JPS61210051A - 光学活性ビシクロ〔２．２．１〕化合物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用〕 本発明は、新規な光学活性ビシクロ〔２．２．１〕化合
物及びその製造方法に関するものである。

〔従来技術〕

従来、２−エンド−ヒドロキシ−１２−エキソ−ヒドロ
キシ−又は２−オキソ−ビシクロ［２，２，１］へブタ
ン−７−アンチ−カルボン酸及びそのメチルエステルは
知られており、ジャスミン香油の香気るため、天然型の
絶対立体構造を有する光学活性のジャスモン酸メチルの
製造原料として用いることはできなかった。天然の左旋
性ジャスモン酸メチルを得るためには、前記ビシクロ〔
２．２．１〕化合物において、その１位の絶対配位が艮
であるエナンチオマーに富む光学活性体を原料として用
いることが必要であるが、このような化合物は従来知ら
れていない。

また、従来、有用な医薬品であるプロスタグランジン類
を合成するためのキーポイントとなる中間体である２−
オキソ−７−ベンジルオキシメチル−ビシクロ〔２．２
．１〕ヘプト−５−エンは知られていあるエナンチオマ
ーに富む光学活性体でなければならない、このような光
学活性体の製造方法としては、ラセミ分割を利用した方
法（ｒＨｕｎｇ、Ｔｅｌｊｅｇ８００６Ｊ）と不斉反応
を利用した方法（ｒＪ、Ａｍ、ｃｈｅ＋＊。

Ｓｏｃ、　、９７，６９０８（１９７５）Ｊ）が知られ
ているが、前者の場合、その収率は低く、最高でも５０
％であり、一方、後者の場合では、理論的には１００％
の収率が期待できるものの、試薬として高価なテルペン
誘導体を必要とし、しかも不斉部分構造を導入するため
に多数の反応段階を要することから、工業的な方法と言
うことができない。

一方、従来、２−オキソ−ビシクロ〔２．２．１〕ヘプ
ト−５−エン−７−カルボン酸は知られており、このも
のを用いると、その７位のカルボン酸基をベンジルオキ
シメチル基に変えることにより、前記プロスタグランジ
ン類中間体を得ることができるが、従来知られている２
−オキソ−ビシクロ［２，２゜１］ヘプト−５−エン−
７−カルボン酸はうセミ体であって、このものを用いて
も、光学活性のものを得ることはできない。

あり（Ｈｅｌｖ、Ｃｈｉｍ、Ａｃｔａ、、６１１ｉ、１
９９１（１９８３）　；　’ｒａｔｒａｈｅｄｒｏｎ、
３７，５ｕｐｐ１．Ｎｏ１，４１１（１９８１）；　Ｊ
、Ａｍ、Ｃｈｅｗ、Ｓｏｃ、。

９５．７５２２（１９７３））、その１位の絶対配置が
Ｒであるエナンチオマーに富むものは知られておらず、
また当然のことながら、その製造方法についても知られ
ていない、従来技術の適用という点からは。

これらのラセミ体について、■ジアステレオメリックな
塩や複合体の形としてから分別結晶法にょす光学分割を
行う、■ジアステレオメリックな誘導体としてからクロ
マトグラフィーによって光学分割する。■酵素や微生物
によって対掌体の片方を選択的に変化させるなどの方法
を行って光学活性体を得ることはできる。しかしながら
、これらのクロ〔２．２．１〕へブタン−若しくはヘプ
ト−５−エン−７−カルボン酸又はそのエステルを容易
に合成゛し得る方法の開発が要望されている。

〔問題点を解決するための手段〕

前記のような光学活性のビシクロ〔２．２．１〕化合物
を得るには、原料はプロキラルな構造でなければならず
、また用いる試薬や触媒は不斉な分子構造であることが
条件となる１本発明者らは、このような点から、原料と
して、ビシクロ〔２．２．１〕へブタン−若しくはヘプ
ト−５−エン−７−カルボン酸又はそのメチルエステル
を用いると共に、その２位の炭素を微生物の作用により
立体選択的に水酸化し、あるいはさらに酸化すれば目的
の２位に水酸基又はオキソ基を有する光学活性のビシク
ロ〔２．２．１〕へブタン−若しくはヘプト−５−エン
−７−カルボン酸又はそのメチルエステルが製造可能で
ある点に着目し、その目的に適合する微生物の探索を鋭
意重ねた結果、ペニシリウム属、アスペルギルス属、ア
ブシディア属、ビューベリア属、カニングハメラ属、ム
コール属若しくはケトミラ本発明を実施するにあたって
の要素は、原料、微生物、菌体取得のための培養条件及
びその菌体を用いて行う原料の変換反応条件の四者であ
るが。

次に、これらについて詳述する。

〔原　　料〕

本発明で用いる原料は、ビシクロ〔２．２．１〕へブタ
ン−７−カルボン酸、ビシクロ〔２．２．１〕ヘプト−
５−二ンー７−シンーカルボン酸及びそれらのメチルエ
ステルの中から選ばれるものであり１次の式これらのビ
シクロ〔２．２．１〕化合物は公知の方法によって合成
することができる０例えば、ビシクロ〔２．２．１〕へ
ブタン−７−カルボン酸は、マルチヤント（Ｍａｒｃｈ
ａｎｄ）等の方法（Ｃｈｅｍ、Ｉｎｄ、　、２００（１
９６９））や、クワルト（Ｋ％Ｉａｒｔ）等の方法（Ｊ
、Ａｍ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、　。

７６．４０７２（１９５４））で得られる７−ブロモノ
ルボルナンを原料として、グリニヤール反応や、リチウ
ムによるメタル化（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ、３７．１
８７（１９８１））を経由する方法でカルボキシル化す
ることにより容易に合成される。ビシクロ〔２．２．１
〕ヘプト−５−二ンー７−シンーカルボン酸は、前記ク
ヮルト等の方法で得られる７−ブロモノルボルネンを原
料とし、これを前記のようにしてカルボキシル化し、副
生するアンチ−カルボン酸をコーチ（にｏｃｈｉ）等の
報告（Ｊ、Ａｍ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、　、９５．１５１
６（１９７３））のようにしてシリカゲルカラムクロマ
トグラフィーで除くか。

あるいはメチルエステルにした後、ザウェルス（Ｓａｕ
ｅｒｓ）等の報告（Ｊ、Ｏｒｇ、Ｃｈｅｍ、　、２９．
１６８５（１９８４））のようにして除いてから加水分
解して遊離酸に戻によって容易に得ることができる。

