JPS61500611A - Immune responses to tumors and viruses induced by anti-idiotypic antibodies - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。 (57) [Summary] This bulletin contains application data before electronic filing, so abstract data is not recorded.

Description

【発明の詳細な説明】 抗イデイオタイプ抗体によって誘発される、腫瘍およびウィルスに対する免疫応 答 〔技術分野〕 この発明は、抗原、特に腫瘍やウィルスに対する免疫学的反応を誘発することに 関するものである。さらに詳細には、この発明は、このような免疫学的反応の誘 発に対するアンチイディオタイプ抗体の使用、並びに、抗体およびこれを産生ず るセルラインに関するものである。[Detailed description of the invention] Immune responses to tumors and viruses induced by anti-idiotypic antibodies Answer 〔Technical field〕 This invention is effective in inducing an immunological response against antigens, especially tumors and viruses. It is related to More specifically, the present invention aims to induce such an immunological response. The use of anti-idiotypic antibodies against cancer, as well as the use of anti-idiotypic antibodies against This is related to cell lines.

〔発明の背景〕[Background of the invention]

（ＶＬ）の可変領域中のアミノ酸配列は、抗原結合部位（すなわちパロトープ］ 中に、特異的な抗原と上記抗体とを相互作用させるコンホメーションを形成する 。 The amino acid sequence in the variable region of (VL) is the antigen binding site (i.e. parotope) forms a conformation that allows the specific antigen to interact with the antibody. .

異種の受容体動物に免疫グロブリンを注射すると、抗ゼノタイプ（種に特異的な 〕、抗アイソタイプ（免疫グロブリンのクラスに特異的な）および抗イデイオタ イプ（抗体の可変領域に特異的な〕抗体を作ることになる。抗イデオタイプの抗 体には２種の機能的クラスが存在することができ、その１つはパロトープに作用 するものであり、他の１つはＨｊｌｌおよび／またはＬ鎖（Ｄ７Ｌ／−ムワーク に作用するもの（フレームワーク決定基）である。一般的に、ジ五−ハ、二ニー ・イングランド・ジャーナル・オブ・メディシン（Ｎ、Ｅｎｇｌ　、Ｊ　。Injection of immunoglobulin into a recipient animal of a different species results in anti-xenotypic (species-specific) ], anti-isotypes (specific for a class of immunoglobulins) and anti-idiotypes Anti-idiotype antibodies (specific to the variable region of antibodies) are produced. Two functional classes can exist in the body, one of which acts on the parotope. and the other one is Hjll and/or L chain (D7L/-Muwak (framework determinants). In general, Ji-5-ha, Ni-nee ・English Journal of Medicine (N, Engl, J.

Ｍｅｄ、）　３０５巻２５−２８頁（１９８１年）、ジエーン、アナレス・デ・ イミノロジー（Ａｎｎ　、Ｉｒｒｍｕｎｏ　ｌ　、）１２５巻Ｃ２３７３−３８ ９頁（１９７４年）参照＠〔発明の概要〕 この発明は、腫瘍、特に固形腫瘍のような腫瘍や狂犬病ウィルスのようなウィル スに対する免疫学的応答を誘発させる方法を提供することを目的とするものであ る。Med,) Volume 305, pp. 25-28 (1981), Jeanne, Annales de. Immunology (Ann, Irrmunol,) Volume 125 C2373-38 See page 9 (1974) @ [Summary of the invention] This invention is useful for treating tumors, especially tumors such as solid tumors and viruses such as rabies virus. The purpose of this research is to provide a method for inducing an immunological response to Ru.

この発明は、上記のような免疫学的応答の生起に抗イデイタイプ抗体を使用する ことをも目的としている。This invention uses anti-Ideitype antibodies to generate an immunological response as described above. It is also aimed at

さらに他のこの発明の目的は、腫瘍特に固形Ｗ１瘍や狂犬病ウィルスのようなウ ィルスに対し、免疫学的応答を誘導するのに有用なモノクロナール抗イデイオタ イプ抗体および上記抗体のためのイモータル（不死）Ｂリンパ球源を提供するこ とにある。Yet another object of the invention is to treat tumors such as solid W1 tumors and viruses such as rabies virus. monoclonal anti-idiopathic agents useful in inducing immunological responses against viruses. and a source of immortal B lymphocytes for said antibodies. It's there.

そして、本発明における上述および他の目的は、１あるいはそれ以上の後述の実 施態様によって達成され実施態様の１つとして、この発明は、腫瘍またはウィル スから選択した抗原に対する免疫学的応答を誘発する方法において、 （ａ）抗イデイオタイプ抗体をもたらし、上記抗イデイオタイプ抗体によって同 定されるエピトープは抗腫瘍または抗ウイルス抗体のパトロープであり、（ｂ） 上記抗イデイオタイプ抗体をひとに投与することにより腫瘍細胞またはウィルス 粒子上のエイトープを同定する抗（抗イディオタイプ〕抗体の産生を患者に促す こと からなる方法を提供するものである。The above and other objects of the invention may be accomplished by one or more of the below-mentioned implementations. In one embodiment, the present invention provides a method for treating tumors or viruses. In a method of eliciting an immunological response against an antigen selected from (a) bring about an anti-idiotype antibody; the epitope determined is a patrope of anti-tumor or anti-viral antibodies; (b) By administering the above anti-idiotype antibodies to humans, tumor cells or viruses can be detected. Encourage patients to produce anti-(anti-idiotypic) antibodies that identify the eitope on the particles thing The present invention provides a method consisting of:

この発明は、ポリクローナル抗イデイオタイプ抗体であって、上記抗イデイオタ イプ抗体によって同定されるエピトープが実質的に抗アイソタイプ抗体を含まな い抗腫瘍および抗ウイルス抗体のパロトープであるものをも提供するものである 。This invention provides a polyclonal anti-idiotype antibody, comprising: The epitope identified by the isotype antibody is substantially free of anti-isotype antibodies. It also provides a parotope for anti-tumor and anti-viral antibodies. .

他の実施態様としては、この発明は、抗イデイオタイプ抗体であって上記抗イデ イオタイプ抗体によって同定されるエピトープが抗腫瘍および抗ウイルス抗体の パロトープである抗体を産生するイモータルＢのリンパ球を提供するものである 。In another embodiment, the present invention provides an anti-idiotype antibody, the anti-idiotype antibody as described above. The epitopes identified by the isotypic antibodies can be used for anti-tumor and anti-viral antibodies. It provides Immortal B lymphocytes that produce antibodies that are parotopes. .

適当な腫瘍は、固形消化器系腫瘍のような固形腫瘍である。適当なウィルスは、 インフルエンザ、単純性ヘルペス、肝炎、および特に狂犬病ウィルスである。Suitable tumors are solid tumors, such as solid gastrointestinal tumors. A suitable virus is influenza, herpes simplex, hepatitis, and especially rabies virus.

この発明にしたがって抗イデイオタイプ抗体の投与に際しては、対象、特に哺乳 類、ざらにひとを刺激して、腫瘍細胞またはウィルス粒子上のエピトープを同定 する抗（抗イディオタイプ〕抗体を産生させる。When administering an anti-idiotype antibody according to this invention, the subject, particularly a breast-feeding Stimulate humans to identify epitopes on tumor cells or viral particles to produce anti-(anti-idiotype) antibodies.

〔発明の詳細な記載〕[Detailed description of the invention]

本発明は、がん療法およびウィルス免疫に対して独特な万策を提供する。従来、 腫瘍療法における万策は。 The present invention provides a unique strategy for cancer therapy and viral immunization. Conventionally, What is the best plan for tumor therapy?

腫瘍を破壊しようと意図する患者に対し抗ＷＬ瘍抗体（すなわち、固形＊ｇ細胞 上のエピトープを同定する抗体〕を投与することを意味した。従来、抗ウイルス 療法は調製ワクチンによる免疫を意味した。しかしながら、本出願人は、腫瘍ま たはウィルス抗原を認識する抗体に対して抗イデイオタイプな抗体によって、患 者自身の腫瘍あるいはウィルスに対する免疫応答を引き起こさせうることを発見 した。この免疫応答を誘導するのは、治療法として有益であり、少なくともウィ ルスの場合には、予防法として有益である。Anti-WL tumor antibodies (i.e., solid * This meant administering an antibody that identified the above epitope. Traditionally, antiviral Therapy meant immunization with prepared vaccines. However, the applicant or by anti-idiotypic antibodies against antibodies that recognize viral antigens. discovered that patients can trigger an immune response against their own tumors or viruses. did. Inducing this immune response would be beneficial as a treatment, and at least In the case of russ, it is useful as a prophylactic measure.

出願人は、実施に関する゛いかなる特定の理論とも結びつくことを望まないが、 本発明によって達成される上記免瘍応答は、抗イデイオタイプ抗体分子と患者の 免疫系との間の相互作用のため起こると思われる。抗イデイオタイプ抗体分子の イディオタイプ（すなわち可変〕領域は、患者によって抗原と見なされる抗原決 定基（エピトープ）を含む。これは、患者に抗（抗イデイオタイプ）抗体の産生 を誘発させる。抗（抗イデイオタイプ）抗体のセットの中には、抗イデイオタイ プ抗体のパロトープに対して直接相補的なものがある。Although applicants do not wish to be associated with any particular theory of implementation, The above-mentioned immune response achieved by the present invention is achieved by combining anti-idiotype antibody molecules and the patient's It is thought to occur due to interactions with the immune system. anti-idiotype antibody molecules The idiotypic (or variable) region is an antigen determinant that is considered an antigen by the patient. Contains constant groups (epitopes). This causes the patient to develop anti-(anti-idiotype) antibodies. induce. Some anti-(anti-idiotype) antibody sets include anti-idiotype antibodies. are directly complementary to the parotope of the protein antibody.

抗−イディオタイプ抗体のバロトープは、イディオタイプ抗体によって同定した （すなわち選択的に結合した）腫瘍細胞またはウィルスのエピトープの「内部の 」イメージを現出させ、したがって、抗（抗イデイオタイプ）抗体は、腫瘍また はウィルスの抗原にも結合すると考えられる。実際２本号法は、患者の産生ずる 抗体の一部に腫瘍またはウィルス抗原と本質的に区別がつかない抗原（抗イデイ オタイプ抗体のバロタイプ）を出現させることにより、腫瘍およびウィルスに対 する免疫応答を誘発する。Barotopes of anti-idiotype antibodies were identified by idiotype antibodies. (i.e. selectively bound) tumor cell or viral epitope. ” image and therefore anti-(anti-idiotype) antibodies may is thought to also bind to viral antigens. In fact, the second method is to reduce the patient's production Some antibodies contain antigens that are essentially indistinguishable from tumor or viral antigens. Antibodies against tumors and viruses induces an immune response that

意外にも、上記方法は、腫瘍成長を抑制し、または。Surprisingly, the above methods inhibit tumor growth or.

ウィルスに対する免疫応答を誘発するための効果的方法である。さらに、多くの 従来方法に対していくつかの長所を持っている。第１＆ζ、はとんどの外来抗原 を患者に投与する必要がない。第２に、患者の抗イデイオタイプ応答が、目めと する効果に対して有利であり。It is an effective method for eliciting an immune response against viruses. Furthermore, many It has several advantages over conventional methods. 1 & ζ, most foreign antigens There is no need to administer it to the patient. Second, the patient's anti-idiotype response It is advantageous for the effect.

決定的である。第３に、患者自身の抗体が抗腫瘍または抗ウイルス抗体であり、 したがって、外因性抗腫瘍抗体を繰り返し投与する必要性が除かれる。他の利点 は当業者に容易に理解される。Decisive. Third, the patient's own antibodies are antitumor or antiviral antibodies; Thus, the need for repeated administration of exogenous anti-tumor antibodies is eliminated. Other benefits is easily understood by those skilled in the art.

