JPS6196999A - 細菌の薬剤感受性検査方法 - Google Patents
細菌の薬剤感受性検査方法Info
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- JPS6196999A JPS6196999A JP22003384A JP22003384A JPS6196999A JP S6196999 A JPS6196999 A JP S6196999A JP 22003384 A JP22003384 A JP 22003384A JP 22003384 A JP22003384 A JP 22003384A JP S6196999 A JPS6196999 A JP S6196999A
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- Japan
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- bacterial
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- tubes
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、感染症の化学療法を行うにあたって、有効な
薬剤の選択またはその薬剤の抗菌力を知るための細菌の
薬剤感受性検査方法に関するものである。
薬剤の選択またはその薬剤の抗菌力を知るための細菌の
薬剤感受性検査方法に関するものである。
一般に細菌の薬剤感受性検査方法は、希釈法と拡散法に
大別されるが通常薬剤の最小発育阻止濃度（Ｍｉｎｉｍ
ｕｍ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉ
ｏｎ ； ＭＩＣ）を求める方法としては、希釈法が用
いられる。希釈法には寒天平板希釈法と液体培地希釈法
とがあり、いずれも薬剤を一定濃度段階で含有する培地
に、被検菌液を接種し、一定時間培養後、判定を行う。
大別されるが通常薬剤の最小発育阻止濃度（Ｍｉｎｉｍ
ｕｍ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉ
ｏｎ ； ＭＩＣ）を求める方法としては、希釈法が用
いられる。希釈法には寒天平板希釈法と液体培地希釈法
とがあり、いずれも薬剤を一定濃度段階で含有する培地
に、被検菌液を接種し、一定時間培養後、判定を行う。
従来、試験管またはシャーレ等で行われている判定は、
培地上に発生した菌の集落の数、性状まＩこは培地表面
の色の対比、濁度など、菌の発育そのものを目安にした
もので、対照培地との比較において、多数の試験管、シ
ャーレ等の観察が必要とされ、またある種の判定表を用
いるなど、およそ簡易な操作とは言い難く試験結果に誤
りが生じる場合もある。また近年開発された液体培地を
使用する薬剤感受性測定機械は、成域本体が高価である
ばかりでなく、その操作法も未だ半自動化の域をでてお
らず、結局煩雑な操作を必要としているのが現状である
。
培地上に発生した菌の集落の数、性状まＩこは培地表面
の色の対比、濁度など、菌の発育そのものを目安にした
もので、対照培地との比較において、多数の試験管、シ
ャーレ等の観察が必要とされ、またある種の判定表を用
いるなど、およそ簡易な操作とは言い難く試験結果に誤
りが生じる場合もある。また近年開発された液体培地を
使用する薬剤感受性測定機械は、成域本体が高価である
ばかりでなく、その操作法も未だ半自動化の域をでてお
らず、結局煩雑な操作を必要としているのが現状である
。
本発明は、上記従来の薬剤感受性試験の判定における欠
点を伴うことなく、細菌の発育を簡単な操作で正確に判
定できようにした細菌の薬剤感受性検査方法を提供する
ものである。
点を伴うことなく、細菌の発育を簡単な操作で正確に判
定できようにした細菌の薬剤感受性検査方法を提供する
ものである。
現在、細菌の固定に関しては、多種生化学性状を基盤と
して菌種の同定が行われている。主に酵素反応が中心で
あるが、基質と指示薬の組み合せた培地等に菌を接種し
、その色調の変化でもって陽性、陰性を判定し、十数項
目にわたる性状について調べ、解析表等によって種レベ
ルまでの同定が行われている。
して菌種の同定が行われている。主に酵素反応が中心で
あるが、基質と指示薬の組み合せた培地等に菌を接種し
、その色調の変化でもって陽性、陰性を判定し、十数項
目にわたる性状について調べ、解析表等によって種レベ
ルまでの同定が行われている。
本発明は、この同定理論に着目し、細菌の薬剤感受性検
査における判定、つまり細菌の発育確認を同細菌の有す
るある種の基質に対する反応、すなわち、細面の発育に
