JPS61108371A - Container for culturing cell on minute carrier or in capsule - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。(57) [Summary] This bulletin contains application data before electronic filing, so abstract data is not recorded.

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は動物細胞を増殖させるに有用な大容積の培養容
器に関するものである。特に、滅菌可能な大容積の装置
で、その中で動物細胞を微小封入するか、または水−不
溶担体粒子上または内に固定し、一度にまたは連続的に
培地を与え、通風し、穏やかに攪拌し、採取できるもの
である。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION Field of the Invention The present invention relates to large volume culture vessels useful for growing animal cells. In particular, a sterilizable, large-volume device in which animal cells are microencapsulated or immobilized on or within water-insoluble carrier particles, fed with medium all at once or continuously, aerated, and gently It can be stirred and collected.

もし新しい組み換えＤＮＡやバイブＩＪ　ｙ−マ技術に
より、有用なタンパクの商業量を大量に生産する可能性
があるならばこわれやすい動物細胞を少なくとも半自動
操作で大容積中で培養する方法と装置を開発する必要が
ある。す／ホカインやホルモン、単クローン抗体などの
有用なタンパク類やグリコジル化タンパクなどを産生ず
る真核動物細胞は大変こわれやすく、また酸素と栄養の
厳しい要求性を持って−る。近年、そのような細胞を微
小担体ビーズ上または内おるいは半透過性のカプセル内
に固定する上での大きな進歩がなされてきた。そのよう
な系は細胞を剪断力から保護し、細胞増殖に適した微小
環境を与える。例えば米国特許第４，３５２，８８３号
、米国特許＄４，４０９，３３１号および米国特許第４
，３９９，２１９号参照。If new recombinant DNA and VibIJ y-ma technologies offer the possibility of producing commercial quantities of useful proteins in large quantities, methods and apparatus should be developed for culturing fragile animal cells in large volumes in at least semi-automated operation. There is a need to. Eukaryotic cells, which produce useful proteins such as hokines, hormones, monoclonal antibodies, and glycosylated proteins, are extremely fragile and have strict requirements for oxygen and nutrients. In recent years, great advances have been made in immobilizing such cells on or within microcarrier beads or within semipermeable capsules. Such systems protect cells from shear forces and provide a suitable microenvironment for cell growth. For example, US Pat. No. 4,352,883, US Pat. No. 4,409,331 and US Pat.
, 399, 219.

従来の技術 真核動物細胞を高密度まで増殖させようとすると、摂取
するための栄養が得られ、老廃物が除去される滅菌環境
が必要である。培地のｐＨと酸素と二酸化炭素の分圧は
適切なレベルの付近に制御されなければならない。固定
化した細胞の調製は通常大量培養とは別々に遂行し、培
養容器への細胞の移送忙は迷いこんだウィルスや微生物
が混在する危険が増大する。増殖した細胞を大量移送す
るＫは培地と細胞の微小担体を攪拌する必要がある。従
来の細菌発酵に用いられるへら型攪拌装置を用いた場合
、細胞損傷や微小担体の破損が生じ　　゛る。BACKGROUND OF THE INVENTION Growing eukaryotic cells to high densities requires a sterile environment to provide nutrients for intake and remove waste products. The pH of the medium and the partial pressures of oxygen and carbon dioxide must be controlled around appropriate levels. Preparation of immobilized cells is usually performed separately from mass culture, and the busy transfer of cells to culture vessels increases the risk of contamination with stray viruses and microorganisms. When transporting a large amount of proliferated cells, it is necessary to stir the medium and microcarriers of cells. If a spatula-type stirring device used in conventional bacterial fermentation is used, cell damage and microcarrier breakage occur.

