JPS61154567A - 架橋グリコサミノグリカン複合体 - Google Patents
架橋グリコサミノグリカン複合体Info
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- JPS61154567A JPS61154567A JP59273492A JP27349284A JPS61154567A JP S61154567 A JPS61154567 A JP S61154567A JP 59273492 A JP59273492 A JP 59273492A JP 27349284 A JP27349284 A JP 27349284A JP S61154567 A JPS61154567 A JP S61154567A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
［産業上の利用分野］
本発明は、架橋グリコサミノグリカン複合体に関し、更
に詳しくは、人工臓器の製造材料として有用な、架橋グ
リコサミノグリカンと、コラーゲン又はゼラチンとから
なる複合体に関するものである。
に詳しくは、人工臓器の製造材料として有用な、架橋グ
リコサミノグリカンと、コラーゲン又はゼラチンとから
なる複合体に関するものである。
［従来技術及びその問題点］
従来より、グリコサミノグリカン（以下ｒＧＡＧ」とい
う）をコラーゲンＣ以下「ＣＯ」という）又はゼラチン
（以下ｒ ＧＥＪという）と接触させると、複合体が形
成されることが知られてい−る。特に、ＧＡＧとＣＯと
の複合体は、生体の結合組織を構成する形の典型的なも
のである。
う）をコラーゲンＣ以下「ＣＯ」という）又はゼラチン
（以下ｒ ＧＥＪという）と接触させると、複合体が形
成されることが知られてい−る。特に、ＧＡＧとＣＯと
の複合体は、生体の結合組織を構成する形の典型的なも
のである。
しかしながら、生体から純粋に取り出されたＧＡＧを単
にＣＯ又はその水溶性誘導蛋白質であるＧＥと混合した
のみでは、硝子体にみられる透明で高粘弾性のヒアルロ
ン酸（以下ｒ ＨＡＪという）−ＣＯ複合体及び結合組
織の基質の代替物を得ることはできず、このようにして
得られる複合体は、人工臓器の製造材料として充分なも
のとはいえない、その原因は、ＧＡＧ水溶液とＣＯ水溶
液を混合したときに、すぐに繊維状の共沈殿物を生じて
しまうためと報告されている（ Ｐｏｄｒａｊｋ７゜Ｖ
、、 ｅｔ ａｌ、 ： Ｂｉｏｃｈ、 Ｂｉａｐｈｙ
ｓ、 Ａｃｔａ、 ２２９．８９０（１９７１）） 。
にＣＯ又はその水溶性誘導蛋白質であるＧＥと混合した
のみでは、硝子体にみられる透明で高粘弾性のヒアルロ
ン酸（以下ｒ ＨＡＪという）−ＣＯ複合体及び結合組
織の基質の代替物を得ることはできず、このようにして
得られる複合体は、人工臓器の製造材料として充分なも
のとはいえない、その原因は、ＧＡＧ水溶液とＣＯ水溶
液を混合したときに、すぐに繊維状の共沈殿物を生じて
しまうためと報告されている（ Ｐｏｄｒａｊｋ７゜Ｖ
、、 ｅｔ ａｌ、 ： Ｂｉｏｃｈ、 Ｂｉａｐｈｙ
ｓ、 Ａｃｔａ、 ２２９．８９０（１９７１）） 。
また１人工皮膚等の製造材料としては、三次元的構造を
有することが好ましいが、以上のようにして得られる複
合体は、二次元的構造を有するたみ、かかる製造材料と
しては適さない。
有することが好ましいが、以上のようにして得られる複
合体は、二次元的構造を有するたみ、かかる製造材料と
しては適さない。
ＧＡＧの中でも高分子量で水溶液中で三次元的構造を有
するＨＡは、ＨＡとＣＯの混合比や混合方法によっては
、高粘弾性で水溶性のＨＡ−ＧＯ複合体を形成するが、
その三次元的構造が不充分であるため、厳格な製造条件
が要求され１人工臓器の製造材料として、決して充分な
ものとはいえない。
するＨＡは、ＨＡとＣＯの混合比や混合方法によっては
、高粘弾性で水溶性のＨＡ−ＧＯ複合体を形成するが、
その三次元的構造が不充分であるため、厳格な製造条件
が要求され１人工臓器の製造材料として、決して充分な
ものとはいえない。
そこで１本発明者らは、人工臓器の製造材料として優れ
た特性を有するものを得ることを目的として鋭意研究を
重ねた結果、架橋ＧＡＧをＧＯ又はＧＥと接触させるこ
とにより、本発明の目的を達成できることを見出し、本
発明を完成するに至った。
た特性を有するものを得ることを目的として鋭意研究を
重ねた結果、架橋ＧＡＧをＧＯ又はＧＥと接触させるこ
とにより、本発明の目的を達成できることを見出し、本
発明を完成するに至った。
［発明の構成］
本発明の複合体は、架橋ＧＡＧと、ＣＯ又はＧＥとから
なることを特徴とするものである。
なることを特徴とするものである。
