JPS61124389A - Production of syrup containing large amount of branched oligosaccharide - Google Patents

Abstract

PURPOSE:To produce a syrup containing a large amount of branched oligosaccharide having caries-preventing effect, extremely economically, by the industrial process based on the reverse synthesis with an enzyme. CONSTITUTION:An aqueous solution of glucose having a solid concentration of >=50% is made to react with an enzyme capable of condensing a saccharide (e.g. glucoamylase) to produce a branched oligosaccharide in the aqueous solution. The sugar syrup produced by the above process is a mixture containing glucose, maltose, etc. as well as branched oligosaccharides such as isomaltose, panose, isomaltotriose, etc. If necessary, the saccharides other than the branched oligosaccharides are separated and removed e.g. by the organic solvent treatment, to obtain a syrup of branched oligosaccharide having high concentration.

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は甘味料として用いられる分岐オリゴ糖を多量に
含むシラップの製造法に関するものである。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION [Industrial Field of Application] The present invention relates to a method for producing syrup containing a large amount of branched oligosaccharides used as a sweetener.

〔従来の技術〕[Conventional technology]

最近、虫歯予防などの見地から、砂糖などの甘味料は敬
遠される傾向にあり、それに代わる甘味料のひとつとし
てイソマルトースなどの分岐オリゴ糖が注目されている
。しかし、これら分岐オリゴ糖を工業的かつ経済的に大
量生産する方法はまだ確立されていないため、現在では
イソマルトース等が高価な試薬として販売されているに
留まり、食品等に一般に利用されるには至っていない。Recently, there has been a tendency to avoid sweeteners such as sugar from the viewpoint of preventing tooth decay, and branched oligosaccharides such as isomaltose are attracting attention as an alternative sweetener. However, as a method for industrially and economically mass-producing these branched oligosaccharides has not yet been established, isomaltose and the like are currently only sold as expensive reagents and are not commonly used in food products. has not yet been reached.

従来、分岐オリゴ糖の製造法としては、たとえばα−１
，６結合を多く有するプルラン、デキストラン等の高分
子多糖類を基質とし、これを適宜の酵素または酸類なと
で加水分解したのち、分子分画クロマトグラフィ、イオ
ン交換クロマトグラフィ等で分画する方法が試みられて
いる。しかしながら、プルラン、デキストランなどは非
常に高価であり、この方法は工業的生産には向かない。Conventionally, methods for producing branched oligosaccharides include, for example, α-1
Attempts have been made to use macromolecular polysaccharides such as pullulan and dextran, which have many 6-bonds, as substrates, hydrolyze them with appropriate enzymes or acids, and then fractionate them using molecular fractionation chromatography, ion exchange chromatography, etc. It is being However, pullulan, dextran, etc. are very expensive, and this method is not suitable for industrial production.

また、従来ぶどう糖の製造過程において、グルコアミラ
ーゼなどが糖化作用とともにぶどう糖の逆合成反応を起
こし、少量のイソマルトース、パノースはかの、いわゆ
る分岐オリゴ糖を生成させることが知られている。その
生成量は糖固形分に対し通常およそ５％前後であるが、
ぶどう糖製造という目的からみれば、このような分岐オ
リゴ糖の生成は好ましい筈がなく、従ってこれらの生成
を極力抑える努力が払われてきた。また、でんぷんを酸
により高温下で加水分解したとき、適合成反応が生じて
α−１，６結合をもつ糖の生成することが知られている
。しかし、この場合分岐オリゴ糖への転化率は極めて低
く、しかも極めて過激な条件下であるため、副反応によ
る生成物も多いから、この方法を分岐オリゴ糖の製造手
段として実用的に利用しうる可能性は殆どない。Furthermore, it is known that in the conventional glucose production process, glucoamylase and the like cause a glucose retrosynthesis reaction as well as saccharification, and small amounts of isomaltose and panose produce so-called branched oligosaccharides. The amount produced is usually around 5% of the sugar solid content, but
From the viewpoint of glucose production, the production of such branched oligosaccharides is not desirable, and therefore efforts have been made to suppress their production as much as possible. It is also known that when starch is hydrolyzed with acid at high temperatures, a compatibility reaction occurs and sugars having α-1,6 bonds are produced. However, in this case, the conversion rate to branched oligosaccharides is extremely low, and since the conditions are extremely extreme, there are many products due to side reactions, so this method can be practically used as a means for producing branched oligosaccharides. There is almost no possibility.

