JPS62104586A - 酵素反応方法 - Google Patents
酵素反応方法Info
- Publication number
- JPS62104586A JPS62104586A JP24497085A JP24497085A JPS62104586A JP S62104586 A JPS62104586 A JP S62104586A JP 24497085 A JP24497085 A JP 24497085A JP 24497085 A JP24497085 A JP 24497085A JP S62104586 A JPS62104586 A JP S62104586A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- reaction
- membrane
- coenzyme
- enzyme
- reverse osmosis
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Separation Using Semi-Permeable Membranes (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は補酵素と酸化還元酵素とを含む酵素反応方法に
関し、詳しくは、酸化還元酵素、補酵素及び基質の存在
下に、補酵素の再生反応と所定の酵素反応とを共役させ
て行なわせ、生成した反応混合物における反応生成物と
補酵素とを分離する酵素反応方法に関する。
関し、詳しくは、酸化還元酵素、補酵素及び基質の存在
下に、補酵素の再生反応と所定の酵素反応とを共役させ
て行なわせ、生成した反応混合物における反応生成物と
補酵素とを分離する酵素反応方法に関する。
（従来の技術）
例えば、グルコースイソメラーゼを用いる異性化糖の製
造のように、補酵素を用いない酵素反応は、既に幾つか
が実用化されているが、補酵素を必要とする酵素反応は
、補酵素が反応目的物に比較して著しく高価であるうえ
に、反応系からのその実用的な分離方法が確立されてい
ないこともあって、未だ実用化されていない。
造のように、補酵素を用いない酵素反応は、既に幾つか
が実用化されているが、補酵素を必要とする酵素反応は
、補酵素が反応目的物に比較して著しく高価であるうえ
に、反応系からのその実用的な分離方法が確立されてい
ないこともあって、未だ実用化されていない。
従来、補酵素を用いる酵素反応系からの補酵素の分離に
ついては、例えば、福井三部編著「生体触媒としての微
生物」第１５７〜１６１頁（昭和５４年共立出版−発行
）に記載されているように、幾つかの方法が提案されて
いる。例えば、ＮＡＤＰの分離に関しては、低分子量化
合物を除去し得る分離膜を使用することも可能である。
ついては、例えば、福井三部編著「生体触媒としての微
生物」第１５７〜１６１頁（昭和５４年共立出版−発行
）に記載されているように、幾つかの方法が提案されて
いる。例えば、ＮＡＤＰの分離に関しては、低分子量化
合物を除去し得る分離膜を使用することも可能である。
しかし、この方法によれば、補酵素のみならず、基質や
反応生成物も同時に除去される。水不溶性の担体に補酵
素を固定化してなる固定化補酵素を用いれば、この固定
化補酵素を水溶性の反応生成物から分離することは容易
であるが、固定化補酵素の製造が必ずしも容易でないう
えに、一般に、固定化補酵素は遊離の補酵素に比べて反
応活性が低い。また、低濃度の補酵素を反応系に供給し
つつ、補酵素を酵素と結合させ、高分子量体として、こ
れを限外濾過膜にて分離する方法も知られているが、こ
の方法によるときは、反応系に高濃度の酵素を供給する
ことを必要とし、工業的な酵素反応方法としては不適当
である。
反応生成物も同時に除去される。水不溶性の担体に補酵
素を固定化してなる固定化補酵素を用いれば、この固定
化補酵素を水溶性の反応生成物から分離することは容易
であるが、固定化補酵素の製造が必ずしも容易でないう
えに、一般に、固定化補酵素は遊離の補酵素に比べて反
応活性が低い。また、低濃度の補酵素を反応系に供給し
つつ、補酵素を酵素と結合させ、高分子量体として、こ
れを限外濾過膜にて分離する方法も知られているが、こ
の方法によるときは、反応系に高濃度の酵素を供給する
ことを必要とし、工業的な酵素反応方法としては不適当
である。
更に、補酵素が一般に負電荷を有する低分子量有機化合
物であることを利用して、負荷電を有する分離膜内に補
酵素を保持しつつ、所要の酵素反応を行なうことも提案
されている。しかし、従来、この方法においては、反応
媒体である緩衝液として、トリス塩酸緩衝液やリン酸カ
ルシウム緩衝液が用いられており、その理由は必ずしも
明らかではないが、反応媒体として純水を用いる場合に
比較して、分離膜による補酵素の保持率が著しく低い。
物であることを利用して、負荷電を有する分離膜内に補
酵素を保持しつつ、所要の酵素反応を行なうことも提案
されている。しかし、従来、この方法においては、反応
媒体である緩衝液として、トリス塩酸緩衝液やリン酸カ
ルシウム緩衝液が用いられており、その理由は必ずしも
明らかではないが、反応媒体として純水を用いる場合に
比較して、分離膜による補酵素の保持率が著しく低い。
