JPS61272663A - Detection of cancer-associated antigen - Google Patents
Detection of cancer-associated antigenInfo
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- JPS61272663A JPS61272663A JP11408785A JP11408785A JPS61272663A JP S61272663 A JPS61272663 A JP S61272663A JP 11408785 A JP11408785 A JP 11408785A JP 11408785 A JP11408785 A JP 11408785A JP S61272663 A JPS61272663 A JP S61272663A
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Abstract
Description
【発明の詳細な説明】
〔発明の利用分野〕
本発明は癌細胞の癌関連抗原の検出法に係り、特に細胞
の膜表面に発現している抗原、又は細胞内部にある抗原
の検出に好適な方法に関する。[Detailed Description of the Invention] [Field of Application of the Invention] The present invention relates to a method for detecting cancer-related antigens in cancer cells, and is particularly suitable for detecting antigens expressed on the membrane surface of cells or antigens inside cells. Concerning methods.
「腫瘍マーカー」に記載されているように1からだの科
学J Ha i−00(1981)における各種の癌の
診断において、癌関連抗原の検出など免疫学的な手法が
検討されている。特に、大腸癌ではカルチノ・エンブリ
オニック・アンティジエン(carcjno embr
yonic antjgen以下CEAと略)、カルボ
ハイドレイト・アンディジエン19−9(carboh
ydrate antjgen 19−9 、以下CA
19−9と略)、ティッシュ・ポリペプチド アンティ
ジエン(tissue polypeptide an
tigen)等、膵癌ではCEA、バイフレアティック
・オンコフイタル アンティジエン(pancreat
jc oncofel;alantjgen)、CA1
.9−9等、肝細胞癌ではα−フェトプロティン(α−
fetoprotein ) 、胃癌ではCEA等が癌
関連抗原としてとらえられており、現在、血液中のこれ
らの抗原の濃度が、癌診断の指標となっている。これら
の抗原は癌細胞内で産生されており、血液中に遊離する
量は癌組織の大きさに依存している。そのため、血液中
の抗原濃度が」二昇したところでこれを測定しても細胞
塊の小さな早期癌を検出することは困難である。As described in "Tumor Markers", immunological methods such as detection of cancer-related antigens are being considered in the diagnosis of various cancers in 1 Karada no Kagaku J Ha i-00 (1981). In particular, for colorectal cancer, carcinoembryonic antiseptics
yonic antjgen (hereinafter abbreviated as CEA), carbohydrate andidiene 19-9 (carboh
ydrate antjgen 19-9, hereinafter CA
19-9), tissue polypeptide antiseptics (abbreviated as 19-9), tissue polypeptide
For pancreatic cancer, CEA, biphreatic oncophytal antiseptics (pancreatic cancer), etc.
jc oncofel;alantjgen), CA1
.. 9-9, etc., in hepatocellular carcinoma, α-fetoprotein (α-
fetoprotein), CEA, etc. are considered cancer-related antigens in gastric cancer, and the concentration of these antigens in the blood is currently used as an index for cancer diagnosis. These antigens are produced within cancer cells, and the amount released into the blood depends on the size of the cancer tissue. Therefore, it is difficult to detect early cancers with small cell clusters even if the antigen concentration in the blood is measured once it has risen.
また細胞に結合している抗原を検出する方法として、細
胞表面抗原を蛍光標識した抗体で染色し、フローサイト
メータにより検出する方法がある(太田、野村編[フロ
ーサイ1ヘメ1へり一手技と実際」)。この方法では細
胞表面の抗原のみを検出しており、細胞内部の抗原は検
出できない。In addition, as a method for detecting antigens bound to cells, there is a method in which cell surface antigens are stained with fluorescently labeled antibodies and detected using a flow cytometer (eds. ”). This method detects only antigens on the cell surface and cannot detect antigens inside the cells.
そこで癌細胞の産生ずる癌関連抗原を感度よく検出でき
る方法が望まれている。Therefore, a method that can detect cancer-related antigens produced by cancer cells with high sensitivity is desired.
本発明の目的は、癌細胞の産生ずる癌関連抗原を効率よ
く定量的に測定する方法を提供することにある。An object of the present invention is to provide a method for efficiently and quantitatively measuring cancer-related antigens produced by cancer cells.
