JPS61280276A - Endo-type alkaline cellulase and detergent composition containing same - Google Patents

Abstract

PURPOSE:To produce an endo-type alkaline cellulase exclusively, by carrying out the genetic cloning of the alkaline cellulase-producing gene site of an alkaline cellulase-producing strain belonging to Streptomyces genus. CONSTITUTION:An endo-type alkaline cellulase-producing chromosome DNA of an alkaline cellulase-producing strain belonging to Streptomyces genus is introduced into a vector to obtain a recombinant vector (e.g. plasmid pCAS1). A bacterial strain capable of producing endo-type alkaline cellulase, belonging to Streptomyces genus and transformed by the above recombinant vector [e.g. Streptomyces lividans HH21 No. 1 (pCAS1), FERM P-8276] is cultured and the objective endo-type alkaline cellulase is separated and recovered from the culture medium. USE:Remarkable cleaning effect can be attained when compounded to a detergent for clothes.

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、エンド型アルカリ性セルラーゼ及びそれを含
有する洗浄剤組成物に関する。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION (Industrial Field of Application) The present invention relates to an endo-type alkaline cellulase and a detergent composition containing the same.

（従来の技術） 近年、衣料の洗浄に関して、著しい発達がみられた。即
ち、洗剤に適した原料の開発、水質の改善、洗浄機械の
改良と普及、繊維の改良等によって衣料の洗浄は著しく
容易になってきた。なかでも、洗剤用原料の改良はめざ
ましく、界面活性剤、ビルグー、分散剤、螢光染料、漂
白剤等の改質によって、衣料用洗剤の組成は、はぼ完成
の域に達したかの感がある。しかし乍ら衣料用洗剤開発
の背景にある思想は、（１）汚れ成るいは／及び繊維表
面に界面活性剤やビルグーが吸着することにより、汚れ
成るいは／及び繊維と水との間の界面張力を低下させ、
汚れと繊維を物理化学的に引き離す、（２）汚れを界面
活性剤、無機ビルグーで分散、可溶化する、（３）汚れ
をプロテアーゼ等の酵素で化学的に分解する、（４）着
色汚れを県白剤等で漂白する、（５）繊維表面に螢光染
料等を吸着させて、増白する、（６）洗浄に有効な成分
の二鎖金属イオンによる沈澱をキレート剤で防止する等
に要約される。(Prior Art) In recent years, there has been significant progress in washing clothes. That is, washing clothes has become much easier due to the development of raw materials suitable for detergents, improvements in water quality, improvements and spread of washing machines, improvements in fibers, etc. In particular, improvements in raw materials for detergents have been remarkable, and it appears that the composition of laundry detergents has reached a level of perfection through improvements in surfactants, virgoos, dispersants, fluorescent dyes, bleaching agents, etc. . However, the idea behind the development of laundry detergents is that (1) the adsorption of surfactants and virgoo on the surface of dirt and/or fibers creates a barrier between dirt and/or fibers and water; reduce interfacial tension,
Physicochemically separates dirt and fibers, (2) disperses and solubilizes dirt with surfactants and inorganic virgool, (3) chemically decomposes dirt with enzymes such as protease, (4) removes colored dirt. Bleaching with prefectural whitening agents, etc., (5) whitening by adsorbing fluorescent dyes, etc. on the fiber surface, (6) using chelating agents to prevent precipitation due to double-chain metal ions, which are effective ingredients for cleaning. Summarized.

即ち、従来の衣料洗浄の基本は汚れを直接に攻撃する成
分若しくは該成分の功撃力を補助する成分を如何に洗浄
剤組成物の一成分として有効に増り入れるかということ
にあった。That is, the basis of conventional clothing cleaning has been how to effectively increase the amount of ingredients that directly attack stains or those that assist in the effective attack power of these ingredients as one component of a detergent composition.

（発明が解決しようとする問題点） しかしながら、現在、該基本に基づいた洗浄剤組成物で
は、ある意味においてその洗浄性能はほぼ飽和点に達し
ており、更に高い洗浄力を有する洗浄剤組成物の開発が
望まれていた。(Problems to be Solved by the Invention) However, at present, the cleaning performance of cleaning compositions based on this basic principle has almost reached a saturation point in a sense, and cleaning compositions with even higher cleaning power are currently being developed. development was desired.

斯様な観点にたち本発明者らは、新規な洗浄機序を与え
る物質としてアルカリ性セルラーゼを見い出し、該酵素
を産生ずる微生物としてストレプトマイセス６エスピー
（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｓｐ、）ＫＳＭ−２（微
工研菌寄第７６２１号）、ストレプトマイセス６エスピ
ー□　（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｇｐ＋）ＫＳＭ−
９（微工研菌寄第７６２２号）を見い出し特許出願した
。Based on this perspective, the present inventors discovered alkaline cellulase as a substance that provides a new cleaning mechanism, and Streptomyces sp. Streptomyces gp+) KSM-
9 (Feikoken Bibori No. 7622) and filed a patent application.

しかしながら、これら微生物の産生ずるアルカリ性セル
ラーゼは、エキソ（ｅｘｏｌ型およびエンドｆｅｎｄｏ
ｌ型セルラーゼの混合物であって、しかも、その生産性
は低いものであった。However, the alkaline cellulases produced by these microorganisms are exo (exol type and endo fendo).
It was a mixture of type I cellulases, and its productivity was low.

（問題点を解決するための手段） 本発明者らは、ストレプトマイセス属に属するアルカリ
性セルラーゼ生産菌のアルカリ性セルラーゼを生産する
遺伝子部位を、遺伝子工学の遺伝子クローニング法でク
ローニングし、エンド型アルカリ性セルラ・−ゼのみを
生成させることに成功し本発明を完成した。(Means for Solving the Problems) The present inventors cloned the alkaline cellulase-producing gene site of an alkaline cellulase-producing bacterium belonging to the genus Streptomyces using genetic engineering gene cloning method, and created an endo-alkaline cellulase. The present invention was completed by successfully producing only -ze.

すなわち、本発明はエンド型アルカリ性セルラーゼおよ
びそれを含有する洗浄剤組成物を提供するものである。That is, the present invention provides an endo-type alkaline cellulase and a cleaning composition containing the same.

本発明のエンド型アルカリ性セルラーゼは、例えば、ス
トレプトマイセス属に属するアルカリ性セルラーゼ生産
菌のエンド型アルカリ性セルラーゼ生産性染色体ＤＮＡ
を含有せしめてなる組換えベクターによって形質転換さ
れたストレプトマイセス属に属するエンド型アルカリ性
セルラーゼ生産菌に培養した培地から回収採取すること
により生産される。The endo-alkaline cellulase of the present invention is, for example, endo-alkaline cellulase-producing chromosomal DNA of an alkaline cellulase-producing bacterium belonging to the genus Streptomyces.
It is produced by collecting and collecting from a medium cultured in an endo-alkaline cellulase-producing bacterium belonging to the genus Streptomyces that has been transformed with a recombinant vector containing the following.

本発明のエンド型アルカリ性セル２−ゼとは、アルカリ
性領域において至適−を有するか、ｐＨ９における酵素
活性が至適−における酸素活性の少くとも一５０チ残存
しているセルラーゼを言う。The endo-type alkaline cellulase of the present invention refers to a cellulase that has an optimum enzyme activity in an alkaline region or has an enzyme activity at pH 9 in which at least 150% of the oxygen activity remaining at the optimum enzyme activity remains.