尚、以下、本明細書においては、分離膜内に補酵素を保
持するとは、補酵素を含む反応混合物を分離膜にて処理
したとき、補酵素を透過させないことをいい、補酵素の
保持率とは、膜技術の分野においてよく知られているよ
うに、補酵素を含む反応混合物を膜処理したときの補酵
素の除去率をいうものとする。その他の溶質についても
同じである。
持するとは、補酵素を含む反応混合物を分離膜にて処理
したとき、補酵素を透過させないことをいい、補酵素の
保持率とは、膜技術の分野においてよく知られているよ
うに、補酵素を含む反応混合物を膜処理したときの補酵
素の除去率をいうものとする。その他の溶質についても
同じである。
（発明の目的）
本発明者らは、酸化還元酵素、補酵素及び基質の存在下
に、補酵素の再生反応と所定の酵素反応とを共役させて
行なわせ、生成した反応混合物における反応生成物と補
酵素とを分離する酵素反応方法における上記した問題を
解決するために鋭意研究した結果、予期しないことに、
上記反応混合物に両性イオン緩衝液を存在させ、これを
負荷電を有する逆浸透膜又は超濾過膜にて処理すること
によって、補酵素の保持率を著しく高め得る。ことを見
い出し、更に、負荷電を有する上記膜が所定の塩除去率
を有するとき、特に、補酵素の保持率が高まることを見
い出して、本発明に至ったものである。
に、補酵素の再生反応と所定の酵素反応とを共役させて
行なわせ、生成した反応混合物における反応生成物と補
酵素とを分離する酵素反応方法における上記した問題を
解決するために鋭意研究した結果、予期しないことに、
上記反応混合物に両性イオン緩衝液を存在させ、これを
負荷電を有する逆浸透膜又は超濾過膜にて処理すること
によって、補酵素の保持率を著しく高め得る。ことを見
い出し、更に、負荷電を有する上記膜が所定の塩除去率
を有するとき、特に、補酵素の保持率が高まることを見
い出して、本発明に至ったものである。
従って、本発明は、酸化還元酵素と補酵素とこれらによ
る反応生成物をを含む酵素反応の反応生成物から補酵素
と反応生成物とを高い分離率にて分離して、酵素反応を
行なう方法を提供することを目的とする。
る反応生成物をを含む酵素反応の反応生成物から補酵素
と反応生成物とを高い分離率にて分離して、酵素反応を
行なう方法を提供することを目的とする。
（発明の構成）
本発明は、酸化還元酵素、補酵素及び基質の存在下に、
補酵素の再生反応と所定の酵素反応とを共役させて行な
わせ、生成した反応混合物における補酵素と反応生成物
とを分離する酵素反応方法であって、上記反応混合物を
両性イオン緩衝液の存在下に負荷電を有する逆浸透膜又
は超濾過膜にて処理して、上記酵素及び補酵素を膜内に
保持し、酵素反応生成物を膜透過させることを特徴とす
る。
補酵素の再生反応と所定の酵素反応とを共役させて行な
わせ、生成した反応混合物における補酵素と反応生成物
とを分離する酵素反応方法であって、上記反応混合物を
両性イオン緩衝液の存在下に負荷電を有する逆浸透膜又
は超濾過膜にて処理して、上記酵素及び補酵素を膜内に
保持し、酵素反応生成物を膜透過させることを特徴とす
る。
本発明において、補酵素の再生系は特に制限されず、単
一の酵素反応のみを利用してもよいが、２種類以上の酵
素反応を利用してもよい。通常は、反応系の複雑化を避
けるために、３種類以下の酵素反応を利用するのが実用
的である。また、本発明において用いる酵素は、酸化還
元酵素であれば特に限定されず、目的とする反応に応じ
て適宜に選択される。この酵素は、′ｔＩ離の状態にて
用いてもよく、また、固定化酵素として用いてもよい。
一の酵素反応のみを利用してもよいが、２種類以上の酵
素反応を利用してもよい。通常は、反応系の複雑化を避
けるために、３種類以下の酵素反応を利用するのが実用
的である。また、本発明において用いる酵素は、酸化還
元酵素であれば特に限定されず、目的とする反応に応じ
て適宜に選択される。この酵素は、′ｔＩ離の状態にて
用いてもよく、また、固定化酵素として用いてもよい。
更に、補酵素及び酵素は、必ずしも精製されている必要
はなく、細菌や酵母無細胞抽出液でもよい。
はなく、細菌や酵母無細胞抽出液でもよい。
本発明において用いる負電荷を有する分離膜は逆浸透膜
又は超濾過膜であって、酵素反応による反応生成物を透
過する分画性を有すればよいが、特に、温度２５℃、圧
力１０ｋｇ／ｃ＋Ｊにて濃度０．５％の塩化ナトリウム
水溶液を処理したとき、塩化ナトリウム除去率が少なく
とも３％であり、更に、温度２５°Ｃ１圧力５ｋｌｒ／
ｃｆｌＩにて処理したとき、グルコースの除去率が３０
％以下、ＮＡＤＰの除去率が５０％以上である分画性を
有することが好ましい。特に、グルコースの除去率が１
０％以下、ＮＡＤＰの除去率が８０％以上である分画性
を有することが好ましい。限外濾過膜は孔径が大きいた
めに、分離性能が悪い。
又は超濾過膜であって、酵素反応による反応生成物を透
過する分画性を有すればよいが、特に、温度２５℃、圧
力１０ｋｇ／ｃ＋Ｊにて濃度０．５％の塩化ナトリウム
水溶液を処理したとき、塩化ナトリウム除去率が少なく
とも３％であり、更に、温度２５°Ｃ１圧力５ｋｌｒ／
ｃｆｌＩにて処理したとき、グルコースの除去率が３０
％以下、ＮＡＤＰの除去率が５０％以上である分画性を
有することが好ましい。特に、グルコースの除去率が１
