JPS61296270A - Reagent for immunological reaction - Google Patents

Abstract

PURPOSE:To enable accurate examination without diluting serum or removing a rheumatic factor, by a reagent prepared by containing 0.4-8pts.wt. of basic amino acid or oligopeptide consisting of basic amino acids in 100pts.vol. of a suspension containing a fine particulate carrier allowed to adsorb an antigen or an antibody. CONSTITUTION:As a fine particulate carrier for adsorbing an antigen or an antibody, a red corpuscle or polystyrene latex is used. As basic amino acid used as the stabilizer of the fine particulate carrier, lisine and alginic acid etc. are used and, as oligopeptide consisting of basic amino acids, L-lisyl-L-lisine and L-lisyl-L-alginic acid etc. are used. The use amount of these additives is not critical but a range visually confirming agglutination, that is, 0.4-8pts.wt., pref., about 0.6-4pts.wt. per 100pts.wt. of a suspension. By this reagent, accurate examination is enabled even when a specimen is serum without diluting serum or removing a rheumatic factor.

Description

【発明の詳細な説明】 １０発明の背景 炎！±１ 本発明は改良された免疫学的反応用試薬に関する。[Detailed description of the invention] 10 Background of the invention flame! ±1 The present invention relates to improved reagents for immunological reactions.

さらに詳しくは、本発明は抗原または抗体を吸着した微
粒子担体の懸濁液に塩基性アミノ酸または塩基性アミノ
酸からなるオリゴペプチドを添加した免疫学的反応用試
薬に関する。More specifically, the present invention relates to a reagent for immunological reactions in which a basic amino acid or an oligopeptide consisting of a basic amino acid is added to a suspension of fine particle carriers adsorbed with an antigen or antibody.

免疫学的反応用試薬は、血清、尿等の体液中に存在づる
抗原または抗体を筒単にかつ鋭敏に検出し、測定するこ
とができるので疾患の診断に広く用いられている。Immunological reaction reagents are widely used in disease diagnosis because they can simply and sensitively detect and measure antigens or antibodies present in body fluids such as serum and urine.

−および１ 免疫学的反応用試薬は長期保存中に懸濁微粒子が自然凝
集を起すことがありこれを防止するため、従来感作した
ラテックスの懸濁液にウシ血清アルブミン、ウマ血清ア
ルブミン等のアルブミンを添加することが行なわれてい
る。またその改良法として塩化コリンやサッカロース等
を添加する方法（特開昭５４−２６３２７号）や分子量
１０００〜１０，０００のポリペプチドを添加する方法
（特開昭５８−１４４７４８号）が提案されている。- and 1 Immunological reaction reagents may cause spontaneous aggregation of suspended particles during long-term storage. Addition of albumin has been carried out. In addition, as improvement methods, a method of adding choline chloride, sucrose, etc. (Japanese Unexamined Patent Publication No. 54-26327) and a method of adding a polypeptide with a molecular weight of 1000 to 10,000 (Japanese Unexamined Patent Application No. 58-144748) have been proposed. There is.

これらの従来法によれば懸濁微粒子の自然凝集の問題は
ある程度解消されているが必ずしも十分ではなく、また
粘度の上昇により検出感度や凝集速度が低下する等の欠
点があった。These conventional methods have solved the problem of spontaneous aggregation of suspended fine particles to some extent, but it is not always sufficient, and they also have drawbacks such as a decrease in detection sensitivity and aggregation rate due to an increase in viscosity.

さらに、検体が血清であるとぎには検体中にリウマチ因
子が存在する場合があり、このものは試薬中の抗体と非
特異的に反応するので、従来の試薬においてはリウマチ
因子と反応１“るｌ”ｃ部分を除去したＦ　（ａｂ）’
　２をラテックス粒子に感作したり、検体中のリウマチ
因子を除去する前処理の必要があった。また、血清中に
はリウマチ因子以外にも抗体と非特異的に反応する成分
が含まれているので従来の試薬を使用する場合は血清を
適当な濃度にまで希釈しなければ１．’にらなかった。Furthermore, when the sample is serum, rheumatoid factor may be present in the sample, and this reacts nonspecifically with antibodies in the reagent, so conventional reagents do not react with rheumatoid factor. F (ab)' with l''c part removed
It was necessary to perform pretreatment to sensitize 2 to latex particles and to remove rheumatoid factors in the specimen. In addition, serum contains components other than rheumatoid factors that react nonspecifically with antibodies, so when using conventional reagents, the serum must be diluted to an appropriate concentration. 'I didn't get it.