〔微生物〕

本発明において使用され微生物は、ペニシリウム（Ｐｅ
ｎ１ｃｉｌｌｉｕｗ＋）属、アスペルギルス（Ａｓｐｅ
ｒｇｉｌｌｕｓ）属、アブシディア（Ａｂｇｉｄｉａ）
属、カニングハメラ（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍｅｌｌａ）
属、ムコール（Ｎｕｃｏｒ）属、ケトミウム（Ｃｈａｅ
ｔｏｍｉｍｕｎ）属、ビューベリア（Ｂｅａｕｖｅｒｉ
ａ）属の糸状菌、ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏ■
ｙｅｓｓ）属の放線菌、及びバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕ
ｓ）属の細菌（バクテリア）である、これらの菌株とし
て有効に利用されるもののうち、アブシディア・コエル
レア（ＡｂｃｉｄｉａＩＦ０４５７８．ケトミウム・コ
クリオデス（Ｃｈａｅｔｏｉ＋ｉｕ＋５ｃｏｃｈｌｉｏ
ｄｅｓ）ＩＦＯ６３０８、ストレプトミセス・アルボフ
ァシェンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｗｙｃｅｓ　ａｌｂｏｆａ
ｃｉｅｎｓ）ＩＦＯ１２８３３、バチルス・チュリンギ
エンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉ
ｓ）ＩＦＯ３９５１はいずれも財団法人発酵研究所の保
存菌株である。他の菌株であるペニシリウム・フニクロ
スム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　ｆｕｎｉｃｕｌｏｓｕ
ｍ）（ＦＥＲＮ　Ｐ−８０５１）、アスペルギルス・ア
ワモリ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ａｗａｍｏｒｉ）（
ＦＥＲＮ　Ｐ−８０５２）、及びアスペルギルス・ニガ
ー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｎｉｇｅｒ）（ＦＥＲＮ
Ｐ　−８０５３）はそれぞれ下記の如き菌学的性質を示
したことから、ｒＡ　Ｍａｎｎｕａｌ　ｏｆ　ｔｈｅ　
Ｐｅｎ１ｃｉｌｌｉａ（Ｒａｐｅｒ　ａｎｄＴｈｏｍ、
１９４９）Ｊ、　　ｒＴｈｅ　ｇｅｎｕｓ　Ａｓｐｅｒ
ｇｉｌｌｕｓ（Ｒａｐｅｒペニシリウム・フニクロスム
（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍｆｕｎｉｃｕｌｏｓｕｍ）　
　　ＦＥＲＮ　　Ｐ−８０５１：ポテト・デキストロー
ス寒天培地あるいはツアペック（Ｃｚａｐｅｋ）寒天培
地上で白緑色の集落を形成し、裏面に赤色色素をわずか
に分泌する。最適生育温度は３０℃である。子のう世代
は形成せず、ベニシリはメト１とフィアライドからなり
、対称的に輪生する０分生子柄はおおむね単生である。

集落表面にはなわ状の組織が生ずることがあり、菌核の
形成も部分的に認められる。

アスペルギルス・アワモリ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　
ａｖａｍｏｒｉ）ＦＥＲＮＰ−８０５２： 泡盛こうじから分離された。ポテト・デキストロース寒
天培地上で３０℃において急速な生育を示し、２〜３日
で褐色〜黒褐色の分生子を密生する。

がおよそ５０μｌの球形である０分生子はメト１とフィ
アライドの復条の先端に形成される。

アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｎ
ｉｇｅｒ）ＦＥＲＭ　Ｐ−８０５３： ポテト・デキストロース寒天培地上３０℃において、旺
盛に発育し、２〜３日で深黒色の分生子を密生する。集
落の裏面は淡黄色となる。分生子柄は集落から立ち上が
るが数■■以下と短い。頂のうは直径がおよそ５０μ層
の球形であり、メト１とフイアライドを有し、その復条
の先端に分生子を着生する。

〔菌体生産条件及び微生物変換反応〕

微生物変換反応を行うのに使用する菌体の生産条件及び
微生物変換反応の方法は以下の通りである。ただし本発
明は、これらによって限定されるものではない。

糸状菌の場合： 通常、液体培地で培養する。その成分としては、グルコ
ース、０．５〜５％、酵母エキス０．１〜１％、麦芽エ
キス０．１〜１％、及びペプトン０．１〜１％が基本的
に含まれ、必要に応じてマグネシウム塩、カル現に密接
にかかわっており、接種菌体量又は接種胞子の量や培地
組成、振どう方法などに応じてその都度最適値を見出す
べく予備的検討を必要とするが、後述の実施例１におい
て挙げる値が目安となる。ついで、変換反応を行うため
には、培養物に基質を添加してさらに培養を継続する方
法をとることもできるが、より好ましくは菌体を濾過な
どの方法で分離し、これを基質の水溶液又は水懸濁液に
加えて攪拌又は振どうを行う方法をとるのがよい、この
場合に用いる溶液は０．０５〜０．ＩＭのリン酸塩緩衝
液又はこれに代る適当な緩衝液（ｐＨは６〜８の中性領
域）とすることができる、さらにこれに０．１〜５％の
グリセロール、キシロース、シュクロース、又はグルコ
ースを加えると変換収率を増剤として添加する。基質の
添加量は反応液１００ｎ＋　ＱあたりｌＯ〜１００■ｇ
とするのが適当である６反応温度は２５〜３５℃とし１
反応時間は使用菌体量によって変るが、だいたい７２時
間以内とする。

バクテリア及び放線菌の場合： 液体培地で培養する。その成分としては、グルコース０
．１〜１％、グリセロール０．１〜１％、酵母エキス０
．１〜０．５％、肉エキス０．１〜０．５％、ペプトン
０．４〜１％、　Ｎａ１ｌｌＯ，１〜０．５％を基本的
に含み、必要に応じて麦芽エキス、肝臓エキス、Ｍｇ、
その他の無機塩及び微量元素を添加する。ｐＨは７〜８
の範囲とする。培養は振とう培養、通気かくはん培養等
の好気的条件下で行い、その温度は３０〜３７℃とする
。培養時間は変換反応の活性発現に密接にかかわってお
り、場合に応じて最適値を見出すべく予備的検討を必要
とするが、通常は６〜１０時間である。ついで変換反応
を行うためには、遠心分離などで集菌した菌体を新たに
リン酸緩衝液などに、（４）ｍ：）、これに基質及びキ
シロース等を添加して攪拌する方法で行うこともできる
が、本発明で用いる菌株であるバチルス・チュリンギエ
ンシスＩＦＯ３９５１の場合には、培養途中（開始後約
７時間）において培養物の中へ基質を添加し、さらに２
４〜４８時間培養を継続する方法による方が変換収率は
高かった。この場合の基質添加量は１００■ａあたり５
〜２０Ｂとするのが適当である。

変換反応終了後は、糸状菌、放線菌、バクテリアのいず
れの場合も濾過ないしは遠心分離によって菌体を除き、
その濾液又は遠心上ずみから目的産物をエーテル、酢酸
エチルなどの有機溶媒で抽出する。

〔生産物〕

前記微生物を用いた反応によって得られる生産物は、原
料として使用したビシクロ〔２．２．１〕化合物の２位
に水酸基が導入された次の構造式で表わされ、１位の絶
対配置がＲであるエナンチオマーに富むものである。こ
の場合、「１位の絶対配置がＲであるエナンチオマーに
富む」ということは。

Ａ＊’ＮＳ体とからなる立体異性体の間で、Ｒ体の割合
が５０％を越えることを意味する。また１本明細書にお
いて、絶対配置の表示に使用する符号Ｒ及びＳの意味は
、ケミカルアブストラクト・インデックスガイド・アペ
ンディックス■のＰ、１７０　Ｉ（１９８４）に記載さ
れている意味に従うものとする。

（１）（ＩＩ） （ｎｌ）　０Ｈ（ＩＶ） 前記微生物反応によっては、前記した２位に水酸基が導
入されたビシクロ〔２．２．１〕化合物が生成物である
が、微生物によっては２位にケトン基が導入されたもの
も生成することもあるが、これは。

通常、主生成物をなすものではない、従って、２位にオ
キソ（ケトン基）の入ったビシクロ〔２．２．１〕化合
物を得るには、前記で得られた２位に水酸基の入った生
成物を、酸化処理する。この場合の酸化処理は従来公知
の方法で行うことができ、例えば、クロム酸酸化法や、
過マンガン酸酸化法等により容易に実施することができ
る。この酸化処理により得られる生成物は次の式で表わ
される。