伴う酵素活性の増大を指標として簡便化、正確化をはか
り、かつ廉価で供給しようとするものである。その具体
的手段としては、細菌培養容器の培養槽に薬剤を一定の
希釈系列で含有させた培地を充堺し、被検菌の接種前又
は培養後に細菌の発育の指標となる基質を添加し、一定
時間反応後、容器を転倒させることにより、基質又は基
質分解生成物に対する指示薬ないし発色剤を含有してい
る反応材にて、細菌の発育の有無を色調の変化で検出す
るようにしている。
査における判定、つまり細菌の発育確認を同細菌の有す
るある種の基質に対する反応、すなわち、細面の発育に
伴う酵素活性の増大を指標として簡便化、正確化をはか
り、かつ廉価で供給しようとするものである。その具体
的手段としては、細菌培養容器の培養槽に薬剤を一定の
希釈系列で含有させた培地を充堺し、被検菌の接種前又
は培養後に細菌の発育の指標となる基質を添加し、一定
時間反応後、容器を転倒させることにより、基質又は基
質分解生成物に対する指示薬ないし発色剤を含有してい
る反応材にて、細菌の発育の有無を色調の変化で検出す
るようにしている。
前記基質としては、アドニトール、アラビノース、アミ
ダブリ・ン、セロビオース、ダルシミトール、フラクト
ース、グリセロール、グリコーゲン、α−メチルグリコ
サイド、Ｎ−アセチルグリコサミン、２−ケトーＤ−グ
ルコニックアシッド、ガラクトース、イノシトール、イ
ヌリン、ラクトース、マルトース、マンニトール、マン
ノース、メリビオース、フラクトース、ラフィノース、
リボース、サリシン、ソルビトール、スターチ、シュー
クロース、トレハロース、ツラノース、キシロース、キ
シリット、アルギニン、エスクリン、ゼラチン、６−Ｂ
ｒ−２ナフチルα−Ｄガラクトピラノサイド、２−ナフ
チルβ−Ｄガラクトピラノサイド、ナフトールＭＳ−Ｂ
Ｉβ−Ｄグルクロネート、ヒソプレート、リジン、Ｌ−
ロイシル２−ナフチルアミド、オルトニトロフェニール
−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、２−ナフチルフォスフ
ェート、尿素、過酸化水素、クエン酸塩、マロン酸塩、
硝酸塩、ピルビン酸塩、トリプトファン、ペプトン、チ
オサルフェート、テトラゾリウム各種誘導体、４メチル
ウンベリフ工リル各種誘導体などがあげられる。
ダブリ・ン、セロビオース、ダルシミトール、フラクト
ース、グリセロール、グリコーゲン、α−メチルグリコ
サイド、Ｎ−アセチルグリコサミン、２−ケトーＤ−グ
ルコニックアシッド、ガラクトース、イノシトール、イ
ヌリン、ラクトース、マルトース、マンニトール、マン
ノース、メリビオース、フラクトース、ラフィノース、
リボース、サリシン、ソルビトール、スターチ、シュー
クロース、トレハロース、ツラノース、キシロース、キ
シリット、アルギニン、エスクリン、ゼラチン、６−Ｂ
ｒ−２ナフチルα−Ｄガラクトピラノサイド、２−ナフ
チルβ−Ｄガラクトピラノサイド、ナフトールＭＳ−Ｂ
Ｉβ−Ｄグルクロネート、ヒソプレート、リジン、Ｌ−
ロイシル２−ナフチルアミド、オルトニトロフェニール
−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、２−ナフチルフォスフ
ェート、尿素、過酸化水素、クエン酸塩、マロン酸塩、
硝酸塩、ピルビン酸塩、トリプトファン、ペプトン、チ
オサルフェート、テトラゾリウム各種誘導体、４メチル
ウンベリフ工リル各種誘導体などがあげられる。
また反応材にあらかじめ含有させて用いる指示薬ないし
発色剤としては、フェノールレッド、ブロムチモールブ
ルー、ブロムクレゾールパープル、メチルバイオレット
、チモールブルー、ニュートラルレッド、クロルフェノ
ールレッド、クレゾールレッド、フェノールフタレイン
、レサズリン、ニンヒドリン試薬、塩化第二鉄、バラア
ミノジエチルアニリン、スルファニール酸、α−ナフチ
ルアミン、塩化カリウム、α−ナフトール、コハソク試
薬などがあげられる。
発色剤としては、フェノールレッド、ブロムチモールブ
ルー、ブロムクレゾールパープル、メチルバイオレット
、チモールブルー、ニュートラルレッド、クロルフェノ
ールレッド、クレゾールレッド、フェノールフタレイン
、レサズリン、ニンヒドリン試薬、塩化第二鉄、バラア
ミノジエチルアニリン、スルファニール酸、α−ナフチ
ルアミン、塩化カリウム、α−ナフトール、コハソク試
薬などがあげられる。
上記手段を施した結果、本発明の薬剤感受性検査方法で
は、腸内細菌科をはじめ、結核菌、真菌など、通常臨床
ｍ凹検査室で取り扱われるすべての菌種について、その
発育を簡単な操作で正確に判定できるようになった。
は、腸内細菌科をはじめ、結核菌、真菌など、通常臨床
ｍ凹検査室で取り扱われるすべての菌種について、その