アルカリ性セルラーゼ生産菌からのエンド型アルカリセ
ルラーゼの生産に関与する染色体ＤＮＡの調製は、特に
限定されない。例えば、リゾチーム等で細胞壁を溶解後
、界面活性剤を用いておだやかに溶菌し、無細胞抽出液
を得る。ついで遠心によって菌体残査とＤＮＡ画分を分
離し、さらに塩化セシウム平衡密度勾配遠心法でＤＮＡ
画分を得る。The preparation of chromosomal DNA involved in the production of endo-type alkaline cellulase from alkaline cellulase-producing bacteria is not particularly limited. For example, after dissolving the cell wall with lysozyme or the like, gentle lysis is performed using a surfactant to obtain a cell-free extract. Next, the bacterial cell residue and DNA fraction were separated by centrifugation, and the DNA was further separated by cesium chloride equilibrium density gradient centrifugation.
Obtain fractions.

もしくは、ＳＤＳ等の界面活性剤によって溶賄後、フェ
ノール処理、クロロホルム処理ヲ行い、ＤＮＡ画分を精
製分離したのち、エタノール沈澱によってＤＮＡを得る
。Alternatively, after dissolving with a surfactant such as SDS, phenol treatment and chloroform treatment are performed, the DNA fraction is purified and separated, and then DNA is obtained by ethanol precipitation.

調製された供与染色体ＤＮＡは、次いでベクターと連結
されるだめに切断される。供与染色体の切断は、通常制
限エンドヌクレアーゼを用いる方法によって実施される
が、特にこの方法に限定されるものではなく、例えば、
物理的に剪断力を加えて切断する方法でもよい。制限酵
素を間用し供与ＤＮＡを切断する場合、完全切断をおこ
す反応条件を用いるのであればアルカリ性セルラーゼ遺
伝子に切断部位を持たない制限エンドヌクレアーゼであ
れは如月なるものでも使用可能である。また、部分的に
しか切断を起さない反応条件を用いるのであれば、全て
の制限エンドヌクレアーゼが使用可能である。斯様に制
限酵素は用いる条件に応じて種々のものが選択可能では
あるが、ベクターとの連結の容易さからは使用するベク
ターに唯一の切断部位を有する制限酵素を使用するのが
よい。例えばＰｓｔ　Ｉ、　　ＢａｍＨＩ、　　Ｓａｃ
　１．　Ｋｐｎ　Ｉ。The prepared donor chromosomal DNA is then cleaved until it is ligated to the vector. Cleavage of the donor chromosome is usually carried out by a method using a restriction endonuclease, but is not particularly limited to this method, for example,
A method of cutting by physically applying shearing force may also be used. When using restriction enzymes to cleave donor DNA, any restriction endonuclease that does not have a cleavage site in the alkaline cellulase gene can be used as long as reaction conditions that cause complete cleavage are used. Also, any restriction endonuclease can be used, provided that reaction conditions that cause only partial cleavage are used. Although various restriction enzymes can be selected depending on the conditions used, it is preferable to use a restriction enzyme that has a unique cleavage site for the vector used for ease of ligation with the vector. For example, Pst I, BamHI, Sac
1. Kpn I.

Ｂｇ！＃等が使用可能である。Bg! # etc. can be used.

一方、ベクターとしては、宿主として使用するストレプ
トマイセス属微生物中で複製可能なものであれば、プラ
スミド若しくはファージの区別なく使用することができ
る。On the other hand, any vector can be used regardless of whether it is a plasmid or a phage, as long as it is replicable in the Streptomyces microorganism used as a host.

ベクターとしてプラスミドを使用する場合、宿土中にお
いて複製可能なものであれば如何なるものでもよいが、
特定の制限酵素による唯一の切断部位を有し、抗生物質
耐性等のマーカーを有するものが、供与染色体との結合
および形質転換株の選択容易性から望ましい。プラスミ
ドの例示としては、すでに公知となっているストレプト
ミセス属微生物から得られたｐＪＣＰｌ　１１、ｐＩＪ
４１、ｐＩＪ６１、ＰＴＪ！＋６１、ｐＩＪ７１］２、
ｐＩＪ３６５、ｐＩＪ３８５などがあげられる。When using a plasmid as a vector, any plasmid that can be replicated in the host soil may be used, but
It is desirable to have a unique cleavage site by a specific restriction enzyme and a marker for antibiotic resistance, etc., from the viewpoint of binding with the donor chromosome and ease of selection of transformed strains. Examples of plasmids include pJCPl 11 and pIJ obtained from known Streptomyces microorganisms.
41, pIJ61, PTJ! +61, pIJ71]2,
Examples include pIJ365 and pIJ385.

切断された供与染色体ＤＮＡを、ベクターに挿入し結合
させる為には、供与染色体ＤＮＡとベクターとを同一の
制限酵素で切断し、然る後に、ＤＮＡＩＪガーゼを使用
し両者を結合するのが一般的に使用される方法である。In order to insert and join the cut donor chromosomal DNA into a vector, it is common to cut the donor chromosomal DNA and the vector with the same restriction enzyme, and then join them together using DNAIJ gauze. This is the method used for

しかし、斯様な方法に限定されることな〈従来知られて
いる如何なる方法でも実施は可能である。However, the present invention is not limited to this method; any conventionally known method can be used.

Ｄ　Ｎ　Ａ　ＩＪガーゼの例示としては、大腸函のＤＮ
Ａリガーゼ及びＴ４ファージのＤＮＡリガーゼがあげら
れる。An example of D N A IJ gauze is the DN of a large intestine box.
Examples include A ligase and T4 phage DNA ligase.

斯様にして調製された供与染色体ＤＮＡ断片とベクター
との結合体である組換えベクターは、次いで、宿主であ
るストレプトマイセス属微生物に導入される。The recombinant vector, which is a conjugate of the donor chromosomal DNA fragment and the vector prepared in this manner, is then introduced into a host microorganism of the genus Streptomyces.

宿主として使用されるストレプトマイセス属微生物は、
本発明の実施目的に応じて１々のものが適宜選択して使
用可能である。Streptomyces microorganisms used as hosts are
One can be appropriately selected and used depending on the purpose of implementing the present invention.

選らばれた宿主微生物であるストレプトマイセス属微生
物への組換えベクターの導入、すなわち形質転換法は、
特に限定されないが、プロトプラスト形質転換法が最適
である。The introduction of a recombinant vector into a selected host microorganism, a microorganism of the genus Streptomyces, that is, the transformation method,
Although not particularly limited, the protoplast transformation method is most suitable.

形質転換株から目的とするアルカリ性セルラーゼ遺伝子
若しくは該アルカリ性セルラーゼ遺伝子を含む供与染色
体ＤＮＡ断片が導入された微生物を選択・分離する方法
は特に限定されないが、ベクターが有する抗生物質耐性
等のマーカー発現を利用し第一次的に選択し次いで宿主
のアルカリ性セルラーゼ活性を指標とする第２次的選択
をする方法が好適である。The method for selecting and isolating microorganisms into which the desired alkaline cellulase gene or donor chromosomal DNA fragment containing the alkaline cellulase gene has been introduced from the transformed strain is not particularly limited, but may utilize the expression of markers such as antibiotic resistance possessed by the vector. A preferred method is to perform a primary selection, followed by a secondary selection using the alkaline cellulase activity of the host as an indicator.

かくして最終的に選択された形質転換株を使用したアル
カリ性セルラーゼの培養液中での蓄積、回収、精製法に
ついては特に制限はない。There are no particular limitations on the methods for accumulating, recovering, and purifying alkaline cellulase in a culture solution using the transformant finally selected in this manner.