本発明に用いる架橋ＧＡＧとしては、 ＨＡ、コンドロ
イチン硫酸（以下ｒＧｈｓＪという） （Ａ、 Ｂ、
Ｃ。
イチン硫酸（以下ｒＧｈｓＪという） （Ａ、 Ｂ、
Ｃ。
Ｄ、 Ｅ、 Ｆ、 Ｈ） 、 ヘパリン（以下ｒＨｅｐ
Ｊという）、ヘパラン硫酸（以下ｒ Ｈ９Ｊという）、
ケラタン硫酸（以下「ＫＳ」という）及びケラタンポリ
硫酸（以下ｒＫＰＳＪという）等のＧＡＧ又はその塩を
、適当な架橋剤で架橋させてなるものであれば如何なる
ものでもよい。
Ｊという）、ヘパラン硫酸（以下ｒ Ｈ９Ｊという）、
ケラタン硫酸（以下「ＫＳ」という）及びケラタンポリ
硫酸（以下ｒＫＰＳＪという）等のＧＡＧ又はその塩を
、適当な架橋剤で架橋させてなるものであれば如何なる
ものでもよい。
好ましい架橋剤としては、例えば、多官能性エポキシ化
合物及び臭化シアン等が挙げられる。
合物及び臭化シアン等が挙げられる。
本発明において、多官能性エポキシ化合物とは、エポキ
シ基を少なくとも１個有する化合物であって、その他に
、エポキシ基を含めて、ＧＡＧを架橋するに適した官能
基を１測置１―有する化合物をいう。
シ基を少なくとも１個有する化合物であって、その他に
、エポキシ基を含めて、ＧＡＧを架橋するに適した官能
基を１測置１―有する化合物をいう。
かかる化合物としては、例えば、ハロメチルオキシラン
化合物及びビスエポキシ化合物などが挙げられる。ハロ
メチルオキシラン化合物としては、エピクロルヒドリン
、エピブロムヒドリン。
化合物及びビスエポキシ化合物などが挙げられる。ハロ
メチルオキシラン化合物としては、エピクロルヒドリン
、エピブロムヒドリン。
β−メチルエピクロルヒドリン及びβ−メチルエピブロ
ムヒドリンなどが挙げられる。ビスエポキシ化合物とし
ては、１．２−ビス（２，３−エポキシプロポキシ）エ
タン、１．４−ビス（２，３−エポキシプロポキシ）ブ
タン、１．６−ビス（２，３−エポキシプロポキシ）ヘ
キサン及びビスフェノールＡ又はビスフェノールＦのジ
グリシジルエーテルなどが挙げられる。
ムヒドリンなどが挙げられる。ビスエポキシ化合物とし
ては、１．２−ビス（２，３−エポキシプロポキシ）エ
タン、１．４−ビス（２，３−エポキシプロポキシ）ブ
タン、１．６−ビス（２，３−エポキシプロポキシ）ヘ
キサン及びビスフェノールＡ又はビスフェノールＦのジ
グリシジルエーテルなどが挙げられる。
本発明に用いる架橋ＧＡＧのうち、架橋剤とじて多官能
性エポキシ化合物を用いたもの及びその製造法は、特願
昭５１３−８８４４０号及び同５１３−１３２８８５号
明細：悸に詳述されている。
性エポキシ化合物を用いたもの及びその製造法は、特願
昭５１３−８８４４０号及び同５１３−１３２８８５号
明細：悸に詳述されている。
架橋剤として臭化シアンを用いたものは、例えば、ＧＡ
Ｇ水溶液に、ｐＨ９〜１１の条件下で臭化シアンを添加
することにより製造することができるが、高架橋度のも
の及びアルカリに弱いＧＡＧではＧＡＧの分解を伴う。
Ｇ水溶液に、ｐＨ９〜１１の条件下で臭化シアンを添加
することにより製造することができるが、高架橋度のも
の及びアルカリに弱いＧＡＧではＧＡＧの分解を伴う。
架橋ＧＡＧは、ＧＡＧ又はその塩と架橋剤とのモル比を
変え、架橋度を調節することにより、出発物質のＧＡＧ
より高粘弾性で水溶性のもの（以下「Ｓ−架橋ＧＡＧ
Ｊという）から、透明でゲル状の水不溶性のもの（以下
［ｉｓ−架橋ＧＡＧ Ｊという）まで自由に調製するこ
とが可能であり、得られた架橋ＧＡＧは１分解酵素に対
して優れた抵抗性を有する。
変え、架橋度を調節することにより、出発物質のＧＡＧ
より高粘弾性で水溶性のもの（以下「Ｓ−架橋ＧＡＧ
Ｊという）から、透明でゲル状の水不溶性のもの（以下
［ｉｓ−架橋ＧＡＧ Ｊという）まで自由に調製するこ
とが可能であり、得られた架橋ＧＡＧは１分解酵素に対
して優れた抵抗性を有する。
ＣＯとしては、水溶性ＣＯ及び不溶性ＣＯ並びに水溶性
ＣＯ若しくは不溶性ＣＯを加工したもの（以下「加Ｔ
ＣＯＪという）のいずれを用いてもよいが、水溶性の複
合体を得るには、水溶性ＣＯを用いなければならない。
ＣＯ若しくは不溶性ＣＯを加工したもの（以下「加Ｔ
ＣＯＪという）のいずれを用いてもよいが、水溶性の複
合体を得るには、水溶性ＣＯを用いなければならない。
架橋ＧＡＧと水溶性ＣＯ又はＧＥとの反応は、Ｓ−架橋
ＧＡＧ水溶液又はｉｓ−架橋ＧＡＧ懸濁液を、激しく撹
拌しつつ、これに水溶性ＣＯ又はＧＥの水溶液を徐々に
加えることにより行なうことができる。
ＧＡＧ水溶液又はｉｓ−架橋ＧＡＧ懸濁液を、激しく撹
拌しつつ、これに水溶性ＣＯ又はＧＥの水溶液を徐々に
加えることにより行なうことができる。
Ｓ−架橋ＧＡＧを用いた場合には、水溶性ＣＯ又はＧＥ
の添加量を調節することにより、水溶性の架橋ＧＡＧ複
