JPS6125567A - Immune globulin adsorbing material and apparatus - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。(57) [Summary] This bulletin contains application data before electronic filing, so abstract data is not recorded.

Description

【発明の詳細な説明】 ■１発明の背景 技術分野 本発明は新規な免疫グロブリン吸着材および該吸着材を
利用した免疫グロブリン吸着装置に関するものである。Detailed Description of the Invention (1) Background Technical Field of the Invention The present invention relates to a novel immunoglobulin adsorbent and an immunoglobulin adsorption device using the adsorbent.

血液中に発現する免疫グロブリンまたは免疫グロプリＱ
複合体は、癌、免疫増殖性症候群、慢性関節リウマチ、
全身性エリテマトーデス等の自己免疫疾患あるいはアレ
ルギー、臓器移植時の拒絶反応等の生体免疫機能に関係
した疾患および現象の原因または進行と密接な関係をも
っていると考えられている。Immunoglobulin or immunoglobulin Q expressed in the blood
The complex is cancer, immunoproliferative syndrome, rheumatoid arthritis,
It is thought to be closely related to the cause or progression of autoimmune diseases such as systemic lupus erythematosus, or diseases and phenomena related to the body's immune function, such as allergies and rejection reactions during organ transplants.

そこで血液、血漿等の体液成分から上記免疫グロブリン
または免疫グロブリン複合体を特異的に吸着除去するこ
とによって上記疾患の進行を防止し、症状を軽減せしめ
、さらには治癒を早めることが期待されている。Therefore, by specifically adsorbing and removing the above-mentioned immunoglobulin or immunoglobulin complex from body fluid components such as blood and plasma, it is expected to prevent the progression of the above-mentioned disease, alleviate symptoms, and even accelerate healing. .

先行技術 従来、このような目的に供し得る吸着材としては、ゾロ
ティンＡを不溶性担体に固定させた吸着材、アクリル酸
エステル系多孔性樹脂（例えば、ＸＡＤ　−７、ローム
アンドハース社製＞おｘびカルぎキシメチルセルロース
等の陽イオン交換体が提案されている。Prior Art Conventionally, adsorbents that can be used for this purpose include adsorbents in which Zolotin A is immobilized on an insoluble carrier, and acrylic acid ester-based porous resins (for example, XAD-7, manufactured by Rohm and Haas Co., Ltd.). Cation exchangers such as dicarboxymethylcellulose have been proposed.

ゾロティンＡを不溶性担体に固定させた吸着剤は、免疫
グロブリンに対して吸着選択性を有するが、プロティン
Ａが黄色ブドウ球菌由来の生理活性タンパク質であるた
め、原料確保が困難で製品コストがかかる。また活性が
不安定であるため、固定化時の取扱い、固定化後の保存
等による失活を起こし易い欠点がおる。さらに、体液に
接触させて使用する際に、プロティンＡ溶出による弊害
が生じる危険があり、加えて失活を抑えつつ滅菌するこ
とが困難であるという難点がある。An adsorbent in which Zolotin A is immobilized on an insoluble carrier has adsorption selectivity for immunoglobulins, but since protein A is a physiologically active protein derived from Staphylococcus aureus, it is difficult to secure raw materials and the product cost is high. Furthermore, since the activity is unstable, it has the disadvantage that it is easily deactivated due to handling during immobilization, storage after immobilization, etc. Furthermore, when used in contact with body fluids, there is a risk of harmful effects due to protein A elution, and in addition, there is a problem that it is difficult to sterilize while suppressing deactivation.

また、アクリル酸エステル系多孔性樹脂およびカル？キ
シメチルセルロースは吸着能が小さく、その上吸着選択
性が低いという欠点があり、さらに体液中のアルブミン
をも吸着するので浸透圧の異常をきたし、安全な治療器
として利用することは不可能であった。In addition, acrylic acid ester-based porous resin and Cal? Oxymethylcellulose has the drawbacks of low adsorption capacity and low adsorption selectivity.Furthermore, it also adsorbs albumin in body fluids, causing abnormal osmotic pressure, making it impossible to use it as a safe therapeutic device. Ta.

近年、このような問題点を改良した吸着材として不溶性
担体に疎水性化合物、例えばフェニルアラニンやトリシ
トファンのような疎水性アミノ酸を固定したものが提案
されている（特開昭５７−１２２８７５号公報）。この
吸着材は製造が容易で活性も安定であるという利点を有
するが、吸着選択性の面で必ずしも十分ではなく、一層
改善された吸着材の出現が望まれていた。In recent years, an adsorbent that has improved this problem has been proposed, in which a hydrophobic compound, for example, a hydrophobic amino acid such as phenylalanine or tricytophane, is immobilized on an insoluble carrier (Japanese Patent Laid-Open No. 122875/1987). Although this adsorbent has the advantage of being easy to manufacture and having stable activity, it is not necessarily sufficient in terms of adsorption selectivity, and there has been a desire for a further improved adsorbent.

■９発明の目的 本発明は、上記従来吸着材の問題点に鑑み、免疫グロブ
リンまたは免疫グロブリン複合体を高活性にかつより特
異的に吸着し、安定な活性を保持し、安全性があり、滅
菌操作も簡単に行うことができ、体液浄化あるいは再生
用に適した吸着材およびそれを利用した吸着装置を提供
せんとするものである。(9) Purpose of the Invention In view of the above-mentioned problems with conventional adsorbents, the present invention adsorbs immunoglobulins or immunoglobulin complexes with high activity and more specificity, maintains stable activity, and is safe. It is an object of the present invention to provide an adsorbent that can be easily sterilized and is suitable for purifying or regenerating body fluids, and an adsorption device using the same.

■０発明の詳細な説明 上記の目的を達成するため、本発明の免疫グロブリン吸
着材は、不溶性担体にチアミン、ニコチン酸、葉酸もし
くはリポ酸またはこれらの１種とｐＫ４゜０〜９．０の
色素との結合物が固定されている。Detailed Description of the Invention In order to achieve the above object, the immunoglobulin adsorbent of the present invention contains thiamin, nicotinic acid, folic acid, lipoic acid, or one of these in an insoluble carrier, and has a pK of 4°0 to 9.0. The bond with the dye is fixed.

また、本発明の免疫グロブリン吸着装置は、流体の導出
入口を有する容器内に上記吸着材が収容されている。Further, in the immunoglobulin adsorption device of the present invention, the adsorbent is housed in a container having a fluid inlet/outlet.

本発明で対象とする被吸着物質は、免疫グロブリンおよ
び免疫グロブリン複合体でちる。より詳細に説明すると
、 免疫グロブリン（Ｇ、’Ｍ、Ａ、Ｄ、Ｅ）としては、抗
核抗体、抗ＤＮＡ抗体、抗リンパ球抗体、抗赤血球抗体
、抗血小板抗体、抗アセチルコリン・レセプター抗体、
抗大腸抗体の自己抗体、腎糸球体・肺基底膜抗体、表皮
親細胞間デスモゾーム抗体、インスリン・レセプター抗
体、ミニリン抗体、血友病筒■因子抗体、 免疫グロブリン複合体としては、リウマチ因子、免疫グ
ロブリン間または免疫グロブリンと他の物質、特に抗原
および抗原様物質との複合体、免疫グロブリン誘導体と
しては、免疫グロブリンの還元生成物、化学修飾生成物 等である。（以下グロブリン系化合物と総称する。）本
発明で使用される吸着試薬は、チアミン、ニコチン酸、
葉酸もしくはリポ酸またはこれらの１種とｐＫ４．０〜
９０の色素との結合物である。The target substances to be adsorbed in the present invention include immunoglobulins and immunoglobulin complexes. To explain in more detail, the immunoglobulins (G, 'M, A, D, E) include anti-nuclear antibodies, anti-DNA antibodies, anti-lymphocyte antibodies, anti-erythrocyte antibodies, anti-platelet antibodies, anti-acetylcholine receptor antibodies,
Anti-colon antibody autoantibodies, renal glomerular/lung basement membrane antibodies, epidermal intercellular desmosomal antibodies, insulin receptor antibodies, minirin antibodies, hemophilia tube factor antibodies, and immunoglobulin complexes such as rheumatoid factor and immune Complexes between globulins or immunoglobulins and other substances, especially antigens and antigen-like substances, and immunoglobulin derivatives include reduced products of immunoglobulins, chemically modified products, and the like. (hereinafter collectively referred to as globulin compounds). The adsorption reagents used in the present invention include thiamine, nicotinic acid,
Folic acid or lipoic acid or one of these and pK4.0~
It is a conjugate with 90 pigments.

本発明者等は、多くのビタミン類および類縁化合物につ
いて免疫グロブリンの吸着能および吸着選択性を研究し
た結果、上記の特定の化合物が吸着試薬として格別優れ
た効果を有することを見い出した。チアミン、ニコチン
酸、葉酸およびリポ酸はそれぞれビタミンＢ４．ビタミ
ンＢ３．ビタミンＭおよびチオクト酸であり、医薬品と
して二［業的に入手可能である。本発明においてはさら
にこれらの化合物のいずれかとｐＫ４．０〜９０の色素
との結合物が吸着試薬として使用される。ｐＫ４．０〜
９０の色素とは、「エッチ、ジェイ、コンズ　バイオロ
ジカル　スティング」アール、ディ、リリイー著、ザ　
ウィリアムス　アンド　ゥィルキンス　カンパニイ（出
版）１９７７　（ｒ　Ｈ，Ｊ、　Ｃｏｎｎ’ｓ　Ｂｉｏ
ｌｏｇｉｃａｌ　５ｔａｉｎｓ　Ｊ　Ｒ，Ｄ。The present inventors have studied the adsorption capacity and adsorption selectivity of immunoglobulins for many vitamins and related compounds, and have found that the above-mentioned specific compounds have exceptionally excellent effects as adsorption reagents. Thiamin, nicotinic acid, folic acid, and lipoic acid each contain vitamin B4. Vitamin B3. Vitamin M and thioctic acid, which are commercially available as pharmaceuticals. In the present invention, a combination of any of these compounds and a dye having a pK of 4.0 to 90 is further used as an adsorption reagent. pK4.0~
90 Pigments are "Horny, Jay, Kon's Biological Sting" by R.D. and Lily, The
Williams & Wilkins Company (Publisher) 1977 (r H, J, Conn's Bio
logical 5tains J R,D.

Ｌｉ１ｌｉｅ、　Ｔｈｅ　Ｗｉｌｌｉａｍｓ　＆　Ｗ’
１ｌｌｋｉｎｓ　Ｃｏｍｐａｒ＋ｙ＋　１９７７　）に
記載の各種指示薬、組織化学用色素の内でｐＫ値が４０
〜９０のものをいう。その例としては、ブロモクロロフ
ェノールブルー、コンゴーレッド、４−（４−ジメチル
アミノ−１−ナノチルアゾ−３−メトキシベンゼンスル
ホン酸）、α−ナフチルレッド、アリザリンレッドＳ１
　ｐ−エトキンクリソイノン、フェナセトリン、ブロモ
クレゾールグリーン、レゾルセイン、２，５−ノニトロ
フェノール、クロロクレゾールグリーン、エチルレッド
（ノキノリン）、インビクラミン酸、２（ｐ−ツメチル
アミノフェニルアゾ）ビリジ／、メチルノｅ−ゾル、１
−ナフチルアミノアゾ−ベンゼン−ｐ−スルホ／酸、レ
ザズリン、ガレイン（酸）、メチルレッド、ラクモイド
、クリソイジンＹ１へマドキシリン、カルミニン酸、プ
ロビルレッド、アリザリンオレンジ、クロロフェノール
レッド、スルホナフチルレッド、ヘノタメトキシレッド
、〇−ニトロフェノール、Ｎ−７エニルー１−ナフチル
アミノアノ−０−力ルデキシベンゼン、ブロモクレゾー
ル／？　−７’ル、ブロモフェノールレッド、アリザリ
ン（酸）、ジブロモフェニルテトラブロモフェニル−ス
ルホンフタレイン、アゾリトミン、リドマス、ｐ−ニト
ロフェノール、ニトラ／−ルイエロー、アリザリンブル
ー、ブロモチモールブルー、ビナクローム、インドオキ
シン、ブリリアントイエロー、６，８−ジニトロ−２，
４−（ＩＨ，３Ｈ）−キナゾリンジオン、ニュートラル
レッド、オーリン（し／リン酸）、キメリンブルー、ｍ
−二トロフェノール、フェノールレッド、ナイルプル−
２Ｂ、ｏ−クレゾールベンゼイン、ジー５−プロモバニ
リデンシクロヘキサノン、０−クレゾールレッド、クル
クミン、α−ナフトールフタレイン、ジヒドロキシスチ
リルケトン、オレンジ■（トロ々オリン０００−２　）
　、フ＋）　＋）アントイエローＳ１エチル−ビス−２
，４−ノ二トロフェニルアセテート、オレンジＩ（）ロ
ベオリ７０００１　）、グロビルーα−ナノチルオレン
ノ、ｍ−クレゾールノや−ノル、ヘシアンが一デオーク
ス、ｐ−キシレノールブルー、フェノールバイオレット
、チモールブルー、フェノールテトラクロロフタレイン
、フェノールテトラヨードフタレイン等があげられる。Li1lie, The Williams &W'
Among the various indicators and histochemical dyes described in 1llkins Compar+y+ 1977), the pK value is 40.
〜90 things. Examples include bromochlorophenol blue, Congo red, 4-(4-dimethylamino-1-nanotylazo-3-methoxybenzenesulfonic acid), α-naphthyl red, Alizarin red S1
p-ethquin chrysoinone, phenacetrin, bromocresol green, resorcein, 2,5-nonitrophenol, chlorocresol green, ethyl red (noquinoline), invicramic acid, 2(p-methylaminophenylazo)viridi/, methyl no e-sol, 1
-Naphthylaminoazo-benzene-p-sulfo/acid, resazurin, gallein (acid), methyl red, lacmoid, chrysoidine Y1 hemadoxylin, carminic acid, provil red, alizarin orange, chlorophenol red, sulfonaphthyl red, henota Methoxy red, 〇-nitrophenol, N-7enyl-1-naphthylaminoano-0-rudexybenzene, bromocresol/? -7'ru, bromophenol red, alizarin (acid), dibromophenyltetrabromophenyl-sulfonephthalein, azolitomine, lidomas, p-nitrophenol, nitra/-ru yellow, alizarin blue, bromothymol blue, binachrome, indooxin , brilliant yellow, 6,8-dinitro-2,
4-(IH,3H)-quinazolinedione, neutral red, aurine (phosphoric acid), chimerin blue, m
-Ditrophenol, phenol red, Nilepur-
2B, o-cresolbenzein, di-5-promovanylidenecyclohexanone, 0-cresol red, curcumin, α-naphtholphthalein, dihydroxystyryl ketone, orange ■ (Tororolin 000-2)
, Fu+) +) Anto Yellow S1 Ethyl-bis-2
, 4-nonitrophenyl acetate, Orange I () Robeoli 70001), globy-alpha-nanothylorenno, m-cresol-nor, hessian deoaks, p-xylenol blue, phenol violet, thymol blue, phenol tetrachlorophthalate Examples include rhein, phenoltetraiodophthalein, and the like.

特に好ましい色素としてはラクモイド、ブリリアントイ
エロー■、フェノールレッド等があげられる。Particularly preferred dyes include lachmoid, brilliant yellow (■), and phenol red.

色素とビタミン類との結合は次のように行なった。まず
、５ｍｍｏｌの色素を５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液４５
−に溶解し、エピクロルヒドリン（クロロメチルオキシ
ラン）５−を添加、混合する。The binding of pigments and vitamins was carried out as follows. First, add 5 mmol of the dye to a 5N aqueous sodium hydroxide solution
- and add epichlorohydrin (chloromethyloxirane) 5- and mix.

これを５０〜６０℃水浴中に入れて２時間反応さ屹る。This was placed in a 50-60°C water bath and reacted for 2 hours.

次に、残余のエピクロルヒドリンを有機溶媒抽出して除
去する。そして、色素と結合させる吸着試薬５　ｍｍｏ
ｌと、触媒として１％トリーｎ−ブチルアミン及び１％
ビリソンを添加し、溶解、混合する。これを８０℃水浴
中に入れて、２〜４時間反応させ、色素と吸着試薬とを
結合させる。次に塩酸でｐ！（を調整（ｐｉ４８〜１０
）した後、ノリ力ゲル表面にこの結合物を固定させる方
法は次の通りである。γ−グリシドキシグロビルトリメ
トキシシラン（シランカッシリング剤）で処理したシリ
カゲルを混合し、８０℃水浴中で２〜４時間反応させる
。次に蒸留水で洗浄した後、１Ｍエタノールアミンを用
いて、未反応のエポキシ基をプロ。Next, residual epichlorohydrin is removed by extraction with an organic solvent. Then, 5 mmo of adsorption reagent to be combined with the dye
l and 1% tri-n-butylamine and 1% as catalysts.
Add virison, dissolve and mix. This is placed in an 80°C water bath and reacted for 2 to 4 hours to bond the dye and adsorption reagent. Next, p! with hydrochloric acid! (Adjust (pi48~10
), the method for immobilizing this conjugate on the surface of the glue gel is as follows. Silica gel treated with γ-glycidoxyglobiltrimethoxysilane (silane cassilling agent) is mixed and reacted in an 80°C water bath for 2 to 4 hours. After washing with distilled water, unreacted epoxy groups were removed using 1M ethanolamine.

キングする。そしてＰＨ４−０，０２Ｍ酢酸バッファー
、ＰＨＩＯ−０，２Ｍ炭酸バッファーで繰シ返し洗浄後
、蒸留水で洗浄し、１２０〜１５０℃で３時間以上減圧
乾燥した。King. Then, it was washed repeatedly with PH4-0.02M acetate buffer and PHIO-0.2M carbonate buffer, then washed with distilled water, and dried under reduced pressure at 120 to 150°C for 3 hours or more.

上記結合物が特に優れた吸着能、吸着選択性を有するの
は、吸着において該結合物の疎水・親水性バランス、表
面静電特性、立体構造、分子剛直性が有効に作用してい
る結果と解釈できるものである。The reason why the above-mentioned conjugate has particularly excellent adsorption ability and adsorption selectivity is due to the effective effect of the hydrophobic/hydrophilic balance, surface electrostatic properties, 3D structure, and molecular rigidity of the conjugate during adsorption. It can be interpreted.

本発明において不溶性担体は、親水性担体、疎水性担体
いずれも使用できる。In the present invention, the insoluble carrier can be either a hydrophilic carrier or a hydrophobic carrier.

不溶性担体の形状は、粒子状、繊維状、中空糸状、膜状
等いずれの公知の形状も用いうるが、血液、血漿の通液
性、吸着材調製時の取扱い簡便性などの点から、粒子状
担体が特に好ましく用いられる。The shape of the insoluble carrier may be any known shape such as particulate, fibrous, hollow fiber, or membrane. A shaped carrier is particularly preferably used.

粒子状担体としては、平均粒径０．０５　ｍｍから５ａ
ｍの範囲にあることが好ましい。平均粒径はＪＩＳ　−
Ｚ−８８０１に規定されるフルイを用いて分級した後、
各級の上限粒径と下限粒径の中間値を各級の粒径とし、
その重量平均として平均粒径を算出する。また、粒子形
状は球形が好ましいが、特に限定されるものではない。The particulate carrier has an average particle size of 0.05 mm to 5a.
It is preferably in the range of m. The average particle size is JIS-
After classifying using a sieve specified in Z-8801,
The intermediate value between the upper limit particle size and the lower limit particle size of each class is the particle size of each class,
The average particle size is calculated as the weight average. Further, the particle shape is preferably spherical, but is not particularly limited.

使い得る粒子状担体としては、アがロース系、デキスト
ラン系、セルロース系、ポリアクリルアミド系、ポリビ
ニルアルコール系、ポリビニルピロリドン系、ポリアク
リロニトリル系、スチレン〜ヒニルヘ／セン共重合体系
、＝ｔ？’Ｊスチレン系、アクリル酸エステル系、メタ
クリル酸エステル系、ガラス系、アルミナ系、チタン系
、活性炭素系、セラミックス系などの担体であるが、特
に多孔性重合体粒子、多孔質ガラス、シリカゲル、多孔
質シリカ−アルミナが良好な結果を与える。重合体組成
は、ポリアミド系、ポリエステル系、ポリウレタン系、
ビニル化合物の重合体等、多孔性構造をとり得る公知の
重合体を用いることができる。Particulate carriers that can be used include agarose type, dextran type, cellulose type, polyacrylamide type, polyvinyl alcohol type, polyvinylpyrrolidone type, polyacrylonitrile type, styrene-hinyl he/cene copolymer type, =t? 'J Styrene-based, acrylic ester-based, methacrylic ester-based, glass-based, alumina-based, titanium-based, activated carbon-based, ceramic-based carriers, etc., but especially porous polymer particles, porous glass, silica gel, Porous silica-alumina gives good results. Polymer compositions include polyamide, polyester, polyurethane,
Known polymers that can have a porous structure, such as polymers of vinyl compounds, can be used.

また、通常、固定化酵素、アフィニティクロマトグラフ
ィーに用いられる公知の担体は、特別の限定なく使用す
ることができる。Furthermore, immobilized enzymes and known carriers commonly used in affinity chromatography can be used without any particular limitations.

該多孔質の中では特に球状のシリカゲルが好ましい結果
を与える。Among the porous materials, spherical silica gel gives particularly favorable results.

本発明に用いられる多孔体粒子は、その表面に吸着試薬
を固定化しうるものであり、平均孔径１００Ｘないし５
０００　Ａ　％　より好”ましくは２００スないし３０
００Ｘの範囲にあるものである。The porous particles used in the present invention are capable of immobilizing adsorption reagents on their surfaces, and have an average pore diameter of 100X to 5X.
000 A% more preferably 200 to 30
It is in the range of 00X.

該多孔性構造は、平均孔径１００大ないし５０００Ｘの
範囲にあるのが好ましいが、平均孔径が小さすぎる場合
には、吸着される物質の蛍が少なく、大きすぎる場合に
は、多孔体粒子の強度が低下し、かつ表面積が減少する
ため実用的ではない。The porous structure preferably has an average pore diameter in the range of 100 to 5000X, but if the average pore diameter is too small, fewer fireflies of the substance will be adsorbed, and if it is too large, the strength of the porous particles will be reduced. It is not practical because the surface area decreases.

平均孔径の測定は、水銀圧入式ポロシメーターによった
。この方法は多孔体に水銀を圧入してゆき、侵入した水
８Ｎ量から気孔量を、圧入に要する圧力から孔径を求め
る方法である。The average pore diameter was measured using a mercury intrusion porosimeter. In this method, mercury is injected into a porous body, and the pore volume is determined from the amount of 8N of water that has entered, and the pore diameter is determined from the pressure required for the intrusion.

吸着試薬を不溶性担体の表面に固定する方法は、共存結
合、イオン結合、物理吸着、包埋あるいは担体表面への
沈殿不溶化等あらゆる公知の方法を用いることができる
が、結合物の溶出性よりみて、共有結合により、固定、
不溶化して用いることが好ましい。そのため通常、固定
化酵素、アフイニティクロマトグラフィーで用いられる
公知の不溶性担体の活性化方法およびリガンドの納得方
法を用いることができる。まだ、必要に応じて不溶性担
体とリガンドとの間に任意の長さの分子（スぜ一す−）
を導入して使用することもできる。All known methods such as coexistence bonding, ionic bonding, physical adsorption, embedding, or precipitation insolubilization on the surface of the carrier can be used to immobilize the adsorption reagent on the surface of the insoluble carrier. , fixed by covalent bond,
It is preferable to use it after insolubilization. Therefore, generally known methods for activating immobilized enzymes, insoluble carriers used in affinity chromatography, and methods for activating ligands can be used. However, if necessary, a molecule of arbitrary length (sweeping) can be inserted between the insoluble carrier and the ligand.
It is also possible to introduce and use it.

本発明の免疫グロブリン吸着装置は、上述の吸着材を、
体液の導出入口を備えた＠器内に充填保持させてなるも
のである。The immunoglobulin adsorption device of the present invention uses the above-mentioned adsorbent,
It is filled and held in a container equipped with an inlet and outlet for body fluids.

次に添付図面を参照しつつ本発明の装置について説明す
る。Next, the apparatus of the present invention will be explained with reference to the accompanying drawings.

第１図は本発明装置の一例を示す断面図である。FIG. 1 is a sectional view showing an example of the device of the present invention.

本装置は両端に入口４および出口５を有する容器１とそ
の内部に収容された吸着材２と入口４および出口５に上
記吸着材２を挾んで設けられたフィルタ３゜３′からな
る。フィルタ３．３′は吸着材の破片等が体液に入り体
内に流れ込むのを防ぐために設けられている。This apparatus consists of a container 1 having an inlet 4 and an outlet 5 at both ends, an adsorbent 2 housed inside the container, and a filter 3°3' provided at the inlet 4 and the outlet 5 to sandwich the adsorbent 2. The filter 3.3' is provided to prevent adsorbent fragments etc. from entering the body fluid and flowing into the body.

容器１の材質は、ガラス、ポリエチレン、ポリゾロピレ
ン、ポリカーボネート、ポリスチレン、ポリメチルメタ
クリレート等が使用できるが、オートクレーブ滅菌が可
能なポリゾロピレンやポリカーゴネート等が特に好まし
い。また、容器本体の吸着材層と出入口部との間に、体
液は通過するが、吸着材は通過しない網目を持つフィル
ターを備えているものが好ましい。この材質は生理学的
に不活性で強度の高いものであれば良いが、特にポリエ
ステル製、ポリアミド製のものが好捷しく使用される。As the material of the container 1, glass, polyethylene, polyzoropyrene, polycarbonate, polystyrene, polymethyl methacrylate, etc. can be used, but polyzoropyrene, polycargonate, etc., which can be sterilized by autoclaving, are particularly preferable. Furthermore, it is preferable that a filter is provided between the adsorbent layer of the container body and the entrance/exit portion, which has a mesh through which body fluids can pass, but which does not allow the adsorbent to pass through. This material may be any physiologically inert and strong material, but polyester and polyamide are particularly preferred.

体液は、体液導入口４より導入され、吸着材２で処理さ
れた後、体液導出口５から導出される。吸着材はフィル
タ３，３′により容器内に保持されている。The body fluid is introduced through the body fluid inlet 4, treated with the adsorbent 2, and then led out through the body fluid outlet 5. The adsorbent is retained within the container by filters 3, 3'.

本発明の吸着装置は、使用の便宜のため、蒸留水や生理
食塩水等の精製水で充填され、オートクレーブ滅菌され
て製品とするのが望ましい。For convenience of use, the adsorption device of the present invention is desirably filled with purified water such as distilled water or physiological saline and sterilized in an autoclave to produce a product.

第２図は、本発明の吸着装置を用いて血液浄化治療を行
う場合の１例を示す概略図である。血液は血液導入口６
より導入され、ポンシフを通って血漿分離装置８へ供給
され、血球と血漿に分離される。分離された血漿はポン
グア′を通って、吸着容器１に供給され、吸着処理され
た後に血漿・血球混合装置９で血球と混合されて血液導
出口１０より導出される。FIG. 2 is a schematic diagram showing an example of blood purification treatment using the adsorption device of the present invention. Blood is in blood inlet 6
The blood is then introduced into the plasma separation device 8 through a ponsif, where it is separated into blood cells and plasma. The separated plasma is supplied to the adsorption container 1 through the pongua', and after being subjected to adsorption treatment, it is mixed with blood cells in the plasma/blood cell mixing device 9 and led out from the blood outlet port 10.

本発明の装置を体外循環で用いる場合には、大路次の二
連シの方法がある。１つには、体内から取シ出した血液
を遠心分離機もしくは模型あるいは中空糸型血漿分離器
を使用して、血漿成分と血球成分とに分離したのち、血
漿成分を該装置に通過させ、浄化した後、血球成分と合
わせて体内に戻す方法であシ、他の１つは体内から取り
出した血液を直接核装置に通過させ、浄化する方法であ
る。When the device of the present invention is used for extracorporeal circulation, there is a two-part method as described by Ohji. One method is to separate blood taken from the body into plasma components and blood cell components using a centrifuge, model, or hollow fiber plasma separator, and then pass the plasma components through the device. One method is to return the blood to the body together with blood cell components after purification, and the other method is to directly pass the blood taken out from the body through a nuclear device and purify it.

体液の通液方法としては、臨床上の必要に応じ、あるい
は設備の装置状況に応じて、連続的に通液してもよいし
、また断続的に通液使用してもよい。The method for passing body fluids may be either continuous or intermittent, depending on clinical needs or equipment conditions.

次に実施例を示して本発明をさらに具体的に説明する。Next, the present invention will be explained in more detail with reference to Examples.

実施例１ 水酸化カリウムでｐＨ９に調整した５％γ−グリシドキ
シゾロビルトリメトキシシラン（シランカッシリング剤
）水溶液で、平均孔径５２２ｘの球状シリカゲル（粒子
径範囲７４〜１７７　Ｉｎｎ　、表面積７０ｍ２／ｆ　
、富士デヴインン製）を処理することにより、シリカゲ
ル表面にエポキシ基を導入した。このシリカゲル表面に
トリブチルアミンとピリジンを触媒として用いて吸着試
薬を反応結合させた後、蒸留水で洗浄し、次に過剰のエ
ポキシ基を１Ｍエタノールアミンでブロッキングした。Example 1 Spherical silica gel with an average pore size of 522x (particle size range 74-177 Inn, surface area 70 m2/ f
, manufactured by Fuji Devin), epoxy groups were introduced onto the silica gel surface. After an adsorption reagent was reactively bonded to the surface of this silica gel using tributylamine and pyridine as catalysts, it was washed with distilled water, and then excess epoxy groups were blocked with 1M ethanolamine.

この吸着材をｐＨ４−０，０２Ｍ酢酸バッファー、ＰＨ
ＩＯ−０，２Ｍ炭酸バッファーで繰り返し洗浄後、蒸留
水で洗浄し、１２０〜１５０℃で３時間以上減圧乾燥し
て吸着実験に供した。This adsorbent was mixed with pH 4-0.02M acetate buffer, PH
After repeated washing with IO-0.2M carbonate buffer, it was washed with distilled water, dried under reduced pressure at 120 to 150°C for 3 hours or more, and used for an adsorption experiment.

吸着実験は、試験管（テルモ製うルボ、１５．りＭＩＩ
Ｌφｘｉｏｏ朋）に吸着材０５グとＰＨ７，４−０，１
Ｍリン酸バッファー２−を混合してアスピレータ−（東
京理化器機製Ａ−２８型）で脱気後、ウシ血漿３Ｔｎｔ
を添加し、ブラッドミキサー（萱垣医理科工業製。The adsorption experiment was carried out using a test tube (Terumo Urubo, 15.
Lφxioo) with adsorbent 05g and PH7,4-0,1
After mixing 2-M phosphate buffer and degassing with an aspirator (Model A-28 manufactured by Tokyo Rikakiki), 3Tnt of bovine plasma was added.
Blood mixer (manufactured by Kayagaki Irika Kogyo).

ＢＭ−１０１型）を使用して攪拌しながら、３７℃熱風
循環式恒温槽（田葉井製、　Ｐ（Ｓ）−２１２型）で９
０分間インキ−ベートした。試験管内容物を！リゾロビ
レン製のカラム（テルモ製の５ｔｎｌデイスポーザプル
シリンノの本体先端部分を切断し、その部分へ外側から
ステンレス管を予め通したシリコンコゞム栓に、ナイロ
ン製の２５０あるいは３３０メツシユのフィルターを付
けて押しはめたもの）に移し、ｐＨ７，４−０，１Ｍリ
ン酸バッファー６−で洗浄し、流出液を捕集した。BM-101 model) while stirring in a 37°C hot air circulation constant temperature bath (Tabai, P(S)-212 model).
Incubate for 0 minutes. Test tube contents! Cut off the tip of the main body of a column made of lysolobilene (Terumo's 5 tnl disposer pull cylinder), and attach a nylon 250 or 330 mesh filter to a silicone stopper with a stainless steel tube passed through it from the outside. It was washed with pH 7.4-0.1M phosphate buffer 6-, and the effluent was collected.

流出液中のアルブミン、総タン・母り質ｉを−すれぞれ
ブロムクレゾールグリーン法、ビウレット法で測定し、
グロブリン量を総夕／・クク質濃度とアルブミン濃度の
差として求めた。すなわち便宜上、グロブリン量はアル
ブミン以外の蛋白質量とし、血漿の場合、フィブリノー
ゲンもグロブリンにきめて計算した。そして吸着材を用
いないで同様に操作して得た流出液のアルブミンあるい
はグロブリン量より上記測定者をそれぞれ差し引くこと
によって、それぞれの吸着材への吸着量を算出しく（１
）式）、この吸着量を吸着材を用いないで操作して得た
流出液のアルブミンあるいはグロブリン量で除すことに
よって吸着率を計算した（（２）式）。Albumin, total tan, and matrix i in the effluent were measured by the bromcresol green method and the biuret method, respectively.
The amount of globulin was determined as the difference between the total protein concentration and the albumin concentration. That is, for convenience, the amount of globulin was defined as the amount of proteins other than albumin, and in the case of plasma, fibrinogen was also calculated as globulin. Then, by subtracting the amount of albumin or globulin from the effluent obtained in the same manner without using an adsorbent, the adsorption amount to each adsorbent can be calculated (1
), and the adsorption rate was calculated by dividing this amount of adsorption by the amount of albumin or globulin in the effluent obtained by operating without using an adsorbent (formula (2)).

吸着量（η／ｆ　）　＝　［（吸着材を用いないで操作
した流出液中の成分量）−（吸着材０，５ｔを用いて操
作した流出液中の成分量））×２　　　　　　　　　　
　　　・・・（１）式吸着率（イ）＝（（上記吸着量）
／（吸着材を用いないで操作した流出液中の成分ｉｌ）
　ｌ　Ｘ　１００　　　　　　　、、、（２）式比較の
ため、従来技術（フェニルアラニン）および吸着試薬を
結合させない球状シリカゲルを用いて上記方法と同様に
して吸着実験を行なった。Adsorption amount (η/f) = [(Amount of components in the effluent operated without using adsorbent) - (Amount of components in the effluent operated using 0.5 t of adsorbent)) x 2
... (1) Formula adsorption rate (a) = ((adsorption amount above)
/(component il in the effluent operated without adsorbent)
l X 100 ,... (2) For comparison purposes, an adsorption experiment was conducted in the same manner as above using conventional technology (phenylalanine) and spherical silica gel to which no adsorption reagent was bound.

結果を表１に示す。表１から明らかなように、従来技術
および吸着試薬を結合させないシリカゲルは、吸着量は
多いが吸着選択性において劣っている。The results are shown in Table 1. As is clear from Table 1, the conventional technology and silica gel to which no adsorption reagent is bound have a large amount of adsorption, but are inferior in adsorption selectivity.

表　　１ 実施例２ 不溶性担体として球状シリカゲルの代りに多孔質ガラス
のｃｐｃ−ｉｏ−ｓｏｏ（平均孔径５１５Ｘ、粒子径範
囲７５〜１２５μｍ１表面積４４．３ｍ２７？、エレク
トロニュークレオニクス社製）を使用し、ウシ血漿の代
りにウシ血清を使用する以外は実施例１と同様にして吸
着実験を行った。結果を表２に示す。Table 1 Example 2 Porous glass CPC-IO-SOO (average pore diameter 515X, particle size range 75-125 μm 1 surface area 44.3 m27, manufactured by Electro Nucleonics) was used instead of spherical silica gel as an insoluble carrier. An adsorption experiment was conducted in the same manner as in Example 1 except that bovine serum was used instead of bovine plasma. The results are shown in Table 2.

表　　２ 比較のため、吸着試薬を結合させない破砕状多孔質ガラ
スのＣＰＧ　−１０（エレクトロニュークレオニクス社
製）とＰＳＧ　（富士デヴイソン製）を用いて実施例２
と同様にして吸着実験を行なった。Table 2 For comparison, Example 2 was conducted using crushed porous glass CPG-10 (manufactured by Electronucleonics) and PSG (manufactured by Fuji Davison) to which no adsorption reagent was bound.
An adsorption experiment was conducted in the same manner.

結果を表３に示す。表３から、吸着試薬を結合させない
多孔質ガラスは、吸着量は多いが吸着選択性において劣
ることは明らかである。また平均孔径が１００Ｘ未満で
ある多孔質ガラスは吸着能が大幅に低下した。これはア
ルブミン（３８ＸＸ１５０Ｘ）、γ−グロブリン（４４
ＸＸ２３５Ｘ）等の分子が多孔質ガラスの孔内に入り乍
いためと考えられる。The results are shown in Table 3. From Table 3, it is clear that the porous glass to which no adsorption reagent is bound has a large amount of adsorption, but is inferior in adsorption selectivity. In addition, the adsorption capacity of porous glass having an average pore diameter of less than 100X was significantly reduced. This includes albumin (38XX150X), γ-globulin (44
This is thought to be due to molecules such as XX235X) entering the pores of the porous glass.

実施例３ 吸着試薬として葉酸とｐＫ４．０〜９０の色素とをエピ
クロルヒドリンを介して結合させたものを用いる以外は
実施例１と同様にして吸着実験を行った。Example 3 An adsorption experiment was conducted in the same manner as in Example 1, except that an adsorption reagent in which folic acid and a dye having a pK of 4.0 to 90 were bonded via epichlorohydrin was used.

結果を表４に示す。表４から葉酸とラクモイドとの結合
物、葉酸とブリリアントイエローとの結合物、葉酸とフ
ェノールレッドとの結合物がグロブリンを選択的かつ高
率に吸着することが明らかである。The results are shown in Table 4. It is clear from Table 4 that the conjugates of folic acid and lacmoid, the conjugates of folic acid and brilliant yellow, and the conjugates of folic acid and phenol red adsorb globulin selectively and at a high rate.

表　　４ 比較のため吸着試薬としてｐＫ４．０〜９．０の色素を
使用したこと、不溶性担体として破砕状多孔質ガラスの
ＣＰＧ−１０−５００（平均孔径ｓＩＪ、、粒子径範粒
子径範囲７５岸１２５ ニュークレオニクス社製）を使用したこと、並びにウシ
血漿の代りにウシ血清を使用したこと以外は実施例３と
同様にして吸着実験を行った。結果を表５に示す。表５
から、葉酸と結合しない色素を吸着試薬として使用する
場合は、吸着選択性が劣っていることが明らかである。Table 4 For comparison, dyes with pK 4.0 to 9.0 were used as adsorption reagents, and crushed porous glass CPG-10-500 (average pore size sIJ, particle size range 75 mm) was used as an insoluble carrier. An adsorption experiment was conducted in the same manner as in Example 3, except that 125 (manufactured by Nucleonics) was used and bovine serum was used instead of bovine plasma. The results are shown in Table 5. Table 5
From this, it is clear that when a dye that does not bind to folic acid is used as an adsorption reagent, adsorption selectivity is inferior.

流側４ 不溶性担体として平均孔径５２２Ｘの球状シリゲルの代
りに平均孔径４４０Ｘの球状ンリカゲ（表面積８　２　
、、、２７，　、富士デク゛イソン化学製）を用し、ウ
シ血漿の代シに正常人血漿を使用する外は実施例１と同
様にして吸着実験を行った。Stream side 4 As an insoluble carrier, instead of the spherical silgel with an average pore diameter of 522X, spherical silgel with an average pore diameter of 440
An adsorption experiment was conducted in the same manner as in Example 1, except that normal human plasma was used in place of bovine plasma.

果を表６に示す。The results are shown in Table 6.

表　　６ ■　発明の効果 本発明の免疫グロブリン吸着材は、不溶性担体にチアミ
ン、ニコチン酸、葉酸もしくはリポ酸またはこれらの１
種とｐＫ４．０〜９０の色素との結合物が固定されてい
るので、免疫グロブリンまたは免疫グロブリン複合体の
吸着能および吸着選択性に優れている。すなわち、各実
施例で示した如く、本発明の吸着材は他の吸着材に比較
してアルブミンの吸着量が少なく、グロブリンの吸着量
は同程度である。Table 6 ■ Effects of the invention The immunoglobulin adsorbent of the present invention contains thiamin, nicotinic acid, folic acid, lipoic acid, or one of these as an insoluble carrier.
Since the bond between the species and the dye having a pK of 4.0 to 90 is fixed, it has excellent adsorption ability and adsorption selectivity for immunoglobulins or immunoglobulin complexes. That is, as shown in each example, the adsorbent of the present invention adsorbs less albumin and the same amount of globulin than other adsorbents.

従って本発明の吸着材は、血液中の病因物質である免疫
グロブリンおよび免疫複合体を高率かつ選択的に吸着除
去でき、生体免疫機能に関係した疾患の安全で確実な治
療、特に肝不全、自己免疫疾患、腎疾患、神経筋疾患、
血液疾患、内分泌及び代謝疾患、アレルギー、臓器移植
時の拒絶反応あるいは癌疾患の治療に有効である。まだ
、滅菌操作も容易かつ確実に実施することができる。さ
らに、本発明の吸着材は、生化学的代謝に関与している
ビタミンまたはその誘導体を結合しているので安全であ
る。また、本発明の吸着材は、装置に充填して治療器と
して用いられるにとどまらず免疫グロブリン、免疫複合
体の分離、精製用吸着材としても有効に利用できる。ま
た、本発明の吸着材は装置に充填し彦くても、湿疹等の
ときの浸出液中に含まれる分泌性免疫グロブリンの吸着
に、単独で用いることもできる。Therefore, the adsorbent of the present invention can adsorb and remove immunoglobulins and immune complexes, which are pathogenic substances in the blood, at a high rate and selectively, and can be used to safely and reliably treat diseases related to biological immune function, especially liver failure, autoimmune diseases, renal diseases, neuromuscular diseases,
It is effective in treating blood diseases, endocrine and metabolic diseases, allergies, rejection reactions during organ transplants, and cancer diseases. Still, sterilization operations can be performed easily and reliably. Furthermore, the adsorbent of the present invention is safe because it binds vitamins or derivatives thereof that are involved in biochemical metabolism. Furthermore, the adsorbent of the present invention can be used not only as a therapeutic device by filling an apparatus, but also as an adsorbent for separating and purifying immunoglobulins and immune complexes. Moreover, even if the adsorbent of the present invention is not filled into an apparatus, it can also be used alone for adsorbing secretory immunoglobulin contained in exudate from eczema and the like.

本発明の装置は、その内部に上記特徴を持つ吸着剤を収
容したもので、コン・ぐクトにまとめられ、簡便でかつ
安全に利用でき、吸着剤の特性を有効に利用できるもの
である。The device of the present invention houses an adsorbent having the above-mentioned characteristics therein, and can be assembled into a container, so it can be used easily and safely, and the characteristics of the adsorbent can be effectively utilized.

【図面の簡単な説明】[Brief explanation of the drawing]

第１図は、本発明の吸着装置の一例を示す断面図である
。 第２図は、本発明の吸着装置を用いて血液浄化治療を行
う場合の１例を示す概略図である。 ■・・容器、２・・・吸着材、３．３’・・フィルタ、
４・・入口、５・・・出口、６・・・血液導入口、７．
７’・ポンプ、８・・・血漿分離装置、９・・・血球混
合装置、１０・・血液導出口FIG. 1 is a sectional view showing an example of the adsorption device of the present invention. FIG. 2 is a schematic diagram showing an example of blood purification treatment using the adsorption device of the present invention. ■...Container, 2...Adsorbent, 3.3'...Filter,
4. Inlet, 5. Outlet, 6. Blood introduction port, 7.
7' Pump, 8 Plasma separation device, 9 Blood cell mixing device, 10 Blood outlet

Claims (9)

【特許請求の範囲】[Claims] （１）不溶性担体にチアミン、ニコチン酸、葉酸もしく
はリポ酸またはこれらの１種とｐＫ４．０〜９．０の色
素との結合物が固定されていることを特徴とする免疫グ
ロブリン吸着材。(1) An immunoglobulin adsorbent characterized in that thiamine, nicotinic acid, folic acid, lipoic acid, or a combination of one of these and a dye with a pK of 4.0 to 9.0 is immobilized on an insoluble carrier. （２）ｐＫ４．０〜９．０の色素がラクモイド、ブリリ
アントイエローまたはフェノールレッドである特許請求
の範囲第１項記載の免疫グロブリン吸着材。(2) The immunoglobulin adsorbent according to claim 1, wherein the dye having a pK of 4.0 to 9.0 is lacmoid, brilliant yellow, or phenol red. （３）不溶性担体に葉酸とラクモイド、ブリリアントイ
エローまたはフェノールレッドとの結合物が固定されて
いる特許請求の範囲第１項記載の免疫グロブリン吸着材
。(3) The immunoglobulin adsorbent according to claim 1, wherein a combination of folic acid and lacmoid, brilliant yellow, or phenol red is immobilized on an insoluble carrier. （４）不溶性担体の粒径が０．０５ｍｍ乃至５ｍｍの範
囲内にある特許請求の範囲第１項または第２項に記載の
免疫グロブリン吸着材。(4) The immunoglobulin adsorbent according to claim 1 or 2, wherein the particle size of the insoluble carrier is within the range of 0.05 mm to 5 mm. （５）不溶性担体の細孔直径が１００Å乃至５０００Å
の範囲内にある特許請求の範囲第４項記載の免疫グロブ
リン吸着材。(5) The pore diameter of the insoluble carrier is 100 Å to 5000 Å
The immunoglobulin adsorbent according to claim 4, which falls within the scope of claim 4. （６）不溶性担体が多孔性重合体粒子、多孔質ガラス、
シリカゲルまたは多孔性シリカ−アルミナである特許請
求の範囲第１項、第４項および第５項のいずれかの項に
記載の免疫グロブリン吸着材。(6) The insoluble carrier is porous polymer particles, porous glass,
The immunoglobulin adsorbent according to any one of claims 1, 4 and 5, which is silica gel or porous silica-alumina. （７）不溶性担体が球状シリカゲルである特許請求の範
囲第６項記載の免疫グロブリン吸着材。(7) The immunoglobulin adsorbent according to claim 6, wherein the insoluble carrier is spherical silica gel. （８）流体の導出入口を有する容器内に、不溶性担体に
チアミン、ニコチン酸、葉酸もしくはリポ酸またはこれ
らの１種とｐＫ４．０〜９．０の色素との結合物が固定
されている吸着材が収容されていることを特徴とする免
疫グロブリン吸着装置。(8) Adsorption in which thiamin, nicotinic acid, folic acid, lipoic acid, or a combination of one of these and a dye with a pK of 4.0 to 9.0 is immobilized on an insoluble carrier in a container having an inlet and outlet for fluid. An immunoglobulin adsorption device characterized by containing a material. （９）該装置は精製水で充填され、オートクレーブ滅菌
されている特許請求の範囲第８項記載の免疫グロブリン
吸着装置。(9) The immunoglobulin adsorption device according to claim 8, wherein the device is filled with purified water and sterilized in an autoclave.