培養で使用する培地の組成は、使用する菌株が良好に生
育し、アルカリ性セルラーゼの生産を順調に行なわしめ
るために適当な炭素源、窒素源あるいは有機栄養源、無
機塩等からなっている。炭素源としては、例えばカルボ
キシメチルセルロース（ＣＭＣ）等の可溶性繊維素誘導
体、パルプ粉末、口紙粉末、アビセル等の固型繊維素等
のセルロース等；クルコース、フラクトース、シュクロ
ース若しくはソルビトール等の炭水化物：クエン酸、コ
ハク酸等の有機酸；ｎ−ドデカン、ｎ−ヘキサデカン等
の炭化水素等々の資化されるものであればいずれも使用
できる。これら炭素源のうちではセルロース等、就中、
可溶性繊維素誘導体を使用した培地はアルカリ性セルラ
ーゼの生産量も多く好適である。The composition of the medium used in the culture includes appropriate carbon sources, nitrogen sources or organic nutrient sources, inorganic salts, etc., in order to ensure good growth of the bacterial strain used and smooth production of alkaline cellulase. Carbon sources include, for example, soluble cellulose derivatives such as carboxymethylcellulose (CMC), pulp powder, pulp powder, cellulose such as solid cellulose such as Avicel; carbohydrates such as crucose, fructose, sucrose, or sorbitol; citric acid; Organic acids such as acid, succinic acid; hydrocarbons such as n-dodecane and n-hexadecane, etc., which can be assimilated, can be used. Among these carbon sources, cellulose, among others,
A medium using a soluble cellulin derivative is suitable because it produces a large amount of alkaline cellulase.

本発明において、遺伝゛子操作によって得た例示のプラ
スミドｐｃＡｓ１を用いて得た形質転換体、ストレプト
マイセス・リビダンスＨＨ２１Ｎｏ、１（ｐＣＡＳｌ　
）、Ｆｌｊ：ＲＭ　　ｐ４Ｌ７１　　ｏ生産するエンド
型アルカリ性セルラーゼの理化学的性質を示すと、次の
通りである。In the present invention, a transformant obtained using the exemplary plasmid pcAs1 obtained by genetic manipulation, Streptomyces lividans HH21No.1 (pCAS1
), Flj:RM p4L71 o The physicochemical properties of the endo-type alkaline cellulase produced are as follows.

１、作用：カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）等ノ
セルロースを、エンド（ｅｎｄｓ）Ｗの機作で分解し粘
度低下をきたす。これに対し還元糖の生成はほとんど認
められない。1. Action: Cellulose such as carboxymethyl cellulose (CMC) is decomposed by the mechanism of ends W, resulting in a decrease in viscosity. On the other hand, the production of reducing sugars is hardly observed.

２、基質特異性：ＣＭＣ等のセルロースに対して特異的
に作用する。2. Substrate specificity: Acts specifically on cellulose such as CMC.

３、至適ｐＨ：ｐ［−１８付近でＣＭＣに対する作用が
至適である。第２図に示す通坊である。3. Optimal pH: The effect on CMC is optimal around p[-18. This is the Tsubo shown in Figure 2.

４、安定−範囲＝５０℃で４８時間処理した場合、ｐＨ
６〜１１において、ＣＭＣに対し９０チ以上の残存活性
を示す。第３図に示す通りである。4. Stability - range = pH when treated at 50°C for 48 hours
6 to 11, it shows a residual activity of 90 chi or more against CMC. As shown in FIG.

５、至適温度ニー８において、ＣＭＣを基質とした場合
、４５℃付近である。第４図に示す通りである。5. The optimal temperature at knee 8 is around 45° C. when CMC is used as a substrate. As shown in FIG.

６熱安定性：ｐＨ８において４０℃１時間処理において
９０チ以上活性が残存する。第５図に示す通りである。6. Thermal stability: More than 90% activity remains after treatment at 40°C for 1 hour at pH 8. As shown in FIG.

本発明のエンド型アルカリ性セルラーゼの酵素活性は、
カルホヤジメチルセルロース（ＣＭＣ）を基質とした時
、はとんど還元糖を生成しないため以下に述べるエンド
型ＣＭＣａｓｅ活性測定方法に従い決定した。The enzyme activity of the endo-type alkaline cellulase of the present invention is
When carbonyl dimethylcellulose (CMC) is used as a substrate, reducing sugars are hardly produced, so the determination was made according to the method for measuring endo-type CMCase activity described below.

すなわち、和光純系製ＣＭＣ１，Ｄ％溶液６−、グリシ
ンバッファー０．５　Ｒ’ｌｉ　（ｐｉ（９）　２　ｍ
、イオン交換水５　ｍｌを混合し、ウベローデ型粘度計
中にて４０℃に保つ。これに酵素溶液１−を加え、すば
やく攪拌後粘度を測定しこの時の値をｖｏとする。４０
℃で５分間静置後再び粘度を測定しこの時の値をＶ、と
する。That is, Wako Pure System CMC1, D% solution 6-, glycine buffer 0.5 R'li (pi(9) 2 m
and 5 ml of ion-exchanged water were mixed and kept at 40°C in an Ubbelohde viscometer. Enzyme solution 1- was added to this, and after stirring quickly, the viscosity was measured and the value at this time was taken as vo. 40
After standing for 5 minutes at °C, the viscosity was measured again and the value at this time was designated as V.

Ｖｏ−Ｖ。Vo-V.

の値が１　ｃｓｔ／ｍｉｎを示した時をエンド型ＣＭＣ
ａｓｅ１ユニットとした。When the value of shows 1 cst/min, end type CMC
It was set as 1 unit of ase.

本発明の洗浄剤組成物は、エンド型アルカリ性セルラー
ゼを組成物１ゆに対して５０ユニット以上、２５，００
０ユニツト以下で配合することか好ましく、別の表現を
すれば洗浄剤組成物を水に溶かした後は、洗たく液１リ
ットル中に０．０６７ユニツト以上、３６ユニツト以下
となるように、エンド型アルカリ性セルラーゼを洗浄剤
組成物に配合することが好ましい、 本発明の洗浄剤組成物にはエンド型アルカリ性セルラー
ゼ以外の成分は特に限定されない。The cleaning composition of the present invention contains endo-type alkaline cellulase at a rate of 50 units or more per 1 liter of the composition, and 25,000 units of endo-alkaline cellulase.
In other words, after the cleaning composition is dissolved in water, it is preferably blended in an end type so that the amount is 0.067 or more and 36 or less in 1 liter of washing liquid. It is preferable to incorporate alkaline cellulase into the detergent composition. The components of the detergent composition of the present invention other than the endo-type alkaline cellulase are not particularly limited.

例えば、公知の次の諸成分なら本来のその効果の必要に
応じて任意に配合される。For example, the following known ingredients may be mixed as desired depending on the desired effect.

（１）界面活性剤 アルキルベンゼンスルホン酸塩、ポリオキシアルキレン
（Ｃ＝２若しくは６）アルキル又はアルケニルエーテル
硫酸エステル塩、アルキル又はアルケニル硫酸エステル
塩、オレフィンスルホン酸塩、アルカンスルホン酸塩、
高級脂肪酸塩、アルキル又はアルケニルエーテルカルボ
ン酸塩、α−スルホ脂肪酸塩又はそのエステル化物等々
の平均炭素数８〜２０のアルキル又はアルケニル鎖を有
する陰イオン性界面活性剤。(1) Surfactant alkylbenzene sulfonate, polyoxyalkylene (C=2 or 6) alkyl or alkenyl ether sulfate ester salt, alkyl or alkenyl sulfate ester salt, olefin sulfonate, alkanesulfonate,
Anionic surfactants having an alkyl or alkenyl chain having an average carbon number of 8 to 20, such as higher fatty acid salts, alkyl or alkenyl ether carboxylates, α-sulfo fatty acid salts or esters thereof.

ここで、陰イオン性界面活性剤の対イオンとしてはナト
リウム、カリウム等のアルカリ金属イオン、カルシウム
、マグネシウム等のアルカリ土類金属イオン、アンモニ
ウムイオン炭素数２又は５のアルカノール基を１〜６個
有するアルカノールアミン（例えばモノエタノールアミ
ン、ジェタノールアミン、トリエタノールアミン、トリ
イノプロパツールアミンなど）を挙げることができる。Here, counter ions of the anionic surfactant include alkali metal ions such as sodium and potassium, alkaline earth metal ions such as calcium and magnesium, and ammonium ions having 1 to 6 alkanol groups having 2 or 5 carbon atoms. Mention may be made of alkanolamines such as monoethanolamine, jetanolamine, triethanolamine, triinopropanolamine, etc.