合体（以下「Ｓ−複合体」という）又は水不溶性の架橋
ＧＡＧ複合体（以下ｒｉｓ−複合体」という）を選択的
に得ることができる。ｉＳ−架橋ＧＡＧを用いた場合に
は、ｉｓ−複合体が得られる。また、グアニジン塩酸水
溶液に、Ｓ−架橋ＧＡＧ又はｒｓ−架橋ＧＡＧと水溶性
ＧＯ又はＧＥの水溶液とを加えて混合した後、徐々にグ
アニジン塩酸を除去すると、均一なＳ−複合体又はｉｓ
−複合体を得ることができる。
の添加量を調節することにより、水溶性の架橋ＧＡＧ複
合体（以下「Ｓ−複合体」という）又は水不溶性の架橋
ＧＡＧ複合体（以下ｒｉｓ−複合体」という）を選択的
に得ることができる。ｉＳ−架橋ＧＡＧを用いた場合に
は、ｉｓ−複合体が得られる。また、グアニジン塩酸水
溶液に、Ｓ−架橋ＧＡＧ又はｒｓ−架橋ＧＡＧと水溶性
ＧＯ又はＧＥの水溶液とを加えて混合した後、徐々にグ
アニジン塩酸を除去すると、均一なＳ−複合体又はｉｓ
−複合体を得ることができる。
不溶性ＣＯ又は加工ＣＯと架橋ＧＡＧとの反応は、Ｓ−
架橋ＧＡＧ水溶液に、単に不溶性ＧＯ又は加工ＧＯの懸
濁液を加えることにより行なうことができ、この場合、
ｉｓ−複合体が得られる。
架橋ＧＡＧ水溶液に、単に不溶性ＧＯ又は加工ＧＯの懸
濁液を加えることにより行なうことができ、この場合、
ｉｓ−複合体が得られる。
［発明の効果］
本発明の複合体は、人工臓器の製造材料として優れた特
性を有する。
性を有する。
即ち、Ｓ−複合体は、透明かつ高粘弾性で、硝子体、関
節液及び結合組織の基質の代替物の製造に有用であり、
ＩＳ−複合体は、人工皮膚の製造材料として有用である
。
節液及び結合組織の基質の代替物の製造に有用であり、
ＩＳ−複合体は、人工皮膚の製造材料として有用である
。
［発明の実施例］
以下、調製例及び実施例により本発明を更に詳細に説明
するが、これらは、本発明の範囲を何ら制限するもので
はない。
するが、これらは、本発明の範囲を何ら制限するもので
はない。
調製例 Ｉ Ｌ１１ユ豆１１
ＨＡナトリウム塩（分子量７３０００Ｇ） ｌｅｇを０
．２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液４５０１に冷却しつつ溶
解し、０．４５ＰＬのミクロフィルターで１濾過した。
．２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液４５０１に冷却しつつ溶
解し、０．４５ＰＬのミクロフィルターで１濾過した。
１戸液に１ＯＮ水酸化ナト′リウム水溶液４０１を加え
て、撹拌下、エタノール５００１ とエピクロルヒドリ
ン６．０１を加えた。２０℃で２４時間反応し、反応液
を酢酸でｐ）１８．４に調整した。エタノール５００１
を加えて白色沈殿物を得、枦取後、エタノールで充分に
洗炸し、減圧乾燥した。
て、撹拌下、エタノール５００１ とエピクロルヒドリ
ン６．０１を加えた。２０℃で２４時間反応し、反応液
を酢酸でｐ）１８．４に調整した。エタノール５００１
を加えて白色沈殿物を得、枦取後、エタノールで充分に
洗炸し、減圧乾燥した。
収 量 ８．
８ｇ非ニユートン指数 ０．６０ 元素分析値 Ｃ： ４２．０％、 Ｈ： ４．８７％
。
８ｇ非ニユートン指数 ０．６０ 元素分析値 Ｃ： ４２．０％、 Ｈ： ４．８７％
。
Ｎ： ３．２９％、 Ｎａ：５．８１％調製例 ２ｓ−
橋ｃｈｓ−ｃの・ ＣｈＳ−Ｃナトリウム塩（分子量 ５３０００） ３．
１ｇを０．７５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液に１２．５％
になるように溶解し、撹拌下、エタノール１容量を加え
、生じたアメ状沈殿物を分取した。このアメ状沈殿物に
エピクロルヒドリン０．１８ｍ１を加えて充分に練り合
わせ、２０℃で２４時間放置した０反応液に水３０１を
加えて溶解し、酢酸でｐＨ８，０として、エタノール沈
殿を行なった。再度、水に溶解し、エタノール沈殿を行
ない減圧乾燥した。
橋ｃｈｓ−ｃの・ ＣｈＳ−Ｃナトリウム塩（分子量 ５３０００） ３．
１ｇを０．７５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液に１２．５％
になるように溶解し、撹拌下、エタノール１容量を加え
、生じたアメ状沈殿物を分取した。このアメ状沈殿物に
エピクロルヒドリン０．１８ｍ１を加えて充分に練り合
わせ、２０℃で２４時間放置した０反応液に水３０１を
加えて溶解し、酢酸でｐＨ８，０として、エタノール沈
殿を行なった。再度、水に溶解し、エタノール沈殿を行
ない減圧乾燥した。
収 量 ２．
８ｇ５ｚ水溶液における粘 Ｎａ： Ｌ２５％ ｊＪＪ製例 ３ ｉ ｓ −ＣｈＳ−Ａの・ＧｈＳ
−ＡナトリウムＩ！４（分子量 ３００００） ５．０
ｇを０．４Ｎ水酸化ナトリウム水溶液に２０％の濃度に
溶解した。エタノール２５１を加えて生じたアメ状沈殿
物を分取した。この沈殿物にエピクロルヒドリン０．−
７５履ｌを加えて充分に練り合わせ、２０℃で２４時間
放置した０反応物に水５０１を加え酢酸で中和後、３０
００ｒｐｍで遠心した。得られた白色沈殿物を２．０Ｍ
塩化ナトリウム水溶液５０１で２回、更に水５０１で３
回洗浄し、エタノールを加えて脱水後。
８ｇ５ｚ水溶液における粘 Ｎａ： Ｌ２５％ ｊＪＪ製例 ３ ｉ ｓ −ＣｈＳ−Ａの・ＧｈＳ
−ＡナトリウムＩ！４（分子量 ３００００） ５．０
ｇを０．４Ｎ水酸化ナトリウム水溶液に２０％の濃度に
溶解した。エタノール２５１を加えて生じたアメ状沈殿
物を分取した。この沈殿物にエピクロルヒドリン０．−
７５履ｌを加えて充分に練り合わせ、２０℃で２４時間
放置した０反応物に水５０１を加え酢酸で中和後、３０
００ｒｐｍで遠心した。得られた白色沈殿物を２．０Ｍ
塩化ナトリウム水溶液５０１で２回、更に水５０１で３
回洗浄し、エタノールを加えて脱水後。
減圧乾燥した。
収 量 ５．
０ｇＮａ： Ｌ２２％ 調製例 ４ｉＳ−橋ＧＡＧの・ 調製例３の方法に準じて以下に示す各種ｉｓ−架橋ＧＡ
Ｇを調製した。
０ｇＮａ： Ｌ２２％ 調製例 ４ｉＳ−橋ＧＡＧの・ 調製例３の方法に準じて以下に示す各種ｉｓ−架橋ＧＡ
Ｇを調製した。
（１） ｉｓ−架橋ＣｈＳ−８
（２） ｉｓ−架橋ＣｂＳ−Ｃ
（３） ｉｓ−架橋Ｈａｐ
実施例 １ 各種ｉｓ−合体の：、％Ｉ調製例３及び
４で得た各種ｉｓ−架橋ＧＡＧを用いて、水溶性ＣＯで
あるアテロコラーゲンとの複合体を調製するとともに吸
着量を測定した。アテロコラーゲンは株式会社 高研よ
り入手し、その１．１ｇを１．６７■に酢酸に溶解し、
ＧｅＯ２のフィルターを通過させて使用した（５１℃ｇ
／５ｏ１）、 １５ｍ１の試験管にｉａ−架橋ＧＡＧを
約５脂ｇ取り、１．８７ｍＭ酢酸１０１に懸濁させた。
４で得た各種ｉｓ−架橋ＧＡＧを用いて、水溶性ＣＯで
あるアテロコラーゲンとの複合体を調製するとともに吸
着量を測定した。アテロコラーゲンは株式会社 高研よ
り入手し、その１．１ｇを１．６７■に酢酸に溶解し、
ＧｅＯ２のフィルターを通過させて使用した（５１℃ｇ
／５ｏ１）、 １５ｍ１の試験管にｉａ−架橋ＧＡＧを
約５脂ｇ取り、１．８７ｍＭ酢酸１０１に懸濁させた。
これにアテロコラーゲン水溶液０，５層ｌを加え、充分
に混合（３０分）した、その後、 ３０００ｒｐｍで遠
心分離し、沈殿物を１．８７ｍＭ酢酸 １０ｍ１で３回
洗浄した（１．８７５Ｍ酢酸洗液を集めＧＯの定量を行
なった）、結合ＧＯは２Ｍグアニジン塩酸水溶液（ｐＨ
７，０） １０ｍ１を加え、４０分混合した後、３００
０ｒｐ■で遠心して溶出した。更に、同緩衝液１０１で
２回溶出させ、全グアニジン塩酸水溶液を集めＧＯの定
量を行なった。結果を表１に示す。
に混合（３０分）した、その後、 ３０００ｒｐｍで遠
心分離し、沈殿物を１．８７ｍＭ酢酸 １０ｍ１で３回
洗浄した（１．８７５Ｍ酢酸洗液を集めＧＯの定量を行
なった）、結合ＧＯは２Ｍグアニジン塩酸水溶液（ｐＨ
７，０） １０ｍ１を加え、４０分混合した後、３００
０ｒｐ■で遠心して溶出した。更に、同緩衝液１０１で
２回溶出させ、全グアニジン塩酸水溶液を集めＧＯの定
量を行なった。結果を表１に示す。
表１
（１）調製例１で得たＳ−架橋ＨＡを３３３．３ｍｇず
つ、それぞれ水２５０１に溶解した。それぞれの溶液に
、種々の濃度のアテロコラーゲン１．８７ｍＮ ＃酸溶
液５０１を撹拌下加え、２０”Ｃで３０分放置した後、
３０ＧＯｒｐｍで３０分遠心し、上清を凍結乾燥した。
つ、それぞれ水２５０１に溶解した。それぞれの溶液に
、種々の濃度のアテロコラーゲン１．８７ｍＮ ＃酸溶
液５０１を撹拌下加え、２０”Ｃで３０分放置した後、
３０ＧＯｒｐｍで３０分遠心し、上清を凍結乾燥した。
凍結乾燥品のウロン酸回収率をカルバゾール−硫酸法に
よって測定した。更に５１％になるように生理食塩水に
溶解し、回転粘度計（■東京計器製Ｅ型粘度計）を用い
て粘度を測定した。また、ＨＡ（分子量８０００００）
００．４２８％水溶液１１を用いて同様の実験を行な
った。結果を図１及び図２に示す０図１において、Ｏ印
及びφ印は、それぞれ、Ｓ−架橋ＨＡ及びＨＡを用いた
ときの上清におけるウロン酸回収率を表わす０図２にお
いて、０印及び・印は。
よって測定した。更に５１％になるように生理食塩水に
溶解し、回転粘度計（■東京計器製Ｅ型粘度計）を用い
て粘度を測定した。また、ＨＡ（分子量８０００００）
００．４２８％水溶液１１を用いて同様の実験を行な
った。結果を図１及び図２に示す０図１において、Ｏ印
及びφ印は、それぞれ、Ｓ−架橋ＨＡ及びＨＡを用いた
ときの上清におけるウロン酸回収率を表わす０図２にお
いて、０印及び・印は。
それぞれ、Ｓ−架ＭＨＡ及びＨＡを用いたときの上清か
ら得られた複合体の生理食塩水溶液の粘度を表わす。
ら得られた複合体の生理食塩水溶液の粘度を表わす。
図１及び図２から、Ｓ−架橋）ＩＡを用いれば、ＨＡを
用いた場合に比し、水溶性で高粘弾性の複合体が収率よ
〈得られることがわかる。
用いた場合に比し、水溶性で高粘弾性の複合体が収率よ
〈得られることがわかる。
（２）図１における反応液中の架！ＨＡの量比が７５％
以上の範囲では、水不溶化による複合体の損失がほとん
どなかったので、該量比が８０％となるような条件下で
架橋ＨＡのＳ−複合体を調製した。
以上の範囲では、水不溶化による複合体の損失がほとん
どなかったので、該量比が８０％となるような条件下で
架橋ＨＡのＳ−複合体を調製した。
即ち、調製例１で得たＳ−架橋ＨＡ Ｉｇを水３００
１に溶解し、激しく撹拌しつつ、コラーゲン０．３ｚを
含有する０、００１７Ｍ酢酸水溶液を徐々に滴下した。
１に溶解し、激しく撹拌しつつ、コラーゲン０．３ｚを
含有する０、００１７Ｍ酢酸水溶液を徐々に滴下した。
滴下後、２０℃で６０分放置した後、３０００ｒｐｍで
３０分漬ｄ゛ｉ１．［−ノー）４ノｍｔｔ＝／＃ＪＭｌ
−−ｙ−ノ１１１ノＲＬＩΔｋｌ’！ｎｋ／７）ｃ−ｈ
ｉ丁会合体得た。
３０分漬ｄ゛ｉ１．［−ノー）４ノｍｔｔ＝／＃ＪＭｌ
−−ｙ−ノ１１１ノＲＬＩΔｋｌ’！ｎｋ／７）ｃ−ｈ
ｉ丁会合体得た。
収 量 １．１８ｇ１（
Ａ含量 ８１．３ ％また。得られ
たＳ−複合体（架橋ＨＡ−Ｃｏ複合体）を、ＨＡ−ＧＯ
複合体、架橋ＨＡとともに電気泳動（酢酸セルロース膜
、展開液０．２Ｍギ酸／ピリジン（ｐｉ４３．０）、０
．５＋ｅＡ／ｃｍ、 ５０分 泳動）に付したアリュー
シャンプルー染色を行なった。結果を図３に示す。図３
において、Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤは、それぞれ、）ＩＡ、
ＨＡ−１００複合体、架橋ＨＡ及び架橋ＨＡ−ＧＯ複合
体の電気法動因を示す。
Ａ含量 ８１．３ ％また。得られ
たＳ−複合体（架橋ＨＡ−Ｃｏ複合体）を、ＨＡ−ＧＯ
複合体、架橋ＨＡとともに電気泳動（酢酸セルロース膜
、展開液０．２Ｍギ酸／ピリジン（ｐｉ４３．０）、０
．５＋ｅＡ／ｃｍ、 ５０分 泳動）に付したアリュー
シャンプルー染色を行なった。結果を図３に示す。図３
において、Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤは、それぞれ、）ＩＡ、
ＨＡ−１００複合体、架橋ＨＡ及び架橋ＨＡ−ＧＯ複合
体の電気法動因を示す。
実施例３［のＳ−合体の１−
（１）調製例２で得た架橋ｃｈｓ−ｃを５００１ｇずつ
、それぞれ水７５１に溶解した。それぞれの溶液に、種
々の濃度のアテロコラーゲン水溶液５０ｓＩ Ｃそれぞ
れ、ｌ：０２．５肩ｇ、 ８．３３ｍｇ、 １Ｇ、２膳
ｇ、 ２４．９ｍｇ。
、それぞれ水７５１に溶解した。それぞれの溶液に、種
々の濃度のアテロコラーゲン水溶液５０ｓＩ Ｃそれぞ
れ、ｌ：０２．５肩ｇ、 ８．３３ｍｇ、 １Ｇ、２膳
ｇ、 ２４．９ｍｇ。
４９．４５ｍｇ及び１００．８■ｇ含有）を撹拌下加え
、２０°Ｃで３０分放置した後、３０００ｒｐｍで３０
分遠心し、上清を凍結乾燥した。凍結乾燥品のウロン酸
回収率をカルバゾール−硫酸法によって測定した。また
、ＣｈＳ−ＣＣ分子ｔ ３００００）（７） ０．８７
％水溶液を用イテ同様の実験を行なった。結果を図４に
示す０図４において、Ｏ印及び・印は、それぞれ、Ｓ−
架橋ｃｈｓ−ｃ及びｃｈｓ−ｃを用いたときの上清にお
けるウロン酸回収率を表わす。図４から、ＣｈＳ−Ｃが
ＧＯと反応し、複合体を形成後、直ちに水不溶化するこ
とに対し、Ｓ−架橋ｃｈｓ−ｃは、かなりのＣＯと結合
しても、水溶性を保持していることがわかる。
、２０°Ｃで３０分放置した後、３０００ｒｐｍで３０
分遠心し、上清を凍結乾燥した。凍結乾燥品のウロン酸
回収率をカルバゾール−硫酸法によって測定した。また
、ＣｈＳ−ＣＣ分子ｔ ３００００）（７） ０．８７
％水溶液を用イテ同様の実験を行なった。結果を図４に
示す０図４において、Ｏ印及び・印は、それぞれ、Ｓ−
架橋ｃｈｓ−ｃ及びｃｈｓ−ｃを用いたときの上清にお
けるウロン酸回収率を表わす。図４から、ＣｈＳ−Ｃが
ＧＯと反応し、複合体を形成後、直ちに水不溶化するこ
とに対し、Ｓ−架橋ｃｈｓ−ｃは、かなりのＣＯと結合
しても、水溶性を保持していることがわかる。
以りのようにして得られた本発明のＳ−複合体について
、実施例２と同様にして、粘度を測定した。結果を表２
に示す。