微小カプセル内で動物細胞を増殖させることは前記の米
国特許第４，４０９，３３１号と、併願し、　１９８４
年２月１３日に提出し、気体散布による細胞培養と題す
る特許出願筒５７９，４９１号とに記載されているよう
に、多くの有利性を持つ。そのような封入した動物細胞
を大量に培養するには、使用培地または興味あるタンパ
クを含有する培地をカプセルから分離して合併し、封入
した細胞を洗浄し、採取または以後の処置のためのカプ
セルの合併を容易にするように設計された滅菌可能な細
胞培養容器を用いるのが望ましい。Growing animal cells in microcapsules is described in U.S. Pat. No. 4,409,331 and co-filed in 1984.
It has many advantages, as described in patent application Ser. To culture such encapsulated animal cells in large quantities, the working medium or the medium containing the protein of interest is separated from the capsule, combined, the encapsulated cells are washed, and the capsule is removed for harvest or further treatment. It is desirable to use sterilizable cell culture vessels designed to facilitate the combination of cells.

動物細胞を培養する装置は知られている。実施例として
は米国特許第４，３５５，９０６号、第４，２０３，８
０１号、第４，３７７．６３９号、第４，２０４，０４
２号、第４，３４３゜９０４号　第４，０８７，３２７
号および英国特許第２，０５９゜４３６Ａ号に記載され
た装置が含有される。バーカー５は動物細胞がこわれや
すいことを認識して米国特許第２，９５８，５１７号に
攪拌の速度を制御できるように加減抵抗器を備え付けた
モーターにより駆動する磁気撹拌棒装置を記載した。ガ
ビンは米国特許第３，０１３，９５０号に液体流出口が
動物細胞を連続的に合併し、培地を与えられるようにし
た培養容器を発表した。トルバート５は培地を連続的に
流出させる一方、細胞や担体粒子をフィルター装置によ
って培養容器に保持させる哺乳動物細胞のための培養装
置を米国特許第４．１８４，９１６号に発表した。Devices for culturing animal cells are known. Examples include U.S. Pat. Nos. 4,355,906 and 4,203,8.
No. 01, No. 4,377.639, No. 4,204,04
No. 2, No. 4,343°904 No. 4,087,327
and British Patent No. 2,059°436A. Recognizing the fragility of animal cells, Barker 5 described in US Pat. No. 2,958,517 a magnetic stirring bar device driven by a motor equipped with a rheostat to control the rate of stirring. Gavin, in US Pat. No. 3,013,950, disclosed a culture vessel in which a liquid outlet allowed animal cells to be continuously integrated and fed with medium. Tolbert 5 published in US Pat. No. 4,184,916 a culture device for mammalian cells in which the culture medium is continuously drained while the cells and carrier particles are retained in the culture vessel by a filter device.

、発明の解決しようとする問題点 本発明の目的は、遊離の動物細胞または、固体またはゲ
ルの多孔微小担体の表面に付着または内部に入れられた
、または透過性カプセル内に含有された細胞（こむでは
以後１微小担体４淀（ｉｆｆ胞ｎ）、を培養するための
、連続的または一度に培地を与えられ、微小担体や細胞
に実質的に障害を与えずに攪拌でき、カプセル微小電極
を同様に製造でき、培養の容積を自動的に制御できる滅
菌可能な容器を供給することである。今一つの目的は固
定化した細胞を大容積にて効率よく増殖させる。例えば
２０リットル以上で高密度にさせる、装置を与えること
である。もう一つの目的は培地または固定化細胞または
従来の懸濁培養細胞を採取できるように設計された細胞
培養容器を与えることである。, Problems to be Solved by the Invention The object of the present invention is to provide free animal cells or cells ( From now on, in order to culture 1 microcarrier 4 cells (if cell n), a medium can be fed continuously or all at once, and the capsule microelectrode can be stirred without substantially damaging the microcarriers or cells. It is to provide a sterilizable container that can be manufactured in a similar manner and in which the culture volume can be automatically controlled.Another objective is to efficiently grow immobilized cells in large volumes, e.g. at high densities over 20 liters. Another object is to provide a cell culture vessel designed to allow harvesting of culture medium or fixed cells or conventional suspension culture cells.

本発明のこれらおよび他の目的は次の記述と図より明白
になろう。These and other objects of the invention will become apparent from the following description and figures.