０％以下、ＮＡＤＰの除去率が８０％以上である分画性
を有することが好ましい。限外濾過膜は孔径が大きいた
めに、分離性能が悪い。
非荷電膜を用いるときは、一般に、補酵素が低分子量体
であるために、基質及び反応生成物が同じく低分子量体
である場合は、基質及び反応生成物、特に反応生成物を
選択的に透過させ、一方、補酵素を分離膜内に保持する
ことは困難であるが、本発明によれば、分離膜として、
前記した特性を有すると共に、負荷電を有する膜を用い
るとき、所謂分離膜の有する篩効果のみならず、分離膜
の有する負電荷と補酵素の負電荷との静電気な反発効果
によっても、補酵素の選択保持性が発揮され、その結果
、本発明によれば、補酵素を高い除去率にて膜内に保持
することができるのである。尚、酵素は、一般に、高分
子■体であるために、実質的に膜を透過し得す、膜内に
保持される。
であるために、基質及び反応生成物が同じく低分子量体
である場合は、基質及び反応生成物、特に反応生成物を
選択的に透過させ、一方、補酵素を分離膜内に保持する
ことは困難であるが、本発明によれば、分離膜として、
前記した特性を有すると共に、負荷電を有する膜を用い
るとき、所謂分離膜の有する篩効果のみならず、分離膜
の有する負電荷と補酵素の負電荷との静電気な反発効果
によっても、補酵素の選択保持性が発揮され、その結果
、本発明によれば、補酵素を高い除去率にて膜内に保持
することができるのである。尚、酵素は、一般に、高分
子■体であるために、実質的に膜を透過し得す、膜内に
保持される。
本発明の方法によれば、例えば、基質、酸化還元酵素及
び補酵素を予め反応容器内に導き、ここで反応媒体とし
ての両性イオン緩衝液の存在下に補酵素の再生反応と共
役する所定の酵素反応を行なわせた後、生成した反応混
合物を前述した負荷電を存する逆浸透膜又は超濾過膜で
処理して、酵素反応生成物を選択的に透過させ、一方、
上記酵素及び補酵素を膜内に保持し、このようにして、
補酵素と反応生成物とを分離することができる。
び補酵素を予め反応容器内に導き、ここで反応媒体とし
ての両性イオン緩衝液の存在下に補酵素の再生反応と共
役する所定の酵素反応を行なわせた後、生成した反応混
合物を前述した負荷電を存する逆浸透膜又は超濾過膜で
処理して、酵素反応生成物を選択的に透過させ、一方、
上記酵素及び補酵素を膜内に保持し、このようにして、
補酵素と反応生成物とを分離することができる。
また、別の方法として、負荷電を有する上記分離膜にて
構成する空間を反応系とし、ここに基質、酸化還元酵素
及び補酵素を導き、反応媒体としての両性イオン緩衝液
の存在下に補酵素の再生反応と所定の酵素反応を共役し
て行なわせつつ、又は行なわせた後、上記酵素及び補酵
素を膜内に保持させ、酵素反応生成物を膜透過させて、
これを分離してもよい。反応後に、反応混合物を膜処理
する段階でこれに両性イオン緩衝液を加えてもよい。
構成する空間を反応系とし、ここに基質、酸化還元酵素
及び補酵素を導き、反応媒体としての両性イオン緩衝液
の存在下に補酵素の再生反応と所定の酵素反応を共役し
て行なわせつつ、又は行なわせた後、上記酵素及び補酵
素を膜内に保持させ、酵素反応生成物を膜透過させて、
これを分離してもよい。反応後に、反応混合物を膜処理
する段階でこれに両性イオン緩衝液を加えてもよい。
本発明において、酸化還元酵素、補酵素及び基質の存在
下に、補酵素の再生反応と所定の酵素反応とを共役させ
て行なわせる方法は、通常の酵素反応の条件に従えばよ
い。従って、反応系における基質の濃度は、基質の溶解
性によっても異なるが、通常、１０Ｍ以下が適当である
が、特に、１〜５Ｍの範囲が好ましい。また、酵素及び
補酵素の濃度は、通常、０．０１ｍＭ〜ＩＭの範囲であ
り、特に好ましくはＯ９１〜０．５Ｍの範囲である。し
かし、これらに限定されるものではない。
下に、補酵素の再生反応と所定の酵素反応とを共役させ
て行なわせる方法は、通常の酵素反応の条件に従えばよ
い。従って、反応系における基質の濃度は、基質の溶解
性によっても異なるが、通常、１０Ｍ以下が適当である
が、特に、１〜５Ｍの範囲が好ましい。また、酵素及び
補酵素の濃度は、通常、０．０１ｍＭ〜ＩＭの範囲であ
り、特に好ましくはＯ９１〜０．５Ｍの範囲である。し
かし、これらに限定されるものではない。
本発明の方法において、分離膜の形態は何ら限定されず
、例えば、平膜、チューブラ−膜、キャピラリー膜、中
空糸状膜等として用いられる。また、これら分離膜を備
えた膜モジュールの形態も、反応に応じて適宜に選択さ
れるものであって、何ら限定されない。
、例えば、平膜、チューブラ−膜、キャピラリー膜、中
空糸状膜等として用いられる。また、これら分離膜を備
えた膜モジュールの形態も、反応に応じて適宜に選択さ
れるものであって、何ら限定されない。
本発明の方法において用いる分離膜は、酸性基としてス
ルホン酸基を有する分離膜が好適である。
ルホン酸基を有する分離膜が好適である。
かかる分離膜として、例えば、スルホン化ポリスルホン
、スルホン化ポリエーテルケトン、スルホン化ポリスチ
レン、スルホン化ポリキナゾロン、スルホン化ポリアミ
ド、スルホン化ポリイミド、スルホン化ポリアミドイミ
ド、スルホン酸基をグラフト化したポリオレフィン、ス
