JPS61132180A - 植物細胞又は組織の培養方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ″　　（ａｌ　　産業上の利用分野 本発明は植物細胞又は組ａを培養増殖させるための培養
方法に関するものである。さらに詳しくは、植物細胞又
は組織をサスペンジョン状態で培養する方法において、
その培養系中へ酸素を効悪工く供給しかつ植物細胞又は
組織の生育を増大−１ｊ　Ｌめる方法に関するものであ
る。

本発明で云う植物組織とベサスベンジ目ン状態で培養可
、能なシュート、不定根、不定胚等の如き一部形態の分
化した植物細胞より成る集合組織を意味する。以下１本
明細書中では、植物細胞及び該組織を総称して植物細胞
等と記すことがある。

（ｂ）　　従来技術 従来植物細胞又は組織を培養するごとくよって、その親
植物体から得られる一次又は、二次の代謝産物、例えば
酵素、テルペノイド。

フラボノイド、ステロイド、アルカフイド。

キノン類、フェノール類等、医薬品２食品。

化粧品、ファインケミカルズ分野の有用物質を生産する
ことができることが知られている。

また、植物細胞又は組織より植物体に分化させる技術を
基にして、植物体の大量増殖が可能であることも知られ
ている。

かかる植物細胞若しくは組ａｔ−用いて、有用物質生産
、植物大量増殖全工業的に利用するだめには、植物細胞
もしくは組織の大量培養が必要であり、通常−殺微生物
培養と同様に液体サスベンンヨン培養法が用いられる。

一方、植物細胞等の培養においては、通常酸素（０，）
の供給を必要とし、そのためサスペンジョン液の液面の
気相部から酸素含有ガスを溶解させて供給する方法、又
はサスペンジョン液中へ酸素含有ガスを吹込んで供給す
る方法などによって、サスペンジョン液中の酸素を一定
濃度に維持している。これらの方法による酸素の供給は
小規模において植物細胞等を培養する場合には特に問題
を引起さないＯ しかし、植物細胞等の培養を工業的規模、集中高密度で
実施しようとする場合には、上記の酸素供給方法はいず
れも不適当である。

すなわち、サスペンジョン液面の自由表面から酸素を供
給する場合は、サスペンジョン液量が増大するとそれと
共に液表面の面積を増加させることが出来ず工業的規模
では、酸素の供給不足を避けることは不可能に近い。

ｔ　ｆ、−、サスペンジョン液中へ酸素含有ガスを吹込
んで供給する場合には、発泡によって液面が上昇し時に
は操作を継続することさえ困難となる。さらに、この方
式では気泡によって植物細胞等が持ち上げられ、培養上
好ましくない培地との分離現象がしばしばみられる。

前記したいずれの酸素供給方式も、工業的規模でしかも
高密度による培養を行う場合には、それらの欠点又は困
難性は更に拡大される。

そこで、本発明者は、上記の如き酸素供給方式の欠点が
なく、植物細胞等の生育にも阻害がなく工業的規模にお
いてもまた高密度培養においても採用し得、その上酸素
供給操作が簡単でかつ培養操作のトラブルがない方法に
ついて研究を進めた結果本発明に到達した。

（ｃ）　　発明の構成 すなわち、本発明は植物細胞等をサスペンジョン状態で
培養するに当り、酸素を溶解しているフルオａカーボン
−ヲ該すスペンション中に供給することｒ特徴とする他
物細胞等の培養方法である。

かかる本発明方法によれば酸素全溶解しているフルオロ
カーボンを植物細胞等が浮遊しているサスペンジョン液
中へ直接供給することによって、そのフルオロカーボン
の表面からサスペンジョン液中へ酸素の溶解拡散が起り
、該液中への酸素の供給が行なわれろ。

本発明者の研究によれば酸素を溶解しているフルオロカ
ーボン金植物細胞等が浮遊しているサスペンジョン液へ
直接供給してフルオロカーボンと該細胞等とが接触して
も化学的にもまた物理的にも該細胞等は安定であり、生
育には何等の悪影ＩＰ！を受けず増殖すること、殊に植
物細胞等を高密度で培養する場合にはサスペンジョンの
容積当り、大量の酸素を必要とし、そのような場合であ
っても大量に該フルオロカーボンを供給しても高密度培
養が何等の支障なく達成されることがわかった。

本発明の植物細胞等の培養方法はサスペンジョン状態の
植物細胞等の培養に適用されるが、サスペンジョン状態
とは、水性媒体中で植物細胞等それ自体が浮遊しながら
生育されるような浮遊培養をいう。

本発明の植物ｍ胞等の培養において培養される植物細胞
等とは、サスペンンヨン状態テ培養可能な全てのいわゆ
る高等植物又は顕花植物由来の植物細胞或いはシュート
、不定根、不定胚等の如き組織である。かかる細胞等は
、人為的或いは遺伝子操作により変性された細胞等であ
ってもよい。また、それは有用物質の含量、細胞増殖速
度等細胞特性の相異なる同種の細胞間、或いは種、属、
科等植物の分類上相異なる細胞間において変性されたも
のであってもよい。

具体的には、例えばタバコ（Ｎｉｃｏｔｉａｎａｔａｂ
ａｃｕｍ）、−２ルバタパフ（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ　ｒ
ｕｓｔｉｃａ）。

ペラドンナ（Ａｔｒｏｐａ　ｂｅｌｌａｄｏｎｎａ）、
シコバナヨウシュチョウセンアサガオ（Ｄａｔｕｒａ　
ｓｔｒａｍｏ　−ｎｉｕｍ）＋ケチョウセンアサガオ（
Ｄａｔｕｒａ　１ｎｎｏ　−ｘｉａ、Ｄａｔｕｒａ　ｍ
ｅｔｅｌｏｉｄｅｓ）、　ヨウシュチョウセンアサガオ
（ＤａｔｕｒＡｔａｔｕｌａ）、チョウセンアサガオ（
Ｄａｔｕｒａ　ｍｏｔｅｌ）、　ヒョＸ　（Ｈｙｏｓｅ
ｙａｍｕｓｎｉｇｅｒ）、ドウボイシア（Ｄｕｂｏｉｓ
ｉａ　ｍｙｏｐｏｒｏｉｄｅｓ）ハシリドコａ　（Ｓｃ
ｏｐｏｌｉａ　ｊａｐｏｎｉｃａ）、　　チョウセンハ
シリドフａ　（Ｓｃｏｐｏｌｉａ　ｐｏｒｕｉｆｌｏｒ
ａ）。

ハルマラ（Ｐｅｇａｎｕｍ　ｈａｒｍａｌａ）、　　ド
クニンジン（Ｃｏｎｉｕｍ　ｍａｃｕｌａｔｕｍ）、　
ニチニチソウ（Ｃａｔｈａｒａｔｒ−ｔｈｌｓ５　ｒｏ
ｓｅｕｓ）＋インドジャポク（Ｒａｕｖｒｏｌｆｉａｓ
ｅｒｐｅｎｔｉｎａ）、ジギタリス（Ｄｉｇｉｔａｌｉ
ｓ　ｐｕｒ−ｐｕｒｅａ　）　＊ケジギタリス（Ｄｌｇ
ｉｔａｌｉｓ　１ａｎａｔａ）。

ケシ（Ｐａｐａｕｅｒ　ｓｏｍｎｉｆｓｒｕｍ）、　／
％カマオニゲシ（Ｐａｐａｖｅｒ　ｂｒａｃｔｅａｔｕ
ｍｌ、　ヒ／ツルニチニチンウ（’Ｖｊｎｃａｍｉｎｒ
）、オウンｙ　（Ｃｏｐｔｉｓ　ｊａｐｏｎｌｃｓ）　
＊キハダ（Ｐｈｅｌｌｏｄｅｎｄｒｏｎ　ａｍｕｒｅｎ
ｓｅ）、ゴガツササデ（Ｐｈａｓｅｏｌｕｓ　ｖｕｌｇ
ａｒｉｓ）、キジュ（Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃａ　ａｅｕ
ｍ＋ｎａｔｅ）＋　　イヌガヤ（Ｃｅｐｈａｌｏｔａｘ
ｕｓ　ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎｊａ）、　　クログル（Ｊ
ｒｉｐｔｅｒｇｌｕｍ　ｗｉｌｆｏｒｄ目）、ヘンル−
ダ（Ｒｕｔａ　ｇｒａｖｅｏｌｅｎ＠）＋ヨウシュャマ
ゴボウ（Ｐｈｙｔｏｌａｃｃａ　ａｍｅｒｉｃａｎａ）
、ムギナデシコ（Ａｇｒｏａｔｅｍｍａ　ｇｉｔｈａｇ
ｏ）、サトウダイコン（Ｂｅｔａｖｕｌｇａｒｉｓ）＋
つ；ン（Ｃｕｃｕｒｍａ　ｌｏｎｇａ）＋アカザ（Ｃｈ
ｅｎｏｐｏｄｉｕｍ　ｃｅｎｔｒｏｒｕｂｒｕｍ）＋デ
リス（Ｄｅｒｒｉｓ＋ｉｌｌｉｐｔ１ｃｍ）、ジョチュ
ウギク（Ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍｅｉｎｓｒａｒｉ
ａｓｆｏｌｌｕｍ）、　　タマサキッヅラフジ（Ｓｔｅ
ｐｈａｎｊａ　ｃｅｐｈａｒａｎｔｈａ）、ヒキオコシ
（Ｉａｏｄｕｎｊａｐｏｎｉｃｕｓ）、ジオスコリ・ア
デルトイデア（Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ　ｄｅｌｔｏｉｄｅ
ａ）、サフラン（Ｃｒｏａｕｓｓａｔｌｖｕｓ）＋ヤマ
／イモ（Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ　ｊａｐｏｎｉｃａ）＋ジ
オスコリア・コンボシタ（Ｄｉｏｓｃｏｒ＠ａｃｏｍｐ
ｏａｉｋａ）、オニトコａ　（Ｄｉｏｓｃｏｒ＠ａ　ｔ
ｏｋｏｒｏ）。

クジラ（ｇｏｐｈｏｒａ　ａｎｇｕｓＶ！ｏ目ＩＬ）、
ステビア（ｇｔｅｖｉａ　ｒｅｂａｕｄｉａｎａ）、−
Ｌツカ（Ｙｕｅｃａ　ｇｌａｕｃａ）＋イノフズチ（Ａ
ａｈｙｒａｎｔｈｅｓ　ｊａｐｏｎｉｃａ）、チョウセ
ンニンジン（Ｐａｎａｘ　ｇｉｎｓｅｎｇ）、ムラサキ
（Ｌｉｔｈｏｓｐｅｒｍｕｍ　ｅｒｙｔｈｒｏｒｈｉｚ
ｏｎ）、ダイオウ（Ｒｈｅｕｍ　ｐａｌｍａｔｕｍ）、
ペシバナ（Ｃａｒｔｈａｍｕｓｔｉｎｃｔｏｒｉｎｓ）
、ミシマサイコ（Ｂｕｐｌｅｕｒｕｍ　ｆａ−１ｃａｔ
ｕｍ）＋ホンバセンナ（Ｃａｓｓｉａ　ａｎｇｕｓｔｉ
ｆｏ−目ａ）ｌタンジン（ｓａｌｖｉａ　ｍ１ｌｔｉｏ
ｖｈｉｚａ）、エビスグサ（Ｃａｓｓｉａ　ｏｂｕｔｓ
ｉｆｏｌｉａ）、ヤエヤマアオ＊　（Ｍｏｒｉｎｄｅ　
ｃｉｔｒｉｆｏｌｉａ）、ムクナ・ブルリエンス（Ｍｕ
ｃｕｎＡｐｒｕｒｉｅｎｓ）、　コカノキ（Ｅｒｙｔｈ
ｒ−ｏｘｙｌｏｎ　ｃｏｃａ）、イヌサフラン（Ｃｏｌ
ｅｈｌｃｕｍ　ａ−ｕｔｕｍｎａｌｅ）、　シフシュ（
Ａｉｌａｎｔｈｕａ　ａｌｔｉａｓｉｍａ）。

プルセア・アンティディセンチリカ（Ｂｒｕｃｅａａｎ
ｔｉｄｙｓａｎｔｅｒｉｃａ）、メイテヌス中ブキャナ
ニ（Ｍａｙｔｅｎｕｓ　ｂｕｃｈａｎａｎｆ）、イカリ
ソウ（Ｅｐｉｍｓ−ｄｉｕｍ　ｇｒａｎｄ＋ｆｌｏｒｕ
ｍ）、、プテルリキア・ベルコサ（Ｐｕｔｔｅｒｌｉｃ
ｋｉａ　ｖｅｒｅｏｓａ）、　トコン（Ｃｅｐｈａ−ｅ
ｌｉｓ　１ｐｅｃａｃｕａｎｂａ）、力ンゾウ（Ｇｌｙ
ｃｙｒｒｈｉｚａｇｌａｂｒａ）　＋アマチャノル（Ｇ
ｙｎｏｓｔｅｍｍａ　ｐｅｎｔａ−ｐｈｙｌ　ｌｕｍ）
　Ｉヘリオトコビウム・インデイクム（Ｈｅｌｉｏｔｒ
ｏｐｉｕｍ　ｉｎｄｉｃｕｍ）、ボドフ・イルム畢エモ
デイ（Ｐｏｄｏｐｈｙｌｌｕｍ　ｅｍｏｄｉ）、タキク
スｅブレビフオリア（Ｊａｘｕｓ　ｂｒｅｖｉｆｏｌｉ
ａ）、ダマスフ−ローズ（Ｒｏｓｅ　ｄａｍａｓｃｏｎ
ａ）、キャベツ・ａ−ズ（Ｒｏｓｅ　ｃｅｎｔｉｆｏ１
％ａ）、ソケイ（ｊａａｍｉｎｕｍ　ｏｆｆ−ｊ　Ｃ”
Ｑ　＆　ｌ　＠　）　＊オオバナソケイ（ｊａｓｍｉｎ
ｕｍ　ｇｒａｎｄ−ｉｆｌｏｒｕｍ）、カミツレ（Ｍａ
ｔｒｉｃａｒｉａ　ｃｈａｍｏｍ目！ａ）。

ラベンダー（Ｌａｖａｎｄｕｌａ　ｏｆｆｉｃｉｎａｌ
ｉａ）、アンゲリカ会アルキャンゲリカ（Ａｎｇｓｌｉ
ｃａ　ａｒｃｈａｎ−ｇａｌｉｃａ）、　セージ（Ｓａ
ｌｖｉａ　ｏｆｆｉｅｉｎａｌｉａ）、　　／％ラッカ
Ｍｅｎｔｈａ　ａｒｖ＠ｎ５ｉａ、ｍｅｎｔｈａ　ｐｉ
ｐｅｒｉｔａ、１４−ａｎｔｈａ　ｖｉｒｉｄｉ＠）＋
ゼラニウム（Ｒ＠ｌａｒｇｏｎｉｕｍｄｅｎｔｉｃｕｌ
ａｔｕｍ）　、アマチャ（Ｈｙｄｒａｎｇ＊ａ　ｓ＠ｒ
ｒ−ａｔａ）＋ワサビダイコン（Ｃｏｃｈｌｅａｒｉａ
　ｏｂｌｏｎｇ−ｉｆｏｌｉｏ）、　）ウガラシ（Ｃａ
ｐａｉｃｕｍ　ａｎｎｕｕｍ）、サボジ？　（Ａｃｈｒ
ａａ　５ａｐｏｔａ）、ワサビ（Ｗａｓａｂｉａｊａｐ
ｏｎｉｃａ）、ミドリサンゴ（Ｅｕｐｈｏｒｂｉａ　ｔ
ｉｒｕ−ｃａｌｌｌ）＋イネ（Ｏｒｙｓａ　ａａｔｉｖ
ａ）＋　コムギ（Ｊｒｊ−ｔｌｃｕｍ　ｖｕｌｇａｒｅ
）、オオムギ（Ｈｏｒｄｅｕｍ　ｖｕｌｇａ−ｒｅ）＋
ビールムギ（Ｈｏｒｄｓｕｍ　ｃｌｌａｔｉｃｈｕｍ）
、　）ウモロコシ（Ｚｓａ　ｍａｙＬモａコシ（Ｓｏｒ
ｇｈｕｍ　ｎ５ｒ−ｖｏ＠ｕｍ）、ダイス（Ｇｌｙｅｉ
ｎ＊　ｍａｘＬイングア（Ｐｈ−（Ｄｉｏｍｃｏｒｅａ
　ｂａｔａｔａａ）、夕１ネギ（Ａｌｌｉｕｍｅ−＊ｐ
＆）＋ネギ（Ａｌｌｉｕｍ　ｆｉｓｌｕｌｏｉｕｍ）、
　　二ｙ　ニク（Ａｌｌｌｕｍ　ｓａｔｗｕｍ）＋ジャ
ガイモ（Ｓｏｌａｎｕｍ　ｔｕ−ｂｅｒｏｓｕｍ）、キ
ャラサバ（Ｍａｎｉｈｏｔ　ｕｔｉｌｉｓｓｉｍａｌ。

ダイコン（Ｒａｐｈａｎｕｓ　５ａｔｉｖ＊ｕｓ）、　
二ｙジン（Ｄａｕｃｕｓ　ａａｒｏｔａ）＋サトイモ（
Ｃｏｌｏａｃ＠ｉａ　ｐｌ−ａｎｔａｇｉｎｅａ）、ナ
タネ（Ｂｒａｓｇｉｃａ　ｎａｐｕｓ）、ヒマワリ（Ｈ
ｓｌｉａｎｔｈｕｍ　ａｎｎｕｕｓ）＋ホウレフ’／つ
（Ｓｐｉｎａｅｉａ　ｏｌｓｒａｃｅａ）、アスパラガ
ス（Ａｓｐａ−ｒａｇｕａ　ｏｆｆｉａｉｎａｌｉｓ）
、カンラン（Ｂｒａｓｓｉｃａｏｌｓｒａｃｅａ）、　
ハクサイ（Ｂｒａｓｓｉｃａ　ｐｅｋｉｎｅｎｓｉｉ）
。

セルリー（Ａｐｉｕｍ　ｇｒａｖｅｏｌｅｎｓ）、パセ
リ（Ｒｓｔ−ｒｏｓｅｌｉｎｕｍ　ｓａｔｉｖｕｍ）＋
チシャ（Ｌａｃｔｕｃａ　ａａｔ−ｉｙａ）、カブ（Ｂ
ｒａｓｓｉｅａ　ｒａｐａ）、イチビ（Ｆｒａｇ−ａｒ
ｉａ　ｅｈｉｌｏ＠ｎ５ｉａ）、ソラマメ（Ｖｉｅｉｔ
　ｆａｂａ）。

トマト（Ｌｙｅｏｐ＠ｒｓｉｅｕｍ　ｓｓｃｕｌｓｎｔ
ｕｍ）、ナス（Ｓｏｌａｎｕｍ　ｍ５ｌｏｎｙｅｎａ）
、スイカ（Ｃｉｔｒｕｌｌｕｓｖｕｌｇａｒｉａ）、キ
ュウリ（Ｃｕｅｕｍｉｓ　ｓａｔｉｖｕｍ）、　−ｒり
７　（Ｃｕｅｕｍｉｇ　ｍｅｌｏ）、パインアップル（
Ａｎａ−ｎａｓ　ｃｏｍｏｓｕｓＬセイヨウカボチャ（
Ｃｕｃｕｒｂｉ−ｔａ　ｍａｘｉｍａ）、ペポカボチャ
（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａ　ｐｅｐｏ）。

アカクローバ−（Ｊｒｉｆｏｌｉｕｍ　ｐｒａｔｅｎｓ
ｓ）、シロクローバ−（Ｊｒｊｆｏｌｌｕｍ　ｒｅｐｅ
ｎａ）、アルファルファ（Ｍｅｄｉｃａｇｏ　ｍａｔｉ
ｖａ）、オーチャードグラス（Ｄａｃｔｙｌｉｓ　ｇｌ
ｏｍｅｒａｔａ）、チモシャ−（Ｐｈｌ−ｅｕｍ　ｐｒ
ａｔｅｎｓ）、バナナ（Ｍｕｓａ　ａａｐｉｓｎｔｕｍ
）、　＝ｒコヤシ（Ｃｏｃｏａ　ｎｕｃｉｆｅｒａ）、
カキ（Ｄｉｏｓｐｙｒｏａｌ（ａｋｌ　）　、モモ（Ｐ
ｒｕｎｕｓ　ｐ＠ｒｓｉｅａ）、リンゴ（Ｍａ−１ｕｓ
　ｐｕｍｉｌａ）、ミザクラ（Ｐｒｕｎｕａ　ａｖｉｕ
ｍ、Ｐｒｕ−ｎｕｓ　ｃａｒａｓｕｓ）、二ホンナシ（
Ｐｙｒｕｓ　５ｓｒｏｔｉｎａ）。

セイヨウナシ（Ｐｙｒｕｓ　ｃｏｍｍｕｎｌｇ）、　７
−　モｙド（Ｐｒｕｎｕｓ　ａｏｍｍｕｎｉｓ）、ブド
ウ（Ｖｌｔｉｓ　ｖｉｎｉｆｅ−ｒａ）、レモ７　（Ｃ
ｉｔｒｕｓ　ｌ＠ｍｏｎ）、ウノシュウミカｙ　（Ｃ１
ｔｒｕｓ　ｕｎｓｈｉｕ）、オＶ／ジ（Ｃｉｔｒｕａａ
−１ｎａｎｓｉｓ）、オリーブ（Ｏｌｅａ　ｅｕｒｏｐ
ａｅａ）＋ブルー　ベ　リ　−　（Ｖａａｃｌｎｉｕｍ
　　ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉｅｕｍ、Ｖａｃｃ　−ｉｎ
ｉｕｍ　ｃａｎａｄｅｎｓｅ）、ワタ（Ｇｏｓｓｙｐｉ
ｕｍ　ｈｉｒｓｕ−ｔｕｍ、Ｇｏｓａｙｐｉｕｍ　ｂａ
ｒｂａｄｅｎｓａ、Ｓｏｓｓｙｐｌｕｍ　ａｒｂ−ｏｒ
ｅｕｍ）、チャ（Ｇａｍｅｌｌｉａ　ｓｉｎ＠ｎ５ｉｓ
）＋コーヒー　（Ｃｏｆｆｅａ　ａｒａｂｉｃａ）、ホ
ップ（Ｈｕｍｕｌｕｓ　１ｕｐ−ｕｌｕｓ）、サトウギ
ビ（Ｓａａｃｈａｒｕｍ　ｏｆｆｉｅｉｎａｒｕｍ）。

アブラヤシ（Ｅｌａｅｉｓ　ｇｕｉｎｅｅｎｓｉｓ）、
キク（Ｃｈ−ｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍ　ｍｏｒｉｆｏｌ
ｉｕｍ）　、カーネーション（Ｄｉａｎｔｈｕｓ　ａａ
ｒｙｏｐｈｙｌｌｕａ）、バラ（Ｒｏｓａ　ｃｈｉ　−
ｎｅｎｓｉａ）、　ｓ−リ（Ｌｉｌｉｕｍ　ｌｏｎｇｉ
ｆｌｏｒｕｍ）、ヤマユリ（Ｌｉｌｉｕｍ　ａｕｒａｎ
ｔｕｍ）、チューリップ（Ｊｕ−１ｉｐａ　ｇｅｎｅｒ
ｉａｎａＬガーベラ（Ｇ＠ｒｂｅｒａ　ｊａｍｅ−ｇｏ
ｎｉ　ｉ　）　、スイセン（Ｎａｒｃｉｓｓｕｓ　ｔａ
ｚｅｔｔａ）等の植物細胞等が挙げられる。

また、これらは細胞間更には培養細胞間。

培養細胞と植物組織より直接得られた細胞間。

植物組織より直接得られた細胞間等で細胞融合して得ら
れる融合細胞でめってもよい゛。

本発明におけるサスペ／ジョ／状態の細胞等の培養にお
いては、培養しよプとする細胞等が培養液中に浮遊した
状態で培養される。

培養液は実質的に水よりなる水性媒体に、種種の無機塩
、ビタミン類、イノジット、ショ糖及び植物ホルモン（
列えはオーキシ／、サイトカイニン）などの通常植物細
胞等の培養に使用される添加成分が加えられている。ま
た、培養液にはアミノ酸、ココナツミルク。

カゼイ／氷解物、イースト抽出物、ブドウ糖答を加える
こともできる。該培養液は通常ｐｌｉ４．０〜６．５の
範囲で用いられる。

本発明方法において用いられるフルオロカーボンはそれ
自体酸素を溶解する能力を有していることは云うまでも
ないが、培養条件下で水と混和せず水と２液相を形成す
るものであり、植物細胞等の生育を阻害しないものであ
るのが一層望ましい。かかるフルオロカーボ／としては
、常温で液体であるのが有利であり、市販されているも
のが広く利用できる。

例えば各種熱媒体、電気絶縁材料として使用サレテいる
フルオロカーボン、人工血液として使用されている種々
のフルオロカーボ／が使用できる。その具体例としては
、炭素数８以上のパーフルオロアルカ７類、パー７Ａ、
ｙＦクロシクロアルカ／類列えば、パーフルオロデカリ
ン、パーフルオロメチルデカリン、炭素数３〜５のアル
キル置換基を有するパーフルオロアルキルシクロヘキサ
ン）、炭素数５〜７のアルキル置換基を有するバーフル
オｐアルチルテトラ粒ドロフラノ類、炭素数４〜６のア
ルキル置換基を有するパーフルオロアルキルテトラヒド
ロピラフ類、パーフルオロアダマンタフ類（例えばパー
フルオロアダマ／り／、ハーフルオロメチルアダマンタ
／。

パーフルオロジメチルアダマ／り／、パーフルオロメチ
ルエチルアダマ／り／、バーフルオロジエチルアダマン
タ／など）が挙げられる。前記フルオロカーボンは１種
々の基１例えば第３級アミノ基を含有したものであって
もよい。これらは一種でも二種以上の混合物でも使用さ
れる。さら忙住友スリーエム−より発売されでいる種々
のフロリナート■（Ｆ−１ｕｏｒｉｎｅｒｔ）であって
もよい。

前記したフルオロカーボ／は単に例示のために挙げたの
でおって本発明方法の実ｍｔ防げない限り、他のフルオ
ロカーボンであっても河畔差支えない。

フルオロカーボンはその比重が水に比べて約１．６〜約
２倍と大きく、そのため本発明方法を実施する場合には
、サスペ／ジョｙ液の上部に酸素を溶解しているフルオ
ロカーボ／を供給し、フルオロカーポ／がサスベンジ目
／液中に懸濁しながら下方へ落下させる方式を実施する
のが有利である。

特にサスペノジ：１７培養を縦長の培養槽を用いて、そ
の、培養槽はその上部に酸素を溶解したフルオロカーボ
／を供給し、その下部から酸素溶解量の低下したフルオ
ロカーボ／を取出すＬうに設計されたものであるのが本
発明方法の実施に特に有利である。

本発明方法は、フルオロカーボ／は、サスベンジ′ｇＩ
／液中に小さな液滴として懸濁するように供給するのが
望ましい。

本発明方法の実施に当っては、サスベ／ジョン液中にお
いて、植物細胞等に栄養分、酸素、その他生育に必要な
成分が充分に接触するために攪拌することができる。ま
た、培養に必要な栄養分等を含んだ新しい培ＣＭ、ｔ−
培春槽内に連続酌交は１間金ｚ的に供給しながら。

増殖した細胞等を連続的又は間多欠的に収穫する連続培
養法を適用中ることもできる。

本発明の方法け、前述したようにサスペ／ジョ／状態で
植物細胞等の培等を行っている培養系に酸素をフルオロ
カーボンを介して供給するのであるが、他の酸素供給手
段を一部併用しても河畔差支えない。例えば、サスペン
ジョン液の自由表面に酸素や空気の如き酸素含有ガスを
接触させて、該液面から一部の酸素を吸収させてもよく
、また、酸素含有ガスをサスペンジョン液中に吹込んで
補足式せることもできる。

かくして本発明によれば、従来の漕素供給手段において
生じる種々の欠点を克服し、安定した操作で植物細亀等
を効率的に増殖出来、また高密度による培養を容易に可
能にすることができる。

以下実ｔ！＃１例を掲げて本発明方法を説明するが１本
発明はこれらに何等限定金受けるもの実施ＩＰ１１ 容器内上部にフルオロカーゼ／ｌ−滴下させる為の滴下
口、下部にフルオロカーボンを排出させる為の排出口を
備え、フルオａカーボ／を外部循環できるようにした１
００−　エルレノマイヤーフラスコ中に、下記のムラシ
ゲ・スクーグ改変培地３０−とフルオロカーボンとして
フロリナートＦＣ−４０（住友フリーエム社＄１）３０
−とを入れた。該容器内にタバコ（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ
ｔａｂａｃｕｍ　Ｓａｍｓｏｎ）の培養細胞（緑色）ｆ
：新鮮重量（ｆｙｅａｈ　ｗｅｉｇｈｔ）当り１．Ｏｆ
を播種１１．容器内上部の空気を窒素で置換した後密橙
した。無菌的なエアレーションにより酸素をＷＩＭせし
めたフロリナートＦＣ−４Ｏｆ：ベリスタポ／グを用い
て該培養器への注入と排出とを調和させながら循環させ
た。その際、該培養器への注入は上部滴下口より液滴状
態で滴下させ、７０リナ一ト層内に位置する排出口より
液を排出させたつ該培養器をロータリーシェーカーを用
いて１２０回転／分にて２５°０．約３０００ルクスの
螢光灯照明下で１０日間培養した。

該培養器より培養細胞の全量を収穫したところ、新鮮重
量当り９．３ｆの緑色細胞が得られ、通常の増殖性を示
すことが判った。

またｐ）（け５．６であった。

実施列２ 植物細胞λしてニチニチソウ（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕ
ｓｒｏｓｅｕｓ）の培養細胞（緑色）１に用い、培地と
してホルモン条件を２，４−ジクロル酢酸０．１η／ｌ
で用いる以外は実施例１と同様にして１０日間培養した
。

培養器から増殖した細胞を収穫し、新鮮重量当９１１．
３９の緑色細胞が得られた。一方、７０リナー）ＦＣ−
４０を用いずに空気から充分に酸素が補給される系での
増殖と何ら変わらなかった。また、該細＠を凍結乾燥し
常法によりアルカロイドを抽出後高速液クロマトグラフ
により成分を分析したところ、定性的にも定量的にもフ
ロリナートＦＣ−４０使用による影響は殆んｙみられな
かった。

実施列３ 植物細胞としてダイブ（Ｇｌｙｃｉｎｅ　ｍａｘ）の培
養細胞（白色）を用い、フルオロカーゼ／としてフロリ
ナートＦＣ−７５（住友スリーエム社製）を用い、培養
条件は、暗所下で培養する以外は実施列１と同様にして
１ｏ日間培養した。

培養器から増殖した細胞を収穫し、新鮮重量当Ｃ，１０
，５Ｆの白色細胞が得られ１通常の培養４　＝、ｉｇｉ
の増殖性を示した。

実施例４ 植物組織として、ジギタリス（Ｄｉｇｉｔａｌｉｓ　ｐ
−ｕｒｐｕｒｅａ）のシュートを用い、フルオロカーゼ
／とじてパーフルオロデカリンを用いる以外は実施１ｆ
ｌ＋　１と同様に２１日間培養した。核培ｔにょ９新鮮
重量当９５．３Ｆ　のシュートが収穫され。

通常の培養と同程度の増殖性を示した。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、植物細胞又は組織をサスペンジョン状態で培養する
   に当り酸素を溶解しているフルオロカーボンを該サスペ
   ンジョン中に供給することを特徴とする植物細胞又は組
   織の培養方法。 ２、該フルオロカーボンの少なくとも一部は液滴状で該
   サスペンジョン中に存在する第１項記載の植物細胞又は
   組織の培養方法。