■８発明の目的 そこで本発明の目的は上記の欠点のない免疫学的反応用
試薬を提供Ｊることにある。(8) Purpose of the Invention Therefore, the purpose of the present invention is to provide a reagent for immunological reactions that does not have the above-mentioned drawbacks.

即ち、本発明は、長期間の保存によっても懸濁微粒子が
凝集づることのない安定な免疫学的反応用試薬を提供す
ることを目的とする。That is, an object of the present invention is to provide a stable immunological reaction reagent in which suspended fine particles do not aggregate even after long-term storage.

本発明はさらに、検体が血清である場合にも、これを希
釈したり、存在するリウマチ因子を除去したりすること
なく正確な検査を行うことが可能な免疫学的反応用試薬
を提供することを目的とげる。The present invention further provides an immunological reaction reagent that allows accurate testing even when the specimen is serum without diluting it or removing existing rheumatoid factors. Achieve the goal.

上記目的を達成するため、本発明の免疫学的反応用試薬
は抗原または抗体を吸着した微粒子担体の懸濁液１００
容Ｍ部当り塩基性アミノ酸または塩基性アミノ酸からな
るオリゴペプチド０，４〜８重量部を含有する。In order to achieve the above object, the immunological reaction reagent of the present invention is a suspension of microparticle carriers adsorbed with antigens or antibodies.
It contains 0.4 to 8 parts by weight of a basic amino acid or an oligopeptide consisting of a basic amino acid per M part.

■９発明の詳細な説明 本発明の免疫学的反応用試薬において、抗原または抗体
を吸Ｗ”ｌるために用いられる微粒子担体としては、赤
血球、ベントナイト、コロジオン粒子、カオリン、活性
炭、ポリスチレンラテックス、ポリビニールトルエンラ
テックス、合成ゴムラテックス等があげられる。これら
の担体のうち、合成ラテックス特にポリスチレンラテッ
クスは保存時の安定性に浸れ、抗原、抗体等のＣｈｉ白
質を強く吸着し、さらに吸着した抗原、抗体の性質を変
化なく保持する点で優れている。■9 Detailed Description of the Invention In the immunological reaction reagent of the present invention, fine particle carriers used to absorb antigens or antibodies include red blood cells, bentonite, collodion particles, kaolin, activated carbon, polystyrene latex, Examples include polyvinyl toluene latex, synthetic rubber latex, etc. Among these carriers, synthetic latex, especially polystyrene latex, is stable during storage and strongly adsorbs Chi white matter such as antigens and antibodies. It is superior in that it maintains the properties of antibodies without change.

微粒子担体の安定剤どして使用される塩基性アミノ酸と
しては、リジン、アルギニンまたはヒスチジンがあげら
れ、塩基性アミノ酸からなるオリゴペプチドとしては、
し−リジル−し−リジン、Ｌ−リジル−し−アルギニン
、Ｌ−リジル−Ｌ−ヒスチジン、Ｌ−リジル−し−リジ
ル−Ｌ−リジン等があげられる。オリゴペプチドはアミ
ノ酸の構成数が２〜５で分子量が５００以下のものが好
ましい。上記塩基性アミノ酸やオリゴペプチドは遊離塩
基または−もしくは二酸付加塩の形でも使用可能である
。これら添加物の使用量は臨界的ではなく、凝集を視認
可能な範囲、すなわち、懸濁液１００容吊部当り０．４
〜８重量部好ましくは０．６〜４唄徂部程度である。０
．４重量部以下の使用量では微粒子担体の安定化効果を
達成することができず、８重量部以上では免疫学的反応
による微粒子担体の凝集を阻害する可−曲性がある。Basic amino acids used as stabilizers for microparticle carriers include lysine, arginine, and histidine, and oligopeptides composed of basic amino acids include:
Examples include lysyl-lysyl-lysine, L-lysyl-lysyl-arginine, L-lysyl-L-histidine, and L-lysyl-lysyl-L-lysine. The oligopeptide preferably has a composition of 2 to 5 amino acids and a molecular weight of 500 or less. The above basic amino acids and oligopeptides can also be used in the form of free bases or - or diacid addition salts. The amount of these additives used is not critical and is within the range where agglomeration is visible, i.e. 0.4 parts per 100 volumes of suspension.
~8 parts by weight, preferably about 0.6 to 4 parts by weight. 0
．． If the amount used is less than 4 parts by weight, the stabilizing effect of the particulate carrier cannot be achieved, and if it is more than 8 parts by weight, the particulate carrier has flexibility that inhibits aggregation due to immunological reaction.