ルホン酸基を有するフッ素系樹脂等からなる超濾過膜 （ｈｙｐｅｒｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ ｍｅｍｂｒａｎｅ
）や逆浸透膜を挙げることができる。尚、超濾過膜とは
所謂ルーズな逆浸透膜を意味する。
、スルホン化ポリエーテルケトン、スルホン化ポリスチ
レン、スルホン化ポリキナゾロン、スルホン化ポリアミ
ド、スルホン化ポリイミド、スルホン化ポリアミドイミ
ド、スルホン酸基をグラフト化したポリオレフィン、ス
ルホン酸基を有するフッ素系樹脂等からなる超濾過膜 （ｈｙｐｅｒｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ ｍｅｍｂｒａｎｅ
）や逆浸透膜を挙げることができる。尚、超濾過膜とは
所謂ルーズな逆浸透膜を意味する。
特に、本発明においては、スルホン酸基が全酸性基の大
部分、好ましくは７０％以上、特に好ましくは９０％以
上である重合体からなる分離膜が好ましい。しかし、ス
ルホン酸基が全酸性基のうち上記範囲にある限りは、残
余の酸性基はスルホン酸基以外の酸性基、例えば、カル
ボン酸基であってもよい。
部分、好ましくは７０％以上、特に好ましくは９０％以
上である重合体からなる分離膜が好ましい。しかし、ス
ルホン酸基が全酸性基のうち上記範囲にある限りは、残
余の酸性基はスルホン酸基以外の酸性基、例えば、カル
ボン酸基であってもよい。
本発明において、特に好適に用いることができるスルホ
ン酸基を有する分離膜として、繰返し単よりなるポリア
リールエーテルをスルホン化してなるスルホン化ポリア
リールエーテル、又は上記繰返し単位Ａと繰返し単位Ｂ （但し、Ｒは−Ｃ〇−又は−３ＯＺ−を示し、Ｒ”は炭
素−炭素結合、又は−ＣＯ−若しくは−ＳＯ□−を含む
２価基を示す。） よりなる線状ボリアリールエーテル共重合体をスルホン
化してなるスルホン化ポリアリールエーテルからなるス
キン層が支持膜としての限外濾過膜上に一体に積層され
てなる複合分離膜を挙げることができる。
ン酸基を有する分離膜として、繰返し単よりなるポリア
リールエーテルをスルホン化してなるスルホン化ポリア
リールエーテル、又は上記繰返し単位Ａと繰返し単位Ｂ （但し、Ｒは−Ｃ〇−又は−３ＯＺ−を示し、Ｒ”は炭
素−炭素結合、又は−ＣＯ−若しくは−ＳＯ□−を含む
２価基を示す。） よりなる線状ボリアリールエーテル共重合体をスルホン
化してなるスルホン化ポリアリールエーテルからなるス
キン層が支持膜としての限外濾過膜上に一体に積層され
てなる複合分離膜を挙げることができる。
このような複合分離膜は、好ましくは、上記繰返し単位
Ａよりなるボリアリールエーテル、又は上記繰返し単位
Ａ及び繰返し単位Ｂよりなる線状ボリアリールエーテル
共重合体をそれぞれスルホン化して、スルホン化ボリア
リールエーテルを調製し、これを少量の非プロトン性極
性有機溶剤、例えば、ジメチルスルホキシド、Ｎ−メチ
ル−２−ピロリドン、Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミド、
Ｎ、 Ｎ−ジメチルアセトアミド等を含んでいてもよい
エチレングリコールモノメチルエーテルのようなアルキ
レングリコールアルキルエーテルと、必要に応じて、添
加剤としての水溶性で且つ低揮発性の有機化合物又は無
機塩とを添加剤として含有する製膜溶液を乾燥した支持
膜上に塗布し、次いで、この製膜溶液から有機溶剤を蒸
発させることによって得ることができる。
Ａよりなるボリアリールエーテル、又は上記繰返し単位
Ａ及び繰返し単位Ｂよりなる線状ボリアリールエーテル
共重合体をそれぞれスルホン化して、スルホン化ボリア
リールエーテルを調製し、これを少量の非プロトン性極
性有機溶剤、例えば、ジメチルスルホキシド、Ｎ−メチ
ル−２−ピロリドン、Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミド、
Ｎ、 Ｎ−ジメチルアセトアミド等を含んでいてもよい
エチレングリコールモノメチルエーテルのようなアルキ
レングリコールアルキルエーテルと、必要に応じて、添
加剤としての水溶性で且つ低揮発性の有機化合物又は無
機塩とを添加剤として含有する製膜溶液を乾燥した支持
膜上に塗布し、次いで、この製膜溶液から有機溶剤を蒸
発させることによって得ることができる。
製膜溶液における前記スルホン化ボリアリールエーテル
の濃度は、得られる複合分離膜におけるこれら重合体に
よる分離膜の膜厚にも関係するが、通常、０．０５〜１
０ｇ量％の範囲が好ましく、特に、０．１〜５重景％の
範囲が好ましい。
の濃度は、得られる複合分離膜におけるこれら重合体に
よる分離膜の膜厚にも関係するが、通常、０．０５〜１
０ｇ量％の範囲が好ましく、特に、０．１〜５重景％の
範囲が好ましい。
（発明の効果）
本発明によれば、酸化還元酵素、補酵素及び基質の存在
下に、補酵素の再生反応と所定の酵素反応とを共役させ
て行なわせ、生成した反応混合物における反応生成物と
補酵素とを分離する酵素反応方法において、生成した反
応混合物を両性イオン緩衝液の存在下に負荷電を有する
膜にて処理することによって、補酵素と反応生成物とを
高い分離率にて分離することができる。特に、所定の塩
除去率を有する負荷電を有する膜を用いるとき、補酵素