（Ｖ）（Ｗ） ＝４記式中、Ｒは水素又はメチル基である）〔発明の作
用・効果〕 本発明による前記式（１）、（ＩＩ）、　（Ｖ）で示さ
れるビシクロ〔２．２．１〕化合物は、香料工業におい
て重要なジャスモン酸メチルを天然型の光学活性体とし
て合成するための原料として用いることができ、また前
記式（ｍ）、　（ＩＶ）、　（Ｖｌ）で示されるビシク
ロ〔２．２．１〕化合物は、有用な医薬品であるプロス
タグランジン類を天然型の光学活性体として合成するた
めの原料として使用することができる。

そして１本発明によると、これらの化合物はいずれも、
プロキラルな基質である原料を微生物に接触せしめると
いう極めて簡単な一段階の操作によって、高い光学純度
で得ることができる。すなわち、前記の菌株のうち、バ
チルス・チュリンギエンシスＩＦＯ３９５１による変換
反応産物（前記式（１）及び（ｎ）において、Ｒ＝ＣＨ
３）を加水分解して遊離酸とし、ついで化学的に酸化し
て得られる化合物（前記式（Ｖ）において、Ｒ＝Ｈ）は
ほぼ１００％ｅ、ｅ、の光学純度であり、別の変換産物
（前記式（ｍ）及び（ＩＶ）において、Ｒ＝ＣＨ３）を
加水分解して遊離酸とし。

ついで化学的に酸化して得られる化合物（前記式（Ｖｌ
）において、Ｒ＝Ｈ）の光学純度は８２％ｅ、ｅ、と高
い。また、他の菌株のアスペルギルス・アワモリＦＥＢ
Ｎ　Ｐ−８０５２によれば、前記式（１）（Ｒ＝Ｈ）で
示される化合物が８５％ｅ、ｅ、の光学純度の結晶とし
て得られ、これを化学的に酸化し七から再結晶操作で精
製した化合物（前記式（Ｖ）において、Ｒ＝Ｈ）の光学
純度は９２％１６．にものぼる−変換反応の粗収率は後
述の実施例１で示されるように、バチルス・チュリンギ
エンシスＩＦＯ３９５１によって、ビシクロ〔２．２．
１〕へブタン−７−カルボン酸メチル〔前記式（Ａ）に
おいて、Ｒ＝ＣＨ３）から生成されるそのアルコール体
（前記式（１）と（ＩＩ）において、Ｒ＝ＣＨ３）は合
せて５８％、アスペルギルス・アワモリＦＥＲＮ　Ｐ−
８０５２によって、ビシクロ〔２．２．１〕へブタン−
７−カルボン酸（前記式（Ａ）において、Ｒ＝Ｈ）から
生成されるそのアルコール体（前記式（１）と（ｎ）に
おいて、Ｒ＝Ｈ）は合せて６３％と、いずれも５０％以
上である。また、ビシクロ〔２．２．１〕ヘプト−５−
エン−７−シンてアスペルギルス・アワモリＦＥＲＮ　
Ｐ−８０５２を作用させた場合、そのアルコール体（前
記式（ｍ）及び（ＩＶ）において、　Ｒ＝Ｈ）の合計収
率は３６％であり、ビシクロ〔２．２．１〕ヘプト−５
−エン−７−シン−カルボン酸メチル（前記式（Ｂ）に
おいて、Ｒ＝ＣＨ３）にムコール・ブシルスＩＦ０４５
７８を作用させた場合には。

そのアルコール体（前記式（［［）及び（ｍＶ）におい
て、Ｒ＝Ｃ）１３）の合計収率は４２％である。

本発明の前記式（１）〜（Ｖｌ）で示される光学活性化
合物を用いて、天然型ジャスモン酸メチルやプロスタグ
ランジン類を得るには、ラセミ体について既に開発され
ている反応や、公知方法を組合せればよい。

〔実施例〕

次に本発明を実施例によりさらに詳細に説明するが、そ
れに先だって、微生物による変換産物の同定にあたって
必要な標準化合物について説明する。

目的物質は、前記したように、前記式（Ｉ）〜対装置を
とるエナンチオマーに富む光学活性体であり、この場合
、用途の点からは、アルコール体（前記式（１）、（Ｉ
ｆ）、　（ｍ）、（■））よりもケトン体（前記式（Ｖ
）、　（Ｖｌ））の方が好ましく、そして、ケトン体は
アルコール体を化学的に酸化することにより容易に得る
ことができる。さらに、前記式（Ｖ）（Ｒ＝Ｈ）と（Ｖ
ｌ）（Ｒ＝Ｈ）で表わされるケトン体は結晶性にすぐれ
ている。従って、これらの点から、前記式（Ｖ）（Ｒ＝
）ｌ）と（Ｖｌ）（Ｒ＝Ｈ）で表わされるケトン体が同
定のためのキーポイントになる化合物である。

次に、標準化合物の合成法について示す、この場合１Ｍ
料としては、アンチ−５−カルボキシトリシクロ［２，
２，１，０４６］へブタン−３−オン（ラセミ体）を、
グリエコ（Ｇｒｉｅｃｏ）等の方法（Ｊ、Ｍｅｄ、Ｃｈ
ｅｗ、。

２３、１０７２（１９８０））で光学分割して右旋性の
光学活性体（（＋）−（２，２，１，０））を得た。こ
のものは、鳳ｐ１４２〜１４３℃、（ａＦ＋９１．７°
（Ｃ＝１．０、ジオキサン）の物性を示した。この光学
活性体（（＋）−■）は星亙３ドラ（Ｂｉｎｄｒａ）等
が示しているように（Ｊ。

Ａｍ、Ｃｈｃｓｓ、Ｓｏｃ、　、９５．７５２２（１９
７３））、天然型プロスタグランジンに導くことのでき
る立体構造を有し。

従って、１位の絶対配置はＲである。この光学活性体（
（＋）−■）を、ビーリー（Ｂｅｅｌｅｙ）等の方法（
Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ、３７，５ｕｐｐ１．Ｎｏ１，
４１１（１９８１））に従って、そのシクロプロパン環
にＨＢｒを付加した後、　Ｚｎ／ＡｃＯＨで還元して得
た２−オキソ−ビシクロ〔２．２．１〕へブタン−７−
アンチ−カルボン酸（前記式（Ｖ）において。

Ｒ＝Ｈ）は右旋性であり、■Ｐ１４１〜１４２．５℃、
【αｉ＝＋１８°（Ｃ＝０．８７、メタノール）の物性
を示した。

これをジアゾメタンでメチル化してメチルエステル（前
記式（Ｖ）において、Ｒ＝ＣＨ３）とした後、イソプロ
パツール溶媒中でＮａＢＨ４で還元し、対応するエンド
−アンチ−ヒドロキシエステル（前記式（１）において
、Ｒ＝ＣＨ３）とエキソ−アンチ−ヒドロキシエステル
（前記式（ＩＩ）において、Ｒ＝ＣＨ３）を約９５：５
の割合の混合物として得た。前記のようにして得た前記
式（Ｖ）（Ｒ＝ＣＨ３）、　（１）（Ｒ＝ＣＨ３）及び
（ＩＩ）（Ｒ＝ＣＨ３）で表わされる化合物は、ＧＣ及
びＧＣ表−１にまとめて示す。なお１本明細書中で示す
ｒＧｃＪはガスクロマトグラフィーを示し、ＧＣ−ＭＳ
はガスクロマトグラフィー結合マススペクトロメトリー
を意味する。

