JPS61236767A - 新規アンサマイシン抗生物質 - Google Patents

新規アンサマイシン抗生物質

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JPS61236767A
JPS61236767A JP61074383A JP7438386A JPS61236767A JP S61236767 A JPS61236767 A JP S61236767A JP 61074383 A JP61074383 A JP 61074383A JP 7438386 A JP7438386 A JP 7438386A JP S61236767 A JPS61236767 A JP S61236767A
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JP
Japan
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naphtomycin
culture
streptomyces
extracted
mycelium
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JP61074383A
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English (en)
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クリストフアー・ミルトン・マシユー・フランコ
ゴウカナパリ・チヤンドラ・セカーラ・レツデイ
トリプテイクマル・ムコーパデイーアイ
ビマル・ナレツシユ・ガングリ
ハンス−ヴオルフラム・フエールハーベル
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Hoechst AG
Original Assignee
Hoechst AG
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Publication date
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    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/10—Nitrogen as only ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D225/00—Heterocyclic compounds containing rings of more than seven members having one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D225/04—Heterocyclic compounds containing rings of more than seven members having one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D225/08—Heterocyclic compounds containing rings of more than seven members having one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings or ring systems condensed with two six-membered rings
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
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    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
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    • Y10S435/8215—Microorganisms
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はす７トマイシン（ｎａｐｈｔｈｏｍｙｃｉｎ　