抗体のイディオタイプは、抗体分子の可変領域またはイディオタイプ領域におけ る個々の明白な抗原決定基によって定義される。これらのイディオタイプ抗原決 定基の一部は抗体のパワトープ上またはその近接位にあり、他のものは可変領域 のフレームワーク中にある。各々の抗体がそれ自身のイディオタイプを持つが、 以下、特定の抗体は下記の用語によって示す。「イディオタイプ抗体」または「 ｌｄ　ＡｂＪは、抗腫瘍または抗ウイルス抗体（すなわち、イディオタイプ抗体 によって同定されるエピトープは腫瘍細胞またはウィルス粒子上に存在する）を 意味する。「抗イデイオタイプ抗体」または「抗Ｉｄ　Ａｂｊは、イディオタイ プ抗体の可変領域上のエピトープを同定する抗体を意味する。そのような抗体の 一部は、イディオタイプ抗体のパロトープであるエピトープを同定し、従って、 イディオタイプ抗体によって同定される腫瘍細胞上のエピトープの「内部」イメ ージを現わす。「抗（抗イデイオタイプ）抗体」または「抗（抗Ｉｄ）ＡｂＪは 、抗イデイオタイプ抗体の可変領域上のエピトープを同定する抗体である。抗（ 抗イデイオタイプ）抗体の一部は、（Ｎ）抗イデイオタイプ抗体のパロトーブお よびφン腫瘍細胞上のエピトープに対応するエピトープを同定する。An antibody's idiotype refers to the differences in the variable or idiotype region of the antibody molecule. defined by individual distinct antigenic determinants. These idiotype antigen determinations Some of the constant groups are on or near the powertope of the antibody; others are in the variable region. in the framework of Each antibody has its own idiotype, but Hereinafter, specific antibodies will be indicated by the following terms. “idiotypic antibody” or “ ld AbJ is an anti-tumor or anti-viral antibody (i.e. idiotypic antibody epitopes identified by (present on tumor cells or viral particles) means. “Anti-idiotype antibody” or “anti-Id Abj” is an idiotype antibody. refers to an antibody that identifies an epitope on the variable region of the antibody. of such antibodies Some have identified epitopes that are parotopes of idiotypic antibodies and therefore “Internal” images of epitopes on tumor cells identified by idiotypic antibodies page. “Anti (anti-idiotype) antibody” or “anti (anti-Id) AbJ is , an antibody that identifies an epitope on the variable region of an anti-idiotype antibody. Anti( Some of the anti-idiotype (N) anti-idiotype antibodies are and epitopes corresponding to epitopes on tumor cells are identified.

後記のように、この発明の方法は、宿主生物に抗イデイオタイプ抗体を投与する ことを企図している。抗イデイオタイプ抗体は生理学上適切な任意の担体（例え ば、減菌した発熱性物質不含の生理食塩水）中に入れて宿主に投与し、その製剤 は当業界で公知である。As described below, the methods of the invention involve administering anti-idiotypic antibodies to a host organism. I'm planning on that. Anti-idiotype antibodies can be carried in any physiologically appropriate carrier, e.g. The formulation is administered to the host in sterile, pyrogen-free physiological saline (e.g., sterile pyrogen-free physiological saline). are known in the art.

担体の選択は、限定的なものではなく、抗体は、これを循環系に投入する任意の 方法（例えば静脈内、筋肉内マたは皮下注射）によって投与することができる。The choice of carrier is not critical; the antibody can be used in any carrier that enters the circulation. It can be administered by various methods such as intravenous, intramuscular or subcutaneous injection.

宿主生物は、どんな動物でもよいが、最も一般にはひとであり、ウィルスの場合 ねこまだはいぬも加わる。The host organism can be any animal, but most commonly humans, and in the case of viruses Cats and dogs also join in.

宿主に投与する大低の抗体の量は、例えば用いられる個々の抗体および接種され る患者によって、広範囲に変化する。患者の免疫系によって抗（抗イデイオタイ プ）抗体が産生されるのを刺激するのに十分な量の抗イデイオタイプ抗体を投与 することのみが必要条件である。しかしながら、免疫反応を誘発するにはほんの 少量の抗体しか必要としないので、用いる抗体の総量は極めて多い必要はない。The amount of antibody administered to the host will depend, for example, on the particular antibody used and the inoculation. varies widely depending on the patient. The patient's immune system can b) administering an amount of anti-idiotype antibody sufficient to stimulate antibody production; The only requirement is that However, only a small amount of Since only a small amount of antibody is needed, the total amount of antibody used does not need to be extremely large.

多くの場合、抗体の投与量は、数マイクログラムから数ミリグラム（例えば約、 ５０−２００μｇ　から約１−５η〕の範囲内で十分である。適当な投与量の決 定は当業者により容易になしイオタイブ抗体含有製剤を投与して、腫瘍、例えば 固形腫瘍（すなわち、白血病のような分散性循環性悪性細胞ではなく、がん、肉 腫、メラノーマ等によって生ずる悪性細胞の固形塊）に対する免疫応答を起すこ とを意図している。好ましい実施態様では、腫瘍は胃腸の腫瘍である。In many cases, doses of antibodies range from a few micrograms to a few milligrams, e.g. A range of 50-200μg to about 1-5η is sufficient. Determining the appropriate dosage It is not readily determined by one skilled in the art that formulations containing iotive antibodies can be administered to tumor, e.g. Solid tumors (i.e. cancer, flesh, rather than dispersed circulating malignant cells such as leukemia) (solid masses of malignant cells caused by cancer, melanoma, etc.) It is intended that In a preferred embodiment, the tumor is a gastrointestinal tumor.

上記のように抗イデイオタイプ抗体のサブクラスは、抗腫瘍、抗体のパロトープ （イディオタイプ抗体）と選択的に結合（すなわち同定］する。抗イデイオタイ プ抗体を含む製剤は、抗イデイオタイプ抗体のバロトープがウィルス抗原の内部 イメージである宿主に投与することができる。このような抗体は、対応するイデ ィオタイプ抗体のパロトープであるエピトープを認識する。腫瘍またはウィルス 抗体の内部イメージを現す抗イデオタイプ抗体は、数種の方法のうち任意のもの によってイディオタイプ抗体の可変領域におけるフレームワーク決定基を認識す る抗イデイオタイプ抗体と識別することができる。希望する抗イデイオタイプ抗 体を同定する方法の１つには、腫瘍またはウィルス抗原（また入手可能であれば 、ハプテンン、イディオタイプ抗体、および抗イデイオタイプ抗体との間の競合 結合分析がある。もし抗原がイディオタイプ抗体に対する抗イデイオタイプ抗体 の結合を妨害するなら、抗イデイオタイプ抗体で同定されるエピトープは、イデ ィオタイプ抗体のパロトープと近い関係１こある。別の試験方法は、抗イデイオ タイプ抗体に対する抗血清が抗腫瘍またはウィルス抗体でもあるかどうかを決定 するものである。適当な抗イデオタイプ抗体を同定する上記および他の方法は、 当業者に公知の範囲内にある。As mentioned above, the subclasses of anti-idiotypic antibodies are anti-tumor, parotopic antibodies (i.e., identify) selectively bind to (i.e., identify) an anti-idiotypic antibody. The barotope of the anti-idiotype antibody is located inside the viral antigen. The image can be administered to a host. Such antibodies are recognizes an epitope that is a parotope of a biotype antibody. tumor or virus Anti-idiotype antibodies that reveal the internal image of antibodies can be produced using any of several methods. recognizes framework determinants in the variable regions of idiotypic antibodies. can be distinguished from anti-idiotype antibodies. Desired anti-idiotype anti One method of identifying the body includes tumor or viral antigens (and if available Competition between , haptens, idiotypic antibodies, and anti-idiotypic antibodies There is a join analysis. If the antigen is an anti-idiotype antibody against an idiotype antibody If the epitope identified by the anti-idiotype antibody interferes with the binding of the There is one close relationship with the parotope of the biotype antibody. Another test method is to Determine if the antiserum against the type antibody is also an antitumor or viral antibody It is something to do. These and other methods of identifying suitable anti-idiotype antibodies include: It is within the knowledge of those skilled in the art.

宿主に投与する製剤は、フレームワーク決定基に対する抗−イディオタイプ抗体 と共に、イディオタイプ抗体のパロトープに対するサブクラスを包含することが できる。製剤が、イディオタイプ抗体のパロトープに対するサブクラスを包含す ることだけが必要である。The formulation administered to the host contains anti-idiotypic antibodies directed against framework determinants. as well as subclasses of idiotypic antibodies to parotopes. can. The formulation encompasses a subclass of idiotypic antibodies to the parotope. All that is necessary is that

用いられた抗イデイオタイプ抗体は、宿主に対し同種または異種抗体であってよ い。しかしながら、ひとにとって好ましい抗体は、抗体分子のＣ領域に対する免 疫反応が最小であるひと抗体である。しかし、この発明においては比較的少量の 抗イデイオタイプ抗体しか必要としないので、異種抗体（例えば、マウス、ラッ ト、やぎ、家兎など〕を用いてよい。また、異種抗イデイオタイプ抗体に対して 重要な反応がない場合には、このような抗体は製造の容易さおよびコストの点か ら好ましい場合がある。さらに、モノクローナル抗イデイオタイプ抗体と同様に 、ポリクローナル抗イデイオタイプ抗体を用いることができる。The anti-idiotypic antibody used may be homologous or xenoantibody to the host. stomach. However, the preferred antibodies for humans are those with immunity to the C region of the antibody molecule. This is the human antibody with the least infectious response. However, in this invention, a relatively small amount of Since only anti-idiotype antibodies are required, heterologous antibodies (e.g. mouse, rat animals, goats, rabbits, etc.) may be used. Also, against heterologous anti-idiotype antibodies In the absence of a significant response, such antibodies may be of interest in terms of ease of manufacture and cost. may be preferable. Additionally, similar to monoclonal anti-idiotype antibodies, , polyclonal anti-idiotype antibodies can be used.

ポリクローナル抗イデイオタイプ抗体は、当業界で知られた従来法によって製造 できる、例えば、ポリクローナル抗１ｄ　Ａｂは、動物をモノクローナル抗腫瘍 またはウィルス抗体（例えば、Ｉｄ　Ａｂ）で免疫することによって産生できる 。免疫した動物は、抗ＬｄＡｂを産生ずる。この抗血清中の抗イデイオタイプ抗 体のサブクラスは、抗腫瘍またはウィルス抗体のバロトープであるエピトープを 同定する。例えば、動物から採取した抗血清は、（ｉ）抗血清から抗アイソタイ プ抗体を除去するための、モノクローナルＩｄ　Ａｂとしては同じアイソタイプ であるが、別のイディオタイプの固定化抗体、および、Ｃ）そのサブクラスが腫 瘍およびウィルス抗原の内部イメージを現す抗Ｉｄ　Ａｂを除去するための、固 定化モノクローナルＩｄ　Ａｂ、を用いた、系列吸収によって精製できる。次い で、抗Ｉｄ　Ａｂを結合モノクローナル抗腫瘍およびウィルス抗体から溶離して 抗アイソタイプ抗体を実質的に含まない溶液を得る。この溶液は、Ｉｄ　Ａｂの パロトープを同定する抗Ｉｄ　Ａｂの存否を分析することができる。Polyclonal anti-idiotype antibodies are produced by conventional methods known in the art. For example, a polyclonal anti-1d Ab can be used to treat animals with monoclonal antitumor or can be produced by immunization with viral antibodies (e.g., IdAb) . The immunized animal will produce anti-LdAb. The anti-idiotype anti- The body subclasses have epitopes that are barotopes for anti-tumor or viral antibodies. identify For example, an antiserum collected from an animal can be obtained by (i) Use the same isotype as monoclonal Id Ab to remove C) an immobilized antibody of another idiotype, and C) its subclass Stabilization to remove anti-Id Abs that represent internal images of tumor and viral antigens. It can be purified by serial absorption using a standardized monoclonal Id Ab. next The anti-Id Ab was eluted from the bound monoclonal anti-tumor and viral antibodies. A solution is obtained that is substantially free of anti-isotype antibodies. This solution contains IdAb The presence or absence of anti-Id Abs that identify parotopes can be analyzed.