次に、前記において示した光学活性体（（＋）−■）を
、前記ビーリー等の方法によってそのシクロプロパン環
にヨウ化水素（ＨＩ）を付加した後、ジアゾメタンによ
りその遊離カルボン酸をメチルエステルとなし、次いで
前記グリエコ等の方法に順じてその２位のオキソ基をケ
タール化した。このケタール化合物に１，５−ジアザビ
シクロ（５，４，０）ウンデ−５−センを作用させて、
ヨウ化水素を脱離させた後、加水分解処理して、７−位
のエステル基をカルボン酸基に変えると共に２−位のケ
タール基をオキソ基に変えて、２−オキソ−ビシクロ〔
２．２．１〕ヘプト−５−エン−７−アンチ−カルボン
酸（前記式（Ｖｌ）において、Ｒ＝Ｈ）を得た。このも
のは、左旋性ｔｔ　示Ｌ、ｍｐ１５２〜１５３℃、（ａ
）ｒ＝　−６４４゜た後、ＮａＢＨ４で２位のオキソ基
を還元して、対応するエンド−アンチ−ヒドロキシエス
テル（前記式（ｍ）において、Ｒ＝ＣＨ３）とエキソ−
アンチ−ヒドロキシエステル（前記式（ｒＶ）において
、Ｒ＝ＣＩ３）を約９２＝８の混合物として得た。前記
のようにして得た式（Ｖｌ）（Ｒ＝ＣＨ３）、　（ｍ）
（Ｒ＝ＣＩ　３　）及び（ＩＶ）（Ｒ＝ＣＨ３）で表わ
される化合物はＧＣ及びＧＣ−ＭＳでの微生物変換産物
の同定に使用する。それらのクロマトグラフィー的性質
を次の表−１にまとめて示す、この表−１には、微生物
変換用原料として用いたビシクロ［２，２，１］へブタ
ン−７−カルボン酸メチル（Ａ）（Ｒ＝ＣＨ３）と、ビ
シクロ〔２．２．１〕ヘプト−５−エン−７−シン−カ
ルボン酸メチル（Ｂ）　（Ｒ＝ＣＨ３）のガスクロマト
グラフィー的性質も合せて示す。

なお１表−１に示したカラムの種類及びその使用条件は
次の通りである。

（１）　５ＣＰ（２＋ｓｍ１．Ｄ、　Ｘ　１．５ｍガラ
スカラム）％のクロモソルブｖ　Ａｌｌ！　８０〜１０
０メツシユ キャリヤーガス（Ｈａ）の流速・・・１■ａ／分（２）
　５Ｐ−１０００（２曹■１．Ｄ、　Ｘ　１．５■ガラ
スカラム）固定相・・・ガスクロ工業■製の５Ｐ−１０
００５％。

クロモソルブＶ　Ａ１８０〜１００メツシユキヤリヤー
ガス（Ｈｅ）の流速・・・１■Ｑ／分（３）　ＣＤＭＳ
（３ｍｍ１．Ｄ、　Ｘ　１．５ｍＸテンレススチールカ
ラム）固定相・・・ガスクロ工業■製のシクロヘキサン
ジメタツールサクシネート（ＣＤＭＳ）１５％、クロモ
ソルブＶ　ＡＭ　ＣＤＭＳ　８０〜１００メツシユ キャリヤーガス（Ｎ２）の流速・・・６０■ｆｉ／分温
度条件・・・化合物（Ａ）（Ｒ＝ＣＨ３）、（Ｖ）（Ｒ
＝ＣＨ３）、（Ｉ）（Ｒ＝ＣＨ３）、（ＩＩ）（Ｒ＝Ｃ
Ｈ３）に対しては１６０℃、その他に対し ては１８０℃ （４）　０Ｖ−１（ガスクロ工業■製の０Ｖ−１化学績
合型シリカキャピラリーカラム、０．２５■ｍ１．Ｄ、
Ｘ２．５鵬）（５）　０Ｖ−１７０１（ガスクロ工業■
製）ＯＶ−１７０１化学結合型シリカキャピラリーカラ
ム、　０．２５■■１、Ｄ、　Ｘ　２５■） キャリヤーガス（Ｈａ）の流速・・・７０１１Ｑ１分温
度・・・１２０℃ （６）　ＢＰ−２０（Ｓ、Ｇ、ＩＥ、社製のＢＰ　−２
０化学結合型シリカキャピラリーカラム、０．２２ｍ菖
１．０．　Ｘ　２５■）キャリヤーガス（Ｈｅ）の流速
・・・６０ｍ　ｎ　／分温度・・・１７５℃ なお、前記において、キャピラリーカラム使用時のキャ
リヤーガス流速はガスクロマトグラフのメーターの示す
値として与えられている。

表−１ （注）表中の化合物Ａ〜■はいずれもメチルエステル型
（Ｒ＝ＣＨ３）である。

次に、前記式（Ｖ）（Ｒ＝ＣＨ３）及び（ｖｔ）（Ｒ＝
ｃｔ＋　３　）で表わされる化合物のＮａＢＨ４還元産
物である２−ヒドロキシ体のうち、各マイナー成分（少
量成分）がエキソの相対配置を有することは１次のよう
にして確認した。

即ち、スタベルスマ（Ｓｔａｐｅｒｓ■ａ）等の方法（
Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ、３７．１８７（１９８１））
で合成したビシクロ〔２．２．１〕ヘプト−２，５−ジ
エン−７−カルボン酸メチルに対し、９−ボラビシクロ
（３，３，１３ノナンでヒービシクロ［２，２，１］ヘ
プト−５−エン−７−カルボン酸メチル（前記式（ＩＶ
）において、Ｒ＝ＣＩ３）を立体選択的に得た０次いで
、このものを接触還元して、その２重粘合を水素化して
２−エキソ−ヒドロキシ−ビシクロ〔２．２．１〕へブ
タン−７−カルボン酸メチル（前記式（ＩＩ）において
、Ｒ＝ＣＨ３）とした。

このようにして得たエキソ体（ＩＩ’／）（Ｒ＝ＣＨ３
）と（ＩＩ）（Ｒ＝ＣＨ３）は、それぞれ前記化合物（
Ｖ）（Ｒ＝ＣＩ３）及び（Ｖｌ）（Ｒ＝ＣＨ３）のＮａ
ＢＨ４還元産物のうちのマイナー成分と、ＧＣ及びＧＣ
−ＭＳにおいて一致した。

なお、微生物変換産物の光学純度は、サンプル量が充分
にある場合には、ケト酸（Ｖ　）　（Ｒ＝　Ｈ）及び（
Ｖｌ）（Ｒ＝Ｈ）に導いて、その旋光度を測定すること
によるが、少量の場合には、キラルな試薬でジアステレ
オマーに誘導し、これをＧＣで分離定量することによっ
て行う、ここでは、水酸化産物（Ｉ　）　（Ｒ＝ＣＨ３
）（ＩＩ）（Ｒ＝ＣＨ３）、（ｍ）（Ｒ＝ＣＨ３）及び
（ＩＶ）（Ｒ＝ＣＨ３）は、（Ｒ）−（−）−１−（１
−ナフチル）エチルイソシに誘導する。ケトン体の産物
（Ｖ　）　（Ｒ＝　Ｈ）と（ＶＩ）（Ｒ＝　）Ｉ）は、
塩化チオニルで酸クロライドとし、（Ｒ）−（＋）−１
−メチルベンジルアミンと縮合反応（以下、この反応を
ＭＢ反応と略記する）させてジアステレオメリンクなア
ミドとする。ケトエステル型の産物（Ｖ）（Ｒ＝ＣＨ３
）及び（■）（Ｒ＝ＣＨ３）は、加水分解して遊離酸と
した後、前記と同様にして。

