JPS61197521A - Heparin medicine - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。(57) [Summary] This bulletin contains application data before electronic filing, so abstract data is not recorded.

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、ヘパリン及びヘパリン塩の精製法に関するも
のであり、また、このような方法によって得られ、従来
知られているヘパリン塩に対して改善された性質を有す
る生成物に関する。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION The present invention relates to a process for the purification of heparin and heparin salts, and also to the products obtained by such a process, which have improved properties over previously known heparin salts. relating to things.

詳しくは、本発明はシュウ酸塩を含有しないヘパリン、
特にカルシウム塩の形態のヘパリンの製剤に関する。こ
のカルシウム塩形態のヘパリンは、長い貯蔵寿命を有す
る注射用ヘパリン溶液の調製に使用可能である。Specifically, the present invention provides oxalate-free heparin;
It particularly relates to formulations of heparin in the form of calcium salts. This calcium salt form of heparin can be used to prepare injectable heparin solutions with a long shelf life.

また、本発明は、適切に調整された量の鉱物塩の存在下
アルコールによる分別沈澱などによってヘパリンからシ
ュウ酸塩を除去する方法に関するものであって、この場
合、沈澱したヘパリンのシュウ酸塩含有量は３０ｐｐｍ
未満、好ましくは２０ｐｐｍ未満である。The present invention also relates to a method for removing oxalate from heparin, such as by fractional precipitation with alcohol in the presence of appropriately adjusted amounts of mineral salts, in which case the oxalate-containing precipitated heparin The amount is 30ppm
less than 20 ppm, preferably less than 20 ppm.

ヘパリンのナトリウム塩（“ナトリウムヘパリネート”
（ｓｏｄｉｕｍ　ｈｅｐａｒｉｎａｔｅ）とも称される
）は、従来、注射用ヘパリン溶液の製造に用いられてい
る。Sodium salt of heparin (“sodium heparinate”)
(also referred to as sodium heparinate) is conventionally used in the production of injectable heparin solutions.

最近、混合カルシウムーナトリウムヘパリネートもしく
はカルシウムーマグネシウムヘパリネート、及び有利に
はカルシウムヘパリネートが、特ニ注射部における多数
の望ましくない血管反応（ナトリウムイオンに起因する
）を除去するために使用されるようになった。Recently, mixed calcium-sodium heparinates or calcium-magnesium heparinates, and preferably calcium heparinates, have been used to eliminate a number of undesirable vascular reactions (due to sodium ions), especially at the injection site. became.

混合ヘパリン濃度、即ちカルンウムーナトリウムヘパリ
ネートもしくはカルシウムーマグネシウムヘパリネート
及びナトリウムを含有しないヘパリン濃度、特にカルシ
ウムヘパリネートは、英国特許第１，４７１，４８２号
に記載の方法によって、出発ヘパリン濃度例えばナトリ
ウムヘパリネートから有利に調製される。この方法は、
水性媒体中のヘパリンの出発単一塩を、該出発ヘパリン
塩中の金属と少なくとも部分的に置換すべき所望の金属
の塩に接触させて、該所望の金属を含有する混合ヘパリ
ン塩中間体を形成させ、このように形成したヘパリン塩
中間体を、該媒体が含有する遊離金属イオンから分離す
ることから成る。置換金属を更に多く含むヘパリン塩が
所望の場合には、上記ヘパリン塩中間体を水性媒体中で
所望金属の塩と再接触させることが可能である。所望の
場合には、この方法の操作条件は、出発ヘパリン塩が含
有していた金属を含有しない単一ヘパリン濃度が置換金
属から得られるように調整することができる。Mixed heparin concentrations, i.e. calumium sodium heparinate or calcium-magnesium heparinate and sodium-free heparin concentrations, in particular calcium heparinate, are prepared by the method described in British Patent No. 1,471,482, such as starting heparin concentrations such as sodium heparinate. Advantageously, it is prepared from nate. This method is
A starting single salt of heparin in an aqueous medium is contacted with a salt of the desired metal to at least partially replace the metal in the starting heparin salt to form a mixed heparin salt intermediate containing the desired metal. forming and separating the heparin salt intermediate thus formed from the free metal ions contained in the medium. If a heparin salt richer in substituted metals is desired, the heparin salt intermediate can be recontacted with a salt of the desired metal in an aqueous medium. If desired, the operating conditions of the process can be adjusted so that a single heparin concentration free of the metal contained in the starting heparin salt is obtained from the substituted metal.

カルシウムイオンを含有するヘパリン塩溶液の貯蔵に際
して、該溶液中に沈積もしくは沈澱が形成するか又は混
濁が現れることがおりにふれて判明した。明らかに、沈
澱又は混濁が形成されるというこの傾向は、上記溶液の
ヘパリン濃度が大きくなればそれだけ大きくなりがちで
あり、治療上の用途のための注射用ヘパリン溶液の場合
には特に不利である。この注射用ヘパリン溶液は、とり
わけアンプル剤もしくは処方注射剤のように一定量の形
態で前置て工業的に調製されるものであり、従って、数
ケ月の貯蔵後においても完全に澄明のままでなければな
らない。もちろん、若干の沈積もしくは光混濁が形成し
ても、溶液は治療上の投与には不適当なものとなる。It has frequently been found that upon storage of heparin salt solutions containing calcium ions, deposits or precipitates form or turbidity appears in the solutions. Apparently, this tendency to form a precipitate or turbidity tends to be greater the greater the heparin concentration of the solution, and is particularly disadvantageous in the case of injectable heparin solutions for therapeutic use. . This injectable heparin solution is pre-prepared industrially, especially in the form of fixed doses, such as ampoules or prescription injections, and therefore remains completely clear even after several months of storage. There must be. Of course, the formation of some sediment or phototurbidity will render the solution unsuitable for therapeutic administration.

一方において、粒子もしくは結晶の大きさが約５０μ以
下の場合には、もはや可視的でないということ、また、
他方において、ヒトの毛細血管は１〜３μ程度の内径を
有するということを考慮すれば、このことは特に重要で
ある。更に、注射可能溶液においては、粒子もしくは結
晶が存在すると、光学的装置を使用しなければもはや可
視的でないとしても、注射活性成分がヘパリンの場合、
その抗凝固性に鑑みて特に有害となるであろう。即ち、
患者に注射するこのような固体粒子によって誘発される
出血的危険は、ヘパリンの別の所望の本質的活性により
高められるであろう。On the one hand, if the size of the particles or crystals is less than about 50μ, they are no longer visible;
On the other hand, this is particularly important considering that human capillaries have an internal diameter of the order of 1-3μ. Furthermore, in injectable solutions, the presence of particles or crystals may no longer be visible without the use of optical equipment, but if the injectable active ingredient is heparin,
It would be particularly harmful in view of its anticoagulant properties. That is,
The hemorrhagic risk induced by such solid particles injected into a patient would be increased by the other desired intrinsic activity of heparin.

溶液が透明の状態にあるということは、沈澱が全く生成
しないということを必ずしも意味しない。The fact that the solution is clear does not necessarily mean that no precipitate is formed.

実際、沈澱が非常にゆっくり生ずるような場合には特に
、微小結晶（特に準−可視的であって５０μ未満のサイ
ズを有する）が合体して非常に僅かの、例え１個でも、
比較的大きい結晶（この結晶はもちろん溶液の全体に亙
る透明性を変化させない）となる傾向が生ずるであろう
。従って、このような溶液を注射することは、少なくと
も上記の場合と同程度に有害であろう。In fact, especially in cases where precipitation occurs very slowly, very few, even one, microcrystals (particularly sub-visible and with a size of less than 50 microns) may coalesce.
There will be a tendency for relatively large crystals (which of course do not change the overall clarity of the solution). Therefore, injecting such a solution would be at least as harmful as the case described above.

上述した危険の全ては、注射の形態（皮下注射、筋肉注
射、静脈注射等）によって変化はするが、標準医薬溶液
中のヘパリン濃度が大きくなるにっれでそれだけ大きく
なる。しかしながら、周知のようにできるだけ高いヘパ
リン濃度を採用するこ　　　　□とがしばしば望ましく
、このために沈毅の可能性又は準−可視的粒子の数の増
大が非常に重大な問題となりやすい。All of the risks mentioned above vary with the mode of injection (subcutaneous, intramuscular, intravenous, etc.), but increase as the concentration of heparin in standard pharmaceutical solutions increases. However, as is well known, it is often desirable to employ as high a heparin concentration as possible, so that the possibility of precipitation or an increase in the number of sub-visible particles is likely to become a very serious problem.

このような困難性を克服するための試みにおいでは、新
しく製造したヘパリン溶液、特に、少なく七も一部がカ
ルシウムから形成される生理学的に許容し得る金属のヘ
パリン塩の溶液をむしろ長く貯蔵して、次いで溶液を更
に処理する萌、例えば溶液をアンプルもしくは処方注射
器に分与する前に、生じた沈澱を濾過する。In an attempt to overcome these difficulties, freshly prepared heparin solutions, especially solutions of physiologically acceptable metal heparin salts formed at least in part from calcium, may be stored for longer periods of time. The resulting precipitate is then filtered before further processing of the solution, eg, before dispensing the solution into ampoules or prescription syringes.