更に、スルホン酸型、ベタイン型等の両性界面活性剤、
ポリオキシエチレンアルキル又はアルケニルエーテルｓ
　’ｔ”　リオキシエチレンアルキル又ハアルケニルフ
ェニルエーテル、ポリオキシプロピン・ポリオキシエチ
レン共重合物のアルキル又はアルケニルエーテル、高級
脂肪酸アルカノールアミド、蔗糖脂肪酸エステル、アル
キルアミンオキサイド等の非イオン性界面活性剤も配分
出来る。Furthermore, amphoteric surfactants such as sulfonic acid type and betaine type,
polyoxyethylene alkyl or alkenyl ethers
't' Nonionic surfactants such as lyoxyethylene alkyl or alkenylphenyl ether, alkyl or alkenyl ether of polyoxypropyne/polyoxyethylene copolymer, higher fatty acid alkanolamide, sucrose fatty acid ester, alkylamine oxide, etc. can also be distributed.

また、アルキルトリメチル第４級アンモニウム塩、ジア
ルキルジメチル第４級アンモニウム塩等々の陽イオン性
界面活性剤も必要により配合してもよい。Further, cationic surfactants such as alkyltrimethyl quaternary ammonium salts, dialkyldimethyl quaternary ammonium salts, and the like may also be blended, if necessary.

これら界面活性剤は、一種若しくは二種以上混合して使
用出来、好ましくは洗浄剤組成物中に１０重量％（以下
チで示す）以上含有するのがよい。These surfactants can be used alone or in a mixture of two or more, and are preferably contained in the detergent composition in an amount of 10% by weight or more (hereinafter referred to as H).

（２）二価金属イオン捕捉剤 下記の各種アルカリ金属塩、アルカノールアミン塩の一
種又は二種以上のビルグー成分を０〜５０チ含有するこ
ともできる。(2) Divalent metal ion scavenger It is also possible to contain 0 to 50 of one or more of the following various alkali metal salts and alkanolamine salts.

オルソリン酸塩、ピロリン酸塩、トリポリリン酸塩、メ
タリン酸塩、ヘキサメタリン酸塩、フィチン酸塩等のリ
ン酸塩。Phosphates such as orthophosphate, pyrophosphate, tripolyphosphate, metaphosphate, hexametaphosphate, phytate.

ニトリロ三酢酸塩、エチレンジアミン四酢酸塩等のアミ
ノポリ酢酸塩、ポリアクリル酸、ポリマレイン酸ポリア
セタールカルボキシレートなどの高分子電解質、クエン
酸、コハク酸、スルホコハク酸等の有機カルボン酸塩、
アルミノケイ酸塩、アスパラギン酸、グルタミン酸等の
アミノ酸塩など。Aminopolyacetates such as nitrilotriacetate and ethylenediaminetetraacetate; polymer electrolytes such as polyacrylic acid and polymaleic acid polyacetal carboxylate; organic carboxylates such as citric acid, succinic acid, and sulfosuccinic acid;
Amino acid salts such as aluminosilicate, aspartic acid, glutamic acid, etc.

（３）　　アルカリ削成るいは無機電解質更にアルカリ
剤あるいは無機電解質として次に示すものの各種のアル
カリ金属塩の一種又は二種以上を組成物中１〜５０チ、
好ましくは５〜６０チ含有することができる。ケイ液塩
、炭酸塩、硫酸塩。又、有機アルカリ剤として、トリエ
タノールアミン、ジェタノールアミン、モノエタノ−・
ルアミン、トリイソプロパツールアミンなど。(3) Alkali remover or inorganic electrolyte Furthermore, as an alkaline agent or inorganic electrolyte, one or more of the various alkali metal salts shown below are added to the composition in an amount of 1 to 50 times,
Preferably, it can contain 5 to 60 pieces. Silica salts, carbonates, sulfates. In addition, as organic alkali agents, triethanolamine, jetanolamine, monoethanol, etc.
amine, triisopropanolamine, etc.

（４）再汚染防止剤 更に再汚染防止剤として次に示す化合物の一種又は二種
以上を組成物中に０．１〜５チ含有することができる。(4) Anti-restaining agent The composition may further contain 0.1 to 5 of one or more of the following compounds as anti-restaining agents.

ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、ポリ
ビニルピロリトン、カルボキシメチルセルロースなど。Polyethylene glycol, polyvinyl alcohol, polyvinylpyrrolitone, carboxymethyl cellulose, etc.

なかでも、カルボキシメチルセルロースあるいは及びポ
リエチレングリコールと本発明に係るアルカリ性セルラ
ーゼとの併用は、どろんこ汚れ除去に相乗的効果を奏す
る。Among these, the combined use of carboxymethyl cellulose or polyethylene glycol and the alkaline cellulase according to the present invention has a synergistic effect in removing mud stains.

（５）漂白剤 過炭酸ソーダ、過炭酸ソーダ、硫酸ナトリウム過酸化水
素付加体、塩化ナトリウム過酸化水素付加体などの漂白
剤あるいは／及び、スルホン化フタロシアニン亜鉛塩、
あるいはアルミニウム塩等の光感応性の漂白性色素等と
本発明に係るアルカリ性セルラーゼとの併用は、洗浄効
果を一段と向上させる。(5) Bleach agents such as sodium percarbonate, sodium percarbonate, sodium sulfate hydrogen peroxide adduct, sodium chloride hydrogen peroxide adduct, and/or sulfonated phthalocyanine zinc salt,
Alternatively, the combined use of a photosensitive bleaching dye such as an aluminum salt and the alkaline cellulase of the present invention further improves the cleaning effect.

（６）酵素（本来的酵素作用を洗浄工程中になす酵素で
ある） 酵素の反応性から分類すると、ヒドロラーゼ類、リアー
ゼ類、オキシドレダクターゼ類、リガーゼ類、トランス
フェラーゼ類及びイソメラーゼ類が挙げられるが、本発
明には何れも適用できる。特に好ましいのはヒドロラー
ゼ類であり、プロテアーゼ、エステラーゼ、カルボヒド
ラーゼ及びヌクレアーゼが含まれる。(6) Enzymes (enzymes that perform their original enzymatic action during the washing process) Classified based on their reactivity, they include hydrolases, lyases, oxidoreductases, ligases, transferases, and isomerases. Any of these can be applied to the present invention. Particularly preferred are hydrolases, including proteases, esterases, carbohydrases and nucleases.

（７）　　青味付剤及び螢光染料 各種の青味付剤及び螢光染料なども必要に応じて配合で
きる。(7) Blue-tinging agents and fluorescent dyes Various blue-tinging agents and fluorescent dyes can be added as necessary.

（８）ケーキング防止剤 粉末洗剤の場合には、次のようなケーキング防止剤も配
合できる。・ξラドルエンスルホン酸塩、キシレンスル
ホン酸塩、酢酸塩、スルホコハク酸塩、メルク、微粉末
シリカ、粘土、カル７ウムーンリケート（例えばＴｏｈ
ｎｓ−Ｍａｎｖｉ１１社のマイクロセルなど）、炭酸カ
ルシウム、酸化マグネシウム等々。(8) Anti-caking agent In the case of a powdered detergent, the following anti-caking agent may also be blended.・ξ Ladolene sulfonate, xylene sulfonate, acetate, sulfosuccinate, Merck, finely powdered silica, clay, calcium 7 umoon sulfonate (e.g. Toh
ns-Manvi11 microcell, etc.), calcium carbonate, magnesium oxide, etc.