発育を簡単な操作で正確に判定できるようになった。
以下、本発明の構成を実施例に従い詳述する。
実施例では、第１図に示したような、容器本体（１）の
長手方向の一方側部に上部が互いに連通した複数の菌液
接種槽（２）を設け、他方側部に各々が独立した複数の
培＃槽（３）を設け、これら菌液接種槽（２）と培養槽
（３）とを、起伏通路（４）により連通し、さらに前記
培養槽（３）の上方に当る位置に小孔（５）を設けた被
覆フィルム（６）を前記容器本体（１）の上面に貼着す
ると共に、この被覆フィルム（６）に設けた小孔（５）
を塞ぐようにして被覆フィルム（６）の上面に、基質又
は基質分解生成物に対する指示薬ないし発色剤を含有し
ている反応材（７）を連設したテープ（８）を貼着した
細菌検査用培養容器であるとか、第２図に示したような
、容器本体（１）に多数の培養槽（３）を複数列並設し
、これら培養ｉ！Ｉ（３）の上方に当る位置に、基質又
は基質分解生成物に対する指示薬ないし発色剤を含有し
ている反応材（７）を連設したテープ（８）を複数列貼
着した細菌検査用培養容器を用いて本発明の検査方法を
実施した。
長手方向の一方側部に上部が互いに連通した複数の菌液
接種槽（２）を設け、他方側部に各々が独立した複数の
培＃槽（３）を設け、これら菌液接種槽（２）と培養槽
（３）とを、起伏通路（４）により連通し、さらに前記
培養槽（３）の上方に当る位置に小孔（５）を設けた被
覆フィルム（６）を前記容器本体（１）の上面に貼着す
ると共に、この被覆フィルム（６）に設けた小孔（５）
を塞ぐようにして被覆フィルム（６）の上面に、基質又
は基質分解生成物に対する指示薬ないし発色剤を含有し
ている反応材（７）を連設したテープ（８）を貼着した
細菌検査用培養容器であるとか、第２図に示したような
、容器本体（１）に多数の培養槽（３）を複数列並設し
、これら培養ｉ！Ｉ（３）の上方に当る位置に、基質又
は基質分解生成物に対する指示薬ないし発色剤を含有し
ている反応材（７）を連設したテープ（８）を複数列貼
着した細菌検査用培養容器を用いて本発明の検査方法を
実施した。
そこで、液体培地希釈法を使用した薬剤感受性検査方法
について、臨床分離結核菌１０株を対象に抗結核薬のＭ
ＩＣＩＣ窓を行った。抗結核薬としては、リファンピシ
ン、カナマイシン、イソニアシト、ストレプトマイシン
の４種類で、前記細菌検査用培養容器の培養槽（３）に
５ｖ！づつ、菌液接種後濃度として１０吻／−Ｊ’ 、
５し／／％／、２％／ジ、１２．火々、６．２５／ｌｙ
々、３．１に、々、１．５６２４り／、、／ 、 ０．
７号、（メツ１−）？、 ０．３Ｑンーメ／づ一ン一、
０．２９．へ〆／１−ｌピ、０．１ｏ／１４／ＪＴ、
Ｏｌの１２／度となるようＭｉｄｄｌｅ ｂｒ。
について、臨床分離結核菌１０株を対象に抗結核薬のＭ
ＩＣＩＣ窓を行った。抗結核薬としては、リファンピシ
ン、カナマイシン、イソニアシト、ストレプトマイシン
の４種類で、前記細菌検査用培養容器の培養槽（３）に
５ｖ！づつ、菌液接種後濃度として１０吻／−Ｊ’ 、
５し／／％／、２％／ジ、１２．火々、６．２５／ｌｙ
々、３．１に、々、１．５６２４り／、、／ 、 ０．
７号、（メツ１−）？、 ０．３Ｑンーメ／づ一ン一、
０．２９．へ〆／１−ｌピ、０．１ｏ／１４／ＪＴ、
Ｏｌの１２／度となるようＭｉｄｄｌｅ ｂｒ。
ｏｋ７Ｈ９液体培地で調整した。また比較対照法として
は、市販の上記薬剤含有の１％小川培地を使用した。接
種は、マンクファーランド０．２に調整した菌液を液体
培地希釈法では培養槽（３）に５０／、前記薬剤含有１
％小川培地には１ｏｏ／Ａ／！流し込み、培養期間は、
３７℃で液体培地希釈法では１ｏ日間、薬剤含有１％小
川培地では３週間とした。判定は、薬剤含有１％小川培
地では従来の集落の発生、数、性状より感受性、耐性を
＋、−で表わし、また液体培地希釈法では本発明による
方法を用いた。この場合の検出法では、結核菌の有する
硝酸塩還元能をみたもので基質としては、Ｍ１５０硝酸
ナトリウム液を判定日当口、各培養槽（３）に１００７
Ｊづつ加え３７℃で２時間放置後、容器本体（１）を転
倒させ、発色剤を含んだ反応材（７）上の赤紫色の発現
で発育の有無を観察しＭＩＣ値を求めた。前記反応材（
７）としては、スルファニル酸２ｇ、Ｎ−１ナフチル工
チレンジアミン２ｇ、酒石酸２０ｇをｌＯＯ〜どの蒸留
水に溶解させた液３０メを、直径８鰭のディスクに含浸
させ風乾させたものを用いた。
は、市販の上記薬剤含有の１％小川培地を使用した。接
種は、マンクファーランド０．２に調整した菌液を液体
培地希釈法では培養槽（３）に５０／、前記薬剤含有１
％小川培地には１ｏｏ／Ａ／！流し込み、培養期間は、
３７℃で液体培地希釈法では１ｏ日間、薬剤含有１％小
川培地では３週間とした。判定は、薬剤含有１％小川培
地では従来の集落の発生、数、性状より感受性、耐性を
＋、−で表わし、また液体培地希釈法では本発明による
方法を用いた。この場合の検出法では、結核菌の有する
硝酸塩還元能をみたもので基質としては、Ｍ１５０硝酸
ナトリウム液を判定日当口、各培養槽（３）に１００７
Ｊづつ加え３７℃で２時間放置後、容器本体（１）を転
倒させ、発色剤を含んだ反応材（７）上の赤紫色の発現
で発育の有無を観察しＭＩＣ値を求めた。前記反応材（
７）としては、スルファニル酸２ｇ、Ｎ−１ナフチル工
チレンジアミン２ｇ、酒石酸２０ｇをｌＯＯ〜どの蒸留
水に溶解させた液３０メを、直径８鰭のディスクに含浸
させ風乾させたものを用いた。
以上の操作により測定した臨床分離株の本発明の方法に
よるＭＩＣ値と薬剤含有１％小川培地による近似ＭＩＣ
値との比較結果は、表■に示す通りである。
よるＭＩＣ値と薬剤含有１％小川培地による近似ＭＩＣ
値との比較結果は、表■に示す通りである。
（以下余白）
〔発明の効果〕
本発明の細菌の薬剤感受性検査方法は、以上に述べたよ
うに構成されているので、細菌の発育を容器本体を転倒
させることにより、簡単な操作で正確に判定できるもの
であり、優れた効果を有する。
うに構成されているので、細菌の発育を容器本体を転倒
させることにより、簡単な操作で正確に判定できるもの
であり、優れた効果を有する。
尚、本発明は一薬剤については同一の容器に一定の濃度
希釈系列で調整しているので、接種等の操作が容易で正
確なＭＩＣ値が得られるという効果を有し、また発育の
確認は、集落の発生ではなく、細菌の生化学性状に基づ
いているので、ＭＩＣ値の誤判定が少ないという効果を
有する。
希釈系列で調整しているので、接種等の操作が容易で正
確なＭＩＣ値が得られるという効果を有し、また発育の
確認は、集落の発生ではなく、細菌の生化学性状に基づ
いているので、ＭＩＣ値の誤判定が少ないという効果を
有する。
さらに、本発明では検出系の指示薬ないし発色剤等を培
地とは別に構成しているので、あらかじめ培地中に混在
されているものと比較して、保存安定性と試薬安定性と
が良好であり、また酵素反応後発色操作を行うので、あ
る種の指示薬ないし発色剤により発育の阻害を受ける性
質を有する細菌の薬剤感受性検査を行うこともできると
いう効果を有する。
地とは別に構成しているので、あらかじめ培地中に混在
されているものと比較して、保存安定性と試薬安定性と
が良好であり、また酵素反応後発色操作を行うので、あ
る種の指示薬ないし発色剤により発育の阻害を受ける性
質を有する細菌の薬剤感受性検査を行うこともできると
いう効果を有する。
また、本発明においては薬剤の一定濃度の希釈系列で行
う本来のＭＩＣ値測定用としてだけでなく、種々の抗菌
剤のそれぞれについての一定濃度のもので行うことによ
りスクリーニング用として実施することができ、さらに
は添加基質と発色系の適当な組み合せにより、細菌の同
定用としての機能を有することが可能であるという効果
を有する。
う本来のＭＩＣ値測定用としてだけでなく、種々の抗菌
剤のそれぞれについての一定濃度のもので行うことによ
りスクリーニング用として実施することができ、さらに
は添加基質と発色系の適当な組み合せにより、細菌の同
定用としての機能を有することが可能であるという効果
を有する。
第１図は本発明の細菌の薬剤感受性検査方法に用いる細
菌検査用培養容器の一実施例を示す斜視図、第２図はそ
の細菌検査用培養容器の他実施例を示す斜視図である。
菌検査用培養容器の一実施例を示す斜視図、第２図はそ
の細菌検査用培養容器の他実施例を示す斜視図である。
Claims (1)
- １、複数の独立した凹状部からなる培養槽の上方に、そ
れぞれ反応材を装着した細菌培養容器を用いて、その培
養槽に薬剤を一定の希釈系列で含有させた培地を充填し
、被検菌の接種前又は培養後に細菌の発育の指標となる
基質を添加し、一定時間反応後、前記細菌培養容器を転
倒させて菌液を反応材に浸漬させることにより、細菌の
発育の有無を反応材の色調の変化で検出することを特徴
とする細菌の薬剤感受性検査方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP22003384A JPS6196999A (ja) | 1984-10-18 | 1984-10-18 | 細菌の薬剤感受性検査方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP22003384A JPS6196999A (ja) | 1984-10-18 | 1984-10-18 | 細菌の薬剤感受性検査方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6196999A true JPS6196999A (ja) | 1986-05-15 |
| JPH0527397B2 JPH0527397B2 (ja) | 1993-04-21 |
Family
ID=16744873
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP22003384A Granted JPS6196999A (ja) | 1984-10-18 | 1984-10-18 | 細菌の薬剤感受性検査方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6196999A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5728350A (en) * | 1992-08-21 | 1998-03-17 | Showa Yakuhin Kako Co., Ltd. | Chemical or microbiological test kit |
| US5955352A (en) * | 1994-12-22 | 1999-09-21 | Showa Yakuhin Kako Co., Ltd. | Instruments for chemical and microbiological tests |
| WO2005047454A1 (ja) * | 2003-11-13 | 2005-05-26 | Ajinomoto Co., Inc. | アミノ酸培地を含有するプレート及びアミノ酸培地を含有するプレートを用いたスクリーニング方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS52154581A (en) * | 1976-01-12 | 1977-12-22 | Unilever Nv | Stabilization of compound |
| JPS5332188A (en) * | 1976-09-07 | 1978-03-27 | Warner Lambert Co | Method and apparatus for diagnosis |
| JPS5661998A (en) * | 1979-10-11 | 1981-05-27 | American Home Prod | Microorganism test method and apparatus |
-
1984
- 1984-10-18 JP JP22003384A patent/JPS6196999A/ja active Granted
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS52154581A (en) * | 1976-01-12 | 1977-12-22 | Unilever Nv | Stabilization of compound |
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Cited By (5)
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| US5728350A (en) * | 1992-08-21 | 1998-03-17 | Showa Yakuhin Kako Co., Ltd. | Chemical or microbiological test kit |
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| WO2005047454A1 (ja) * | 2003-11-13 | 2005-05-26 | Ajinomoto Co., Inc. | アミノ酸培地を含有するプレート及びアミノ酸培地を含有するプレートを用いたスクリーニング方法 |
| JPWO2005047454A1 (ja) * | 2003-11-13 | 2007-05-31 | 味の素株式会社 | アミノ酸培地を含有するプレート及びアミノ酸培地を含有するプレートを用いたスクリーニング方法 |
| JP4770463B2 (ja) * | 2003-11-13 | 2011-09-14 | 味の素株式会社 | アミノ酸培地を含有するプレート及びアミノ酸培地を含有するプレートを用いたスクリーニング方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0527397B2 (ja) | 1993-04-21 |
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