の分離率を更に高めることができる。
下に、補酵素の再生反応と所定の酵素反応とを共役させ
て行なわせ、生成した反応混合物における反応生成物と
補酵素とを分離する酵素反応方法において、生成した反
応混合物を両性イオン緩衝液の存在下に負荷電を有する
膜にて処理することによって、補酵素と反応生成物とを
高い分離率にて分離することができる。特に、所定の塩
除去率を有する負荷電を有する膜を用いるとき、補酵素
の分離率を更に高めることができる。
（実施例）
以下に実施例及び参考例を挙げて本発明を説明するが、
本発明はこれら実施例により何ら限定されるものではな
い。尚、実施例において、溶質除去率は次式により求め
た。
本発明はこれら実施例により何ら限定されるものではな
い。尚、実施例において、溶質除去率は次式により求め
た。
参考例１
（１） ポリスルホン共重合体の製造特公昭４６−２
１４５８号に記載されている方法に従って、式Δ１ の繰返し単位５７モル％と、弐Ｂ。
１４５８号に記載されている方法に従って、式Δ１ の繰返し単位５７モル％と、弐Ｂ。
の繰返し単位４３モル％とからなる線状ポリスルホン共
重合体を製造した。
重合体を製造した。
このようにして得られたポリスルホン共重合体（収率１
００％）は、淡黄色粒状物であって、この共重合体の対
数粘度は０．８４ｃｌＩｌ／ｇであった。
００％）は、淡黄色粒状物であって、この共重合体の対
数粘度は０．８４ｃｌＩｌ／ｇであった。
（２） スルホン化ポリスルホン共重合体の製造上記
のようにして得たポリスルホン共重合体１０ｇを９７％
濃硫酸８０ｍ１に加えて溶解させ、常温にて４時間攪拌
反応させて、黒褐色の粘稠な反応液を得た。これを水浴
中に投入して、スルホン化ポリスルホン共重合体を凝固
させた。水にて洗浄後、０．５Ｎ水酸化ナトリウム水溶
液８００ｍ１中に一晩放置した。次いで、洗浄液が中性
になるまでこの重合体を洗浄した後、６０℃で５時間真
空乾燥した。
のようにして得たポリスルホン共重合体１０ｇを９７％
濃硫酸８０ｍ１に加えて溶解させ、常温にて４時間攪拌
反応させて、黒褐色の粘稠な反応液を得た。これを水浴
中に投入して、スルホン化ポリスルホン共重合体を凝固
させた。水にて洗浄後、０．５Ｎ水酸化ナトリウム水溶
液８００ｍ１中に一晩放置した。次いで、洗浄液が中性
になるまでこの重合体を洗浄した後、６０℃で５時間真
空乾燥した。
このようにして得られたスルホン化ポリスルホン共重合
体は、対数粘度が０．８４、スルホン酸基量は１．２ミ
リ当Ｎ／ｇであった。
体は、対数粘度が０．８４、スルホン酸基量は１．２ミ
リ当Ｎ／ｇであった。
（３）複合半透膜の製造
濃度０．５％のポリエチレングリコール（平均分子量２
００００ ）水溶液を温度２５℃、圧力３．５ｋｇ／ｃ
ｎｌにて処理したときの除去率が１０％である次式〇の
繰返し単位 を有するポリスルホン限外濾過膜（分画分子量１０００
００）を８０℃の温度の熱水中に１時間浸漬して熱処理
した後、２５℃の温度で１０％１．４−ブタンジオール
水溶液に１時間浸漬し、次いで、約６０℃の乾燥器中に
５分間放置して、乾燥半透膜を得た。
００００ ）水溶液を温度２５℃、圧力３．５ｋｇ／ｃ
ｎｌにて処理したときの除去率が１０％である次式〇の
繰返し単位 を有するポリスルホン限外濾過膜（分画分子量１０００
００）を８０℃の温度の熱水中に１時間浸漬して熱処理
した後、２５℃の温度で１０％１．４−ブタンジオール
水溶液に１時間浸漬し、次いで、約６０℃の乾燥器中に
５分間放置して、乾燥半透膜を得た。
前記スルホン化ポリスルホン共重合体をエチレングリコ
ールモノメチルエーテルに溶解して、１゜０重量％の重
合体溶液を調製し、これを上記乾燥限外濾過膜上に塗布
し、室温にて放置して、殆どすべての溶剤を蒸発させて
除去した後、６０℃の温度で５分間加熱して、複合分離
膜を得た。
ールモノメチルエーテルに溶解して、１゜０重量％の重
合体溶液を調製し、これを上記乾燥限外濾過膜上に塗布
し、室温にて放置して、殆どすべての溶剤を蒸発させて
除去した後、６０℃の温度で５分間加熱して、複合分離
膜を得た。
この複合分離膜の性能は、０．５％塩化ナトリウム水溶
液を２５℃、１０ｋｇ／Ｃ！ｌｌの条件にて処理したと
き、除去率１５％であった。
液を２５℃、１０ｋｇ／Ｃ！ｌｌの条件にて処理したと
き、除去率１５％であった。
参考例２
前記の式Ｃの繰返し単位を有するポリスルホン（ＵＣＣ
社製Ｐ−１７００）をＮｏ５ｈａｙらの方法（Ｊ、 Ａ
ｐｐｌｉｅｄ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｓｃｉ、、 ２０．１
８８７ （１９７６））に従ってスルホン化して、スル
ホン酸基量０．８ミリ当量／ｇの、スルホン化ポリスル
ホンを得た。
社製Ｐ−１７００）をＮｏ５ｈａｙらの方法（Ｊ、 Ａ
ｐｐｌｉｅｄ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｓｃｉ、、 ２０．１
８８７ （１９７６））に従ってスルホン化して、スル
ホン酸基量０．８ミリ当量／ｇの、スルホン化ポリスル
ホンを得た。
このスルホン化ポリスルホン１５ｇをＮ−メチルピロリ
ドン８２ｇに溶解し、更に、これに硝酸リチウム３ｇを
加え、均一な溶液とした後、１０μｍの濾紙にて濾過し