（９）酸化防止剤 第３ブチルヒドロキントルエン、４．４’−ブチリデン
ビス−（６−第３ブチル−６−メチルフェノール）、２
，２′−ブチリデンビス−（６−第３ブチル−４−メチ
ルフェノール）％モノスチレン化クレゾール、・ジスチ
レン化クレゾール、モノスチレン化フェノール、シスチ
レン化フェノール、１゜１’−ビｘ−（４−ヒドロキシ
フェニル）シクロヘキサン等の酸化防止剤。(9) Antioxidant tert-butylhydroquine toluene, 4.4'-butylidenebis-(6-tert-butyl-6-methylphenol), 2
, 2'-butylidenebis-(6-tert-butyl-4-methylphenol)% monostyrenated cresol, distyrenated cresol, monostyrenated phenol, cystyrenated phenol, 1゜1'-bix-(4-hydroxy Antioxidants such as phenyl)cyclohexane.

（ｌ［１１可溶化剤 エタノールのような低級アルコール、ベンゼンスルホン
酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩のような低級アルキル
ベンゼンスルホン酸塩、プロピレングリコールのような
グリコール類、アセチルベンゼンスルホン酸塩、アセト
アミド類、ピリジンジカルボン酸アミド類、安息香酸塩
又は尿素などの可溶化剤。(l[11 Solubilizers Lower alcohols such as ethanol, benzenesulfonates, lower alkylbenzenesulfonates such as p-toluenesulfonates, glycols such as propylene glycol, acetylbenzenesulfonates, acetamides , pyridine dicarboxylic acid amides, benzoates or urea.

本発明の大きな利点は、従来の洗浄剤では十分に落とす
ことができなかった無機固体汚れ、例えば微細な泥汚れ
に特に洗浄効果があるのを初めとして襟、袖口の汚れ、
油じみ等々の汚れに対しても有効であり、更に無燐或い
は低燐洗剤の洗浄力向上に非常に役立つことにある。繊
維と繊維の間にもぐりこんだ微細などろんこ汚れの除去
は燐酸塩が有効であった。ところが、富栄養化問題で燐
酸塩配合量が逓減化の傾向にあり、一部は無燐化を余儀
なくされた結果、どろんこ汚れの除去は至難となってき
た。特に、木綿布にもぐりこんだどろ汚れは全く除去し
にくいことは周知の通りである。まだ、木綿混紡布から
成るズックにこびりついたどる汚れも主婦の悩みの種で
ある。The great advantage of the present invention is that it has a particularly effective cleaning effect on inorganic solid stains that conventional cleaning agents cannot sufficiently remove, such as fine mud stains, as well as stains on collars and cuffs.
It is also effective against dirt such as oil stains, and is also very useful in improving the detergency of phosphorus-free or low-phosphorus detergents. Phosphate was effective in removing fine scale dirt that got between the fibers. However, due to the problem of eutrophication, the amount of phosphate added has been decreasing, and some products have had to be made phosphorus-free, making it extremely difficult to remove muddy dirt. It is well known that it is particularly difficult to remove muddy dirt that has penetrated cotton cloth. Housewives are still troubled by the stains that cling to canvas canvas made from a cotton blend.

本発明の洗浄剤はこのような課題の解決に光間をもたら
すものである。即ち、セルロース繊維及びそれと他の種
類の繊維との混紡布のどろんこ汚れを洗浄する際に、例
えば（１）アルカリ性の無燐或いは低燐洗剤に本発明を
適用することにより、（２）弱アルカリ液体無燐洗剤に
本発明を適用することにより、燐酸塩を充分含有する弱
アルカリ性粉末洗剤と同等以上の優れた洗浄力が得られ
る。The cleaning agent of the present invention provides a solution to these problems. That is, when cleaning muddy stains on cellulose fibers and blended fabrics with other types of fibers, for example, by applying the present invention to (1) alkaline non-phosphorus or low-phosphorus detergents, (2) weak alkaline detergents can be used. By applying the present invention to a liquid phosphorus-free detergent, it is possible to obtain excellent detergency that is equivalent to or better than that of a weakly alkaline powder detergent containing a sufficient amount of phosphate.

本発明の別の大きな利点は、如何なる形態の洗浄剤にも
適用できることにある。噴霧乾燥粉末、粉末ブレンド粉
末、錠剤、液体等の色々な形態にアルカリセルラーゼを
添加して本発明品を得ることができる。Another great advantage of the present invention is that it can be applied to any form of cleaning agent. The product of the present invention can be obtained by adding alkaline cellulase to various forms such as spray-dried powder, powder blend powder, tablet, and liquid.

（作用） 洗浄剤の技術分野において酵素を使用することは公知で
あるが、その酵素は特に汚れに対して有効に作用するも
ののみが知られているにすぎない。(Effect) Although the use of enzymes is known in the technical field of detergents, only enzymes that are particularly effective against dirt are known.

即ち、蛋白汚れに対してはプロテアーゼが、澱粉汚れに
対してはアミラーゼが更には油脂汚れに対してはリパー
ゼが知られており何れも汚れに直接に功撃する酵素であ
る。本発明におけるエンド型アルカリ性セルラーゼの洗
浄機作は如何なるものか未だ完全には解明されていない
が、界面活性剤にその本質をみることのできる繊維の単
なる膨潤作用に基づくものではない。That is, protease is known to be effective against protein stains, amylase is known to be effective against starch stains, and lipase is known to be effective against oil and fat stains, all of which are enzymes that directly attack stains. Although the cleaning mechanism of endo-type alkaline cellulase in the present invention is not yet fully elucidated, it is not based on a mere swelling action of fibers whose essence can be seen in surfactants.

（発明の効果） ストレプトマイセス属に属するアルカリ性セルラーゼ生
産函より誘導された形質転換体の生産するエンド型アル
カリ性セルラーゼは、洗浄剤就中衣料用洗浄剤に配合さ
れた場合、衣料汚れ特に衿布、袖口汚れ、更にはズック
靴等の汚れに対して顕著な洗浄効果を発揮する。(Effect of the invention) When the endo-type alkaline cellulase produced by the transformant derived from the alkaline cellulase production box belonging to the genus Streptomyces is added to detergents, especially laundry detergents, it can be used to stain clothes, especially collar fabrics. It has a remarkable cleaning effect on stains on cuffs, canvas shoes, etc.

次に本発明の創製例及び実施例を示す。Next, production examples and examples of the present invention will be shown.

創製例１．（染色体ＤＮＡの調製法） ストレフトマイセス・エスピーＫＳＭ−９（Ｆ’ＥＲＭ
　　Ｐ−７６２０）より染色体ＤＮＡを調製する際には
１００ｍ１のＭ　Ｙ　／　Ｎａ　ｔ　ＣＯｓ培地（肉エ
キス１．５チ、酵母エキス０．５チ、ＫＨ，ＰＯ４０，
１チ、Ｎａ、ＣＯｓ　Ｏ，２チ）、で生育させた菌体を
集菌、洗浄後、８ｄの２５チシエークロース５０　ｍＭ
　トリス−塩酸、２０　ｍＭ　Ｅ　Ｄ　Ｔ　Ａ　（ｐＨ
８，０）のバッファーに懸濁し３．２　ａｔｔのＥＤ’
ｌ’Ａ　（田８．０）と５岬のリゾチームを加え、６７
℃で１時間靜置した後、２！ＩＬｔの１０チＳＤＳを加
え溶菌させた。これに５　Ｍ　ＮａＣｔを４−加え、０
℃で６時間靜置した後、４８，０００　ｔで１時間遠心
しクリアートライゼートを得、ＰＥＧ６０００を終濃度
１０チになるように加えてＤＮＡを沈殿させ、これをＴ
ｇバッファーに溶解し、塩化セシウム密度勾配遠心によ
り染色体ＤＮＡとプラスミドＤＮＡを単離した。Creation example 1. (Preparation method of chromosomal DNA) Strephtomyces sp. KSM-9 (F'ERM
When preparing chromosomal DNA from P-7620), prepare 100 ml of MY/Nat COs medium (1.5 ml of meat extract, 0.5 ml of yeast extract, KH, PO40,
After collecting and washing the bacteria grown in 1H, Na, COs O, 2H), 50mM of 8d of 25TH
Tris-HCl, 20mM EDTA (pH
8.0) buffer and ED' of 3.2 att.
Add l'A (T8.0) and lysozyme of 5 Misaki, 67
After standing at ℃ for 1 hour, 2! 10% SDS of ILt was added to lyse the bacteria. Add 5 M NaCt to this and add 0
After incubating at ℃ for 6 hours, centrifugation was performed at 48,000 t for 1 hour to obtain a clear trisate. PEG6000 was added to a final concentration of 10 t to precipitate the DNA, and this was
Chromosomal DNA and plasmid DNA were isolated by cesium chloride density gradient centrifugation.

