JPS6211090A - トレポネマ・ハイオジセンテリアエの生育方法 - Google Patents
トレポネマ・ハイオジセンテリアエの生育方法Info
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- JPS6211090A JPS6211090A JP61105004A JP10500486A JPS6211090A JP S6211090 A JPS6211090 A JP S6211090A JP 61105004 A JP61105004 A JP 61105004A JP 10500486 A JP10500486 A JP 10500486A JP S6211090 A JPS6211090 A JP S6211090A
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- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
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- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
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- C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
- C12P1/04—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes by using bacteria
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
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- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
豚の赤痢は離乳後の豚に主として影響を及ぼす 。
重い粘液出血性下痢である。この病気の抑制は一般に化
学生物物質(chemobiot 1cs)および抗生
物質の使用により達成されてきた。今日まで、この病気
を抑制するために有効な薬物以外の予防物質は存在して
いない。嫌気性スピロ記す)は豚の赤痢の主要な病因学
的因子であることが認識されている。米国特許第4.Z
oo、272号は、豚の赤痢に対する豚の抵抗を増加す
るために、T、hyodysenteriaeの殺した
細胞を含有するワクチンまたはバクテリンの使用を開示
している。
学生物物質(chemobiot 1cs)および抗生
物質の使用により達成されてきた。今日まで、この病気
を抑制するために有効な薬物以外の予防物質は存在して
いない。嫌気性スピロ記す)は豚の赤痢の主要な病因学
的因子であることが認識されている。米国特許第4.Z
oo、272号は、豚の赤痢に対する豚の抵抗を増加す
るために、T、hyodysenteriaeの殺した
細胞を含有するワクチンまたはバクテリンの使用を開示
している。
この先行技術の方法は、バクテリン生成物の活性が比較
的低いために、商業的に受入れられなかった。記載され
た処置のスケジュールは6回の静脈内注射を含む、より
少ない筋肉内注射を含む処置のスケジュールで使用でき
るへクチリンを得ることは望ましいことである。
的低いために、商業的に受入れられなかった。記載され
た処置のスケジュールは6回の静脈内注射を含む、より
少ない筋肉内注射を含む処置のスケジュールで使用でき
るへクチリンを得ることは望ましいことである。
コレステロールに富んだ分画は、ある有機体のための生
育促進剤として有効であることが知られている。ジャー
ナル・オプ・バクテリオロジー(J、Bacterio
l、)Vol、135、N003,818−827ペー
ジ(1978)るコレステロール含有血清分画の使用を
記載している。ジャーナル・才ブ・ゼネラル・マイクロ
バイオロジー(J、Gen、Microbiol。
育促進剤として有効であることが知られている。ジャー
ナル・オプ・バクテリオロジー(J、Bacterio
l、)Vol、135、N003,818−827ペー
ジ(1978)るコレステロール含有血清分画の使用を
記載している。ジャーナル・才ブ・ゼネラル・マイクロ
バイオロジー(J、Gen、Microbiol。
gy)は、トレボネマ・ハイオジセンテリアエ±A且)
、Vol、116.539−543ページ(1980)
の生育におけるUSPコレステロールの使用を記載して
いる。
、Vol、116.539−543ページ(1980)
の生育におけるUSPコレステロールの使用を記載して
いる。
本発明によれば、栄養培地がコレステロールに富んだウ
シ分画を含有することを特徴とする得られた細胞をバク
テリン中において引続いて使用すりを適当な栄養培地中
で生育させる方法が提供される。
シ分画を含有することを特徴とする得られた細胞をバク
テリン中において引続いて使用すりを適当な栄養培地中
で生育させる方法が提供される。
本発明の方法は、T、hyodysenter土aeの
有毒な菌株を用いて実施することができる。有毒な菌株
は典型的な豚の赤痢の感染を生成することのできる菌株
である。2つの特定の菌株(B 204およびB 23
4)はこの目的に有効であることがわかった。これらは
アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション(Am
erican Type Cu1ture
Co11ection)、に受託され、モしてATc
c No、31212(B204)およびATCCN
o、31287 (B234)と表示された。
有毒な菌株を用いて実施することができる。有毒な菌株
は典型的な豚の赤痢の感染を生成することのできる菌株
である。2つの特定の菌株(B 204およびB 23
4)はこの目的に有効であることがわかった。これらは
アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション(Am
erican Type Cu1ture
Co11ection)、に受託され、モしてATc
c No、31212(B204)およびATCCN
o、31287 (B234)と表示された。
T、hyodysenteriae菌株は、子牛胎児血
清または子箕血清、デキストロース、l−システィンM
CI、ビタミンB−12および酵母エキスを補充したト
リブチツク・ソイ・ブロス(Tryptic Soy
Broth) [ディ7 D I+ラボラトリー
ズ(Difco Laboratories)]の混
合物からなる培地中で生育させることができる。本発明
の改良は、T、hyodysenteriae細胞を生
育させるためのこのような培地中にコレステロールに富
んだウシ分画を含めることである。コレステロールに富
んだウシ分画は前記培地の容量に基づいて好ましくは1
.0〜2.5容量%の量で存在するが。
清または子箕血清、デキストロース、l−システィンM
CI、ビタミンB−12および酵母エキスを補充したト
リブチツク・ソイ・ブロス(Tryptic Soy
Broth) [ディ7 D I+ラボラトリー
ズ(Difco Laboratories)]の混
合物からなる培地中で生育させることができる。本発明
の改良は、T、hyodysenteriae細胞を生
育させるためのこのような培地中にコレステロールに富
んだウシ分画を含めることである。コレステロールに富
んだウシ分画は前記培地の容量に基づいて好ましくは1
.0〜2.5容量%の量で存在するが。
0.1〜5.0容量%の量で存在することができる。
本発明の方法における使用に適するコレステロールに富
んだウシ分画はいくつかの源から入手可能である。マイ
ルス・ラボラトリーズ・インコーホレーテッド(Mi
les Laboratories、Inc、)のマ
イルスΦサイエンティフィック・ディウ′イジョン(M
ilesScientific Division)
から入手可能でありかつ米国特許第4,290,774
号において開示されかつフレイムされている方法に従っ
てウシ血清から調製されたコレステロール・コンセント
レイト・コード(cholesterol Conc
entrate Code)82−010は有用であ
る。バイオセル・ラボラトリーズ(Biocell
Laboratories)から入手可能であるポビン
・コレステロール・コンセントレイト・リスト(Bov
ineConcentrate Li5t)3200
は、他の有用な物質である。本発明の方法において有用
な好ましいコレステロールに富んだウシ分画は、次の工
程: (a) M状のコレステロールを含有するウシの血漿
または血清あるいはその分画をシリカの吸着剤と接触さ
せてコレステロールを吸着させ、 (b) 吸着されたコレステロールを残りの液状の血
漿または血清から分離し、 (c) 吸着されたコレステロールを凍結しかつ融解
し、 (d) 吸着されたコレステロールをpH9、0〜1
1,5において溶離し、 (e) 溶離されたコレステロール溶液を限外濾過に
より濃縮し、 (f) emされたコレステロール溶液のpHを11
.0〜11.4の範囲内の値に調節し、 (g) 6縮されたコレステロール溶液を順番に炭酸
ナトリウムおよび水に対・して透析し。
んだウシ分画はいくつかの源から入手可能である。マイ
ルス・ラボラトリーズ・インコーホレーテッド(Mi
les Laboratories、Inc、)のマ
イルスΦサイエンティフィック・ディウ′イジョン(M
ilesScientific Division)
から入手可能でありかつ米国特許第4,290,774
号において開示されかつフレイムされている方法に従っ
てウシ血清から調製されたコレステロール・コンセント
レイト・コード(cholesterol Conc
entrate Code)82−010は有用であ
る。バイオセル・ラボラトリーズ(Biocell
Laboratories)から入手可能であるポビン
・コレステロール・コンセントレイト・リスト(Bov
ineConcentrate Li5t)3200
は、他の有用な物質である。本発明の方法において有用
な好ましいコレステロールに富んだウシ分画は、次の工
程: (a) M状のコレステロールを含有するウシの血漿
または血清あるいはその分画をシリカの吸着剤と接触さ
せてコレステロールを吸着させ、 (b) 吸着されたコレステロールを残りの液状の血
漿または血清から分離し、 (c) 吸着されたコレステロールを凍結しかつ融解
し、 (d) 吸着されたコレステロールをpH9、0〜1
1,5において溶離し、 (e) 溶離されたコレステロール溶液を限外濾過に
より濃縮し、 (f) emされたコレステロール溶液のpHを11
.0〜11.4の範囲内の値に調節し、 (g) 6縮されたコレステロール溶液を順番に炭酸
ナトリウムおよび水に対・して透析し。
(h) 透析したコレステロール溶液を限外濾過によ
り50〜3000mg/dlのコレステロール水準にさ
らに濃縮し、 (i) 濃縮されたコレステロール溶液のpHを7.