て、製膜溶液とした。
ドン８２ｇに溶解し、更に、これに硝酸リチウム３ｇを
加え、均一な溶液とした後、１０μｍの濾紙にて濾過し
て、製膜溶液とした。
この製膜溶液をガラス板上に厚み２８５μｍに塗布し、
１３０℃で１分間乾燥し、溶剤を蒸発させた後、５°Ｃ
の水中に浸漬して、負負荷電を有する分離膜を得た。
１３０℃で１分間乾燥し、溶剤を蒸発させた後、５°Ｃ
の水中に浸漬して、負負荷電を有する分離膜を得た。
この分離膜の性能は、０．５％塩化ナトリウム水溶液を
２５℃、１０ｋｇ／ｃＪの条件にて処理したとき、除去
率３％であった。
２５℃、１０ｋｇ／ｃＪの条件にて処理したとき、除去
率３％であった。
実施例１
攪拌器及び温度調整器を備えたバッチ式膜透過試験機に
上記参考例１又は２で得た分離膜を取付け、純水又はグ
リシルグリシン緩衝液（１００ｍＭ、ｐｔ１７．５）に
溶解させた補酵素の水溶液を温度２５℃、圧力５ ｋｇ
／ ｃ＋＋Ｉの条件下に膜処理した。補酵素の保持率を
第１表に示す。実施例は参考例１の膜を、また、比較例
は参考例２の膜を用いた結果であり、本発明に従って、
所定の塩保持率を有する分離膜を用いるとき、補酵素の
保持率が高いことが理解される。
上記参考例１又は２で得た分離膜を取付け、純水又はグ
リシルグリシン緩衝液（１００ｍＭ、ｐｔ１７．５）に
溶解させた補酵素の水溶液を温度２５℃、圧力５ ｋｇ
／ ｃ＋＋Ｉの条件下に膜処理した。補酵素の保持率を
第１表に示す。実施例は参考例１の膜を、また、比較例
は参考例２の膜を用いた結果であり、本発明に従って、
所定の塩保持率を有する分離膜を用いるとき、補酵素の
保持率が高いことが理解される。
第 １ 表
実施例２
攪拌器及び温度調整器を備えたバッチ式膜透過試験機に
上記参考例１で得た分離膜を取付け、種々の緩衝液の存
在下に補酵素の保持率を温度２５°Ｃ１圧力５ ｋｇ
／ ｃｏｔの条件下に測定した。結果を第２表に示すよ
うに緩衝液が両性イオン緩衝液であるとき、補酵素の保
持率が高いことが理解される。
上記参考例１で得た分離膜を取付け、種々の緩衝液の存
在下に補酵素の保持率を温度２５°Ｃ１圧力５ ｋｇ
／ ｃｏｔの条件下に測定した。結果を第２表に示すよ
うに緩衝液が両性イオン緩衝液であるとき、補酵素の保
持率が高いことが理解される。
実施例３
参考例１において得られた分離膜を攪拌器及び温度調整
器を備えたバッチ式膜透過試験機に取付け、下に示す組
成の酵素反応液（全ｆｔｔ８ｍｌ）ヒドロゲナーゼ
１．４単位（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ
ｒｕｈｌａｎｄｉｉ由来）乳酸脱水素酵素
９０．０単位（牛心臓由来） ピルビン酸 ３０．０ｍＭＮＡ
Ｄ”″ ３． Ｏｍ Ｍグ
リシルグリシン（ｐＨ７，５） １００．０ｍＭ
を入れ、圧力２ ｋｇ ／ ｃｔのガス状水素を還元剤
として、３５℃で１２時間反応させて、ピルビン酸から
乳酸を生産した。この後、反応液に圧力３ｋｇ／−の窒
素ガスによる加圧下にに反応液を透過させ、乳酸を分取
した。
器を備えたバッチ式膜透過試験機に取付け、下に示す組
成の酵素反応液（全ｆｔｔ８ｍｌ）ヒドロゲナーゼ
１．４単位（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ
ｒｕｈｌａｎｄｉｉ由来）乳酸脱水素酵素
９０．０単位（牛心臓由来） ピルビン酸 ３０．０ｍＭＮＡ
Ｄ”″ ３． Ｏｍ Ｍグ
リシルグリシン（ｐＨ７，５） １００．０ｍＭ
を入れ、圧力２ ｋｇ ／ ｃｔのガス状水素を還元剤
として、３５℃で１２時間反応させて、ピルビン酸から
乳酸を生産した。この後、反応液に圧力３ｋｇ／−の窒
素ガスによる加圧下にに反応液を透過させ、乳酸を分取
した。
ピルビン酸の転化率は１００％、ＮＡＤ”の保持率は９
６％であった。
６％であった。
実施例４
実施例３において、乳酸脱水素酵素の代わりにアルコー
ル脱水素酵素（パン酵母由来）を用い、基質としてアセ
トアルデヒドを用いた以外は、実施例２と同様にして、
エタノールを生産した。
ル脱水素酵素（パン酵母由来）を用い、基質としてアセ
トアルデヒドを用いた以外は、実施例２と同様にして、
エタノールを生産した。
アセトアルデヒドのエタノールへの転化率は１００％、
ＮＡＤ’の保持率は９５％であった。
ＮＡＤ’の保持率は９５％であった。
比較例１
実施例３において、分離膜として参考例工の膜に代えて
参考例２で得た膜を用いた以外は、同様にして乳酸を生
産した。
参考例２で得た膜を用いた以外は、同様にして乳酸を生
産した。
ピルビン酸の転化率は１００％であったが、ＮＡＤ”の
保持率は７６％であった。
保持率は７６％であった。
実施例５
実施例１において得られた分離膜を攪拌器及び温度調整
器を備えたバッキ弐膜透過試験機に取付け、下に示す組
成の酵素反応液（全量８ｍ１）ヒドロゲナーゼ
１．４単位（Ｍｅ ｔｂａｎｏｂａｃ ｔ
ｅｒ ｉｕｍ由来）Ｆ４２０−ＮＡＤＰ”オキシドレダ
クターゼ ２．９単位（Ｍｅｔｈａｎｏｂａｃｔｅｒ
ｉｕｍ由来）キシロースレダクターゼ ９０
単位（Ｃａｎｄｉｄａ ｐｅｌｌｉｃｕｌｏｓａ由来）
キシロース ３０．０ｍＭＮＡＤ
Ｐ’ ３．０ｍＭＦ４２０
０．３ｍ
Ｍグリシルグリシン １００．０ｍＭを入
れ、圧力２ ｋｇ ／ ｃｔＡのガス状水素を還元剤と
して、３５℃で１２時間反応させて、キシロースからキ
シリトールを生産した。この後、反応液に圧力３ｋｇ／
−の窒素ガスによる加圧下にに反応液を透過させ、キシ
リトールを分取した。
器を備えたバッキ弐膜透過試験機に取付け、下に示す組
成の酵素反応液（全量８ｍ１）ヒドロゲナーゼ
１．４単位（Ｍｅ ｔｂａｎｏｂａｃ ｔ
ｅｒ ｉｕｍ由来）Ｆ４２０−ＮＡＤＰ”オキシドレダ
クターゼ ２．９単位（Ｍｅｔｈａｎｏｂａｃｔｅｒ
ｉｕｍ由来）キシロースレダクターゼ ９０
単位（Ｃａｎｄｉｄａ ｐｅｌｌｉｃｕｌｏｓａ由来）
キシロース ３０．０ｍＭＮＡＤ
Ｐ’ ３．０ｍＭＦ４２０
０．３ｍ
Ｍグリシルグリシン １００．０ｍＭを入
れ、圧力２ ｋｇ ／ ｃｔＡのガス状水素を還元剤と
して、３５℃で１２時間反応させて、キシロースからキ
シリトールを生産した。この後、反応液に圧力３ｋｇ／
−の窒素ガスによる加圧下にに反応液を透過させ、キシ
リトールを分取した。
キシリトールの転化率は１００％であった。また、ＮＡ
ＤＰ” 、Ｆ４２０及びキシリトールの保持率はそれぞ
れ９５．５％、１００％及び０％であった。
ＤＰ” 、Ｆ４２０及びキシリトールの保持率はそれぞ
れ９５．５％、１００％及び０％であった。
比較例３
緩衝液として１／１５Ｍのトリス塩酸塩緩衝液を用いた
以外は、実施例５と同様にして、キシロースからキシリ
トールを生産した。キシロースの転化率は１００％であ
ったが、ＮＡＤＩ）”、Ｆ４２０及びキシリトールの保
持率はそれぞれ５０％、９２％及び０％であった。
以外は、実施例５と同様にして、キシロースからキシリ
トールを生産した。キシロースの転化率は１００％であ
ったが、ＮＡＤＩ）”、Ｆ４２０及びキシリトールの保
持率はそれぞれ５０％、９２％及び０％であった。
Claims (6)
- （１）酸化還元酵素、補酵素及び基質の存在下に、補酵
素の再生反応と所定の酵素反応とを共役させて行なわせ
、生成した反応混合物における補酵素と反応生成物とを
分離する酵素反応方法であつて、上記反応混合物を両性
イオン緩衝液の存在下に負荷電を有する逆浸透膜又は超
濾過膜にて処理して、上記酵素及び補酵素を膜内に保持
し、酵素反応生成物を膜透過させることを特徴とする酵
素反応方法。 - （２）両性イオン緩衝液がグリシルグリシン緩衝液であ
ることを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の酵素反
応方法。 - （３）両性イオン緩衝液がバルビタール緩衝液であるこ
とを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の酵素反応方
法。 - （４）負荷電を有する逆浸透膜又は超濾過膜がスルホン
酸基を有する分離膜であることを特徴とする特許請求の
範囲第１項記載の酵素反応方法。 - （５）負荷電を有する逆浸透膜又は超濾過膜内において
、酸化還元酵素、補酵素及び基質の存在下に、補酵素の
再生反応と所定の酵素反応とを共役させて行なうことを
特徴とする特許請求の範囲第１項記載の酵素反応方法。 - （６）負荷電を有する逆浸透膜又は超濾過膜が温度２５
℃、圧力１０ｋｇ／ｃｍ＾２の条件下に濃度０．５％の
塩化ナトリウム水溶液を処理したとき、少なくとも３％
の塩除去率を有することを特徴とする特許請求の範囲第
１項記載の酵素反応方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24497085A JPS62104586A (ja) | 1985-10-30 | 1985-10-30 | 酵素反応方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24497085A JPS62104586A (ja) | 1985-10-30 | 1985-10-30 | 酵素反応方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62104586A true JPS62104586A (ja) | 1987-05-15 |
| JPH0528109B2 JPH0528109B2 (ja) | 1993-04-23 |
Family
ID=17126658
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP24497085A Granted JPS62104586A (ja) | 1985-10-30 | 1985-10-30 | 酵素反応方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS62104586A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2016104020A (ja) * | 2009-08-06 | 2016-06-09 | アニッキ ゲーエムベーハーＡｎｎｉｋｋｉ Ｇｍｂｈ | リグノセルロース原料から炭水化物分解産物を製造するプロセス |
| US10563237B2 (en) | 2012-11-14 | 2020-02-18 | Annikki Gmbh | Method for obtaining sugar derivatives |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0730326A (ja) * | 1993-07-08 | 1995-01-31 | Kokusai Electric Co Ltd | 電圧制御発振器 |
-
1985
- 1985-10-30 JP JP24497085A patent/JPS62104586A/ja active Granted
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2016104020A (ja) * | 2009-08-06 | 2016-06-09 | アニッキ ゲーエムベーハーＡｎｎｉｋｋｉ Ｇｍｂｈ | リグノセルロース原料から炭水化物分解産物を製造するプロセス |
| US9970038B2 (en) | 2009-08-06 | 2018-05-15 | Annikki Gmbh | Process for the production of carbohydrate cleavage products from a lingnocellulosic material |
| US10563237B2 (en) | 2012-11-14 | 2020-02-18 | Annikki Gmbh | Method for obtaining sugar derivatives |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0528109B2 (ja) | 1993-04-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5401410A (en) | Membrane and process for the production thereof | |
| NZ202805A (en) | Asymmetrical macroporous membranes | |
| US5145584A (en) | Processes for using a thin film composite ultrafiltration membrane | |
| JPS6335B2 (ja) | ||
| US4613440A (en) | Composite membranes based on interpenetrating polymer networks | |
| JPS6354903A (ja) | パ−ベ−パレ−シヨン用分離膜 | |
| EP0562371B1 (de) | Immobilisierung biochemischer Substanzen | |
| JPS62104586A (ja) | 酵素反応方法 | |
| EP0562373A2 (de) | Immobilisierung biochemischer Substanzen | |
| Hirose et al. | Wet poly (vinyl chloride) membrane | |
| US4747953A (en) | Composite membranes based on interpenetrating polymer networks | |
| DK1099468T3 (da) | Mikroporös hydrofil membran | |
| Burdick et al. | Co-immobilized coupled enzyme systems on nylon mesh capable of gluconic and pyruvic acid production | |
| JPS62104588A (ja) | キシリト−ルの製造方法 | |
| JPS63130105A (ja) | 選択透過性複合膜の製造方法 | |
| JPH0543714B2 (ja) | ||
| US4695483A (en) | Method for the preparation of composite membranes based on interpenetrating polymer networks | |
| EP0273679A2 (en) | Improved method for effecting enzymatic reactions and an enzymatic reactor useful therein | |
| JPH02131586A (ja) | 試薬の化学的活性形を使用及び再生する方法 | |
| JPS588836B2 (ja) | 固定化酵素及びその製造方法 | |
| JPS6344885A (ja) | 酵素固定化ダイナミツクス膜 | |
| JPH02195894A (ja) | ガラクトオリゴ糖の製造方法 | |
| JPS61209007A (ja) | 補酵素の選択的分離方法 | |
| LEI | Stimuli-responsive microfiltration membranes and surfaces from copolymers with grafted functional side chains | |
| JPH0584433A (ja) | 複合膜及びそれを用いる液体混合物の分離方法 |