実質的に他の抗体を含まないモノクローナル抗イデイオタイプ抗体は、イモータ ルＢリンパ球を実質的にンバ球」の語は、ハイブリドーマ（体細胞が、正常およ び悪性りンバ球と交雑したもの〕、および、ウィルス（例えば、エプスタイン・ バール・ウィルス）または発癌性ＤＮＡによって形質転換された正常リンノ寸球 のような、数ケ月間（好ましくは無限に）培養物中に維持されうる比較的安定し た連続抗体産生細胞を包含する。抗イデイオタイプ抗体を産生ずる正常Ｂリッツ ｆ球からイモータルＢりンパ球を産生ずる技術は当業界で公知である。　「モノ クローナル・アンテイボディーズ」（アール・エイチ・ケネット、ティ・ジエイ ・マクリーンおよびケイ・ビー・ピートル編、１９８０年〕；エム・シュライヤ ーら著、「ノ翫イブリドーマ・テクニック」（コールド・スプリング・）翫−／ イー・ラドラトリー、１９８０年】；「モノクローナル・アンテイボデーズ・ア ンド・ティーセル・ハイブリドーマズ（ジー・ジエイ９ハーマーりング、ニー・ ／１−マーリングおよびジエイ・エフ・キーネイ、１９８１年）；コズパーら著 、プロシーディング・オブ・ナショナル・アカデミ−・オブ・サイエンス（アメ リカ、１９８２年）７９巻６６５１−６６５５頁；ジョナら著、「ハイプリード ーマＪ（１９８３年）２巻１２４頁：「モノクローナル・′アンテイボデイズ・ アンド・ファンクショナル・セル・ライング」（アール・エッチ・ケネット、ケ ー・ビー・ビートル、およびティ・ジエイ・マッキーン編、１９８３年）：コズ パーら著、「イムノロジー・ツデイＪ（１９８３年）４巻７２−７９頁を参照。Monoclonal anti-idiotype antibodies that are substantially free of other antibodies are The term "substantially all B lymphocytes" refers to hybridomas (somatic cells whose somatic cells are normal and viruses (e.g., Epstein virus), and viruses (e.g., Epstein Barr virus) or normal lymphocytes transformed by oncogenic DNA relatively stable substances that can be maintained in culture for several months (preferably indefinitely), such as Contains continuous antibody producing cells. Normal Blitz that produces anti-idiotype antibodies Techniques for producing immortal B lymphocytes from f-globules are known in the art. "Things" Clonal Antibodies” (R.H. Kennett, T.G. ・McLean and K.B. Pitre, eds., 1980]; M. Schreier ``Nokan Ibridoma Technique'' (Cold Spring) by Kan-/ E. Radatory, 1980]; “Monoclonal Antibodies A hybridomas /1-Marling and G.F. Kenney, 1981); Kozper et al. , Proceedings of the National Academy of Sciences (American Rika, 1982) Vol. 79, pp. 6651-6655; Jonah et al., “Hypread Ma J (1983) Vol. 2, p. 124: “Monoclonal Antibodies” and Functional Cell Lying” (R.H. Kennett, Ke. - B. Beetle and T.G. McKean, eds., 1983): Koz. See Parr et al., Immunology Today J (1983), Vol. 4, pp. 72-79.

抗Ｉｄ　Ａｂを産生じ、イモータルＢ　ＩＪンバ球の産生に適している正常ＢＩ Ｊンバ球は、当業界で公知な方法の変法で提供される。例えば、ラットまたはマ ウスのような動物をモノクローナル抗腫瘍または抗ウイルス抗体で免疫し、抗Ｉ ｄ　Ａｂを産生するＢ　１３ンパ球を動物の胛臓から採取することができる。抗 ＩｄＡｂを産生ずるひと３９７８球は、モノクローナル抗腫瘍またはウィルス抗 体を用いて患者を免疫することによって得られる。患者から末梢血リンパ球を採 取し、モノクローナル抗腫瘍またはウィルス抗体によって培養物を刺激して抗− Ｉｄ　Ａｂを産生ずる３９７８球のインビトロでの生育を誘導する。デフレイテ スら著、プロシーディング・オブ・ナショナル・アカデミ−・オブ・サイエンス （アメリカ、１９８２年〕７９巻。Normal BI that produces anti-Id Ab and is suitable for the production of immortal B IJ members Jomba balls are provided by variations of methods known in the art. For example, rats or Animals such as mice are immunized with monoclonal antitumor or antiviral antibodies, and anti-I d. Ab-producing B13 lymphocytes can be collected from the animal's viscera. anti IdAb-producing human 3978 cells are monoclonal anti-tumor or viral anti- It is obtained by immunizing a patient using the body. Collect peripheral blood lymphocytes from the patient. culture by stimulating the cultures with monoclonal anti-tumor or viral antibodies. In vitro growth of 3978 spheres producing Id Ab is induced. deflate Written by Su et al., Proceedings of the National Academy of Sciences (USA, 1982) 79 volumes.

６６４６−６６５０頁参照。従って、抗Ｉｄ　Ａｂを産生ずる、動物またはひと の３９７８球は、当業界で公知の方法により採取し固定することができる。もち ろん、腫瘍細胞またはウィルス抗原の内部イメージを現出する抗Ｉｄ　Ａｂを産 生ずるこれらのリンパ球は、イディオタイプ領域上のフレームワーク、決定基に 対する抗１ｄ　Ａｂを産生するＢ　＋Ｊンバ球と区別されることが必要である。See pages 6646-6650. Therefore, animals or humans producing anti-Id Abs 3978 balls can be harvested and fixed by methods known in the art. rice cake Of course, it is possible to produce anti-Id Abs that reveal internal images of tumor cells or viral antigens. These lymphocytes that arise are based on frameworks and determinants on the idiotypic region. They need to be distinguished from B+J cells, which produce anti-1d Abs.

腫瘍に適用するこの発明の方法はまた。アメリカ特許第４１０８９８３号に記述 されるウィルス性腫瘍細胞破壊ワクチンの様な、腫瘍に対する免疫反応を誘発す る他の方法と共に実施することができる。ウィルスに関しては、ウィルスの場合 、所望により、宿主哺乳類でおこる免疫応答は上述と同様に抗Ｉｄ　Ａｂを投与 することｆこ加えて公知のウィルスワクチンで免疫することによっていっそうさ かんになる。抗（抗ＩｄＡｂ）の産生が抗Ｉｄ　Ａｂを投与することによって宿 主哺乳類に誘発された後（例えば投与後約２週間）、宿主に当業界で公知の従来 技術を用いてウィルス・ワクチンの１回接種を行う（例えば　ＨＤＣ狂犬病ワク チンのような不活性化ウィルスワクチン）、ブロッキンら著、アメリカン・ジャ ーナル・オブ・エビデミオロジー（１９７６年）１０３巻、７５−８０頁：ウィ クターラ著、ラビーズ・ワクジン・フォー・ヒユーマン・ユース、４０号３−９ 頁（１９７８年〕参照。投与におけるワクチンの型および実験方法はこの分野の 技術で公知である。次に示す例は１本発明の説明であり、発明の範囲を限定する ものではない。The method of this invention also applies to tumors. Described in U.S. Patent No. 4,108,983 drugs that induce an immune response against tumors, such as viral tumor-killing vaccines It can be implemented in conjunction with other methods. When it comes to viruses, when it comes to viruses. , if desired, the immune response that occurs in the host mammal is induced by administration of anti-Id Ab as described above. In addition, by immunizing with known virus vaccines, It makes sense. Anti (anti-IdAb) production can be inhibited by administering anti-IdAb. After being induced in the primary mammal (e.g., approximately 2 weeks after administration), the host is given a conventional method known in the art. A single dose of a viral vaccine is administered using technology (e.g. HDC rabies vaccine). (Inactivated virus vaccines such as Chin), Brockin et al., American J. Journal of Evidemiology (1976) Vol. 103, pp. 75-80: Wi. Kutara, Rabbi's Works for Human Youth, No. 40, 3-9. (1978). Vaccine types and experimental methods for administration are within the knowledge of the field. known in the art. The following example is illustrative of the invention and does not limit the scope of the invention. It's not a thing.

実施例１　腫瘍抗体 （モノクローナルイディオタイプ抗体ン次に示す実験では、ひと消化器系癌細胞 と結合しているマウス・モノクローナル抗体１７−　Ｉ　Ａ、Ｃ４２０３２およ びＣ４１４７２を使用した。これらは、バーリンら著、プロシーディング・オブ ・ナショナル・アカデミ−・オブ・サイエンス（アメリカ、１９７９年）　７６ ７１４３８−１４４２頁およびコブロフスキー著、モノクローナル・アンティボ ディ・イン・キャンサーの中で「生体内でのモノクローナル抗体」として：プロ シー・ラングマン、アイ・ドロウブリッジおよびダルベツコ編、１９８３年〕に 記述されている。モノクローナル抗体（ＭＡ　ｂ　）　、　Ｃ４２０３２ハＭｒ 　１８０．１６０゜５０および４０にの結腸直腸癌腫（ＣＲ（：Ｊ結合抗体に対 する特異性を有している。Ｍ　Ａ　ｂ　（：４１４７２　（Ｉ　ｇＧ２すは、Ｃ ＲＣ結合抗原Ｍｒ　５　Ｑ　Ｋ　に対する特異性を有している。肝炎ウィルスに 対するＭＡｂ　Ａ３Ｃ５も用いられるが、これについてはバンズら著、プロシー ディング・オブ・ナショナル・アカデミ−・オブ・サイエンス（アメリカ、１９ ８１年）７８巻、１２１４−１２１８頁で記述されている。ＭＡｂ１７−１Δ（ ＩｇＧ２Ａ、ルＬ鎖）およびＣ４２０Ｃ４２０３２（Ｉ、　ＸＬ鎖）は、アイら 著、イムノケミストリー（１９７８年）１５巻、４２９−４３６頁で記述されて いるようにプロティンＡ・セファロース・カラム（ファルマシア、ビスカドアウ ェイ、ニュージャーシーツでアフィニティークロマトグラフィーにかけることに よって、ハイブリドーマ担持マウスから得た腹水から精製される。Example 1 Tumor antibody (In the following experiments, monoclonal idiotype antibodies were used in human gastrointestinal cancer cells.) Mouse monoclonal antibody 17-IA, C42032 and and C41472 were used. These are from Berlin et al., Proceedings of ・National Academy of Science (USA, 1979) 76 pp. 71438-1442 and Kobrowski, Monoclonal Antibo As “in vivo monoclonal antibodies” in D-in-Cancer: Professional In C. Langman, I. Drawbridge and Dalbecko, eds., 1983]. It has been described. Monoclonal antibody (MA b), C42032 c Mr 180.160°50 and 40 colorectal carcinoma (CR(: against J-binding antibody) It has the specificity of M　A　b　(:41472　(IgG2　、C It has specificity for the RC binding antigen Mr5QK. to hepatitis virus MAb A3C5 is also used, but this is described in Bans et al. Department of National Academy of Sciences (USA, 19 1981), Vol. 78, pp. 1214-1218. MAb17-1Δ( IgG2A, L chain) and C420C42032 (I, XL chain) were used by Ai et al. Described in ``Immunochemistry'' (1978), Vol. 15, pp. 429-436. Protein A Sepharose Column (Pharmacia, Biscadoau) Hey, I decided to run affinity chromatography on New Jersey sheets. Therefore, it is purified from ascites fluid obtained from hybridoma-bearing mice.

（患者〕 患者は全て転移性で再発性の結腸直腸腺癌を持っていて、シアーズら著、ランセ ット（１９８２年）７６２−７６５頁で発表されている方法を用いて、Ｂａ１ｂ 、／Ｃマウスの腹水から濃縮したＭＡｂ　１７−ＩＡの精製された発熱性物質不 含の滅菌製品を１回の投与で全身的に注射した。Ｍａｂｌ？−ＩＡ　１９２”’ ９以下ヲ注入した９患者のうち７患者は抗マウスグロブリン抗体を発生した。モ ノクローナル抗体２００−１０００１９を受けた２０患者のうち、３患者が抗マ ウスグロブリン抗体を発生した。抗マウスグロブリン抗体を発生した最初のグル ープの３患者（患者番号０７．０８および０９）の血清および２番目のグループ の２患者（番号１４および２３）の血清を、抗イデイオタイプ抗体を単離するた めに選択または処理した。患者番号０７．０８および２３から抗イデイオタイプ 抗体を単離するために用いた血清は、３患者すべてが高濃度の抗マウスグロブリ ン抗体を示した時に得られた。患者番号０８は、最初の注射の後２０ケ月目にモ ノクローナル抗体１３０ηの２回目の注射を受け２回目の注射の後得られた血清 を抗イデイオタイプ抗体の存否を調べるスクリーニングテストに用いた。(patient〕 All patients had metastatic, recurrent colorectal adenocarcinoma and were described by Sears et al. (1982) pp. 762-765. ,/C Purified pyrogen-free MAb 17-IA concentrated from mouse ascites. The sterile product was injected systemically in a single dose. Mable? -IA　192”’ Seven of the nine patients injected with <9 developed anti-mouse globulin antibodies. Mo Of the 20 patients who received noclonal antibody 200-100019, 3 patients Usuglobulin antibodies were developed. The first group to develop anti-mouse globulin antibodies Serum from 3 patients (patient nos. 07.08 and 09) and the second group Sera from two patients (numbers 14 and 23) were collected to isolate anti-idiotype antibodies. selected or processed. Anti-idiotypes from patient numbers 07.08 and 23 The serum used to isolate antibodies contained high concentrations of anti-mouse globulin in all three patients. This was obtained when the antibody was shown to be positive. Patient number 08 was diagnosed 20 months after the first injection. Serum obtained after the second injection of noclonal antibody 130η was used in a screening test to determine the presence or absence of anti-idiotype antibodies.