予備貯蔵時間が長ければ長いほど最終的な医薬製剤の製
造が経済的でなくなることは明らかであろう。It will be clear that the longer the pre-storage time, the less economical the production of the final pharmaceutical formulation will be.

従って、本発明の目的は、上記困難性の全てを本質的に
克服することであり、即ち、本発明の特定の目的は、長
い貯蔵寿命を有する溶液、特に注射可能な溶液の調製に
使用し得る注射可能な品質を有するヘパリンを提供する
ことである。本発明の別の目的は、このようなヘパリン
を得るための方法を提供することであり、この方法では
上述したようなタイプの予備貯蔵処理を必要としない。It is therefore an object of the present invention to essentially overcome all of the above-mentioned difficulties, namely, a particular object of the invention is to provide solutions for use in the preparation of solutions, in particular injectable solutions, with a long shelf life. The objective is to provide heparin with injectable quality that can be obtained. Another object of the invention is to provide a method for obtaining such heparin, which does not require pre-storage treatment of the type described above.

実際、上述した困難性の大部分は、注射可能な品質を有
するヘパリンの溶液中に種々の性質を有する鉱物塩が様
々な１ｔ（２，５重量％まで）で存在するためであると
いうことが判明した。この鉱物塩の存在は、試験したバ
ッチのオリジン（ｏｒｉｇｉｎ）、天然の採取源からの
抽出方法のオリジン、及び／又は得られる天然ヘパリン
を変色（即ち、白色化）して注射可能な品質を有するヘ
パリンに通常必要とされる無色標準に合致させるための
方法のオリジンに依存する。尤も、鉱物塩の上記の含有
量は今日の規制（例えば、フランスＣ０ＤＥＸの標準）
によって許容される範囲内にある。In fact, it is believed that most of the above-mentioned difficulties are due to the presence of mineral salts with different properties in varying amounts (up to 2,5% by weight) in solutions of heparin of injectable quality. found. The presence of this mineral salt may change the origin of the tested batch, the origin of the extraction method from natural sources, and/or discolor (i.e., whiten) the resulting natural heparin to give it injectable quality. It depends on the origin of the method to match the colorless standards normally required for heparin. However, the above content of mineral salts does not comply with today's regulations (e.g. French C0DEX standard).
within the range allowed by.

残留塩の大部分は、夫々が１％までの量の塩素酸塩及び
硫酸塩によって構成される。他の塩、特に炭酸塩、亜硫
酸塩はより少ない割合で存在する。The majority of the residual salts are constituted by chlorate and sulfate, each in amounts up to 1%. Other salts, especially carbonates and sulfites, are present in smaller proportions.

硫酸カルシウム、亜硫酸カルシウム及び炭酸カルシウム
の低い溶解度を考慮すると、例えば上述した方法によっ
てヘパリンのナトリウム塩をヘパリンのカルシウム含有
塩に変換すると、これらの塩の割合が減るはずである。Considering the low solubility of calcium sulfate, calcium sulfite and calcium carbonate, converting the sodium salt of heparin to the calcium-containing salt of heparin, for example by the method described above, should reduce the proportion of these salts.

実際、前記カルシウム塩はヘパリンのカルシウム含有塩
の澄明溶液から固体として分離可能である。In fact, the calcium salt can be separated as a solid from a clear solution of the calcium-containing salt of heparin.

しかしながら、最も驚くべきことに、特に上記方法によ
るナトリウムヘパリネートのカルシウムヘバリネートへ
の変換の終了時、上記残留鉱物塩の含量は出発ナトリウ
ムヘパリネートの前記含量に比して殆ど変化していない
ということが観察された。Most surprisingly, however, especially at the end of the conversion of sodium heparinate to calcium heparinate by the method described above, the content of the residual mineral salts remains almost unchanged compared to the content of the starting sodium heparinate. It was observed that

更に驚くべきことには、少なくとも一部がカルシウムで
形成される金属を含有する塩を包含するヘパリンの塩が
、少量であるが無視できない量のシュウ酸イオンを尚も
含有しているにもかかわらず、透明な水溶液の形態で溶
解可能であるということが判明した。このことは、カル
シウムのような金属のシュウ酸塩は周知のように非常に
水不溶性であるのであるからとりわけ予想に反すること
であった。It is even more surprising that heparin salts, including metal-containing salts formed at least in part by calcium, still contain small but non-negligible amounts of oxalate ions. It has been found that it can be dissolved in the form of a clear aqueous solution. This was particularly unexpected since oxalates of metals such as calcium are well known to be highly water insoluble.

この挙動の理由は未だに十分に解明されていないが、特
に塩化カルシウムが過剰に存在する場合、シュウ酸カル
シウムの通常の溶解条件における変化が確認された。即
ち、市販の注射用ヘパリン又はヘパリネートは、１，０
乃至２．５重量％の範囲内で変化する残留塩含量を有し
得ることが判明した。Although the reasons for this behavior are still not fully understood, changes in the normal dissolution conditions of calcium oxalate were observed, especially when calcium chloride is present in excess. That is, commercially available injectable heparin or heparinate has a concentration of 1.0
It has been found that it is possible to have a residual salt content varying within the range from 2.5% to 2.5% by weight.

このような試料に関して多数の試験を行ったところ、該
試料のシュウ酸塩含有量が一貫して９０ｐｐｍより多い
ことが判明した。ある場合には、シュウ酸塩含有量が４
ｏｐｐｍであったが、この結果はむしろ誤りであること
が後に判明した。典型的には、市販の注射用ヘパリンに
おいては、シュウ酸塩含有量が９０乃至３００ｐｐｍで
あり、ときにはそれ以上である。Numerous tests were performed on such samples and the oxalate content of the samples was consistently found to be greater than 90 ppm. In some cases, the oxalate content is 4
oppm, but this result was later found to be rather erroneous. Typically, commercially available injectable heparin has an oxalate content of 90 to 300 ppm, and sometimes more.

処理済ヘパリンから鉱物塩、特に微争のシュウ酸塩を除
去すると、カルンウムヘパリネート溶１の調製後に該溶
液中に生じやすい混濁及び沈積が消失するということが
判明した。It has been found that the removal of mineral salts, particularly the minor oxalates, from the treated heparin eliminates the turbidity and deposits that tend to occur in the Carunum Heparinate Solution 1 after its preparation.

更に、シュウ酸イオン含有量が十分に小さくなっていれ
ば、長期貯蔵に際して、このような溶液中の準−可視可
能な粒子の（２乃至５０μの範囲の大きさを有する粒子
の検出用の粒子計数器のような通常の光学装置によって
検出できるような）実質的増加はないことが判明した。Furthermore, if the oxalate ion content is sufficiently low, it will be possible to reduce the particle size for the detection of sub-visible particles (with sizes ranging from 2 to 50 μm) in such solutions during long-term storage. It was found that there was no substantial increase (detectable by conventional optical equipment such as a counter).

後記するような本発明の精製方法によって処理されるカ
ルシウムもしくは混合カルシウムヘパリネート溶液は、
数ケ月の貯蔵後においてさえ澄明である。即ち、混濁も
しくは沈積はみられない。The calcium or mixed calcium heparinate solution treated by the purification method of the present invention as described below is
Clear even after several months of storage. That is, no turbidity or sedimentation is observed.

準−可視可能な粒子含量は長時間の貯蔵に際して増加す
ることがなく、このために前述した結晶合体の危険もま
た減少する。The quasi-visible particle content does not increase upon long-term storage, so that the risk of crystal coalescence mentioned above is also reduced.

本発明のヘパリンもしくはヘパリン塩は、このように、
残留鉱物塩、特にシュウ酸塩含量が十分に小さいので、
このようなヘパリン製品更に詳しくは、カルシウムヘパ
リネート溶液−一から出発して調製される注射可能溶液
は、このタイプの投与に通常用いられる濃度で数ケ月例
えば少なくとも６ケ月の貯蔵後においてさえも完全に澄
明のままであり得るようなものである。The heparin or heparin salt of the present invention is thus:
Since the residual mineral salts, especially oxalate content, are sufficiently small,
Such heparin products, more particularly, injectable solutions prepared starting from calcium heparinate solution, remain completely intact even after storage for several months, e.g. at least 6 months, at concentrations commonly used for this type of administration. It is possible for it to remain clear.

３０ｐｐｍ未満、好ましくは２０ｐｐｍ未満又はそれ以
下のンユウ酸イオンを含有する本発明のヘパリン塩は、
溶液、特に注射可能溶液の形態にし得、これらの溶液は
澄明であって、準−可視可能な粒子の含有量は、あった
としても、長期に亙る貯蔵に際して実質的に一定であり
、この貯蔵は、２年間程度、更に、３乃至５年間であっ
ても可能である。この貯蔵は、約２０〜２５℃の範囲内
のような室温でのものと理解されたい。Heparin salts of the invention containing less than 30 ppm, preferably less than 20 ppm or less of oxalate ions are
They may be in the form of solutions, particularly injectable solutions, which are clear and whose content of sub-visible particles, if any, remains substantially constant upon long-term storage; This is possible for about 2 years, or even for 3 to 5 years. This storage is understood to be at room temperature, such as within the range of about 20-25°C.

更に、本発明のヘパリン塩は、０．５％未満、好ましく
は０．３％未満の残留鉱物塩含量を有する。Furthermore, the heparin salts of the invention have a residual mineral salt content of less than 0.5%, preferably less than 0.3%.