尚、本発明にお１ノる前記数値限定に関しては単位系を
統一したときの値を示す。It should be noted that with regard to the numerical limitations mentioned above in the present invention, the values are shown when the unit system is unified.

本発明の免疫学的反応用試薬ｔよぞれ自体公知の方法に
よって製造される。例えば、グリシン等の緩衝液に微細
粒子を懸濁し、この粒子に抗原または抗体を吸着さけ、
次いで所定量のＪｕｌ性アミノ酸または塩基性アミノ酸
からなるオリゴペプチドを緩衝液に溶かしたものを上記
懸濁液に加えることによって製造される。尚、安定剤と
して塩基性アミノ酸と塩基性アミノ酸を伴わせて使用し
ても差しつかえない。The immunological reaction reagent t of the present invention is manufactured by a method known per se. For example, by suspending fine particles in a buffer such as glycine and adsorbing antigens or antibodies to the particles,
Next, it is produced by adding a predetermined amount of an oligopeptide consisting of a Jul amino acid or a basic amino acid dissolved in a buffer solution to the above suspension. In addition, a basic amino acid and a basic amino acid may be used together as a stabilizer.

本発明の試薬には、従来から懸濁液安定剤として使用さ
れていたアルブミン等をさらに添加することもでき、そ
の場合には保存安定性が一層向上する。Albumin, which has been conventionally used as a suspension stabilizer, can be further added to the reagent of the present invention, and in this case, storage stability is further improved.

次に実施例を示して本発明をさらに具体的に説明する。Next, the present invention will be explained in more detail with reference to Examples.

実施例　１゜ （試薬のｙ４製） （１）　　３ボ１ス　し゛−テツ　ス゛０．１Ｍグリシ
ン緩衝液（ｐＨ８，０＞　ニ２Ｗ／Ｖ％になるようにポ
リスチレンラテックス（直径０．１２０μ）を浮遊さ往
る。Example 1゜(Reagent made by Y4) (1) 3-bottle 1-box 0.1M glycine buffer (pH 8.0>2W/V%) Add polystyrene latex (diameter 0.120μ) Floating away.

抗ヒトＣ−反応性蛋白ウサギ血清のＩｏＧ分画を０．１
Ｍグリシン緩衝液（ｐＨ８，０）に０．２Ｗ／Ｖ％にな
るように希釈する。The IoG fraction of anti-human C-reactive protein rabbit serum was 0.1
Dilute to 0.2 W/V% in M glycine buffer (pH 8,0).

上記（１）の２　Ｗ／Ｖ％ボリスヂレンラテックス液１
容に上記（２）の抗ヒトＣ−反応性蛋白１ｇＧ溶液１容
を加え、室温にて３時間および４℃にて１昼夜感作する
。Above (1)-2 W/V% Borisdylene latex liquid 1
Add 1 volume of the anti-human C-reactive protein 1gG solution in (2) above to the solution, and sensitize at room temperature for 3 hours and at 4°C for 1 day and night.

次にウシ血清アルブミンを０もしくは１　Ｗ／Ｖ％およ
び（または）１−−リジン塩酸塩をＯもしくは２　Ｗ／
Ｖ％含ム０．１Ｍグリシン！！街液（ｐｌ＋　８．０）
　ＧＣて濃度ｏ、ｅｗ／ｖ％の感作ラテツクス試薬を調
製する。Bovine serum albumin was then added at 0 or 1 W/V% and/or 1-lysine hydrochloride was added at O or 2 W/V%.
V% containing 0.1M glycine! ! Street liquid (pl+ 8.0)
A sensitizing latex reagent with a concentration of o, ew/v% is prepared using GC.

（Ｕ集試験） 凝集反応用スライドグラス上に被検血清（非動化せず）
　　０．０４−を滴■し、その上に上記各ラテックス試
薬０．０４　ｄを加え、マツチ棒でよく混和し、スライ
ドグラスを上下左右にゆすり１分間後の凝集像を次の判
定基準に従い判定した。結果を表１に示ｔ。(U test) Test serum (not immobilized) on a slide glass for agglutination reaction
Add 0.04 d of each of the latex reagents above, mix well with a pine stick, shake the slide glass up and down, left and right, and judge the agglutination image after 1 minute according to the following criteria. did. The results are shown in Table 1.

判定基準 甘・・・大きな凝集塊が認められる。Judgment criteria Sweet: Large aggregates are observed.

＋・・・小さなもしくは中程度の凝集塊が認められる。+...Small or medium aggregates are observed.

−・・・凝集塊が全く認められず、均一である。-: No agglomerates were observed and the sample was uniform.

表　　　１ 表１に示寸ように、ウシ血清アルブミン１　Ｗ／Ｖ％お
よびし一リジン塩酸塩２　Ｗ／Ｖ％を含有する本発明の
試薬は、従来のウシ血清アルブミンＩ　Ｗ／Ｖ％のみを
含有する試薬に比べ、検出感度が高く、ＲＦによる非特
異反応がない点において優れている。Table 1 As shown in Table 1, the reagent of the present invention containing 1% W/V of bovine serum albumin and 2% W/V of mono-lysine hydrochloride can contain only % W/V of conventional bovine serum albumin I. It is superior in that it has higher detection sensitivity and no non-specific reactions due to RF than other reagents containing it.

実施例　２ 実施例１のＬ−リジン塩酸塩の代りにＬ−アルギニンあ
るいはＬ−リジル−Ｌ−リジン塩酸塩を用いて同様の凝
集試験を行なったどころ、表１と同一の結果を得た。Example 2 A similar agglutination test was conducted using L-arginine or L-lysyl-L-lysine hydrochloride in place of L-lysine hydrochloride in Example 1, and the same results as in Table 1 were obtained.

実施例　３ 実施例１および２で調製した各試薬を４℃で所定期間保
持した。保存に際してアジ化ナトリウム０．０２　Ｗ／
Ｖ％を添加した３、所定の保存期間後に各試薬を用いて
実施例１と同様の方法でヒトＣ−反応性蛋白の検出を行
なった。Example 3 Each reagent prepared in Examples 1 and 2 was held at 4°C for a predetermined period of time. Sodium azide 0.02 W/ during storage
3 and after a predetermined storage period, human C-reactive protein was detected in the same manner as in Example 1 using each reagent.

結果を表２にポす。The results are shown in Table 2.

＊不良とは凝集像が出ないか出ても不鮮明であることを
示す。表２から、Ｌ−リジン−塩酸塩またはＬ−リジル
−し−リジンニ塩酸塩を添加した本発明の試薬は、ウシ
血清アルブミンのみを添加した従来の試薬に比べ保存安
定性が優れていることが明らかである。*Poor means that no agglomerated image appears or that it is unclear even if it appears. Table 2 shows that the reagent of the present invention to which L-lysine hydrochloride or L-lysyl-lysine dihydrochloride is added has better storage stability than the conventional reagent to which only bovine serum albumin is added. it is obvious.

実施例　４ 実施例１で調製したウシ血清アルブミン１　Ｗ／Ｖ％お
よびＬ−リジン−ｊ！！Ｍ塩またはＬ・−リジル−Ｌ−
リジンニ塩酸塩２　Ｗ／Ｖ％を含む抗ヒトＣ−反応性蛋
白ウサギＩｏＧＩＩＡ作ラテックス試薬（試薬Ａ）と、
ウジ血清アルブミン１　Ｗ／Ｖ％のみを含む同感作ラテ
ツクス試薬（試薬Ｂ）とを用いて、非動化処理（５６℃
３０分間）または未処理の被検血清、０．１Ｍ／／ｌＪ
シン［ｉｉ液（ｆｕｌｌ　８．０）　テ＋７）１０倍希
釈または未希釈の被検血清各１０例について凝集比較試
験を行なった。結果を表３に示す。Example 4 Bovine serum albumin 1 W/V% and L-lysine-j prepared in Example 1! ! M salt or L・-lysyl-L-
An anti-human C-reactive protein rabbit IoGIIA latex reagent (Reagent A) containing 2% W/V of lysine dihydrochloride;
Inactivation treatment (56°C
30 minutes) or untreated test serum, 0.1M//lJ
An agglutination comparison test was conducted on 10 samples each of 10-fold diluted or undiluted test sera. The results are shown in Table 3.

表　　　３ 十 ト 表３から明らかなように、Ｌ−リジン−塩酸塩または、
し−リジル−Ｌ−リジンニ塩Ｉｌｌ塩を添加しだ感作ラ
デックス試Ｓ＜試薬Ａ）では非働化末処理未希釈液につ
いても非動化処理１０侶希釈液検体と同一結果が得られ
た。Table 3 As is clear from Table 3, L-lysine hydrochloride or
In the sensitized Radex test S<Reagent A) in which lysyl-L-lysine di-salt Ill salt was added, the same results were obtained for the inactivated undiluted solution as for the inactivated 10-diluted solution sample.

■０発明の作用効果 本発明によれば、保存安定性の優れた免疫学的反応用ラ
テックス試薬が提供される。即ち、本発明の試薬は長期
間保存しても自然凝集を起すことがなく、正確な検査が
可能である。(2) Functions and Effects of the Invention According to the present invention, a latex reagent for immunological reactions with excellent storage stability is provided. That is, the reagent of the present invention does not cause spontaneous aggregation even when stored for a long period of time, allowing accurate testing.

さらに、本発明によれば、検体が血清である場合にも、
これを希釈する一必要がなく、またリウマチ因子が存在
してもこれを除去することなく検査を実施することがで
きる免疫学丙反応用ラテックス試薬が提供される。本発
明のラデックス試薬においては、ラテックス粒子が適度
に安定化されているため、血清検体中にリウマチ因子や
その他の非特異的反応物質が生爪存在しても凝集反応を
起さない。従って血清検体を希釈したり前処理したつづ
ることなく正確な検査を実施することができ、操作が簡
便である。Furthermore, according to the present invention, even when the specimen is serum,
Provided is a latex reagent for immunological reactions that does not require dilution and allows tests to be carried out without removing rheumatoid factor even if it is present. In the latex reagent of the present invention, since the latex particles are appropriately stabilized, no agglutination reaction occurs even if rheumatoid factor or other non-specific reactive substances are present in the serum sample. Therefore, accurate testing can be performed without diluting or pretreating the serum sample, and the operation is simple.

Claims (4)

【特許請求の範囲】[Claims] （１）抗原または抗体を吸着した微粒子担体の懸濁液１
００容量部当り塩基性アミノ酸または塩基性アミノ酸か
らなるオリゴペプチド０．４〜８重量部を含有すること
を特徴とする免疫学的反応用試薬。(1) Suspension of microparticle carriers adsorbing antigen or antibody 1
1. A reagent for immunological reactions, comprising 0.4 to 8 parts by weight of a basic amino acid or an oligopeptide comprising a basic amino acid per 0.0 parts by volume. （２）塩基性アミノ酸がリジン、アルギニンまたはヒス
チジンである特許請求の範囲第１項記載の免疫学的反応
用試薬。(2) The reagent for immunological reactions according to claim 1, wherein the basic amino acid is lysine, arginine or histidine. （３）オリゴペプチドが分子量５００以下のペプチドで
ある特許請求の範囲第１項記載の免疫学的反応用試薬。(3) The immunological reaction reagent according to claim 1, wherein the oligopeptide is a peptide with a molecular weight of 500 or less. （４）オリゴペプチドがＬ−リジル−Ｌ−リジンである
特許請求の範囲第１項記載の免疫学的反応用試薬。(4) The immunological reaction reagent according to claim 1, wherein the oligopeptide is L-lysyl-L-lysine.