（Ｒ）−（＋）−１−メチルメンジルアミンと縮合させ
る。

標準化合物（１）（Ｒ”ＣＨ３）と（ＩＩ）（Ｒ＝ＣＨ
３）の混合物、（ＩＩＩ）（Ｒ＝ＣＨ３）と（ｒＶ）（
Ｒ＝ＣＩ　３　）の混合物、−化合物（Ｖ）（Ｒ＝Ｈ）
及び（Ｖｌ）（Ｒ＝Ｈ）のそれぞれに関し、そのラセミ
体と光学活性体（ＩＲ一体）のそれぞれに上記のＮＥＩ
反応又はＭＢ反応を行って得たジアステレオマーのガス
クロマトグラフィー分離における保持時間のデータを表
−２に示す。

なお、前記で得た、ジアステレオマーは、化合物符号と
、１位の絶対配置と、ジアステレオマーを得る場合の反
応の種類によって表わし１例えば、（ＩＳ）−１１−（
Ｒ＝ＣＨ３）＊（Ｒ）　　ＮＥＩや、（ＩＲ）−ｖ（Ｒ
＝ｌ）　＊　（Ｒ）　−ＭＢのように表わした。この場
合、前者は、１位の絶対配置がＳである２−エキソ−ヒ
ドロキシ−ビシクロ〔２．２．１〕−へブタン−７−ア
ンチ−カルボン酸メチルにおいて、その２位の水酸基に
ＮＥＩ反応を行って得られたジアステレオマーを意味し
、一方、後者は、１位の絶対配置がＲである２−オキソ
−ビシクロ（２，２，ｉ）へブタン−７−アンチ−カル
ボン−において、そのカルボキシル基にＮＯ反応を行っ
て得られたジアステレオマーを意味する。

また、ジアステレオマーのガスクロマトグラフィーによ
る分離集験における分析条件は辰の通りである。

（１）カラム：ＱＶ−１化学結合型シリカキャピラリー
カラム、０．２５■■１．Ｄ、　Ｘ　５０ｍ（２）キャ
リヤーガス（Ｈｅ）の流速：１００ｍＡ／分（３）温　
　度：実験Ｎ００１〜８・・・・２５０℃実験Ｎｏ、９
〜ｌ：”２００℃ データ処理装置による。

表−２ 次に、前記ＮＥＩ反応及びＭＢ反応の具体的実施方法を
以下に示す。

（ＮＥＩ反応〕 目的産物の０．１〜０，７−ｇを含むＥｔＯＡｃ溶液（
以下ＥｔＯＡｃは酢酸エチルを表すものとする）の０．
１１Ωを小型アンプルに入れ減圧で溶媒を留去する。試
薬２０μＱ（＝トルエン１７．８μΩ＋（Ｒ）−（−）
−１−（１−ナフチル）エチルイソシアネート２μｎ＋
Ｎ、Ｎ−μＱのメタノールを加えて適宜希釈してからＧ
Ｃに供する。

（ＭＢ反応〕 目的産物が遊離酸の形の時は直ちに塩化チオニルとの反
応を行うが、メチルエステルの形である時は、まず加水
分解を行う、０．１〜０．２ｔａＨのメチルエステルを
含むＥｔＯＡｃ溶液の０．１５ｍＭを小型アンプルに入
れ、減圧で溶媒を留去する。メタノール０．２ｍｇと６
Ｎ　ＮａＯＨＯ，１ｍｇを加え３０℃に１時間保つ。

６Ｎ　ＨＣ，Ωで酸性とし１食塩飽和の状態でエーテル
抽出を行う（５■ａ×２）。エーテル層を合せ、飽和食
塩水で洗浄後、Ｎａ　２　Ｓｏ　４で乾燥する。エーテ
ル　・留去した残渣に塩化チオニル５０μΩを入れ、室
温に１時間放置する。過剰の塩化チオニルを減圧で除き
、トルエン０．１ｍΩを加え、再度濃縮する。トルエン
８５μｌ　（Ｒ）　−（＋）−１−メチルベンジルアミ
ン５μΩ、及びピリジン１０μｇの混合液を加え、室温
に数時間放置後メタノールで適当に希釈を示す。

培地Ａ（ｇ／Ｑ）ニゲルコース、１０；酵母エキス、３
；麦芽エキス、３；ペプトンｅ５；Ｍｇ５Ｑ４・７Ｈ２
０，０，３；　ＣａＣ１１２・２Ｈ２０，０，１；Ｎａ
Ｃｆ１，０．１：微量元素液、１ｍｆｆ１　；　ｐＨ５
，６培地Ｂ：３％グリセロース含有０．０５Ｍリン酸緩
衝液（ｐ）１７．５） 培地Ｃ（ｇ／　、Ｑ　）　：酵母エキス、２；肝臓浸出
物、２；。

肉エキス、２；グルコース、３；グ リセロール、３；ペプトン、５； ＮａＣＱ、３；麦芽工゛キス、２；ＭｇＳＯ４・７Ｈ２
ｏ、ｏ、ａ　；　ＣａＣＱ　２　・２Ｈ２０ｙＯ−１；
微量元素液、１■Ｑ：ｐＨ７，４ 微量元素組成（ｇ／Ｑ）：Ｈ３ＢＯ３，０，３；ＭｎＣ
Ｑ　２・４Ｈ２０，０，２Ｈ１ｎＣｎ　２．０．７５　
；　ＣｕＳＯ４・５Ｈ２０，０，２；ＦｅＣＩＩ　３　
・６Ｈ２０＃２．５　；　（ＮＨａ　）　ｓＭｏ７０２
４・４Ｈ２０，０，１；ＣｏＳＯ４・７Ｈ２０，０，１
５ １７Ｏｒｐ膳とした。また生産物の精製のためのシリカ
ゲルカラムクロマトグラフィー用布てん剤には、和光純
薬製のすａｋｏ　ｇｅｌ　Ｃ−２００を用いた。

実施例１ この実施例において使用した基質液の組成は次の通りで
ある。

〔基質液〕

Ｓｌ：ビシクロ〔２．２．１〕へブタン−７−カルボン
酸（（Ａ）（Ｒ＝Ｈ））を５ｍｇ／ｓ　Ｑ含む０．０５
Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，５）。

Ｓｌ：ビシクロ〔２．２．１〕へブタン−７−カルボン
酸メチル〔（ム）（Ｒ＝ＣＨ３））を０．０５Ｍリン酸
緩衝液（ｐＨ７、５）に超音波で均一に分散させたもの
、濃度はその遊離酸と して５ｍｇ／ｍ　ｎ　＊ Ｓ３：ビシクロ〔２．２．１〕ヘプト−５−エン−７−
シン−カルボン酸ＣＢ）（Ｒ＝Ｈ））を５ｓｇ／ｙａＱ
含む０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，５）、５４３Ｊ
ヒシクロ〔２．２．１〕ヘプト−５−エン−７−シン−
カルボン酸メチル（（Ｂ）（Ｒ＝ＣＨ３））の０．０５
Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，５）中への分散液。含有量は
その遊離酸として５ｍｇ／ｒａΩ。

また、生産物の精製に用いたシリカゲルカラムクロマト
グラフィーは次の条件によって行った。

カラムサイズ：１ｃｍφ×２０〜２３ｃ■溶　離　液：
ベンゼン中のＥｔＯＡｃ濃度が１５．２０、２５．３０
．３５．４０％の溶液の２５＋ａ　Ｑづつ。

９木の５００ｍΩ容肩付フラスコに培地Ａｌ５０ｍ　Ｑ
づつを入れ、綿栓をつけ滅菌処理を施した。アスペルギ
ルス・アワモリＦＥＲＮ　Ｐ−８０５２の保存用スラン
ト　から胞子をとり、フラスコの１本に接種し、２８℃
で２４時間往復振どう機上で振どう培養した。この培養
物（パルプ状）の１５■Ｑづつを他の８本の培地に無菌
的に移植し、２８℃で２４時間振どう培養した（本培養
）、一方、あらかじめ４本の５００＋ｓ　Ｑ容バッフル
付三角フラスコの各々に培地Ｂ１００１悲づつを入れ、
シリコン通気栓を付し、滅菌処理しておい角フラスコの
それぞれに入れた。この４本の三角フラスコの各々に基
質液Ｓ１．　Ｓ２．　Ｓ３．　Ｓ４の各１ｍΩを入れ、
ロータリー振どう機上で３０℃で４８時間振とうし、変
換反応を行った。菌体を濾別し、少量の水で洗い、濾液
と洗液を合して、６ＮＨＣＱでＰＲを１．５とした。こ
のようにして得た４種類の反応液の各々をＮａＣＱで飽
和させ、ＥｔＯＡｃの１５０ｍ　Ｑと１００１１Ｑで抽
出した。　ＥｔＯＡｃ層を合せ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥後
、ロータリーエバポレーターで濃縮した。過剰のジアゾ
メタン／エーテル溶液を加えてメチル化後、濃縮し、１
５％ＥｔＯＡｃ／ベンゼンの１ｍＱにとかした。これを
シリカゲルのカラムクロマトグラフィーで精製した。１
５〜２０％及び２５〜３５％ＥｔＯＡｃ／ベンゼンの溶
出物をそれぞれ合せ、溶媒をすべて留去して得た残渣を
ＥｔＯＡｃの０．２ｍＱに溶かした。

この試料液中の目的生産物をＧＣで同定・定量した。そ
の分析条件は表−１に関して記載したものと同様である
。定量のための検量線は、標準品のた。また、ＧＣ−Ｍ
Ｓによっても目的物の生成を確認した１次に、この試料
液の１／６〜１／２をとり、光学純度測定のためのＭＢ
反応又はＮＥＩ反応に供し、得られたジアステレオメリ
ック誘導体をＧＣで分離定量した。その分析条件は表−
２に関して記載したのと同様である。これらの結果を表
−３に一括記載する。

また、前記と同様の実験を、他の７種類の糸状菌につい
ても行った。前培養１本培養、変換反応に関した時間（
ｈ）をこの順に菌名の後に示す：アスペルギルス・ニガ
ーＦＥＲＭ　Ｐ−８０５３（２４ｈ、　２４ｈ。

４８ｈ）、ペニシリウム・フニクロスムＦＥＢＭ　Ｐ−
８０５１（２４ｈ、２５ｈ、　４８ｈ）、アブシデイ“
ア・コエルレアＩＦＯ４０１１（２４ｈ、　２７ｈ、４
６ｈ）　、ビューベリア・バシアナＩＦ０４８４ｇ（２
４ｈ、２７ｈ、４６ｈ）、カニングハメラ・ブラ、　ケ
スレアナＩＦ０６１５６（４８ｈ、２６ｈ、　６９ｈ）
、ムコール・ブシルスＩＦ０４５７ｇ（１９ｈ、２６ｈ
、　４２！１）、及びケトミウム・コクリオデスＩＦ０
６３０８（４８ｈ、２６ｈ、６９ｈ）。

容バッフル付三角フラスコに培地Ｃの１００＋ｓ　ｎづ
つを入れ通気性のシリコン栓をつけ、滅菌処理を施した
。バチルス・チュリンギエンシスＩＦＯ３９５１の保存
用スラントから菌体の少量をとり、フラスコの１本に接
種し、３０℃で１２時間ロータリー振とう機上で振とう
培養した。この前培養物の２Ｏｒａ　Ｑづつを他の４本
の培地に無菌的に移植し、３０℃で７間抜振どう培養し
た（本培養）０次いで、基質液Ｓ１、Ｓ２、Ｓ３及びＳ
４の１ｍＱづつを別々に４木の本培養物に添加し、４９
時間振とうを継続した。菌体を遠心沈殿によって除き、
上ずみの各々を６ＮＨＣＱでｐＨ１，５とし、ＮａＣΩ
を飽和になるように加え、Ｅｔ、ＯＡｃ（１５０ｗΩ＋
１００ｍ　ｌ　）で抽出した。これ以降の操作は糸状菌
の場合と同様にして行った。またストレプトミセス・ア
ルボファシェンスＩＦ０１２８３３を用いて同様め実験
を行った。結果は表−３にまとめである。

なお、表−３に示した「生成量（ｍｇ）」及び「光学純
度（％ｅ、ｅ、）Ｊの欄における数値は、基質が〔Ａ〕
（ビシクロ〔２．２．１〕へブタン−７−カルボン酸又
はそのメチルエステル）の場合には、それに対応する化
合物（■）、（１）、（Ｖ）についての値を示し、一方
、基質が〔Ｂ〕（ビシクロ〔２．２．１〕ヘプト−５−
エン−７−シン−カルボン酸又はそのメチルエステル）
の場合には、それに対応する化合物（ＩＶ）、（■）。

（Ｖｌ）についての値を示す６また、基質が酸である時
は酸としての生成量及び基質がメチルエステルである時
はメチルエステルとしての生成量が与えられている。

実施例２ アスペルギルス・アワモリＦＥＲＮ　Ｐ−８０５２の胞
子を５００１１Ｑ容振とうフラスコに入れた１５０ｍ　
Ａの培地Ａ（滅菌ずみ、１２本）に接種し、２８℃で３
１時間往往復上う機上で振どう培養した。なお胞子の接
種には、保存用スラントに培地Ａの６ＩＩＩＱを入れて
胞子懸濁液を作り、その１ｓｆｉづつを用いる方法によ
った。全部の菌体を濾集し、　１２本のバッフル付三角
フラスコに等量づつ入れた。三角フラスコには、あらか
じめ１ｓＭのＮｏ”十を添加した培地Ｂの１００ｍ　Ｑ
づつを入れ、シリコン通気栓を付して滅菌処理しておい
た。これらの三角フラスコの各々に水２ｍΩに溶かした
基質（Ａｌ　（Ｒ＝　Ｈ）の２０鵬ｇを添加した（全使
用量２０Ｘ１２＝２４０ｍｇ）。３０℃においてロータ
リーシェーカー上で６４時時間上うした。菌体を濾別し
、濾液を合せ６Ｎ　Ｎａ０１１でｐＨ７，５とした後、
エバポレーターで約３００ｍ　ｍ　ニ濃縮した。　６Ｎ
　ＨＣＱ　’ｔ’ｐＨ１，５とし。