）　Ｈと呼ばれる新規アンサマイシン（ａｎｓａｍｙｃ
ｉｎ　）　抗生物質、ならびにストレプトミセス（Ｓ　
ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）Ｙ　−８３４０３６９（ＤＳ
Ｍ　３２７Ｂ　）で表示される微生物からのその製法に
関する。
アンサマイシン抗生物質は周知のように種々のストレプ
トミセス、ノカルジア（Ｎ　ｏｃａｒｄｉａ）およびミ
クロモノスポラ（Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ　）　
１ｌｉＩがら生成される。ナフトマイシン（ｎａｐｈｔ
ｈｏｍｙｃｉｎｅ）科から得られるアンサマイシン抗生
物質については、それが種々のストレプトミセス種から
産生されることが報告されている。これらはまた文献中
にも記載されている。アンサマイシン抗生物質は癌治療
における腫瘍の制御において抗菌剤として医薬において
重要な役割を演じておシそしてまた植物病原性糸状菌の
制御に農業においても使用されうる。これまで臨床上結
核治療に使用されるす７アマイシン（ｒｉｆａｍｙｃｉ
ｎ）を含む種々のアンサマイシンが記載されている。
アンサマイシンはｒ　Ａｎｔｉｂｉｏｔ、　Ａｎｎ、　
Ｊ　１９５８〜６０．２６２　（１９６０）　；　ｒＰ
ｕｒｅ　Ａｐｐｌ、Ｃｈｅｍ、Ｊ　７．５５１　（１９
６３）、ｒ　Ｆｏｒｔｓｃｈｒ、　Ｃｈｅｍ、　Ｏｒｇ
、　Ｎａｔｕｒｓｔ、　Ｊ　３３．２３１〜３０７（１
９７６）　；　ｒ　Ｊ、　Ａｍｅｒ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓ
ｏｃ、　Ｊ　９２．７５９１　（１９７０）。
υ、６２７５　（１９７１）　ｉ　ｒ　Ｊ、　Ａｎｔｉ
ｂｉｏｔｉｃｓ　Ｊ　２３．４４２（１９７０）および
聾、８１０　（１９７１）　；　ｒＡｃｃｏｕｎｔｓ　
ｏｆＣｈｅｍｉｃａｌ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　Ｊ　５．５
７　（１９７２）　ｊ　ｒ　Ｈｅ１ｖ、　Ｃｈｉｍ。
Ａｃ１ａ　Ｊ　５６．２２７９〜２２８７　（１９７３
）　；　ｒ　Ｔｏｐｉｃｓ　ｉｎ　Ｃｕｒｒ−ｅｎｔ　
Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　Ｊ　７２．２１〜４９（１９７７
）およびｒＴｏｐｉｃｓｉｎ　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ　
Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　Ｊ　、第！巻＄９３〜２１７頁、
Ｓａｍｍｅａ　Ｐ、　Ｇ、編、ロンドン（１９７７）に
記載されている。
リファマイシンはｒ　Ｆａｒｍａｃｅ　ｇｄ、　Ｓｃｉ
、Ｊ　１４．１４６（１９５９）　；胆、２２８　（１
９６０）および腫、１６５（１９６１）ｉｒ　Ｆｒｏｇ
、　Ｉｎｄｕｓｔ、　Ｍｉ’ｃｒｏｂｉｏ１．　Ｊ　６
．２１　（１９，６７）　；　ｒ　Ａｒｚｎｅ−ｉｍｉ
ｔｔｅｌ−Ｆｏｒｓｃｈ、Ｊ　２１．１９０７　（１９
７１）および米国特許第２，９９９，０４８号、第３，
８８４．７６３号および第４．０１３，７８９号に記載
されている。
トリポマイシン（ｔｏｌｙｐｏｍｙｃｉｎｅ）はｒ　Ｊ
、　Ａｎｔｉｂｉｏ−ｔｉｃｓ　Ｊと、１１９５（１９
７５）および益、１１　（１９７２）および西ドイツ特
許第２．０１５，０７６号に記載されている。
／Ｍ　Ｏｆｆイシン（ｈａｌｏｍｙｃｉｎｅ　）はｒ　
ＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌＡｇｅｎｔｓ　ａｎｄ　Ｃ
ｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ　Ｊ　１９６７．４３５〜４４
１およびｒ　Ｊ、　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ　Ｊ　３０
．６２５　（１９７７）に記載されている。
ストレプトバリシン（５ｔｒｅｐｔｏｖａｒｉｃｉｎｅ
　）はｒＡｎｎ。
Ｒｅｖ、　Ｔｕｂｅｒｃ、　Ｐｕ１ｍ、　Ｄｉｍ、　Ｊ
　７５．５７６〜５８３、（１９５７）；ｒＪ、　Ａｎ
ｔｉｂｉｏｔｉｃｓ　Ｊ　２１．２０４　（１９６８）
および垣、７１〜７３　（１９７２）　；およびｒ　Ｊ
、　Ａｍｅｒ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、Ｊ　９５．６２
７５　（１９７１）に記載されている。
ナフトマイシン抗生物質にはナフトマイシンＡがｒ　Ａ
ｒｃｈ、　Ｍｉｋｒｏｂｉｏｌ、　Ｊ　６５．３０３〜
３１７　（１９６９）　；ｒ　Ｊ、　Ａｎｔｉｂｉｏｔ
ｉｃｓ　Ｊ　２８．８５〜８６（１９７５）および妥１
６７（１９７９）にそしてす７トマイシンＢおよびＣが
ｒ　Ｊ、　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ　Ｊ　３６．４８４
〜４９２（１９８３）に記載されている。
アクタマイシン（ａｃｔａｍｙｃｉｎ　）はｒ　Ｔｅｔ
ｒａｈｅｄ。
Ｌｅｔｔ、Ｊ２２．１１４５〜１１４８（１９８１）お
よび銭、１１４９〜１１５２（１９６１）に記載されて
いる。
さらにアンサマイシン抗生物質に関する要約はｒ　Ｉｎ
ｄｅｘ　ｏｆ　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ　ｆｒｏｍ　Ａ
ｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ　Ｊ、Ｈａｍａｏ　Ｕｍｅｚ
ａｖｒａ　（主編集者）第１巻、ｍ　２１８．５６４〜
５６６および６２４頁、Ｕｎｉｖ、　Ｐａｒｋ　Ｐｒｅ
ｓｓ出版、米国ペンシルベニアステートカレッジ、　（
１９６７）および第■巻第４１４，４４６〜４５０，７
３５．８９７〜９０５．９８４〜９８５，９５２〜９５
４，９９５〜９９６および１１１６頁、Ｕｎｉｖ、　Ｐ
ａｒｋ　Ｐｒｅｓｓ出版、米１ボルチモア、（１９７８
）に見出される。
さらにアンサマイシンに対する見出しはｒｃＲ８Ｈａｎ
ｄｂｏｏｋ　ｏｆ　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ　Ｃｏｍｐｏ
ｕｎｄｓ　Ｊ１第■巻−第４５１〜４９１頁、ミクロサ
イクリックラクトン（ラクタム）抗生物質、Ｊａｍｅｓ
　Ｂｅｒｄｙ著、ＣＲＣＰｒｅｓｓ出版、Ｉｎｃ、　Ｂ
ｏｃａ　Ｒａｔｅｎ１米国フロリダ州、（１９８０）に
見られる。
、Ｌ　Ｗ、　ＣｏｒｃｅｒａｎおよびＦｒｅｄ　Ｅ、　
Ｈａｈｎ氏編の教本ｒ　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ　Ｊ第
■巻、　Ｓｐｒｉｎｇｅｒ出版、米国一ニーヨーク（１
９７５年）にはＷ、　Ｗｅｈｒｌｉおよびに８　ｔａｅ
ｈｌｉｎ氏による「す７オマイシンおよび他のアンサマ
イシン類」に関する概説が第２５２〜２６８頁にあり、
一方Ｊ、　Ｗ、　Ｃｏｒｃｅｒａｎ氏編第■巻、８ｐｒ
ｉｎｇｅｒ出版、米国一ニーヨーク（１９８１年）には
Ｇ、　Ｌａｎｃｉｎｉ氏他による「アンサマイシンの生
合成」に関する概説がｓ１２〜４ｏ頁に見られる。
本発明はす７トマイシンＨと呼ばれる新規アンサマイシ
ン抗生物質、ならびにストレプトミセスＹ−８３４０３
６９（ＤＳＭ　３２７８）で表示される微生物からのそ
の製法に関する。
本発明による化合物には下記構造式■が付与されうる。
ナフトマイシンＨ産生用の微生物はストレプトミセス種
としてアクチノミセタレス（Ａｃｔｉｎｏ−ｍｙｃｅｔ
ａｌｅｓ　）目、およびストレプトミセス科およびスト
レプトミセス属から同定された。本発明においては微生
物はストレプトミセスエヒナッス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙ
ｃｅｓ　ｅｃｈｉｎａｔｕｓ）　Ｙ　−８５４０３６９
として記載される。これは１９８５年３月２２日にドイ
ツ微生物寄託機関（Ｄｅｕｔｓｃｈｅｎ　Ｓａｍｍｌｕ
ｎｇ　ｖｏｎ　Ｍｉｋｒ。
ｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ　）に受託番号３２７８として寄
託されている。
ナフトマイシンＨと呼ばれる新規アンサマイシン抗生物
質の調製はストレプトミセスＹ−８３４０３６９（ＤＳ
Ｍ　３２７８　）を炭素源および音素源ならびにミネラ
ル栄養塩および痕跡の元素を含有する培養基中好気性条
件下に発酵させることによシ培養し、そして形成された
抗生物質を以下に記載されるように知られた方法で培養
ブロスから単離および精製することからなる。
炭素源としてはグルコース、スクロース、澱粉、グリセ
リン、デキストリン、フルクトース、糖蜜、オートミー
ル、マルトース、ラクトースまたはガラクトース、好ま
しくはグルコース、澱粉、デキストリンおよびマンニト
ールが適当である。窒素源としては大豆粉、酵母粉、酵
母抽出物、内袖出物、麦芽抽出物、コーンステイープリ
カー、はプトン、カゼイン、綿実油、または無機物質例
えばアンモニウム塩または硝酸塩（例えば硫酸アンモニ
ウム、硝酸ナトリウム、塩化アンモニウムまたは硝酸カ
リウム）が使用されうる。麦芽抽出物、酵母抽出物、大
豆粉、はプトンおよびコーンステイープリカーが用いら
れるのが好ましい。無機栄養塩としては塩化ナトリウム
、硫酸マグネシウム、塩化カリウム、燐酸水素カリウム
および燐酸二水素カリウム、塩化カルシウム、炭酸カル
シウム、燐酸水素アンモニウム、燐酸水素ナトリウム、
および燐酸二水素ナトリウム、燐酸マグネシウムまたは
燐酸カルシウムが適当である。痕跡の元素としては鉄塩
、マンガン塩、銅塩、亜鉛塩またはコバルト塩あるいは
他の１金践の塩が使用されうる。
ストレプトミセスＹ　−８３４０３６９の培養は場合に
よりシリコーンまたはデスモフェン（Ｄｅｓｍｏｐｈｅ
ｎ■）のような泡止め剤の一種類またはそれ以上の存在
下に実施されうる。
ストレプトミセスＹ−８３４０３６９の培養は２４〜４
０℃で１ｌｌＨ６，０〜ａＯで、好ましくは好気性条件
下に２７℃およびｐＨ６，８で行われうる。発酵は本発
明による化合物の収量が最高である４０〜６６時間後に
中止される。発酵は深部培養が好ましくあシうる。泡止
め剤は培養ブロス中に濃度０．０２５１で含有されるよ
うに発酵開始時に添加されうる。
発酵の進展および本発明のナフトマイシンＨの形成はス
タフィロコッカス・オーレウス（８ｔａｐｈｙｌｏｃｏ
ｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ）　２０９　Ｆに対する培養プ
ロ′スの抗菌活性を測定することによシ追跡されうる。
ナフトマイシンＨｉｎｔ得られる培養ブロス中の菌糸体
ならびに培養Ｆ液の両方の中に存在する。
ナフトマイシンＨは知られた方法で培養ブロスから単離
および精製される。従ってナフトマイシンＨは培養Ｆ液
からＦ液の…を６．５〜７．５に調整したのち酢酸エチ
ル、クロロホルムまたはブタノールのような水不溶性溶
媒を用いて抽出されうる。溶媒としては酢酸エチルが、
そしてｐＨ７，０が好ましい。菌糸体からは本発明によ
る化合物は濾過または遠心分離によシ得られた菌糸体を
酢酸エチル、クロロホルム、メタノール、エタノール、
アセトン、ブタノールまたはメチルエチルケトンのよう
な溶媒を用いて、または塩酸溶液または酢酸溶液のよう
な酸溶液を用いて抽出される。好ましい溶媒はアセトン
である。
抽出後溶媒を例えば真空下に蒸発させることによシ除去
し、水層をｐ）１６．５〜Ｚ５に調整しそして酢酸エチ
ルのような溶媒で抽出する。好ましくは−は７．０に調
整される。培養ヂ液および菌糸体の溶媒抽出液を合し、
蒸発乾固させそして例えばカラムクロマトグラフィーに
よシ精製する。
ナフトマイシンＨの単離には培養ブロスは予め菌糸体を
分離することなく菌糸体に際して用いられた溶媒抽出に
そのままかけることもできる。
ナフトマイシンＨを培養ブロスから取得するもう一つの
方法は吸着に基づく。その場合液体物質、例えば培養戸
液または本発明による化合物を含有する溶媒抽出液全適
当な吸着剤例えば活性炭、ダイアイオン（Ｄｉａｉｏｎ
　）■ＨＰ−２０、ＸＡＤ■、アルミナ、シリカゲルま
たはセファデックスＬＨ−２０を用いてカラムクロマト
グラフィーまたは液体クロマトグラフィー処理する。本
発明による化合物は吸着剤からメタノールまたはアセト
ンのような適当な襲動相を用いて溶離され、溶出液を蒸
発乾固しそして例えばカラムクロマトグラフィーによシ
精製する。場合によシ精製はまた向流分配、調製用薄層
クロマトグラフィーおよび結晶化によっても行われうる
。それ以上の精製は高圧液体クロマトグラフィーによシ
行われうる。
本発明を以下の実施例により詳細に説明する。
実施例　１ ナフトマイシンＨを発酵により調製するためのストレプ
トミセスＹ　−８３４０３６９（ＤＳＭ　、３２７８　
）の培養 ストレプトミセスＹ　−８３４０３６９（ＤＡＭ　５２
７Ｂ　）を下記組成を有する酵母−麦芽−寒天培養基に
加えた。
麦芽抽出物　　　　　−１ｃｌ″Ｏ１ 酵母抽出物　　　　　−４，０，９ グルコース　　　　　−４，０ｙ　　　　　　　　　　
島寒天　　　　　　　　−１５，１ 蒸留水　　　　　　　−１を 声　　　　　　　　　−７，０ 培地を試験管に分配しそして１２１℃で２０分間滅菌し
た。次に試験管を寒天斜面管を調製するために斜位にて
冷却し、土壌から単離されたストレプトミセスＹ　−８
５４０３６９培養物を接種しそして良好な生育および良
好な胞子形成が確認されるまで２８℃で１０〜１５日間
培養した。１０〇−ずつの接種用培地を有する５個の５
００ｄ−三角フラスコまたは接種用培地１ｔを有する１
個の５を吸引ビンに次に斜面管からの蒸留水中の胞子懸
濁液を接種した。
接種用培地の組成 グルコース　　　　　　−１５，０１１大豆粉　　　　
　　　−１５，０，９ コーンステイープリカー　−５，１ ＣａＣＯ５−２，０１１ ＮａＣｔ　　　　　　　　　　　　　　　−５，０＃蒸
留水　　　　　　　−１ｔ ｍ　　　　　　　　　　−７，０ 次に各１００−ずつの接種用培地を５００−の三角フラ
スコに、または接種用培地１ｔを５ｔの吸引ビンに分配
しそして１２１℃で２０分間滅菌した。フラスコまたは
ビンを冷却し、胞子懸濁液を接種しそして振巾３．７５
ｃＩＩＬの軌道振盪装置中２４　Ｏｒｐｍで７２時間２
８℃で振盪した。生育した培養物は第２段階の接種培養
物調製のための１０容ｉチ接種用培地１０ｔを含有する
１５ｔのガラス発酵器用接撫物として用いた。発＃は２
７℃（±１℃）で１６０〜１８０　ｒｐｍで攪拌しなが
らＱ、６〜α８　ＶＶＭの通気速度で２５時間行われた
。その際得られる。良好に生育した第２段層液種培養物
が生産培地用の接種物として用いられた。
生産用培地の組成 澱粉　　　　　　　　−１αｏ、ｙ グルコース　　　　　−１（ＬＯＰ 麦芽抽出物　　　　　−７，５ＩＩ Ｒプトン　　　　　　−五ｏｌＩ ＮａＣｔ−１，０１ ＭｇＳＯ４・７Ｈ２０−１，０１ ＣｕＳＯ４・５　ｆ（２０−７，ＯＷ ＦｅＳＯ４Ｈ７Ｈ２Ｏ−１，０”Ｇ’ ＭｎＣｌ２’　４Ｈ２０−ａＯ１ｎ９、ＺｎＳＯ４・７
　Ｈ２Ｏ−２，０”ｆｉ’蒸留水　　　　　　　−１を 聞　　　　　　　　　−７，０ 発酵器の反応混合物に［ＬＯ２５％のデスモアエンを加
えた。生産用培地１００ｔを１５ｏｔの発酵器中に充填
した。この培地を間接的および直接的蒸気によシ１２１
℃に２８分間滅菌した。この発酵器を冷却しそして第２
段層液種用培養物（ＩＯＶ／Ｖ％）を接種した。発酵は
１２０〜１４０　ｒｐｍで攪拌しながらａ６〜αｆ３　
ＶＶＭの通気速度で２７℃（±０．５℃）′Ｔ：、６６
時間行われた。６６時間後に発酵を中止すると培養ブロ
スの一値は６．４４そして沈積した細胞量は１８＋ｄ／
１００−であった。
実施例　２ ナフトマイシンＨを発酵により調製するためのストレプ
トミセスＹ　−８５４０５６９（ＤＳＭ　３２７Ｂ　）
の培養下記のことが相違する以外は実施例１と同様にし
た。
寒天培地の組成 オートミール　　　　−２０，０，９ 奄 寒天　　　　　　　　−１５，０１１ ＦｅＳ０４・７Ｈ２０−０，１１１＆９Ｚｎ８０４−７
Ｈ２０−０，１１１９ ＭｎＣＬ２　・４　Ｈ２Ｏ−０，１”？蒸留水　　　　
　　　−１を ｍ−１２ 生産用培地の組成 澱粉　　　　　　　　　−１αＯｇ グルコース　　　　　　−１αＯ１ 大豆粉　　　　　　　　−１５，０，９に２ＨＰＯ４−
１，ＯＪ Ｍｇ８０４・７Ｈ２０−１，０ＪＦ ＮａＣｔ−！Ｌ０１ Ｃｕ８０４　’　５　Ｈ２Ｏ−７，ｏ卿Ｆｅ３Ｏ４”　
７　Ｈ２Ｏ−１，０１１ｆＭｎＣ２２・４　Ｈ２Ｏ−ａ
Ｏ１１ｇ Ｚｎ８０４’７Ｈ２０−２，０１ＩＰ ′蒸留水　　　　　　　　−１ｔ ｐＨ−７，０ 発酵器を収穫する際には培養プロスの…値は６．３５で
めυそして沈積した細胞量は２５ｍ／１００−であった
。
実施例　３ ナフトマイシンＨを発酵によシ調製するためのストレプ
トミセスＹ　−８３４０３６９（ＤＳＭ　３２７８）の
培養下記のことが相違する以外は実施例１と同様にした
。
培養基の組成 澱粉　　　　　　　　　−３０，［’ スクロース　　　　　　−１αＯｇ グルコース　　　　　　−１０，Ｉ［ 大豆ペプトン　　　　　−１５，０，９コーンステイー
プリカー　　−１α０ＩＫ２ＨＰＯ４−３，Ｉ ＮａＣｔ−１，０１ ＣａＣＯ５−ＡＯｊ’ ＣｕＳＯ４’　５　ｆ’！２０　　　　　　　−　７．
０４Ｆｅ８０４　・７　Ｈ２Ｏ−１，０”ｌｉ’ＭｎＣ
ｔ２・４　Ｈ２Ｏ−ａ　Ｏ”Ｇ’Ｚｎ８０４　・７　Ｈ
２Ｏ−２，０！ 、蒸留水　　　　　　　　　−１を 一１２ 生産用培地の組成 デキストリン　　　　　　−２（ＬＯ１１大豆粉　　　
　　　　　−１αＯＩ 酵母抽出物　　　　　　−２，０Ｉ ＦｅＳＯ４Ｈ７Ｈ２Ｏ−０，１１ 蒸留水　　　　　　　　−１ｔ …　　　　　　　　　　−ＺＯ 発酵器を収穫する際には培養プロスの…値は６．７３で
あシそして沈積した細胞量は２４ｍ／１００−であった
。
実施例　４ ナフトマイシンＨを発酵によシ調製するためのストレプ
トミセスＹ　−８３４０３６９（ＤＳＭ　３２７８　）
の培養下記のことが相違する以外は実施例１と同様にし
た。
接種用培地の組成 グルコース　　　　　　−３０，ＯＩＩ大豆粉　　　　
　　　　−３０，１ コーンステイープリカー　−１０，１’ＣａＣＯ４−５
，ＯＪｉ’ 蒸留水　　　　　　　−１を −ＺＯ 生産用培地の組成 マンニトール　　　　　−２０、ＯＩ 大豆粉　　　　　　　　−２０，０！ｉ蒸留水　　　　
　　　　−１ｔ ｐＨ−７，２ ５４時間後に発酵器を収穫する際培養プロスの一値は＆
４６であシそして沈積した細胞量は１８ｗｄ／１００−
であった。
実施例　５ す７トマイシンＨを発酵によシ調製するためのストレプ
トミセスＹ　−８３４０３６９（ＤＳＭ　３２７８　）
の培養下記のことが相違する以外は実施例１と同様にし
た。
接種用培地の組成 大豆粉　　　　　　　　−１５，０，９澱粉　　　　　
　　　　−１５，［［’グルコース　　　　　　−ｓ　
ｏ、　ｏ　ｌｌＣａＣＯ３−１０，０１ ＣｏＣｔ２・６　Ｈ２Ｏ−５，０１１ 蒸留水　　　　　　　　−１を −ＺＯ 生産用培地の組成 溶性澱粉　　　　　　　−２０，１ グルコース　　　　　　−１５、ＯＩｉ大豆はプトン　
　　　　−５０ｇ ペプトン　　　　　　　　−五ｏ、ｐ ＣａＣＯ３−２，０１１ コーンステイープリカー　　−２，１Ｎ’ＮａＣ６−’
２．０１１ （ＮＨ４）２Ｓｏ４　　　　　　　　−　α５ＩＣｕ８
０４−５Ｈ２０−７，１ Ｆｅ８０４−７’Ｈ２０−１，０＃ ＭｎＣｔ２・４　Ｈ２Ｏ−ａ　Ｏｌ ＺｎＳＯ４’　７　Ｈ２Ｏ−２，０＆ 蒸留水　　　　　　　　−１ｔ Ｐ’　　　　　　　　　　　−６，７ ４８時間後に発酵器を収穫する際には一値は６．７８で
あシそして沈積した細胞量は１８ｇＬｔ／１００−であ
った。
実施例　６ ナフトマイシンＨの単離、精製および同定的９０１の発
酵プロスを遠心分離して菌糸体と培養Ｆ液を分離した。
得られる培養ろ液（９０ｔ）を２ＮＮａＯＨを用いて−
７，ＯＫ調整しそして３０ｔの酢酸エチルを用いて２回
抽出した。水層を捨てそして合一した酢酸エチル抽出液
を真空下に蒸発乾固させた。得られた粗生成物は約５５
、Ｂｌｌであった。得られた菌糸体（３，９，９）を各
１５ｔずつのアセトンで３回抽出した。合一した抽出液
を真空下に蒸発させてアセトンを除去した。得られた水
鳥を２ＮＮａＯＨを用いて…ＺＯに調整しそして酢酸エ
チル５ｔを用いて２回抽出した。水層を捨てそして合一
した抽出液を真空下に蒸発乾固させた。約１６．１の粗
製抽出物が得られた。
粗製抽出物３６．９を３．５Ｘ４９０のシリカゲルカラ
ムに入れそしてクロロホルムおよびクロロホルム：メタ
ノール混合物（ここでメタノール濃度は次第に５チまで
上昇、最終的な組成は９５：５）を用いて連続して溶離
した。かくして１４．６　　　　４１の半純粋な化合物
が得られ、これを６Ｘ３１（１！ＩＩＥ寸法のシリカゲ
ルカラム（メツシュ寸法２００〜３００）に適用しそし
て加圧下にはじめベンゼンそして次にベンゼン／酢酸エ
チル混合物（酢酸エチル濃度は次第に６０％まで上昇さ
せる。最終的表組成４：６）を用いて溶離する。その際
７ラクシヨンＡが約０．１９ＩＩそしてフラクションＢ
が約１．２１の量で得られた。さらに精製するためにフ
ラクションＡを１．４Ｘ８０ｃＩＩＬのセファデックス
ＬＨ−２０のカラムに適用しそしてメタノールで溶離す
ると、１４２Ｆｎ９の化合物が得られ、これをクロロホ
ルム／メタノール（９５：５）混合物中で調製用薄層ク
ロマトグラフィー（０，５１１１厚さのシリカゲルプレ
ート）で精製した。その際９６吋の純粋な化合物が得ら
れ、これは知られた抗生物質ナフトマイシンＡとして同
定された。次に薄層クロマトグラフィーカラムとしての
６×３０ｃＰＩＬ−シリカゲル−Ｈカラム（結合剤なし
）ＫフラクションＢを充填しそしてクロロホルムとメタ
ノールの９６二４混合物を用いて溶離した。
その際半純粋な物質６５０■が得られ、これをクロロホ
ルムおよびメタノール（９５：５）からなる混合物中調
製用薄層クロマトグラフィー（卑さ１０のシリカゲルプ
レート）によシ精製しそして次に石油エーテル／ベンゼ
ン／酢酸エチル混合物から再結晶すると、ナフトマイシ
ンＨが１２０〜の髪で得られた。
ナフトマイシンＨは化学分析および分光法により同定さ
れた。
ＵＶ最大吸収の測定においてはナフトマイシンＨは１０
Ｉｌｉ９／ｌの濃度で使用された。吸収スペクトルは２
００〜８００ｎｍの領域で測定された。
１Ｈおよび１５Ｃ核磁気共鳴スはクトルの測定はＨＸ　
−２７０Ｂｒｕｋｅｒ−Ｆｏｕｒｉｅｒ−変換核磁気共
鳴分光計を用いｃＤｃｔ５中２７０　ＭＨｚで実施され
た。
ＸＲ−スペクトルの測定はヌジョール中ＰｅｒｋｉｎＥ
１ｍｅｒ　ＩＲ−分光計Ｐ、Ｅ、６８３．およびＫＢｒ
中ＰｅｒｋｉｎＥ１ｍｅｒ　ＩＲ−分光計Ｐ、Ｅ、５２
１を用いて行われた。
マススはクトルはＭＳ−９０２８，ＡＥＩ質量分光計を
用いＦＡＢ　（Ｆａｓｔ−Ａｔｏｍ衝撃）イオン源を使
用して測定された。
ナフトマイシンＨの物理化学的性質 外観：淡黄色結晶性粉末 化学式：　Ｃ，、ｆ（４４ＣｔＮＯ。
分子量：　７０５　（ＦＡＢ−ＭＳ　：Ｍ−１−Ｈ”−
７０６）〔αＩＤ　：　＋３０２．９３°（ｃｌ、７、
ｃｍｃｔ、　）融点：１５０℃（分解） ＵＶ−スはクトル： λｍａｘ−（ａ）メタノール中：　２２８，５０２ｎｍ
（ｂ）ａｌ　Ｎ　ＮａＯＨ−メタノール中：２１６．２
３６（ｓｃｈ）、２９８．４２８ｎｍ（ｃ）　０．Ｉ　
Ｎ　ＮａＯＨ中：２４０．２９８．４２５ｎｍＩ’Ｒ−
スはクトル： （ａｌ　ＫＢｒ中、Ｃ−Ｏ領域：　１６６７．１６２６
．１６００および１５７７ｃ！ＩＬ−’ （ｂ）ヌジョール中（第１図参照） 隅（ト）−スはクトル： トリエン系に桐しないオレフィン性プロトンのシグナル
は以下のように割当てられる。５．４７および５．６３
　ｐｐｍの２個の二重線はトランスジ置換二重結合に属
する（　Ｊ、６１ｙ　−１５Ｈｚ）。５．９３ｐｐｍで
の二重線はメチル基との「長い範囲」カップリング（２
，Ｏ２ｐｐｍ、　Ｊ〜１．５Ｈｚ）およびメチンプロト
ンとのビシナルカップリング（２，７ｐｐｍ、Ｊ−１０
Ｈ２）を示しておυそしてそれゆえＨＣ（２１）が割当
てられる。Ｈｃ（１３）のシグナルは６．７２ｐｐｍで
の巾広三重線として現われる。ナフトマイシンＨにおけ
るトリエン系のカップリング定数（Ｊ２．３−１１．５
、Ｊ　＝１１、Ｊ６１，１５）はＣ（２）　−Ｃ（３）
およ４．５ びＣ（４）−Ｃ（５）が２幾何異性を有し、一方もう一
個の二重結合Ｃ（６）　−Ｃ（７）がＥ幾何異性を有す
ることを示している（式■のナフトマイシンＨの＃ｌ造
参照）。
山　　　　　　　　　　−一　　−４ロー以下の９５１
表ではす７トマイシンＨ中における３９個の炭素原子の
存在が証明される。
第１表 ＣＤＣ４５中におけるす７トマイシンＨの１３０　ＮＭ
Ｒ（６７，９ＭＨｚ　）、ｐｐｍＣ−０領域二ケトン−
〇一原子　２０５．５ｉ　　２０１．６キ／７−Ｃ−原
子　１７ａ６；　　１７ａｌアミド−Ｃ−原子　１６５
．０ Ｂ　ｐ　２−領域：　１６１．２；　　１４７．２；　
　Ｃ４２，５ｉ　　１４１．６ｉ１３ａＯ；　　１３７
．６；　　１３６．８；　１３６．７ｉ１３５．９ｉ　
　１３５．５；　　１３４．５；　　１３ｉ８；１３３
．３；　　１３２．５ｉ　　１３１．２ｉ　　１２６．
５；１２３．４；　　１２１．４；　　１２１．Ｏｉ　
　１１９．９ｓｐ５−領域；　（ＣＨ−０、ＣＨ−１Ｃ
Ｈ２−１ＣＨ３−）ニア６．５；　７３．３ｉ　　７１
．８ｉ　　４５．１　４１．７；４０．６ｉ　　３６．
４ｉ　　３五７’；　　１７．４ｉ　　１６．４；１６
．１　１２．４ｉ　　１１．１　１α８溶解度 メタノール、アセトン、酢酸エチルおよびクロロホルム
中に溶解性でありそしてヘキサン、石油エーテルおよび
水性アルカリ中に少し溶解する。ｔｉｅ　（薄層クロマ
トグラフィー）データで。
はナフトマイシンＨは以下の第１表に示されるＲｆ−値
を有する（種々の溶媒系を使用してシリカゲル層で他の
ナフトマイシンＨと比較して測定）・　　　　　第１表 アルミニウム箱上０．２皿厚さのシリカゲル６０Ｆ２５
４（メルク社製）層を用いるｔ１ｃデータＲｆ−値 溶 ＥｔｏＡｏｏ、６４　　　Ｑ、５３　０．４６ＥｔＯＡ
ｃ：ＭｅＯＨ（９８：２）　　　　　　　Ｑ、４８　　
　Ｑ、４４　０．４１ベンゼン：ＥｔＯＡｃ（２二８）
　　　　　　　　０．５６　　０．３８　　０．２８Ｅ
ｔＯＡｃ　：酢酸（２００：１）　　　　　　０．５７
　　　α４７　α４１Ｔ （ＥｔＯＡＣは酢酸エチルをそしてＭｅａｎはメタノー
ルを示す）上記の結果をマス７はクトルフラグメント化
パターンと関連させると、ナフトマイシンＨは式■で示
される構造を有する新規な抗生活性を有する化合物であ
ることが明白である。
ナフトマイシンＨの抗菌活性をナフトマイシンＡおよび
Ｂのそれと比較して測定した。その結果は下記ｍ■表に
おいて、試験細菌を含有する寒天上の６ｕＰ紙ディスク
上における１ｍｇ／ｌの溶液の形態のナフトマイシン化
合物の存在によシ生成された抑制ゾーンのゾーン直径（
１ｍ）として示される。
第■表 スタフィロコッカス・オーレウス２０９Ｐ　　１７　　
　１４　　　　１５（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　
ａｕｒｅｕｓ）ストレプトコッカス・７エカリス　　　
　　１２　　　　９　　　　１０（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏ
ｃｃｕｓ　　ｆａｅｃａＬｉｓ）サルシナ・ルテア　　
　　　　　　　　　　１８　　　１２　　　　１６（Ｓ
ａｒｃｉｎａ　１ｕｔｅａ） バチルス・サブチリス　　　　　　　　　　　１５　　
　　９　　　　１２（＆ｃｉｌｌｕｓ　５ｕｂｔｉｌｉ
ｓ）アルカリゲネス・フェカリス　　　　　　　１２　
　　　　　　　１０（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ　　ｆａ
ｅｃａｌｉｓ）（肛？にλ７″ｉ′家は、　　　　　１
８　１１　　１６ベニシリウム・イタリクス　　　　　
　　　１６　　　１４Ｐ　　　　１５（Ｐｅｎｉｃｉｌ
ｌｉｕｍ　１ｔａｌｉｃｕｓ）アスはルギルス・ニガー
　　　　　　　　１７／２１　　１３　　１４／１８（
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｎｉｇｅｒ）サツカロミセス
・セレビシアエ　　　　　　　１０　　　　　　　　　
１０（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉ
ａｅ）本発明による化合物を抗生物質として使用するに
は薬量単位１２．５〜５０　＃／ｋｆ　（経口）および
以下の一日量が過当である。
第１日（２回）２５〜１００■／ゆ（経口）第２日（１
回）１２．５〜５０〜／ｋｌ？（経口）糸状菌感染に対
し局所使用するには例えば１０〜２０ＩＩＭｉ／−を含
有する軟膏または溶液が用いられる。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １）式 I ▲数式、化学式、表等があります▼ I を有するナフトマイシンＨ。 ２）微生物ストレプトミセスＤＳＭ３２７８を慣用の方
    法で好気性条件下に培養基の存在下に発酵させそして形
    成された化合物を培養液および菌糸体から有機溶媒を用
    いて抽出および次にクロマトグラフィー法により慣用の
    方法で単離することからなる前記特許請求の範囲第１項
    記載のナフトマイシンＨの製法。 ３）微生物ストレプトミセスＤＳＭ３２７８を炭素源お
    よび窒素源ならびに無機栄養塩および場合により痕跡の
    元素を含有する培養基中２４〜４０℃およびｐＨ６．０
    〜８．０で発酵させ、形成された化合物を培養ろ液およ
    び菌糸体からエステル、低級アルカノール、ケトンまた
    はクロロホルムを用いて抽出しそしてこの抽出液から蒸
    発および続くクロマトグラフィー精製によりナフトマイ
    シンＨを単離することからなる前記特許請求の範囲第２
    項記載の方法。 ４）前記特許請求の範囲第１項記載の化合物を含有する
    ことからなる医薬。 ５）抗生性質を有する医薬の調製への前記特許請求の範
    囲第１項記載の化合物の使用。
JP61074383A 1985-04-03 1986-04-02 新規アンサマイシン抗生物質 Pending JPS61236767A (ja)

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