〔発明が解決しようとする問題点〕[Problem that the invention seeks to solve]

本発明は上記の如く、分岐オリゴ糖の工業的製造法が未
だ確立されていない現状において、う歯防止効果のある
分岐オリゴ糖の有用性に鑑み、分岐オリゴ糖の工業的製
造法を提供することを目的とするものである。As described above, the present invention provides an industrial method for producing branched oligosaccharides in view of the usefulness of branched oligosaccharides that have an anti-caries effect, in the current situation where an industrial method for producing branched oligosaccharides has not yet been established. The purpose is to

〔問題点を解決するための手段〕[Means for solving problems]

本発明者らは、このような分岐オリゴ糖の工業的生産に
つき検討を重ねた結果、酵素による適合成反応に基づく
、極めて経済的な分岐オリゴ糖シラップの製造法を見出
した。これは、従来のぶどう糖製造においては極力抑え
ねばならなかった適合成反応をむしろ促進させ、積極的
に利用するものであって、このような技術思想は従来な
かったものである。As a result of repeated studies on the industrial production of such branched oligosaccharides, the present inventors have discovered an extremely economical method for producing branched oligosaccharide syrup based on a compatible synthesis reaction using enzymes. This actually promotes and actively utilizes the compatible composition reaction, which had to be suppressed as much as possible in conventional glucose production, and such a technical concept has never existed before.

本発明は固形分濃度５０％以上のぶどう糖水溶液に、糖
類の縮合作用を有する酵素を作用させて該水溶液中に分
岐オリゴ糖を生成させ、更に必要により分岐オリゴ糖以
外の糖類を分離・除去することにより分岐オリゴ糖を多
量に含むシラップを製造する方法である。ここでいう分
岐オリゴ糖とは、イソマルトース、パノース、イソマル
トトリオース等、α−１，６結合をもつオリゴ糖の総称
である。In the present invention, an enzyme having a saccharide condensation action is applied to a glucose aqueous solution having a solid content concentration of 50% or more to produce branched oligosaccharides in the aqueous solution, and further, if necessary, saccharides other than branched oligosaccharides are separated and removed. This is a method for producing syrup containing a large amount of branched oligosaccharides. The term "branched oligosaccharide" as used herein is a general term for oligosaccharides having α-1,6 bonds, such as isomaltose, panose, and isomaltotriose.

本発明の概要を述べると、ぶどう糖の高濃度水溶液を基
質として、これにグルコアミラーゼ等の糖類の縮合作用
ををする酵素を作用させて適合成反応をすすめ、液中に
分岐オリゴ糖を生成させる。To summarize the present invention, a highly concentrated aqueous solution of glucose is used as a substrate, and an enzyme such as glucoamylase that condenses sugars is allowed to act on this to proceed with a compatible synthesis reaction, thereby producing branched oligosaccharides in the liquid. .

ここで得られる糖液は、イソマルトース、パノース、イ
ソマルトトリオース等の分岐オリゴ糖のほか、ぶどう糖
、マルトースなどを含む糖類混合液である。この糖液を
そのまま分岐オリゴ糖シラップとして利用することもで
きるが、必要により更に有機溶媒処理等によって分岐オ
リゴ糖以外の糖類を分離・除去し、高濃度の分岐オリゴ
糖シラップとする。The sugar solution obtained here is a saccharide mixture containing branched oligosaccharides such as isomaltose, panose, and isomaltotriose, as well as glucose, maltose, and the like. This sugar solution can be used as it is as a branched oligosaccharide syrup, but if necessary, saccharides other than the branched oligosaccharides are separated and removed by further treatment with an organic solvent to obtain a highly concentrated branched oligosaccharide syrup.

本発明者らの研究によると、ぶどう糖液から適合成反応
によって生成する分岐オリゴ糖の量は、基質として使用
するぶどう糖水溶液のぶどう糖固形分濃度が高いほど大
きいことが判明した。すなわち、これを第１図によって
説明するなら、種々の固形分濃度のぶどう糖液にグルコ
アミラーゼを作用させると、反応時間の経過とともに、
分岐オリゴ糖の生成量は各固形分濃度ごとに次第に（は
ぼ３日後）一定の平衡状態に到達する。このとき、たと
えば固形分濃度５０％の場合では、分岐オリゴ糖の生成
量は３０％程度（固形分として）で平衡状態となるが、
基質の固形分濃度が増すにつれて平衡状態は更に高い値
に移行し、８５％のぶどう糖液を用いた場合には、分岐
オリゴ糖の生成量は６０％前後に達して平衡状態となる
。上記平衡状態は、使用した基質濃度により一定のレベ
ルがある模様で、たとえば７５％基質濃度による反応で
平衡状態（分岐オリゴ糖生成量は５０％前後）に達した
後、基質を希釈して濃度５０％とすると、平衡状態は基
質濃度５０％のレベル（分岐オリゴ糖生成量３０％程度
）に変化することが認められた。According to the research conducted by the present inventors, it has been found that the amount of branched oligosaccharides produced from a glucose solution by a compatible composition reaction increases as the glucose solid content concentration of the glucose aqueous solution used as a substrate increases. That is, to explain this using Figure 1, when glucoamylase is applied to glucose solutions with various solid content concentrations, as the reaction time progresses,
The amount of branched oligosaccharide produced gradually reaches a certain equilibrium state (after about 3 days) for each solid content concentration. At this time, for example, if the solid content concentration is 50%, the amount of branched oligosaccharides produced will be in equilibrium at about 30% (as solid content), but
As the solid concentration of the substrate increases, the equilibrium state shifts to a higher value, and when an 85% glucose solution is used, the amount of branched oligosaccharides produced reaches around 60%, and an equilibrium state is reached. The above equilibrium state seems to have a certain level depending on the concentration of the substrate used. For example, after reaching the equilibrium state (the amount of branched oligosaccharide produced is around 50%) in a reaction with a substrate concentration of 75%, the substrate is diluted and the concentration When the concentration was 50%, it was observed that the equilibrium state changed to a level where the substrate concentration was 50% (the amount of branched oligosaccharide produced was about 30%).

このような事実からして、分岐オリゴ糖を高収率に得る
には、固形分濃度の高いぶどう糖液を用いるのが望まし
いことが明らかである。従って、本発明では基質に使用
するぶどう糖液は、固形分濃度の高いものであることが
必要であり、５０％以上、好ましくは６０％以上のもの
を用いる。固形分濃度５０％以下のぶどう糖液では、分
岐オリゴ糖の生成は急激に減少するので、経済的に不利
であるため都合が悪い。From these facts, it is clear that in order to obtain branched oligosaccharides in high yield, it is desirable to use a glucose solution with a high solid content concentration. Therefore, in the present invention, the glucose solution used as a substrate needs to have a high solid content concentration, and is preferably 50% or more, preferably 60% or more. In a glucose solution with a solid content concentration of 50% or less, the production of branched oligosaccharides rapidly decreases, which is economically disadvantageous and therefore inconvenient.

本発明では、このような高濃度のぶどう糖液を基質とし
、これにｍ類の縮合作用を有する酵素、たとえばグルコ
アミラーゼを作用させ、反応をすすめる。反応条件、た
とえば反応温度、　ｐＨ等は、酵素がそれぞれ通常使用
される条件に従えばよく、殊更特殊な条件を必要としな
い。用いる酵素としては、入手の容易さなどからグルコ
アミラーゼが最適である。また、基質に用いるぶどう糖
は、純度の高いものが好ましいことはいうまでもない。In the present invention, such a highly concentrated glucose solution is used as a substrate, and an enzyme having an M-class condensing action, such as glucoamylase, is allowed to act on this to proceed with the reaction. Reaction conditions, such as reaction temperature and pH, may be in accordance with the conditions under which each enzyme is normally used, and no particularly special conditions are required. Glucoamylase is most suitable as the enzyme to be used because of its ease of availability. Furthermore, it goes without saying that it is preferable that the glucose used as the substrate be of high purity.

酵素反応はバッチ式で行なっても、あるいはカラムを用
いて連続式で行なってもよい。反応中、適合成によるぶ
とう糖の縮合反応によって基質の濃度が次第に低下し、
それにつれ、分岐オリゴ糖生成の平衡状態のレベルが基
質濃度に応じて低下する傾向がある。尤もその低下はご
く僅かであるので、実用上不都合とならない場合も多い
が、必要に応じて反応中、基質水溶液にぶどう糖を適宜
補給することによってその濃度を一定に保ち、分岐オリ
ゴ糖生成のレベルを維持することもできる。The enzyme reaction may be carried out batchwise or continuously using a column. During the reaction, the concentration of the substrate gradually decreases due to the condensation reaction of glucose due to the compatible composition.
Accordingly, the equilibrium level of branched oligosaccharide production tends to decrease with substrate concentration. However, since the decrease is very slight, it is often not a practical disadvantage, but if necessary, the concentration can be kept constant by appropriately supplying glucose to the substrate aqueous solution during the reaction, and the level of branched oligosaccharide production can be reduced. can also be maintained.

またこれとは逆に、目的によっては反応中、基質濃度を
適宜増減することにより、分岐オリゴ糖生成の平衡レベ
ルを任意に変化させる場合もある。Conversely, depending on the purpose, the equilibrium level of branched oligosaccharide production may be arbitrarily changed by appropriately increasing or decreasing the substrate concentration during the reaction.

基質とするぶどう糖液の濃度が８０％以上、特に８５％
を越えると液中に結晶が析出し、作業上注意を要するが
、これらは反応中に消失することが多く、作業の障害と
なることはない。反応中結晶の消失する理由は、前記の
ぶどう糖の縮合反応による基質濃度の低下のほかに、非
結晶性のイソマルトースが生成することによって、他の
糖の晶出を阻止するためである。The concentration of the glucose solution used as a substrate is 80% or more, especially 85%.
If the temperature exceeds 100%, crystals will precipitate in the liquid, which requires caution during operation, but these often disappear during the reaction and do not interfere with the operation. The reason why the crystals disappear during the reaction is that, in addition to the decrease in the substrate concentration due to the condensation reaction of glucose, the formation of amorphous isomaltose prevents the crystallization of other sugars.

このようにして分岐オリゴ糖を多く含む糖液が得られる
が、その糖組成の一例は第１表に示すとおりである。In this way, a sugar solution containing a large amount of branched oligosaccharides is obtained, and an example of the sugar composition is shown in Table 1.

第１表に見られるように、いずれの基質濃度においても
生成したＤＰ２のうち約８５％がイソマルトースであり
、ＤＰ３もα−１，６結合を有するものの比率が高い。As seen in Table 1, approximately 85% of the DP2 produced at any substrate concentration is isomaltose, and a high proportion of DP3 also has α-1,6 bonds.

これは叶４以上のものについても同様と見られ、反応液
中には分岐オリゴ糖が多く生成していることが明らかで
ある。また、ＤＰ２の生成量は約３０％で平衡に達し、
反応時間を延長するに従ってＤＰ３　、　ＤＰ４等が増
加することが認められる。このことから、反応条件を適
宜コントロールして、組成の異なる分岐オリゴ糖を製造
することも可能である。This seems to be the same for those with 4 or more leaves, and it is clear that many branched oligosaccharides are produced in the reaction solution. In addition, the amount of DP2 produced reaches equilibrium at about 30%,
It is observed that DP3, DP4, etc. increase as the reaction time is extended. From this, it is also possible to produce branched oligosaccharides with different compositions by appropriately controlling the reaction conditions.

このようにして得られた分岐オリゴ糖を含む糖液は、そ
のまま分岐オリゴ糖シラップとして利用できるほか、必
要によりこれを更に処理して高濃度の分岐オリゴ糖シラ
ップとすることもできる。The sugar solution containing branched oligosaccharides obtained in this way can be used as is as a branched oligosaccharide syrup, or if necessary, it can be further processed to form a highly concentrated branched oligosaccharide syrup.

そのための方法としては、たとえば次のようなものが挙
げられる。Examples of methods for this purpose include the following.

（１１糖液を濃縮、徐冷してぶどう糖等を晶出除去する
方法。(A method in which 11-sugar solution is concentrated and slowly cooled to crystallize and remove glucose, etc.)

（２）糖液に食塩を添加して、ぶどう糖−食塩の複塩結
晶を晶出させ、除去する方法。(2) A method of adding salt to a sugar solution to crystallize and remove glucose-salt double salt crystals.

（３）糖液にアルコール類、アセトン等の有機溶媒を添
加して、分岐オリゴ糖以外の糖類を沈澱させ、除去する
方法。(3) A method in which saccharides other than branched oligosaccharides are precipitated and removed by adding an organic solvent such as alcohol or acetone to a sugar solution.

（４）活性炭カラム、ゲルろ過等の分子分画クロマトグ
ラフィ、またはイオン交換体によるイオン交換クロマト
グラフィを用いて、分岐オリゴ糖以外の糖類を除去する
方法。(4) A method of removing saccharides other than branched oligosaccharides using molecular fractionation chromatography such as an activated carbon column or gel filtration, or ion exchange chromatography using an ion exchanger.

（５）糖液に酵母を作用させ、分岐オリゴ糖以外の糖類
を資化させる方法。(5) A method of assimilating sugars other than branched oligosaccharides by allowing yeast to act on a sugar solution.

このようにして得られる分岐オリゴ糖を高濃度に含有す
るシラップは、されやかな甘味を有するので、種々の食
品の甘味料あるいは風味改良剤として多方面の用途があ
る。そのうえ、う歯防止効果があるので、虫歯予防を目
的とする甘味料としても広く利用しうるちのである。The syrup containing a high concentration of branched oligosaccharides obtained in this way has a mild sweet taste, and therefore has many uses as a sweetener or flavor improver for various foods. Furthermore, it has anti-caries effects, so it is widely used as a sweetener to prevent tooth decay.

その上、前記のとおりイソマルトースによる糖類の晶出
抑制効果をも有するので、砂糖、ぶどう糖、異性化糖、
マルトース等の糖液に少量添加することにより、晶出防
止剤としても利用できる。Furthermore, as mentioned above, it also has the effect of suppressing the crystallization of sugars due to isomaltose, so sugar, glucose, isomerized sugar,
It can also be used as a crystallization inhibitor by adding a small amount to a sugar solution such as maltose.

今、イソマルトースの晶出防止効果の一例を示すと、次
のとおりである。An example of the crystallization prevention effect of isomaltose is as follows.

〔実施例〕〔Example〕

イソマルトース添加による晶　防止１験（１１試料 Ａ：マルトース８０％シラップ Ｂ：マルトース８３％シラップに、ＤＰ２５６％含有シ
ラップ（内イソマルトース５０％）１０％を混合したも
の（全体としてＤＰ２８０％のもの）（２）保存温度：
　　５．１２．２０℃、および室温（冬季）（３）結果
：第２表のとおり ５　　　　　　　　　　９日　　　３５日２０　　　　
　　　　　　９　　　　２］室温　　　　　　　　　８
２１ られた日を晶出Ｈとじた。Crystallization prevention by addition of isomaltose 1 trial (11 Sample A: Maltose 80% syrup B: Maltose 83% syrup mixed with 10% syrup containing DP 256% (of which isomaltose 50%) (DP 280% as a whole) (2) Storage temperature:
5.12.20℃ and room temperature (winter) (3) Results: As shown in Table 2 5 9 days 35 days 20
9 2] Room temperature 8
21 The date of crystallization is summarized as H.

第２表から明らかなように、イソマルトースを添加した
ものの方が、いずれの保存条件においても結晶晶出まで
の日数が長く、顕著な晶出抑制効果を示した。As is clear from Table 2, the samples to which isomaltose was added took longer to crystallize under all storage conditions, and exhibited a remarkable effect of suppressing crystallization.

実施例１ 高純度ぶどう糖液（ＤＨ９７，５、昭和産業■製）を基
質に市販グルコアミラーゼ（ノボ社製、商品名：　ＡＭ
Ｇ２０ＯＬ　）を作用させ、分岐オリゴ糖を３０％以上
含む反応混合物を得た。Example 1 Commercially available glucoamylase (manufactured by Novo, trade name: AM) using high purity glucose solution (DH97.5, manufactured by Showa Sangyo ■) as a substrate
G20OL) to obtain a reaction mixture containing 30% or more of branched oligosaccharides.

反応条件二基質濃度　６５％ グルコアミラーゼ添加量０．５％対ＤＳ反応温度　６０
“Ｃ 反応ｐＨ４，５ 反応時間　７２ｈｒ 基質及び反応生成物の糖組成は下表の通りであった（高
速液クロにより分析）。Reaction conditions Bisubstrate concentration 65% Glucoamylase addition amount 0.5% vs. DS reaction temperature 60
"C Reaction pH 4.5 Reaction time 72 hr The sugar compositions of the substrate and reaction product were as shown in the table below (analyzed by high performance liquid chromatography).

得られた反応混合物を、活性炭脱色、イオン交換樹脂に
よる精製を行なった後、濃度８０％まで濃縮した。この
濃縮液を用いて、３２容ジヤケツト付横型攪拌弐晶出装
置を用いて、ぶどう糖結晶を晶出させ、遠心分Ｍｔｔｔ
＆により、結晶を分離、除去した。The resulting reaction mixture was decolorized with activated carbon and purified with an ion exchange resin, and then concentrated to a concentration of 80%. Using this concentrated solution, glucose crystals were crystallized using a horizontal stirring two-crystallizer with a 32-volume jacket, and the centrifugal fraction Mttt
The crystals were separated and removed by &.

晶出条件；液濃度　　８０．２％ シード種類 含水結晶ぶどう糖 （１００メツシュスルー品） シード量　０．５％対ＤＳ 温度及び時間は第２図のプログラムに沿って８４時間晶
出させた。Crystallization conditions: Liquid concentration: 80.2% Seed type: Hydrous crystalline glucose (100 mesh through product) Seed amount: 0.5% vs. DS Crystallization was carried out for 84 hours according to the temperature and time program shown in Figure 2.

遠心分離条件：バスケット型遠心分離機使用８００Ｇ、
　濾布　８０メツシユ 分離液の糖組成は、下記のようであり、分岐オリゴ糖分
の豊富な糖液が得られた。Centrifugation conditions: 800G using basket type centrifuge,
The sugar composition of the filter cloth 80 mesh separated liquid was as shown below, and a sugar liquid rich in branched oligosaccharides was obtained.

実施例２ 実施例１で得た反応混合物を、活性炭脱色、イオン精製
を行なった後、精製混合物固形分当り１５％の食塩を添
加、溶解して、濃度約８５％まで濃縮し、実施例１で用
いた３β容晶出装置で、下記の条件で、ぶどう糖−食塩
の複塩結晶を晶出させ、遠心分離機により、ぶどう糖−
食塩の複塩結晶を除去した。分離液をイオン交換樹脂で
精製して、残存食塩を除いて高分岐オリゴ糖含有糖液を
得た。Example 2 The reaction mixture obtained in Example 1 was subjected to activated carbon decolorization and ion purification, and then 15% of common salt was added and dissolved based on the solid content of the purified mixture, and concentrated to a concentration of about 85%. The double salt crystals of glucose and salt were crystallized using the 3β volume crystallizer used in
Double salt crystals of common salt were removed. The separated solution was purified using an ion exchange resin to remove residual sodium chloride to obtain a sugar solution containing highly branched oligosaccharides.

晶出条件：液濃度　８５．３％ 温度及び時間は第３図のプログラム −に沿って実施 シード　０．５％対ＤＳ （ぶどう糖−食塩　複塩結晶） 遠心分離条件：ハスケノト型遠心分離機８００Ｇ　　８
０メツシユ濾布 実施例３ 実施例１で得られた濃度８０％の精製済反応混合物１．
！Ｍ！に等容量の９５％エチルアルコールを加えて混合
し、実施例１で用いた３β容晶出装置で、３０℃に保ち
、３０ｒｐｍで攪拌しながら、２４時間晶出させた後、
ｍ５Ｂ東洋濾紙で濾過して、沈澱物を除去した。得られ
た分離液中のアルコールを減圧蒸発させ、下表のような
組成の高分岐オリゴ糖含有糖液を調製した。Crystallization conditions: Liquid concentration 85.3% Temperature and time were carried out according to the program shown in Figure 3 Seed 0.5% vs. DS (glucose-salt double salt crystal) Centrifugation conditions: Hasukenoto type centrifuge 800G 8
0 mesh filter cloth Example 3 Purified reaction mixture obtained in Example 1 with a concentration of 80%1.
! M! An equal volume of 95% ethyl alcohol was added and mixed, and the mixture was kept at 30°C and crystallized for 24 hours while stirring at 30 rpm using the 3β volume crystallizer used in Example 1.
The precipitate was removed by filtration with m5B Toyo filter paper. The alcohol in the obtained separated liquid was evaporated under reduced pressure to prepare a highly branched oligosaccharide-containing sugar solution having the composition shown in the table below.

実施例４ 高純度ぶどう糖（ＤＥ９７．６、昭和産業側製）を基質
として、固定化グルコアミラーゼ（ノボ社製）を用いて
、分岐オリゴ糖含有反応混合物を調製した。Example 4 A reaction mixture containing a branched oligosaccharide was prepared using immobilized glucoamylase (manufactured by Novo) and high purity glucose (DE97.6, manufactured by Showa Sangyo) as a substrate.

反応条件：温水ジャケット付ガラスカラムφ３　ａｍ　
Ｘ　ｈ　５Ｑｃｍ 酵素　　　３５０ｍ　ｌ充填 反応温度　５５°Ｃ 基質濃度　６５％ 基質ｐＨ４，４６ 通液ｓｖ　　　ｏ、ｏｓ 得られた反応混合物を分子分画クロマトにより分離し、
次の組成の高分岐オリゴ糖含有シラップを得た。Reaction conditions: Glass column with warm water jacket φ3 am
X h 5Qcm Enzyme 350ml Reaction temperature 55°C Substrate concentration 65% Substrate pH 4,46 Liquid passage svo, os The obtained reaction mixture was separated by molecular fractionation chromatography,
A highly branched oligosaccharide-containing syrup having the following composition was obtained.

分離条件：カラムφ２．６５ｘ　２（１００ｍシャケ・
２ト付力ラム温度　５５℃ 充虜剤　東洋パールＩＩＷ−ｄｏｓ　（東洋曹達）糖液
充填量　２ｇ（６０％反応混合物）溶出速度　　２５ｍ
／！／ｈｒ 〔発明の効果〕 以上の如く、本発明方法によると分岐オリゴ糖の含有率
の高いシラップが得られ、本発明は分岐オリゴ糖の工業
的製造用として確立された方法である。Separation conditions: Column φ2.65 x 2 (100m salmon
2-ton loading ram temperature 55℃ Encapsulant Toyo Pearl IIW-dos (Toyo Soda) Sugar solution filling amount 2g (60% reaction mixture) Elution rate 25m
/! /hr [Effects of the Invention] As described above, according to the method of the present invention, syrup with a high content of branched oligosaccharides can be obtained, and the present invention is a method established for industrial production of branched oligosaccharides.

【図面の簡単な説明】[Brief explanation of drawings]

第１図はぶどう糖固形分濃度に対するグルコアミラーゼ
の作用日数による分岐オリゴ糖の生成％を示す図である
。 第２図は実施例１におけるぶどう糖晶出の温度及び時間
のプログラムである。 第３図は実施例２におけるぶどう糖晶出の温度及び時間
のプログラムである。FIG. 1 is a diagram showing the production percentage of branched oligosaccharides depending on the number of days of action of glucoamylase with respect to the glucose solid content concentration. FIG. 2 is a temperature and time program for glucose crystallization in Example 1. FIG. 3 is a temperature and time program for glucose crystallization in Example 2.

Claims (1)

【特許請求の範囲】[Claims] １、固形分濃度５０％以上のぶどう糖水溶液に、糖類の
縮合作用を有する酵素を作用させて該水溶液中に分岐オ
リゴ糖を生成させ、更に必要により分岐オリゴ糖以外の
糖類を分離・除去することを特徴とする分岐オリゴ糖を
多量に含むシラップの製造法。1. A glucose aqueous solution with a solid content concentration of 50% or more is treated with an enzyme having a saccharide condensation action to produce branched oligosaccharides in the aqueous solution, and further to separate and remove saccharides other than branched oligosaccharides if necessary. A method for producing syrup containing a large amount of branched oligosaccharides, characterized by: