JPS61161223A - 高濃度ヒトγ型インターフェロンフラグメント水溶液の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野］ 本発明は、高濃度ヒトγ型インターフェロン水溶液の製
造法に関する。

（従来の技術） インターフェロン（以下工ＦＮと略称することがある）
は、高等動物の細胞がウィルスや核酸などの刺激によっ
て誘発されて産生ずる蛋白であシ、抗ウィルス作用、抗
腫瘍作用などを有する。

ヒトのインターフェロンには、現在α型、β型および１
Ｍの３種の性状の異なるタイプが存在することが知られ
ている。

α型インターフェロン（以下ＩＦＮ−αと略称する）、
β型インターフェロン（以下Ｉ　Ｆ　Ｎ−βと略称する
）に関する研究は比較的す（んでおシ、精製法もそれら
の物性もかなシ明らかになって来ている。

γ型インターフェロン（以下工ＦＮ−γと略称すること
がある。）はリンパ球の芽球化やリンホカイン産生が起
るような状況下で、免疫担肖細胞から産生されるため免
疫インターフェロンとも呼ばれている。工ＦＨ−γは工
ＦＮ−α−？ＩＦＮ−βと比較して、抗細胞増殖活性や
抗腫瘍活性が高いといわれておシ、臨床的応用面からよ
）期待されている。しかし、その産生に新鮮なリンパ球
が必要であることなどの制約があるため、これまで効率
のよい産生糸は確立されていない。また、異なる実験系
では、異なる細胞種が異なる分子種のＩＦＮ−γを産生
ずる可能性も示唆されておυ、その構造や性質に関して
も不明な点が数多く残されている。

（発明が解決しようとする問題点〕 本発明者らは、遺伝子組換え技術によυ生産されたヒ）
ＩＦＮ−γの精製につき技術開発研究を行なっている際
、ヒト１ＦＮ−γが非常に多量化を起しやすく、精製が
困難であることを認め、これを解決するために還元性硫
黄化合物および蛋白変性剤の共存下に灼し濾過すること
を特徴とするヒ）、ＩＦＮ−γ単量体の製造法を開発し
た（特願昭５８−１８６３８３号明測書参照）。この方
法で得られたと）ＩＦＮ−γ単量体水溶液には還元性硫
黄化合物および蛋白変性剤が含まれており、これらの低
分子化合物のうち特に蛋白変性剤は製剤には用いられな
いので除去する必要があるが、該除去処理により得られ
る水溶液中のヒトＩＦＮ−γは溶解度が低く、濃縮操作
等において容易に析出するため、製剤原料としてはあま
り適切でないことが判明した。

本発明者らは、さらに鋭意研究を行ないヒ）ＩＦＮ−γ
ガ（溶化の原因を究明し、高濃度ヒト■ＦＮ−γ水ｍＷ
の製造法を確立した。

（問題点を解決するための手段） 本発明は、蛋白変性剤を含有するヒ）Ｉｌ’ｉ’Ｎ−γ
の希薄水溶液から蛋白変性剤を除去し、該溶液を液体状
態で熟成させ、ついで濃縮することを特徴とする該水溶
液の製造法を提供するものである。

上記、蛋白変性剤を含有するヒト■ＦＮ−ｒ水溶液とし
て、好ましくは、粗ヒ）１１１ｉ’Ｎ−γを還元性硫黄
化合物および蛋白変性剤の共存下ゲル濾過して得られる
ヒ）ＩＦＮ−γ単量体水溶液が用いられる。

」二記粗ヒトＩＦＮ−ｒは、ヒト１ＦＮ−γ含有物であ
ればいかなるものでもよい。例えば、天然に存在するヒ
）ＩＦＮ−γを濃縮して得られる天然型ＩＦＮ−γ（ｎ
ＩＦＮ−γ）や遺伝子組み換え技術によって得られるヒ
）ＩＦＮ−γを生産する微生物を養培して製造されるヒ
トＩＦＮ−γ（ｒＩＦＮ−ｒ）含有物（ＥＰＣ公開第０
０８９６７６号公報；ヌクレイツク　アシツズ　リサー
チ、第１０巻、２４８７〜２５０１頁（１９８２）ｉネ
イチャー、第２９５巻、５０３〜５０８頁（１９８２）
；ヌクレイツク　アシッズ　リサーチ、第１０巻、３６
０５〜３６１５頁（１９８２）など〕が挙げられる。

より具体的には、上記γ工ＦＮ−γは、第５図で例示さ
れる１４６個のアミノ酸からなるポリペプチドやそのポ
リペプチドの種々のフラグメントを包含する。種々のフ
ラグメントとしては、例えば上記ポリペプチドのＮ末端
部分の４個以下のアミノ酸が欠落したＮ末端部欠落スピ
ーシーズや上記ポリペプチドもしくはＮ末端欠落スピー
シーズの第１８１番アミノ酸残基以降の部位で切断され
たＣ末端部欠落スピーシーズなどが挙げられる。

さらに上記ｒＩＦＮ−γは上記ポリペプチドのシスティ
ン残基がセリンもしくはスレオニンに置換されたものも
包含する。

上記種々のフラグメントの中では、第５図で示される１
４６個のアミノ酸からなるポリペプチドのＮ末端部分の
４個以下のアミノ酸が欠落したＮ末端部欠落スピーシー
ズまたは当該Ｎ末端部欠落スピーシーズのＣ末端部分が
切断されたものが好ましい。

とりわけ本発明のヒ）ＩＦＮ−γとしては第５図で示さ
れる１４６個のアミノ酸からなるポリへ欠落スピーシー
ズ〔デス（Ｏｙｓ　−Ｔｙｒ　−Ｃｙｓ　）　Ｉ　Ｆ　
Ｎ−γ〕が好ましい。

希薄水溶液は、例えば、半量化しているＩＦＮ−γの溶
液を凝集沈澱しないように緩衝液を用いて３０〜２００
μｇ７ｍｌに稀釈して得られるが、凝集沈澱しないよう
にすればどんな方法ンとってもかまわない。通常、Ｔ）
Ｈ５，０−８，０の緩衝液のみで稀釈すると、ただちに
自沈が出るので、好ましくは、これに０．５〜４程度の
蛋白変性剤を緩側’ｒＦｊ、に含ませたもので稀釈する
と凝集沈澱のない稀薄な溶液を得ることができる。また
ＩＦＮ−γがンヌテイン残基を有する場合は４−記緩衝
液には、さらに還元性硫黄化合物を含有させてもよい。

上記蛋白変性剤としては、例えば、グアニジン塩（塩酸
塩、硫酸塩）、尿素、チオシアン酸塩（ナトリウム塩、
カリウム塩）などがあげられる。

蛋白変性剤は、上記希薄水溶液を、ゲルｐ過または限外
膜濾過することによυ除去されるが、ゲ／Ｉ／濾過する
のが好都合である。

ゲル濾過の方法は、通常用いられるカラム法が適してい
る。

ゲ）Ｖ濾過の原液として上記ヒトエＦＮ−γ希薄水溶液
が好ましいが、多少析出物があってもゲル沖過にさしつ
かえない程度であればかまわない。

またゲル濾過中に一部析出することもあるが、析出物は
、たとえば、０．２２μのメンブレンで沖過すれば、除
去できる。

ゲＡ／濾過用のゲルとしては市販のものなどから自由に
選択されるが、デキストフン、ポリアクリルアミド、ア
ガロースなどのゲル粒子が好ましい。

とりわけセファデックスＧ−２５，トリスアクリル（’
）Ｆ−０５など低分子化合物の除去に適したものがあけ
られる。

使用するゲルの量は、通常負荷するサンプ′ルの２〜１
００倍量（Ｖ／Ｖ　）、好ましくは５・〜２０倍量であ
る。

展開溶媒は、通常ｐＨについて５０〜８．０、とり、わ
け中性付近の緩衝液を用い、また丁ＦＮ−γがンステイ
ン残基な有する場合は、好ましくは還元性硫黄化合物を
１〜ｌｏｏｍＭとりわけ５〜２０ｍＭの濃度で含有させ
る。

具体的には、展開溶媒であらかじめ平衡としたゲルカラ
ムに上記希薄水溶液を負荷する。これを展開溶媒により
溶出する。溶出速度は、サンプルの不純度、ゲルの種類
、量により異なるが、通常Ｓ■（スペース　ベロシティ
）０１〜１０、好ましくは５ＶＯ９５〜３である。溶出
液は通常の方法により分画する。

ヒ）ＩＦＮ−γの画分は、通常の方法、たとえばＯ，Ｄ
、２８０ｎｍ　の吸収等で溶出曲線として表わすことに
よシ容易に検出することができる。

蛋白変性剤を除去した希薄水溶液の液体状態での熟成は
、該希薄溶液を適当な時間、温度で放置することで達成
できる。

熟成の温度、時間の両ファクターは適宜法められるが、
温度についてはヒ）ＩＦＮ−γの雑菌汚染等の観点から
低温、たとえば４°Ｃ附近が、また熟成の効率の観点か
ら３５〜４０℃が好ましいが、０°Ｃ〜４０℃附近であ
れば、適当な温度を選ぶことができる。時間については
、ゲル濾過直後を濃縮すると白濁してくるが、１時間も
放置しておけば、白濁はずっと少なくなる。通常０．５
〜７日間、好ましく、は２４〜７２時間放置後濃縮すれ
ば十分である。

なお、必要により、熟成を行う前またはその途中で無菌
濾過等の操作をすることもできる。

濃縮は、限外膜処理によシ好都合に行うことができる。

限外膜はＭＷＣＯ１０，０００程度のものを用いるのが
好ましく、通常の操作によって行うことができる。

上記によシ製造されるヒ）１１ｉ’Ｎ−γ水溶液は、０
．２〜１．５ダ／　ｍｅのヒトＩ　’Ｆ　Ｎ　−７を含
有し、前記の製造法による０　、　０５　Ｗ／ｌｌ程度
のものに比し、易溶化されたと）Ｉｌｉ’Ｎ−γを含有
する高濃度水溶液であシ、ヒトＩＮ’Ｎ−γの大量製造
中間体として好適である。

本発明によるヒトエＦＮ−γの易溶化は以下によυ達成
するものと考えられる。

すなわち粗ヒトエＦＮ−γを還元性硫黄化合物および蛋
白変性剤の共存下にゲ／Ｉ／沖過して得られる原料のヒ
）ＩＦＮ−γは、共有結合的にも非共有結合的にも単量
体であるが、蛋白変性剤を除去すると非共有結合的に多
量体とな）その溶解度が低下するものと推定される。こ
れを希薄水溶液状態で熟成させると、一度生じたヒトエ
ｉ’Ｎ−７多量体が、安定な非共有結合二量体とｋす、
その易溶化が達成され、容易に高濃度に濃縮が可能とな
ったと考えられる。

本発明によル製造される高濃度ヒトエＦＮ−γ水溶液は
前記の方法で得られるヒトエＦＮ−γ水溶液に比し高濃
度であるので、保存用凍結品や凍結乾燥して得られる注
射用製剤等の原液として、より有利に使用される。

本発明によシ製造されるヒトＴＦＮ−γは、低毒性で、
従来の方法で得られる工ＦＮ−γと同様の目的に同様の
用法により使用でき、抗つイρス。

抗腫瘍、細胞増殖抑制および免疫増強作用等を有するの
で、公知のＩＦＮ−γと同様にして投与することができ
る。

なお、原料の蛋白変性剤を含有するヒト１Ｆ’Ｎ−９γ
水溶液は、例えば粗ヒトエ￥Ｈ−ｒを還元性硫黄化合物
および蛋白変性剤の共存下にゲ／Ｌ／’ｆｆｚ過するこ
とによシ製造できる。

ここで粗ヒトエＦ’Ｎ−γはヒトＴＦＮ−γを含有する
ものであればいかなるものでもよい。天然に存在するし
トエＦＮ−γを濃縮９分離したものや遺伝子組み換え技
術によって得られると）ＩＦＮ−γ生産能を有する微生
物の培養により製造されたヒトＴＦＮ−γ〔特開昭５８
１８９１９７号公報；ヌクレイツク　アシッド　リザー
チ、第１０巻、２４８７−２５０１頁（１９８２年）；
ネイチャ、第２９５巻、５０３−５０８頁（１９８２年
）参照〕を用いることができる。実用面からは、上記ヒ
）ＩＦＮ−γ生産能を有する微生物を培養して得られる
菌体抽出液、硫安分画液、抗体カラム溶出液、イオン交
換溶出液を粗ヒ）、ＴＦＮ−γとして用いるが、不純蛋
白量が多いほど還元性硫黄化合物の負が多く必要になシ
経済的ではないため、一般には抗体カラムあるいはイオ
ン交換カラム溶出液等を適用するのが好ましい。また粗
ヒトエＦＮ−γは多量化していてもさしつかえない。

還元性硫黄化合物としては、例えばンステイン。

Ｎ−アセチμシヌテイン、Ｈ−アセチルホモシヌテイン
、還元型グμタチオン、チオエタノールアミン、モノチ
オグリセロール、ジチオスレイト−μ１次素数１〜７の
チオアルカン、ロンガリットなどの有機含硫黄化合物や
メタ重亜硫酸塩（ナトリウム塩、カリウム塩）なとの無
機含硫黄化合物があげられる。

蛋白変性剤としては、前記したものがあげられる。

ゲｙｖ’ｆｉ適用のゲルとしては市販のものなどから自
由・に選択されるが、デキストフン、ポリアクリルアミ
ド、アガロースなどのゲ″ル粒子が好ましい。

また、例えば遺伝子組み換え技術によ）製造されるヒト
ＴＦＮ−Ｔに適用す葛湯合、その分子量が１７．１４３
であること中伸の不純蛋白との分離効率を考え、分画範
囲１．０’　００〜ａ’ｏ、ｏｏｏ程度の性能を有する
ものから選択゛して使用す”るのが好都合セある。具体
的にはとシ□わけセフ７デツダスＧ−’５’Ｏ，Ｇ−７
５．セフ１クリｆｉ／５−２００゜バイオゲ／Ｉ／Ｐ−
１０，Ｐ−３’０・・、’　Ｆ　−’　６０’等があ゛
げられる。

使用するゲμ量は、通常負荷す゛るサンプルの５〜１０
０倍（Ｗ／Ｗ）好ましくは１０〜３０倍　□（Ｗ／Ｗ）
量である。　　　　　　　　　　　　゛ゲ／Ｌ／Ｆ５過
の方法は、通常用いられるカフ′ム法が適している。

すなわち、粗とトエｒｎ−ｒｆ、緩衝液などに゛溶解し
水溶液となし、展開溶媒であらかじめ平衝としたゲルカ
ラムに負荷する。これを展開溶媒により゛溶出する。溶
出速度は、サンプルの不純度、ゲルの種類、量に・よ多
異なるが、通常ＢＹ（スペース　ベロシティ）０．１〜
１０、好ましくはｓｖ’“０．５〜３である。溶出液は
通常の方法によυ分画する。

ヒトＴ］ｉ’Ｎ−γ゛と還元性硫黄化合物および蛋白変
性剤□を共存させるのは上記ゲ／ｌ／濾過操作のいずれ
の工程において寸もよいが、ヒトＴＦＮ−γをゲ／Ｉ／
に負荷するための水溶液および展開溶媒に還元性゛硫黄
化合物および蛋白変性剤を加えておくのが好ましい。

なお蛋白変性剤は□、゛抽出、抗体カラム処理など前処
理で使用している場合には、カラムに負荷する九めめ水
゛溶液に改めて加えることなくその溶液のまま使用する
ことが可能である。

上記負荷用水溶液番よ゛び展開溶媒は、ｐＨについては
５．０〜８．０′、とカわけ中性付近で、還元゛性−黄
化合一を１〜１’　０’　ＯｍＭ　とシわけ５〜２０　
ｍＭの濃度で含有させるのが好ましく、蛋白変性剤を０
．１〜７Ｍとりわけ１〜２Ｍの濃度で含有させることが
好ましい。

本願明細書中、ＩＦＮ−γの活性としての抗ウィルス活
性；国際単位（工Ｕ）は、単位（ユニット）の確定した
国際標準ＩＦＮ−γと目的とする資料を、ヒト羊膜由来
Ｉｉ’Ｌｉ胞株に対するシンドビヌ　ウィルス（Ｓｉｎ
ｄｂｉｓ　　Ｖｉｒｕｓ　）の卸１胞変性効果阻止試験
を用いて測定し、その比率から力価を算出して求めたも
のである。溶液中の蛋白量は、Ｅ：４８０ｎｍ　＝　１
．０　をｌ　Ｍｆとして計算して求めた。

以下実施例および参考例により本発明をよシ具体的に説
明するが、これらにより本発明は制限されるものではな
い。

なお参考例中に記載した抗体力ラムＡｂ　（ＭＯγ２−
１１．１）は特開昭５９−８０６４６号公報記載の方法
で調製した。

実施例１ 参考例２　（Ｉｆ　）でえた工ＦＮ−γ（化ツマ−）含
有溶出画分５３０ゴのうちの２６ｇ？（９，８５ｑ含有
）にＩ　Ｏ＝Ｍｖヌテイン塩酸ｍ、１５０ｍＭ塩化ナト
リウム、０．５Ｍ塩酸グアニジンおよび０．０１％ツイ
ーン２０を含む２５ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ６、０）の希
釈液１７４ｇ／を添加、混合し、タン白含量０．０５〜
／　ｔｔｔｌの低濃度溶液を調製した。この溶液を予め
１９ｍＭシスティン塩酸塩＋１５０ｍＭ塩化ナトリウム
および０．０１％ツイーン２０を含む’１５　ｍＭ酢酸
駁衝液（ｐＩＩ６．０）で平衡化したセファデックスＧ
−２５のカラム（５Ｘ６０α）に負荷し、同一緩衝液で
溶出し、塩酸グアニジンを除去した工ＦＮ−γの溶出画
分１９０ｍ／（９，１２ダ含有）をえた。この溶液のタ
ン白含量は０．０４８ダ／ｍｌで、澄明であった。

タン白回収率は９２．５％で、工Ｆ　Ｎ−γの比活慴１
よ３．７ｘｌＯｘＵ／ｍｙ　　タン白であった。

実施例２ 実施例１でえた工ＦＮ−γの溶出画分４０ｙｘｌ（１，
９２”ｆ含有）を４°Ｃで２４時間熟成したのち、ダイ
アフローＰＭ−１０１４３１φ（アミコン社製限外ｐ過
暎）を用い限外ｐ過にょシ４ｔｎｌまで濃縮した。この
濃縮液は澄明で、タン白含景は０　、４７０　Ｍｌ／ｌ
ｅｌであった。またタン白回収率は９８％（１，８８ダ
）であった。との工ＦＮ−γの比活性は６．８Ｘ１０６
エＵ／ｘｖ　タン白であった。