創製例２、（組換えプラスミドの構築と調製）創製例１
で得られた染色体ＤＮＡをＰｓｔ　ｒにて、５７℃、２
時間の完全分解を行う。別てプラスミドｐｌＪＩ８５も
Ｐｓｔ　Ｉにて同様に完全分解を行う。Creation Example 2, (Construction and Preparation of Recombinant Plasmid) Creation Example 1
The chromosomal DNA obtained in
Complete time decomposition. Separately, plasmid plJI85 is also completely digested with PstI.

ついで、両者を混合し、フェノール補出後、エタノール
沈殿を行なった後、リゲーションを行う。Next, the two are mixed, phenol is extracted, ethanol precipitation is performed, and ligation is performed.

リゲーションけＴ４リガーゼを用いて１２℃で１２時間
反応を行なった。The reaction was carried out at 12° C. for 12 hours using T4 ligase.

リゲーションが完全に行なわれたことは、アガロースゲ
ル電気泳動によって確認した。Complete ligation was confirmed by agarose gel electrophoresis.

創製例３．（受容菌の分離） 形質転換の受容菌としてはストレプトマイセス・リビダ
ンスＨｆ（２１株を用いるが、本菌はＣＭＣａｓｅの生
産性を有する為、そのままでは受容菌として用いること
が出来ない、そこでＣＭＣａｓｅ欠損変異株の誘導を行
なった。Creation example 3. (Isolation of Recipient Bacteria) Streptomyces lividans Hf (21 strain) was used as the recipient bacterium for transformation, but since this bacterium has CMCase productivity, it cannot be used as a recipient bacterium as it is, so CMCase A deletion mutant strain was induced.

ストレプトマイセス・リビダンスＨ）１２１の胞子を０
．０５Ｍリン酸バッファー（ｐＨ７，０）に良く分散さ
せた後、ＮＴＧ　（Ｎ−メチル−マーニトロ−Ｎ−二ト
ロングアニジン）を５００２になるように加え、３０℃
で１時間根盪する。これを生理食塩水で希釈し、ＣＭＣ
を含有する８Ｍ寒天培地にブレーティングする。0 spores of Streptomyces lividans H) 121
．． After well dispersing in 05M phosphate buffer (pH 7,0), add NTG (N-methyl-mernitro-N-nitronganidine) to a concentration of 5002, and incubate at 30°C.
Soak for 1 hour. Dilute this with physiological saline and CMC
Blate onto 8M agar medium containing.

コロニー形成させた後、コンゴーレッド染色法でハロー
形成能が低下した閑を選択した。After colony formation, plants with reduced halo-forming ability were selected using Congo red staining.

完全なＣＭＣａｓｅ欠損株は得られなかったが、野性法
の１１５以下にハロー径が低下した株を分離し、ストレ
プトマイセス°リビダンスＨＨ２１Ｎｏ、　１株と命名
した。Although a complete CMCase-deficient strain was not obtained, a strain with a halo diameter reduced to 115 or less than the wild method was isolated and named Streptomyces lividans HH21 No. 1 strain.

創製例４．（プロトプラスト調製と形質転換）プロトプ
ラスト調製及び形質転換はビプ（Ｂｉｂｂｌらの方法（
ビプ、エム・ジエイ；ジエイ・エム・ワードとディーニ
ー・ホープウッド（Ｂｉｂｂ、　Ｍ。Creation example 4. (Protoplast preparation and transformation) Protoplast preparation and transformation were carried out using the method of Bibbl et al.
Bibb, M.G.; G.M. Ward and Deanie Hopewood (Bibb, M.

Ｊ、　；　Ｊ、　Ｍ、　Ｗａｒｄ　＆　Ｄ、　Ａ、　Ｈ
ｏｐｗｏｏｄ　）　・ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）２７
４，３９８〜４００　１９７８）に従った。J, ; J, M, Ward & D, A, H
opwood ) ・Nature 27
4,398-400 1978).

すなわちＳ培地で生育させた菌体を集菌し、０．６Ｍシ
ュークローズで洗浄した後、２η／−リゾチーム（次に
示すＰ培地に溶解）に懸濁し３０℃で１時間静置してプ
ロトシラスト化する。That is, the bacteria grown in S medium were collected, washed with 0.6M sucrose, suspended in 2η/-lysozyme (dissolved in P medium shown below), and left standing at 30°C for 1 hour. Toshirast.

（Ｐ培地） シュークロース　　　　　　　　１０３９に、Ｓｏ、　
　　　　　　　　　　　　０．２５　ｆＭｇＣＬ、６Ｈ
，０２，０５ｆ ＫＨｔＰＯｉ　　　　　　　　　　　　　０．０５　ｆ
ＣａＣ４ｍ　２Ｈρ　　　　　　　　　３６６８りＴＥ
Ｓ（０，２５Ｍ　　田７２）　　　　　　１００ｒｎｔ
水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１　
ｔこれを綿ヂ過により残存菌糸体と分離し、遠心により
プロトプラストを得た。さらにＰ培地で良く洗浄後、少
量のＰ培地に懸濁し、そこで実施例２で調製したＤＮＡ
を加え、終濃度２０チになるようにポリエチレングリコ
ール＃１０００を加え、ＤＮＡを取り込ませた。これを
Ｐ培地で希釈、遠心後、次に示すＲ２ＹＥ寒天培地にま
いて再生させた。(P medium) Sucrose 1039, So,
0.25 fMgCL, 6H
,02,05f KHtPOi 0.05 f
CaC4m 2Hρ 3668riTE
S (0,25M field 72) 100rnt
water 1
This was separated from the remaining mycelium by sifting through cotton, and protoplasts were obtained by centrifugation. After further washing thoroughly with P medium, the DNA prepared in Example 2 was suspended in a small amount of P medium.
was added, and polyethylene glycol #1000 was added to a final concentration of 20% to incorporate DNA. After diluting this with P medium and centrifuging, it was spread on the following R2YE agar medium and regenerated.