（ポリクローナル抗イデイタイプ抗体の製造）精製したＭＡｂ　１７−ＩＡ３０ ０μｆをフロイント混合アジュバントで乳化したものを、ニュージランド白うさ ぎの多部位に皮下注射し、３０日後面ノクローナル抗体１００μｍを筋肉注射で 増強した。二度目の反応の１０日後面清を採取した。(Production of polyclonal anti-ideitype antibody) Purified MAb 17-IA30 Emulsify 0 μf with Freund's mixed adjuvant and use Inject subcutaneously into multiple areas of the body, and 30 days later inject 100 μm of noclonal antibody intramuscularly. Reinforced. Ten days after the second reaction, the supernatant was collected.

抗血清を固定化Ｍ　Ａ　ｂ　Ｃ４２０３２およびＭＡｂ１７−ＩＡで吸収させた 。精製モノクローナル抗体（各々３０岬）を、アフイ・ゲル１０〔パイオーラッ ド・ラボラトリーズ、リッチモンド、カリフォルニア（Ｂｉｏ−Ｒａｄ　Ｌ＠ｂ ｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｒｉｃｈｍｏｎｄ、ＣＡ　）　）　２　ａｔと結合させた 。ついで、抗血清を、抗アイソタイプおよび抗イデイオタイプ抗体をそれぞれ取 り除くために免疫吸着剤ＭＡｂ　Ｃ４２０３２およびＭＡｂ　１７−ＩＡに連続 吸収させた。吸収した抗体を、０．１　Ｍグリシン緩衝液（ｐＨ２，８）で溶出 し、直ちに燐酸緩衝液で中和し、燐酸緩衝生理食塩水で透析し、蛋白質を２９　 Ｑ　ｎｍ　（Ｅ”％　−１４）の吸光度で定量した。Antiserum was absorbed with immobilized MAb C42032 and MAb17-IA . Purified monoclonal antibodies (30 capes each) were added to Afui Gel 10 de Laboratories, Richmond, California (Bio-Rad L@b oratories, Richmond, CA)) 2 Combined with at . The antiserum was then used to collect anti-isotype and anti-idiotype antibodies, respectively. Sequentially to the immunoadsorbents MAb C42032 and MAb 17-IA to remove I let it absorb. Elute the absorbed antibody with 0.1M glycine buffer (pH 2, 8) Immediately neutralize with phosphate buffer and dialyze against phosphate buffered saline to remove protein 29 It was determined by absorbance at Q nm (E"% -14).

ＭＡｂ　１７−１Ａを１回注射した後患者から得られた抗血清も、上で述べたと 同様にして精製した。それぞれＭＡｂ　１７−ＩＡを７５０岬を投与した患者番 号２３゜およびＭＡｂ　１？−ＩＡを１３３および１２５Ｗｉ投与した患者番号 ０８および＆０７由来の血清は、抗体を最初に注射した後、種々の時期に採取し た。Antisera obtained from patients after a single injection of MAb 17-1A were also as described above. It was purified in the same manner. Patient number to which MAb 17-IA was administered 750 Misaki No. 23° and MAb 1? - Patient numbers who received IA 133 and 125Wi Sera from 08 and &07 were collected at various times after the initial injection of antibodies. Ta.

ラジオイムノアッセイ法によって抗ムリンＩｇＧ抗体を含有していることが°分 かった試料を、それぞれ上述と同様に抗アイソタイプおよび抗イデイオタイプ抗 体を除去するために、免疫吸着剤ＭＡｂ　Ｃ４２０３２およびＭＡｂ　１７−Ｉ Ａで十分に吸収させた。血清から分離した抗イデイオタイプ抗体は、■でラベル した抗ひとＦ　（ａｂ’　）、、フラグメントに結合することにより免疫グロブ リンであることを示した。血清試料から得た抗イデイオタイプ蛋白の収量はそれ ぞれ異なって、＆０８より１３μダ／ａｔ　、　Ｆａ　Ｏ７より８．９μｆ／ｍ ｅ、および黒２３より４３μｆ／ｊＥｔであった。最も高い水準の抗マウス免疫 グロブリン抗体を示した血清黒２３から最も多くの量が得られた。Contains anti-murin IgG antibodies by radioimmunoassay The samples were treated with anti-isotype and anti-idiotype antibodies, respectively, as described above. To remove the body, immunoadsorbents MAb C42032 and MAb 17-I A was sufficiently absorbed. Anti-idiotype antibodies isolated from serum are labeled with ■ immunoglobulin by binding to the anti-human F (ab') fragment. It was shown that it was phosphorus. The yield of anti-idiotypic protein obtained from serum samples is Each is different, 13 μf/at from &08, 8.9 μf/m from Fa O7 e, and black 23, it was 43 μf/jEt. Highest level of anti-mouse immunity The highest amount was obtained from serum black 23, which showed globulin antibodies.

（抗イデイオタイプ抗体の存否を調べるための血清スクリーニング法） 血清試料について抗イデイオタイプ抗体の存否を調べるために、競合分析を、ｌ 　でラベルしたＭＡｂ１７−ＩＡと予備インキュベートした４種のひと血清と家 兎抗イデイオタイプ抗体を用いて行なった。(Serum screening method to check the presence or absence of anti-idiotype antibodies) To test serum samples for the presence or absence of anti-idiotype antibodies, competitive analysis was performed Four human sera preincubated with MAb17-IA labeled with It was performed using a rabbit anti-idiotype antibody.

４分の１インチ（６，３５ｙ）粒径のポリスチレン・ビーズ〔プレシジョン・プ ラスチック・ボール・コーポレイション、シカゴ、イリノイ（Ｐｒｅｃｉｓｉｏ ｎ　ＰｌａｓｔｉｃＢａｌｌ　Ｃｏ、、　Ｃｈｉｃａｇｏ、ＩＬ〕〕　を９５チ エタノールで３回洗浄した。風乾したビーズを、０．０２Ｍテトラはう酸ナトリ ウム（Ｐ２Ｏ，２）で希釈した家兎またはひとの抗イデイオタイプ抗体と共にイ ンキュベートした。Quarter-inch (6,35y) particle size polystyrene beads [Precision Plastics] Rustic Ball Corporation, Chicago, Illinois (Precisio n　PlasticBall Co., 　Chicago, IL〕　95 pieces Washed three times with ethanol. The air-dried beads were washed with 0.02M sodium tetraphosphate. with rabbit or human anti-idiotype antibodies diluted in P2O,2). Incubated.

緩やかに振とうしながら４℃で一夜培養した後、ビーズを燐酸緩衝生理食塩水で ３回洗浄し、２チうし血清アルブミンおよび０．０４％Ｎ　＠Ｎ　ａを含有する 燐酸緩衝生理食塩水を用いて、室温で少なくとも３時間インキュベートした。つ いで、ビーズをひと抗イデイオタイプ抗体源と予備インキュベートしたイディオ タイプの基準として１２５Ｉ　でラベルしたＭＡｂ　１７−ＬＡに露した。すな わち、ひと血清をＣａＺ＋およびＭｇ２＋を含まない燐酸緩衝生理食塩水で２５ チの濃度に希釈し、２％うし血清アルブミンおよびｏ、０４チＮ　ａ　Ｎ　３　 を補った。さらに−夜培養を続けた後、ビーズを洗浄し、ガンマ−線測定器で結 合放射能を測定した。After an overnight incubation at 4°C with gentle shaking, the beads were washed with phosphate-buffered saline. Washed 3 times, contains 2 times bovine serum albumin and 0.04% N@Na Incubate with phosphate buffered saline for at least 3 hours at room temperature. One The beads were pre-incubated with a source of human anti-idiotype antibodies. Exposure to 125I-labeled MAb 17-LA was used as a type standard. sand That is, human serum was diluted with CaZ+ and Mg2+-free phosphate buffered saline for 25 minutes. diluted to a concentration of 2% bovine serum albumin and supplemented. Furthermore, after continuing the overnight culture, the beads were washed and analyzed using a gamma ray counter. The combined radioactivity was measured.

モノクローナル抗体（番号２３．０９または１４，１１回注射後に得られた血清 中３つは、モノクローナル抗体注射前より高いＭＡｂ　１７−ＩＡに対する結合 阻害を示した。患者番号１４のモノクローナル抗体注射後血清が得た結合阻害値 は、他の２種の血清に比べて低いが、同じ患者の血清が示すモノクローナル抗体 投与前の値よりも高力；つた。モノクローナル抗体を２回目に注射して７日後の 患者番号０８から得た血清の阻害値は、既に高かった。Monoclonal antibodies (no. 23.09 or serum obtained after 14,11 injections) The middle three showed higher binding to MAb 17-IA than before monoclonal antibody injection. showed inhibition. Binding inhibition value obtained for serum after monoclonal antibody injection of patient number 14 The monoclonal antibodies shown by the same patient's serum are lower than those of the other two sera. Strength higher than pre-administration value; 7 days after the second injection of monoclonal antibody The inhibition value of the serum obtained from patient number 08 was already high.

（抗イデイオタイプ検出の競合分析ノ モノクローナル抗体Ｃ４２０３２、Ｃ４１４７２およびＡ３Ｃ５に対してと同様 にＭＡｂ　１７−ＩＡに対して、分離した抗イデイオタイプ抗体の結合を測定す るために上述と同様な方法で競合分析を行った。(Competitive analysis for anti-idiotype detection) Similar to monoclonal antibodies C42032, C41472 and A3C5 To measure the binding of the isolated anti-idiotype antibody to MAb 17-IA. A competitive analysis was conducted using the same method as described above.

結果は、３種の血清（番号０８．０７お上び２３）由来の抗イデイオタイプ抗体 のＭＡｂ　１？−ＩＡに対する結合性は、他の３種のモノクローナル抗体に対す るより顕著に高いことを示し、他の２種のモノクローナル抗体（Ｃ４２０３２お よびＣ４１４７２）も、結腸直腸の癌腫細胞上の抗原部位を検出した。しかし、 これらの部位はＮＡｂ　１７−ＩＡ認諏部位と異なっていた。ＭＡｂ１７−１八 にさらす前に３人の患者すべての血清から分離した免疫グロブリンを約２．５μ ｆ　／ｄに濃縮し、ポリスチレン・ビーズに結合した。しかしながら、上記製品 は試験したどのモノクローナル抗体とも結合せず、処理前の血清中に抗イデイオ タイプ抗体が存在しないことを示した。The results show that anti-idiotype antibodies derived from three types of sera (numbers 08.07 and 23) MAb 1? -Binding to IA was higher than that of other three monoclonal antibodies. It was significantly higher than that of the other two monoclonal antibodies (C42032 and C42032). and C41472) also detected antigenic sites on colorectal carcinoma cells. but, These sites were different from the NAb 17-IA recognized sites. MAb17-18 Approximately 2.5 μl of immunoglobulin isolated from the serum of all three patients was collected before exposure to f/d and bound to polystyrene beads. However, the above products did not bind to any of the monoclonal antibodies tested, and there was no anti-id in the serum before treatment. showed the absence of type antibodies.

（ひと抗イデイオタイプ抗体同志の交叉反応性］ひと抗イデイオタイプ抗体同志 の交叉反応があるが否かを決定するために競合分析を行った。(Cross-reactivity between human anti-idiotype antibodies) Among human anti-idiotype antibodies A competition analysis was performed to determine whether there was any cross-reactivity.

競合分析の結果は、下に示すように、患者番号０７および２３の抗イデイオタイ プ血清間で顕著な交叉反応を示し、患者番号０８および２３の抗イデイオタイプ 抗体間の交叉反応は少し弱い（しかし、それでも重要である〕。同様の交叉反応 が、患者番号０８から得たモノクローナル抗体処理前血清と患者番号０７の抗イ デイオタイプ血清との間に見られた（結果は示さない）。上述の結果は、他の患 者が産生じた抗イデイオタイプ抗体が、同じ抗原部位に向けらることを示してい る。The results of the competition analysis show that the anti-idiotypic results for patient numbers 07 and 23 are shown below. The anti-idiotypes of patient numbers 08 and 23 showed significant cross-reactivity between Cross-reactivity between antibodies is a little weaker (but still significant). Similar cross-reactivity The serum obtained from patient number 08 before monoclonal antibody treatment and the anti-antibody antibody from patient number 07 were used. diotype serum (results not shown). The above results are similar to those of other patients. This indicates that anti-idiotype antibodies produced by individuals are directed against the same antigenic site. Ru.