、実施例２と同様にして、粘度を測定した。結果を表２
に示す。
表 ２
（２）表２において、最も粘度の高い複合体が得られる
条件、即ち、凍結乾燥品中の架橋ＣｈＳ−Ｃ含量が８４
％となるような条件下で架橋ｃｈｓ−ｃとｃｏとのＳ−
複合体を調製した。
条件、即ち、凍結乾燥品中の架橋ＣｈＳ−Ｃ含量が８４
％となるような条件下で架橋ｃｈｓ−ｃとｃｏとのＳ−
複合体を調製した。
収 率 ８８．４駕
ｃｈｓ−ｃ含量 ９４．７ｇ１Ａ′ｌｌ！
例２で得たＳ−架橋ｃｈｓ−ｃを１１００Ｉ１ずつ、そ
れぞれ水 １００１に溶解した。それぞれの溶液に、種
々ノ濃度＋７）ＧＥ水溶液１０ｈｌ（それぞれ、ＧＥｌ
ｈｇ。
ｃｈｓ−ｃ含量 ９４．７ｇ１Ａ′ｌｌ！
例２で得たＳ−架橋ｃｈｓ−ｃを１１００Ｉ１ずつ、そ
れぞれ水 １００１に溶解した。それぞれの溶液に、種
々ノ濃度＋７）ＧＥ水溶液１０ｈｌ（それぞれ、ＧＥｌ
ｈｇ。
２０ｍｇ、 ４ｈｇ、 ＢＯＢ、 ８０Ｂ及び１８０■
ｇ含有）を撹拌下加え、２０℃テ３０分放置した後、３
０ＧＯｒｐｍで３０分遠心し、上清を凍結乾燥した。
ｇ含有）を撹拌下加え、２０℃テ３０分放置した後、３
０ＧＯｒｐｍで３０分遠心し、上清を凍結乾燥した。
また、ＣｈＳ−Ｃ（分子量３００００）を２００履ｇず
つ、それぞれ水１００ｍ１に溶解した。それぞれの溶液
に、種々の濃度のＧＥ水溶液１００＋１（それぞれ、Ｇ
ＥＩＯ鵬ｇ。
つ、それぞれ水１００ｍ１に溶解した。それぞれの溶液
に、種々の濃度のＧＥ水溶液１００＋１（それぞれ、Ｇ
ＥＩＯ鵬ｇ。
２０℃１ｇ、 ４ｈｇ、 ８ｈｇ、 ８０＋ｓｇ及び１
６０ｍｇ含有）を撹拌下加え、２０℃で３０分放置した
後、３０００ｒｐｍで３０分遠心し、上清を凍結乾燥し
た。
６０ｍｇ含有）を撹拌下加え、２０℃で３０分放置した
後、３０００ｒｐｍで３０分遠心し、上清を凍結乾燥し
た。
凍結乾燥品を５％になるように生理食塩水に溶解したと
ころ、図５に示す結果を得た０図５において、Ｏ印及び
φ印は、それぞれ、Ｓ−架橋ｃｈｓ−ｃ及びｃｈｓ−ｃ
を用いたときの上清から得られた複合体の生理食塩水溶
液の粘度を表わす、 ｃｈｓ−ｃは、少量のＧＥの添加
により白濁し、水不溶化したが、Ｓ−架橋ｃｈｓ−ｃは
、かなりＣＯと結合しても水溶性を保持していた。
ころ、図５に示す結果を得た０図５において、Ｏ印及び
φ印は、それぞれ、Ｓ−架橋ｃｈｓ−ｃ及びｃｈｓ−ｃ
を用いたときの上清から得られた複合体の生理食塩水溶
液の粘度を表わす、 ｃｈｓ−ｃは、少量のＧＥの添加
により白濁し、水不溶化したが、Ｓ−架橋ｃｈｓ−ｃは
、かなりＣＯと結合しても水溶性を保持していた。
応用例
（１）実施例２（２）で得た架橋ＨＡとＣＯとのＳ−複
合体（以下「架橋ＨＡ−ＧＯ複合体」という）及び実施
例３（２）テ得た架橋ｃｈｓ−ｃとＣＯとのＳ−複合体
（以下「架＊ ｃｈｓ−ｃｏ複合体」という）を、それ
ぞれ１．５％の濃度になるように水に溶解し、塩化ビニ
ル板上にアプリケーターを用いて一定の厚さに塗布し、
４０℃の温風で２０時間加温脱水した。
合体（以下「架橋ＨＡ−ＧＯ複合体」という）及び実施
例３（２）テ得た架橋ｃｈｓ−ｃとＣＯとのＳ−複合体
（以下「架＊ ｃｈｓ−ｃｏ複合体」という）を、それ
ぞれ１．５％の濃度になるように水に溶解し、塩化ビニ
ル板上にアプリケーターを用いて一定の厚さに塗布し、
４０℃の温風で２０時間加温脱水した。
それぞれの膜を剥離して厚さ０．００３ｃ■の膜を調製
した。
した。
また、対照トｌ、−’（、ＨＡ（分子量８０００００）
（７）１．５％水溶液を同様に処理して厚さ０．００
３ｃｍのＨＡｌｌｆｉを調製した。
（７）１．５％水溶液を同様に処理して厚さ０．００
３ｃｍのＨＡｌｌｆｉを調製した。
（２）６週令のウィスター系ラット４匹を一群として、
毛刈の後、背部皮膚２ｃｍを切開し、直ちに切開部をミ
ツヘル縫合器により縫合した。
毛刈の後、背部皮膚２ｃｍを切開し、直ちに切開部をミ
ツヘル縫合器により縫合した。
縫合後、（１）で得た膜の２Ｘ２ｃｍの正方形膜を縫合
部にのせ、その上に、生理食塩水で湿らしたガーゼをの
せてテープで固定した。２週間後、ラントを層殺し、縫
合針を外した後、断面がＩＣｌ１１となるように皮膚切
片を作成した。■東洋ボールドウィン製テンシトロン万
能試験＠ ＲＴ）Ｉ−５０を用いて皮膚切片の引張耐力
を測定した。結果を表３に示す。
部にのせ、その上に、生理食塩水で湿らしたガーゼをの
せてテープで固定した。２週間後、ラントを層殺し、縫
合針を外した後、断面がＩＣｌ１１となるように皮膚切
片を作成した。■東洋ボールドウィン製テンシトロン万
能試験＠ ＲＴ）Ｉ−５０を用いて皮膚切片の引張耐力
を測定した。結果を表３に示す。
表 ３
表３から、本発明の複合体からなる膜は、優れた治癒促
進効果を有することがわかる。