“鉱物塩”という表現は、硫酸もしくは塩酸のような鉱
酸の塩に限定されるものではなく、シュウ酸もしくは炭
酸のような酸の塩又は酢酸のような低分子量有機酸の塩
でさえも包含する。このような塩は全てヘパリン塩では
ないと考えられる。The expression "mineral salts" is not limited to salts of mineral acids such as sulfuric or hydrochloric acids, but also salts of acids such as oxalic or carbonic acid or even salts of low molecular weight organic acids such as acetic acid. include. It is believed that all such salts are not heparin salts.

このようなヘパリン塩は、ヘパリン塩の金属の少なくと
も一部がカルシウムのように水溶性でないシュウ酸塩を
形成するものであっても、長期に亙って貯蔵又は保存さ
れる注射可能溶液の製造に使用できることが判明した。Such heparin salts, even if at least some of the metals in the heparin salts form oxalates, which are not water-soluble, such as calcium, can be stored or preserved for long periods of time in the production of injectable solutions. It turned out that it can be used for.

本発明は、また、通常の変色法、特に酸化法〈これらの
方法は、この方法で処理したヘパリンのシュウ酸塩含有
量を増加させやすいことが判明した）によって得られる
ようなひどく変色したヘパリン製品を含めた市販の製品
から本発明の精製ヘパリンを得るための方法をも提供す
る。The present invention also provides a method for discoloring heavily discolored heparin, such as that obtained by conventional discoloration methods, especially oxidation methods, which have been found to be prone to increasing the oxalate content of heparin treated with this method. Also provided are methods for obtaining purified heparin of the present invention from commercially available products, including products.

精製すべき出発ヘパリン調製品もしくは更に一般的には
、ヘパリンと他の塩（特に鉱物塩）との混合物に適用可
能な本発明の方法は、ヘパリン塩と残留鉱物塩との間の
溶解度差を用いる選択的沈澱を利用する。本発明の方法
は、ヘパリン−鉱物塩混合物を含有する水溶液にアルコ
ール（例えばエタノール）のような非イオン性沈澱剤の
一定量を添加して、ヘパリンもしくはヘパリン塩を選択
的に沈澱させ、一方、鉱物塩を水溶液中に残存させ、ヘ
パリンを回収し、必要に応じて、最終ヘパリン中のシュ
ウ酸塩の濃度が、多くの場合子くとも７０ｐｐｍである
が、好ましくは３０ｐｐｍ程度で、更に好ましくは２０
ｐｐｍ未満（長い貯蔵時間（例えば、２年間又は３乃至
５年間であっても）が必要であり且つ、沈澱が生じない
という点に関して全面的安全性がその期間に要求される
場合）となるまで、前記のように回収したヘパリンの新
しい水溶液に対して前記選択的分離を繰り返すことから
成る。本発明においては、（現在使用し得る技術によっ
て検出した場合）シュウ酸塩を痕跡だけで有するヘパリ
ンを得ることさえも意図されている。The method of the invention, which is applicable to the starting heparin preparation to be purified or more generally to mixtures of heparin and other salts (in particular mineral salts), allows the solubility differences between the heparin salts and the residual mineral salts to be Selective precipitation is used. The method of the present invention involves selectively precipitating heparin or heparin salts by adding a certain amount of a non-ionic precipitant, such as an alcohol (e.g. ethanol), to an aqueous solution containing a heparin-mineral salt mixture; The mineral salt remains in the aqueous solution and the heparin is recovered, optionally the concentration of oxalate in the final heparin is often at least 70 ppm, preferably around 30 ppm, more preferably 20
ppm (if long storage times (e.g. 2 years or even 3 to 5 years) are required and total safety in terms of no precipitation is required during that period) , repeating said selective separation on a fresh aqueous solution of heparin recovered as described above. In the present invention, it is even contemplated to obtain heparin having only traces of oxalate (as detected by currently available techniques).

本発明の方法の好ましい具体例によれば、用いるヘパリ
ンは金属（例えば、ナトリウム、リチウム、カリウム）
の塩の形態であって、そのシュウ酸塩はそれ自体水溶性
である。その後、実質的にンユウ酸塩が存在しない最終
精製ヘパリンの金属の代わりに、他の金属、特にカルシ
ウム（そのシュウ酸塩は水に不溶性である）のようなも
ので少なくとも部分的に置換することができ、又はマグ
ネシウムで置換することもできる。According to a preferred embodiment of the method of the invention, the heparin used is a metal (e.g. sodium, lithium, potassium).
The oxalate salt is itself water-soluble. Thereafter, the metal in the final purified heparin, which is substantially free of oxalate, is at least partially replaced by other metals, especially calcium, the oxalate of which is insoluble in water. or can be substituted with magnesium.

このような処理に使用されるヘパリン溶液の濃度は大き
く変化させることかできる。用いるエタノールの容量は
処理溶液の容量に比例するので、溶液を希釈しすぎない
ようにすることが実用上の理由から好ましい。等量のヘ
パリンに対しては、溶液を希釈すればするほど必要とさ
れるエタノールの量が大きくなる。反対に、ヘパリン溶
液は、粘度が急速に増加するのである良度を超えてはな
らず、また、このような溶液を用いると生ずるヘパリン
の沈澱中には、分離すべき出発不純物が大量に混入して
しまうであろう。The concentration of heparin solutions used in such treatments can vary widely. Since the volume of ethanol used is proportional to the volume of the processing solution, it is preferable for practical reasons not to dilute the solution too much. For an equal amount of heparin, the more dilute the solution, the greater the amount of ethanol required. Conversely, heparin solutions must not exceed a certain quality because the viscosity increases rapidly, and the resulting heparin precipitation with such solutions contains large amounts of the starting impurities to be separated. I would probably end up doing that.

これらの条件を考慮して、本発明の方法は、良度が注射
に通常用いられる溶液の濃度程度である、即ち、約４０
乃至約２５０ｇ／乏（約５，０００乃至３０，０ＯＯＩ
Ｕ／−に相当）のナトリウムヘパリネートを含有する溶
液に対して適用するのが有利である。Considering these conditions, the method of the present invention has a quality of about the concentration of solutions commonly used for injections, i.e. about 40
~250g/lack (approx. 5,000~30,0OOI)
Advantageously, it is applied to solutions containing sodium heparinate (corresponding to U/-).

溶液のｐＨは精製の結果に影響を及ぼす。酸溶液は、溶
液中に鉱物塩、特にシュウ酸塩をむしろ保持するもので
あり、従って、分離を改善する。The pH of the solution affects the results of purification. Acid solutions rather keep mineral salts, especially oxalates, in solution, thus improving separation.

また、ヘパリンは強酸により影響を受は得る。Heparin can also be affected by strong acids.

ｐｌ＋が３．５より大きい溶液、好ましくは５乃至７の
ｐＨの溶液が有利に用いられる。Solutions with a pl+ greater than 3.5, preferably with a pH of 5 to 7, are advantageously used.

このように調製したヘパリン溶液に十分な量のエタノー
ルを添加すると、実際止金てのヘパリンが沈澱し、一方
、鉱物塩は水性アルコール溶液中に残存する。１容量の
ヘパリン溶液に対しては、０．５乃至１．５容量のエタ
ノールを用いることが好ましい。Addition of a sufficient amount of ethanol to the heparin solution thus prepared causes the actual heparin to precipitate, while the mineral salts remain in the aqueous alcoholic solution. Preferably, 0.5 to 1.5 volumes of ethanol are used for 1 volume of heparin solution.

好ましくは、実際上純粋な中性アルコール（９９乃至Ｌ
ＯＧ’　ＧＬ）が採用される。Preferably, practically pure neutral alcohol (99-L
OG' GL) will be adopted.

ヘパリンの沈澱を、上澄液から分離し、次いで混練し、
残存する溶液を全て除去するために洗浄する。洗浄は無
水アルコールで行うのが好ましい。The heparin precipitate is separated from the supernatant and then kneaded;
Wash to remove any remaining solution. Preferably, washing is carried out with absolute alcohol.

次いで、ヘパリンを濾過して乾燥する。The heparin is then filtered and dried.

これらの最初の分離が不完全の場合には、上記要求に合
致するヘパリン塩が得られるまで、ヘパリンの沈澱に対
してこの処理を繰り返すとよい。If these initial separations are incomplete, this process may be repeated on the heparin precipitate until a heparin salt meeting the above requirements is obtained.

出発ヘパリンの大部分が上記の沈澱中に回収され、残余
か水性アルコール溶液中に残存する。新しいヘパリンの
沈澱を得るために、後者のものを別のアルコールで処理
してもよい。Most of the starting heparin is recovered in the precipitation described above, with the remainder remaining in the hydroalcoholic solution. The latter may be treated with another alcohol to obtain a fresh heparin precipitate.

本発明の精製方法は、市販のヘパリン（出所起源の如何
にかかわらず）が含有する遊離のシュウ酸塩を除去する
あらゆる場合に適用可能であることが判明した。It has been found that the purification method of the present invention is applicable in all cases where commercially available heparin (regardless of its origin) contains free oxalate.

しかしながら、この方法によると、相当するシュウ酸塩
が水溶性であるナトリウムのような金属のヘパリン塩に
適用した場合には、３０ｐｐｍ未満、更には２０ｐｐｍ
未満を含有するヘパリンが得られるまで、どんな測定可
能な遊離のシュウ酸塩をも確かに除去できるが、ある場
合には、このようなヘパ・リン塩を少なくとも部分的に
カルシウム（そのシュウ酸塩は不溶性である）のような
金属の１つに変換すると、得られる生成物が多量の遊離
シュウ酸塩を含有するということが最終的に判明した。However, according to this method, when applied to heparin salts of metals such as sodium, where the corresponding oxalate is water-soluble, less than 30 ppm, or even 20 ppm
Although it is certainly possible to remove any measurable free oxalate until a heparin containing less than It was finally found that when converted to one of the metals, such as (insoluble), the resulting product contained a large amount of free oxalate.

この段階においては、これらの現象を解明するために何
らの科学的説明も提供されないが、ある起源の市販ヘパ
リンに含有されるシュウ酸塩の一部が、あたかもヘパリ
ン分子に吸収もしくは固定されるように機能して、次い
でこの分子が明らかに陰イオン交換体として作用するも
のと推定される。従って、これらの現象の結果として、
最終のヘパリン塩は、長期間に亙る貯蔵が可能なヘパリ
ンの注射可能溶液の製造にはもはや適当ではないものと
なる。At this stage, no scientific explanation has been provided to elucidate these phenomena, but it appears as if some of the oxalate contained in commercially available heparin of some origin is absorbed or fixed into heparin molecules. It is assumed that this molecule then apparently acts as an anion exchanger. Therefore, as a result of these phenomena,
The final heparin salt is no longer suitable for the production of injectable solutions of heparin that can be stored for extended periods of time.

しかしながら、この困難性は本発明の更に改良された方
法の場合には克服され得ることが判明した。この方法は
、上記精製工程における非イオン性ヘパリン沈澱剤を、
精製すべき出発ヘパリン水溶液（又はヘパリン−鉱物塩
混合物の水溶液：これは、咀らかに最初に固定もしくは
吸収されたシュウ酸塩を含めて、シュウ酸塩以外の水溶
性鉱物塩を、シュウ酸塩の分離を促進するのに十分な濃
度で含有する）と接触させることから成る。上記固定も
しくは吸収されたシュウ酸塩は、次いで遊離されて、ヘ
パリン塩の次の沈澱に際して水溶液中に残存しヘパリン
塩の次の沈澱に供される。However, it has been found that this difficulty can be overcome in the case of the further improved method of the invention. In this method, the nonionic heparin precipitant in the above purification step is
The starting aqueous heparin solution (or aqueous heparin-mineral salt mixture) to be purified: This removes water-soluble mineral salts other than oxalate, including the oxalate that was initially fixed or absorbed in the masticate. (containing the salt in a sufficient concentration to promote separation of the salt). The fixed or absorbed oxalate is then liberated and remains in the aqueous solution during the subsequent precipitation of the heparin salt.

このように、精製すべきヘパリン溶液中に存在する他の
塩のあるものは、溶液中のそれ自身の濃度を適当に調整
すると、適切であれば、シュウ酸イオンの更に完全な抽
出を可能とする。Thus, some of the other salts present in the heparin solution to be purified can, if appropriate, permit a more complete extraction of oxalate ions by suitably adjusting their concentration in the solution. do.

即ち、本発明方法の好ましい具体例に於いては、ヘパリ
ンの出発水溶液と上記した非イオン性ヘパリン沈澱剤と
を接触させる前に、当該ヘパリンの出発水溶液中の前記
水溶性鉱物塩の濃度を予め調整することが通常要求され
る。That is, in a preferred embodiment of the method of the present invention, the concentration of the water-soluble mineral salt in the starting aqueous heparin solution is adjusted in advance before contacting the starting aqueous heparin solution with the nonionic heparin precipitant described above. Adjustment is usually required.

事実、十分な濃度特に二価アニオンかろ成る塩及び好ま
しくは一価アニオンから成る塩の十分な濃度は、あたか
もそれらがヘパリンに吸着又は固定されたノユウ酸塩の
置換を惹起するかの如く挙動を示すことが知見されてい
る。In fact, a sufficient concentration, especially of salts comprising divalent anions and preferably salts comprising monovalent anions, will cause them to behave as if they cause displacement of the oxalates adsorbed or immobilized on heparin. It has been found that

必要であれば、最終ヘパリン中の全シュウ酸塩農産が３
０ｐｐｍ未満、好ましくは２０ｐｐｍ未満にまでなるよ
うに、上記の定義の如く調整された濃度のシュウ酸塩以
外の水溶性鉱物塩及び前記のように回収されたヘパリン
から成る溶液を再接触させる沈澱段階を繰り返すことが
適当である。If necessary, the total oxalate yield in the final heparin is
a precipitation step of re-contacting a solution consisting of a water-soluble mineral salt other than oxalate and the heparin recovered as described above at a concentration adjusted as defined above to be less than 0 ppm, preferably less than 20 ppm; It is appropriate to repeat.

好ましくは、シュウ酸塩以外の二価アニオンを有する塩
の金属は、出発ヘパリン溶液中に含まれているか又は該
溶液に添加され得るものであり、そのシュウ酸塩が水溶
性であるような金属を含む群から選択されるものである
。炭酸塩、特に炭酸ナトリウムが、本発明方法において
最も効果的な塩であることが判明した。Preferably, the metal of the salt with a divalent anion other than oxalate is one that is included in or can be added to the starting heparin solution and is such that the oxalate is water-soluble. selected from the group including. Carbonates, particularly sodium carbonate, have been found to be the most effective salts in the process of the invention.

また、上記溶液中のヘパリンも鉱物塩の金属と同じ金属
のヘパリン塩の形態にあることが好ましい。そうすると
、ヘパリン塩の金属が鉱物塩中に含まれる金属で交換さ
れる可能性が避けられるので、精製ヘパリン塩の金属含
量は閉鎖制御（ｃｌｏｓｅｃｏｎｔｒｏｌ）下に保持さ
れることになる。Further, it is preferable that the heparin in the solution is also in the form of a heparin salt of the same metal as the metal of the mineral salt. The metal content of the purified heparin salt will then be kept under close control, since the possibility of exchange of the metal of the heparin salt with metals contained in the mineral salt is avoided.

アルコールの如き非イオン性沈澱剤と接触させられる溶
液中の前記鉱物塩の濃度を、ヘパリンの重量に対し、０
．３乃至２．５％、例えば約０，５％の値に調整すると
有利である。The concentration of the mineral salt in the solution that is brought into contact with a non-ionic precipitant, such as alcohol, is adjusted to 0, relative to the weight of heparin.
．． It is advantageous to adjust the value to a value of 3 to 2.5%, for example approximately 0.5%.

出発溶液もまた同様に、そのシュウ酸塩が水溶性である
少なくとも１つの金属の一価アニオンを有する塩を含有
すると有利である。塩化ナトリウムはそのような塩の代
表例である。本発明方法の好ましい態様においては、前
記−価基の濃度は、溶液中１乃至７重量／容量％の範囲
、例えば約２．５重量／容量％であるか、又はこの濃度
に調整する。It is advantageous if the starting solution likewise contains a salt with at least one monovalent anion of a metal, the oxalate of which is water-soluble. Sodium chloride is a typical example of such a salt. In a preferred embodiment of the method of the invention, the concentration of the -valent groups is or is adjusted to a concentration in the range of 1 to 7% w/v, for example about 2.5% w/v in solution.

必須ではないが、非イオン性沈澱剤と接触させられる溶
液のｐＨが７乃至１０、例えば約８．５であると有利で
あることが判明した。これは、使用される二価アニオン
を有する塩が炭酸ナトリウムである場合、自発的に達成
されるｐＨに他ならない。Although not essential, it has been found advantageous if the pH of the solution contacted with the non-ionic precipitant is between 7 and 10, for example about 8.5. This is the pH that is achieved spontaneously if the salt with divalent anions used is sodium carbonate.

二価及び／又は−価アニオンを有するこれらの塩は、本
発明方法の最終段階、例えばヘパリン溶液と非イオン性
沈澱剤との最終接触段階で容易に除去され得る。例えば
塩化水素酸を用いて、炭酸塩を分解するのに十分な若干
酸性値、特に３乃至７の範囲にｐＨを調整すると有利で
ある。最終ヘパリン塩が沈澱すると、塩素イオンは水溶
液中に残存する。These salts with divalent and/or -valent anions can be easily removed in the final step of the process, for example in the final contact of the heparin solution with the non-ionic precipitant. It is advantageous to adjust the pH, for example using hydrochloric acid, to a slightly acidic value, in particular in the range 3 to 7, sufficient to decompose the carbonate. When the final heparin salt precipitates, the chloride ions remain in the aqueous solution.

実質的にシュウ酸塩を含有しないヘパリン組成物、特に
ヘパリン塩がこのようにして得られる。A substantially oxalate-free heparin composition, in particular a heparin salt, is thus obtained.

このヘパリン組成物（塩）は、該ヘパリン塩の金属カヂ
オンの少なくとも一部分がカルシウムのような金属（そ
のシュウ酸塩は非常に不溶性である）で形成されている
場合でさえも、薬剤組成物特に長期の貯蔵寿命を有する
注射可能な又は潅注可能な溶液の製造にそのままで適す
るか、又は有利には前記英国特許第１，４７１，４８２
号の方法に従って（ｐ′Ｊ論必ずしも該方法に従う必要
はない）このヘパリン組成物が含有している金属カチオ
ンの少なくとも一部を置換して、実質的にシュウ酸塩を
含有しない他のヘパリン塩を得るための出発ヘパリン塩
として適しており、次いでこの他のヘパリン塩から長期
の貯蔵寿命を有する薬剤組成物が得られる。This heparin composition (salt) is suitable for use in pharmaceutical compositions, especially when at least a portion of the metal cations of the heparin salt are formed of a metal such as calcium, the oxalate of which is highly insoluble. Suitable as such for the production of injectable or irrigable solutions with a long shelf life or advantageously as described in British Patent No. 1,471,482
At least a portion of the metal cations contained in this heparin composition are replaced by other heparin salts that are substantially free of oxalate according to the method of No. It is suitable as a starting heparin salt to obtain from this other heparin salts a pharmaceutical composition with a long shelf life.

即ち本発明は、シュウ酸塩非含有のヘパリン製剤のうち
、特に、ヘパリンの金属塩、即ちヘパリンのナトリウム
、カリウム、カルシウムもしくはマグネシウム塩の如き
ヘパリンの単−塩、又は任意の相対比で上記金属カチオ
ンの少な（とも２つを含有するヘパリンの混合塩に係る
。本発明のこれらのヘパリン塩は全て実質的にシュウ酸
塩を含有しないものであり、即ち、全シュウ酸塩含量は
、多くの場合７０ｐｐｍ未満であるが３０ｐｐｍ程度に
低く、好ましくは２０ｐｐｍ未満である（以後、シュウ
酸塩非含有ヘパリンと称す）。前記混合塩のうち、ナト
リウム及びカルシウムを含む好ましい一連の混合塩を選
択し得る。Thus, the present invention provides oxalate-free heparin preparations, particularly metal salts of heparin, i.e., mono-salts of heparin, such as sodium, potassium, calcium or magnesium salts of heparin, or the above-mentioned metals in any relative ratio. These heparin salts of the present invention are all substantially oxalate-free, i.e. the total oxalate content is much lower than the cation content. less than 70 ppm, but as low as 30 ppm, preferably less than 20 ppm (hereinafter referred to as oxalate-free heparin). Among the mixed salts, a preferred series of mixed salts containing sodium and calcium may be selected. .

本発明は、又、シュウ酸塩非含有ヘパリンを薬剤賦形剤
と共に含有する医薬製剤に係り、特に、少なくとも１２
０国際単位（１０）／ｍｇ、好ましくは１５０１Ｕ／ｍ
ｇより高い活性を有し、発熱物質を含有せず且つシュウ
酸塩非含有の好ましくは無色のヘパリン製剤に係り、更
に、血液凝固の治療に有用な高濃度ヘパリン溶液、特に
５，０００乃至３５，０００１Ｕ／ｍｅ、好ましくは２
０，０００乃至３０．０００１Ｕ／ｍｌ！、例えば２５
．０００１Ｕ／ｍｆのヘパリンを含有する皮下注射に適
するシュウ酸塩非含有の好ましくは無色の溶液、又は、
１，０００乃至１０，０００１０／ｒｄ、例えば５，０
００１Ｕ／−のヘパリンを含有する静脈注射に適するシ
ュウ酸塩非含有溶液等に係るものである。The present invention also relates to pharmaceutical formulations containing oxalate-free heparin together with pharmaceutical excipients, in particular at least 12
0 international units (10)/mg, preferably 1501 U/m
pyrogen-free and oxalate-free, preferably colorless heparin preparations having an activity greater than ,0001 U/me, preferably 2
0,000 to 30.0001U/ml! , for example 25
．． an oxalate-free, preferably colorless solution suitable for subcutaneous injection containing 0001 U/mf of heparin, or
1,000 to 10,00010/rd, for example 5,0
The invention relates to an oxalate-free solution suitable for intravenous injection containing 0.001 U/- of heparin.

前記製剤のヘパリンは、１種又は数種の金属カチオンを
含むヘパリンの生理的に許容し得る金属塩の形態にある
と有利である。好ましくは、該金属は少なくとも一部が
カルシウムである。カルシウムが該ヘパリン塩の唯一の
金属であると有利である。医薬製剤が、随時使用し得る
ように処方済使い捨て注射器（ｄｉｓｐｅｎｓａｂｌｅ
　ｓｙｒｉｎｇｅ）として提供されると有利である。Advantageously, the heparin of the formulation is in the form of a physiologically acceptable metal salt of heparin containing one or more metal cations. Preferably, the metal is at least partially calcium. Advantageously, calcium is the only metal of the heparin salt. Pharmaceutical preparations are stored in pre-prescribed disposable syringes for occasional use.
Advantageously, it is provided as a syringe.

本発明はまた、ヒトの血液凝固の制御方法に係る。該方
法は、本発明のシュウ酸塩非含有ヘパリンの有効量をヒ
トに投与することから成り、例えば、患者のトロンビン
の状態（ｔｈｒｏｍｂｏｌｉｃ　５ｔａｔｅ）に応じて
１日２回皮下注射により１３，５００乃至５０，０００
１０を投与する。又は１日に亙り均等に静脈経路（調整
した潅注が有利である）を介して２４時間当たり２０．
０００乃至５０．０００１０を投与する。或いは又、筋
肉内径路を介して１週間３回５，０００乃至１０．００
０１Ｕ投与することも有利である。The invention also relates to a method for controlling blood coagulation in humans. The method consists of administering to a human an effective amount of oxalate-free heparin of the invention, e.g. 50,000
Administer 10. or 20.0 mg per 24 hours via the intravenous route (adjusted irrigation is advantageous) evenly throughout the day.
000 to 50.00010. Alternatively, 5,000 to 10,000 3 times per week via the intramuscular route
It is also advantageous to administer 01U.

本発明の精製ヘパリンは、通常の投与量及び濃度条件下
での注射可能溶液の調製に直接使用され得る。また、例
えば英国特許第１，４７１，４８２号に開示の方法に従
って、カルシウムヘパリネート又はカルシウム−マグネ
シウム、カルシウム−ナトリウム混合塩の如き他の塩の
調製用出発材料として使用することもできる。The purified heparin of the present invention can be used directly in the preparation of injectable solutions under conventional dosage and concentration conditions. It can also be used as a starting material for the preparation of calcium heparinate or other salts such as calcium-magnesium, calcium-sodium mixed salts, for example according to the method disclosed in British Patent No. 1,471,482.

ヘパリンの好ましい精製方法の第１例 注射可能ナトリウムヘパリネートの好ましいアルコール
分別精製方法に於いて、注射可能な品質を有するウシ又
はブタ由来のナトリウムヘパリンを使用する。このヘパ
リン製剤を鉱物除去水（３００，０００乃至ａｏｏ、ｏ
ｏｏΩ／ｃｍ、好ましくは５００．０００Ω／ｃｍの比
抵抗を有する）中に溶解させる。First Example of a Preferred Purification Process for Heparin In a preferred alcohol fractional purification process for injectable sodium heparinate, bovine or porcine sodium heparin of injectable quality is used. This heparin preparation was mixed with mineral-free water (300,000 to 300,000 aoo, o
ooΩ/cm, preferably 500.000 Ω/cm).

ヘパリネート溶液の濃度を５，０００乃至３０．０００
１０／Ｔｎ１、好ましくは２５，０００１０／ｒｒｆｌ
に調整する。０．３％メタクレゾールを加えて汚染を防
止する。試薬級５Ｎナトリウム溶液又は試薬級５Ｎ塩化
水素酸溶液を添加して、溶液のｐｉ（を５乃至７好まし
くは６．５に維持する。溶液の電気伝導率を７，０００
乃至１５，０００μＭｈｏｓ−ｃｍに保持する。The concentration of heparinate solution is 5,000 to 30,000.
10/Tn1, preferably 25,00010/rrfl
Adjust to. Add 0.3% metacresol to prevent contamination. Add a reagent-grade 5N sodium solution or a reagent-grade 5N hydrochloric acid solution to maintain the solution's p.i. between 5 and 7, preferably 6.5.
to 15,000 μMhos-cm.

０．７容量の中性エチルアルコール（９９乃至１００゜
ＧＬ）を上記のように調製したヘパリネート溶液に加え
る。沈澱を生起させ、必要なら少量の塩化ナトリウムを
加えてもよい。Add 0.7 volume of neutral ethyl alcohol (99-100° GL) to the heparinate solution prepared above. Precipitation may occur and a small amount of sodium chloride may be added if necessary.

沈澱物を上澄液から分離する。この沈澱物を前記鉱物除
去水に再溶解し、約１２．５００１０／ｍｆＪ濃度の溶
液を得る。必要に応じ、５Ｎ　ＮａＯＨ又は５ＮＨＣ！
溶液を使用して、ｐＨを５．５に調整する。溶液を０．
３μのミリポアフィルタで濾過する。１容量の溶液に対
し１．２容量の中性エチルアルコール（９９−１００°
ＧＬ）を攪拌しながら加える。沈澱を生起させ、必要に
応じ少量の塩化ナトリウムを加える。Separate the precipitate from the supernatant. This precipitate is redissolved in the mineral-free water to obtain a solution with a concentration of about 12.50010/mfJ. 5N NaOH or 5NHC as necessary!
Adjust the pH to 5.5 using the solution. The solution was reduced to 0.
Filter through a 3μ Millipore filter. 1.2 volumes of neutral ethyl alcohol (99-100°
GL) while stirring. Allow precipitation to occur and add a small amount of sodium chloride if necessary.

このようにして得られたヘパリン沈澱物を、無水エチル
アルコール中で粉砕することにより脱水し、工業用ブフ
ナーで真空下に濾過し、無水アルコールで洗浄後、温度
３５／４０℃、ｌ　Ｔｏｒｒの減圧下で乾燥する。The heparin precipitate thus obtained was dehydrated by trituration in absolute ethyl alcohol, filtered under vacuum on an industrial Buchner and washed with absolute alcohol at a temperature of 35/40°C and a vacuum of l Torr. Dry underneath.

更に沈澱を必要とする場合は、第２の沈澱段階即ち、ヘ
パリン濃度１２，５００１Ｕ／ｍｆ）、　ｐ）１５．５
及び１容量の溶液に対し１，２容蛍の無水アルコールの
添加の条件下で前記と同様の沈澱を繰り返せばよい。If further precipitation is required, a second precipitation step, i.e. heparin concentration 12,5001 U/mf), p) 15.5
The same precipitation as above may be repeated under the conditions of adding 1 to 2 volumes of absolute alcohol to 1 volume of the solution.

ウシ又はブタ由来の注射可能品質を有するヘパリンのナ
トリウム塩を３００，０００乃至８００，０００　ｏｈ
ｍｓ、好ましくは５００，０００　ｏｈｍｓの抵抗を有
する鉱物除去水に溶解し、ｓ、ｏｏｏ乃至３０，０００
１０／蛯、好ましくは２ｓ、ｏｏｏ＋ｕ／ｍ１７のヘパ
リン濃度の溶液を得る。メタクレゾールを３／１，００
０濃度になるように加える。300,000 to 800,000 oh of heparin sodium salt of injectable quality of bovine or porcine origin.
s, ooo to 30,000 ohms, preferably dissolved in demineralized water with a resistance of 500,000 ohms.
A solution with a heparin concentration of 10/l, preferably 2s, ooo+u/m17 is obtained. Metacresol 3/1,00
Add so that the concentration is 0.

炭酸ナトリウム溶液（最初のヘパリン型中に対して０．
５％の割合の無水炭酸ナトリウム）を加え、溶液のｐｌ
［を７乃至１０好ましくは８．５に調整する。Sodium carbonate solution (0.0% in the original heparin type)
5% proportion of anhydrous sodium carbonate) and pl of the solution
[Adjust to 7 to 10, preferably 8.5.

この時点で、溶液の電気伝導度は７，０００乃至１５．
０００μＭｈｏｓ／ａｍの範囲になる。次いで、塩化ナ
トリウムの結晶を２．５％（重量／容量）の割合で溶液
に加える。次に、ヘパリン溶液の容量に対し、０．７容
量の中性エチルアルコール（９９乃至１００°ＧａｙＬ
ｕｓｓａｃ　ｄｅｇｒｅｅｓと滴定される）を攪拌しな
がら加える。６時間静置の後、ヘパリン沈澱物を集める
。At this point, the electrical conductivity of the solution is between 7,000 and 15.
000 μMhos/am. Then, sodium chloride crystals are added to the solution at a rate of 2.5% (w/v). Next, 0.7 volume of neutral ethyl alcohol (99-100°GayL) was added to the volume of heparin solution.
(titrated with ussac degrees) is added with stirring. After standing for 6 hours, collect the heparin precipitate.

第２アルコール分別 このようにして得られたヘパリン沈澱物を再び前記鉱物
除去水に溶解し、約１２，５００１ｔｌ／ｍｎの濃度の
溶液を得る。この時点でｐＨは約８．５である。次いで
、溶液に対し２．５％（重量／容量）の割合で塩化ナト
リウム結晶を加える。攪拌しながら、９９乃至１００°
ＧＬの中性エチルアルコールの１容量を加える。Second alcohol fractionation The heparin precipitate thus obtained is dissolved again in the demineralized water to obtain a solution having a concentration of about 12,5001 tl/mn. At this point the pH is approximately 8.5. Then, sodium chloride crystals are added at a rate of 2.5% (weight/volume) to the solution. 99-100° while stirring
Add 1 volume of GL neutral ethyl alcohol.

この媒質を１２時間放置し、新しく沈澱したヘパリンを
集める。The medium is allowed to stand for 12 hours and the newly precipitated heparin is collected.

上記した「第２アルコール分別」を上記条件下で３回繰
り返す。即ち、前記第２アルコール分別を全部で４回実
施する。第４回目のアルコール分別から得られる沈澱物
を、前記鉱物除去水に再度溶解し、約１２．５００１１
１／ｍ＆の濃度の溶液を得る。激しく攪拌しながら、塩
化水素酸を使用してｐｌを３に調整する。次いでこの攪
拌を更に１５分間続ける。更に、５Ｎ水酸化ナトリウム
を使用してｐＨを５５に調整する。塩化ナトリウム結晶
を２．５％（重量／害虫）の割合で加え、得られた溶液
を０．３μミリボアメンプランで濾過する。９９乃至１
００°ＧＬの中性エチルアルコール１重量／容量を攪拌
しながらｐ液に加える。The above-described "secondary alcohol fractionation" is repeated three times under the above conditions. That is, the second alcohol fractionation is performed a total of four times. The precipitate obtained from the fourth alcohol fractionation was redissolved in the mineral-removed water, and approximately 12.50011
A solution with a concentration of 1/m& is obtained. With vigorous stirring, adjust the pl to 3 using hydrochloric acid. This stirring is then continued for a further 15 minutes. Additionally, the pH is adjusted to 55 using 5N sodium hydroxide. Sodium chloride crystals are added at a rate of 2.5% (wt/pest) and the resulting solution is filtered through a 0.3 μm millibore membrane run. 99 to 1
Add 1 weight/volume of 00°GL neutral ethyl alcohol to the p-liquid with stirring.

この媒質を１２時間静置する。This medium is allowed to stand for 12 hours.

得られたヘパリン沈澱物を、無水エチルアルコール中で
粉砕することにより脱水し、真空下に濾過する。最後に
無水アルコールで洗浄し、温度３５７４０℃及びｌ　Ｔ
ｏｒｒの減圧下で乾燥する。このようにして注射可能ヘ
パリンのナトリウム塩が得られ、当該ヘパリン中の全鉱
物塩の割合は０．５％未満でぁす、全ソユウ酸塩の割合
は最大２０ｐｐｍに等しいか又はそれよりし少ない。The resulting heparin precipitate is dehydrated by trituration in absolute ethyl alcohol and filtered under vacuum. Finally, wash with absolute alcohol, temperature 35740℃ and l T
Dry under vacuum at orr. In this way, an injectable sodium salt of heparin is obtained, in which the proportion of total mineral salts is less than 0.5%, the proportion of total solute salts being at most equal to or less than 20 ppm. .

実施例１ 本実施例に於いては、市販の１６０１０／ｍｇナトリウ
ムヘパリネートを使用する。Example 1 In this example, commercially available 16010/mg sodium heparinate is used.

鉱物塩の全含量は２．５％であり、ノユウ酸塩含里は約
２２０ｐｐｍ（即ち、００２２％）である。The total content of mineral salts is 2.5% and the oxalate content is about 220 ppm (i.e. 0.022%).

３００２のスチール−非酸化反応器（Ｓｔｅｅｌ−ｉｎ
ｏｘｒｅａｃｔｏｒ）中で、このヘパリネー　ト１０，
０００ｇを５００．０００Ω／ｃｍの比抵抗を有する５
０２の鉱物除去水に溶解する。この水は、予めミリボア
メンプラノ０．２２μで濾過されたものである。3002 Steel-in non-oxidizing reactor
This heparinate 10,
000g with a resistivity of 500.000Ω/cm5
Dissolved in 02 mineral-free water. This water had previously been filtered with Millibore Memplano 0.22μ.

１時間攪拌を行って、溶解を完全にする。ｐＨを測定し
、５ＮのＮａＯＨ又は５ＮのＨＣｌを加えて６５に調整
する。上記と同じ鉱物除去水を加えて、容積を６４１に
する。電気伝導率を測定すると、１５，０００ｇＭｈｏ
ｓ／ｃｍである。温度を１５乃至３０°Ｃに保持してお
く。Stir for 1 hour to ensure complete dissolution. Measure the pH and adjust to 65 by adding 5N NaOH or 5N HCl. Add the same demineralized water as above to bring the volume to 641. When measuring the electrical conductivity, it is 15,000gMho
s/cm. Keep the temperature between 15 and 30°C.

最初の溶液ｌ容積に対し、新たに蒸留しｆこメタクレゾ
ール＋９２ｄと中性エチルアルコール（９９／１００°
ＧＬ）０．７容屯即ち４４．８１とを加える。溶液を沈
澱か生ずるまで放置する。この際、必要に応し少量の塩
化ナトリウムを添加中る。上澄液及び沈澱したナトリウ
ムヘパリネートをそれぞれ分離回収する。回収ナトリウ
ムヘパリネート中の鉱物塩自互は０５％未満であるが、
約２００ｐｐｍの７ユウ酸イオンが依然として存在して
いる。To 1 volume of the initial solution, freshly distilled m-cresol + 92d and neutral ethyl alcohol (99/100°
GL) 0.7 tonne or 44.81 tonne. The solution is allowed to stand until a precipitate forms. At this time, a small amount of sodium chloride is added if necessary. The supernatant liquid and precipitated sodium heparinate are separated and recovered. Although the mineral salt content in the recovered sodium heparinate is less than 0.5%,
Approximately 200 ppm of 7-oxalate ions are still present.

このナトリウムヘバリネートを再び５００．０００Ω／
′ｃｍ比抵抗の前記鉱物除去水５０２中に溶かす。必要
に応じ、５ＮのＮａＯＨ又は５ＮのＨＣｆｆｉを添加し
てｐｌ＋を５５に調整する。電気伝導率を測定すると、
１５．０００ｇＭｈｏｓ／ｃｍである。前記鉱物除去水
を加えて、容積を１２８Ｑにする。新たに蒸留したメタ
クレゾール３８４ｇを加え、室温で２４時間放置する。This sodium hevarinate is again 500.000Ω/
It is dissolved in the mineral-free water 502 having a specific resistance of 'cm'. If necessary, adjust pl+ to 55 by adding 5N NaOH or 5N HCffi. When measuring electrical conductivity,
It is 15.000 gMhos/cm. Add the demineralized water to bring the volume to 128Q. Add 384 g of freshly distilled metacresol and leave at room temperature for 24 hours.

ヘパリン溶液を０３μのＣＷＳＳミリポアフィルタで濾
過し、ｐ液を回収する。３０１即ち１．２容量の中性エ
チルアルコール（９９／ｌｏｏ°ＧＬ）を、前記戸液２
５２に攪拌しながらゆっくり加える。次いで、沈澱物が
得られるまで放置する。必要に応じ、少量の塩化ナトリ
ウムを添加する。The heparin solution is filtered through a 03μ CWSS Millipore filter and the p solution is collected. 301 or 1.2 volumes of neutral ethyl alcohol (99/loo°GL) was added to the solution 2.
Slowly add to 52 while stirring. It is then allowed to stand until a precipitate is obtained. Add a small amount of sodium chloride if necessary.

上澄液及びナトリウムヘパリネート性澱物をそれぞれ分
離回収する。次いで回収ナトリウムヘパリネートを、無
水アルコールで脱水し、粉砕し、真空条件下ブフナー漏
斗で濾過し、最後に乾燥し、凍結乾燥する。このように
して９，４００ｇのナトリウムヘパリネートを得る。収
率は９４％である。このヘパリネートは１６０　ＩＩＩ
／ｍｇであると滴定される。The supernatant liquid and the sodium heparinate precipitate are separated and collected. The recovered sodium heparinate is then dehydrated with absolute alcohol, ground, filtered in a Buchner funnel under vacuum, and finally dried and lyophilized. 9,400 g of sodium heparinate are thus obtained. Yield is 94%. This heparinate is 160 III
/mg.

鉱物塩の含量は０．１５％であり、３０ｐｐｍのノユウ
酸イオンを含有している。The content of mineral salts is 0.15% and contains 30 ppm nooxalate ions.

水−アルコール上澄液中に含有されているヘパリネート
を回収するために、以下の処理を施す。In order to recover the heparinate contained in the water-alcohol supernatant, the following treatment is performed.

攪拌下に最初のアルコール沈澱の上澄液１容量に対し、
中性のエチルアルコール（９９／１００°ＧＬ）１容量
を加える。２４時間放置した後、清澄又は若干乳白色の
上澄液を残渣アルコールに移しかえる。For 1 volume of supernatant liquid of the first alcohol precipitation under stirring,
Add 1 volume of neutral ethyl alcohol (99/100° GL). After standing for 24 hours, the clear or slightly opalescent supernatant is transferred to the residual alcohol.

沈澱物を分離し、無水エチルアルコール中で回収し、脱
水し、粉砕し乾燥する。The precipitate is separated, collected in absolute ethyl alcohol, dehydrated, ground and dried.

中性のエチルアルコール（９０／１０００ＧＬ）を、該
上澄液１容量に対し０５容量の割合で、攪拌しながら第
２の調製の上澄液に加える。次いで２４時間放置する。Neutral ethyl alcohol (90/1000 GL) is added to the supernatant of the second preparation with stirring at a ratio of 0.5 volumes to 1 volume of the supernatant. Then leave it for 24 hours.

ナトリウムヘパリネートを第１上澄液の場合と同様の条
件下で回収する。Sodium heparinate is recovered under similar conditions as for the first supernatant.

このようにして得られたナトリウムヘパリネートを、カ
ルシウム塩の調製に使用する。The sodium heparinate thus obtained is used for the preparation of calcium salts.

この調製を英国特許第１，４７１，４８２号に開示の方
法で実施する。This preparation is carried out as disclosed in British Patent No. 1,471,482.

要約すると、この調製方法は、カルシウムに富むヘパリ
ネートを得るべく、ナトリウムヘパリネート溶液に塩化
力ルノウムを加え、次いて、遊離したナトリウムイオン
を除去し、カルシウムイオンに富むヘパリネートを得る
べく再びカルシウムイオンを加えることから成る。In summary, this preparation method involves adding sodium chloride to a sodium heparinate solution to obtain a calcium-rich heparinate, then removing the free sodium ions, and adding calcium ions again to obtain a calcium-rich heparinate. Consists of adding.

上記した方法により、ヘパリンのカルシウム塩ヲ得る。The calcium salt of heparin is obtained by the method described above.

このヘパリンのカルシウム塩は、１６０１Ｕ／ｍｇであ
ると滴定され、１０．３％のカルシウムと０．２％のナ
トリウムと２０ｐｐｍのノユウ酸イオンとを含有してい
る。The calcium salt of heparin was titrated to 1601 U/mg and contains 10.3% calcium, 0.2% sodium, and 20 ppm nooxalate ions.

実施例２ カルシウムーナトリウムヘパリネートを調整するために
、実施例１と同様に調整されて約３０ｐｐｍのノユウ酸
塩を含有する１６０　ＩＵ／ｍｇのナトリウムヘパリネ
ートを、英国特許第１，４７１，４８２号に開示の方法
に従って処理する。この実施例では、塩化カルシウムを
ナトリウムヘパリネート溶液に１度だけ添加する。次い
で、遊離したナトリウムイオンを除去する。Example 2 To prepare a calcium-sodium heparinate, 160 IU/mg of sodium heparinate prepared as in Example 1 and containing about 30 ppm nosalate was prepared using British Patent No. 1,471,482. will be processed in accordance with the method of disclosure. In this example, calcium chloride is added only once to the sodium heparinate solution. The liberated sodium ions are then removed.

このようにして、約７％のカルシウムを含有する１６０
　ＩＩＩ／ｍｇのカルシウムヘパリネートを調製する。In this way, 160% calcium containing about 7%
Prepare III/mg calcium heparinate.

このヘパリネート塩中のシュウ酸イオン含量はｔｇｐｐ
ｍである。The oxalate ion content in this heparinate salt is tgpp
It is m.

２５．０００１Ｕ／ｄと滴定されるこのカルソウムーナ
トリウムヘパリネートの溶液を数ケ月アンプル中に貯蔵
しておいても、何ら沈澱物は認められなかった。This solution of calcium sodium heparinate titrated to 25.0001 U/d was stored in an ampoule for several months without any precipitate being observed.

実施例３ 実施例２を繰り返すが、しかしながら本実施例に於いて
は、英国特許第１，４７１，４８２号に開示の方法に従
って、ナトリウムヘパリネートを完全にカルシウムヘバ
リネートに変換する。Example 3 Example 2 is repeated, but in this example the sodium heparinate is completely converted to calcium heparinate according to the method disclosed in British Patent No. 1,471,482.

このようにして得られるカルシウムヘパリネートは、１
６０１０／ｍｇであると滴定され、約１０．４％のカル
シウム含量と０．１％未満のナトリウム含量とを有する
。鉱物塩の含量は０．４％であり、２０ｐｐｍのシュウ
酸イオンを含有している。このようにして得られる溶液
は、２５，０００１Ｕ／ｄであり、実施例２と同様の性
質即ち貯蔵安定能を有する。The calcium heparinate thus obtained is 1
6010/mg and has a calcium content of approximately 10.4% and a sodium content of less than 0.1%. The content of mineral salts is 0.4% and contains 20 ppm oxalate ions. The solution thus obtained is 25,0001 U/d and has similar properties to Example 2, ie storage stability.

実施例４ 本実施例では、１６０１Ｕ／ｍｇの市販の注射可能なヘ
パリンのナトリウム塩を使用する。Example 4 This example uses 1601 U/mg of commercially available injectable heparin sodium salt.

その鉱物塩の含量は２．５％であり、シュウ酸塩含量は
１．ＯＱＯｐｐｍ（０，１％）である。３００１ステン
レススチ一ル反応器中で、このヘパリン１０．０００ｇ
を５００．０００　ｏｈｍｓの抵抗を有する５０！の鉱
物除去水に溶解させる。この水は、予め０．２２μのミ
リボアメンプランで濾過されたものである。Its mineral salt content is 2.5% and oxalate content is 1.5%. OQOppm (0.1%). 10.000 g of this heparin in a 3001 stainless steel reactor.
50 with a resistance of 500.000 ohms! Dissolve the minerals in water. This water was previously filtered through a 0.22μ millibore membrane run.

攪拌下にこの溶液を１５分間放置し、鉱物除去水を添加
して容重を６４！にする。濃度は２５，０００１０／−
である。次いで、１９２ｄの新たに蒸留したメタクレゾ
ールを、次に水溶液形態にある５０ｇの炭酸ナトリウム
を、最後に１，６００ｇの塩化ナトリウム結晶を加える
。再び溶液を攪拌下に１５分間放置する。The solution was left under stirring for 15 minutes and demineralized water was added to bring the volume to 64! Make it. Concentration is 25,00010/-
It is. Then 192 d of freshly distilled metacresol are added, then 50 g of sodium carbonate in aqueous form and finally 1,600 g of sodium chloride crystals. The solution is again left under stirring for 15 minutes.

必要に応じ、炭酸ナトリウム溶液を添加して、ｐＨを８
．５に調整する。９９乃至１００°ＧＬと滴定される中
性のエチルアルコール４４！を攪拌下に加える（溶液の
初期容里１につき０．７容量のアルコール）。この媒質
を６時間静置し、沈澱したヘパリンを収集する。If necessary, add sodium carbonate solution to bring the pH to 8.
．． Adjust to 5. Neutral ethyl alcohol titrated to 99-100°GL 44! (0.7 volumes of alcohol per initial volume of solution) under stirring. The medium is allowed to stand for 6 hours and the precipitated heparin is collected.

このヘパリン沈澱物を、上記の特性を有する鉱物除去水
１１０１中に再溶解させた後、第２アルコール分別処理
を実施する。そうすると、約１２，５００ＩＵ／ｒｄｌ
の濃度を有する溶液を得る。この溶液を１５分間攪拌下
に放置し、鉱物除去水を加えて１２８２にする。３８４
ｄの新たに蒸留したメタクレゾールを添加する。炭酸ナ
トリウム溶液でｐｌを８．５に調整する。３，２００ｇ
の塩化ナトリウムを添加する。次いで攪拌下に１５分間
溶液を放置する。９９乃至１００゜ＧＬに滴定される中
性エチルアルコールを、ヘパリン溶液１容量に対し１容
量の割合で攪拌しながら加える。得られた媒質を１２時
間静置する。上澄液を除去した後、生成したヘパリン沈
澱物を回収する。After this heparin precipitate is redissolved in mineral-free water 1101 having the above characteristics, a second alcohol fractionation process is performed. Then, about 12,500 IU/rdl
Obtain a solution with a concentration of . The solution is left under stirring for 15 minutes and demineralized water is added to 1282. 384
Add the freshly distilled metacresol of d. Adjust the pl to 8.5 with sodium carbonate solution. 3,200g
of sodium chloride. The solution is then left under stirring for 15 minutes. Neutral ethyl alcohol titrated to 99-100° GL is added at a ratio of 1 volume to 1 volume of heparin solution with stirring. The resulting medium is allowed to stand for 12 hours. After removing the supernatant, the heparin precipitate formed is collected.

アルコール分別を、第２分別と同様の条件下で逐次的に
３回繰り返す。この際、前回の分別処理で得られたヘパ
リン沈澱に対して次の分別処理をする。The alcohol fractionation is repeated three times successively under the same conditions as the second fractionation. At this time, the heparin precipitate obtained in the previous fractionation treatment is subjected to the next fractionation treatment.

次いで、最終ヘパリン沈澱物を鉱物除去水に再溶解させ
、約１２，５００１０／ｍｆ！の濃度を得る。溶液は１
２８之である。激しく攪拌しながら塩化水素酸を加えて
Ｉ）Ｈを３に調整する。溶液を１５分間攪拌する。５Ｎ
の水酸化ナトリウムでｐＨを５５に調整する。３８４ｄ
の新たに蒸留したメタクレゾール及び次いで３．２００
ｇの塩化ナトリウム結晶を加える。得られた溶液を０３
μのミリボアメンプランで濾過する。The final heparin precipitate was then redissolved in demineralized water to approximately 12,50010/mf! Obtain the concentration of The solution is 1
It is 28. I)H is adjusted to 3 by adding hydrochloric acid with vigorous stirring. Stir the solution for 15 minutes. 5N
Adjust the pH to 55 with sodium hydroxide. 384d
of freshly distilled metacresol and then 3.200
g of sodium chloride crystals are added. The obtained solution is 03
Filter through a μ millibore membrane run.

これら全ての操作を１５乃至３０°Ｃの温度範囲で実施
する。９９乃至１００°ＧＬと滴定される１容量の中性
エチルアルコールを攪拌下にｐ液に添加する。溶液を１
２時間放置する。All these operations are carried out at a temperature range of 15-30°C. One volume of neutral ethyl alcohol titrated to 99-100° GL is added to the p-liquid under stirring. 1 solution
Leave it for 2 hours.

このようにして得られた最終ヘパリン沈澱物を、無水エ
チルアルコール中で粉砕することにより脱水し、真空下
に濾過し、無水アルコールで洗浄を繰り返し、次いでｌ
　Ｔｏｒｒの減圧下３５／４０℃で２４時間乾燥する。The final heparin precipitate thus obtained is dehydrated by trituration in absolute ethyl alcohol, filtered under vacuum, repeated washing with absolute alcohol and then l
Dry for 24 hours at 35/40° C. under a vacuum of Torr.

微量の溶剤を除去すべく、粉末を粉砕し、再びＩ　Ｔｏ
ｒｒの減圧下４０°Ｃで２４時間乾燥する。To remove traces of solvent, the powder was pulverized and I To
Dry for 24 hours at 40°C under vacuum of rr.

９．１００ｇのヘパリンのナトリウム塩か得られ、その
鉱物塩含惜は０５％未満であり、ノユウ酸塩含遣は２０
１’ｌｌ）ｍ未満である。この分別で得られろ収率は、
９０．４３％である。回収されたナトリウムヘパリンの
ＩＵ／ｍｇ滴定は１５７である。9.100 g of the sodium salt of heparin was obtained, with a mineral salt content of less than 0.05% and an oxalate content of less than 20%.
less than 1'll)m. The yield obtained by this fractionation is
It is 90.43%. The recovered sodium heparin IU/mg titer is 157.

精製ヘパリン中のシュウ酸イオンの測定は、ＪＲ，ＩＩ
ＥＬＢＥＲＴ及びＭ、Ａ、ＭＡＲＩＮＩ（Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ、Ｊ、（１９６３）　２（５）ｐｐ、　１１０１−６
）の方法による該イオンの抽出後行なった。但し、該方
法は、ヘパリン中に存在するシュウ酸イオンをＩＲＡ４
０Ｑアニオン樹脂で吸着する萌に、過剰の炭酸ナトリウ
ムの存在下で抽出するように変更した。ＩＲＡ４００ア
ニオン樹脂の使用は、前記著者等により推奨されている
。該樹脂からの溶出後、ノユウ酸イオンをＰ、　Ｍ、　
ＺＡＲＥＭＢＳＫＩ及びＡ。Measurement of oxalate ions in purified heparin was carried out by JR, II.
ELBERT and M, A, MARINI (Bioche
m, J. (1963) 2(5)pp, 1101-6
) after extraction of the ions. However, this method converts oxalate ions present in heparin into IRA4.
Moe adsorbed with 0Q anion resin was modified to be extracted in the presence of excess sodium carbonate. The use of IRA400 anionic resin is recommended by the authors cited above. After elution from the resin, the oxalic acid ions are converted into P, M,
ZAREMBSKI and A.

１１０ＤＧＫＩＮＳＯＮ（Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｊ、（１９
６５）　９６．７１７−７２１）のフルオロメトリック
法に従って決定した。110DGKINSON (Biochem, J, (19
65) Determined according to the fluorometric method of 96.717-721).

Claims (3)

【特許請求の範囲】[Claims] （１）注射可能品質のヘパリン製剤であつて、前記ヘパ
リンがヘパリンの金属塩から成り、前記金属の少なくと
も１部がカルシウムであり、シュウ酸塩の含量が、６か
月の貯蔵期間内前記ヘパリン製剤の溶液中の沈澱又は結
晶の生成を防止し得る充分低い値を有することを特徴と
する前記ヘパリン製剤。(1) An injectable quality heparin preparation, wherein the heparin is comprised of a metal salt of heparin, at least a portion of the metal is calcium, and the oxalate content is such that within a six month storage period the heparin is The above heparin preparation, characterized in that it has a value sufficiently low to prevent the formation of precipitates or crystals in the solution of the preparation. （２）シュウ酸塩含量が７０ｐｐｍより低いことを特徴
とする特許請求の範囲第１項に記載のヘパリン製剤。(2) The heparin preparation according to claim 1, wherein the oxalate content is lower than 70 ppm. （３）注射可能な水溶液の形態にあることを特徴とする
特許請求の範囲第１項又は第２項に記載のヘパリン製剤
。(3) The heparin preparation according to claim 1 or 2, which is in the form of an injectable aqueous solution.