なし　４２９７ 抗−１ｄ２３　０７　前　４５９５　０後　１２３１　７１ ０８前　４０９７　５ 後　２５８５　４０ （抗イデイオタイプ抗体によって検出されたエピトープ） ＭＡｂ　１７−ＩＡに対するひと抗イデイオタイプ抗体の結合のバブテン阻害は 、抗イデイオタイプ抗体がイディオタイプ抗体のパロトープに対するものである ことを示すために行なった。None 4297 Anti-1d23 07 before 4595 0 after 1231 71 Before 08 4097 5 After 2585 40 (Epitope detected by anti-idiotype antibody) Babten inhibition of human anti-idiotype antibody binding to MAb 17-IA , the anti-idiotype antibody is directed against a parotope of the idiotype antibody I did this to show that.

結腸直腸の癌から得た細胞株、ＳＷ　１２２２の３ＭＫＣ［抽出物を、バーリン ら著、〔ジャーナル・オブ・クリニカル−イムノロジー（Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｉ ｍｍｕｎｏｌ、　）　２巻１３５−１４０頁〕で述べられているのと同様に調製 した。この製剤はＭＡｂ　１７−Ｌ　Ａに結合し、この材料が可溶性の抗原を含 有することを示した。１２５にでラベルしたＭＡｂ１７−ＩＡをＣＲＣ細胞抽出 物およびＭＡｂ　１７−ＩＡに結合しないメラノーマの３ＭＫＣｌ抽出物とイン キュベートした。それから、抗体抗原混合物を、患者番号２３から得た抗イデイ オタイプ抗体で被覆したビーズに加え、その結合を放射性同位元素で標識したモ ノクローナル抗体のみの結合と比較した。これらの実験は、少量の競合ハプテン による結合の変化を検出するために、非飽和量のよう化モノクローナルを用いて 行った。対照として、よう化ＭＡｂ　１７−ＩＡをＭＡｂ　１７−ＩＡとは結合 しないことが知られている〆う／−マ由来の抽出物と混合した。濃度０，１また は０．５η／−のＣＲＣ細胞抽出物は、それぞれ３９％および６８哄で、患者番 号２３由来の抗イデイオタイプ抗体がよう化ＭＡｂ１７−ＩＡと結合するのを阻 害することが分かった。メラノーマ由来の抽出物は、０．５■／　ｍｅ以下の濃 度では、顕著にはモノクローナル抗体結合に効果を表わさない。3MKC of SW 1222, a cell line obtained from colorectal cancer et al., [Journal of Clinical Immunology (J, Cl1n, I Prepared similarly as described in Mmunol, Volume 2, pp. 135-140]. did. This formulation binds MAb 17-LA and this material contains soluble antigen. It was shown that it has. MAb17-IA labeled with 125 was extracted from CRC cells. Melanoma 3M KCl extract and infusion that do not bind to MAb 17-IA Cubated. The antibody-antigen mixture was then combined with the anti-antibody antibody obtained from patient number 23. In addition to beads coated with the otype antibody, the binding was coupled with a radioisotope-labeled antibody. The binding was compared with that of noclonal antibody alone. These experiments were performed using small amounts of competing haptens. Using non-saturating amounts of iodized monoclonal to detect changes in binding due to went. As a control, iodized MAb 17-IA was combined with MAb 17-IA. The mixture was mixed with an extract derived from A. Concentration 0,1 or 0.5η/- CRC cell extracts were 39% and 68ml, respectively, and patient no. 23-derived anti-idiotype antibody from binding to iodized MAb17-IA. It was found that it was harmful. The melanoma-derived extract has a concentration of 0.5■/me or less. The effect on monoclonal antibody binding is not significant.

この結合反応のハプテン阻害は、抗イデイオタイプ抗体上のＣＲＣエピトープの 「内部イメージ」の現出を示す。このことは、ＣＲＣ細胞抽出物が抗イデイオタ イプ抗体と結合しないが、予想したようにＭＡｂ　１？−ＩＡに結合することに よっても確認された。Hapten inhibition of this binding reaction is due to the CRC epitope on the anti-idiotype antibody. Indicates the emergence of an "internal image". This suggests that CRC cell extracts are anti-idiopathic agents. However, as expected, MAb 1? - to bind to IA It was also confirmed.

（ひと８９７３球による抗イデイオタイプおよび抗（抗イデイオタイプ）抗体の 産生） ＭＡｂ　１７−ＩＡを注射後、各々１２および６か月日の患者番号０８および２ ３から軟膜細胞を得た。デフレイタスら著、プロシーディング・オブ・ナショナ ル・アカデミ−・オブ・サイエンス（アメリカ、１９８２年）７９巻６６４６− ６６５０頁に述べられているように１７−ＩＡ　の１００ｇ／ｄＦ（ａｂ′）２ フラクメントテ細胞ヲ刺激した。続く７日間、細胞の一定量を２−アミノエチル イソウロニウムブロミドで処理したひつじ赤血球でロゼツト化することによって ＴおよびＢ細胞ポピユレーションに分離した。〔ペロリーノら著、クリニカル・ イムノロジー・アンド・イムノパスオロジ−（１９７５年〕３巻３２４−３３３ 　頁を参照。〕どちらの〕細胞ポピュレーションモ１７−ＩＡのＦ　（ａｂ’　 ）２フラグメントマタは抗−インフルエンザ・モノクローナル抗体およびやぎ抗 マウスＩ　ｇ−Ｆ　ＩＴＣで着色された。ついで細胞ポピユレーションをシトフ ルオログラフで分析した。さらに、同一患者由来の末梢血単核細胞を１７−ＩＡ 　のＦ（ａｂ′）２フラグメントまたは抗インフルエンザ・モノクローナル抗体 でデクレイタスら著（上述の文献）に述べられている特異的ひとＩｇを産生修飾 ミッシエルーダットン培養基中で９日間刺激した。これらの培養物から得た上清 を特異的ひとＩｇＧに対する固相酵素結合免疫吸収分析で分析した。〔ケイ・ピ ー・エル・ラボラトリーズ、ゲテルスブルグ、エム・ディ（ＫＰＬＬａｂｏｒａ ｔｏｒｉｅｓ　、　Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、　ＭＤ　）　）患者番号０８の １７−ＩＡ　Ｆ（ａｂ’）ｚに初めに結合するリンパ球の比率は１．２％であり 患者番号２３のリンパ球は０．２％であった。ＭＡｂ　１７−ＩＡとインキュベ ートした７日間で１７−ＩＡ　のＦ　（ａ　ｂ’　）２と特異的に結合する患者 番号２３のリンパ球の比率は、０，２％から１３％に増加した。１７−ＩＡ　と 結合する細胞すべては、Ｂ細胞ポピユレーション中に存在した。さらに９日後、 ひと抗−ＭＡｂ　１７−ＩＡ　ＩｇＧ　が検出された。同条件下で抗インフルエ ンザ・モノクローナル抗体を用いて同じ患者由来のリンパ球をインキュベートし てもＭＡｂ　１７−ＩＡ４たは抗インフルエンザ・モノクローナル抗体に対する 検出可能なひとＩｇを全く産生じなかった。(anti-idiotype and anti-(anti-idiotype) antibodies produced by human 8973 cells) production) Patient numbers 08 and 2, 12 and 6 months after injection of MAb 17-IA, respectively. Buffy coat cells were obtained from 3. Defreitas et al., Proceedings of the Nation. Academy of Science (USA, 1982) Volume 79, 6646- 100 g/dF(ab')2 of 17-IA as stated on page 6650. Fractionate cells were stimulated. For the next 7 days, aliquots of cells were treated with 2-aminoethyl by rosetting with sheep red blood cells treated with isouronium bromide. Separation into T and B cell populations. [Perolino et al., Clinical Immunology and Immunopathology (1975) Volume 3 324-333 See page. [Which] cell population model 17-IA F (ab’) ) 2 fragments are anti-influenza monoclonal antibodies and goat anti-antibodies. Mouse Ig-F Colored with ITC. Then, the cell population is removed. Analyzed using a fluorograph. Furthermore, peripheral blood mononuclear cells from the same patient were treated with 17-IA F(ab')2 fragment or anti-influenza monoclonal antibody Modifications to produce specific human Ig as described in Decreitas et al. (cited above) The cells were stimulated for 9 days in Missiel-Datton medium. Supernatants obtained from these cultures were analyzed by solid-phase enzyme-linked immunosorbent assay against specific human IgG. [K.P. - L Laboratories, Gettelsburg, M.D. tories, Gaithersburg, MD)) Patient number 08 17-The proportion of lymphocytes that initially bind to IA F(ab')z is 1.2%. The lymphocytes in patient number 23 were 0.2%. MAb 17-IA and incubation Patients who specifically bind to F(a b')2 of 17-IA in the 7 days after treatment The proportion of lymphocytes with number 23 increased from 0.2% to 13%. 17-IA and All binding cells were present in the B cell population. Another nine days later, Human anti-MAb 17-IA IgG was detected. Anti-influenza under the same conditions Incubate lymphocytes from the same patient with the monoclonal antibody However, against MAb 17-IA4 or anti-influenza monoclonal antibody No detectable human Ig was produced.

別の実験で、抗（抗イデイオタイプ）抗体を産生ずるためにひとＢりンバ球を刺 激した。８９７８球を集め、イディオタイプ抗体ではな（自家性抗イデイオタイ プ抗体で刺激した点を除いて、上述の方法を用いてインビトロで刺激した。刺激 した８９７８球によって抗（抗イデイオタイプ）抗体を産生じ、これらの抗（抗 １ｄ）Ａｂ　はＣＲＣ細胞抽出物および全細胞上にあるエピトープを同定するこ とが示された。こうして、ひと免疫系は抗イデイオタイプ抗体で刺激するのに応 答して抗腫瘍抗体を産生ずる。In another experiment, human B lymphocytes were stimulated to produce anti-(anti-idiotype) antibodies. It was intense. 8,978 cells were collected, and the antibody was not an idiotype antibody (autologous anti-idiotype antibody). The cells were stimulated in vitro using the method described above, except that the cells were stimulated with antibodies. stimulation The 8978 cells produced anti-(anti-idiotype) antibodies, and these anti-(anti-idiotype) antibodies 1d) Abs can identify epitopes on CRC cell extracts and whole cells. was shown. Thus, the human immune system responds to stimulation with anti-idiotype antibodies. In response, antitumor antibodies are produced.

（抗イデイオタイプ抗体を産生ずるイモータル３９７８球） モノクローナル抗体を分泌するイモータルＢリンノぐ球を産生ずる多くの方法は 既知技術である。コズバーラ著、〔イムノロシー−７デイ（Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇ ｙ　Ｔｏｄａｙ　）４巻７２−７９頁〕を参照。したがって、上述のように末梢 血リンパ球から得た抗（抗イデイオタイプ）抗体を分泌するひと８９７８球は、 既知技術の１つによりイモータル化することができる。(Immortal 3978 bulb that produces anti-idiotype antibodies) There are many ways to produce immortal B lymphocytes that secrete monoclonal antibodies. This is a known technology. Written by Kozbara, Immunology - 7 Days y Today) Vol. 4, pp. 72-79]. Therefore, as mentioned above, peripheral Human 8978 cells secreting anti-(anti-idiotype) antibodies obtained from blood lymphocytes are It can be immortalized by one of the known techniques.

谷筋に使用できる方法の１つは、ＥＢウィルス（ＥＢＶ）を用いてイモータル化 することである。この方法によると、上述の正常リンパ球をインビトロでＥＢＶ に感染させ、イモータル細胞株が、例えば栄養層上で限界希釈することによって 確立される。コシバーら著、〔上述の文献（１９８３年）〕を参照、およびその 中で引用された参照文５１−６０頁を参照。One of the methods that can be used for Tanisuji is to immortalize it using the EB virus (EBV). It is to be. According to this method, the above-mentioned normal lymphocytes are in vitro treated with EBV. Infect the immortal cell line by limiting dilution on the trophoblast, e.g. Established. See Kocivar et al., supra (1983), and their See references cited therein, pp. 51-60.

別の方策としては、ひとプラズマサイトーマまたはリンポプラストイド融合パー トナ−と、上述の抗−１ｄＡｂ　分泌リンパ球またはＥＢＶ形質転換リンパ球の どちらかを融合するものがある。例えば、抗−ＩｄＡｂを分泌するＥＢＶ−形質 転換１３１Ｊコシバは、ひとリンボブラストイドセルラインＫＲ−４などと融合 できる。ついで目的とするハイブリドーマが親の細胞を除外するウアバイン含有 ハイポキサンチン−アミノプテリン−チミジン培地中で選択される。ハイブリド ーマの特異的抗体産生を試験する。そして陽性ハイブリドーマを免疫抑制した哺 乳動物（例えば、ヌード・マウス）の腹腔または大量の培地中でクローン化、再 クローン化および増殖する。コツバーら著、プロシーディング・オブ・ナショナ ル・アカデミ−・オブ・サイエンス（１９８２年）７９巻６６５１−６６５５頁 を参照。Another strategy is to use human plasmacytoma or lymphoplastoid fusion toner and the above-mentioned anti-1 dAb-secreting lymphocytes or EBV-transformed lymphocytes. There is something that combines both. For example, EBV-transfectors that secrete anti-IdAbs Conversion 131J Koshiba is fused with the human limbo blastoid cell line KR-4 etc. can. The desired hybridoma then contains ouabain to exclude the parental cells. Selected in hypoxanthine-aminopterin-thymidine medium. hybrid test for specific antibody production. Then, positive hybridomas were treated with immunosuppressed mammals. Cloned and re-cloned in the peritoneal cavity of a mammal (e.g. nude mouse) or in bulk culture medium. Clone and propagate. Kotzber et al., Proceedings of the Nation. Le Academy of Science (1982) Vol. 79, pp. 6651-6655. See.

実施例２ウィルス抗体 （抗イデイオタイプ抗体の製造） 狂犬病ウィルスグリコプロティン（Ｇ）のエピトープを再構成するために種々の モノクロナール抗体（ｍＡｂ）に対応して作られた抗イデイオタイプ抗体（抗− Ｉｄ（ＶＮＡ）　を誘発することを含めて、多数の狂犬病ウイルスの重要な生物 学的特性に応答する。Ｇのどの部分が上記の機能に応答するかということについ ては現在では正確には知られていない。シーフンら、ジャーナル・オブ・ゼネラ ル・パイラロジー（１９８３年）６４巻８４３−８５１　頁は、タイプ特異性Ｖ ＮＡに対し少なくとも３つの主な抗原部位の存在を示唆する、狂犬病ウィルスＧ のチャレンジ・ウィルス・スタンダード（ＣＶＳ）株に対する機能性エピトープ マットを記載している。Example 2 Viral antibodies (Production of anti-idiotype antibody) Various methods were used to reconstruct the epitope of rabies virus glycoprotein (G). Anti-idiotype antibodies (anti- A number of important organisms of rabies virus, including inducing Id(VNA) response to scientific characteristics. Regarding which part of G responds to the above functions, is not exactly known at present. Shihun et al., Journal of General. Le Pyralogy (1983), Vol. 64, pp. 843-851, describes type specificity V Rabies virus G suggests the existence of at least three major antigenic sites for NA. Functional epitope against the challenge virus standard (CVS) strain of Matt is listed.

機能的エピトープマットにより定義される狂犬病ウィルス上の結合部位およびア イソタイプ（プロティンＡ・セファロース・クロマトグラフィによって精製可能 ）に基づいて大パネルのハイブリドーマの中から５つの抗ＧｍＡｂを選び出した 。抗狂犬病ウィルスＧ　ｍＡｂの５０９−６．１０１−１．５０７−１および７ １９−３はすでに記載されている。シーフンら著；〔上述の文献〕、およびライ クターら著〔ジャーナル・オブ・エクスペリメンタル・メデイシン（１９８０年 ）１５２巻：　９９−１１２頁参照。狂犬病ウィルスの感染を強力に中和するこ れらのｍＡｂは、以下に示す性質を有している。：５０９−６（エピトープマツ プ部位１　；　ＩｇＧ２ａ）、１０１−１（エピトープマツプ部位［ｂ；ＩｇＧ ；！ａ）。５０７−１（エピトープマツプ部位１［ｂｉｌｇＧｌ）および７１９ −３（エピトープマツプ部位［ｃ；ＩｇＧ２ａ）抗ＧｍＡｂ　１１ａ４−２（Ｉ ｇＧ１）はＰ３ｘ５３Ａｇ８マウスミエローマ細胞の変異株６５３と狂犬病ウィ ルスで免疫したＢ　Ａ　Ｌ　Ｂ　／　ｃマウス由来の膵臓細胞を付加的に融合し て得られた。ライクターら著；〔プロシーディング・オブ・ナショナル・アカデ ミ−・オブ・サイエンス（アメリカ、１９７８年）７５巻３９３Ｂ−３９４２頁 によるカーネイら著；〔ジャーナル・オブ・イムノロジー（１９７９年〕１２３ 巻：　１５４８−１５５０頁〕。抗Ｇ分泌ハイブリドーマ細胞を選択し、限界希 釈およびライクターら著；（上述の文献）（１９７８年）にすでに記述されてい る様に調製り、　ｔ：　腹水テ９　ａ　−：／化する。１１０４−２　ｍＡｂ゛ は、ＥＲＡウィルスと非常によい結合性を示すが中和性に乏しいので選ばれた抗 狂犬病ウィルスのヌクレオカプシドｍＡｂ　５１５−３　（ＩｇＣ，２ａ）およ び３８９−１　（ＩｇＧ１）を、同様の技術でケルブのウィルスで免疫したＢＡ ＬＢ／ｃマウスから分離した。Binding sites and access points on rabies virus defined by functional epitope mats Isotype (Protein A, Sepharose, purifiable by chromatography) ) selected five anti-GmAbs from a large panel of hybridomas. . Anti-rabies virus G mAb 509-6.101-1.507-1 and 7 19-3 has already been described. Shihun et al.; [Journal of Experimental Medicine (1980)] ) Volume 152: See pages 99-112. Strongly neutralizes rabies virus infection These mAbs have the properties shown below. :509-6 (Epitope Pine epitope map site 1; IgG2a), 101-1 (epitope map site [b; IgG2a), 101-1 (epitope map site [b; IgG2a) ;! a). 507-1 (epitope map site 1 [bilgGl) and 719 -3 (epitope map site [c; IgG2a) anti-GmAb 11a4-2 (I gG1) is a P3x53Ag8 mouse myeloma cell mutant strain 653 and rabies virus. We additionally fused pancreatic cells derived from BAL B/c mice immunized with obtained. Reichter et al.; [Proceedings of the National Academy of Sciences] Me of Science (USA, 1978) Vol. 75, pp. 393B-3942 by Carney et al.; [Journal of Immunology (1979)] 123 Volume: Pages 1548-1550]. Select anti-G secreting hybridoma cells and limit the (mentioned above) (1978). t:　Ascites te9　a　-:/. 1104-2 mAb゛ was selected because it shows very good binding to the ERA virus but has poor neutralizing properties. Rabies virus nucleocapsid mAb 515-3 (IgC, 2a) and BA and 389-1 (IgG1) were immunized with Cherub virus using the same technique. isolated from LB/c mice.

用いた狂犬病ウィルスのＥＲＡまたは０７５株のストックは標準方法によりＢＨ Ｋ−２１中で増殖させた。The stock of the rabies virus ERA or 075 used was BH by standard methods. Grown in K-21.

ライクターら著、ラボラトリ−・テクノロジー・イン・ラビーズ１０１−１２３ 　頁（エム・キャブラン・アンド・エイチ・コブロスキー（第３版編集、１９７ ３年）を参照。狂犬病抗原変異株であるＥＩＩＬＡ　ＲＶ１９４−２およびＲＶ ５０９−６はそれぞれ抗−〇ｍＡｂ１９４−２および５０９−６による中和に耐 性であるウィルスを表わすものとして報告されている。ディーツスコルドら著、 プロシーディング・オブ・ナショナル・アカデミ−・オブ・サイエンス（アメリ カ、１９８３年）８０巻７０・−７４頁を参照。狂犬病グリコプロティン（Ｇｓ 　）は、ディーツスコルドらがバイオロジー（１９８３年）１２４巻３３０−３ ３７　頁に記載しているように免疫吸収クロマトグラフィを用いてウィルス粒子 涸渇培地から精製した。Reichter et al., Laboratory Technology in Labies 101-123 Page (edited by M. Cablan and H. Kobrowski (3rd edition), 197 3rd year). Rabies antigen mutant strains EIILA RV194-2 and RV 509-6 was resistant to neutralization by anti-○ mAbs 194-2 and 509-6, respectively. It has been reported that it represents a sexually transmitted virus. Written by Dietzskold et al. Proceedings of the National Academy of Sciences (1983), Vol. 80, pp. 70-74. Rabies glycoprotein (Gs ) is published by Dietzskold et al. in Biology (1983) Vol. 124, 330-3. Viral particles were isolated using immunoabsorption chromatography as described on page 37. Purified from depleted medium.

抗Ｇ　ｍＡｂは全て腹水から精製した。アイソタイプＩｇＧ２ａの抗体はブリト ンーロビンンン緩衝液（ｐＨ，８，０）で約３０分の１に希釈した。ゲルハード ら著、モノクローナル・アンティボディ３１７−３３３頁、（アール。All anti-G mAbs were purified from ascites fluid. Antibodies of isotype IgG2a are It was diluted to about 1/30 with Ni-Robin buffer (pH, 8.0). gelhard et al., Monoclonal Antibodies, pp. 317-333, (R.

ケネット・ティ、マツキーン・アンド・ケイ、ベツチトル編（１９８０年）を参 照。ＢＲＢ中のｍ　Ａ　ｂはチェイルジン０．４５μ１紙を通し、プロティンＡ セファロース４Ｂ吸着カラム〔ファルマシア・ビスカドアウェイ。See Kennett T., Matskeen and K., Betschitl (1980). Light. mAb in BRB was passed through 0.45 μl paper of Cheilgin, and protein A Sepharose 4B adsorption column [Pharmacia Biscado Away.

ニューシャーシー（Ｐｈａｒｍａｃｉａ、　Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、　Ｎ、Ｊ、 　３　Ｉｎかけた。抗体をｐＨａ、ｏでＢ　ＲＢ　７こ溶出する前にＢＲＢ（ｐ Ｈ８，０）　３０　ｘｌでカラムを洗浄した。最初にアイソタイプＩｇＧ１の抗 ＧｍＡｂを最終濃度１８饅（重量比）になるまで硫酸で・沈殿させた。Ｉｇ分画 を溶解し、ＢＲＢ（ｐＨ８，０）で透析し、前と同様にプロティンＡセファロー ス・カラムに通した。カラムから溶出したＩｇを、抗原としてＥＲＡウィルスを 使うラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって検出した。ディラスコールドら著 〔ジャーナル・オブ・パイラロジー（１９８２年）４４巻５９５−６０２頁〕を 参照。抗体を燐酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、（ＰＨ７，４）で真空透析して濃 縮した。蛋白濃縮物は基準としてうし血清アルブミンを用いて定量した。プラム ホールら著、アナリテイカル・バイオケミストリ（１９６９年）３１巻１４６− １４８頁参照。New Chassis (Pharmacia, Piscataway, N, J, 　3　In. BRB (p The column was washed with 30xl of H8,0). First, isotype IgG1 anti- GmAb was precipitated with sulfuric acid to a final concentration of 18% by weight. Ig fraction was dissolved, dialyzed against BRB (pH 8,0), and purified with protein A Sepharose as before. passed through the column. The Ig eluted from the column was used as an antigen for ERA virus. Detection was performed using radioimmunoassay (RIA). Written by Dillascold et al. [Journal of Pyrology (1982) Vol. 44, pp. 595-602] reference. The antibody was concentrated by vacuum dialysis against phosphate buffered saline (PBS), (PH7,4). Shrunk. Protein concentrates were quantified using bovine serum albumin as a standard. plum Hall et al., Analytical Biochemistry (1969) Vol. 31, 146- See page 148.

抗１ｄＡｂは、スタウトら著、ジャーナル・オブ・エクスペリメンタル・メデイ シン（１９８３年）１５７巻６８７−７０４頁で述べられている様に調製した。Anti-1 dAb was published by Stout et al., Journal of Experimental Medicine. It was prepared as described in Shin (1983) Vol. 157, pp. 687-704.

簡単に言えば、雌ニューシーラント白兎を、フロイントの完全アジュバント（Ｆ ＣＡ）で乳化させたプロティンＡセファロース精製ｍＡｂ　３００μｙで、*** 鎖にそって多数の部位に皮下注射した。ＰＢＳ中の抗体１００μｙで２回の追加 抗原を７および３０日筋肉内投与し、血清はその１０日後面取した。抗アイソタ イプＡｂを除去するためニｍＡｂ　５１５−３　（ＩｇＧ２ａ　）　または３８ ９−１（ＩｇＧ１）のいずれかと結合させたセファロース４Ｂカラムにかけて、 各々の抗イデイオタイプ抗血清をイディオタイプ領域に対して特異的にさせた。Simply put, a female New Sealant white rabbit was treated with Freund's complete adjuvant (F Protein A Sepharose-purified mAb emulsified with 300 μy of breast It was injected subcutaneously at multiple sites along the chain. Two additions of 100 μy of antibody in PBS Antigen was administered intramuscularly on days 7 and 30, and serum was harvested 10 days later. anti isota mAb 515-3 (IgG2a) or 38 9-1 (IgG1) on a Sepharose 4B column, Each anti-idiotype antiserum was made specific for the idiotype region.

上記カラムから得た溶出物はイディオタイプ決定基に対し反応性のある抗体を含 有していた。一定領域に対する抗体を、０．１Ｍジエチルアミ７　（ｐＨ１１， ５）でｍＡｂ’　５１５−３および３８９−１免疫吸収カラムから溶出した。各 々の抗ＩｄＡｂ　由来のＩｇＧを上述と同じ様にプロティンＡセファロース・ク ロマトグラフィーによって分離した。カラム流出液の非イディオタイプ決定基に 対する反応性は無視できるものであった。The eluate obtained from the above column contains antibodies reactive against idiotypic determinants. had. Antibodies against certain regions were mixed with 0.1M diethylamide 7 (pH 11, 5) was eluted from the mAb' 515-3 and 389-1 immunoabsorption columns. each IgG derived from each anti-IdAb was purified using protein A Sepharose in the same manner as described above. Separated by chromatography. Non-idiotypic determinants of column effluent The reactivity was negligible.

（抗イデイオタイプ抗体の確認） 上で調製した抗１ｄ　Ａｂ　の特異性および種々の抗ＧｍＡｂの中でのイディオ タイプ交叉反応の存在は、ＲＩＡで各抗１ｄ　Ａｂ　製品について測定した。(Confirmation of anti-idiotype antibody) Specificity of the anti-1d Ab prepared above and ideology among various anti-GmAbs The presence of type cross-reactivity was determined for each anti-1d Ab product by RIA.

固相ＲＩＡを固定ＭＡｂに対する抗１ｄＡｂの結合を測定するために使用した。Solid phase RIA was used to measure the binding of anti-1 dAb to immobilized MAb.

個々のｍＡｂを次に示すように炭酸塩−炭酸水素塩緩衝液（ｐ８８．９　）中で 腹水濃度に応じて希釈した。５０９−６（１：３０００）、１０１−１（１：６ ０００）、７１９−３（１：６０００）、５０７−１（１ニー６０００）、１１ ０４−２（１：１６０００）。ついで、各２５μｌずつポリビニル微量滴定平板 （ダイナチク・ラボラトリーズ製）のウェルに加えた。これらの抗体は３７℃で 一夜インキュベートしウェルに乾かした。ウェル上の遊離結合部位は少なくとも １時間０，０８％アジ化ナトリウムを添加した燐酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳＮ） 中で１０％無ガンマ・うま血清（ギブコ・ラボラトリーズ製）でブロックした。Individual mAbs were prepared in carbonate-bicarbonate buffer (p88.9) as shown below. It was diluted according to the ascites concentration. 509-6 (1:3000), 101-1 (1:6 000), 719-3 (1:6000), 507-1 (1 knee 6000), 11 04-2 (1:16000). Next, add 25 μl each to a polyvinyl microtitration plate. (manufactured by Dynachiku Laboratories). These antibodies were incubated at 37°C. Incubate overnight and dry wells. Free binding sites on the wells are at least Phosphate buffered saline (PBSN) supplemented with 0.08% sodium azide for 1 hour Inside, it was blocked with 10% gamma-free horse serum (manufactured by Gibco Laboratories).

抗ｉｄ　Ａｂ　の希釈液２５μｌを加え、室温で１時間後プレートを充分洗浄し た。結合した抗Ｉｄ　Ａｂ　は、よう素化法で標識した１２５１やぎ抗家兎１ｇ Ｇ（カッベル・ラボラトリーズ製）を２５μ、９（３００００カウント／分）加 えることによって検出し、室温でさらに１時間インキュベートした。Ｍａｒｋｗ ｅｌｌら著、〔バイオケミストリー（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、　１９７８　 ）　１７巻＝４８００−４８１７頁参照。抗１ｄＡｂ　希釈液または放射能標識 したプローベの全てをＰＢＳＮ中に１０％無ガンマ・うま血清で作った。非結合 プローベがなくなるまでプレートを洗い、それぞれのウェルに結合した放射能を ガンマ線カウンターで測定した。Add 25 μl of diluted anti-id Ab, and after 1 hour at room temperature, wash the plate thoroughly. Ta. The bound anti-Id Ab was 1 g of 1251 goat anti-rabbit labeled by the iodine method. G (manufactured by Kabbel Laboratories) at 25 μ, 9 (30,000 counts/min) Detection was performed by dilution and further incubation at room temperature for 1 hour. Markw Ell et al., Biochemistry, 1978. ) See Volume 17 = pages 4800-4817. Anti-1dAb diluent or radioactive label All probes were made with 10% gamma-free horse serum in PBSN. non-binding Wash the plate until the probe is gone and remove the radioactivity bound to each well. Measured with a gamma ray counter.

同種および異種ｍＡｂで各々の抗１ｄ　Ａｂ　製品を滴定した結果各抗１ｄＡｂ が同種１ｄｍＡｂに対して特異的であることがわかった。Titration of each anti-1dAb product with homologous and heterologous mAbs resulted in each anti-1dAb was found to be specific for the cognate 1dmAb.

（イディオタイプ抗体のパロトープに対する抗イデイオタイプ抗体の定量） 競合ＲＩＡ法を、ＩｄＡｂおよび抗ＩｄＡｂ間の相互作用に対する狂犬病ウィル スＧの阻害能を試験するために考案した。Ｃｈａｆｌｉｎ　ら著、ジャーナル・ オブ・イムノロジー（Ｊ　、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　、１９７４年）１１２巻：１ ７４７−１７５６　頁〕、および、５ｈｅｒら著、ジャーナル・オブ・イムノロ ジー（Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ６．１９７２年）１０９巻：１７６−１７８頁参照。(Quantification of anti-idiotype antibody against parotope of idiotype antibody) The competitive RIA method was used to test the rabies virus for the interaction between IdAb and anti-IdAb. It was devised to test the inhibitory ability of SuG. Chaflin et al., Journal of Immunology (J, Immunol, 1974) 112:1 747-1756] and 5her et al., Journal of Immunology. See J. Immunol 6. 1972, vol. 109: 176-178.

狂犬病Ｇｓ　を競合抗原として用いた。標準抗１ｄＡｂ希釈液を添加する前に、 Ｇｓの２倍系列希釈液と共に予備滴定レベルのｍＡｂを１時間インキュベートし た。結合抗血清の量を１２５１で標識したやぎ抗家兎抗体を結合させることによ って定量した。対応する抗ＧｍＡｂ（５０９−６，５０７−１、および１１０４ −２）に対する５種中３種の抗１ｄＡｂの結合をＧｓ　が阻害した。最大阻害は 、６μ！Ｚ／ｍＧｓ　の量で２０〜５０哄に変化するが、僅か０．７５μｉ／ｍ ｌ　Ｇ　ｓ程度でも少なくとも１５哄の減少が観察された。抗ＩｄＡｂの結合を 全面的に阻害するのが不可能なことは、フレームワークとバロトープ部位の両持 異性が３種のポリクローナル抗１ｄ血清に存在することを示す。このことは、還 元または非還元状態でドデシル硫酸ナトリウム・ポリアクリルアミドゲル電気泳 動（５ＤＳ−ＰＡＧＥ）を用いて分離したｍＡｂと抗ＩｄＡｂ　の反応性を測る ウェスタン・プロット測定法によって確認された。抗原結合部位はｒｎＡｂの還 元によって除去されるので、還元ｍＡｂに対する抗ＩｄＡｂの反応性はフレーム ワーク決定基に対する特異性を示したことになる。Ｇ、による抗１ｄ１０１−Ｉ Ａｂまたは抗１ｄ　７１９−３Ａｂの有意な結合阻害が存在しないことは、上記 血清におけるバロトープ特異性ポピユレーションが微弱あるいは欠如しているこ とを示唆している。Rabies Gs was used as a competitive antigen. Before adding standard anti-1 dAb dilutions, Incubate pre-titrated levels of mAb with 2-fold serial dilutions of Gs for 1 hour. Ta. The amount of bound antiserum was reduced by binding goat anti-rabbit antibody labeled with 1251. It was quantified. The corresponding anti-GmAbs (509-6, 507-1, and 1104 Gs inhibited the binding of three out of five anti-1 dAbs to -2). The maximum inhibition is , 6μ! It changes from 20 to 50 depending on the amount of Z/mGs, but it is only 0.75 μi/m A decrease of at least 15 liters was observed even at 1 Gs. Anti-IdAb binding What is impossible to completely inhibit is the combination of framework and barotopic sites. It is shown that isomerism exists in three polyclonal anti-1d sera. This means that the return Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis in original or non-reducing state Measure the reactivity of the separated mAb and anti-IdAb using chromatography (5DS-PAGE) Confirmed by Western blot measurements. The antigen-binding site is the rnAb's reducing site. The reactivity of the anti-IdAb to the reduced mAb is in frame because it is removed by the original This indicates specificity for work determinants. anti-1d101-I by G. The absence of significant binding inhibition of Ab or anti-1d 719-3 Ab was demonstrated above. Barotope-specific population in serum may be weak or absent. It suggests that.

（抗（抗イデイオタイプ）抗体の製造）次に示す例は、抗Ｇ　ｍＡｂの抗原結合 部位に対して反応性を有する抗１ｄＡｂが上述の抗Ｇ　ｍＡｂに認識されたウィ ルスのエピトープをまねたサブポピユレーションを含有し、Ｇに対する免疫応答 を誘発しうろことを示している。(Production of anti-(anti-idiotype) antibodies) The following example shows the antigen binding of anti-G mAb. The anti-1 dAb that is reactive against the site is recognized by the above-mentioned anti-G mAb. contain subpopulations that mimic the epitopes of G. It shows that it induces scales.

４つのグループに分けたＩＣλマウスの皮下にＦＣＡで乳化したプロティンＡセ ファロース精製抗１ｄ　ＩｇＧを１匹当り４０μＩずつ接種した。追加抗原刺激 皮下接種は７日月と３２日日目にそれぞれフロイント完全アジュバント中に４０ μｙの抗ＩｄＩｇＧを入れて行った。Protein A serum emulsified with FCA was administered subcutaneously to ICλ mice divided into four groups. 40 μl of phallose-purified anti-1d IgG was inoculated per animal. booster stimulation Subcutaneous inoculations were performed on day 7 and day 32 of 40 mg in complete Freund's adjuvant, respectively. μy of anti-IdIgG was added.

最後の追加抗原刺激接種に続く５日間眼窩後方叢より採血し、集めた血清につい て狂犬病ウィルス中和抗体（ＶＮＡ）を調べた。対照として別のグループのマウ スには、プロティンＡ・セファロースで精製した正常家兎夏ｇＧで免疫した。Blood was collected from the retroorbital plexus for 5 days following the last booster vaccination, and the collected serum was Rabies virus neutralizing antibodies (VNA) were examined. Another group of mice as a control The mice were immunized with normal rabbit Natsu gG purified with Protein A Sepharose.

免疫したマウスにおけるＶＮＡの濃度を迅速螢光フォーカス阻害試験法の変法に よって測定した。スミスら著ラボラトリ−・テクエックス・イン・ラビース（Ｌ ａｂｏｒａｃｏｒｙ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ　ｉｎ　Ｒａｂｉｅｓ　Ｍ、カブラ ンおよびＨ，コブロフスキ、ら編、第３版、１９７３年）：３５４−３５７頁参 照。マウス血清を二倍系列希釈物をマイクロタイター■平板（ファルコン・プラ スチックス製）（５０μｌ／　ウェル）で作り、１０’　Ｐ　ＦＵ１５０μｌを 含有する、同量のウィルスを用いて３７℃で１時間インキュベートした。インキ ュベーション後、新たにトリズシン処理したＢＨＫ−２１細胞（２Ｘ　１０６個 ／Ｉ−１　”）５０μｌをそれぞれのウェルに加え、混合した。そして血清・ウ ィルス・細胞混合物の１０μｌづつをテラサキ平板（ファルコン・プラスチック ス製）のウェルに（２回に分けて）移した。２０時間インキュベーション後平板 を最初、ＰＢＳで次いで蒸留水中８０％（容量比）アセトンで洗い、室温におい て８０−アセトン中で３０分間固定処理した。平板を乾燥し、螢光コンジュゲー ト家兎由来抗狂犬病ヌクレオカプシド抗体５μｌ／ウェルと３７℃で３０分間細 胞を染色した。ライクトル著シンポジウム・オン・シリーズ・イムノバイオロジ カル・スタンダード（Ｓｙｍｐ、　５ｅｒｉｅｓ　Ｉｍｍｕｎａｌｂｉｏｌ。Determination of VNA concentration in immunized mice using a modified rapid fluorescence focus inhibition test method Therefore, it was measured. Laboratory Techniques in Labyrinth (L) by Smith et al. aboracory Techniques in Rabies M, Cabra (eds. N. and H. Kobrowski, et al., 3rd edition, 1973): pp. 354-357. Light. Plate two-fold serial dilutions of mouse serum in a microtiter plate (Falcon Plasma). (manufactured by Stix) (50 μl/well) and add 150 μl of 10’P FU. The same amount of virus was incubated at 37°C for 1 hour. ink After incubation, add freshly treated BHK-21 cells (2X 106 cells) /I-1”) was added to each well and mixed. Pour 10 μl of each virus/cell mixture onto a Terasaki plate (Falcon Plastic). The cells were transferred (in two batches) to the wells of a commercially available manufacturer. Plating after 20 hours incubation was washed first with PBS and then with 80% (by volume) acetone in distilled water and kept at room temperature. The cells were fixed in 80-acetone for 30 minutes. Dry the plate and apply fluorescent conjugate Incubate with 5 μl/well of anti-rabies nucleocapsid antibody derived from rabbits for 30 minutes at 37°C. The cells were stained. Symposium on Series Immunobiology by Leictor Cal Standard (Symp, 5eries Immunalbiol.

５ｔａｎｄａｒｄ　）　２１巻１０２−１１８頁を参照。対照ウェル（ウィルス を含むが抗体を含まない）は狂犬病ウィルス特異性内容物を包含する細胞をほぼ ４０％示した。5 standard) Volume 21, pages 102-118. Control well (virus containing rabies virus-specific content (containing rabies virus-specific content) It showed 40%.

ウィルス中和の終点は、狂犬病ウィルスに感染した細胞数を５０％減少しうる最 大血清希釈レシプロカルとして定義した。The end point of virus neutralization is the maximum that can reduce the number of cells infected with rabies virus by 50%. It was defined as a large serum dilution reciprocal.

迅速螢光フォーカス阻害試験の結果は以下の表、に示す。抗１ｄ５０９−６Ａｂ および抗Ｉｄ　１１０４−２Ａｂで免疫したマウスにＥλＡ株狂犬病ウィルスに 対する顕著なＶＮＡ力価を生じた。他の３種の抗（抗１ｄ）ＡｂはＥＲＡウィル スを中和しなかった。対照の実験は、免疫するのに用いた抗１ｄＡｂと同様にマ ウス抗（正常家兎１ｇＣ，）Ａｂが狂犬病ウィルス中和活性を持っていないこと を示した。さらに、抗１ｄ　５０９−６Ａｂと共に抗（抗ｌａ　５０９−６）　 血清を予備インキュベートすると中和活性を失った。しかし正常家兎血清で予備 インキュベートしても活性を失わなかった。The results of the rapid fluorescence focus inhibition test are shown in the table below. Anti-1d509-6 Ab and EλA strain rabies virus in mice immunized with anti-Id 1104-2 Ab. This resulted in significant VNA titers against. The other three anti-(anti-1d) Abs are ERA virus did not neutralize the Control experiments were performed using the same anti-1 dAb used to immunize. Anti-rabies (normal rabbit 1gC) Ab does not have rabies virus neutralizing activity showed that. Furthermore, along with anti-1d 509-6 Ab, anti(anti-la 509-6) Preincubating the serum lost its neutralizing activity. However, normal rabbit serum is used as a backup. No activity was lost even after incubation.

生じたＶＮＡの特異性を試験するために、他の狂犬病ウィルスを中和測定に用い た。狂犬病のＣｖＳ株はｍＡｂ　５０９−６　および１１０４−２の両方と結合 した（ここではデータは示さない）、そして表は、ＣｖＳが抗（抗Ｉｄ　５０９ −６　）血清および抗（抗１ｄ　１１０４−２）血清の両方によって中和される ことを示している。To test the specificity of the resulting VNA, other rabies viruses were used for neutralization measurements. Ta. Rabies CvS strain binds both mAbs 509-6 and 1104-2 (data not shown here), and the table shows that CvS was anti-(anti-Id 509 -6) Neutralized by both serum and anti-(anti-1d 1104-2) serum It is shown that.

他方、ＥＲＡウィルスの変異株であるＲＶ５０９−６は、５０９−６エピトープ が変異した結果ｍＡｂ　５０９−６　による結合および中和活性を失っているが （ラドンら著ジャーナル・オン・ゼネラル・パイロロジー（Ｊ、Ｇｅｎ。On the other hand, RV509-6, a mutant strain of ERA virus, has the 509-6 epitope. As a result of the mutation, the binding and neutralizing activity of mAb 509-6 has been lost. (Radon et al., Journal on General Pyrology (J, Gen.

Ｖｉｒｏｌ、１９８３）　６４巻：　８４３−８５１頁参照）、そノウイルスは 抗（抗Ｉｃ１５０９−６）血清によって中和されなかった。別の中和耐性変異株 ＲＶ−１９４−２は、抗（抗Ｉｄ　５０９−６）血清によって中和された。先の 結果は、抗ＧｍＡｂ　５０９−６および１９４−２に認識される抗原部位が完全 に独立していることを示す。ラドン等、前掲参照。このデータは、抗（抗Ｉｄ　 ５０９−６　）血清が抗ＧｍＡｂ　５０ｇ−６に認識されたエピトープとのみ反 応し、したがって上記エピトープは抗１ｄ　５０９−５　Ａｂ　にまねられたの であることを示す。Virol, 1983) Vol. 64: pp. 843-851), the virus is It was not neutralized by anti-(anti-Ic1509-6) serum. Another neutralization-resistant mutant RV-194-2 was neutralized by anti-(anti-Id 509-6) serum. Previous The results show that the antigenic sites recognized by anti-GmAbs 509-6 and 194-2 are completely indicates that it is independent. See Radon et al., supra. This data is based on anti-(anti-Id) 509-6) The serum reacts only with the epitope recognized by anti-GmAb 50g-6. Therefore, the above epitope was mimicked by the anti-1d 509-5 Ab. .

抗（抗Ｉｄ）血清による 狂犬病ウィルスの中和士 マウス抗血清の相手　ＥＲＡ　ＣＶＳ 親株　ＲＶ５０’ｌ−６ＲＶ１９４−２　親株正常　家兎１ｇＧ　４　４　４　 ４ 抗−Ｉｄ５０９−６　３２　４　６４　６４抗−Ｉｄｌｏｌ−１４ＮＤ来　ＮＤ 　ＮＤ抗−１ｄ１７９−３　４　ＮＤ　ＮＤ　ＮＤ抗−１ｄ５０７−１　４　Ｎ Ｄ　ＮＤ　ＮＤ抗−１ｄｌ１０４−２　１２８　４　１２８　６４ＲＩＧ＊４　 １６　１６　３２　３２ 寸　感染細胞数を５０哄減少させつる最高血清希釈レシプロカル 来　実施せず 料　ヒト抗狂犬病！ｇを０．２国際軍位／ｌｄに希釈し２倍系列希釈物を狂犬病 ウィルスと共にインキ−已ご：」二凱丸工一一一一−−一一一−一−一−一一− 上記実験は説明の目的のみで表わされたのであってこの発明を限定するものでは なく、この発明は請求の範囲のみによって定義されるものである。by anti (anti-Id) serum Rabies virus neutralizer Mouse antiserum partner ERA CVS Parent strain RV50'l-6RV194-2 Parent strain normal domestic rabbit 1gG 4 4 4 4 Anti-Id509-6 32 4 64 64 Anti-Idlol-14ND ND anti-1d179-3 4 ND ND ND anti-1d507-1 4 N D ND ND anti-1dl104-2 128 4 128 64RIG*4 16 16 32 32 The highest serum dilution reciprocal that reduces the number of infected cells by 50% Not implemented since Fee Human anti-rabies! Dilute g to 0.2 international military rank/ld and prepare 2-fold serial dilutions for rabies. Ink with a virus: ``Nikaimaru Kou 1111--111-1-1-11- The above experiments are presented for illustrative purposes only and are not intended to limit this invention. Rather, the invention is defined only by the scope of the claims.

国際調査報告 −１，−八−””＃Ｉ””？ＣＴ／Ｚ？　８４１０Ｑｖ１ａＡｌ−ｎ−ｉＥＸＴ ｏＴｈｅ：ＩＮＴＥＲＮｉ一つ？：０ＮＡｒ−５ＥＡＲＣＨＲＥ？ＯＲτ０ＮＩ ＮＴＥＲＮＡＴ、ｌ０ＮＡＬ　Ａ、ＰＰ乙ＩＣＡＴＩＯＮ　Ｎｏ、　ＰＣＴ／Ｅ Ｐ　８４１００３３４　（ＳＡ　８２５１）international search report -1, -8-""#I""? CT/Z? 8410Qv1aAl-n-iEXT oThe: One INTERNi? :0NAr-5EARCHRE? ORτ0NI NTERNAT, l0NAL A, PP ICATION No, PCT/E P 84100334 (SA 8251)

Claims (8)

【特許請求の範囲】[Claims] （１）抗腫瘍または抗ウイルス抗体のパロトープであるエピトープを同定する抗 イデイオタイプ抗体を含む、腫瘍またはウイルスに対して免疫応答を誘発する組 成物。(1) Antibodies that identify epitopes that are parotopes of antitumor or antiviral antibodies. A group that elicits an immune response against a tumor or virus, including idiotypic antibodies. A product. （２）抗イデイオタイプ抗体がモノクローナルである請求の範囲第１項記載の組 成物。(2) The set according to claim 1, wherein the anti-idiotype antibody is monoclonal. A product. （３）抗イデイオタイプ抗体がポリクローナルである請求の範囲第１項記載の組 成物。(3) The set according to claim 1, wherein the anti-idiotype antibody is polyclonal. A product. （４）抗腫瘍または抗ウイルス抗体のパロトープであるエピトープを同定する抗 イデイオタイプ抗体を産生するイモータルＢリンパ球。(4) Antibodies that identify epitopes that are parotopes of antitumor or antiviral antibodies. Immortal B lymphocytes that produce idiotype antibodies. （５）ハイブリドーマである請求の範囲第４項記載のイモータルＢリンパ球。(5) The immortal B lymphocyte according to claim 4, which is a hybridoma. （６）請求の範囲第４または５項記載のイモータルＢリンパ球から得られ、他の 抗体を実質的に含まないモノクローナル抗体。(6) Obtained from the immortal B lymphocytes according to claim 4 or 5, and other A monoclonal antibody that is substantially free of antibodies. （７）抗腫瘍または抗ウイルス抗体のパロトープであるエピトープを同定し、抗 アインタイプ抗体を実質的に含まないポリクローナル抗イデイオタイプ抗体。(7) Identify epitopes that are parotopes of anti-tumor or anti-virus antibodies, and A polyclonal anti-idiotype antibody that is substantially free of ein-type antibodies. （８）異種宿主に対して抗腫瘍または抗ウイルス抗体を投与し、上記宿主の血清 から目的とする抗イデイオタイプ抗体を分離・精製することからなる、抗腫瘍ま たは抗ウイルス抗体のパロトープであるエビトープを同定する抗イデイオタイプ 抗体の製法。(8) Administering antitumor or antiviral antibodies to a heterologous host, and administering the serum of the host to Anti-tumor or or anti-idiotypes that identify evitopes that are parotopes of antiviral antibodies. Antibody production method.