（Ｒ２ＹＥ寒天培地） シュークローズ　　　　　　　　１０６ｆＫ、Ｓｏ、　
　　　　　　　　　　　　　０．２５　ｆＭｇＣｌ、・
６Ｈ，０１０，１２Ｐ Ｃａ　ｃｚ、　’　２Ｈ２０２，９５ｔＫＨ，ＰＯ４０
，０５ｆ グルコース　　　　　　　　　　　　１０ｆカザミノ酸
　　　　　　　　　　　　０．１を酵母エキス　　　　
　　　　　　　　５２Ｌ−アスパラギン　　　　　　　
　　　３ＰＴＥＳ　　　　　　　　　　　　　　１００
ｍ寒天　　　　　　　　　　　　　　２２ｆ水　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　１を形質転換株は
Ｒ２ＹＥ寒天培地上で充分に胞子が着生した後、これを
チオストレプトン５０？含む、次に示す８Ｍ寒天培地に
レプリカすることによシ選択した。(R2YE agar medium) Shoerose 106fK, So,
0.25 fMgCl,・
6H,010,12P Ca cz, '2H202,95tKH,PO40
, 05f glucose 10f casamino acid 0.1 yeast extract
52L-asparagine
3PTES 100
m agar 22f water
After sufficient spores had settled on the R2YE agar medium, the transformed strain of 1 was treated with thiostrepton 50? Selection was made by replicating onto the following 8M agar medium containing:

（８Ｍ寒天培地） 酵母エキス　　　　　　　　　　　　　１を肉エキス　
　　　　　　　　　　　　１ｆＮＺアミン（ｔｙｐｅ　
Ａ　）　　　　　　　２　Ｓ’マルトース　　　　　　
　　　　　　１０ｔＣＭＣＩＯｆ 寒天　　　　　　　　　　　　　　２０を水　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　１　を目的のＣＭ
Ｃａｓｅ遺伝子を有する株は、コンゴーレッド染色法に
よｔ）ＣＭＣ含有寒天平板上で透明なハローをコロニー
周辺に形成する。生成したハローのうち、最大のハロー
を生成した該当菌株を分離し、これをストレプトマイセ
ス・リビダンスＨＨ２１Ｎｏ、１　（ｐｃＡｓｌ　）と
命名した。本醒株はＦ　Ｅ　ＲＭ　　Ｐ−Ｆ１２７６と
して微工研に寄託された。(8M agar medium) Yeast extract 1 and meat extract
1fNZ amine (type
A) 2S'maltose
10tCMCIO of agar 20% water
1. Commercial with the aim of
A strain having the Case gene forms a transparent halo around colonies on a CMC-containing agar plate by Congo red staining. Among the halos produced, the strain that produced the largest halo was isolated and named Streptomyces lividans HH21No.1 (pcAsl). The present strain was deposited at the Microtech Institute as FERM P-F1276.

創製例５．（プラスミドｐｃＡｓ１の確認）ストレプト
マイセス・リビダンスＨＨ２１Ｎｏ、１（ｐｃＡｓｌ　
）、　ＦＥＲＭ　　Ｐ−”１１２−７６　　をＭＹ培地
で３０℃、３日間培養し、培養函体を溶菌し、超遠心分
離後、クリアートライゼートを塩化セシウム密度勾配遠
心にかけることにより、プラスミドｐＣＡＳ１の存在が
確認された。プラスミドｐｃＡｓ１の開裂地図は第１図
に示す。制限酵素を用いた解析によりプラスミドｐｃＡ
ｓ１にはストレフトマイセス・エスピーＫＳＭ−９に由
来する３、　４　Ｋｂ　の挿入断片を有することが確認
された。Creation example 5. (Confirmation of plasmid pcAs1) Streptomyces lividans HH21No.1 (pcAsl
), FERM P-"112-76 was cultured in MY medium at 30°C for 3 days, the culture box was lysed, and after ultracentrifugation, the clear trisate was subjected to cesium chloride density gradient centrifugation to obtain plasmid pCAS1. The cleavage map of plasmid pcAs1 is shown in Figure 1. Analysis using restriction enzymes revealed that plasmid pcA
It was confirmed that s1 contained a 3 to 4 Kb insert fragment derived from Strephtomyces sp. KSM-9.

実施例１．（エンド型アルカリ性セルラーゼの生産）肉
ｘキーｚ、％１５　％　（Ｗ／Ｖ　）　、ｆ３’ｔ−母
エキスＯ１５チＣＷ／Ｖ）、リン酸二水素カリウム０．
１チ（Ｗ／ｖ）、炭酸ナトリウムｏ、２　％　（Ｗ／Ｖ
　）　（別滅菌）を５００ｄ容坂ロフラスコに入れ滅梢
後、ｐｃＡｓｌを有するストレプトコッカス・リビダン
スＨＨ２１Ｎｏ、　１　　（ｐｃＡｓ　１　）、ＦＥＲ
ＭＰ−ｇλ７／　を接種し、６０℃、４日間振盪培養し
た後、培養液から遠心分離によって画体を除去した上滑
液のエンド型ＣＭＣａｓｅ活性を粘度低下法によって測
定したところ、０．１０６　ｃａｔ／ｍｉｎノ工７　）
’　型ＣＭ　Ｃａｓｅ活性としてエンド型アルカリ性セ
ルラーゼが得られた。Example 1. (Production of endo-type alkaline cellulase) Meat
1 t (W/v), Sodium carbonate o, 2% (W/V
) (separately sterilized) was placed in a 500 d Sakaro flask, and after sterilization, Streptococcus lividans HH21 No. 1 (pcAs 1) with pcAsl, FER
After inoculating MP-gλ7/ and culturing with shaking at 60°C for 4 days, the endo-type CMCase activity of the supernatant synovial fluid, which was removed from the culture medium by centrifugation, was determined to be 0.106 cat. /min 7)
Endo-type alkaline cellulase was obtained as a '-type CM Case activity.

実施例２゜ 本実施例をもって天然エリ垢汚染布に対して、エンド型
アルカリ性セルラーゼが特に有効であることを示す。Example 2 This example shows that endo-type alkaline cellulase is particularly effective against cloth contaminated with natural burr dirt.

１）洗剤配合 直鎖ドデシルベンゼン久ルホン酸ンーダ　　　　１２　
（ｗｔ％１アルキル憶酸ソーダ（Ｃ０４〜＋ｅ）　　　
　　　　　４石ケン（牛脂脂肪酸ソーダ）　　　　　　
　２結品性アルミノケイ酸ソーダ　　　　　　　１５ケ
イ酸ソーダ　　　　　　　　　　　　１０炭酸ソーダ　
　　　　　　　　　　　　　１０カルボキシメチルセル
ロース　　　　　　　１ポリエチンングリコール（ＭＷ
６０００）　　　１螢光染料　　　　　　　　　　　　
　　　　０．４香　　料　　　　　　　　　　　　　　
　　　０．２芒　　硝　　　　　　　　　　　　　バラ
ンス水　　分　　　　　　　　　　　　　　　　　　５
２）天然えり布汚染布； 木綿金布＃２　［１２３布をワイシャツの襟に縫い付け
、成年男子て２日間着用させる。着用後中心点に対し汚
れが対称な布を選び出し、この汚れの対称点で布を半裁
し実験に供した。1) Detergent formulation linear dodecylbenzene sulfonate 12
(wt% 1 alkyl sodium hydroxide (C04~+e)
4 soaps (beef tallow fatty acid soda)
2 Sodium aluminosilicate 15 Sodium silicate 10 Sodium carbonate
10 Carboxymethyl cellulose 1 Polyethin glycol (MW
6000) 1 fluorescent dye
0.4 fragrance
0.2 awn salt balance moisture 5
2) Natural collar contaminated cloth; cotton gold cloth #2 [123 cloth was sewn onto the collar of a dress shirt and an adult male was allowed to wear it for two days. After wearing, a cloth with stains symmetrical about the center point was selected, and the cloth was cut in half at the symmetrical point of the stains and used for experiments.

３）洗浄条件及び方法 天然汚染布を洗浄する場合、９ＣＩｎＸ３０αの天然汚
染布を対称の位置で半裁し、９ｍ×１５ＣＷＬの一対の
汚染布の一方を基準洗剤で洗浄し、片方を比較洗剤であ
る本発明の洗剤でそれぞれ洗浄した。3) Cleaning conditions and methods When cleaning naturally contaminated cloth, cut the naturally contaminated cloth of 9CInX30α in half at symmetrical positions, wash one of the pair of contaminated cloths of 9m x 15CW with the standard detergent, and wash the other with the comparison detergent. Each was washed with the detergent of the present invention.

まず天然汚染布片１５枚を５０ｍＸ５０ｃＩＩＬの綿布
に縫い付け、粉末洗剤の場合には８ｔの０．６６５チの
洗剤溶液に入れ３０℃で１時間浸漬後東芝型洗濯機「銀
河」に移し綿製肌着８００　ｇｒ、ポリエステル綿混（
６５チ１５５チ）製Ｙシャツ５００ｇｒ　　を加えた後
、全量をａＯｔとした後強反転で１０分間洗浄し、脱水
、すすぎを充分にした後、乾燥後判定に供した。First, 15 pieces of naturally contaminated cloth were sewn onto a 50m x 50cIIL cotton cloth, and in the case of powdered detergent, they were soaked in 8t of 0.665cm detergent solution at 30°C for 1 hour, then transferred to a Toshiba type washing machine "Galaxy". Underwear 800 gr, polyester cotton blend (
After adding 500g of Y-shirt manufactured by 65cm (155cm), the total amount was adjusted to aOt, and then washed for 10 minutes with strong inversion, thoroughly dehydrated and rinsed, and then dried and subjected to evaluation.

基準洗剤で洗った半裁布と本発明の洗剤で洗った半裁布
とを肉眼判定による１対比較で評価した。A pair of half-cut fabrics washed with the standard detergent and a half-cut fabric washed with the detergent of the present invention were evaluated by visual judgment.

汚れの程度を表わす１０段階にランクづけした標準汚れ
を基準にし、洗浄布をランクづけした。洗浄性は基準洗
剤の洗浄力を１００としたときの本発明の洗剤の洗浄力
の点数で表わした。洗浄力指数の差はａ５以上で有意の
差とみなせる。The cleaning cloths were ranked based on standard soiling, which was ranked on a 10-level scale representing the degree of soiling. The detergency was expressed as a score for the detergency of the detergent of the present invention, with the detergency of the reference detergent set at 100. Differences in detergency index can be considered significant at a5 or higher.

４）　結果 表 実施例３゜ 更に本発明のエンド型アルカリ性セルラーゼを、液体洗
浄剤組成物及び漂白剤含有洗浄剤組成物に配合し、天然
エリ垢汚染布の洗浄効果を確認した。4) Results Table Example 3 Furthermore, the endo-type alkaline cellulase of the present invention was blended into a liquid detergent composition and a bleach-containing detergent composition, and the cleaning effect on cloth contaminated with natural burr dirt was confirmed.

１）洗剤配合 成　　　、　　　　　　　液体洗剤　漂白剤含有（ｗｔ
引　洗剤（ｗｔチ） アルキル硫酸ソーダ　　　　　　　　　　　　　　２ア
ルキルエトキシ硫酸ンーダ　　　　２０　　　　　−ノ
ニオン　　　　　　　　　　１５　　　５石　　＃　　
　　　　　　　　　　１ｏ　　　　　３トリポリリン酸
ソーダ　　　　　　　　−２０ケイ酸ソーダ　　　　　
　　　　　−　　　　　５炭酸ソーダ　　　　　　　　
　　　　−５芒　　硝　　　　　　　　　　　　−バラ
ンスクエン酸ソーダ　　　　　　　　　　３　　　　−
アルカノールアミン　　　　　　　　　　５　　　　　
−ポリエチレングリコール　　　　　　　２１エタノー
ル　　　　　　　　　　　　７　　　　−過炭酸ソーダ
　　　　　　　　　　−　　　２０螢光染料　　　　　
　　　　　　　０．２　　　　０．４背味付剤　　　　
　　　　　　０．００５　　　　　−香　　料　　　　
　　　　　　　　０．２　　　　０．３水　　　　　　
　　　　　　バランス　　　　５プロテアーゼ　　　　
　　　　　０．５　　　　０．５２）天然エリ布汚染布
及び洗浄条件、方法天然エリ布汚染布の調整及び洗浄条
件、方法は実施例２に順じた。1) Detergent formulation, liquid detergent containing bleach (wt
Detergent (wt) Sodium alkyl sulfate 2 Sodium alkyl ethoxy sulfate 20 -Nonion 15 5 stones #
1o 3 Sodium tripolyphosphate -20 Sodium silicate
- 5 carbonated soda
-5 awns -Balanced Sodium Citrate 3-
Alkanolamine 5
- Polyethylene glycol 21 Ethanol 7 - Sodium percarbonate - 20 Fluorescent dye
0.2 0.4 Back seasoning agent
0.005 -Fragrance
0.2 0.3 water
balance 5 protease
0.5 0.52) Natural fluff-stained fabric, washing conditions, and method Preparation of the natural fluff-contaminated fabric, washing conditions, and method were as in Example 2.

６）結果 液体洗浄剤組成物及び漂白剤含有洗浄剤組成物にエンド
型゛アルカリ性セルラーゼを配合した場合、いずれも無
配合だった場合に比較して優れた洗浄効果を示した。6) Results When endo-type alkaline cellulase was blended into liquid detergent compositions and bleach-containing detergent compositions, superior cleaning effects were shown compared to cases where neither was blended.

【図面の簡単な説明】[Brief explanation of the drawing]

第１図はプラスミドｐＣＡＳ１の開裂地図を示す図であ
る。カッコ内はＫｂ　を表している。 第２図は、エンド型アルカリ性セルラーゼの作用、至適
−を示す図で、第６図は、その田安定性を示す図で、第
４図は、その作用至適温度を示す図で、第５図は、その
温度安定性を示す図である。 代理人　弁理士　　戸　１）親　男 第　　１　　図 第　　２　　図 Ｈ １３図 Ｈ 第　　４　　図 第　　５　　図 ＡＡ−FIG. 1 shows a cleavage map of plasmid pCAS1. The value in parentheses represents Kb. Figure 2 is a diagram showing the optimal action of endo-type alkaline cellulase, Figure 6 is a diagram showing its stability, and Figure 4 is a diagram showing its optimal temperature for action. FIG. 5 is a diagram showing its temperature stability. Agent Patent Attorney 1) Parent Male Figure 1 Figure 2 Figure H Figure 13 H Figure 4 Figure 5 Figure AA-

Claims (1)

【特許請求の範囲】 １、ストレプトマイセス属に属するアルカリ性セルラー
ゼ生産菌のアルカリ性セルラーゼ生産性染色体ＤＮＡを
放線菌由来のベクターに含有せしめてなる組換えベクタ
ーによつて形質転換されたストレプトマイセス属に属す
るアルカリ性セルラーゼ生産菌の産生するエンド型アル
カリ性セルラーゼ。 ２、ストレプトマイセス属に属するアルカリ性セルラー
ゼ生産菌のアルカリ性セルラーゼ生産性染色体ＤＮＡを
放線菌由来のベクターに含有せしめてなる組換えベクタ
ーによつて形質転換されたストレプトマイセス属に属す
るアルカリ性セルラーゼ生産菌の産生するエンド型アル
カリ性セルラーゼを含有する洗浄剤組成物。[Scope of Claims] 1. A Streptomyces genus transformed with a recombinant vector obtained by containing the alkaline cellulase-producing chromosomal DNA of an alkaline cellulase-producing bacterium belonging to the Streptomyces genus in a vector derived from Streptomyces. Endo-type alkaline cellulase produced by alkaline cellulase-producing bacteria belonging to . 2. An alkaline cellulase-producing bacterium belonging to the genus Streptomyces transformed with a recombinant vector obtained by containing the alkaline cellulase-producing chromosomal DNA of an alkaline cellulase-producing bacterium belonging to the genus Streptomyces in a vector derived from Streptomyces A cleaning composition containing endo-type alkaline cellulase produced by.