実施例３ 実施例゛１でえたＩＦＮ−γの溶出画分４０ゴ（１，９
１ｇ含有）を４℃で１００時間熟成したのち、実施例２
と同様の方法で４ｍｌまで濃縮した。

この濃縮液は澄明で、タン白含量は０．４７５ｗＩｇ／
ｍｅであった。タン白回収率は９９％（１９〜）であっ
た。なおＩＦＮ−γの比活性は？、８Ｘ１０６ＩＵ／■
タン白であった。

実施例４ 参考例２（■）と同様の方法でえたＩＦＮ−γ溶出画分
５１０ｍ１（０、３８８１ｎｇ／ｍｌ）に、実施例１と
同様の希釈液３４４７＋＋＋／を添加、混合しタン白含
量０．０５ダ／　ｙｔｌ　１ｊｌｆ１度の溶液を調製し
た。

次いで、この溶液を予め実施例１と同様の千両化緩衝液
で平衡化したセファデックスＧ−２５のカラム（１４Ｘ
１００ｃｍ）に負荷し、同一緩衝液で溶出し、塩酸グア
ニジンを除いた工ＦＮ−γの溶出画分３７６０ｍ１をえ
た。この溶液のタン白含量は０．０４８り／窮ｌであル
、その工ＦＮ−γの比活性は３．５１０　　工Ｕ／１！
ｖタン白であった。

この溶液を４°Ｃで４８時間熟成したのち、ダイアフロ
ーＰＭ−１０，１５０藺φ膜を用い１８８肩ｌまで濃縮
し、タン白含量０　、９６　Ｗ／ｍｌの澄明な工ＦＮ−
γ溶液をえた。との工ＦＮ−７の比活性は６．７Ｘ１０
　　工Ｕ／＃　タン白で、５ＤＢ−ＰＡＧＫではモノマ
ーに収斂した。

実施例５ 参考例４でえたヒトＩＦＮ−γ（化ツマ−）溶出画分４
５０ｍ１にｌＱｍＭ還元型グルタチオン。

１５０ｍＭ塩化ナトリウム、０．５Ｍｉ［酸グアニジン
および０．０１％ツイーン２０を含む２５ｍＭ酢酸緩衝
液（ｐＨ６，０）の希釈液３．２４０Ｉｌｔを添加、混
合し、タン内含、１１０．０５〜／ｌｒｌの低濃度溶液
を調製した。この溶液を予め、１０ｍ１ｌｌ還元型グμ
タチオン、１５０ｍＭｔｎ化ナトリウムおよび０．０１
％ツイーン２０を含む２５ｍＭ酢酸俵衝液（ｐＨ６、０
）で平衡化したセファデックスＧ−２５のカラム（１４
Ｘ１００ｃＩＩＫ）に負荷し、同一緩衝液でゲル濾過を
行い、塩酸グアニジンを除去したヒトエＦＮ−γの溶出
画分３．１８０　ｗｅ（１５５，８Ｗ）をえた。この溶
液のタン内含景工Ｕ／Ｗタン白であった。この溶液を４
℃で４８時間熟成させたのち、実施例２と同様の方法で
１５９＋／まで濃縮した。この濃縮液は澄明で、そのタ
ン白含量は０　、９２　Ｗ／ｗｅであった。タン白回収
率は９３．９％（１４６，３〜）であった。

なおヒトエＦＮづの比活性は６．８ＸｌＯ’工Ｕ／ｑ　
タン白であった。

実施例６ 参考例２と同様の方法でえたと）ＩＦＮ−７（化ツマ−
）溶出画分４３５ｍ１（０゜３９２Ｈｇ／ｒ？）に１５
０ｍＭ塩化ナトリウム、０．５Ｍｍ酸グアニジンおよび
０，０１％ツイーン２０を含ム２５ｍＭ＃酸腹衝液（ｐ
Ｈ’６　、０ンの希釈液２．９７５ｘ／を添加し、タン
白含量０　、０５　ｑ／ｍｌの溶液を調製した。この溶
液を予め窒素ガスを注入し、十分に脱気したｔ　５０　
ｍＭ　塩化ナトリウムおよび０．０１％ツイーン２０を
含む２５ｍＭ酢酸緩衝液（、ｐＨ６，０）で平衡化した
セフ１デックスＧ−２５カツム（１４Ｘ１００ｃＩＩ）
に負荷したのち同一緩衝液でゲ／Ｌ’濾過を行い、塩酸
グアニジンおよび還元型グルタチオンを除去したとトエ
ＩＮ−ｒの溶出画分３．２’８０ｍ１（ｌ１８ＷＩＩＩ
含有）をえた。この溶液のタン白含量は０．０４２１１
１／ｍｌであった。タン白回収率は８１％で、そのヒト
エＫＮ−７の比活性は２．８Ｘ１０　　工Ｕ／１ｑ　タ
ン白であった。

この溶液を４℃で２４時間熟成させたのち、実施例２と
同様の方法で３００府ｌまで濃縮した。そのタン白含量
は０．２３９〜／　ｔｌであった。タン白回収率は５２
％（７１，８η）で、ヒトエＦＮ−γの比活性は１．ｌ
Ｘ１０’Ｉυ、４ツ　タン白でおうた。

実施例Ｉ 実施例５で得たヒ）ＩＦＮ−γの性状は以下のとおりで
あった。

（１）　　ドデシ／Ｉ／硫酸ナトリウムのスラブ電気泳
動法（８Ｄ８−ＰＡＧＥ）による分子Ｊｉ測定見かけ上
の分子量約１８，０００でモノマー−に収斂した。

測定条件：８Ｄ８濃度、０．１％；アクリ〜アミド濃度
６％（ｌ縮ゲ／Ｌ／）、１２．５％（分離用ゲ／１／）
Ｎ電圧１６０ＶＣ濃縮時）。

１８０Ｖ（分離時）；濃縮６０分９分離２．５−３．０
時間１発色剤、クマシーブリリアント　プμ− （２）　　ゲｌｖ濾過による分子量測定見かけ上の分子
量は約４０．０００であった（第１図）。

測定条件 （リ　資料：本発明の高濃度とトエＦＮ−γ水溶液（タ
ン白濃度−１，７３１ １１ｊｇ／肩１１但しツイーン２０を含まない） ｍｅタン白：　牛血１アルブミン（Ｍ、Ｗ。