癌細胞内で産生される抗原は、細胞外に分泌されるが、
当然、細胞膜上及び細胞内部にも存在している。一般に
、早期癌では血液中に遊離する抗原の量は非常に少ない
。また抗原によっては、細胞内において産生されるが、
細胞外には分泌しない癌細胞の存在も指摘されている。Antigens produced within cancer cells are secreted outside the cells, but
Naturally, it also exists on the cell membrane and inside the cell. Generally, in early stage cancer, the amount of antigen released into the blood is very small. Also, depending on the antigen, it is produced within the cell,
It has also been pointed out that there are cancer cells that do not secrete extracellular substances.
したがって、細胞外に分泌された抗原よりも、細胞膜」
二、及び/又は細胞内部に存在する抗原の量を検出した
方が癌の早期発見にとって有利である。Therefore, rather than antigen secreted outside the cell, cell membrane
Detecting the amount of antigen present inside cells and/or cells is advantageous for early detection of cancer.
一般に抗体は細胞内部に侵入しないため、細胞内部を存
在する抗原をそのまま検出することは困難である。しか
し、細胞を破砕することにより、膜表面及び/又は細胞
内部の癌関連抗原を遊離させれば抗原抗体反応によりこ
れを容易に検出することができる。Generally, antibodies do not invade inside cells, so it is difficult to detect antigens present inside cells as they are. However, if cancer-related antigens on the membrane surface and/or inside the cells are released by disrupting the cells, they can be easily detected by antigen-antibody reactions.
本発明の実施例として膵癌をとり上げ、その癌関連抗原
であるCEAの定量検出法について説明する。Taking pancreatic cancer as an example of the present invention, a method for quantitatively detecting CEA, which is a cancer-related antigen, will be explained.
実施例1 第1図は、試料となる細胞の調製手段の概略図である。Example 1 FIG. 1 is a schematic diagram of a means for preparing cells to be used as a sample.
まず、体内から切り出した膵臓組織塊1をハンクス液(
c M F −thanks )で洗浄する。この組織
塊1をシャーレ2に移し、メスまたはハサミを用いて十
分に細切する(第1図(1)))。この細切した組織片
3をディスパーザ又はトリジン(酵素)液5をいれたフ
ラスコ4に移し、37℃で一定時間振盪する(第1図(
C))。その後遠心分離又はろ過により酵素液5咎除き
細胞の浮遊液6を得る(第1図(d))。First, a pancreatic tissue mass 1 cut out from the body was prepared using Hank's solution (
c MF-thanks). This tissue mass 1 is transferred to a petri dish 2 and thoroughly chopped using a scalpel or scissors (FIG. 1 (1)). The finely chopped tissue pieces 3 are transferred to a disperser or a flask 4 containing tolizine (enzyme) solution 5, and shaken at 37°C for a certain period of time (see Fig. 1).
C)). Thereafter, the enzyme solution 5 is removed by centrifugation or filtration to obtain a cell suspension 6 (FIG. 1(d)).
第2図は、細胞に結合している抗原の定曖測定法を示す
模式図である。細胞が癌化していると、癌細胞7の膜表
面には抗原CE A 8 aが存在する。FIG. 2 is a schematic diagram showing a method for measuring ambiguous antigens bound to cells. When a cell has become cancerous, the antigen CE A 8 a is present on the membrane surface of the cancer cell 7 .
また、細胞内にも抗原8bが産生されている。細胞の浮
遊液6にCE A 8 aと特異的に反応する抗CEA
抗体(ウサギ)9を加えて膜−にの全てのCEAと抗原
抗体反応をおこさせる(第2図(a))。Furthermore, antigen 8b is also produced within the cells. Anti-CEA that specifically reacts with CE A 8 a in cell suspension 6
Antibody (rabbit) 9 is added to cause an antigen-antibody reaction with all CEA on the membrane (FIG. 2(a)).
