JPS62111695A - 清澄化された澱粉加水分解物の製造方法およびそれに用いるのに適当な新規の酵素組成物 - Google Patents
清澄化された澱粉加水分解物の製造方法およびそれに用いるのに適当な新規の酵素組成物Info
- Publication number
- JPS62111695A JPS62111695A JP61240223A JP24022386A JPS62111695A JP S62111695 A JPS62111695 A JP S62111695A JP 61240223 A JP61240223 A JP 61240223A JP 24022386 A JP24022386 A JP 24022386A JP S62111695 A JPS62111695 A JP S62111695A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- phospholipase
- enzyme
- enzyme composition
- units
- glucanase
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
- C12N9/18—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
- C12N9/20—Triglyceride splitting, e.g. by means of lipase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C13—SUGAR INDUSTRY
- C13K—SACCHARIDES OBTAINED FROM NATURAL SOURCES OR BY HYDROLYSIS OF NATURALLY OCCURRING DISACCHARIDES, OLIGOSACCHARIDES OR POLYSACCHARIDES
- C13K1/00—Glucose; Glucose-containing syrups
- C13K1/06—Glucose; Glucose-containing syrups obtained by saccharification of starch or raw materials containing starch
- C13K1/08—Purifying
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/911—Microorganisms using fungi
- Y10S435/913—Aspergillus
- Y10S435/917—Aspergillus niger
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、炭化水素源のある種の水溶液の改善された精
製方法、澱粉加水分解物、特に小麦澱粉加水分解物の濾
過性の改善、それによって得られる濾過液の清澄さの改
善そしてかかる改善を達成するのに適する酵素組成物に
関する。
製方法、澱粉加水分解物、特に小麦澱粉加水分解物の濾
過性の改善、それによって得られる濾過液の清澄さの改
善そしてかかる改善を達成するのに適する酵素組成物に
関する。
炭化水素源の水溶液は、天然に産する炭化水素含有物質
を処理して有用な生成物をもたらす工業界においてしば
しば出会うものである。か−る処理の例には、炭化水素
を酵素により分解する工業的な反応またはか＼る分解を
化学的な作用に置き変えた類似の処理がある。か−る処
理の生成物は、濾過によって分離される懸濁副生成物よ
り成る水溶液の状態でしばしば得られる。か＼る濾過に
おいて、濁った液から濾過液を得ることがしばしば困難
であることであるという問題にしばしば遭遇する。本発
明者は、これらの問題がある種のリン含有化合物が水溶
液中に存在することによって引き起こされることを発見
した。本発明はか＼る化合物を処理して、水溶液の濾過
性を改善する方法である。
を処理して有用な生成物をもたらす工業界においてしば
しば出会うものである。か−る処理の例には、炭化水素
を酵素により分解する工業的な反応またはか＼る分解を
化学的な作用に置き変えた類似の処理がある。か−る処
理の生成物は、濾過によって分離される懸濁副生成物よ
り成る水溶液の状態でしばしば得られる。か＼る濾過に
おいて、濁った液から濾過液を得ることがしばしば困難
であることであるという問題にしばしば遭遇する。本発
明者は、これらの問題がある種のリン含有化合物が水溶
液中に存在することによって引き起こされることを発見
した。本発明はか＼る化合物を処理して、水溶液の濾過
性を改善する方法である。
本発明者は、本発明の方法が特に、炭化水素が加水分解
法に委ねた澱粉である水溶液に適用できることを見出し
た。本発明の方法および方法条件が他の炭化水素から誘
導される水溶液に適用できるとはいえ、本発明の方法の
便宜の為に、この明細書では以降、澱粉について説明す
る。
法に委ねた澱粉である水溶液に適用できることを見出し
た。本発明の方法および方法条件が他の炭化水素から誘
導される水溶液に適用できるとはいえ、本発明の方法の
便宜の為に、この明細書では以降、澱粉について説明す
る。
澱粉はα−グルコシド結合によって互いに結合されたグ
ルコビラノース単位で形成された高分子量炭化水素であ
る。この重合体は加水分解によって分解され、低分子量
のオリゴ糖類および最終的には単量体単位のグルコーゼ
が得られる。この加水分解は酸、または酵素によって触
媒作用をされ得る。この酸およびα−アミラーゼはα−
〇−（１−＞４）−グルコシド結合を加水分解すること
によって澱粉分子を多かれ少なかれ任意に分解する。β
−アミラニゼはその作用において更に特別なものである
。即ち、澱粉またはオリゴ糖類を直接的にマルトースに
分解する。一方、グルコアミラーゼはＤ−グルコース（
デキストリン）を分解することができる。脱技酵素、例
えばプルラナーセは、アミロペクチン澱粉成分の加水分
解を促進するのに用いることができる。
ルコビラノース単位で形成された高分子量炭化水素であ
る。この重合体は加水分解によって分解され、低分子量
のオリゴ糖類および最終的には単量体単位のグルコーゼ
が得られる。この加水分解は酸、または酵素によって触
媒作用をされ得る。この酸およびα−アミラーゼはα−
〇−（１−＞４）−グルコシド結合を加水分解すること
によって澱粉分子を多かれ少なかれ任意に分解する。β
−アミラニゼはその作用において更に特別なものである
。即ち、澱粉またはオリゴ糖類を直接的にマルトースに
分解する。一方、グルコアミラーゼはＤ−グルコース（
デキストリン）を分解することができる。脱技酵素、例
えばプルラナーセは、アミロペクチン澱粉成分の加水分
解を促進するのに用いることができる。
いわゆる澱粉シロップは、酸および／または酵素加水分
解によって澱粉から生産されそして一般にデキストロー
スおよび／またはマルトースを三量体および他のＤＰ
２０またはそれ以上のオリゴマー（“ＤＰ”は“重合度
”であり、以下においてはアラビア数字で分子中の単量
体単位の数で示す）と−緒に含有している澱粉加水分解
物である。この加水分解物は広い組成範囲を有し、多く
は透明でありそして、殆ど無色であるシロップを必要と
する多くの用途分野を持つ。
解によって澱粉から生産されそして一般にデキストロー
スおよび／またはマルトースを三量体および他のＤＰ
２０またはそれ以上のオリゴマー（“ＤＰ”は“重合度
”であり、以下においてはアラビア数字で分子中の単量
体単位の数で示す）と−緒に含有している澱粉加水分解
物である。この加水分解物は広い組成範囲を有し、多く
は透明でありそして、殆ど無色であるシロップを必要と
する多くの用途分野を持つ。
本発明者は、特に小麦の澱粉からか−るシロップを製造
する際に、分解生成物が標準的な装置を用いて濾過する
ことが困難であり・そして濾液が許容できない程に濁っ
ているという問題に遭遇した。本発明者は、鋭意研究し
た結果、か−る問題がリン脂質の存在によって引き起こ
されることそして濾過速度および澱粉加水分解物の清澄
さが、ある種の酵素で処理することによって改善できる
ことを見出した。
する際に、分解生成物が標準的な装置を用いて濾過する
ことが困難であり・そして濾液が許容できない程に濁っ
ているという問題に遭遇した。本発明者は、鋭意研究し
た結果、か−る問題がリン脂質の存在によって引き起こ
されることそして濾過速度および澱粉加水分解物の清澄
さが、ある種の酵素で処理することによって改善できる
ことを見出した。
それ故に本発明は、濾過することが困難でありおよび／
または濁った濾液を生成する炭水化物源の水溶液を処理
する方法において、該溶液が不純物としてリン脂質を含
有しそして、溶液の濾過性および／または濾液の清澄さ
がホスホリパーゼ酵素を含有する酵素組成物との接触に
よって改善されるような条件のもとで濾過前に該溶液を
処理し、ホスホリパーゼ酵素と、キシラナーゼおよび存
在していてもよいβ−グルカナーゼ酵素との合計との比
が少なくとも０．０５：１、殊に少なくとも１：１、特
に少なくとも５：１そして最も好ましくは少なくとも１
０：１であることを特徴とする、上記方法にある。
または濁った濾液を生成する炭水化物源の水溶液を処理
する方法において、該溶液が不純物としてリン脂質を含
有しそして、溶液の濾過性および／または濾液の清澄さ
がホスホリパーゼ酵素を含有する酵素組成物との接触に
よって改善されるような条件のもとで濾過前に該溶液を
処理し、ホスホリパーゼ酵素と、キシラナーゼおよび存
在していてもよいβ−グルカナーゼ酵素との合計との比
が少なくとも０．０５：１、殊に少なくとも１：１、特
に少なくとも５：１そして最も好ましくは少なくとも１
０：１であることを特徴とする、上記方法にある。
この方法で用いる満足な酵素組成物は、ホスホリパーゼ
およびキシラナーゼおよび／またはβ−グルカナーゼ酵
素を含有し、ホスホリパーゼと、キシラナーゼおよびβ
−グルカナーゼ酵素より成る合計との比が０．０５：１
〜５０：１、特に１：１〜３０：１の範囲にあるもので
ある。
およびキシラナーゼおよび／またはβ−グルカナーゼ酵
素を含有し、ホスホリパーゼと、キシラナーゼおよびβ
−グルカナーゼ酵素より成る合計との比が０．０５：１
〜５０：１、特に１：１〜３０：１の範囲にあるもので
ある。
この方法で用いる酵素組成物は、１ｇの全蛋白当たり少
なくとも５０００単位、殊に少なくとも１５゜ＯＯＯ単
位、特に少なくとも５０，０００単位、更に好ましくは
少なくとも１００，０００単位のホスホリパーゼを含有
するものが有利である。
なくとも５０００単位、殊に少なくとも１５゜ＯＯＯ単
位、特に少なくとも５０，０００単位、更に好ましくは
少なくとも１００，０００単位のホスホリパーゼを含有
するものが有利である。
ホスホリパーゼ酵素はリン脂質の加水分解に接触的作用
する酵素である。リン脂質は、二個の水酸基が長鎖の脂
肪酸によってエステル化されておりそしてホスホリル基
が極性部分とホスホ−ジエステル結合を形成するグリセ
ロホスフェートの誘導体と考えることができる。
する酵素である。リン脂質は、二個の水酸基が長鎖の脂
肪酸によってエステル化されておりそしてホスホリル基
が極性部分とホスホ−ジエステル結合を形成するグリセ
ロホスフェートの誘導体と考えることができる。
リン脂質の四個のエステル部分全部が酵素により加水分
解され易い。５ｎ−１の位置のアシルエステルを分解す
るホスホリパーゼは、ホスホリパーゼＡ１と記され、そ
して５ｎ−２の位置で分解するものはホスホリパーゼＡ
２と記される。グリセロール側でホスホ−ジエステル結
合を分解する酵素はホスホリパーゼＣと記され、そして
極性・側での分解酵素はホスホリパーゼＤである。リソ
−リン脂質（ｌｙｓｏｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ）□即
ち部分的に加水分解されたリン脂質□の残りのアシル基
を加水分解する酵素は、ホスホリパーゼＡ。
解され易い。５ｎ−１の位置のアシルエステルを分解す
るホスホリパーゼは、ホスホリパーゼＡ１と記され、そ
して５ｎ−２の位置で分解するものはホスホリパーゼＡ
２と記される。グリセロール側でホスホ−ジエステル結
合を分解する酵素はホスホリパーゼＣと記され、そして
極性・側での分解酵素はホスホリパーゼＤである。リソ
−リン脂質（ｌｙｓｏｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ）□即
ち部分的に加水分解されたリン脂質□の残りのアシル基
を加水分解する酵素は、ホスホリパーゼＡ。
またはＡ２と同じ種類の反応を実施しそしてここではホ
スホリパーゼし、またはＬ２と記す。後者の酵素類は一
般にリソ−ホスホリパーゼと称される。分解する場所を
以下に図示する： ＣＨＩ −ＯＨ “Ｃ’Ｄ 本発明の方法において有効なホスホリパーゼ酵素は、Ａ
１、Ａ２、し８、Ｌ２およびＣで表されるものである。
スホリパーゼし、またはＬ２と記す。後者の酵素類は一
般にリソ−ホスホリパーゼと称される。分解する場所を
以下に図示する： ＣＨＩ −ＯＨ “Ｃ’Ｄ 本発明の方法において有効なホスホリパーゼ酵素は、Ａ
１、Ａ２、し８、Ｌ２およびＣで表されるものである。
若干の八、およびＡ２酵素もそれぞれにＬ２およびＬ１
活性を有している。これらがそうでない場合には、Ａ、
＋ Ｌ、またはＡ、＋ Ｌ、の酵素組合せを用いる必要
がある。本発明の方法が特に適する小麦澱粉加水分解物
に適用する為には、Ｌｌ、Ｌ２またはＣ−活性を有する
ホスホリパーゼが必要であり、ホスホリパーゼＬ１また
はＬ２が特に有利である。
活性を有している。これらがそうでない場合には、Ａ、
＋ Ｌ、またはＡ、＋ Ｌ、の酵素組合せを用いる必要
がある。本発明の方法が特に適する小麦澱粉加水分解物
に適用する為には、Ｌｌ、Ｌ２またはＣ−活性を有する
ホスホリパーゼが必要であり、ホスホリパーゼＬ１また
はＬ２が特に有利である。
インターナショナル・ユニオン・オブ・バイオケミス斗
す−（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｕｎｉｏｎ ｏｆ
Ｂｉｏ−ｃｈｅｎｉｓｔｒｙ）の酵素委員会（１９６
１）は、指定された条件□即ち温度、ｐＨＳ基質の性質
□のもとで１分光たりｌミクロモルの特定の基質を接触
的に変換する量としてあらゆる酵素の標準単位を規定し
ている。与えられた酵素のサンプルのホスホリパーゼ含
有量は、既知の量の酵素を含有する標準溶液におけるレ
シチンまたはりソーレシチンの消失量をＮＭＲで確かめ
ることによって決めることができる。他の測定方法はこ
の明細書の後の方に記述しである。
す−（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｕｎｉｏｎ ｏｆ
Ｂｉｏ−ｃｈｅｎｉｓｔｒｙ）の酵素委員会（１９６
１）は、指定された条件□即ち温度、ｐＨＳ基質の性質
□のもとで１分光たりｌミクロモルの特定の基質を接触
的に変換する量としてあらゆる酵素の標準単位を規定し
ている。与えられた酵素のサンプルのホスホリパーゼ含
有量は、既知の量の酵素を含有する標準溶液におけるレ
シチンまたはりソーレシチンの消失量をＮＭＲで確かめ
ることによって決めることができる。他の測定方法はこ
の明細書の後の方に記述しである。
本発明の別の面は、本発明の方法で用いるのに適する酵
素組成物を提供することであり、このものは酵素組成物
の全蛋白質１ｇ当たり少なくとも５．０００単位の量で
存在するホスホリパーゼより成りそしてホスホリパーゼ
酵素と、キシラナーゼおよび存在していてもよいβ−グ
ルカナーゼ酵素より成る合計との比が少なくとも０゜０
５：１、殊に少なくとも１：１１特に少なくとも５：１
そして更に好ましくは少なくとも１０：１であるもので
ある。
素組成物を提供することであり、このものは酵素組成物
の全蛋白質１ｇ当たり少なくとも５．０００単位の量で
存在するホスホリパーゼより成りそしてホスホリパーゼ
酵素と、キシラナーゼおよび存在していてもよいβ−グ
ルカナーゼ酵素より成る合計との比が少なくとも０゜０
５：１、殊に少なくとも１：１１特に少なくとも５：１
そして更に好ましくは少なくとも１０：１であるもので
ある。
満足な酵素組成物は、ホスホリパーゼおよびキシラナー
ゼおよび／またはβ−グルカナーゼを含有し、その際ホ
スホリパーゼと、キシラナーゼおよびβ−グルカナーゼ
より成る合計との比が０．０５：Ｉ〜５０：Ｉ、特ニＩ
：ｔ 〜３０：１ノ範囲にある。
ゼおよび／またはβ−グルカナーゼを含有し、その際ホ
スホリパーゼと、キシラナーゼおよびβ−グルカナーゼ
より成る合計との比が０．０５：Ｉ〜５０：Ｉ、特ニＩ
：ｔ 〜３０：１ノ範囲にある。
酵素組成物が、１ｇの全蛋白質当たり少なくとも１５０
００単位、殊に少なくとも５０，０００単位、特に少な
くとも１００．０００単位のホスホリパーゼを含有する
のが特に有利である。
００単位、殊に少なくとも５０，０００単位、特に少な
くとも１００．０００単位のホスホリパーゼを含有する
のが特に有利である。
酵素組成物は微生物源の出であるのが有利でありそして
ホスホリパーゼ６以上にホスホリパーゼＡ３、Ａ２、Ｌ
、および／またはＬ２を含有するものが特に有利である
。本発明のホスホリパーゼ酵素組成物を形成するのに用
いることのできる微生物には、−シタ’１ｌｙｅ員、例
えばクロカビ、バチルス、タルイフエロマイセス（Ｈｕ
ｙｖｅｒｍｙｃｅｓ） 、左Ｚ図え、ムコール、ペニ
シリウム、丈ゾプユ、孟ユ左ユエ不皇ス、スポロトクウ
ム、トリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）およびス
トレプトマイセスが含まれる。
ホスホリパーゼ６以上にホスホリパーゼＡ３、Ａ２、Ｌ
、および／またはＬ２を含有するものが特に有利である
。本発明のホスホリパーゼ酵素組成物を形成するのに用
いることのできる微生物には、−シタ’１ｌｙｅ員、例
えばクロカビ、バチルス、タルイフエロマイセス（Ｈｕ
ｙｖｅｒｍｙｃｅｓ） 、左Ｚ図え、ムコール、ペニ
シリウム、丈ゾプユ、孟ユ左ユエ不皇ス、スポロトクウ
ム、トリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）およびス
トレプトマイセスが含まれる。
本発明の更に他の面は、実質的にリン脂質を含有してい
ない炭化水素源水溶液、殊に澱粉加水分解物、特に小麦
澱粉加水分解物の水溶液を提供することにある。
ない炭化水素源水溶液、殊に澱粉加水分解物、特に小麦
澱粉加水分解物の水溶液を提供することにある。
澱粉加水分解物は、加水分解物の濾過の時におよび／ま
たは濾液の清澄さに問題がないならば他の澱粉の加水分
解物、例えばコーン、ワックス・コーン、ジャガイモ、
タピオカ、米、サトウモロコシまたはワックス・サトウ
モロコシの澱粉の加水分解物も用いることができるが、
特に小麦の：Ｒ粉から誘導される加水分解物が適してい
る。本発明の方法で処理することのできる澱粉加水分解
物は、例えば澱粉を酸またはα−アミラーゼで処理する
ことによって例えば１０〜２０ ＤＥシロップ（ＤＥ・
右旋糖当量）なる加水分鮮度に加水分解物することによ
って製造される。最初の澱粉加水分解を本発明の方法に
よって処理してもよくそして同時にまたは次いで高地の
種類の追加的な酵素作用に委ねて、２０〜１００の範囲
のＤＥの澱粉加水分解物またはシロップの範囲のものを
製造することができる。本発明の方法は、２０〜１１０
℃１特に５０〜１００℃の温度で実施するのが有利であ
る。澱粉加水分解物のｐＨは８まで、特に３．５〜６．
５の範囲に維持するのが有利である。濾過速度および／
または濾液の清澄さについての所望の改善を達成するの
に必要とされ時間は、酵素の使用量、用いる基質の性質
および所望の生成物に依存して１時間〜５日間である。
たは濾液の清澄さに問題がないならば他の澱粉の加水分
解物、例えばコーン、ワックス・コーン、ジャガイモ、
タピオカ、米、サトウモロコシまたはワックス・サトウ
モロコシの澱粉の加水分解物も用いることができるが、
特に小麦の：Ｒ粉から誘導される加水分解物が適してい
る。本発明の方法で処理することのできる澱粉加水分解
物は、例えば澱粉を酸またはα−アミラーゼで処理する
ことによって例えば１０〜２０ ＤＥシロップ（ＤＥ・
右旋糖当量）なる加水分鮮度に加水分解物することによ
って製造される。最初の澱粉加水分解を本発明の方法に
よって処理してもよくそして同時にまたは次いで高地の
種類の追加的な酵素作用に委ねて、２０〜１００の範囲
のＤＥの澱粉加水分解物またはシロップの範囲のものを
製造することができる。本発明の方法は、２０〜１１０
℃１特に５０〜１００℃の温度で実施するのが有利であ
る。澱粉加水分解物のｐＨは８まで、特に３．５〜６．
５の範囲に維持するのが有利である。濾過速度および／
または濾液の清澄さについての所望の改善を達成するの
に必要とされ時間は、酵素の使用量、用いる基質の性質
および所望の生成物に依存して１時間〜５日間である。
本発明の方法は、澱粉加水分解物の濾過性および製造さ
れる濾液の清澄さの改善に加えて、加水分解物の泡立ち
を低下させそして別の精製段階、例えばイオン交換およ
びカーボンでの処理を更に受は入れ易い濾過液を形成す
る。
れる濾液の清澄さの改善に加えて、加水分解物の泡立ち
を低下させそして別の精製段階、例えばイオン交換およ
びカーボンでの処理を更に受は入れ易い濾過液を形成す
る。
本発明を、酵素測定が以下の方法によって行われている
以下の実施例によって更に詳細に説明する： ａ）ホスホ１パーゼＬの 一リソー レシチンの２０ミリモル水溶液０．２５ｍ１
（例えば、商品番号Ｌ ４１２９としてシグマ・カンパ
ニー（Ｓｉｇｍａ Ｃｏｍｐａｎｙ）によって販売され
ている。約９９χ濃度且つ主としてパリミチン−および
ステアリン酸を含有している）を、０．２５ｍｆのアセ
テート緩衝液（ｐｕ ４．５．０．０２１と混合しそし
て約５分間、５５℃にサーモスタットで保持する。
以下の実施例によって更に詳細に説明する： ａ）ホスホ１パーゼＬの 一リソー レシチンの２０ミリモル水溶液０．２５ｍ１
（例えば、商品番号Ｌ ４１２９としてシグマ・カンパ
ニー（Ｓｉｇｍａ Ｃｏｍｐａｎｙ）によって販売され
ている。約９９χ濃度且つ主としてパリミチン−および
ステアリン酸を含有している）を、０．２５ｍｆのアセ
テート緩衝液（ｐｕ ４．５．０．０２１と混合しそし
て約５分間、５５℃にサーモスタットで保持する。
−次いで、５０マイクロリツトルの酵素サンプル（水で
適当に希釈されている）を加える。
適当に希釈されている）を加える。
−酵素の正確に添加１分後に２５マイクロリツトルの培
養混合物を０．２５ｎｌの“酵素試薬１”と混合しそし
て３７℃で５分間培養する。次いで０．５ｒａ ｌ （
丁酵素試薬２”添加し、これに続いて３７℃で更に５分
間培養する。
養混合物を０．２５ｎｌの“酵素試薬１”と混合しそし
て３７℃で５分間培養する。次いで０．５ｒａ ｌ （
丁酵素試薬２”添加し、これに続いて３７℃で更に５分
間培養する。
紫色に着色した溶液の光学濃度（０，０，）は５５５ｎ
ｍと読める。
ｍと読める。
−この試験を、酵素および基質を１分間の代わり１０分
間培養して繰り返す。
間培養して繰り返す。
ｍ：つの０．０．の間の相違を得る（−分間の培養時間
と１０分間の培養時間との間の相違Δ０．０、）。Δ０
．Ｄ、を９で割ると一分間のΔ０．Ｄ、が得られる。
と１０分間の培養時間との間の相違Δ０．０、）。Δ０
．Ｄ、を９で割ると一分間のΔ０．Ｄ、が得られる。
“酵素試薬１”および“酵素試薬２”は、市販の非エス
テル化脂肪酸測定法（ＮＥＦＡ ＱＵＩＣに“ＢＭＹ”
）に属している（ベーリンガー・マンハイム０山内株式
会社（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ Ｙａ
ｍａｎｏｕｃｈｉ Ｋ、に、）によって販売されている
）。
テル化脂肪酸測定法（ＮＥＦＡ ＱＵＩＣに“ＢＭＹ”
）に属している（ベーリンガー・マンハイム０山内株式
会社（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ Ｙａ
ｍａｎｏｕｃｈｉ Ｋ、に、）によって販売されている
）。
遊離脂肪酸の評価数は、標準のオレイン酸溶液について
のＮＥＦＡ ＱＵＩＣＫ ＢＭＹ試験によって得られる
基準化曲線を用いて行う。
のＮＥＦＡ ＱＵＩＣＫ ＢＭＹ試験によって得られる
基準化曲線を用いて行う。
一分間に放出される＠離脂肪酸のマイクロモル数ハ、５
０マイクロリツトルの酵素サンプル中に存在するホスホ
リパーゼ単位数と同等である。
０マイクロリツトルの酵素サンプル中に存在するホスホ
リパーゼ単位数と同等である。
次いで、酵素組成物中の蛋白質１ｇ当たりの単位数を算
出する。
出する。
ｂ）ホスホリパーゼＣの−
用いる方法は、レシチンの標準溶液を加水分解しそして
生じるグリセロールを場合によっては評価することを゛
包含するマンハイム・ベーリンガ−（Ｍａｎｎｈｅｉｍ
Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ）（Ｃａｔ Ｎｏ １５６３６
）によって開示されている。
生じるグリセロールを場合によっては評価することを゛
包含するマンハイム・ベーリンガ−（Ｍａｎｎｈｅｉｍ
Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ）（Ｃａｔ Ｎｏ １５６３６
）によって開示されている。
Ｃ）キシラーゼおよび −グルカナーゼの ・この試験
は、試験条件下の酵素組成物が標準のキシランおよびβ
−グルカン溶液からそれぞれＤ−キジローゼおよびＤ−
グルコーゼを放出する速度を測定する。
は、試験条件下の酵素組成物が標準のキシランおよびβ
−グルカン溶液からそれぞれＤ−キジローゼおよびＤ−
グルコーゼを放出する速度を測定する。
ｐＨ４，５６のアセテート緩衝液にキシラン（１重量％
のシグマ・カンパニー Ｎｏ、Ｘ−３８７５）またはβ
−グルカン（１重量％のシグマ・カンパニーＮｏ、Ｇ−
６５１３）を溶解した１ｍｆの溶液を、水で適当に希釈
した１００マイクロリツトルの酵素溶液と試験条件下に
混合物する。この混合の前に、基質溶液を約１０分間の
間５５℃にサーモスタットによって保持する。酵素７基
質−混合物の培養は５５℃で実施する。５分および１０
分のそれぞれの後に０．５ｍｆの培養混合物を０．５ｍ
ｊ２のＤＮＳ （ジニトロサリチル酸）試薬と混合して
サンプルを完成する。このサンプル（培養混合物干ＤＮ
Ｓ）を１０分間、沸騰水中で加熱し、２．５ｍｊ！の水
を添加しそして最終混合物を冷却する。光学濃度（０，
Ｄ、）は室温で５４０ｎｍと測定される。
のシグマ・カンパニー Ｎｏ、Ｘ−３８７５）またはβ
−グルカン（１重量％のシグマ・カンパニーＮｏ、Ｇ−
６５１３）を溶解した１ｍｆの溶液を、水で適当に希釈
した１００マイクロリツトルの酵素溶液と試験条件下に
混合物する。この混合の前に、基質溶液を約１０分間の
間５５℃にサーモスタットによって保持する。酵素７基
質−混合物の培養は５５℃で実施する。５分および１０
分のそれぞれの後に０．５ｍｆの培養混合物を０．５ｍ
ｊ２のＤＮＳ （ジニトロサリチル酸）試薬と混合して
サンプルを完成する。このサンプル（培養混合物干ＤＮ
Ｓ）を１０分間、沸騰水中で加熱し、２．５ｍｊ！の水
を添加しそして最終混合物を冷却する。光学濃度（０，
Ｄ、）は室温で５４０ｎｍと測定される。
基質ブランク値を、１ｍｆｆ１の基質を１００マイクロ
リツタの水と混合し、５５℃で１０分間培養し、この０
．５ｍ／！の溶液を０．５ｍｆのＤＮＳ−試薬と混合し
そして上記の試験操作を行う。用いる希釈物では、酵素
ブランク値は無視することができる。
リツタの水と混合し、５５℃で１０分間培養し、この０
．５ｍ／！の溶液を０．５ｍｆのＤＮＳ−試薬と混合し
そして上記の試験操作を行う。用いる希釈物では、酵素
ブランク値は無視することができる。
時間に対する光学濃度のグラフの直線部分から一分光た
りの光学濃度の変化速度を算出する。
りの光学濃度の変化速度を算出する。
上記の条件のもとでのＤ−キジローゼおよびＤ−グルコ
ーゼについての確定された測定曲線を、試験条件下に酵
素組成物によって放出されるＤ−キジローゼ／Ｄ−グル
コーゼの量を測定する為に用いる。
ーゼについての確定された測定曲線を、試験条件下に酵
素組成物によって放出されるＤ−キジローゼ／Ｄ−グル
コーゼの量を測定する為に用いる。
一単位のキシラナーゼおよびβ−グルカナーゼが上記の
条件下に一分間に１マイクロモルの生成物（Ｄ−キジロ
ーゼ／Ｄ−グルコーゼとして測定）７ｉ−放出する酵素
の量であるので、サンプル中の酵素の単位数を計算する
ことができる。
条件下に一分間に１マイクロモルの生成物（Ｄ−キジロ
ーゼ／Ｄ−グルコーゼとして測定）７ｉ−放出する酵素
の量であるので、サンプル中の酵素の単位数を計算する
ことができる。
ｄ）蛋白質の定量
用いる方法は、ローリ−（Ｌｏｗｒｙ）等のＪ、ユＢｉ
。
。
１、 Ｃｈｅｍ、１９３ 、第２６５〜２７５頁（１９
５１）に記載されているものである。
５１）に記載されているものである。
尖施桝ユニ 主衾皿玉獲ｊ華庸別成物の調製酵素組成物
を、ノボ・インダストリー（Ｎｏｖ。
を、ノボ・インダストリー（Ｎｏｖ。
１ｎｄｕｓｔｒｉ Ａ／Ｓ）によって販売されている市
販のβ−グルカナーゼ調製物のＦＩＮＩＺＹＭ ２０Ｏ
ＬバッチＫＺＮＯＯ１５で製造する。ＦＩＮＩＺＹＭ
２０ＯＬはコウジカビ属の選択された変種の水性醗酵に
よって製造される真菌のβ−グルカナーゼ調製物である
。この酵素組成物は大麦のβ−グルカン（１，４−β−
１，３−β−グルカン）をオリゴ糖類およびグルコース
に加水分解すると言われておりそして、濾過の困難を阻
止しそしてβ−グルカンの沈澱を防止する為に、ビール
の醗酵および貯蔵の間に用いることができることが判っ
ている。
販のβ−グルカナーゼ調製物のＦＩＮＩＺＹＭ ２０Ｏ
ＬバッチＫＺＮＯＯ１５で製造する。ＦＩＮＩＺＹＭ
２０ＯＬはコウジカビ属の選択された変種の水性醗酵に
よって製造される真菌のβ−グルカナーゼ調製物である
。この酵素組成物は大麦のβ−グルカン（１，４−β−
１，３−β−グルカン）をオリゴ糖類およびグルコース
に加水分解すると言われておりそして、濾過の困難を阻
止しそしてβ−グルカンの沈澱を防止する為に、ビール
の醗酵および貯蔵の間に用いることができることが判っ
ている。
３０ｍＩ！、のＦＩＮＩＺＹＭ ２００ ＬバンチＫＺ
ＮＯＯ１５を３０ｆｆｌｌの蒸留水にて希釈する。この
混合物を、固体粒子を除く為に、３５００回転／分にて
５分間遠心分離処理する。５０ｍ／！の懸濁液を、手分
析用ＢＩＯ−ＲＡＤ−ポリアクリルアミドＢｉｏ−ｇｅ
ｌ Ｐ−６０（１００〜２００メソシユ）カラム（直
径５ｃｍ、高さ２３ｃｍ）にてクロマトグラフィー分析
により分離し、酢酸緩衝液にてｐＨ５，２で溶離しそし
て１０ＩＩ１１の分別物に集める。クロマトグラムは、
蛋白質の吸収に相当する２８０ｎｍの所に二つの異なる
ピークををする。この二つのピークに相当する分別物を
、この明細書において前に記した如きリソレシチン基質
を用いてのホスホリパーゼし一活性について検査する。
ＮＯＯ１５を３０ｆｆｌｌの蒸留水にて希釈する。この
混合物を、固体粒子を除く為に、３５００回転／分にて
５分間遠心分離処理する。５０ｍ／！の懸濁液を、手分
析用ＢＩＯ−ＲＡＤ−ポリアクリルアミドＢｉｏ−ｇｅ
ｌ Ｐ−６０（１００〜２００メソシユ）カラム（直
径５ｃｍ、高さ２３ｃｍ）にてクロマトグラフィー分析
により分離し、酢酸緩衝液にてｐＨ５，２で溶離しそし
て１０ＩＩ１１の分別物に集める。クロマトグラムは、
蛋白質の吸収に相当する２８０ｎｍの所に二つの異なる
ピークををする。この二つのピークに相当する分別物を
、この明細書において前に記した如きリソレシチン基質
を用いてのホスホリパーゼし一活性について検査する。
最初のピークに相当する分別物（１６〜４０）はホスホ
リパーゼし一活性を有しておりそして塊っている。
リパーゼし一活性を有しておりそして塊っている。
塊っているこの分別物を次いでＡＭＩＣＯＮ ＤＩＡＦ
ＬＯＸＭ−５０−限外濾過器によって濃縮し、次いでこ
の濃縮物を手分析用ＢＩＯ−ＲＡＤ−ポリアクリルアミ
ドＢｉｏ−ゲルＰ−１５０（５０〜１５０メンシュ）カ
ラム（直径５ｃｍ、高さ９０ｃｍ）にてクロマトグラフ
ィーにより分析し、１０ｍ ｌの分別物中に酢酸緩衝液
にてｐＨ５，２で溶離する。クロマトグラムは五つの異
なるピークを有しそしてこれらのピークに相当するそれ
らの分別物を上記の如きホスホリパーゼし一活性につい
て検査する。活性（５９〜７２）を示すこれらの分別物
を塊らせ、ＡＭＩＣＯＮ ＤＩＡＦＬＯＸＭ−５０−限
外濾過器によって濃縮する。
ＬＯＸＭ−５０−限外濾過器によって濃縮し、次いでこ
の濃縮物を手分析用ＢＩＯ−ＲＡＤ−ポリアクリルアミ
ドＢｉｏ−ゲルＰ−１５０（５０〜１５０メンシュ）カ
ラム（直径５ｃｍ、高さ９０ｃｍ）にてクロマトグラフ
ィーにより分析し、１０ｍ ｌの分別物中に酢酸緩衝液
にてｐＨ５，２で溶離する。クロマトグラムは五つの異
なるピークを有しそしてこれらのピークに相当するそれ
らの分別物を上記の如きホスホリパーゼし一活性につい
て検査する。活性（５９〜７２）を示すこれらの分別物
を塊らせ、ＡＭＩＣＯＮ ＤＩＡＦＬＯＸＭ−５０−限
外濾過器によって濃縮する。
この濃縮物を、手分析用ＰＩＩＡＲＭＡＣＩＡ−急速流
ＤＥＡＥ−５ｅｐｈａｒｏｓｅアニオン交換カラム（直
径５ｃｍ、高さ３３ｃｍ）にて順々に分別し、塩化ナト
リウム成分の直線的な増加を用いそして１０ｍ！！、の
分別物を取ってｐＨ５，２にピペラジン−１１ｃＩＪＥ
街液で抽出する。クロマトグラムは五つの異なるピーク
を有する。ホスホリパーゼし一活性（５５〜６３）を有
する分別物を再び塊らせそして＾旧ＣＯＮ ＤＩＡＦＬ
ＯＸＭ−５０−限外濾過器によって濃縮し、次いでｐＨ
八ＲへＡＣＩＡ ５ｅｐｈｄｅｘ Ｇ−２５ＭカラムＰ
Ｄ−１０によって脱塩する。
ＤＥＡＥ−５ｅｐｈａｒｏｓｅアニオン交換カラム（直
径５ｃｍ、高さ３３ｃｍ）にて順々に分別し、塩化ナト
リウム成分の直線的な増加を用いそして１０ｍ！！、の
分別物を取ってｐＨ５，２にピペラジン−１１ｃＩＪＥ
街液で抽出する。クロマトグラムは五つの異なるピーク
を有する。ホスホリパーゼし一活性（５５〜６３）を有
する分別物を再び塊らせそして＾旧ＣＯＮ ＤＩＡＦＬ
ＯＸＭ−５０−限外濾過器によって濃縮し、次いでｐＨ
八ＲへＡＣＩＡ ５ｅｐｈｄｅｘ Ｇ−２５ＭカラムＰ
Ｄ−１０によって脱塩する。
脱塩した濃縮物を次いで、分析用ＰＩＩＡＲＭＡＣＩＡ
ＭＯＮＯロ アニオン交換カラム（直径５ｃｍ、高さ５
０ｃｍ）にて順々に分別し、塩化ナトリウム成分の段階
的な増加を用いそして２ｍｊ２の分別物を集めてｐｌ＋
９．４にジェタノールアミン緩衝液で抽出する。クロマ
トグラムは七つの異なるピークを有し、そして二つのピ
ークを示す分別物、即ち分別物１６〜１９および２１〜
２５は、ホスホリパーゼし活性を含有していることが判
っており、１６〜１９は塊った時に２１〜２５０分別物
よりも８０倍以上の活性を有している。か−るミロの分
離および１６〜１９の塊り処理の後に、ＡＭＩＣＯＮ
ＭｏｕｃｏＮ−Ｂｉ４縮器で濃縮し、１ｇの蛋白質当た
り４２２．０００単位のホスホリパーゼＬ−活性および
５００：１より多いホスホリパーゼ： キシラナーゼお
よびβ−グルカナーゼ−比を有する溶液を得る。
ＭＯＮＯロ アニオン交換カラム（直径５ｃｍ、高さ５
０ｃｍ）にて順々に分別し、塩化ナトリウム成分の段階
的な増加を用いそして２ｍｊ２の分別物を集めてｐｌ＋
９．４にジェタノールアミン緩衝液で抽出する。クロマ
トグラムは七つの異なるピークを有し、そして二つのピ
ークを示す分別物、即ち分別物１６〜１９および２１〜
２５は、ホスホリパーゼし活性を含有していることが判
っており、１６〜１９は塊った時に２１〜２５０分別物
よりも８０倍以上の活性を有している。か−るミロの分
離および１６〜１９の塊り処理の後に、ＡＭＩＣＯＮ
ＭｏｕｃｏＮ−Ｂｉ４縮器で濃縮し、１ｇの蛋白質当た
り４２２．０００単位のホスホリパーゼＬ−活性および
５００：１より多いホスホリパーゼ： キシラナーゼお
よびβ−グルカナーゼ−比を有する溶液を得る。
去ｉ桝」＝ ８に う 素組 物の調−１１装置は、
サーモスタットで３０℃に保持されておりそして１分・
１２の流体培養基当たり０．７１の空気が圧縮空気に
て送り込まれている全容積２（作業容積１．４ｆ”）の
醗酵器よりなる。
サーモスタットで３０℃に保持されておりそして１分・
１２の流体培養基当たり０．７１の空気が圧縮空気に
て送り込まれている全容積２（作業容積１．４ｆ”）の
醗酵器よりなる。
醗酵媒体は２０ｇ／ ＥのＰＲＯＦＬＯ（綿実粉末）、
２０ｇ／ｌの市販のコーンオイル、１ｇ／ｌの硫酸アン
モニウム、１ｇ／ ｆｆｉの燐酸二水素カリウム、０．
５ｇ／２の硫酸マグネシウム水和物、０．５ｇ／ Ｅ、
の塩化カリウム、５ｍｇ／ ｌの硫酸第一鉄水和物、１
．６ｍｇ／Ｉ！、の硫酸マンガン水和物、１．４ｍｇ／
Ｅの硫酸亜鉛水和物および２ｍｇ／ ｌの塩化コバル
ト水和物より成り、これらはフタル酸水素カリウム／水
酸化ナトリウム緩衝液（０，０５Ｍのフタル酸水素カリ
ウムｐ Ｈ＝ ５ ）に溶解されているかまたは懸濁さ
れている。最終的媒体中のフタル酸水素カリウムおよび
水酸化ナトリウムの含有量はそれぞれ９゜５８／２およ
び１．１５ｇ／ｊ２である。
２０ｇ／ｌの市販のコーンオイル、１ｇ／ｌの硫酸アン
モニウム、１ｇ／ ｆｆｉの燐酸二水素カリウム、０．
５ｇ／２の硫酸マグネシウム水和物、０．５ｇ／ Ｅ、
の塩化カリウム、５ｍｇ／ ｌの硫酸第一鉄水和物、１
．６ｍｇ／Ｉ！、の硫酸マンガン水和物、１．４ｍｇ／
Ｅの硫酸亜鉛水和物および２ｍｇ／ ｌの塩化コバル
ト水和物より成り、これらはフタル酸水素カリウム／水
酸化ナトリウム緩衝液（０，０５Ｍのフタル酸水素カリ
ウムｐ Ｈ＝ ５ ）に溶解されているかまたは懸濁さ
れている。最終的媒体中のフタル酸水素カリウムおよび
水酸化ナトリウムの含有量はそれぞれ９゜５８／２およ
び１．１５ｇ／ｊ２である。
瀘皿少裂遣
種菌としてクロカビ（ＡＴＣＣ１３４９６）を、２ｇ／
ｆ！。
ｆ！。
のデキストローゼ、１ｇ／２の硫酸アンモニウム、１ｇ
／ｌの燐酸二水素カリウム、０．５ｇ／ ｌの硫酸マグ
ネシウム水和物、０．５ｇ／ ｌの硫酸マグネシウム水
和物、０．’５ｇ／ ｆの塩化カリウム、０．１ｇ／！
の酵母抽出物、５ｍｇ／ １の硫酸第一鉄水和物、１．
６ｍｇ＃！の硫酸マンガン水和物、１．４ｍｇ／ ｅの
硫酸亜鉛水和物および２ｍｇ／ ｅの塩化コバルト水和
物より成る媒体において胞子から培養する。この種菌は
四日の間、震盪水浴中の５００ｍ ｌの震盪フラスコ中
で全容量５０ｍＩ！、の媒体において３０℃のもとで培
養する。
／ｌの燐酸二水素カリウム、０．５ｇ／ ｌの硫酸マグ
ネシウム水和物、０．５ｇ／ ｌの硫酸マグネシウム水
和物、０．’５ｇ／ ｆの塩化カリウム、０．１ｇ／！
の酵母抽出物、５ｍｇ／ １の硫酸第一鉄水和物、１．
６ｍｇ＃！の硫酸マンガン水和物、１．４ｍｇ／ ｅの
硫酸亜鉛水和物および２ｍｇ／ ｅの塩化コバルト水和
物より成る媒体において胞子から培養する。この種菌は
四日の間、震盪水浴中の５００ｍ ｌの震盪フラスコ中
で全容量５０ｍＩ！、の媒体において３０℃のもとで培
養する。
培養媒体に種菌１００＋ｙｌを接種する。温度は３０℃
でありそして空気を一定の状態で流す。撹拌羽の回転速
度は最初の４８時間の間２５０回転／分でありそして次
の２４時間の間１００回転７分増加する。六日後にこの
そ（どを７５０回転／分に増加しそして醗酵が終了する
まで一定のま＼に保持する。醗酵期間は１２日間である
。このバイオマスは定量化されておらず、ｐＨは１２日
後にｐＨ４゜９に達するまで僅かに低下する。細胞を除
いた媒体中のホスホリパーゼし一活性を前記のＮＥＦＡ
Ｑｕｉｃｋ−試験にて測定する。濾過によって菌糸体
を除いた後に、８００１１１！の液を回収する（醗酵の
間に、減少した体積は水分の蒸発に起因している）。８
００ｍ ｌの液体はｌｎｆ！当たり１３７単位のホスホ
リパーゼし一単位を含有している。それ故に全部で１０
９６００単位が限外濾過によって醗酵物から回収される
。
でありそして空気を一定の状態で流す。撹拌羽の回転速
度は最初の４８時間の間２５０回転／分でありそして次
の２４時間の間１００回転７分増加する。六日後にこの
そ（どを７５０回転／分に増加しそして醗酵が終了する
まで一定のま＼に保持する。醗酵期間は１２日間である
。このバイオマスは定量化されておらず、ｐＨは１２日
後にｐＨ４゜９に達するまで僅かに低下する。細胞を除
いた媒体中のホスホリパーゼし一活性を前記のＮＥＦＡ
Ｑｕｉｃｋ−試験にて測定する。濾過によって菌糸体
を除いた後に、８００１１１！の液を回収する（醗酵の
間に、減少した体積は水分の蒸発に起因している）。８
００ｍ ｌの液体はｌｎｆ！当たり１３７単位のホスホ
リパーゼし一単位を含有している。それ故に全部で１０
９６００単位が限外濾過によって醗酵物から回収される
。
更に、酵素溶液が１ｇの蛋白質当たり１７８１９５単位
のホスホリパーゼし、８１８２単位のキシラナーゼおよ
び１４８９単位のβ−グルカナーゼを、ホスホリパーゼ
し：（キシラナーゼ十 β−グルカナーゼ）・１８：１
の比で含有していることが分析で判った。
のホスホリパーゼし、８１８２単位のキシラナーゼおよ
び１４８９単位のβ−グルカナーゼを、ホスホリパーゼ
し：（キシラナーゼ十 β−グルカナーゼ）・１８：１
の比で含有していることが分析で判った。
小麦”＾”澱粉の水性スラリー３５重量％を連続的に１
８０Ｈのマルトデキストリンに転化する。
８０Ｈのマルトデキストリンに転化する。
その際慣用のα−アミラーゼ加水分解法を用いる。
ρ１１を４．８に調整しそして温度を５５℃に調整した
後に、乾燥ベースで算出して０．１５重量％の麦芽汁４
００ＯＬ（β−アミラーゼ）を１８ ＤＥマルトデキス
トリンの２ｉバンチに加える。この混合物を２０時間培
養しそして、ＤＥが４２に上昇した時にシロップの濾過
速度を実験室用の減圧プレコートフィルター（ｐｒｅ−
ｃｏａｔ ｆｉｌｔｅｒ）を用いて測定する。このフィ
ルターは工業用の回転式減圧プレコートフィルターに関
連した結果を得る為に用いる。この濾過は、４．８にｐ
ｌ＋を調整した後に６０℃のシロップ温度にて実施する
。
後に、乾燥ベースで算出して０．１５重量％の麦芽汁４
００ＯＬ（β−アミラーゼ）を１８ ＤＥマルトデキス
トリンの２ｉバンチに加える。この混合物を２０時間培
養しそして、ＤＥが４２に上昇した時にシロップの濾過
速度を実験室用の減圧プレコートフィルター（ｐｒｅ−
ｃｏａｔ ｆｉｌｔｅｒ）を用いて測定する。このフィ
ルターは工業用の回転式減圧プレコートフィルターに関
連した結果を得る為に用いる。この濾過は、４．８にｐ
ｌ＋を調整した後に６０℃のシロップ温度にて実施する
。
二つの培養を行う。最初の培養物は添加物を含有してお
らず、１２Ｏｆ −ｈ−’・ ｍ −２の濾過速度が得
られる。第二の培養は、実施例１に記載の濃厚な１６〜
１９の塊った分別物０．１重量２（乾燥ベースで算出）
を添加して実施する。この場合の濾過速度は５００２・
トド ｌ１１−２である。
らず、１２Ｏｆ −ｈ−’・ ｍ −２の濾過速度が得
られる。第二の培養は、実施例１に記載の濃厚な１６〜
１９の塊った分別物０．１重量２（乾燥ベースで算出）
を添加して実施する。この場合の濾過速度は５００２・
トド ｌ１１−２である。
１０〜２００Ｈのマルトデキストリンを、β−アミラー
ゼ酵素を用いてｐＨ５，２そして５８℃で糖化すること
によって高麦芽糖シロップとする。この生成物は１０４
２・ ｈ−１・ ｍ −ｔの濾過速度を有しそして、カ
ーボンでの精製後には９４単位の清澄さおよび１１．６
単位の色を有する（この清澄さおよび色は光学濃度測定
器によって得られる）。糖化生成物を実施例２の酵素の
０．５単位／ｇ（マルトデキストリン）にて前処理した
場合、濾過速度は３２３！・ ｈ−１・ ｍ −２であ
りそしてカーボン精製の後の清澄さおよび色はそれぞれ
１００および０．８である。
ゼ酵素を用いてｐＨ５，２そして５８℃で糖化すること
によって高麦芽糖シロップとする。この生成物は１０４
２・ ｈ−１・ ｍ −ｔの濾過速度を有しそして、カ
ーボンでの精製後には９４単位の清澄さおよび１１．６
単位の色を有する（この清澄さおよび色は光学濃度測定
器によって得られる）。糖化生成物を実施例２の酵素の
０．５単位／ｇ（マルトデキストリン）にて前処理した
場合、濾過速度は３２３！・ ｈ−１・ ｍ −２であ
りそしてカーボン精製の後の清澄さおよび色はそれぞれ
１００および０．８である。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １）濾過することが困難でありおよび／または濁った濾
液を生成する炭水化物源の水溶液を処理する方法におい
て、該溶液が不純物としてリン脂質を含有しそして、溶
液の濾過性および／または濾液の清澄さがホスホリパー
ゼ酵素を含有する酵素組成物との接触によって改善され
るような条件のもとで濾過前に該溶液を処理し、ホスホ
リパーゼ酵素と、キシラナーゼおよび存在していてもよ
いβ−グルカナーゼ酵素より成る合計との比が少なくと
も０．０５：１、殊に少なくとも１：１、特に少なくと
も５：１そして最も好ましくは少なくとも１０：１であ
ることを特徴とする、上記方法。 ２）酵素組成物がホスホリパーゼおよびキシラナーゼお
よび／またはβ−グルカナーゼ酵素を含有し、その際ホ
スホリパーゼと、キシラナーゼおよびβ−グルカナーゼ
酵素より成る合計との比が０．０５：１〜５０：１、特
に１：１〜３０：１の範囲にある特許請求の範囲第１項
記載の方法。 ３）方法で用いる酵素組成物が１ｇの全蛋白質当たり少
なくとも５０００単位、殊に少なくとも１５，０００単
位、特に少なくとも５０，０００単位、更に好ましくは
少なくとも１００，０００単位のホスホリパーゼを含有
する特許請求の範囲第１項または第２項記載の方法。 ４）ホスホリパーゼ酵素がＬ＿１、Ｌ＿２またはＣ−活
性を有する特許請求の範囲第１〜３項の何れか一つに記
載の方法。 ５）炭化水素源の水溶液が澱粉加水分解物、特に小麦澱
粉加水分解物である特許請求の範囲第１〜４項の何れか
一つに記載の方法。 ６）２０〜１１０℃、殊に５０〜１００℃の温度で実施
する特許請求の範囲第１〜５項の何れか一つに記載の方
法。 ７）ｐＨ値を８まで、特に３．５〜６．５の範囲に維持
する特許請求の範囲第１〜６項の何れか一つに記載の方
法。 ８）酵素組成物の全蛋白質１ｇ当たり少なくとも５，０
００単位の量で存在するホスホリパーゼより成りそして
ホスホリパーゼ酵素と、キシラナーゼおよび存在してい
てもよいβ−グルカナーゼ酵素より成る合計との比が少
なくとも０．０５：１、殊に少なくとも１：１、特に少
なくとも５：１そして更に好ましくは少なくとも１０：
１であることを特徴とする、 濾過することが困難でありおよび／または濁った濾過物
を生成する炭水化物源の水溶液を処理する方法において
、該溶液が不純物としてリン脂質を含有しそして、溶液
の濾過性および／または濾液の清澄さがホスホリパーゼ
酵素を含有する酵素組成物との接触によって改善される
ような条件のもとで濾過前に該溶液を処理し、ホスホリ
パーゼ酵素と、キシラナーゼおよび存在していてもよい
β−グルカナーゼ酵素より成る合計との比が少なくとも
０．０５：１、殊に少なくとも１：１、特に少なくとも
５：１そして最も好ましくは少なくとも１０：１である
、上記方法に用いるのに適する酵素組成物。 ９）ホスホリパーゼおよびキシラナーゼおよび／または
β−グルカナーゼを含有し、その際ホスホリパーゼと、
キシラナーゼおよびβ−グルカナーゼより成る合計との
比が０．０５：１〜５０：１、特に１：１〜３０：１の
範囲にある特許請求の範囲第８項記載の酵素組成物。 １０）１ｇの全蛋白質当たり少なくとも１５，０００単
位、殊に少なくとも５０，０００単位、更に好ましくは
少なくとも１００，０００単位のホスホリパーゼを含有
する特許請求の範囲第８項または第９項記載の酵素組成
物。 １１）微生物源の出である特許請求の範囲第８〜１０項
の何れか一つに記載の酵素組成物。 １２）ホルホリパーゼＣ以上にホスホリパーゼＡ＿１、
Ａ＿２、Ｌ＿１および／またはＬ＿２を含有する特許請
求の範囲第８〜１１項の何れか一つに記載の酵素組成物
。 １３）微生物が￥コウジカビ属￥、例えば￥クロカビ￥
、￥バチルス￥、￥クルイフェロマイセス￥（Ｋｌｕｙ
ｖｅｒｍｙｃｅｓ）、￥カンジタ￥、￥ムコール￥、￥
ペニシリウム￥、￥リゾプス￥、￥サッカロマイセス￥
、￥スポロトクウム￥、￥トリコデルマ￥（Ｔｒｉｃｈ
ｏｄｅｒｍａ）および￥ストレプトマイセス￥である特
許請求の範囲第１１または１２項の何れか一つに記載の
酵素組成物。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB858525012A GB8525012D0 (en) | 1985-10-10 | 1985-10-10 | Carbohydrate refining process |
| GB8525012 | 1985-10-10 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62111695A true JPS62111695A (ja) | 1987-05-22 |
| JPH0740952B2 JPH0740952B2 (ja) | 1995-05-10 |
Family
ID=10586484
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61240223A Expired - Lifetime JPH0740952B2 (ja) | 1985-10-10 | 1986-10-11 | 清澄化された澱粉加水分解物の製造方法およびそれに用いるのに適当な新規の酵素組成物 |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4916064A (ja) |
| EP (1) | EP0219269B2 (ja) |
| JP (1) | JPH0740952B2 (ja) |
| AT (1) | ATE67247T1 (ja) |
| AU (1) | AU604216B2 (ja) |
| CA (1) | CA1293212C (ja) |
| DE (1) | DE3681396D1 (ja) |
| DK (1) | DK482286A (ja) |
| ES (1) | ES2023814T5 (ja) |
| FI (1) | FI92718B (ja) |
| GB (1) | GB8525012D0 (ja) |
| IE (1) | IE59003B1 (ja) |
| MX (1) | MX165746B (ja) |
| NZ (1) | NZ217551A (ja) |
| ZA (1) | ZA866933B (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2011205927A (ja) * | 2010-03-29 | 2011-10-20 | Nagase & Co Ltd | 酵母エキスの製造方法 |
Families Citing this family (39)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8915299D0 (en) * | 1989-07-04 | 1989-08-23 | Cerestar Holding Bv | Carbohydrate refining process and a supported enzyme for use therein |
| JP2858875B2 (ja) * | 1990-05-23 | 1999-02-17 | サントリー株式会社 | 酒類の製造方法 |
| US5194094A (en) * | 1991-06-12 | 1993-03-16 | American Maize-Products Company | Fractionating starch hydrolysates |
| TW362115B (en) * | 1992-06-16 | 1999-06-21 | Sankyo Lifetech Co Ltd | Novel phospholipase A1, process for its preparation and the use thereof |
| FI96317C (fi) * | 1994-05-31 | 1996-06-10 | Exavena Oy | Menetelmä hienojakoisten ja muunnettujen tärkkelyksien valmistamiseksi |
| US6936289B2 (en) | 1995-06-07 | 2005-08-30 | Danisco A/S | Method of improving the properties of a flour dough, a flour dough improving composition and improved food products |
| DE19527274A1 (de) * | 1995-07-26 | 1997-01-30 | Metallgesellschaft Ag | Enzymatisches Verfahren zur Entschleimung von pflanzlichen Ölen mit Aspergillus-Phospholipase |
| DE19620649A1 (de) * | 1996-05-22 | 1997-11-27 | Roehm Gmbh | Rekombinant hergestellte Lysophospholipase aus Aspergillus |
| CN1148442C (zh) | 1996-12-09 | 2004-05-05 | 诺维信公司 | 利用来自具有磷脂酶a和/或b活性的丝状真菌的磷脂酶降低含有大量非水合磷的食用油中的含磷成分 |
| US6103505A (en) * | 1996-12-09 | 2000-08-15 | Novo Nordisk A/S | Method for reducing phosphorus content of edible oils |
| DE69835112T2 (de) * | 1997-04-09 | 2007-01-04 | Danisco A/S | Verwendung von Lipase zur Verbesserung von Teigen Und Backwaren |
| DK1098988T4 (da) * | 1998-07-21 | 2007-09-03 | Danisco | Födevare |
| DK2290059T3 (en) | 1998-11-27 | 2016-02-22 | Novozymes As | Lipolytic enzyme VERSIONS |
| ATE494366T1 (de) | 1999-10-14 | 2011-01-15 | Novozymes As | Lysophospholipase aus aspergillus |
| US6146869A (en) * | 1999-10-21 | 2000-11-14 | Novo Nordisk Biotech, Inc. | Polypeptides having phospholipase B activity and nucleic acids encoding same |
| ATE471377T1 (de) | 2000-04-28 | 2010-07-15 | Novozymes As | Variante eines lipolytischen enzyms |
| CN100591212C (zh) | 2001-05-18 | 2010-02-24 | 丹尼斯科有限公司 | 改善生面团和面包质量的方法 |
| PL373887A1 (en) | 2002-05-21 | 2005-09-19 | Dsm Ip Assets B.V. | Novel phospholipases and uses thereof |
| US20040071685A1 (en) * | 2002-10-09 | 2004-04-15 | Devin Houston | Compositions and methods for increasing the bioavailability of plant polyphenols |
| US20050196766A1 (en) * | 2003-12-24 | 2005-09-08 | Soe Jorn B. | Proteins |
| US7955814B2 (en) * | 2003-01-17 | 2011-06-07 | Danisco A/S | Method |
| DE602004030000D1 (de) * | 2003-01-17 | 2010-12-23 | Danisco | Verfahren zur in-situ-herstellung eines emulgators in einem nahrungsmittel |
| EP1620551B1 (en) | 2003-04-28 | 2013-09-18 | Novozymes A/S | Phospholipase and method of producing it |
| GB0716126D0 (en) | 2007-08-17 | 2007-09-26 | Danisco | Process |
| US7718408B2 (en) | 2003-12-24 | 2010-05-18 | Danisco A/S | Method |
| US7906307B2 (en) | 2003-12-24 | 2011-03-15 | Danisco A/S | Variant lipid acyltransferases and methods of making |
| GB0405637D0 (en) | 2004-03-12 | 2004-04-21 | Danisco | Protein |
| EP2267108A1 (en) | 2004-07-16 | 2010-12-29 | Danisco A/S | Enzymatic oil-degumming method |
| EP1799819B1 (en) | 2004-09-30 | 2011-03-23 | Novozymes Inc. | Polypeptides having lipase activity and polynucleotides encoding same |
| DE102006046857A1 (de) | 2006-10-02 | 2008-04-03 | Ab Enzymes Gmbh | Klonierung, Expression und Verwendung saurer Lysophospholipasen |
| EP2405007B1 (en) * | 2007-01-25 | 2013-12-04 | DuPont Nutrition Biosciences ApS | Production of a lipid acyltransferase from transformed Bacillus licheniformis cells |
| EP2376527A1 (en) | 2008-12-12 | 2011-10-19 | Novozymes Inc. | Polypeptides having lipase activity and polynucleotides encoding same |
| CN103314091A (zh) | 2010-11-12 | 2013-09-18 | 诺维信公司 | 具有磷脂酶c活性的多肽及其编码多核苷酸 |
| US20150017700A1 (en) | 2011-12-22 | 2015-01-15 | Danisco Us Inc. | Compositions and methods comprising a lipolytic enzyme variant |
| CN112852777A (zh) | 2012-12-11 | 2021-05-28 | 诺维信公司 | 具有磷脂酶c活性的多肽以及对其进行编码的多核苷酸 |
| MX363261B (es) | 2013-03-21 | 2019-03-19 | Novozymes As | Polipéptidos que tienen actividad de la fosfolipasa a y polinucleótidos que los codifican. |
| MX2020001159A (es) | 2013-07-19 | 2021-07-07 | Danisco Us Inc | Composiciones y metodos que comprenden una variante de enzima lipolitica. |
| BR112016021474B1 (pt) | 2014-03-19 | 2022-10-04 | Novozymes A/S | Composição compreendendo uma fosfatidilinositol fosfolipase c e um polipeptídeo de fosfolipase c específica para fosfatidilcolina e fosfatidiletanolamina e método para reduzir o teor de fosfolipídeos em uma composição de óleo |
| WO2015173426A1 (en) | 2014-05-15 | 2015-11-19 | Novozymes A/S | Compositions comprising polypeptides having phospholipase c activity and use thereof |
Family Cites Families (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2970086A (en) * | 1957-12-30 | 1961-01-31 | Corn Products Co | Method of making dextrose using purified amyloglucosidase |
| US3264193A (en) * | 1963-12-17 | 1966-08-02 | Corn Products Co | Process for converting amylaceous materials to dextrose |
| US4298400A (en) * | 1971-01-18 | 1981-11-03 | Grain Processing Corporation | Low D.E. starch conversion products |
| JPS5218797B2 (ja) * | 1973-03-10 | 1977-05-24 | ||
| DE2643800C2 (de) * | 1976-09-29 | 1986-10-30 | Fritz Werner Industrie-Ausrüstungen GmbH, 6222 Geisenheim | Verfahren zur Herstellung von Xylose durch enzymatische Hydrolyse von Xylanen |
| GB2065689B (en) * | 1979-11-29 | 1983-06-22 | Tate & Lyle Ltd | Enzymatic clarification of polysaccharide solutions |
| EP0039962B1 (en) * | 1980-05-08 | 1983-03-02 | Shell Internationale Researchmaatschappij B.V. | Clarification of polysaccharide-containing fermentation products |
| FR2491494B1 (fr) * | 1980-10-06 | 1985-11-29 | Inst Francais Du Petrole | Procede enzymatique de clarification de gommes xanthanes permettant d'ameliorer leur injectivite et leur filtrabilite |
| EP0078621A1 (en) * | 1981-10-29 | 1983-05-11 | Kelco Biospecialties Limited | Treatment of Xanthan gum solutions |
| EP0078556B1 (en) * | 1981-11-03 | 1986-03-12 | Shell Internationale Researchmaatschappij B.V. | Process for cell disruption |
| US4562150A (en) * | 1983-03-09 | 1985-12-31 | Agency Of Industrial Science And Technolgy | Method for manufacture of cellulase |
| US4636468A (en) * | 1984-06-25 | 1987-01-13 | Genencor, Inc. | Lipolytic enzyme derived from a aspergillus microorganism having an accelerating effect on cheese flavor development |
| US4612284A (en) * | 1984-09-28 | 1986-09-16 | A. E. Staley Manufacturing Company | Process for the enzymatic hydrolysis of non-gelatinized granular starch material directly to glucose |
-
1985
- 1985-10-10 GB GB858525012A patent/GB8525012D0/en active Pending
-
1986
- 1986-09-11 ZA ZA866933A patent/ZA866933B/xx unknown
- 1986-09-11 NZ NZ217551A patent/NZ217551A/xx unknown
- 1986-09-30 FI FI863951A patent/FI92718B/fi not_active IP Right Cessation
- 1986-10-01 ES ES86307549T patent/ES2023814T5/es not_active Expired - Lifetime
- 1986-10-01 DE DE8686307549T patent/DE3681396D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1986-10-01 AT AT86307549T patent/ATE67247T1/de not_active IP Right Cessation
- 1986-10-01 EP EP86307549A patent/EP0219269B2/en not_active Expired - Lifetime
- 1986-10-06 US US06/915,438 patent/US4916064A/en not_active Expired - Lifetime
- 1986-10-08 CA CA000520085A patent/CA1293212C/en not_active Expired - Lifetime
- 1986-10-08 MX MX003980A patent/MX165746B/es unknown
- 1986-10-09 IE IE266186A patent/IE59003B1/en not_active IP Right Cessation
- 1986-10-09 AU AU63651/86A patent/AU604216B2/en not_active Ceased
- 1986-10-09 DK DK482286A patent/DK482286A/da not_active Application Discontinuation
- 1986-10-11 JP JP61240223A patent/JPH0740952B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2011205927A (ja) * | 2010-03-29 | 2011-10-20 | Nagase & Co Ltd | 酵母エキスの製造方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0740952B2 (ja) | 1995-05-10 |
| CA1293212C (en) | 1991-12-17 |
| ES2023814T5 (es) | 2000-08-16 |
| GB8525012D0 (en) | 1985-11-13 |
| DK482286A (da) | 1987-04-11 |
| AU604216B2 (en) | 1990-12-13 |
| EP0219269A3 (en) | 1988-08-03 |
| FI863951A (fi) | 1987-04-11 |
| DK482286D0 (da) | 1986-10-09 |
| EP0219269B1 (en) | 1991-09-11 |
| EP0219269B2 (en) | 2000-03-29 |
| FI92718B (fi) | 1994-09-15 |
| MX165746B (es) | 1992-12-03 |
| US4916064A (en) | 1990-04-10 |
| ZA866933B (en) | 1987-04-29 |
| ES2023814B3 (es) | 1992-02-16 |
| IE862661L (en) | 1987-04-10 |
| IE59003B1 (en) | 1993-12-15 |
| NZ217551A (en) | 1988-06-30 |
| AU6365186A (en) | 1987-04-16 |
| ATE67247T1 (de) | 1991-09-15 |
| FI863951A0 (fi) | 1986-09-30 |
| EP0219269A2 (en) | 1987-04-22 |
| DE3681396D1 (de) | 1991-10-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPS62111695A (ja) | 清澄化された澱粉加水分解物の製造方法およびそれに用いるのに適当な新規の酵素組成物 | |
| JP2589941B2 (ja) | グルコアミラーゼ酵素分画 | |
| US4618579A (en) | Raw starch saccharification | |
| US3565765A (en) | Preparation of high maltose conversion products | |
| EP0564893B1 (en) | Amylase resistant starch | |
| KR20010032497A (ko) | 막 분리 단계를 포함하는 효소성 전분 당화 | |
| CA1262879A (en) | PROCESS FOR PRODUCING THERMOSTABLE .alpha.-AMYLASES BY CULTURING MICRO-ORGANISMS AT ELEVATED TEMPERATURES | |
| US4338433A (en) | Moranoline derivatives and process for preparation thereof | |
| Patel et al. | Production of fructooligosaccharides by Fusarium oxysporum | |
| CA2019756C (en) | Novel thermoduric and aciduric pullulanese enzyme and method for its production | |
| WO1986001832A1 (en) | THERMOSTABLE beta-AMYLASE | |
| Pleszczyńska et al. | Hydrolysis of dextran by Penicillium notatum dextranase and identification of final digestion products | |
| US4650757A (en) | Process of enzymatic conversion of polysaccharides | |
| US3862005A (en) | Process for producing aldonic acids and starch sugars containing aldonic acids | |
| JPH0714356B2 (ja) | 澱粉若しくは澱粉加水分解物からマルトース及びマルトトリオースを生成する方法 | |
| Saha et al. | Improved method for preparing high maltose conversion syrups | |
| Benson et al. | Production and quantification of transglucosidase from Aspergillus niger | |
| US3047471A (en) | Method of refining amyloglucosidase | |
| Krzechowska et al. | Isolation and some properties of glucoamylase from Cephalosporium charticola Lindau | |
| US4575487A (en) | Method for determination of transglucosidase | |
| PL110770B1 (en) | Method of producing the enzyme of glucose isomerase | |
| JPH0584074A (ja) | オリゴ糖酸化酵素、オリゴ糖酸化酵素の製造方法、オリゴ糖の測定方法、オリゴ糖酸の製造方法及びアミラーゼ活性測定法 | |
| JP4830031B2 (ja) | 転移酵素、糖質の製造方法、配糖体の製造方法、転移酵素の製造方法 | |
| US5604128A (en) | Isolated cultures of Pestalotiopsis funerea IFO 5427 and Pestalotiopsis negleta FERM BP-3501 | |
| EP0528612A2 (en) | Amylase capable of digesting raw starch |