６８．０００）、卵白アルブミン （Ｍ、Ｗ、４５．０００）、キ毫ト リプシノーゲンＡ　（Ｍ、Ｗ。

２５．０００）、チトクロームＣ （Ｍ、！、１２，５００） （１１）ゲ／Ｌ’濾過：２５ｍＭ酢酸アン屹ニウム。

１５０　ｍＭ　ＮａＣ１およびＩＱ’ｍＭ還元型グルタ
チオンを含むｐＨ６，０の緩衝 液で平衡化したセファデックスＧ− １００カラム＜２．７×Ｂ７ａｓ＞に資料２．４６ダ４
ゴおよび各標準タン白 ５ｑ／２薦ｌを負荷し、溶出速度２１ｄ／時藺、フック
シ、ン４．５ｍｌでゲル濾過を行った。

（ａｊ−Ｓ’ＤＳ存在下におけるゲル濾過による分子量
測定 見かけ−１−の分子量は約１８，０００であった（第２
図）。

測定条件 （１）資料二本発明の高濃度ヒ）　Ｉ　Ｆ　Ｎ−γ水溶
液（タン白濃度−１０２９ｍμｌ。

但しツイーン２０を含まない） 標桑タン白：牛血清アルブミン（Ｍ、Ｗ。

６８．０００）、卵白アルブミン （Ｍ、Ｗ、４５，０００　）　、キモトリプシノーゲン
Ａ　（Ｍ、　Ｗ、２５，０００　）＋チトクロームＣ（
ＭｏＷ、■２．５００〕（１１）　　ゲル濾過：２５ｍ
Ｍ酢酸アンモニウム。

１５０ｍＭ　ＮａＣｌ　　１０ｍＭ４元型グルタチオン
および０．１％ＳＤＳ を含むｐＨ６，０の緩衝液で平衡化 したセファデックスＧ−１００カ ラム（２，７Ｘ８７訓）に資料２０６ １ｎ？　／　２　ｍｌおよび各標準タン白５■／　２　
ｍｌを負荷し、溶出速度２１ｍｇ／時間、フラクション
４．５　ｍｌでゲル濾過を行った。

実施例５で得たヒトＩＦＮ−γは、５ＤＳ−ＰＡ、　Ｇ
　ＥおよびＳＤＳ存在下におけるゲル濾過では単量体（
見かけ」−の分子量約１８，０００）として検出され、
ゲル濾過では二量体（見かけ上の分子量約４０，０００
）として検出されることから、分子量約１８，０００の
サブユニットからなる二量体であり、その結合は非共有
結合であることが判明した。すなわち、このヒ）ＩＦＮ
−γは共有結合的には単量体であり、非共有結合的には
二量体である。

実施例８ 参考例４でえたヒ）ＩＦＮ−γ（七ツマ−）溶出画分８
６ｍ１３にｔｏｍＭ還元型グルタチオン。

１５０ｍＭ塩化ナトリウムおよび０．５　Ｍ塩酸グアニ
ジンを含む２５ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ６，０）の希釈ｇ
７．１６４ｍ１を添加、混合し、タン白含量０、０５９
　ｍＬｉ／ｍｅの低濃度溶液２００＋＋＋ｌを調製した
。

この溶液を予め、１０ｍＭ還元型グルタチオンおよび１
５０ｍＭ塩化ナトリウムを含む２５　ｍＭ　＃酸緩衝液
（ｐ　Ｉ−１６，０）で平衡化したセファデックスＧ−
２５のカラム（５Ｘ６０儂）に負荷し、同一緩衝液でゲ
ル濾過を行い、塩酸グアニジンを除去したヒ）ＩＦＮ−
γの溶出画分２１８ｍ１をえた。

この溶液のタン白含量は０．０４５７”グ／ｍｅであっ
た。

溶出液をアクロ５’０Ａ（０，２μｍ；ゲルマン社）を
用いて滅菌濾過した後、３７°Ｃで８日間熟成させた後
ダイアフローｐＭ−１０（アミコン社製限外濾過膜）で
限外濾過し、１０Ｍまで濃縮した。

この濃縮液は澄明で、タン白含量は０．９０５１”ｉ’
／ｍｌであった。また５ＤＳ−ＰＡＧＥで七ツマ−に収
斂した。なおヒト■ＦＮ−γの比活性は３，７Ｘ１０　
　ＩＵ／ηタン白であった。

実施例９ 参考例５　（ｉｌｉ　）でえたｄｅｓ　（０ｙｓ−Ｔｙ
ｒ　−０ｙｓ　）ＩＦＮ−γ含有溶出画分の２．２ｍ１
（０，８８１”９／ｍｌ含有）に８倍量の１５０ｍＭ塩
化ナトリウムおよび０．５　Ｍ塩酸グアニジンを含む２
５ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ６，０）の希釈液を添加、混合
し、低濃度溶液を調製した。この溶液を予め１”５０　
ｍＭ塩化ナトリウムを含む２５ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ６
，０）で平衡化したセファデックスＧ−２５カラム（２
，６Ｘ１５ｃｍ）に負荷し、同一緩衝液で溶出し、塩酸
グアニジンを除去したｄｅｓ　（Ｃｙｓ　−Ｔｙｒ　−
Ｃｙｓ　）　Ｉ　Ｆ、Ｎ−γの溶出画分８０ｍ１をえた
。この溶液のタン白含量は０．０２２７’９７ｍ１で、
澄明であった。

本溶出画分を４　”Ｃで２４時間熟成したのち、ダイア
フローＹＭ　−１０、２５ｍｍφ（アミコン社製限外濾
過膜）を用い限外濾過により濃縮しフィルター（０，２
μｍ）で濾過し０．６８　ｍｌの澄明な溶液を得た。タ
ン白含量は０．６７０　ＬＩＭｉ／ｍｌであった。

またタン白回収率は６８％であった。

実施例１０ 実施例９で得られたｄｅｓ　（Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ
　）　Ｉ　ＦＮ−γの性状は以下のとおりであった。

（１）　　５ＤＳ−ＰＡ（）Ｅによる分子量測定見かけ
上の分子量約１７．０００で七ツマ−に収斂した。

測定条件：ＳＤ８濃度、０．１％；アクリルアミド濃度
４％（ａ縮ゲル）、１２．５％（分離用ゲル）；電圧、
６０Ｖ（＃縮時）、１８０Ｖ（分離時）；濃縮６０分１
分離３．０時間；発色剤、クマシーブリリアント　ブル
ー （２）ゲル濾過（二よる分子量測定 見かけ」−の分子量は約３５，０００であった（第３図
）。

測定条件 （１）資料：本発明の高濃度ｄｅｓ　（Ｃｙｓ　−Ｔｙ
ｒ−Ｏｙｓ）ＩＦＮ−γ水溶液（タン白濃度−０，６７
０〜／ｍｌ） 標準タン白：牛皿漬アルブミン（Ｍ、Ｗ。

６８．０００）、卵白アルブミン（Ｍ。

Ｗ、４５，０００）およびキモトリプシノーゲンＡ（Ｍ
、’Ｗ、　２５，０００）（１１）ゲル濾過；２５ｍＭ
酢酸アンモニウム、および１５０　ｍＭＮａｃＩヲ含む
ｐＨ，６，Ｏ（７）緩衝液で平衡化したセファデックス
ａ　−１００カラム（ｔｏ　Ｘ　５５ｃＩｎ）’に資料
０、２７ｍ！ｉ’／　０．４ｍｌおよび各標準タン白１
〜／　０．４　ｍｌを負荷し、溶出速度２ｍｌ／時間、
フラクションＱ、　５　ｍｌでゲル濾過を行った。

本発明のｄｅｓ　（Ｃｙｓ　−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ　）　Ｉ
　Ｆ　Ｎ−γは、Ｓ　Ｄ　Ｓ　−１？Ａ　Ｇ　Ｅでは単
量体（見かけ上の分子量約１７．０００　）として検出
され、ゲル濾過では二量体（見かけ上の分子量約８５，
０００）として検出されることから、分子量約１７．０
００のサブユニットからなる二量体であり、その結合は
非共有結合であることが判明した。

参考例１ 特開昭５８−１８９１９７号公報実施例８記載の発現用
°ヒ）ＩＦＮ−γ遺伝子を有する菌株ＲＲＩ（ｐＲＫ　
２４．８　ｃＩｔｓ、ｐＲ，ｃ　２８１／ＩＦＩ−９０
０１をＭ９−グルコース培地で３０′Ｃで菌体濃度が８
〜４×ｌＯ細胞７ｍｌになるまで培養した後、グルコー
ス、カザミノ酸を濃度がそれぞれ１，０％。

０５％になるように加えて４２℃で１時間誘発させた。

得られた培養液を遠心分離にかけて菌体を集め、凍結し
て保存した。

参考例２ （１）参考例１でえた凍結菌体１０００Ｆに７Ｍ着醋酸
グアニジンよび２ｍＭ　　フェニルメチルヌルホニμフ
ルオライドを含む１００ｍＭ）リス塩酸緩衝液（ｐＨ７
、０）を３０００．ｗ？加え、４℃で１時間攪拌したの
ち遠心分離機（１７，０００ｒｐｍ／３０分）に付し、
澄明な上清液をえた。この上清液を１３７ｍＭ塩化す［
リウム、　’７７　ｍＭ塩化カリウム＋８ｍｕ　リン酸
二ナトリウムおよび１．５ｍＭリン酸−カリウムから成
る緩衝液（以下Ｐ。

Ｂ、Ｓと略す）で７０倍に希釈し、生じてくる沈澱物を
シャープレス遠心分離機（，１０，０００ｒｐｍ）に付
して除去した。次いでえられた上清液２２０４をベリコ
ン（ミリポア社製ｉ分画分子量２１０．０００）で１５
４にまで環線した。この濃縮液を４℃で一夜放置し、生
じた沈澱物をさらにＶヤープレス遠心分離機にかけて除
去した。この上清液を予め充填した抗体力ツム（Ａｂ（
Ｍｏγ２−１１．１）　　１５Ｘ３０３）Ｋ流速１，０
００ｍ１／時間で負荷したのち、ＰＢ８０２，５００＋
１．１Ｍ塩化ナトリウムおよび０．１％ツイーン２０を
含んだｌＱｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７，０）の５，００
０ｍ１゜ＰＢ８０２，５００＋ｗｌおよび０．−５Ｍ塩
酸グアニジンを含んだ２０　ｍＭ　’ｊｌン酸緩衝液（
ｐＨ７、０）の２．５００ｇｔの各洗浄液を遂次抗体カ
ラムを通過させたのち、２Ｍ塩酸グアニジンを含む２３
ｍＭ　　リン酸緩衝液（ｐＨ７、０）で溶出し、抗ウィ
ルス活性を有する溶出画分５００ｍ１を集めた。

（ＩＩ）参考例２（１）で得た溶出画分にシスティン塩
酸塩を１０ｍＭ量添加した。

このヒトＩＦｌｉ−７水溶液５００ｍ１を予め１ｍＭエ
チレンジアミン四酢酸酢酸塩−１５Ｑ１　塩化□丹すウ
ム、’１０ｍＭシスティン塩酸塩および２Ｍ塩酸グアニ
ジンを含んだ２５ｍＭ酢酸緩衝液（’ｐＨ６，０）で平
衡化したセファクリ−）Ｌｚ８−２００（ファルマシア
社［）のカラム（９Ｘ１００σ）に負荷し、同一緩衝液
で溶出し、七ツマー溶出画９嵐、。イ、を、あだ。３゜
よう、いえ、わえヨ分はドデシ）Ｖ硫酸ナトリウムの７
ラブ電気泳ＩＪ法（以下８　’Ｄ　Ｓ　Ｌ−Ｐ　Ａ　Ｃ
Ｊ　Ｅと略す）でもモ九−に収斂した。（見かけ上の分
子量約１８，０００）。

この分子ふるい操作により比活性３　、３　Ｘ　Ｉ　０
６エＵ／クタン白のヒトＸ　Ｆ　Ｎ　−７を２０１〜え
た。

参考例３ ４１例２　（ＩＩ　）でえたヒト工Ｆ　Ｎ−γ（モノマ
ー）溶出画分５３０ｍ１ＣＯ、３７９ｑ／ｓｔ／）のう
ちの２００ｓｒｔ（７５，８りを予めｌ０ｍＭシスティ
ン塩酸塩、１５０ｍＭ塩化すＹリウムおよび０．０１％
ツイーン２０を含む２５１１１Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ６、
０）の平衡化緩衝液で平衡化したセファデックスＧ−２
５のカラム（５Ｘ６０３）に負荷し、同一緩衝液で溶出
し、塩酸グアニジンを除去したヒト１ＦＮ−７の溶出画
分１８０評／をえた。

この溶出液は溶出直後に白濁を生じ沈叙したので、遠心
分離（１０，ＯＱＯｒｐｍ／３０分）に付しその上清液
のタン白含量を測定したところ０．０５ｇＦ／　ｘｔ　
テあった。タン白回収率は１１．９％（９＃）であった
。なおヒ）ＩＦＮ−γの比活性は３．３ＸＩＯＩＵ／ダ
タン白であった。

参考例４ 参考例２（■）の方法で得た溶出画分４２０ｒｓｌに還
元型グルタチオンをｌＱｍＭ量添加し、ヒト工ＦＮ−γ
を七ツマ−に収斂させた。

このヒトＩＦＮ−γ水溶液４２０　ｍｌを予めＩｍＭエ
チレンジアミン四酢酸酢酸塩５０ｍＭ塩化ナトリウム、
１０ｍＭ還元型グルタチオンおよび２Ｍ塩酸グアニジン
を含んだ２５ｍｕ酢酸緩衡液緩衝液６．０）で平衡化し
たセファクリ−／Ｌ’Ｓ−２００（ファルマシア社製）
のカラム（９ＸＩ００１７１）に負荷し、同一緩衝液で
溶出し、化ツマー溶出画分４５０ｔｔｌを集めた。本操
作によシ比活性３．４×１０６　工Ｕ／ｑタン白のヒト
１ＦＮ−γ（０，４１０ｑ／肩ｌ）を得た。

参考例５ ｄｅｓ　（Ｃｙｓ　−Ｔｙｒ−Ｏｙｓ　）　Ｉ　Ｆ　Ｎ
−γの製造（１）形質転換体の製造 ＩＦＮ−γ発現フ”ラスミドｐＲ０２８／ＩＦＩ−９０
０（ＥＰＯ公開第００８９６７６号公報実施例７参照〕
を制限酵素ＮｄｅＩ、Ｎｃｏ工で消化し、工ＦＮ−γ遺
伝子部分を含むＮｄｅＩ−ＮｃｏＩ　７１０　ｂｐ　　
Ｄ　Ｎ　Ａ断片（Ａ）を分収した。一方、プラスミドｐ
Ｔ’（０２３を制限酵素Ｂｇ１．　Ｈ、ＥｃｏＲＩで消
化し、λＰＬプロモーターを含む２６５□ｂｐのＤＮＡ
断片（Ｂ）を分取した。（Ａｌ、（Ｂ）と化学合成して
得た蛋白合成開始コドンを含むオリゴヌクレオチドアダ
プター ＡＡＴＴＣ！Ａ、ＴＯＯＡＧＧＡＴＣＣＡＣ）ＴＡＯＧ
ＴＯＣＴＡＧ（）ＴＡＴ をＴ４ＤＮＡリガーゼを用いてＮｄｅｌ　、ＥｃｏＲＩ
ののりしろ部分に結合させた。得られたＤＮＡ断片をＮ
ｃｏＩ　、ＢｇｌＩＩ　で処理して得たプラスミドｐＲ
０２８／ＩＦニー９００に結合させ、Ｏｙｓ　−Ｔｙｒ
−ｃｏｓ欠落ＩＦＮ−γのポリペフ”チドなコードする
発現プラスミドｐＬＣ２を構築した。（第４図）このプ
ラスミドｐ、ＬＯ２を用いてＯ０ｈｅｎらの方法〔プロ
シージング　オブ　ナショナル　アカデミ−オブ　サイ
エンス　ＵＳＡ　、第６９巻、２１１０頁（１９７２）
）に従って大腸菌ＲＲＩ（ｐＲＫ２４８　　ｃＩｔｓ）
を形質転換し、形質転換体エンニー３３−　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　・＾町すヒア　コリ（
Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　　ｃｏｌｊ、＝Ｅ　、ｃ　ｏ
　ｌ　ｊ　）ＲＦｔＩ（ｐＬＣ２，ｐＲＫ−２４８０Ｉ
ｔｓ）を得た。

（１１）形質転換体の培養 上記（１）で構築したプラスミドを含む菌株Ｅ。

ｃｏｌｉ　　ＲＲＩ（１）ＬＯ２，ｐＲＫ２４８　ｃＩ
ｔｓｌを１％バクトドリブトン、０５％酵母エキス、０
５％食塩、７μｇ／ｍｌテトラサイクリンを含む液体培
地５ｏｒｎｌ中で、３５°Ｃ９１２時間振とう培養を行
った。培養紗を０５％カザミノ酸、０５％グルコース、
７μｇ　７ｍｌ　のテトラサイクリンを含むＭ９培地２
．５１に移し、３５°Ｃで４時間、ついで４２°Ｃで３
時間培養した。遠心分離して菌体を集め、−８０゛Ｃで
保存した。

（ｉｉｉｌ　　Ｉ　Ｆ　Ｎ−γｄ３の精製上記（ｌｌｌ
と同様の方法で得た凍結菌体７，１ｇを７Ｍ塩酸グアニ
ジンおよび２ｍＭフェニルメチルスルフォニルフルオラ
イドを含む０．１Ｍ１ｌス塩酸緩衝液（ｐＨ７，０）　
２２ｍｌに懸濁し、４°Ｃで１時間攪拌したのちｉｏ、
ｏｏｏｘｇで３０分間遠心分離にかけて上滑２４ｍ１を
得た。この上清にＰＢＳ８００ｍｅを加えて希釈し、抗
体カラム（Ｍｏ　　γ２−１１．１．カラム容量１５ｍ
１）に流速１ｍ１１分でかけた。そののち、０．５Ｍ塩
酸グアニジンを含む２０ｍＭ　リン酸ナトリウム緩衝液
（Ｉ）Ｉ−Ｉ７．Ｏ）６０ｍｌでカラムを洗浄し、つい
で、２Ｍ塩酸グアニジンを含む２０ｍＭリン酸ナトリウ
ム緩衝液（ｐＨ７，０）４５ｍＪで溶出し、抗ウィルス
活性を有する画分２５ｍ１を得た。この画分２５ｍ１を
あらかじめ１ｍＭエチレンジアミン四酢酸、０．１５Ｍ
塩化ナトリウム、１ｏｍＭシスティンおよび２Ｍ塩酸グ
アニジンを含む２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ
６，０）で平衡化した七フアクリルＳ−２００（ファル
マシア社製）のカラム（２，６Ｘ　９４ｃｍ　）。

カラム容量５００ｍＡ！にかけ、同−緩衝紗で溶出して
抗ウィルス活性を有する画分４０ｍ１を得た。

ここで得られた０ｙｓ−Ｔｙｒ−Ｏｙｓ欠落ＩＦＮ−γ
のポリペプチド（ｄｅｓ　（０ｙｓ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ　
）　Ｉ　Ｆ　Ｎ−γ〕は、７．０　ｍ’／であり比活性
は２．７　Ｘ　１０　　ＩＵ／”９であった。

参考例６ 参考例５　（ｉｉｉｌでえたｄｅｓ　（Ｃｙｓ−Ｔｙｒ
　−Ｃｙｓ　）　Ｉ　Ｆ　Ｎ−γ溶出画分１．２ｍｌ　
（０，６２１”ｆｌ／ｍｅ　）を予め１５０ｍＭ塩化ナ
トリウムを含む２５ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液＜ｐＨ
６，ｏ）で平衡化したセファデックスＧ−２５のカラム
に負荷し、同一緩衝液で溶出し、塩酸グアニジンを除去
したＩＦＮ−γの溶出画分をえた。この溶出液は溶出直
後（：白濁を生じ沈澱したので、フィルター（０，２μ
ｍ）でｒ過し、２．４　ｍｌの澄明液を得た。含量は０
１５０η／ｍｌタン白でタソ白回収率は４８％であった
。

（発明の効果） 本発明ｉ二よりヒトγ型インターフェロンは易溶化され
、高濃度ヒトγ型インターフェロン水溶液を得ることが
できる。

【図面の簡単な説明】

第１．２および３図は、それぞれ実施例？　（２１。 （３）および実施例１０（２）のゲルｒ過の結果を示す
。 ・は本発明のＩＦＮ−γを、○は標桑タン白（Ａ：キモ
トリプシノーゲンＡ、Ｂ：卵白アルブミン。 Ｃ：牛血清アルブミン、Ｄ：チトクロームＣ）を示す。 第４図は参考例５に開示した発現用プラスミドｐＬＣ２
の構築図を示す。 第５図は１４６個のアミノ酸からなるＩＦＮ−γのアミ
ノ酸配列を示す。 第１図 仝ｊ−量（ｘｌｏ３１ 第２図 発Ｓ’Ｌ　　（ＸＩＯ４） 第３図 扮′ｊ−号　（ｘ１０４） 第５図 Ｃｙｓ　Ｔｙｒ　Ｃｙｓ　Ｇｌｎ　Ａｓｐ　ＰｒｃＡｌ
ａ　Ｇｌｕ　Ａｓｎ　Ｌｅｕ　Ｌｙｓ　ＬＹＥＧＩＹ　
Ｈｉｓ　Ｓｅｒ　Ａｓｐ　Ｖａｌ　Ａ１＝Ｌｅｕ　Ｐｈ
ｅ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ工１ｅ　ＬｅｔＧｌｕ　Ｇｌｕ　Ｓ
ｅｒ　Ａｓｐ　Ａｒｇ　ＬＹＥＧｌｎ工１ｅ　Ｖａｌ　
Ｓｅｒ　Ｐｈｅ’　ＴＹＩＬｙｓ　Ａｓｎ　Ｐｈｅ　Ｌ
ｙｓ　Ａｓｐ　ＡｓＩＬｙｓ　Ｓｅｒ　Ｖａｌ　Ｇｌｕ
　Ｔｈｒ工１（）　Ｔｙｒ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ ：　Ｔｙｒ　Ｐｈｅ　Ａｓｎ　Ａｌａ Ｌ　Ａｓｐ　Ａｓｎ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ １　ＬＹＳ　Ａｓｎ　Ｔｒｐ　Ｌｙｓ ；　工１ｅ　　Ｍｅｔ　　Ｇｌｎ　　Ｓｅｒ’　Ｐｈｅ
　ＬＹＳ　Ｌｅｕ　ｐｈｅ ）Ｇｌｎ　　Ｓｅｒ　　工ｌｅ　　Ｇ１ｎ８０　　　　
゛ ；　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ａｓｐ　Ｍｅｔ Ａｓｎ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ　Ｐｈｅ　ＰｈｅＬＹＳ　Ａｒ
ｇ　Ａｓｐ　Ａｓｐ　ＰｈｅＴｙｒ　Ｓｅｒ　Ｖａｌ　
Ｔｈｒ　ＡｓｐＬｙｓ　Ａｌａ　工１ｅ　Ｈｉｓ　Ｇｌ
ｕＡｌａ　Ｇｌｕ　　Ｌｅｕ　　Ｓｅｒ　　Ｐｒ。 ＬＹＳ　Ａｒｇ　　ＬＹＳ　Ａｒｇ　　５ｅｒＧｌｙ　
Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ａｌａ　５ｅｒＡＳｎ　Ｓｅｒ　Ａｓ
ｎ　Ｌｙｓ　ＬＹＳＧｌｕ　Ｌｙｓ　Ｌｅｕ　Ｔｈｒ　
ＡｓｎＬｅｕ　Ａｓｎ　Ｖａｌ　Ｇｌｎ　ＡｒｇＬｅｕ
　　工ｌｅ　　Ｇｌｎ　　Ｖａｌ　　Ｍｅｔへｌａ　Ａ
ｌａ　、Ｌ　　　Ｔｈｒ　Ｇｌｙｓ Ｇｌｎ　Ｍｅｔ　Ｌａｕ　Ｐｈｅ　Ａｒｇｌｎ

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）蛋白変性剤を含有するヒトγ型インターフェロン
   の希薄水溶液から蛋白変性剤を除去し、該溶液を液体状
   態で熟成させ、ついで濃縮することを特徴とする高濃度
   ヒトγ型インターフェロン水溶液の製造法。
2. （２）ヒトγ型インターフェロンが第５図で示されるポ
   リペプチドのＮ末端部分の４個以下のアミノ酸が欠落し
   たＮ末端部欠落スピーシーズまたは当該Ｎ末端部欠落ス
   ピーシーズのＣ末端部分が切断されたものである特許請
   求の範囲第１項記載の製造法。