この抗CEA抗体9はフルオレツセインイソチオシアネ
ート(FITC) 10で標識しておく。次に、遠心分
離又はろ過により未反応のFTTC−抗CEA抗体を除
く(第2図(b))。膜に結合しているcEA (8a
)を可溶化させるため、細胞7をブレンダーを用いて破
砕し、さらに抗原部をNP−40などの非イオン性界面
活性剤の0.5 %液により溶解させる(第2図(C)
)。この溶液をFTTC−抗CEA抗体と特異的に反応
する抗体、例えば、抗つサギIgG抗体(ヤギ)11を
結合した膜などの固相12−1−を通らせることにより
FITC−抗CEA抗体−CEA複合体を固定する(第
2図(d))。このとき固相は、FTTCにより蛍光標
識されたと同じことになり、この同相を取り出し、蛍光
測定することにより、膵組織塊1の膜表面の抗原量を定
量することができる。例えば、488nmのArレーザ
光を同相に照射し、520〜540nmの蛍光強度を測
定する。この蛍光強度を、あらかじめ校正しておいた蛍
光強度−抗原量の関係と照らし合わせ、抗原量を定量す
ることができる。This anti-CEA antibody 9 is labeled with fluorescein isothiocyanate (FITC) 10. Next, unreacted FTTC-anti-CEA antibody is removed by centrifugation or filtration (Figure 2(b)). Membrane-bound cEA (8a
), the cells 7 are crushed using a blender, and the antigen portion is further dissolved with a 0.5% solution of a nonionic surfactant such as NP-40 (Figure 2 (C)).
). FITC-anti-CEA antibody- by passing this solution through a solid phase 12-1- such as a membrane bound with an antibody that specifically reacts with FTTC-anti-CEA antibody, for example, anti-heron IgG antibody (goat) 11. The CEA complex is fixed (FIG. 2(d)). At this time, the solid phase is the same as fluorescently labeled with FTTC, and by taking out this same phase and measuring the fluorescence, the amount of antigen on the membrane surface of the pancreatic tissue mass 1 can be quantified. For example, Ar laser light of 488 nm is irradiated in the same phase, and the fluorescence intensity of 520 to 540 nm is measured. The amount of antigen can be quantified by comparing this fluorescence intensity with a previously calibrated relationship between fluorescence intensity and antigen amount.
実施例2
実施例1の第2図(a)では抗原抗体反応は細胞表面の
抗原8aに対してのみ起こり、細胞内に存在する抗原8
bには作用していない。そのため、第2図(d)では、
細胞内部にあった抗原8bは同相に固定されず、全て−
L清み液中に溶解している。Example 2 In FIG. 2(a) of Example 1, the antigen-antibody reaction occurs only against the antigen 8a on the cell surface, and against the antigen 8a present inside the cell.
It has no effect on b. Therefore, in Figure 2(d),
Antigen 8b inside the cell was not fixed in the same phase, and all -
Dissolved in the L purifying solution.
そこで、この」二清み液を採取し液中の抗原8bを測定
すると、細胞内部にあった抗原8bの量を定量すること
ができる。抗原8bが膜表面の抗原8aと同じCEAの
ときを例にして説明する。第3図及び第4図は抗原CE
A8bの定敏測定法を示す模式図である。第3図では、
−に清み液に第2図と同じように、FTTC標識した抗
CEA抗体を加えて抗原抗体反応を引き起こす。次にC
E A 8 bのみを固定するために、CE Aと特異
的に反応する抗CEA抗体(ヤギ)を結合した固相12
−[−を通過させる。このようにしてCEA8 bを固
相上に固定する。第73図とは逆に第4図のように、始
めにCE A 8 bを固相12に固定し、次にl/1
1’C−抗Cl(A抗体と抗原抗体反応を起こさせても
同じである。抗原の定置法は実施例1の場合と同じであ
る。Therefore, by collecting this 2-separate liquid and measuring the antigen 8b in the liquid, it is possible to quantify the amount of antigen 8b that was inside the cells. An example in which the antigen 8b is CEA, which is the same as the antigen 8a on the membrane surface, will be explained. Figures 3 and 4 show antigen CE
FIG. 2 is a schematic diagram showing a method for measuring sensitivity of A8b. In Figure 3,
- FTTC-labeled anti-CEA antibody is added to the clarified solution in the same manner as in FIG. 2 to cause an antigen-antibody reaction. Next, C
In order to immobilize only E A 8 b, a solid phase 12 bound to an anti-CEA antibody (goat) that specifically reacts with CEA was used.