ＮａＣＩｔを飽和になるまで加えた後、　ＥｔＯＡｃの
３００ｍｊｌ。

２００ｍ　ｍ　、　２００ｗ　ｍ及びｉｏｏ■Ωでくり
返し抽出した。

ＩＥｔＯＡｃ層を合せＮａ２ＳＯ４で乾燥後、エバポレ
ーター　’１；”−＠Ｊｔ、た。濃縮物をシリカゲルカ
ラムクロマトグラフィーによって精製しくカラム：　２
．５ｃｍφ×２６ｃ＋ｓ　：溶出：　ＥｔＯＡｃ／ベン
ゼン混液（３００ｍ　Ｑづつ）のＥｔＯＡｃ濃度を５％
づつ増加させて行う段階溶出）、ＥｔＯＡｃ　３５〜４
０％のフラクションを合せ濃縮し、ＥｔＯＡｃ／ヘキサ
ンから結晶化させて１６１ｍｇの２−エンド−ヒドロキ
シビシクロ〔２．２．１〕へブタン−７−アンチ−カル
ボン酸を針状晶として得た（収率５７％）。このものは
、１２１４０〜１４１℃、〔α）Ｆ＝−１３，４°（Ｃ
＝０．９７゜メタノール）、ＭＳ（ｍ／ｅ）　：　１５
６（Ｍ”　）、Ｉ　Ｒ（Ｋ　Ｂ　ｒ　ｒ　ｃｔｍ　−ｉ
）　：３３５０（ＯＨ）、　１７００（ＣＯＯＨ）の物
性を示した。またメチルエステルのＧＣにおける保持時
間は化合物（１）（Ｒ＝ＣＨ３）の標準品のデータに一
致した。また、このメチルエステルに対してＮＥＩ反応
を行って得たジアステレオマーのＧＣから、光学純度は
（ＩＲ）体が８４．７％ｅ、ｅ。と計算された。

なお、確認のために、上記結晶を次のように酸化してケ
ト酸とした。即ち、１４ｃｍｇの上記結晶をアセトン２
ＩＩＱに溶かし、水冷下ジョーンズ試薬０．３５膳ａを
加え、３０分攪拌した。イソプロパノ−で抽出した。有
機層を合せＮａ　２５０４で乾燥後、シリカゲルカラム
クロマトグラフィー（カラム、１．２ｃｍφＸ　１７ｃ
ｍ：　Ｓｏｗ　ｍづつの１５〜３５％Ｅ七ＯＡｃ／ベン
ゼンで溶出）で精製した。２０〜３０％ＥｔＯＡｃのフ
ラクションを合せ濃縮し、ベンゼン／ヘキサンから結晶
化させて、　９６ｒａｇの葉片状晶を得た（収率６９％
Ｌ　ｍｐ１３６〜１４１℃、〔α沼’＝＋１６°（Ｃ＝
０．８９．メタノール）、　ＭＳ（ｍ／ｅ）　：　１５
４（Ｍ”　）、　ＩＲ（ＫＢｒ、ｃｍ−’）　：　３４
００（ＯＨ）、　１７４０（オキソ基）、　１７１０（
ＣＯＯＨ）、　ＭＳ、　ＩＲ及び”Ｈ−ＨＭＨノ全パタ
ーンハ標準品ノ（＋）　　Ｖ（Ｒ＝ＩＩ）のスペクトル
と一致した。（ＩＲ）体の光学純度は〔α〕ρデータか
らは、８９％ｅ、ｅ、であるが、より正確なジアステレ
オマーのＧＣ分析（ＭＢ反応産物のＧＣ分析）からは９
２．２％ｅ、ｅ、と算出された。

実施例３ アスペルギルス・アワモリＦＥＲＮ　Ｐ−８０５２の胞
子を’５００ｍ　１１　ｍ！Ｆ振とうフラスコ内培地Ａ
（１５０■９，２０本）に接種し、２８℃で３１時間往
往復上う機で振とうした。菌体を濾集し、１０本のバッ
フル付５００ＩＩＱ容三−い、、で、基質（Ｂ）　（Ｒ
＝　Ｈ）の１０ｍｇづつを２ｍｊｌの水溶液として、各
フラスコに添加した（全使用量１０Ｘ１（１：１０１０
０１ｔ、シリコン通気栓を付して３０℃で６４時時間上
うした。菌体を濾別し、濾液を合せ、　６ＮＮａＯＨで
ｐＨ７，５とした後、エバポレーターで約３００ｍ　ｍ
に濃縮した。６ＮＨ１ｌでｐＨ，５とし、ＮａＣＱを飽
和になるまで加え、ＥｔＯＡｃの３００ｍ　ｍ　、　２
００ｍ　Ｑ　、　２００ｍ　１１及び１００＋ｅ　１１
で４回抽出した。有機層を合せ、Ｎａ　２　Ｓｏ　４で
乾燥後、工、バボレーターで濃縮した。これをシリカゲ
ルカラムクロマトグラフィーによって精製しくカラム：
　２ｃｍφＸ　３０ｃｍ　：溶離液：５％づつＥｔＯＡ
ｃの濃度を上げたＥｔＯＡｃ／ベンゼン混液１００＋ｓ
　ｎづつ）、３５〜４０％ＨｔＯＡｃフラクションを合
せ濃縮した。油状残渣をアセトン０．５ＩＱに溶かし水
冷下、ジョーンズ試薬（１７５μａ）を加え１時間４℃
で攪拌を続行した。イソプロパツール０．２層ａと氷２
粒を入れ、ＮａＣＱ飽和とし、Ｅｔ、ＯＡｃで抽出した
（８ｍＱＸ２＋３ｍ’ｎ）。

有機層を合せＮａ　２　Ｓｏ　４で乾燥後、エバポレー
ターで濃縮し１次いでシリカゲル力ラムクロマトグラ（
Ｒ＝　Ｈ）を葉片状晶として得た（収率１７％）。憎２
１３９〜１４３℃（Ｊ”＝　−４３１”　（Ｃ＝０．１
６、メ’１）−）Ｌｔ）。

ＭＳ（ｍ／ｅ）　：　１５２（Ｍ”　）、ＩＲ（ＫＢｒ
、　ｃｍ−”）　：　１７４０（＞　＝Ｏ）、１７００
（ＣＯＯ）ｌ）。ＭＳ、　ＩＲ及びＨ−ＮＭＲスペクト
ルは（−）−Ｖｌ（Ｒ＝Ｈ）のｗ中凸のスペクトルに一
致した。

ＩＲ体の光学純度は〔α〕。のデータからは６７％ｅ、
ｅ、。

ＭＢ反応物のＧＣ分析からは７１，４％ｅ、ｅ、であっ
た。

実施例４ ５００ｍ　Ｑ容バッフル付三角フラスコ１４個に培地Ｃ
の１００ｒａ　Ｑづつを入れ、シリコン通気栓を付し滅
菌処理した。各々にバチルス・チュリンギエンシスＩＦ
０３９５１の前培養物（１００■αＸ２．２８℃で１２
時間振どう培養）の１０ｍｆｌづつを無菌的に接種し、
３０℃で５時間ロータリーシェーカーで振とうした。培
養物の各々に基質［Ａ］（Ｒ＝ＣＨ３）の超音波分散液
〔１１ｒａｇ／ｖｓＱ−０，０５Ｎリン酸緩衝液（ＰＨ
７，５））の１■ａを加え、３０℃で振どうを継続した
（基質の総使用量は。

＋ｎＱ、３００ｍＱ及び２００１１　Ｑ　）で抽出した
。有機層を合せ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥後エバポレーター
で濃縮したにれをシリカゲルカラムクロマトグラフィー
で精製した（カラム：　１．５ｃｍφＸ４０ｃ＋：溶離
液＝０〜４０％ＥｔＯＡｃ／ベンゼンの１００ｍ　Ｑづ
つ）。目的物を含むフラクション（ＥｔＯＡｃ　２５％
）を合せ、エバポレーターで濃縮した。この油状物（８
８ｍｇ）をメタノール０．３５ｍｇに溶かし、　６Ｎ　
ＮａＯＨ０，２７ｉ＋Ｑを加え、３０℃に２時間保ち、
加水分解した。水０．５ｍｊｌ加え、　６ＮＨＣＱでｐ
Ｈ約２とし、ＮａＣｊ！で飽和下、　ＥｔＯＡｃ（８■
ａ　Ｘ２＋３■ａ）で抽出した。有機層を合せ濃縮後、
アセトン０．５園αに溶かし、４℃に冷却下、ジョーン
ズ試薬２００μ塁を加えて酸化した。実施例３における
のと同様に後処理・抽出し、シリカゲルカラムクロマト
グラフィーによる精製を経て、目的物（Ｖ）（Ｒ＝　Ｈ
）をベンゼン／ヘキサンから結晶化させて３５■６の葉
片状晶として得た（化合物（Ａ）（Ｒ＝ＣＨ３）からの
収率２３％）、■Ｐ１３８〜１４２℃、〔α）：’＝＋
１９°（Ｃ＝０．４３．メタノール）、　ＭＳ（ｍ／ｅ
）　：　１５４（Ｍ”　）、　ＩＲ（ＫＢｒ、ｃｍ−’
）　：　１７４０（Ｃ＞　＝０）、１７１０（ＣＯＯＨ
）、　ＭＳ、ＩＲ及びＨ−ＮＭＲスペクトルは（＋）−
（Ｖ）（Ｒ＝Ｈ）の標準品のスペクトルに一致した。（
ＩＲ）体の光学純度は〔α〕。゛のデータからは約１０
０％ｅ、ｅ、、　ＭＢ反応物のＧＣ分析からは９４．４
％ｅ、ｅ、であった。

実施例５ ５００ｍ　ｍ容肩付フラスコ１２個に培地Ｃの１００■
ａづつを入れ綿栓を付し滅菌処理した。各々にバチルス
・チュリンギエンシスＩＦＯ３９５１の前培養物（１０
０■ａ　Ｘ２．２８℃で１２時間振どう培養）の１０ｍ
αづつを無菌的に接種し、２８℃で６．５時間往復振ど
う機上で振とうした。これらの培養物の各々に基質ＣＢ
）（Ｒ：ＣＨ３）の超音波分散液（ｌ１ｍｇ／−〇−０
．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，５））の１■ａを加え
、２８℃で更に４４時間振どうを継続した（基質の総使
用量は、１１Ｘ１２＝１３２■ｇ）、遠心で菌体を除去
し、上ずみを合せ。

６ＮＨＣＱでｐＨ１，５とした。２等分し、各々をＮａ
Ｃ１１で飽和させ、ＥｔＯＡｃ（８００＋ｓ　Ｑ、５０
０ｍ　ｍ及び３００ｍ　ｍ　）で抽出した。有機層を合
せ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥後、エバポレーターで濃縮した
。これをシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し
た（カラム：　１．５ｃ■φＸ　４０ｃｗ　；溶媒＝０
〜４０％ＥｔＯＡｃ／ベンゼンの１００１Ｉｆｌづつ）
、目的物を含むフラクション（２５％ＥｔＯＡｃ）を合
せ、エバポレーターで濃縮した。この油状物４９−ｇを
メタノール０．２■ａに溶かし６Ｎ　ＮａＯＨＯ，２■
悲を加え３０℃に２時間保ち加水分解した。水０．５■
Ωを入れ、６ＮＨＣＱでｐｎ約２とし、ＮａＣｌ２飽和
下、Ｉ！ｔＯＡｃ　（８クロマトグラフイーによる精製
を経て、目的物をベンゼンｌヘキサンから結晶化させて
、１ｂ＋ｇの（−）−（Ｖｌ）（１’［＝Ｈ）を葉片状
諷として得た（収率は化合物（Ｂ）（Ｒ＝ＣＨ３）から
８％）、　ｍｐ１４４〜１４８℃、〔α〕：１＝−４ａ
ｉ°　（Ｃ＝０．０９、ＭｅＯＨ）、　ＭＳ（＊／ｅ）
　：　１５２（Ｍ”　）。

ＩＲ（ＫＢｒ、ｃｍ−１）　：　１７３０（オキソ基）
、１７００（ＣＯＯＨ）、　ＭＳ。

ＩＲ及び’Ｈ−ＮＭＲスペクトルは（−）−（ＶＩ）（
Ｒ＝Ｈ）の標準品のスペクトルに一致した。光学純度は
〔α］０のデータからは７５％ｅ、ｅ、、　ＭＢ反応体
のＧＣ分析からは８１．９％ｅ、ｅ、であった。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）水酸基又はオキソ基を２位に有するビシクロ〔２
   ．２．１〕ヘプタン−若しくはヘプト−５−エン−７−
   カルボン酸及びそのメチルエステルの中から選ばれるビ
   シクロ〔２．２．１〕化合物からなり、該ビシクロ〔２
   ．２．１〕化合物の１位の絶対配置がＲであるエナンチ
   オマーに富む光学活性ビシクロ〔２．２．１〕化合物。 −５−エン−７−カルボン酸及びそのメチルエステルの
   中から選ばれるビシクロ〔２．２．１〕化合物の２位の
   炭素原子を、ペニシリウム属、アスペルギルス属、アブ
   シデイア属、ビューベリア属、カニングハメラ属、ムコ
   ール属若しくはケトミウム属の糸状菌、ストレプトミセ
   ス属の放線菌又はバチルス属の細菌を用いて水酸化する
   ことを特徴とする、水酸基を２位に有するビシクロ〔２
   ．２．１〕ヘプタン−若しくはヘプト−５−エン−７−
   カルボン酸及びそのメチルエステルの中から選ばれるビ
   シクロ〔２．２．１〕化合物からなり、該ビシクロ〔２
   ．２．１〕化合物の１位の絶対配置がＲであるエナンチ
   オマーに富む光学活性ビシクロ〔２．２．１〕化合物の
   製造方法。 （３）ビシクロ〔２．２．１〕ヘプタン−若しくはヘプ
   ト−５−エン−７−カルボン酸及びそのメチルエステル
   の中から選ばれるビシクロ〔２．２．１〕化合物の２位
   の炭素原子を、ペニシリウム属、アスペルギルス属、ア
   ブシデイア属、ビューベリア属、カニングハメラ属、ム
   コール属若しくはケトミウム属の糸状菌、ストレプトミ
   セス属の放線菌又はバチルス属の細菌を用いて水酸化し
   、次いで酸化することを特徴とする、オキソ基を２位に
   有するビシクロ〔２．２．１〕ヘプタン−若しくはヘプ
   ト−５−エン−７−カルボン酸及びそのメチルエステル
   の中から選ばれるビシクロ〔２．２．１〕化合物からな
   り、該ビシクロ〔２．２．１〕化合物の１位の絶対配置
   がＲであるエナンチオマーに富む光学活性ビシクロ〔２
   ．２．１〕化合物の製造方法。