0−11.0の範囲内の値に調節 し、 (D 濃縮されたコレステロール溶液を50〜100
℃に30分〜24時間加熱し、そして (k) 精製されたコレステロールに富んだウシ分画
をそれから回収する、 からなる方法によって調製される。
り50〜3000mg/dlのコレステロール水準にさ
らに濃縮し、 (i) 濃縮されたコレステロール溶液のpHを7.
0−11.0の範囲内の値に調節 し、 (D 濃縮されたコレステロール溶液を50〜100
℃に30分〜24時間加熱し、そして (k) 精製されたコレステロールに富んだウシ分画
をそれから回収する、 からなる方法によって調製される。
この特定の分画およびその生産の方法は、本出願人によ
る本願と同時に提出された同時係属米国特許出願第73
2.856号において記載されかつフレイムされている
。
る本願と同時に提出された同時係属米国特許出願第73
2.856号において記載されかつフレイムされている
。
コレステロールに富んだ分画の生産に使用するための出
発物質は、コレステロールを含有するウシの任意の血漿
または血清またはその分画であることができる。好まし
い出発物質は、ウシ血清である。出発物質が血清である
とき、可溶性塩、例えば、クエン酸ナトリウムを0.2
5〜1.0のイオン強度に添加することが好ましい。他
の適当な塩は、塩化ナトリウム、リン酸ナトリウム、リ
ン酸カリウム、硫酸アンモニウムおよび硫酸ナトリウム
を包含する。可溶性塩をLの濃度に添加すると、引続く
シリカ吸着工程において吸着されるコレステロールの量
は増加する。ウシ血漿は、通常、抗強固剤としてクエン
酸塩を添加することを包含する方法により集められる。
発物質は、コレステロールを含有するウシの任意の血漿
または血清またはその分画であることができる。好まし
い出発物質は、ウシ血清である。出発物質が血清である
とき、可溶性塩、例えば、クエン酸ナトリウムを0.2
5〜1.0のイオン強度に添加することが好ましい。他
の適当な塩は、塩化ナトリウム、リン酸ナトリウム、リ
ン酸カリウム、硫酸アンモニウムおよび硫酸ナトリウム
を包含する。可溶性塩をLの濃度に添加すると、引続く
シリカ吸着工程において吸着されるコレステロールの量
は増加する。ウシ血漿は、通常、抗強固剤としてクエン
酸塩を添加することを包含する方法により集められる。
この塩の濃度は通常吸着1程のために1分であり、そし
て追加の塩は不必要である。
て追加の塩は不必要である。
血漿または血清の出発物質を0〜50℃、好ましくは2
0〜25℃の温度に維持する。pHは5.5〜9.0、
好ましくは7.0〜8.0の範囲に調節する。
0〜25℃の温度に維持する。pHは5.5〜9.0、
好ましくは7.0〜8.0の範囲に調節する。
本発明において有用なシリカあ吸着剤は臨界の組成をも
たない。適当なシリカ物質はカポット・コーポレーショ
ン(cabot Corporation)から商標
カポシル(cabosil)で入丁可能な極微小シリカ
およびカリ−・カンパニー(cary Compan
y)から商標エーロ’yル(Ae r o s i 1
)380で入手可能な粉末状シリカである。このシリカ
は液状の血漿または血清に1〜50/l、好ましくは1
0〜20g/lの量で添加される。
たない。適当なシリカ物質はカポット・コーポレーショ
ン(cabot Corporation)から商標
カポシル(cabosil)で入丁可能な極微小シリカ
およびカリ−・カンパニー(cary Compan
y)から商標エーロ’yル(Ae r o s i 1
)380で入手可能な粉末状シリカである。このシリカ
は液状の血漿または血清に1〜50/l、好ましくは1
0〜20g/lの量で添加される。
液状の血漿または血清中のシリカの懸濁液は次いで約3
〜4時間混合する。次いで吸着したコレステロールを含
有するシリカを残りの液状の血漿または血清から好まし
くは遠心により分離し、モして液相を廃棄する。次いで
のシリカのペーストを一20℃で凍結し、そしてこの温
度に少なくとも1週間、好ましくは2週間保持する。次
いで、凍結したペーストを室温(約20〜25℃)に2
4〜48時間融解する。融解したペーストから絞り出さ
れる液体を廃棄する。
〜4時間混合する。次いで吸着したコレステロールを含
有するシリカを残りの液状の血漿または血清から好まし
くは遠心により分離し、モして液相を廃棄する。次いで
のシリカのペーストを一20℃で凍結し、そしてこの温
度に少なくとも1週間、好ましくは2週間保持する。次
いで、凍結したペーストを室温(約20〜25℃)に2
4〜48時間融解する。融解したペーストから絞り出さ
れる液体を廃棄する。
シリカのペーストを洗浄して存在するかも知れない望ま
しくない蛋白質を除去する。これは約0.15モルの塩
化ナトリウムを含有する塩水溶液中にペーストを懸濁さ
せることによって達成される。他の有用な塩は酢酸ナト
リウムおよびリン酸ナトリウムである。この塩溶液はペ
ーストの重量の約2倍の量で使用する。ペーストを液体
から分離する。塩溶液を使用するこの洗浄手順は好まし
くは2回反復して吸蔵された蛋白質を除去する。
しくない蛋白質を除去する。これは約0.15モルの塩
化ナトリウムを含有する塩水溶液中にペーストを懸濁さ
せることによって達成される。他の有用な塩は酢酸ナト
リウムおよびリン酸ナトリウムである。この塩溶液はペ
ーストの重量の約2倍の量で使用する。ペーストを液体
から分離する。塩溶液を使用するこの洗浄手順は好まし
くは2回反復して吸蔵された蛋白質を除去する。
洗浄されたペーストを約2容量の脱イオン水または蒸留
水中に懸濁させ、そしてpHを9.0〜11.5、好ま
しくは10.4〜1O06に適当なアルカリ性物質、例
えば、水性水酸化ナトリウムの添加により調節する。こ
の懸濁液を約2詩間攪拌し、その間pHを上のアルカリ
性物質の周期的添加により所望水準に維持する。この処
理は所望のコレステロール分画をシリカから溶離する。
水中に懸濁させ、そしてpHを9.0〜11.5、好ま
しくは10.4〜1O06に適当なアルカリ性物質、例
えば、水性水酸化ナトリウムの添加により調節する。こ
の懸濁液を約2詩間攪拌し、その間pHを上のアルカリ
性物質の周期的添加により所望水準に維持する。この処
理は所望のコレステロール分画をシリカから溶離する。
次いで、懸濁液を12〜24時間、好ましくは12〜1
8時間沈降させる。コレステロール水準有する上澄み液
をさらに処理するためサイホンで取り出す。所望のコレ
ステロールに富んだ分画の生産のためのこの最初の溶離
のみを使用することが好ましい。しかし、上のアルカリ
性懸濁、溶離。
8時間沈降させる。コレステロール水準有する上澄み液
をさらに処理するためサイホンで取り出す。所望のコレ
ステロールに富んだ分画の生産のためのこの最初の溶離
のみを使用することが好ましい。しかし、上のアルカリ
性懸濁、溶離。
攪拌および沈降の工程を2回以上反復し、そして第1の
溶離物質とともに第2および第3の溶離からの@濁液を
プールすることが可能である。シリカを廃棄する。
溶離物質とともに第2および第3の溶離からの@濁液を
プールすることが可能である。シリカを廃棄する。
コレステロール溶液を濾過および遠心により清澄にして
微量のシリカを除去し、次いでその最初の体積の15〜
50%、好ましくは20%に限外濾過技術により濃縮す
る。PHはアルカリの添加により11.0〜11.4の
範囲の値、好ましくはpH11,2にWJmする。これ
は引続く除去のために存在するかも知れない残留シリカ
の可溶化を促進する。
微量のシリカを除去し、次いでその最初の体積の15〜
50%、好ましくは20%に限外濾過技術により濃縮す
る。PHはアルカリの添加により11.0〜11.4の
範囲の値、好ましくはpH11,2にWJmする。これ
は引続く除去のために存在するかも知れない残留シリカ
の可溶化を促進する。
次いで、コレステロールの濃縮物を処理して存在する塩
の実質的にすべてを除去する。好ましい塩の除去技術は
順次に炭酸ナトリウムおよび水に対して透析することで
ある。この塩の除去工程は引続く熱処理工程のためのに
重要である。塩の有意な量の除去は加熱時のコレステロ
ールの望ましくない変性を起こすであろう。
の実質的にすべてを除去する。好ましい塩の除去技術は
順次に炭酸ナトリウムおよび水に対して透析することで
ある。この塩の除去工程は引続く熱処理工程のためのに
重要である。塩の有意な量の除去は加熱時のコレステロ
ールの望ましくない変性を起こすであろう。
透析したコレステロールの溶液を限外濾過により50〜
3000mg/d l、好ましくは1000〜2000
m g / d Iのコレステロール水準に濃縮する
。
3000mg/d l、好ましくは1000〜2000
m g / d Iのコレステロール水準に濃縮する
。
次いで、濃縮したコレステロールの溶液のpHを7.0
〜11.0の生育、好ましくはpH7。
〜11.0の生育、好ましくはpH7。
6に調節して、それを生育培地中における引続く使用に
最も適合するようにさせる。
最も適合するようにさせる。
この溶液を50〜100℃、好ましくは80℃に20分
〜24時間、好ましくは30分〜60分間加熱して、コ
レステロールの貯蔵安定性を増加する。この溶液を室温
に冷却し、そして滅菌症過しテ精製されたコレステロー
ルに富んだ分画を回収する。この生産物は純粋なコレス
テロールではなく、それは生産プロセスを通過した少量
の同定されない物質と混合物している。
〜24時間、好ましくは30分〜60分間加熱して、コ
レステロールの貯蔵安定性を増加する。この溶液を室温
に冷却し、そして滅菌症過しテ精製されたコレステロー
ルに富んだ分画を回収する。この生産物は純粋なコレス
テロールではなく、それは生産プロセスを通過した少量
の同定されない物質と混合物している。
純粋なコレステロールは、コレステロールに富んだウシ
分画により達成される方法でT、hy。
分画により達成される方法でT、hy。
dysenteriaeの生育に適切に影響を及ぼさな
いので、本発明における使用に不適当である。
いので、本発明における使用に不適当である。
T、hyodysenteriaeの細胞は、コレステ
ロールに富んだウシ分画を含有する培地中でこの分野に
おいてよく知られた条件下に生育させる。次いで、得ら
れる細胞をよ〈知られた方法においてホルマリン、メル
チオレイト(merthiolate)またはベーター
プロピオラクトンのような物質を使用して殺す0次いで
、細胞を収穫し、そして適当な担体媒質中に懸濁させて
所望のへクチリンを生産する。
ロールに富んだウシ分画を含有する培地中でこの分野に
おいてよく知られた条件下に生育させる。次いで、得ら
れる細胞をよ〈知られた方法においてホルマリン、メル
チオレイト(merthiolate)またはベーター
プロピオラクトンのような物質を使用して殺す0次いで
、細胞を収穫し、そして適当な担体媒質中に懸濁させて
所望のへクチリンを生産する。
へクチリンの活性は、アジュバントの使用によりさらの
増大することができる。本発明の方法により生産される
T、hyodysenteria互細胞とともに使用す
るために好ましいアジュバントは、米国特許第3,91
9,411号において開示されかつフレイムされている
ポリアリルサツカリド(polyallyl 5ac
charide)で架橋されたアクリル酸ポリマーと特
定の乳剤系との組み合わせである。このようなアジュバ
ントは、商標HABLOGENでマイルス・ラボラトリ
ーズ番インコーポレーテッド(Miles Labo
ratories、Inc、)のベイベット・ディウ゛
イジョン(BayvetD i v i s i o
n)から市販されている。
増大することができる。本発明の方法により生産される
T、hyodysenteria互細胞とともに使用す
るために好ましいアジュバントは、米国特許第3,91
9,411号において開示されかつフレイムされている
ポリアリルサツカリド(polyallyl 5ac
charide)で架橋されたアクリル酸ポリマーと特
定の乳剤系との組み合わせである。このようなアジュバ
ントは、商標HABLOGENでマイルス・ラボラトリ
ーズ番インコーポレーテッド(Miles Labo
ratories、Inc、)のベイベット・ディウ゛
イジョン(BayvetD i v i s i o
n)から市販されている。
上の方法で生産されたT、hyod 5enteri
aeバクテリンは3週間の間隔でわずかに2回の投手で
筋肉内に注射して、豚の赤痢に対する豚の抵抗を有意に
増加することができることが発見された。
aeバクテリンは3週間の間隔でわずかに2回の投手で
筋肉内に注射して、豚の赤痢に対する豚の抵抗を有意に
増加することができることが発見された。
次の実施例により、本発明をさらに説明する。
実施例1
コレステロールに富んだウシ分画は、次のようにして調
製した。新鮮なウシ血清を20〜25℃の温度にし、そ
して14.7g/Iのクエン酸ナトリウム(0,5の血
清イオン強度)を添加した。生ずる溶液を30分間攪拌
し、そしてpHを適当量のINの水酸化ナトリウムの添
加により7.0とした。微細なシリカを10 g/ 1
の量で添加し、そして生ずるスラリーを室温で3時1l
Il攪拌した。吸着した物質を含有するシリカを次いで
液相かも遠心により分離し、そして液体を廃棄した。シ
リカのペーストを一20℃で凍結し、そしてその温度で
2週間貯蔵した0次いで、凍結したペーストを室温で4
8時間融解した。絞り出された液体を廃棄した0次いで
シリカのペーストを2容量の0.85%(重量/容量基
準)の塩化ナトリウム水溶液(0,146モルのNaC
l)中に懸濁させた。それを15分間おだやかに混合し
、そして少なくとも3時間沈降させた。J:澄み液をサ
イホンで除去し、そして廃棄した。この洗浄工程を2回
反復した0次いで、洗浄したペーストを2容量の脱イオ
ン水中にF!濁させた。PHをINの水酸化ナトリウム
の添加により10.5に調節した。生ずる懸濁液を室温
で2時間攪拌し、その間pHヲ10 、5ニJWjli
L;/:、 J!ji拌を停止L、モしてL澄み液を1
8時間沈降させた。E澄み液はサイホンで取り出し、そ
して濾過および遠心により清澄にした。シリカを廃棄し
た6次いで清澄にした溶液を限外濾過によりその最初の
体積の20%に濃縮した。濃縮した物質のpHはINの
水酸化ナトリウムの添加により11.2に調節した。
製した。新鮮なウシ血清を20〜25℃の温度にし、そ
して14.7g/Iのクエン酸ナトリウム(0,5の血
清イオン強度)を添加した。生ずる溶液を30分間攪拌
し、そしてpHを適当量のINの水酸化ナトリウムの添
加により7.0とした。微細なシリカを10 g/ 1
の量で添加し、そして生ずるスラリーを室温で3時1l
Il攪拌した。吸着した物質を含有するシリカを次いで
液相かも遠心により分離し、そして液体を廃棄した。シ
リカのペーストを一20℃で凍結し、そしてその温度で
2週間貯蔵した0次いで、凍結したペーストを室温で4
8時間融解した。絞り出された液体を廃棄した0次いで
シリカのペーストを2容量の0.85%(重量/容量基
準)の塩化ナトリウム水溶液(0,146モルのNaC
l)中に懸濁させた。それを15分間おだやかに混合し
、そして少なくとも3時間沈降させた。J:澄み液をサ
イホンで除去し、そして廃棄した。この洗浄工程を2回
反復した0次いで、洗浄したペーストを2容量の脱イオ
ン水中にF!濁させた。PHをINの水酸化ナトリウム
の添加により10.5に調節した。生ずる懸濁液を室温
で2時間攪拌し、その間pHヲ10 、5ニJWjli
L;/:、 J!ji拌を停止L、モしてL澄み液を1
8時間沈降させた。E澄み液はサイホンで取り出し、そ
して濾過および遠心により清澄にした。シリカを廃棄し
た6次いで清澄にした溶液を限外濾過によりその最初の
体積の20%に濃縮した。濃縮した物質のpHはINの
水酸化ナトリウムの添加により11.2に調節した。
次いで、濃縮した物質のpHを6容量の0.01モルの
炭酸ナトリウムに対してpH11,2において透析した
。次いで、それを6容積の蒸留水に対して透析した。こ
の濃縮物のコレステロール水準を既知の技術により分析
し、そしてさらに1000m、g/cflのコレステロ
ール水準に限外濾過により濃縮した。次いで、pHをI
Nの塩酸の添加により7.6に調節し、そして得られる
溶液を80℃に1時間加熱した0次いで、この溶液な室
温に冷却し、滅菌濾過した0次いで、濾過した物質を精
製したコレステロールに富んだ分画として回収した。
炭酸ナトリウムに対してpH11,2において透析した
。次いで、それを6容積の蒸留水に対して透析した。こ
の濃縮物のコレステロール水準を既知の技術により分析
し、そしてさらに1000m、g/cflのコレステロ
ール水準に限外濾過により濃縮した。次いで、pHをI
Nの塩酸の添加により7.6に調節し、そして得られる
溶液を80℃に1時間加熱した0次いで、この溶液な室
温に冷却し、滅菌濾過した0次いで、濾過した物質を精
製したコレステロールに富んだ分画として回収した。
T、hyodysenteriae菌株ATCCNo、
31212(7)凍結した種を、13m1のトリブチツ
ク・ンイ・ブロス(TrypticSoy Brot
h)[デ47 D 11ラボラトリーズ(Dffco
Laboratories)、27.5g/ l]
、10%の子牛胎児血清、0.5%のデキストロース、
0.05%の1−システィンHCIおよび0.25mc
g/mlのビタミンB−12を含有するガラス管中に接
種した。このような百分率は重量/容量基準に基いた0
次いで、ガラス管をシールし、そして10容敲%の水素
、80容量%の窒素、lO容量%の二酸化炭素を含有す
る嫌気性雰囲気中↑37℃において72時間インキュベ
ーションした。次いで、得られる種を同一の培地を含有
する2本の管に移し、それらを37℃で24時間同一条
件下にインキュベーションした。これらの管の内容物を
プールした。次いで、プールした活性な種培養物の7m
lの部分を、各々が200m1のトリブチツク・ソイ・
ブロス(Tryptic Soy Broth)、
1%の酵母エキス、5%の子羊血清。
31212(7)凍結した種を、13m1のトリブチツ
ク・ンイ・ブロス(TrypticSoy Brot
h)[デ47 D 11ラボラトリーズ(Dffco
Laboratories)、27.5g/ l]
、10%の子牛胎児血清、0.5%のデキストロース、
0.05%の1−システィンHCIおよび0.25mc
g/mlのビタミンB−12を含有するガラス管中に接
種した。このような百分率は重量/容量基準に基いた0
次いで、ガラス管をシールし、そして10容敲%の水素
、80容量%の窒素、lO容量%の二酸化炭素を含有す
る嫌気性雰囲気中↑37℃において72時間インキュベ
ーションした。次いで、得られる種を同一の培地を含有
する2本の管に移し、それらを37℃で24時間同一条
件下にインキュベーションした。これらの管の内容物を
プールした。次いで、プールした活性な種培養物の7m
lの部分を、各々が200m1のトリブチツク・ソイ・
ブロス(Tryptic Soy Broth)、
1%の酵母エキス、5%の子羊血清。
0.5%のデキストロース、0.05%の1−システィ
yHclおよび0.25mcg/mlのビタミンB−1
2を含有する2本の500m1容のびんの各々に添加し
た。このような百分率は重量/容置基準に基いた0次い
で、びんの内容物を記載する嫌気性雰囲気中で37℃に
おいて、濁るまで(薬24時HR) 、 インキュベー
ションした。
yHclおよび0.25mcg/mlのビタミンB−1
2を含有する2本の500m1容のびんの各々に添加し
た。このような百分率は重量/容置基準に基いた0次い
で、びんの内容物を記載する嫌気性雰囲気中で37℃に
おいて、濁るまで(薬24時HR) 、 インキュベー
ションした。
次いで生ずる膨張した種培養物を2つの部分に分け、そ
して各部分を単独で使用して、各々が7リツトルのトリ
ブチツク・ソイ・ブロス(T r yptic So
y Broth)、1%の酵母エキス、3%の子羊血
清、1%のデキストロース、0.05%の1−システィ
ンHCIおよび0.25mcg/mlのビタミyB−1
2を含有する2つの14リツトル容のパイロット発酵器
の一方に接種した。このような百分率は重量/容量基準
に基いた。発酵器の一方に2.5容量%の上のようにm
Wしたコレステロールに富んだウシ分画をさらに補充し
た0次いで、両者の発酵器を37℃において44時間玉
の嫌気性雰囲気下にインキュベーションした。pHを5
Nの水酸化ナトリウムの周期的添加により6.5に調節
した。
して各部分を単独で使用して、各々が7リツトルのトリ
ブチツク・ソイ・ブロス(T r yptic So
y Broth)、1%の酵母エキス、3%の子羊血
清、1%のデキストロース、0.05%の1−システィ
ンHCIおよび0.25mcg/mlのビタミyB−1
2を含有する2つの14リツトル容のパイロット発酵器
の一方に接種した。このような百分率は重量/容量基準
に基いた。発酵器の一方に2.5容量%の上のようにm
Wしたコレステロールに富んだウシ分画をさらに補充し
た0次いで、両者の発酵器を37℃において44時間玉
の嫌気性雰囲気下にインキュベーションした。pHを5
Nの水酸化ナトリウムの周期的添加により6.5に調節
した。
上のインキュベーションが完結したとき、適当な試料を
各発酵器から取り、次いで発酵器の内容物を0.15容
罎%のホルマリンで処理して細胞を不活性化した。細胞
の試料を顕微鏡検査し、合計の細胞の計数をペトロッフ
ーハウサー(Petroff−Hauser)計数室内
で測定し、そして生存しうる細胞の計数を新しく注いだ
5%のウシ血液寒天平板上で系統的に希釈することによ
って決定した。これらの血液寒天平板を37℃において
50容量%の水素および50容量%あ二酸化炭素の嫌気
性雰囲気中で4日間インキュベーションした。T、hy
odysenteriaeのコロニーを溶血の個々のゾ
ーンとして観察した。これらの実験の結果を表1に記載
する。
各発酵器から取り、次いで発酵器の内容物を0.15容
罎%のホルマリンで処理して細胞を不活性化した。細胞
の試料を顕微鏡検査し、合計の細胞の計数をペトロッフ
ーハウサー(Petroff−Hauser)計数室内
で測定し、そして生存しうる細胞の計数を新しく注いだ
5%のウシ血液寒天平板上で系統的に希釈することによ
って決定した。これらの血液寒天平板を37℃において
50容量%の水素および50容量%あ二酸化炭素の嫌気
性雰囲気中で4日間インキュベーションした。T、hy
odysenteriaeのコロニーを溶血の個々のゾ
ーンとして観察した。これらの実験の結果を表1に記載
する。
表1
生存しう
合計の細 る細胞の
培地 題簿」l東五−胞の計数 計数コレステ ゆ
るいコイル 1.3X 3.7Xロ一ル分画 状:比
較的に to9/ 10’/を含まず 長く薄い壁
の ml ml細胞;全体的 に不活性 コレステ 緊密なコイル 2.6X 1.4Xロ一ル
分画 状;より短 109 / 109 /を含む
く、より厚い ml ml壁の細胞;活 性 上のデータから理解できるように、コレステロールに富
んだウシ分画の存在は合計の細胞の計数を二倍にし、生
存しうる細胞の計数を100倍増加させ、そして細胞の
形態学に対して陽性の作用を示した。
るいコイル 1.3X 3.7Xロ一ル分画 状:比
較的に to9/ 10’/を含まず 長く薄い壁
の ml ml細胞;全体的 に不活性 コレステ 緊密なコイル 2.6X 1.4Xロ一ル
分画 状;より短 109 / 109 /を含む
く、より厚い ml ml壁の細胞;活 性 上のデータから理解できるように、コレステロールに富
んだウシ分画の存在は合計の細胞の計数を二倍にし、生
存しうる細胞の計数を100倍増加させ、そして細胞の
形態学に対して陽性の作用を示した。
実施例2
次いで、との実施例1に記載するように調製したT、h
yodysenteriaeATCCNo、31212
種培養物を使用して、各々が200m1のトリブチツク
・ソイ・ブロス(Tryptic Soy Bro
th)を1%の酵母エキス、5%の子羊血清、0.05
%の1−システィンHc1および0.25mcg/ml
のビタミンB−12と混合して含有する2本の500
m l容のびんの各々に接種した。このような百分率は
重量/容量2&準に基いた。びんの1つ(対照)は、0
.5容量%の実施例1に記載したようにして調製したコ
レステロールに富んだウシ分画を含有した。第2のびん
は、0.5容量%のマイルス・ラボラトリーズ・イ〉′
コーホレーテッド(MiIes Laborator
ies、Inc、)のコレステロール・コンセントレイ
ト・コード(cholesterol Concen
trate Code)82−010を含有した。第
3のびんは、2.5容量%のバイオセル・ラボラトリー
ズ(Biocell LaboratorieS)の
ポビン・コレステロール・コンセントレイト・リスト(
Bovine Concentrate Li5t
)3200を含有した。次いで、これらの接種したびん
を10容量%の水素、80容量%の窒素、10容量%の
二酸化炭素を含有する嫌気性雰囲気中で37℃において
38時間インキュベーションした。びんの内容物を2N
水酸化ナトリウムの添加によりpH7,0に2時間およ
び31時間調節した。各びんから°の合計の細胞の計数
をペトロッフーハウサ−(Petroff−Hause
r)計数室内で測定した。結果を表2に示す。
yodysenteriaeATCCNo、31212
種培養物を使用して、各々が200m1のトリブチツク
・ソイ・ブロス(Tryptic Soy Bro
th)を1%の酵母エキス、5%の子羊血清、0.05
%の1−システィンHc1および0.25mcg/ml
のビタミンB−12と混合して含有する2本の500
m l容のびんの各々に接種した。このような百分率は
重量/容量2&準に基いた。びんの1つ(対照)は、0
.5容量%の実施例1に記載したようにして調製したコ
レステロールに富んだウシ分画を含有した。第2のびん
は、0.5容量%のマイルス・ラボラトリーズ・イ〉′
コーホレーテッド(MiIes Laborator
ies、Inc、)のコレステロール・コンセントレイ
ト・コード(cholesterol Concen
trate Code)82−010を含有した。第
3のびんは、2.5容量%のバイオセル・ラボラトリー
ズ(Biocell LaboratorieS)の
ポビン・コレステロール・コンセントレイト・リスト(
Bovine Concentrate Li5t
)3200を含有した。次いで、これらの接種したびん
を10容量%の水素、80容量%の窒素、10容量%の
二酸化炭素を含有する嫌気性雰囲気中で37℃において
38時間インキュベーションした。びんの内容物を2N
水酸化ナトリウムの添加によりpH7,0に2時間およ
び31時間調節した。各びんから°の合計の細胞の計数
をペトロッフーハウサ−(Petroff−Hause
r)計数室内で測定した。結果を表2に示す。
入ヱ
旦生遣
培地の補充物 合計の細胞の計数好ましいコレ
ステロールに 2.5X109/ml富んだ分画
(対照)
コレステロ−
ル・コンセン
ト し イ ト ・ 2.7X109/m
lコード82− ポビン・コレ ステロール・ コンセントレ 3.0X109./mlイト・リス
ト Lのデータから理解できるように、種々の源からのコレ
ステロールに富んだウシ分画を使用して望ましく高い細
胞計数c7)T、hyodysenteriaeを生産
することができる。
lコード82− ポビン・コレ ステロール・ コンセントレ 3.0X109./mlイト・リス
ト Lのデータから理解できるように、種々の源からのコレ
ステロールに富んだウシ分画を使用して望ましく高い細
胞計数c7)T、hyodysenteriaeを生産
することができる。
実施例3
好ましいコレステロールに富んだ分画を補充した培地と
ともにT、hyOdysenteria旦菌株ATCC
No−31287を使用して、実施例1のf順を全体的
に反復して、高い濃度の細胞を生産した。
ともにT、hyOdysenteria旦菌株ATCC
No−31287を使用して、実施例1のf順を全体的
に反復して、高い濃度の細胞を生産した。
実施例4
実施例1に記載する方法において生育培地中に好ましい
コレステロールに富んだ分画を使用して調製した殺した
T、hyodysenteria旦廁胞と、米国特許第
3,919,411号に記載する10容量%のHABL
OGENアジュバントおよび1:10,000のメルチ
オレイトと混合することによって、ワクチンまたはバク
テリンを調製した。このワクチンは2xl 09m胞/
mlを含有した。次いで、このワクチンを5種類の別々
の対抗(challenge)研究において使用して、
このワクチンの豚の赤痢に対する作用を決定した。ワク
チン接種/対抗研究(challenge 5tud
ies)の各々において。
コレステロールに富んだ分画を使用して調製した殺した
T、hyodysenteria旦廁胞と、米国特許第
3,919,411号に記載する10容量%のHABL
OGENアジュバントおよび1:10,000のメルチ
オレイトと混合することによって、ワクチンまたはバク
テリンを調製した。このワクチンは2xl 09m胞/
mlを含有した。次いで、このワクチンを5種類の別々
の対抗(challenge)研究において使用して、
このワクチンの豚の赤痢に対する作用を決定した。ワク
チン接種/対抗研究(challenge 5tud
ies)の各々において。
豚を豚の赤痢の経歴をもたない群れから入手し、そして
これらの豚は雌雄混合のものであり、そして一般にヨウ
クシャ−(Yo rkshi re)、ハンプシャー(
Hamshire)またはクロス(cr o s s)
の種であった。最初のワクチン接種の時、豚は離乳後少
なくとも3週間でありかつ体重88.9〜101.6k
g(35〜40ボンド)のものであった。
これらの豚は雌雄混合のものであり、そして一般にヨウ
クシャ−(Yo rkshi re)、ハンプシャー(
Hamshire)またはクロス(cr o s s)
の種であった。最初のワクチン接種の時、豚は離乳後少
なくとも3週間でありかつ体重88.9〜101.6k
g(35〜40ボンド)のものであった。
すべてのワクチン接種/対抗の研究は、ワクチン接種し
た豚および対照の豚を分離することのできる隔離設備に
おいて実施した。豚に抗生物質を含有しない蛋白質の1
0分の食物の配給量(grower ration)
をかえた。対抗前に、豚をレフタル・スワブ(rect
al s w ab)し、そして適当な単離培地」
二で試験後、T。
た豚および対照の豚を分離することのできる隔離設備に
おいて実施した。豚に抗生物質を含有しない蛋白質の1
0分の食物の配給量(grower ration)
をかえた。対抗前に、豚をレフタル・スワブ(rect
al s w ab)し、そして適当な単離培地」
二で試験後、T。
hyodysenteriaeおよびサルモネラ(Sa
lmone I Ia)種を含有り、ナイコトカ示され
た。
lmone I Ia)種を含有り、ナイコトカ示され
た。
実施例1に類似するが、最終の細胞を殺さないで生育さ
せたT、hyodysenteriae菌株ATCCN
o、31212または31287で胃内で豚を対抗させ
た。対抗投与量は10”〜109の有機体を含有するよ
うに希釈された100m1の活性培養物から成っており
、これを個々の豚に胃管を経由して48時間の断食後に
投与した。
せたT、hyodysenteriae菌株ATCCN
o、31212または31287で胃内で豚を対抗させ
た。対抗投与量は10”〜109の有機体を含有するよ
うに希釈された100m1の活性培養物から成っており
、これを個々の豚に胃管を経由して48時間の断食後に
投与した。
各対抗した豚を毎日の基準で対抗後28日の観察期間に
わたって観察した。臨床的病気の開始後、赤痢の豚をレ
フタル・スワブ(rectalswab)して病原因子
を単離した。スワブ(swab)をスペクチノマイシン
(Spectinomycin)血液寒天モ板上で継代
培養し、40℃で4〜6日間インキュベーションし、モ
して溶血の寒天平板をスピロヘータの存在についてm微
鏡検査することによって、T、hyodysenter
iaeの感染を確認した8、5種類の研究の間に死んだ
豚の各々を剖検した。巨視的な病変を記録し、そしてレ
フタル・スワブ(rectal swab)を結腸か
ら取り、七のように車代培養した。
わたって観察した。臨床的病気の開始後、赤痢の豚をレ
フタル・スワブ(rectalswab)して病原因子
を単離した。スワブ(swab)をスペクチノマイシン
(Spectinomycin)血液寒天モ板上で継代
培養し、40℃で4〜6日間インキュベーションし、モ
して溶血の寒天平板をスピロヘータの存在についてm微
鏡検査することによって、T、hyodysenter
iaeの感染を確認した8、5種類の研究の間に死んだ
豚の各々を剖検した。巨視的な病変を記録し、そしてレ
フタル・スワブ(rectal swab)を結腸か
ら取り、七のように車代培養した。
次の臨床学的指数を使用して、対抗に対する個々の豚の
臨床的応答を測定した: 〇−正常 〇−正常 〇−正常1−下痢
1−粘液 l−柔らかい?−赤痢
2−血液およ 1,5−ゆる3−やせた び粘
液 い 4−死にかけた 3−血液 2−流動性5−死
3−木っぽい種々の分析法を使
用して、臨床学的指数を評価し、そして丁に定義する: a) 毎日の臨床学的指数(DCI)−各対抗した豚に
ついての毎日の臨床学的指数 は、3つの上に記載したパラメーター:D(、I=全全
体状態+糞便の組成+糞便b) の稠度 毎日の群の臨床学的指数(I)GCI)−ワクチン接種
した群および対照群についての毎日の群の臨床学的指数
を次式に 従って計算した: × l 0O C) 個々の累積臨床学的指数(ICCI)一対抗後2
8日の期間にわたる各豚についての個々の累積臨床学的
指数は、次のようにして計算した: ΣDCI(対抗後28日の期間) d) 群の累積臨床学的指数(GCCI)−ワクチン接
種した群および対照群についての群の累積臨床学的指数
は、豚の特定の群内でICClをモ均することによって
1すた : 10匹の豚を等しく2つに室の中に分割した。
臨床的応答を測定した: 〇−正常 〇−正常 〇−正常1−下痢
1−粘液 l−柔らかい?−赤痢
2−血液およ 1,5−ゆる3−やせた び粘
液 い 4−死にかけた 3−血液 2−流動性5−死
3−木っぽい種々の分析法を使
用して、臨床学的指数を評価し、そして丁に定義する: a) 毎日の臨床学的指数(DCI)−各対抗した豚に
ついての毎日の臨床学的指数 は、3つの上に記載したパラメーター:D(、I=全全
体状態+糞便の組成+糞便b) の稠度 毎日の群の臨床学的指数(I)GCI)−ワクチン接種
した群および対照群についての毎日の群の臨床学的指数
を次式に 従って計算した: × l 0O C) 個々の累積臨床学的指数(ICCI)一対抗後2
8日の期間にわたる各豚についての個々の累積臨床学的
指数は、次のようにして計算した: ΣDCI(対抗後28日の期間) d) 群の累積臨床学的指数(GCCI)−ワクチン接
種した群および対照群についての群の累積臨床学的指数
は、豚の特定の群内でICClをモ均することによって
1すた : 10匹の豚を等しく2つに室の中に分割した。
5匹のワクチン接種した豚に5mlの前述のワクチンを
3週の間隔で2回筋肉内投与した。5匹のワクチン接種
しない豚を別な室内に保持した。促進剤投与(boos
ter)後2週に、すべての豚を毒性のT、hyody
senteriaeATCCNo、31212で対抗さ
せた。
3週の間隔で2回筋肉内投与した。5匹のワクチン接種
しない豚を別な室内に保持した。促進剤投与(boos
ter)後2週に、すべての豚を毒性のT、hyody
senteriaeATCCNo、31212で対抗さ
せた。
研究NO02
29匹の豚を5室の23匹のワクチン接種した豚および
2室の6匹の対照に分割した。ワクチン接種した豚に5
mlの前述のバクテリ7を3週の間隔で2回筋肉内役ケ
した。対抗は研究No、1に記載するものと同一であっ
た。
2室の6匹の対照に分割した。ワクチン接種した豚に5
mlの前述のバクテリ7を3週の間隔で2回筋肉内役ケ
した。対抗は研究No、1に記載するものと同一であっ
た。
研究NO63
10匹の豚を等しく2つに室の中に分割した。
5匹のワクチン接種した豚に5mlの前述のバクテリ7
を3週の間隔で2回筋肉内投与した。5匹のワクチン接
種しない豚を別の室内に保持した。
を3週の間隔で2回筋肉内投与した。5匹のワクチン接
種しない豚を別の室内に保持した。
促進剤投与後2週に、すべての豚を毒性のエユ1yod
ysenteriaeATCCNo、31287で対抗
させた。
ysenteriaeATCCNo、31287で対抗
させた。
研究N004
46匹の豚を9室の36匹のワクチン接種した豚および
2室の10匹のワクチン接種しない対照に分割した。ワ
クチン接種した豚に5 m lの前述のバクテリ7を3
週の間隔で2回筋肉内投与した。対抗は研究No、3に
記載するものと同一であった。
2室の10匹のワクチン接種しない対照に分割した。ワ
クチン接種した豚に5 m lの前述のバクテリ7を3
週の間隔で2回筋肉内投与した。対抗は研究No、3に
記載するものと同一であった。
研究N015
46匹の豚を9室の36匹のワクチン接種した豚および
2室の10匹のワクチン接種しない対照に分割した。ワ
クチン接種した豚に5 m lの前述の/ヘクテリンを
3週の間隔で2回筋肉内投与した。対抗は研究No、1
に記載するものと同一であった。
2室の10匹のワクチン接種しない対照に分割した。ワ
クチン接種した豚に5 m lの前述の/ヘクテリンを
3週の間隔で2回筋肉内投与した。対抗は研究No、1
に記載するものと同一であった。
5種類の研究は合計105匹のワクチン接種した豚およ
び36匹の対照を含んだ。5種類の研究の結果を表3お
よび4に要約する: 菌株ATCC31212を用いる胃内の対抗後、臨床学
的赤痢はワクチン接種した豚の17゜2%(64匹のう
ち11匹)および対照の豚の71.4%(21匹のうち
15匹)において観察された。これはワクチン接種した
豚のうちの臨床学的赤痢の実際の場合の75.9%の減
少を表わす、対抗後の28日の観測の全期間について計
算した累積臨床学的指数(GCCI)はワクチン接種し
た豚について10.4であり、これに対してワクチン接
種したしない豚について83.2であった。これは臨床
学的指数により測定して合計の臨床学的症候(F痢、赤
痢、やせること、死)の87.5%の減少を表わす、死
はワクチン接種した豚において観察されず、こに対して
21匹の対照のうち5匹は対抗後に死んだ(23,8%
)、臨床学的赤痢の開始はワクチン接種した豚において
遅延され、そして臨床学的病気の期間は減少した。無食
欲は認められるようにワクチン接種した豚において減少
した。
び36匹の対照を含んだ。5種類の研究の結果を表3お
よび4に要約する: 菌株ATCC31212を用いる胃内の対抗後、臨床学
的赤痢はワクチン接種した豚の17゜2%(64匹のう
ち11匹)および対照の豚の71.4%(21匹のうち
15匹)において観察された。これはワクチン接種した
豚のうちの臨床学的赤痢の実際の場合の75.9%の減
少を表わす、対抗後の28日の観測の全期間について計
算した累積臨床学的指数(GCCI)はワクチン接種し
た豚について10.4であり、これに対してワクチン接
種したしない豚について83.2であった。これは臨床
学的指数により測定して合計の臨床学的症候(F痢、赤
痢、やせること、死)の87.5%の減少を表わす、死
はワクチン接種した豚において観察されず、こに対して
21匹の対照のうち5匹は対抗後に死んだ(23,8%
)、臨床学的赤痢の開始はワクチン接種した豚において
遅延され、そして臨床学的病気の期間は減少した。無食
欲は認められるようにワクチン接種した豚において減少
した。
菌株ATCC31287を用いる胃内の対抗後、臨床学
的赤痢はワクチン接種した豚の35゜4%(41匹のう
ち14匹、1匹の豚士)および対照の豚の70.0%(
15匹のうち10匹、1匹の豚士)において観察された
。これはワクチン接種した豚のうちの臨床学的赤痢の実
際の場合の49.4%の減少を表わす、累積臨床学的指
数(GCCI)はワクチン接種した豚について18.6
であり、これに対してワクチン接種したしない豚につい
て73.5であった。これは合計の臨床学的症候の74
.7%の減少を表わす、死はワクチン接種した豚におい
て観察されず、こに対して15匹の対照のうち2匹は対
抗後に死んだ(13,3%)。臨床学的赤痢の開始はワ
クチン接種した豚において有意に遅延され、そして臨床
学的病気の期間は減少した。
的赤痢はワクチン接種した豚の35゜4%(41匹のう
ち14匹、1匹の豚士)および対照の豚の70.0%(
15匹のうち10匹、1匹の豚士)において観察された
。これはワクチン接種した豚のうちの臨床学的赤痢の実
際の場合の49.4%の減少を表わす、累積臨床学的指
数(GCCI)はワクチン接種した豚について18.6
であり、これに対してワクチン接種したしない豚につい
て73.5であった。これは合計の臨床学的症候の74
.7%の減少を表わす、死はワクチン接種した豚におい
て観察されず、こに対して15匹の対照のうち2匹は対
抗後に死んだ(13,3%)。臨床学的赤痢の開始はワ
クチン接種した豚において有意に遅延され、そして臨床
学的病気の期間は減少した。
臨床学的赤痢の病原性因子としてT、hyodsent
eriaeの確認は、スペクチノマイシン血液寒天平板
上のレフタル・スワブ(rectal swab)の
モ板培養後に、すべての場合において達成された。サル
モネラ(Salm。
eriaeの確認は、スペクチノマイシン血液寒天平板
上のレフタル・スワブ(rectal swab)の
モ板培養後に、すべての場合において達成された。サル
モネラ(Salm。
nella)種の選択的培地J−の同時の平板培養は陰
性の結果を与えた。
性の結果を与えた。
死んだ豚の結腸の内容物は血液を含みかつ水っぽく、そ
して結腸自体は総体的に炎症しかつ絨毛を欠いていた6
剖検時に内壁から取ったレフタル・スワブ(recta
l swab)は、T、hyodysenteria
eにツイテ陽性でありかつサルモネラ(Salmone
lla)種について陰性であった。対抗後28日に保護
したワクチン接種した豚から取ったレクタルΦスワブ(
rectal swab)は、スペクチノマイシン血
液寒天平板上で42℃において継代培養後、すべての場
合において陰性であった。
して結腸自体は総体的に炎症しかつ絨毛を欠いていた6
剖検時に内壁から取ったレフタル・スワブ(recta
l swab)は、T、hyodysenteria
eにツイテ陽性でありかつサルモネラ(Salmone
lla)種について陰性であった。対抗後28日に保護
したワクチン接種した豚から取ったレクタルΦスワブ(
rectal swab)は、スペクチノマイシン血
液寒天平板上で42℃において継代培養後、すべての場
合において陰性であった。
すべての141匹のワクチン接種した豚および対照の豚
を考慮すると、5種類の対抗研究を通して臨床学的応答
の要約する表5を構成することができる。105匹のワ
クチン接種した豚のうち25.5匹は臨床学的赤痢を発
現しく24.3%)、これに対して36匹のワクチン接
種しない豚のうちの25.5匹は臨床学的赤痢を発現し
た(70.8%)。これはすべてのワクチン接種した豚
のうちの臨床学的赤痢の65.7%の減少を表わす。3
6匹の対照の豚の7匹は対抗後に死に(19,4%)、
これに対してワクチン接種した豚は死ななかった。すべ
ての105匹のワクチン接種した豚についての群の累積
臨床学的指数は13.6であり、そして36匹のワクチ
ン接種しない豚についてのGCCIは79.2であった
。これはすべてのワクチン接種した豚のうちの合計の臨
床学的症候(下痢、赤痢、やせること、死)の82.8
%の減少を表わす。
を考慮すると、5種類の対抗研究を通して臨床学的応答
の要約する表5を構成することができる。105匹のワ
クチン接種した豚のうち25.5匹は臨床学的赤痢を発
現しく24.3%)、これに対して36匹のワクチン接
種しない豚のうちの25.5匹は臨床学的赤痢を発現し
た(70.8%)。これはすべてのワクチン接種した豚
のうちの臨床学的赤痢の65.7%の減少を表わす。3
6匹の対照の豚の7匹は対抗後に死に(19,4%)、
これに対してワクチン接種した豚は死ななかった。すべ
ての105匹のワクチン接種した豚についての群の累積
臨床学的指数は13.6であり、そして36匹のワクチ
ン接種しない豚についてのGCCIは79.2であった
。これはすべてのワクチン接種した豚のうちの合計の臨
床学的症候(下痢、赤痢、やせること、死)の82.8
%の減少を表わす。
5種類の個々の研究からのワクチン接種/対抗の結果を
考慮すると、T、hyodysenteriaeバクテ
リンは、豚の赤痢の予防の条件下で表面するとき、明確
な効能の程度を示であろうと結論することができる。
考慮すると、T、hyodysenteriaeバクテ
リンは、豚の赤痢の予防の条件下で表面するとき、明確
な効能の程度を示であろうと結論することができる。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1、栄養培地がコレステロールに富んだウシ分画を含有
することを特徴とする得られた細胞をバクテリン中にお
いて引続いて使用するために¥トレポネマ・ハイオジセ
ンテリアエ¥(¥Treponema hyodyse
nteriae¥)を適当な栄養培地中で生育させる方
法。 2、コレステロールに富んだウシ分画が、次の工程: (a)液状のコレステロールを含有するウシの血漿また
は血清あるいはその分画をシリカの吸着剤と接触させて
コレステロールを吸着させ、 (b)吸着されたコレステロールを残りの液状の血漿ま
たは血清から分離し、 (c)吸着されたコレステロールを凍結しかつ融解し、 (d)吸着されたコレステロールをpH9.0〜11.
5において溶離し、 (e)溶離されたコレステロール溶液を限外濾過により
濃縮し、 (f)濃縮されたコレステロール溶液のpHを11.0
〜11.4の範囲内の値に調節し、 (g)濃縮されたコレステロール溶液を順番に炭酸ナト
リウムおよび水に対して透析し、 (h)透析したコレステロール溶液を限外濾過により5
0〜3000mg/dlのコレステロール水準にさらに
濃縮し、 (i)濃縮されたコレステロール溶液のpHを7.0〜
11.0の範囲内の値に調節し、 (j)濃縮されたコレステロール溶液を50〜100℃
に30分〜24時間加熱し、そして (k)精製されたコレステロールに富んだウシ分画をそ
れから回収すること、 からなる方法によって調製される特許請求の範囲第1項
記載の方法。 3、栄養培地が0.1〜5.0容量%のコレステロール
に富んだウシ分画を含有する特許請求の範囲第1項記載
の方法。 4、栄養培地が1〜2.5容量%のコレステロールに富
んだウシ分画を含有する特許請求の範囲第1項記載の方
法。 5、栄養培地が2.5容量%のコレステロールに富んだ
ウシ分画を含有する特許請求の範囲第1項記載の方法。 6、栄養培地が1〜2.5容量%のコレステロールに富
んだウシ分画を含有し、前記コレステロールに富んだウ
シ分画は、次の工程: (a)液状のコレステロールを含有するウシの血漿また
は血清あるいはその分画をシリカの吸着剤と接触させて
コレステロールを吸着させ、 (b)吸着されたコレステロールを残りの液状の血漿ま
たは血清から分離し、 (c)吸着されたコレステロールを凍結しかつ融解し、 (d)吸着されたコレステロールをpH10.4〜10
.6において溶離し、 (e)溶離されたコレステロール溶液を限外濾過により
出発容量の15〜50%の容量に濃縮し、 (f)濃縮されたコレステロール溶液のpHを11.2
の値に調節し、 (g)濃縮されたコレステロール溶液を順番に炭酸ナト
リウムおよび水に対して透析し、 (h)透析したコレステロール溶液を限外濾過により1
000〜2000mg/dlのコレステロール水準にさ
らに濃縮し、 (i)濃縮されたコレステロール溶液のpHを7.6の
値に調節し、 (j)濃縮されたコレステロール溶液を80℃に30〜
60分間加熱し、そして (k)精製されたコレステロールに富んだウシ分画をそ
れから回収すること、 からなる方法によって調製される特許請求の範囲第1項
記載の方法。 7、特許請求の範囲第1項記載の方法により生産された
¥トレポネマ・ハイオジセンテリアエ¥(¥Trepo
nema hyodysenteriae¥)バクテリ
ン。 8、特許請求の範囲第2項記載の方法により生産された
¥トレポネマ・ハイオジセンテリアエ¥(¥Trepo
nema hyodysenteriae¥)バクテリ
ン。 9、約2×10^9細胞/mlを含有する特許請求の範
囲第7項記載のバクテリン。 10、ポリアリルサッカリドで架橋されたアクリル酸ポ
リマーと乳剤系との組み合わせから成るアジュバントと
混合された特許請求の範囲第7項記載のバクテリン。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US73287285A | 1985-05-10 | 1985-05-10 | |
US732872 | 1991-07-19 |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP5203727A Division JPH08785B2 (ja) | 1985-05-10 | 1993-07-27 | トレポネマ・ハイオジセンテリアエのバクテリン |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS6211090A true JPS6211090A (ja) | 1987-01-20 |
JPH069505B2 JPH069505B2 (ja) | 1994-02-09 |
Family
ID=24945290
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP61105004A Expired - Lifetime JPH069505B2 (ja) | 1985-05-10 | 1986-05-09 | トレポネマ・ハイオジセンテリアエの生育方法 |
JP5203727A Expired - Lifetime JPH08785B2 (ja) | 1985-05-10 | 1993-07-27 | トレポネマ・ハイオジセンテリアエのバクテリン |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP5203727A Expired - Lifetime JPH08785B2 (ja) | 1985-05-10 | 1993-07-27 | トレポネマ・ハイオジセンテリアエのバクテリン |
Country Status (13)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP0201796B1 (ja) |
JP (2) | JPH069505B2 (ja) |
KR (1) | KR940004541B1 (ja) |
AT (1) | ATE74159T1 (ja) |
BR (1) | BR8602091A (ja) |
CA (1) | CA1279277C (ja) |
DE (1) | DE3684503D1 (ja) |
DK (1) | DK217486A (ja) |
ES (1) | ES8706817A1 (ja) |
GR (1) | GR861135B (ja) |
HU (1) | HU201114B (ja) |
PL (1) | PL156487B1 (ja) |
ZA (1) | ZA863451B (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH06293662A (ja) * | 1985-05-10 | 1994-10-21 | Mobay Corp | トレポネマ・ハイオジセンテリアエのバクテリン |
Families Citing this family (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR2707168B1 (fr) * | 1993-07-08 | 1995-08-18 | Rhone Merieux | Vaccin contre la dysenterie hémorragique du porc et ensemble de vaccination y relatif. |
US9192831B2 (en) | 2009-01-20 | 2015-11-24 | Nike, Inc. | Golf club and golf club head structures |
US9149693B2 (en) | 2009-01-20 | 2015-10-06 | Nike, Inc. | Golf club and golf club head structures |
EP2646123B1 (en) | 2010-11-30 | 2017-05-17 | NIKE Innovate C.V. | Golf club heads or other ball striking devices having distributed impact response |
US9101808B2 (en) | 2011-01-27 | 2015-08-11 | Nike, Inc. | Golf club head or other ball striking device having impact-influencing body features |
US9186547B2 (en) | 2011-04-28 | 2015-11-17 | Nike, Inc. | Golf clubs and golf club heads |
US9375624B2 (en) | 2011-04-28 | 2016-06-28 | Nike, Inc. | Golf clubs and golf club heads |
US9433844B2 (en) | 2011-04-28 | 2016-09-06 | Nike, Inc. | Golf clubs and golf club heads |
US9433845B2 (en) | 2011-04-28 | 2016-09-06 | Nike, Inc. | Golf clubs and golf club heads |
US9409073B2 (en) | 2011-04-28 | 2016-08-09 | Nike, Inc. | Golf clubs and golf club heads |
CN104168965B (zh) | 2011-08-23 | 2017-11-14 | 耐克创新有限合伙公司 | 具有空穴的高尔夫球杆头部 |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4100272A (en) * | 1977-05-31 | 1978-07-11 | Iowa State University Research Foundation, Inc. | Method of increasing the resistance of swine to swine dysentery infection |
GB8405530D0 (en) * | 1984-03-02 | 1984-04-04 | Lysons R J | Vaccine for swine dysentery |
ATE74159T1 (de) * | 1985-05-10 | 1992-04-15 | Mobay Corp | Treponema hyodysenteriae-bacterin und verfahren fuer dieses. |
JP3128329B2 (ja) * | 1992-06-19 | 2001-01-29 | 三菱化学株式会社 | 芳香族炭酸エステルの製造方法 |
-
1986
- 1986-04-28 AT AT86105860T patent/ATE74159T1/de not_active IP Right Cessation
- 1986-04-28 DE DE8686105860T patent/DE3684503D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1986-04-28 EP EP86105860A patent/EP0201796B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1986-04-29 GR GR861135A patent/GR861135B/el unknown
- 1986-05-08 CA CA000508731A patent/CA1279277C/en not_active Expired - Fee Related
- 1986-05-09 ES ES554822A patent/ES8706817A1/es not_active Expired
- 1986-05-09 ZA ZA863451A patent/ZA863451B/xx unknown
- 1986-05-09 KR KR1019860003622A patent/KR940004541B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1986-05-09 PL PL1986259415A patent/PL156487B1/pl unknown
- 1986-05-09 BR BR8602091A patent/BR8602091A/pt unknown
- 1986-05-09 DK DK217486A patent/DK217486A/da not_active Application Discontinuation
- 1986-05-09 JP JP61105004A patent/JPH069505B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1986-05-09 HU HU861935A patent/HU201114B/hu unknown
-
1993
- 1993-07-27 JP JP5203727A patent/JPH08785B2/ja not_active Expired - Lifetime
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
J.GEN.MICROBIOLOGY=1980 * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH06293662A (ja) * | 1985-05-10 | 1994-10-21 | Mobay Corp | トレポネマ・ハイオジセンテリアエのバクテリン |
JPH08785B2 (ja) * | 1985-05-10 | 1996-01-10 | モーベイ・コーポレーシヨン | トレポネマ・ハイオジセンテリアエのバクテリン |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
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ATE74159T1 (de) | 1992-04-15 |
HU201114B (en) | 1990-09-28 |
GR861135B (en) | 1986-09-30 |
DK217486A (da) | 1986-11-11 |
KR940004541B1 (ko) | 1994-05-25 |
HUT44072A (en) | 1988-01-28 |
KR860009121A (ko) | 1986-12-20 |
ES554822A0 (es) | 1987-07-01 |
ZA863451B (en) | 1988-11-30 |
PL156487B1 (pl) | 1992-03-31 |
JPH069505B2 (ja) | 1994-02-09 |
EP0201796B1 (de) | 1992-03-25 |
JPH06293662A (ja) | 1994-10-21 |
EP0201796A3 (en) | 1989-03-29 |
CA1279277C (en) | 1991-01-22 |
EP0201796A2 (de) | 1986-11-20 |
BR8602091A (pt) | 1987-01-06 |
DK217486D0 (da) | 1986-05-09 |
ES8706817A1 (es) | 1987-07-01 |
JPH08785B2 (ja) | 1996-01-10 |
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