−[− to pass through. In this way, CEA8 b is immobilized on the solid phase. Contrary to FIG. 73, as shown in FIG. 4, CE A 8 b is first immobilized on the solid phase 12, and then
The same effect can be obtained even if an antigen-antibody reaction is caused with the 1'C-anti-Cl (A antibody).The method for placing the antigen is the same as in Example 1.
実施例3
実施例1及び2では抗原CEAを細胞膜−Lに発見して
いるC EΔ8a量と細胞内部に存在するCEABb量
とに分けて定量する方法について説明した。細胞の膜−
ヒと内部のCEAを分けることなくまとめて検出する場
合には、癌組織片3をブレンダー及び0.5 %NP
−40液を用いて破砕し、CEAを溶解させる。この後
、実施例2と同じようにしてCI=: Aを定量するこ
とができる。Example 3 In Examples 1 and 2, a method was described in which the antigen CEA was quantified separately into the amount of CEΔ8a found in the cell membrane-L and the amount of CEABb present inside the cell. Cell membrane-
When detecting human and internal CEA all at once without separating them, put the cancer tissue piece 3 in a blender and 0.5% NP.
-40 liquid is used to crush and dissolve CEA. After this, CI=: A can be quantified in the same manner as in Example 2.
実施例4
実施例1,2.3では細胞膜」二の抗原と内部の抗原と
が同じものである場合を示している。ところで細胞が癌
化することにより膜表面の糖鎖などが変化し、癌特異抗
原となることもある。さらに、1つの癌細胞が産生する
抗原は1種類たけではなく多種類存在する。例えば膵鎗
ではCE AとCA19−9などを産生ずる。そのため
検出すべき膜−Lの抗原と細胞内部の抗原とは必すしも
一致しない。しかし、この場合でも、それぞれに特異的
に反応する抗体を作用させることにより、実施例1及び
2ど回し、ように、定量することができる。Example 4 Examples 1, 2 and 3 show cases where the antigen on the cell membrane and the antigen inside the cell membrane are the same. However, when a cell becomes cancerous, sugar chains on the membrane surface may change and become cancer-specific antigens. Furthermore, one cancer cell produces not just one type of antigen, but many types. For example, the pancreatic syringe produces CEA and CA19-9. Therefore, the membrane-L antigen to be detected does not necessarily match the antigen inside the cell. However, even in this case, the amount can be quantified in the same manner as in Examples 1 and 2 by applying antibodies that specifically react with each.
本実施例(1〜4)では、細胞を破砕し、抗原を遊離さ
せてから定量測定を行っている。抗原を遊離させてから
後は、血液中の抗原の定量測定とほぼ同じ過程となって
いる。そのため、従来の血液中の抗原定置装置に、細胞
の表面及び内部の抗原の検出系を非常に簡単にしかも安
価に組み込むことができるという効果がある。またこの
ことにより血液中の抗原の定置、細胞の抗〃にの定量を
1台の装麿で行うことが可能となる。In Examples (1 to 4), quantitative measurements are performed after cells are crushed and antigens are released. After the antigen is released, the process is almost the same as the quantitative measurement of antigen in blood. Therefore, there is an effect that a detection system for antigens on the surface and inside of cells can be incorporated into a conventional blood antigen fixation device very easily and at low cost. Moreover, this makes it possible to perform the immobilization of antigens in blood and the quantification of antigens in cells using a single apparatus.
本実施例によれば、癌細胞の膜」二の抗原と内部の抗原
とを独立に定量することができる。また、細胞内部にし
か分泌しない(細胞外に分泌しない)抗原をも効率よく
計測することができる。さらに抗原部を溶解して測定す
るため、細胞が有色細胞であったり、内部に蛍光体をも
っている細胞であっても関係なく抗原量を定量すること
ができる。According to this example, antigens on the membrane and internal antigens of cancer cells can be independently quantified. Furthermore, antigens that are secreted only inside cells (not secreted outside cells) can also be efficiently measured. Furthermore, since the antigen portion is dissolved and measured, the amount of antigen can be quantified regardless of whether the cells are colored cells or cells that contain fluorescent substances inside.
また試薬との反応は全て抗原抗体反応という特異的な反
応であるため、原理的に検出感度が高いという効果があ
る。In addition, since all reactions with reagents are specific reactions called antigen-antibody reactions, detection sensitivity is theoretically high.
本実施例では膵癌関連検査について説明したが、大腸癌
肝細胞癌、胃癌・肺癌等でも同様に行うことができる。In this embodiment, a pancreatic cancer-related test has been described, but the test can be similarly performed for colon cancer, hepatocellular carcinoma, stomach cancer, lung cancer, etc.
また悪性リンパ腫のように細胞が始めから浮遊細胞であ
る場合は、第1図のような調整は不必要である。Further, in cases where the cells are floating cells from the beginning, such as in malignant lymphoma, the adjustment as shown in FIG. 1 is unnecessary.
本発明によれば、細胞に結合している癌関連抗原を効率
よく直接定量できるので、抗原産生量の少ない早期癌で
も感度よく検出することができる。According to the present invention, cancer-related antigens bound to cells can be efficiently and directly quantified, so even early cancers with low antigen production can be detected with high sensitivity.
また、細胞の膜トの抗原のみ、または細胞内部の抗原の
みを定量することができるので、ガン診断に際してより
多くの情報をljえることができる効果がある。さらに
細胞の外部に抗原を放出しない癌細胞の抗原を定量でき
るので、診断の有用性を広げる効果がある。Furthermore, since it is possible to quantify only the antigens on the cell membrane or only the antigens inside the cells, there is an effect that more information can be obtained when diagnosing cancer. Furthermore, since antigens in cancer cells that do not release antigens outside the cells can be quantified, this method has the effect of expanding the usefulness of diagnosis.
第1図は癌細胞の調製手順の概略図、第2図は細胞膜」
ユの抗原の定量測定法を示す模式図、第3図は細胞内部
の抗原の定板測定Y人を示す模式図、第4図は細胞内部
の抗原の定量測定法を示す模式】・・・組識塊、2・・
・シャーレ、コ3・・組織片、4・・フラスコ、5・・
・酵素液、6・・・細胞浮遊液、7・・・癌細胞、8a
・・・細胞膜りの抗原(CEA)、8b・・細胞内部の
抗原(CEA)、9・・・抗CEA抗体、冨1図
(C)
′fJ2図
¥ ご
(えっ
冨・
lン
(b、 )Figure 1 is a schematic diagram of the procedure for preparing cancer cells, and Figure 2 is a cell membrane.
Figure 3 is a schematic diagram showing the method for quantitative measurement of antigens inside cells. Figure 4 is a schematic diagram showing the quantitative measurement method for antigens inside cells. Tissue mass, 2...
・Petri dish, 3. Tissue piece, 4. Flask, 5.
・Enzyme solution, 6... Cell suspension, 7... Cancer cells, 8a
...Antigen (CEA) on the cell membrane, 8b...Antigen (CEA) inside the cell, 9...Anti-CEA antibody, Figure 1 (C) 'fJ2 Figure (b, )
Claims (1)
いて検出する方法において、該細胞を破砕することによ
つて該細胞の膜表面の抗原及び/または該細胞内部の抗
原を遊離させ、該遊離した抗原を検出することを特徴と
する癌関連抗原検出法。1. A method for detecting a cancer-related antigen bound to a cell using an antigen-antibody reaction, in which the antigen on the membrane surface of the cell and/or the antigen inside the cell is released by crushing the cell. , a cancer-related antigen detection method characterized by detecting the released antigen.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP11408785A JPS61272663A (en) | 1985-05-29 | 1985-05-29 | Detection of cancer-associated antigen |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP11408785A JPS61272663A (en) | 1985-05-29 | 1985-05-29 | Detection of cancer-associated antigen |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS61272663A true JPS61272663A (en) | 1986-12-02 |
Family
ID=14628761
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP11408785A Pending JPS61272663A (en) | 1985-05-29 | 1985-05-29 | Detection of cancer-associated antigen |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS61272663A (en) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US10684254B2 (en) | 2016-02-08 | 2020-06-16 | Panasonic Intellectual Property Management Co., Ltd. | Analyte detection by dielectrophoresis |
-
1985
- 1985-05-29 JP JP11408785A patent/JPS61272663A/en active Pending
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US10684254B2 (en) | 2016-02-08 | 2020-06-16 | Panasonic Intellectual Property Management Co., Ltd. | Analyte detection by dielectrophoresis |
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