進効果を有することがわかる。
図１は１反応液中の架橋）ＩＡ又は）ＩＡｆ）量比によ
る」二清のウロン酸回収率の変化を示す図である０図２
は、凍結乾燥品中の架橋ＨＡ又はＨＡの含量による複合
体溶液の粘度の変化を示す図である０図３は、ＨＡ、架
橋ＨＡ及びその複合体の電気泳動図である０図４は、反
応液中の架橋ｃｈｓ−ｃ又はｃｈｓ−ｃの量比による上
清のウロン酸回収率の変化を示す図である。図５は、凍
結乾燥品中の架橋ｃｈｓ−ｃ又はｃｈｓ−ｃの含量によ
る複合体溶液の粘度の変化を示す図である。 図 １ ｇ扁−’ｆＬ’ｆＱＪｉ−’１ｔ）ＨＡ ｙ−ｊＨＡ
ｎ１〜しＣ％）図２
る」二清のウロン酸回収率の変化を示す図である０図２
は、凍結乾燥品中の架橋ＨＡ又はＨＡの含量による複合
体溶液の粘度の変化を示す図である０図３は、ＨＡ、架
橋ＨＡ及びその複合体の電気泳動図である０図４は、反
応液中の架橋ｃｈｓ−ｃ又はｃｈｓ−ｃの量比による上
清のウロン酸回収率の変化を示す図である。図５は、凍
結乾燥品中の架橋ｃｈｓ−ｃ又はｃｈｓ−ｃの含量によ
る複合体溶液の粘度の変化を示す図である。 図 １ ｇ扁−’ｆＬ’ｆＱＪｉ−’１ｔ）ＨＡ ｙ−ｊＨＡ
ｎ１〜しＣ％）図２
Claims (1)
- 架橋グリコサミノグリカンと、コラーゲン又はゼラチン
とからなることを特徴とする複合体。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59273492A JPS61154567A (ja) | 1984-12-26 | 1984-12-26 | 架橋グリコサミノグリカン複合体 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59273492A JPS61154567A (ja) | 1984-12-26 | 1984-12-26 | 架橋グリコサミノグリカン複合体 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61154567A true JPS61154567A (ja) | 1986-07-14 |
| JPH0586234B2 JPH0586234B2 (ja) | 1993-12-10 |
Family
ID=17528654
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59273492A Granted JPS61154567A (ja) | 1984-12-26 | 1984-12-26 | 架橋グリコサミノグリカン複合体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61154567A (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2622104A1 (fr) * | 1987-10-22 | 1989-04-28 | Bioetica Sa | Procede de stabilisation de phases lamellaires lipidiques hydratees, par ex. de liposomes, composition de phases lamellaires lipidiques hydratees, par ex. des liposomes, stabilisees par un emploi d'un support stabilisant a base d'atelocollagene et de glycosaminoglycannes et utilisation en pharmacie ou en cosmetologie |
| WO1989008465A1 (en) * | 1988-03-09 | 1989-09-21 | Terumo Kabushiki Kaisha | Medical material permitting cells to enter thereinto and artificial skin |
| EP0338813A2 (en) * | 1988-04-19 | 1989-10-25 | Koken Company Limited | Hyaluronic acid-containing aqueous solution or aqueous dispersion of collagen |
| FR2645455A2 (fr) * | 1987-10-22 | 1990-10-12 | Bioetica Sa | Procede de stabilisation de phases lamellaires lipidiques hydratees, par exemple de liposomes, composition de phases lamellaires lipidiques hydratees, par exemple des liposomes, stabilisees et utilisation en pharmacie ou en cosmetologie sous forme de compositions pharmaceutiques ou cosmetiques |
| JP2679409B2 (ja) * | 1990-05-29 | 1997-11-19 | ストライカー・コーポレーション | 合成骨マトリックス |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS58170721A (ja) * | 1982-03-17 | 1983-10-07 | アベ ウイドラ | 親水性バイオポリマ−コポリエレクトロライト |
-
1984
- 1984-12-26 JP JP59273492A patent/JPS61154567A/ja active Granted
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS58170721A (ja) * | 1982-03-17 | 1983-10-07 | アベ ウイドラ | 親水性バイオポリマ−コポリエレクトロライト |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2622104A1 (fr) * | 1987-10-22 | 1989-04-28 | Bioetica Sa | Procede de stabilisation de phases lamellaires lipidiques hydratees, par ex. de liposomes, composition de phases lamellaires lipidiques hydratees, par ex. des liposomes, stabilisees par un emploi d'un support stabilisant a base d'atelocollagene et de glycosaminoglycannes et utilisation en pharmacie ou en cosmetologie |
| FR2645455A2 (fr) * | 1987-10-22 | 1990-10-12 | Bioetica Sa | Procede de stabilisation de phases lamellaires lipidiques hydratees, par exemple de liposomes, composition de phases lamellaires lipidiques hydratees, par exemple des liposomes, stabilisees et utilisation en pharmacie ou en cosmetologie sous forme de compositions pharmaceutiques ou cosmetiques |
| WO1989008465A1 (en) * | 1988-03-09 | 1989-09-21 | Terumo Kabushiki Kaisha | Medical material permitting cells to enter thereinto and artificial skin |
| EP0338813A2 (en) * | 1988-04-19 | 1989-10-25 | Koken Company Limited | Hyaluronic acid-containing aqueous solution or aqueous dispersion of collagen |
| JP2679409B2 (ja) * | 1990-05-29 | 1997-11-19 | ストライカー・コーポレーション | 合成骨マトリックス |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0586234B2 (ja) | 1993-12-10 |
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Legal Events
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|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |