JPS61272637A - けい光偏光測定装置 - Google Patents
けい光偏光測定装置Info
- Publication number
- JPS61272637A JPS61272637A JP11416285A JP11416285A JPS61272637A JP S61272637 A JPS61272637 A JP S61272637A JP 11416285 A JP11416285 A JP 11416285A JP 11416285 A JP11416285 A JP 11416285A JP S61272637 A JPS61272637 A JP S61272637A
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- JP
- Japan
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- fluorescent light
- sample
- light
- polarization
- cell
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- Pending
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-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
- G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
- G01N21/6445—Measuring fluorescence polarisation
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- Pathology (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔発明の利用分野〕
本発明は、けい光測光測定装置に係り、特に生体液中の
標的物質を定量的に測定するに好適なけい光測光測定装
置に関する。
標的物質を定量的に測定するに好適なけい光測光測定装
置に関する。
けい光測光測定装置は、抗原抗体反応を利用して生体液
中の微量の抗原や抗体を定量するために用いられている
。
中の微量の抗原や抗体を定量するために用いられている
。
けい光性分子が偏光した光で励起されると、光の吸収と
発光の間に分子のブラウン運動による回転で、励起分子
の配向性が解消してけい光の偏光度が低下する。励起光
側の偏光板を垂直に固定し、けい先側の偏光板をそれに
平行にしたとき、あるいは直角にしたときに得られるけ
い光強度をそれぞれ■ヮとＩｏとすると、けい光偏光度
Ｐは次式で表わされる。
発光の間に分子のブラウン運動による回転で、励起分子
の配向性が解消してけい光の偏光度が低下する。励起光
側の偏光板を垂直に固定し、けい先側の偏光板をそれに
平行にしたとき、あるいは直角にしたときに得られるけ
い光強度をそれぞれ■ヮとＩｏとすると、けい光偏光度
Ｐは次式で表わされる。
けい光物質で標識した抗原が、対応する抗体と結合する
と、分子が著しく大きくなり、けい光分子の回転ブラウ
ン運動が抑えられ、偏光度は抗体が結合する前に比べて
大きくなる。上記の原理を利用したものがけい光側光分
析（ｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎｆｌｕｏｒｏｉｍｍｕｎ
ｏａｓｓａｙ）であり、まずけい光標識抗原と抗体を反
応させ、この系に測定しようとする非標識抗原（未知物
質）を加えると抗体を消費し、抗体と結合する標識抗原
が少なくなり、結合しないものが多くなる。このものは
低分子なので回転ブラウン運動が活発に起こり、偏光度
が小さくなることから、小さくなった程度に応し、未知
物質の蝋を求めることができる。けい光標識抗原の分子
緻が小さいＪＪが、抗体と結合する前後のブラウン運動
に差が生じ、より高い感Ｊａ′が得られる。この方法に
用いられるけい光物質としてフルオレセイン系けい光物
質が一般に用いられる。
と、分子が著しく大きくなり、けい光分子の回転ブラウ
ン運動が抑えられ、偏光度は抗体が結合する前に比べて
大きくなる。上記の原理を利用したものがけい光側光分
析（ｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎｆｌｕｏｒｏｉｍｍｕｎ
ｏａｓｓａｙ）であり、まずけい光標識抗原と抗体を反
応させ、この系に測定しようとする非標識抗原（未知物
質）を加えると抗体を消費し、抗体と結合する標識抗原
が少なくなり、結合しないものが多くなる。このものは
低分子なので回転ブラウン運動が活発に起こり、偏光度
が小さくなることから、小さくなった程度に応し、未知
物質の蝋を求めることができる。けい光標識抗原の分子
緻が小さいＪＪが、抗体と結合する前後のブラウン運動
に差が生じ、より高い感Ｊａ′が得られる。この方法に
用いられるけい光物質としてフルオレセイン系けい光物
質が一般に用いられる。
けい先制光度Ｐを測定する従来の装置は、偏光成分の垂
直成分（Ｔよ）と」１構成分（１，）ｔｉ：偏光板を回
転することによって交７７、に測定していたため、両成
分の２１ｔｑ定に時間差が生じた。Ｉｌ値濱質のために
は、異なる測定タイミングにおける各偏光強度を使用せ
ざるを得なかったので、ある測定時点での正確なＪＪ値
を求めることはできないという欠点があった。このため
、偏光成分測定にあたり時間経過につれて蛍光強度が変
化する反応を正確に追跡することは困難であった。また
、パックグラウンド蛍光が時間とともに変化する場合に
は、このバックグラウンドの変化とＩ」的とする成分に
由来する蛍光強度を区別することができなかった。
直成分（Ｔよ）と」１構成分（１，）ｔｉ：偏光板を回
転することによって交７７、に測定していたため、両成
分の２１ｔｑ定に時間差が生じた。Ｉｌ値濱質のために
は、異なる測定タイミングにおける各偏光強度を使用せ
ざるを得なかったので、ある測定時点での正確なＪＪ値
を求めることはできないという欠点があった。このため
、偏光成分測定にあたり時間経過につれて蛍光強度が変
化する反応を正確に追跡することは困難であった。また
、パックグラウンド蛍光が時間とともに変化する場合に
は、このバックグラウンドの変化とＩ」的とする成分に
由来する蛍光強度を区別することができなかった。
〔発明０月１的〕
本発明の目的は、試料からのけい光強度が変化する反応
を１１（確に追跡でき、パックブラウン１−はい光が変
動する場合でもＩＩ：確な測定値が得られるけい売悩光
測定装置を提供することにある。
を１１（確に追跡でき、パックブラウン１−はい光が変
動する場合でもＩＩ：確な測定値が得られるけい売悩光
測定装置を提供することにある。
「発明の概要〕
本発明は、試料を収容し得るセルと、このセルに照射す
る励起光を偏光する偏光フィルタと、試料からのけい光
の垂直偏光成分を通す第１の固定偏光フィルタと、試料
からのけい光の＋ｌＺ行偏光成分を通す第２のＩｉ’、
’Ｉ定偏光フィルタと、同＃、￥に得られた垂直成分と
ｉｐ行酸成分受光信号がらけい先制光度を演算する演算
装置を備えたことを特徴とする。
る励起光を偏光する偏光フィルタと、試料からのけい光
の垂直偏光成分を通す第１の固定偏光フィルタと、試料
からのけい光の＋ｌＺ行偏光成分を通す第２のＩｉ’、
’Ｉ定偏光フィルタと、同＃、￥に得られた垂直成分と
ｉｐ行酸成分受光信号がらけい先制光度を演算する演算
装置を備えたことを特徴とする。
第１図に本発明の一実施例の概略構成をボす。
試料セル３は、反応容器として用いられ、光度計の光路
に位置づけられ得る。試料セル；うが光路に位置づけら
れる前に、フルオレセイン系けい光物質で標識した抗原
を含む試薬液を所定量加えられ、さらに対応する抗体を
含む試薬液の所定酸加えることによって抗原抗体反応を
生ぜしぬる。その後試料添加装置によって所定量の被検
体（離油試料）を加える。この被検体は非標識抗原を含
んでいる。
に位置づけられ得る。試料セル；うが光路に位置づけら
れる前に、フルオレセイン系けい光物質で標識した抗原
を含む試薬液を所定量加えられ、さらに対応する抗体を
含む試薬液の所定酸加えることによって抗原抗体反応を
生ぜしぬる。その後試料添加装置によって所定量の被検
体（離油試料）を加える。この被検体は非標識抗原を含
んでいる。
続いて試料セルは第１図のように光路に位置づけられる
。
。
この試料セルには特定波長の偏光が照射される。
光源Ｊからの光は、励起波長選択器］、 １ ｋ通った
あと偏光フィルタ２を通ってセル３に照射される。
あと偏光フィルタ２を通ってセル３に照射される。
セル３の少なくとも励起光入射方向と二つのけい光取出
方向の壁面は透光性材料からなっている。
方向の壁面は透光性材料からなっている。
試料から発生されるけい光の垂直偏光成分は、固定設置
されている垂直偏光フィルタ７を選択的に透過し光検出
器１４で受光される。また試料からのけい光の平行偏光
成分は、固定設置されている平行偏光フィルタ８を選択
的に透過し光検出器４で受光される。二方向のけい光光
路には、けい光波長選択＃＃１２，１．３が配置され、
同じけい光波長が選択される。第１図ではけい光波長選
択器を２つ設けているが、けい光の取出方向を一方向と
し、１つの波長選択器で特定の波長光を選択した後、光
路を２つに分岐して各分岐光路に違う偏光成分を取り出
す偏光フィルタを設けることもできる。
されている垂直偏光フィルタ７を選択的に透過し光検出
器１４で受光される。また試料からのけい光の平行偏光
成分は、固定設置されている平行偏光フィルタ８を選択
的に透過し光検出器４で受光される。二方向のけい光光
路には、けい光波長選択＃＃１２，１．３が配置され、
同じけい光波長が選択される。第１図ではけい光波長選
択器を２つ設けているが、けい光の取出方向を一方向と
し、１つの波長選択器で特定の波長光を選択した後、光
路を２つに分岐して各分岐光路に違う偏光成分を取り出
す偏光フィルタを設けることもできる。
いずれの場合も、光検出器４および１４は同時に同じ発
光源からのはい光を観測できる。各受光信号は増幅器５
．１５で増幅され、演算器９にてけい先制光度の演算に
供される。演算結果は、被検成分の濃度として、あるい
はけい先制光度として表示装置６に表示される。
光源からのはい光を観測できる。各受光信号は増幅器５
．１５で増幅され、演算器９にてけい先制光度の演算に
供される。演算結果は、被検成分の濃度として、あるい
はけい先制光度として表示装置６に表示される。
第１表には、従来の偏光成分交〃受売方式による８１す
定結果例を示す。この例では、試料として高じリルビン
血清を生理食塩水で２０倍に希釈したものを用いた１、
第１表ではジゴキシン測定用として調製した反応液を用
いている。なお、抗ｊ）Ｋとしては、α−フェトなと、
抗体としては、フェリチン、コルチゾール、コルチコレ
ステリン、ウヮバミンなどを用いることができる。けい
光標識物質としてはＦＴＴＣなどを用いることができる
。
定結果例を示す。この例では、試料として高じリルビン
血清を生理食塩水で２０倍に希釈したものを用いた１、
第１表ではジゴキシン測定用として調製した反応液を用
いている。なお、抗ｊ）Ｋとしては、α−フェトなと、
抗体としては、フェリチン、コルチゾール、コルチコレ
ステリン、ウヮバミンなどを用いることができる。けい
光標識物質としてはＦＴＴＣなどを用いることができる
。
第１表における測定装置の条件は、励起波長が４９０
ｎ ｍ、けい光波長が５２０ ｎ ｒｎ、検出器が第１
表 光電子増倍管である。第１表では、けい先部光度をミリ
雫位のｒｎ Ｐとして表示しである。
ｎ ｍ、けい光波長が５２０ ｎ ｒｎ、検出器が第１
表 光電子増倍管である。第１表では、けい先部光度をミリ
雫位のｒｎ Ｐとして表示しである。
一方、第２表には本発明に基づく測定結果例を示す。第
２表の例は、ｍ＋＋定装置が違う他は、第１表と同じ条
件で測定された。第１表と第２表の結果を比較すると、
従来法（第１表）では時間の経過によってバ１Ｐ値が変
動しているが、本発明法（第２表）ではｉｎ Ｔ’値が
ほぼ−・定となっている。
２表の例は、ｍ＋＋定装置が違う他は、第１表と同じ条
件で測定された。第１表と第２表の結果を比較すると、
従来法（第１表）では時間の経過によってバ１Ｐ値が変
動しているが、本発明法（第２表）ではｉｎ Ｔ’値が
ほぼ−・定となっている。
従来の装置は、偏光板回転により各偏光成分ｋ測定する
のに３０秒以−Ｌユの時間を要していたが、第２表 ができレート測定においても、ある測定時点での１Ｆ確
なＰ値演算により、短時間に反Ｊ、Ｌ；液中の強度変化
酸を求めることができた。第；う表に、この結果を示す
。第３表におけるレート測定の傾配第：３表 （７ｍ Ｔ’ ）は、２５秒間に０．８９ｍＰであるの
で、０．０３５６１１ＩＰ／ ｓｅｃとなる。
のに３０秒以−Ｌユの時間を要していたが、第２表 ができレート測定においても、ある測定時点での１Ｆ確
なＰ値演算により、短時間に反Ｊ、Ｌ；液中の強度変化
酸を求めることができた。第；う表に、この結果を示す
。第３表におけるレート測定の傾配第：３表 （７ｍ Ｔ’ ）は、２５秒間に０．８９ｍＰであるの
で、０．０３５６１１ＩＰ／ ｓｅｃとなる。
第３表の測定値をもとに、ジゴキシン測定用検鼠線を作
成した例を第２図に示す。
成した例を第２図に示す。
以−■二の実施例により、今まで不困難であった短時間
のけい光測光測定が可能となり、またバックグラウンド
のけい光強度の変化を取り除くけい売悩光の測定を可能
にした。−Ｌ述の実施例では、偏光成分の垂直成分（■
□）と平行成分（Ｉ／／）を同時測定することにより、
時間経過によりけい光強度が変化する反応を正確に追跡
することが可能となり、また、バックグラウンドけい光
が時間とともに変化する場合に、このバックグラウンド
の変化と目的とする成分に由来するけい光強度を区別す
ることが可能となる効果がある。
のけい光測光測定が可能となり、またバックグラウンド
のけい光強度の変化を取り除くけい売悩光の測定を可能
にした。−Ｌ述の実施例では、偏光成分の垂直成分（■
□）と平行成分（Ｉ／／）を同時測定することにより、
時間経過によりけい光強度が変化する反応を正確に追跡
することが可能となり、また、バックグラウンドけい光
が時間とともに変化する場合に、このバックグラウンド
の変化と目的とする成分に由来するけい光強度を区別す
ることが可能となる効果がある。
以上説明したように、本発明によれば、同じタイミング
でけい光の平行成分と垂直成分の信号が得られ、それら
をけい光偏光度演算に利用できるので、正確な測定値が
得られるという効果が奏せられる。
でけい光の平行成分と垂直成分の信号が得られ、それら
をけい光偏光度演算に利用できるので、正確な測定値が
得られるという効果が奏せられる。
第１図は本発明の一実施例の概略楕成図、第２図はジゴ
キシンの検量線例に示す図である。 ２．７．８・・・偏光フィルタ、３・試料セル、４゜】
４・・・光検出器、９・・・演算器。
キシンの検量線例に示す図である。 ２．７．８・・・偏光フィルタ、３・試料セル、４゜】
４・・・光検出器、９・・・演算器。
Claims (1)
- １、試料を収容し得るセルと、このセルに照射する励起
光を偏光する偏光フィルタと、試料からのけい光の垂直
偏光成分を通す第１の固定偏光フィルタと、試料からの
けい光の平行偏光成分を通す第２の固定偏光フィルタと
、同時に得られた上記垂直成分の受光信号と上記平行成
分の受光信号とからけい光偏光度を演算する演算装置を
備えたけい光偏光測定装置。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11416285A JPS61272637A (ja) | 1985-05-29 | 1985-05-29 | けい光偏光測定装置 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11416285A JPS61272637A (ja) | 1985-05-29 | 1985-05-29 | けい光偏光測定装置 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61272637A true JPS61272637A (ja) | 1986-12-02 |
Family
ID=14630712
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11416285A Pending JPS61272637A (ja) | 1985-05-29 | 1985-05-29 | けい光偏光測定装置 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61272637A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2011152067A1 (ja) * | 2010-06-04 | 2011-12-08 | 富士フイルム株式会社 | 生体分子検出装置および生体分子検出方法 |
| WO2012042880A1 (ja) * | 2010-09-30 | 2012-04-05 | 富士フイルム株式会社 | 生体分子検出装置および生体分子検出方法 |
| WO2012042886A1 (ja) * | 2010-09-30 | 2012-04-05 | 富士フイルム株式会社 | 生体分子検出装置および生体分子検出方法 |
| WO2012042882A1 (ja) * | 2010-09-30 | 2012-04-05 | 富士フイルム株式会社 | 生体分子検出装置および生体分子検出方法 |
-
1985
- 1985-05-29 JP JP11416285A patent/JPS61272637A/ja active Pending
Cited By (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2011152067A1 (ja) * | 2010-06-04 | 2011-12-08 | 富士フイルム株式会社 | 生体分子検出装置および生体分子検出方法 |
| JP2012013684A (ja) * | 2010-06-04 | 2012-01-19 | Fujifilm Corp | 生体分子検出装置および生体分子検出方法 |
| CN102933954A (zh) * | 2010-06-04 | 2013-02-13 | 富士胶片株式会社 | 生物分子检测设备和生物分子检测方法 |
| WO2012042880A1 (ja) * | 2010-09-30 | 2012-04-05 | 富士フイルム株式会社 | 生体分子検出装置および生体分子検出方法 |
| WO2012042886A1 (ja) * | 2010-09-30 | 2012-04-05 | 富士フイルム株式会社 | 生体分子検出装置および生体分子検出方法 |
| WO2012042882A1 (ja) * | 2010-09-30 | 2012-04-05 | 富士フイルム株式会社 | 生体分子検出装置および生体分子検出方法 |
| JP2012093336A (ja) * | 2010-09-30 | 2012-05-17 | Fujifilm Corp | 生体分子検出装置および生体分子検出方法 |
| JP2012093339A (ja) * | 2010-09-30 | 2012-05-17 | Fujifilm Corp | 生体分子検出装置および生体分子検出方法 |
| CN103140751A (zh) * | 2010-09-30 | 2013-06-05 | 富士胶片株式会社 | 生物分子检测设备和生物分子检测方法 |
| US8581213B2 (en) | 2010-09-30 | 2013-11-12 | Fujifilm Corporation | Biological molecule detecting apparatus and biological molecule detecting method |
| US8680486B2 (en) | 2010-09-30 | 2014-03-25 | Fujifilm Corporation | Biological molecule detecting apparatus and biological molecule detecting method |
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