ｒＱ−ｃＨＡ−１−１ｃｆ ｏ、 ７７ｙ
（０，Ｂ ε３ｍｍｏｌ）を２Ｎ ＨＣｊ！／Ａｃ
０）−１１，７ｒｄ（３，５ｍ ｍｏｌ ）に溶解し、
２時間室温にて反応させる。反応後乾燥エーテルに再沈
し、析出結晶を濾取・乾燥すると、粗製−「ｏｓ−ｎ−
ＬＶＳ〜Ｐｈｅ−Ａｒｑ−ＣＨＡ−２ＨＣＪ！０．
７０ ｇ を得る。これを１３！間溶媒３０％ＡＣＯ
Ｈの１−−ヨーバールｌ−Ｉ Ｗ ４０ Ｆカラムにて
精製すると、０．４８７ （６７，６％）のＴＯＳ −
０−Ｌ ｙＳ−Ｐ ｈ ｅ−Ａ ｒ ａ −ＣＩ−Ｉ
Ａ ・２１−Ｉ Ｇ ｊ！をｖ、する。
Ｒｆ２＝、０．３９ ｍ、ｐ、＝１７７−１９１℃（
１−７，０’ （ＭｅＯＨ１ Ｃ＝０． ５） 元素分析 Ｃ３５Ｈ４８Ｎ８０８ＳＣ１２・ＣＩ−Ｉ
Ｎ 測定ｆ＋ｌＩ ５１．４５ ６．１９ １３．６２
計０値 ５１．２２ ６．０２ １３．６５実施例３ 同様な方法にて、下記の基質を合成した。
１−７，０’ （ＭｅＯＨ１ Ｃ＝０． ５） 元素分析 Ｃ３５Ｈ４８Ｎ８０８ＳＣ１２・ＣＩ−Ｉ
Ｎ 測定ｆ＋ｌＩ ５１．４５ ６．１９ １３．６２
計０値 ５１．２２ ６．０２ １３．６５実施例３ 同様な方法にて、下記の基質を合成した。
元素分析 Ｉ
測定値く％） 計算値（％） ＩＰ Ｓ
−２２００Ｃ３６Ｈ４８Ｎ ８０８ Ｃ１２・Ｃ５
３，２３５３，４０ Ｈ６，１３６，２２ Ｎ １３．５１ １３．８４ＰＳ −２２０
２Ｃ３３８５６Ｎ３０ｇ ０１２ ・Ｃ５１，３３５１
，０９ ト１ ６． ８４
６． ７６Ｎ １４．３０ １
４．４５ＰＳ−２２０４Ｃ３ｏ■４４Ｎ８０８Ｃ１２・
Ｃ４８，８３４８，ｂ２ １−１ ６．４６ ６．３８Ｎ １
４．７４ ５．０９Ｐ Ｓ −２２０６Ｃ３４Ｈ
４６Ｎ ８ ０８ Ｓ Ｃｉ ２Ｃ５０，８３５０，
６２ １６，０６５，８７ Ｊ １３．５７’ １３．８９１１
Ｍ例４ 新規に合成した基質の特異性を各酵素と反応さ主ること
により試験した。
測定値く％） 計算値（％） ＩＰ Ｓ
−２２００Ｃ３６Ｈ４８Ｎ ８０８ Ｃ１２・Ｃ５
３，２３５３，４０ Ｈ６，１３６，２２ Ｎ １３．５１ １３．８４ＰＳ −２２０
２Ｃ３３８５６Ｎ３０ｇ ０１２ ・Ｃ５１，３３５１
，０９ ト１ ６． ８４
６． ７６Ｎ １４．３０ １
４．４５ＰＳ−２２０４Ｃ３ｏ■４４Ｎ８０８Ｃ１２・
Ｃ４８，８３４８，ｂ２ １−１ ６．４６ ６．３８Ｎ １
４．７４ ５．０９Ｐ Ｓ −２２０６Ｃ３４Ｈ
４６Ｎ ８ ０８ Ｓ Ｃｉ ２Ｃ５０，８３５０，
６２ １６，０６５，８７ Ｊ １３．５７’ １３．８９１１
Ｍ例４ 新規に合成した基質の特異性を各酵素と反応さ主ること
により試験した。
１）基質液：２０１１１０１／ｊ２ ト１２０２）！
ａｍ液：１−リス、ＮａＣｌＣａＣＡ２の４濃度および
反応、ｐＨは酵素により次の通りとし−ＬＺ リ
０ ４）反応停止液（ＰＮＡ）：１０％ＡＣＯＨ５）停止発
色試薬（ＣＩ−ＩＡ）：ペンタアミンフエロエート（１
）１１＝１０．４） 測定法： 緩街液０．３ｄと酵素試薬０．１−をシリコン処理硬質
ガラス製試験管又は、プラスチック製試験情に採取し、
３７℃ｔｉＮ潟槽中にて５分間予加温する。次いで基質
液ｏ、 ｉ＃Ｉｉ！を加えて酵糸反応を３７℃５分間実
／Ｉｌ！ｉする。正確に５分俊、反応停止液、または停
止発色試薬２．０ｍを加えＣ酵素反応を停止後、続いて
３７℃で１０分間放置後４０５ ｎｍまたは７００ ｒ
＋ｍの吸光度を測定する。
ａｍ液：１−リス、ＮａＣｌＣａＣＡ２の４濃度および
反応、ｐＨは酵素により次の通りとし−ＬＺ リ
０ ４）反応停止液（ＰＮＡ）：１０％ＡＣＯＨ５）停止発
色試薬（ＣＩ−ＩＡ）：ペンタアミンフエロエート（１
）１１＝１０．４） 測定法： 緩街液０．３ｄと酵素試薬０．１−をシリコン処理硬質
ガラス製試験管又は、プラスチック製試験情に採取し、
３７℃ｔｉＮ潟槽中にて５分間予加温する。次いで基質
液ｏ、 ｉ＃Ｉｉ！を加えて酵糸反応を３７℃５分間実
／Ｉｌ！ｉする。正確に５分俊、反応停止液、または停
止発色試薬２．０ｍを加えＣ酵素反応を停止後、続いて
３７℃で１０分間放置後４０５ ｎｍまたは７００ ｒ
＋ｍの吸光度を測定する。
結果を第２表に示す。
Claims (3)
- （１）一般式〔 I 〕 ▲数式、化学式、表等があります▼〔 I 〕 〔式中ｎは３〜４の整数、▲数式、化学式、表等があり
ます▼ 又は−ＳＯ＿２Ｒ＾２であり、Ｒ＾２はＣ＿１〜Ｃ＿６
の分枝を有することもある低級アルキル基、フェニル基
、ベンジル基又はトリル基を示す。〕 であられされる新規化合物及びその塩。 - （２）一般式〔 I 〕 ▲数式、化学式、表等があります▼〔 I 〕 〔式中ｎは３〜４の整数、▲数式、化学式、表等があり
ます▼ 又は−ＳＯ＿２Ｒ＾２であり、Ｒ＾２はＣ＿１〜Ｃ＿６
の分枝を有することもある低級アルキル基、フェニル基
、ベンジル基又はトリル基を示す。〕 で表わされる新規化合物又はその塩よりなる生体成分の
測定に使用する基質。 - （３）測定対象の生体成分が血漿カリクレン、血漿プレ
カリクレン又は血漿カリクレンインヒビターである特許
請求の範囲第２項記載の基質。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60265389A JPS62126197A (ja) | 1985-11-26 | 1985-11-26 | 新規な血漿キニノゲナーゼ測定用化合物 |
| US06/933,753 US4816562A (en) | 1985-11-26 | 1986-11-21 | Novel substrate for plasma kallikrein and a method for measuring biological components using the same |
| EP86116420A EP0224254B1 (en) | 1985-11-26 | 1986-11-26 | a novel substrate for plasma kallikrein and a method for measuring biological components using the same |
| DE8686116420T DE3685197D1 (de) | 1985-11-26 | 1986-11-26 | Substrat fuer plasmakallikrein und methode zur messung von diese benutzenden biologischen komponenten. |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60265389A JPS62126197A (ja) | 1985-11-26 | 1985-11-26 | 新規な血漿キニノゲナーゼ測定用化合物 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62126197A true JPS62126197A (ja) | 1987-06-08 |
| JPH0569120B2 JPH0569120B2 (ja) | 1993-09-30 |
Family
ID=17416496
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60265389A Granted JPS62126197A (ja) | 1985-11-26 | 1985-11-26 | 新規な血漿キニノゲナーゼ測定用化合物 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4816562A (ja) |
| EP (1) | EP0224254B1 (ja) |
| JP (1) | JPS62126197A (ja) |
| DE (1) | DE3685197D1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003008380A1 (fr) * | 2001-07-18 | 2003-01-30 | Ajinomoto Co., Inc. | Derives d'acide carboxylique |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS62126196A (ja) * | 1985-11-26 | 1987-06-08 | Nitto Boseki Co Ltd | 新規なα１−アンチトリプシン測定用化合物 |
| JPH06104079B2 (ja) * | 1988-07-14 | 1994-12-21 | 日東紡績株式会社 | 新規な酵素活性測定用基質 |
| US5391705A (en) * | 1991-03-15 | 1995-02-21 | Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. | Polyfluorinated tripeptide thrombin inhibitors |
| US6069232A (en) * | 1995-10-02 | 2000-05-30 | Hoechst Marion Roussel, Inc. | Polyfluoroalkyl tryptophan tripeptide thrombin inhibitors |
| US5739354A (en) * | 1996-03-26 | 1998-04-14 | Hoechst Marion Roussel, Inc. | Process for the preparation of N-methyl-D-phenylalanyl-N- 1- 3- (aminoiminomethyl)amino!propyl!-3,3-difluoro-2-oxohexyl!-L-prolinamide |
| FR2983215B1 (fr) * | 2011-11-28 | 2013-12-20 | Univ Grenoble 1 | Dosage de la capacite de controle de c1inh |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60241900A (ja) * | 1984-05-16 | 1985-11-30 | Nitto Boseki Co Ltd | 新規な第Ｘａ因子活性測定用基質 |
| JPS6117956A (ja) * | 1984-07-04 | 1986-01-25 | Nitto Boseki Co Ltd | 新規な尿中カリクレイン測定用基質 |
-
1985
- 1985-11-26 JP JP60265389A patent/JPS62126197A/ja active Granted
-
1986
- 1986-11-21 US US06/933,753 patent/US4816562A/en not_active Expired - Lifetime
- 1986-11-26 EP EP86116420A patent/EP0224254B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1986-11-26 DE DE8686116420T patent/DE3685197D1/de not_active Expired - Lifetime
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003008380A1 (fr) * | 2001-07-18 | 2003-01-30 | Ajinomoto Co., Inc. | Derives d'acide carboxylique |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0224254A2 (en) | 1987-06-03 |
| US4816562A (en) | 1989-03-28 |
| JPH0569120B2 (ja) | 1993-09-30 |
| EP0224254A3 (en) | 1989-01-18 |
| DE3685197D1 (de) | 1992-06-11 |
| EP0224254B1 (en) | 1992-05-06 |
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