本発明は細胞、特に微小担体・滲固定化細胞を培地内で
培養するための装置に関するものである。装置は培地と
細胞または微小担体−固定化細胞を保持するための底壁
と側壁を持つ容器と、容器内に培地を導入するための入
口と培地と細胞と無傷な微小担体をともに除去するため
の容器の底壁に隣接する出口よ多構成される。第２の出
口は過剰の培地を容器から排出させるために、底壁より
上に位置する。微小担体または細胞を通過させず培地は
通過させる大きさの穴を持つつい立てまたは窓のような
中央部は第２出口と細胞含有液との間に配置する。その
ような配置でもって、液体の全体積を保持し、微小担体
と細胞を容器内に保持する一方、容器内に連続的に希望
する速度で培地を与えることが可能である。操作上、第
２の出口は、培養中の容器内の液量な変化できるように
調整可能で、置換可能である。The present invention relates to an apparatus for culturing cells, particularly microcarrier/immobilized cells, in a medium. The device consists of a container with a bottom wall and side walls for holding medium and cells or microcarriers - immobilized cells, an inlet for introducing the medium into the container, and for removing both the medium, cells and intact microcarriers. The outlet is adjacent to the bottom wall of the container. A second outlet is located above the bottom wall for draining excess medium from the container. A central portion, such as a ridge or window, having holes sized to allow the medium to pass through but not the microcarriers or cells is placed between the second outlet and the cell-containing liquid. With such an arrangement, it is possible to retain the entire volume of liquid and keep the microcarriers and cells within the container, while continuously feeding the medium into the container at the desired rate. Operationally, the second outlet is adjustable and replaceable to allow for changes in the volume of liquid in the container during cultivation.

好適な実施態様においては装置はさらに容器の底壁の付
近に第３の出口と、微小担体または細胞の通過をさせな
いための適切な大きさの窓またはつい立てよ多構成され
る。第２と第３の出口は底壁より上部に延びた円柱状の
穴の内に配置されるのが望ましい。第３の出口は細胞、
微小カプセルあるいは他の微小担体を保持する一方、全
液体を排出で、きる。例えば細胞を工程中、洗浄しなけ
ればいけないときなど有効である。In a preferred embodiment, the device is further configured with a third outlet near the bottom wall of the container and a suitably sized window or window to prevent the passage of microcarriers or cells. Preferably, the second and third outlets are located within a cylindrical hole extending above the bottom wall. The third exit is the cell,
It is possible to drain all the liquid while retaining the microcapsules or other microcarriers. This is useful, for example, when cells must be washed during a process.

好適な実施態様においては装置は動物細胞と培地を攪拌
するための水かきと、水かきを回転させるための電気モ
ーターのような原動力と水かきの回速速度を調節するた
めの原動力の制御器を含有する。これらの構成物を組合
せて微小担体と動物細胞への傷害を最小にする攪拌速度
での遅い加速が可能になる。制御器は水かきを少くとも
１分以上かけて徐々に加速するのが望ましい。In a preferred embodiment, the device includes a web for agitating the animal cells and medium, a motive force such as an electric motor for rotating the web, and a controller for the motive force for adjusting the speed of rotation of the web. . The combination of these constructs allows for slow acceleration at stirring speeds that minimize damage to the microcarriers and animal cells. Preferably, the controller gradually accelerates the webbing over at least one minute.

さらに本発明では、本容器は微小担体−固定化動物細胞
を導入するための入口と、分散した動物細胞を含有する
複数の保形マトリックスを形成するための一体となった
装量を含む。これらは微小担体自体として働きうるし、
また透過性カプセルを形成するためにさらに処理できる
。後者の場合は、容器は、米国特許第４．３５２，８８
３号に発表したカプセル化工程での膜形成に用いられた
タイプのポリカチオ／のような保形マトリックスを被覆
する成分を含有する液体を導入する入口を持つ。保形マ
トリックス作製のための装置はよく知られている６噴射
頭”といわれる小滴形成装置を修正したものよ多構成さ
れる。それは複数の動物細胞を含有するアルギン酸ナト
リウムのようなゲル状物質の溶液を保持するための空間
と、中空の針でこの空間よｐ下に延びそれぞれ空間の下
に位置する窓となる複数の導管、ゲル状物質を導管中に
通すためのポンプや他の手段を特徴とする。装置はまた
ゲル状物質の流れを阻止するための導管の開口部付近の
空気通路を持つ構造を含有しこれにより流れを複数の小
滴に分ける。その後、形成された小滴は小滴を保形マ）
　ＩＪラックス変換するための塩化カルシウムのような
ゲル状溶液を保持した貯蔵器中に滴下する。塩化カルシ
ウム溶液に入ったマトリックスは導管を通して容器内に
直接移送され続いてＵ、　Ｓ、　４，３５２，８８３と
６改良したカプセル膜作製”と題して１９８４年２月１
３日に提出したアメリカ特許出願第５７９，４９４号に
発表したタイプのいろいろな試薬で処理できる。このよ
うに保形カルシウム架橋マトリックスは食塩水で数回洗
浄でき続いて、ゲル状マトリックスのまわりに透過性の
膜を形成するためにポリリジンやポリオルニチンのよう
なポリカチオン溶液にさらす。膜が形成された後、微小
カプセルの塊ができないように、あるいは他の目的で、
アルギン酸ナトリウムの希釈溶液を添加してもよい、ま
たこのように作製されたカプセルの内部マトリックスは
クエン酸ナトリウムやキレート剤の溶液を注入すること
により液状にできる。Further according to the invention, the container comprises an inlet for introducing the microcarrier-immobilized animal cells and an integral charge for forming a plurality of shape-retaining matrices containing dispersed animal cells. These can act as microcarriers themselves,
It can also be further processed to form permeable capsules. In the latter case, the container is
It has an inlet for introducing a liquid containing a component to coat the shape-retaining matrix, such as polycation/of the type used to form the membrane in the encapsulation process described in No. 3. The apparatus for producing shape-retaining matrices consists of a modification of the well-known six-jet droplet forming apparatus. a plurality of conduits with hollow needles extending below the space and each serving as a window located below the spaces, and a pump or other means for passing the gel-like substance into the conduits. The device also includes a structure with an air passageway near the opening of the conduit to interrupt the flow of the gel-like material, thereby dividing the flow into a plurality of droplets.The formed droplets then Shape-retaining droplets)
Drop into a reservoir holding a gel-like solution such as calcium chloride for IJ lux conversion. The matrix in calcium chloride solution was transferred directly into a container through a conduit and subsequently published in U. S. 4,352,883 and 6 entitled "Improved Capsule Membrane Preparation" February 1, 1984.
It can be treated with a variety of reagents of the type described in U.S. Patent Application No. 579,494, filed on the 3rd. The shape-retaining calcium cross-linked matrix can thus be washed several times with saline and subsequently exposed to a polycation solution such as polylysine or polyornithine to form a permeable membrane around the gel-like matrix. After the membrane is formed, to prevent the formation of clumps of microcapsules or for other purposes,
A dilute solution of sodium alginate may be added, and the internal matrix of the capsules thus prepared can be liquefied by injecting a solution of sodium citrate or a chelating agent.

作用 このように、本発明の装置は微小カプセルまたは微小担
体−固定化動物細胞の作製を可能にし、複数の計量ポン
プの必要なしに一度にまたは連続して培地を与えて浮遊
培養細胞または固定化培養細胞を高密度まで増殖させる
ことができ、そして細胞により産生される興味ある物質
を含有する培地の回収や、細胞の洗浄、細胞採取のため
の微小担体の回収または微小担体に保持された興味ある
タンパクの回収に適している。OPERATION Thus, the device of the invention allows the creation of microcapsules or microcarriers-immobilized animal cells, feeding medium at once or sequentially without the need for multiple metering pumps to support suspension-cultured or immobilized cells. Cultured cells can be grown to high density, and the collection of medium containing substances of interest produced by the cells, washing of cells, collection of microcarriers for cell harvesting, or interest retained on microcarriers. Suitable for recovery of certain proteins.

本発明の他の特徴と有利性は続く記述、図面、および特
許請求の範囲より当技術分野において明らかとなろう。Other features and advantages of the invention will be apparent to those skilled in the art from the following description, drawings, and claims.

図１は本発明の微小担体−固定化細胞培養容器の透視お
よび部分的断面の分解部品配列図である。FIG. 1 is a perspective and partially cross-sectional exploded parts arrangement view of the microcarrier-immobilized cell culture vessel of the present invention.

図２は図１の容器の、典型的な入口の構造を描写したカ
バーの詳細な透視図である。図３は図１の容器の、微小
担体または細胞を回収し、採収または置換のための培地
の排出および、容器内に一定看の培地を自動的に保持す
るための容器の出口部分を描写した詳細図であシ、図４
は固定化細胞を含有する、保形ゲル小球または他の成形
物を作製するための装置全体の詳細図でおる。FIG. 2 is a detailed perspective view of the cover of the container of FIG. 1 depicting a typical inlet structure. FIG. 3 depicts the outlet portion of the container of FIG. 1 for collecting microcarriers or cells, ejecting the medium for collection or replacement, and automatically maintaining a constant amount of medium within the container. This is the detailed diagram shown in Figure 4.
Figure 1 is a detailed view of the entire apparatus for making shape-retaining gel globules or other molded articles containing immobilized cells.

それぞれの図に引かれた参照数字は対応する部分を示す
。Reference numbers drawn in each figure indicate corresponding parts.

図に言及すると、図１は培養容器８、そのカバ一部品１
２、水かき推進および制御部品１４、および任意の完全
小滴形成部品９、を示す。Referring to the figures, FIG. 1 shows a culture vessel 8, its cover part 1
2, the webbed propulsion and control component 14, and the optional full droplet forming component 9 are shown.

容器８は側壁１０と開口部１６、完全取の手１８と２０
、底壁３２より延びた支持２２よ構成る円柱状ステンレ
ス鋼構造で構成される。開口部１６は滅菌可能で弾力の
ある封２４とカバ一部品１２と連結するための輪ぶち２
６によりふちどられる。ハント４ル１８と２０は水力起
重のようなものの起重棒を受けるための中空の円柱より
構成される。図１に示したように、使用中の容器１０は
２８に記した培養培地中に入っている多数の細胞、微小
カプセルまたは微小担体かまたは他の液体３０により充
満されている。容器８の底壁３２は先細シの雄管接続部
分４０を持つノ；ルブ羽で制御される導管３６と一式と
なった出口３４を中心に持つ。The container 8 has a side wall 10, an opening 16, and a full handle 18 and 20.
, a cylindrical stainless steel structure comprising a support 22 extending from a bottom wall 32. The opening 16 has a sterilizable elastic seal 24 and a ring tab 2 for connecting with the cover part 12.
Framed by 6. The handles 18 and 20 consist of hollow cylinders for receiving the hoist rods of things such as hydraulic hoists. As shown in FIG. 1, the container 10 in use is filled with a number of cells, microcapsules or microcarriers, or other liquid 30 contained in a culture medium as indicated at 28. The bottom wall 32 of the container 8 has a central outlet 34 which is associated with a lubricated conduit 36 having a tapered male tube connection portion 40.

上に延びた、ふた４４を持つ円柱状で多孔性ステンレス
鋼のシリンダー招は底壁３２に固定されている。管は容
器を用いる目的に応じて微小担体または細胞の通過を阻
止するに十分な小さな開口部を持つ。管内に導管４６が
あり、管Ｃと平行に上に延び容器が含む最大培養量を既
定する上部開口末端拐を持つ。導管４６は取シはずし可
能で結合している、すなわち、連結４９により、多孔性
円柱４２内で容器８の底３２を通って出口部に結合する
。いろいろな高さの導管を希望するいろいろな最大液量
に応じて換えることができる。出口５０は導管５２、付
属したパルプ５４、先細シ管接続部分５６へと導かれる
。多孔性円柱４２内に出口５０の付近に第２の出口５Ｂ
があシ、容器８の底壁３２を通り、導管６０と、付属バ
ルブ６２および雄先細シ管接続部分６４を持つ。A cylindrical, porous stainless steel cylinder with an upwardly extending lid 44 is secured to the bottom wall 32. The tube has an opening small enough to prevent the passage of microcarriers or cells depending on the purpose for which the container is used. Within the tube is a conduit 46 which extends upward parallel to tube C and has an open top end that defines the maximum culture volume that the vessel will contain. The conduit 46 is removably connected, ie it is connected by a connection 49 through the bottom 32 of the container 8 within the porous cylinder 42 to the outlet. Conduits of different heights can be substituted for different maximum fluid volumes desired. The outlet 50 leads to a conduit 52, an attached pulp 54, and a tapered tube connection 56. A second outlet 5B is provided in the porous cylinder 42 near the outlet 50.
The recess passes through the bottom wall 32 of the container 8 and has a conduit 60, an attached valve 62 and a male convergent tube connection portion 64.

容器８の円柱壁１０の左側に、以後詳細に記述する微小
担体−′作製装置の出口のパイプ７０に接続するための
連結６８を持つ入口６６が配列する。カバー１２は各コ
ーナーに封のかぎ部品１０２を持つ６角形の封板１００
より構成される。容器の封をするため円柱状容器８の上
にカバーをのせ、かぎ部品１０２の封のかぎ１０４を封
板１００の底面に対して封２４で押しつけてふち２６の
下側にかみ合わせ、とって１０６を封２４に対して板１
００に押しつける。板１００は透明なプラスチック、例
えばポリカーボン、で組み立てることにより容器８の内
部が目視可能となる。Arranged on the left side of the cylindrical wall 10 of the container 8 is an inlet 66 with a connection 68 for connection to an outlet pipe 70 of the microcarrier-' production device, which will be described in detail below. The cover 12 includes a hexagonal sealing plate 100 with a sealing latch 102 at each corner.
It consists of In order to seal the container, place the cover on the cylindrical container 8, press the sealing key 104 of the lock part 102 against the bottom surface of the sealing plate 100 with the seal 24, engage the lower side of the rim 26, and remove it 106. Seal 24 against plate 1
Push it to 00. The plate 100 is made of transparent plastic, such as polycarbonate, so that the interior of the container 8 can be visually observed.

板１００の中央に磁石により構成される磁気駆動部品１
０８と水かき１１２に備え付けた従来通シの回転可能な
ベアリング付きシャフトが配置される。Magnetic drive component 1 configured by a magnet in the center of plate 100
08 and a conventional rotatable shaft with a bearing attached to the web 112 is arranged.

水かきは９０度角度のついた板よ構成る１組の１８０゜
度に互いに離れた水かき片１１４，１１６　よ）構成さ
れる。板１００はボルトによりカバー１２へ水かき駆動
と制御部品１４を付着させるため複数のシャフト１１８
を含む（図示せず）。６つの入口１１０，１１２゜１１
４．１１６，１１８と１２０が板１００の駆動部品１０
８のまわシを放射状に位置する。それぞれの入口は板１
００を貫通し、微小担体を作製するため、いろいろな洗
浄溶液を注入し、培地を与え、酸素分圧、ｐＨなどをモ
ニターしたシあるいは他の目的のために有効なようにい
ろいろな管と制御装置が備えつけられている。The web consists of a pair of web strips 114, 116 spaced 180 degrees apart and made up of plates angled at 90 degrees. Plate 100 includes a plurality of shafts 118 for attaching web drive and control components 14 to cover 12 by bolts.
(not shown). 6 entrances 110, 112° 11
4. 116, 118 and 120 are the driving parts 10 of the plate 100
8 mawashi are located radially. Each entrance is board 1
00 to inject various washing solutions, provide culture medium, monitor oxygen partial pressure, pH, etc., to prepare microcarriers, or use various tubes and controls to be effective for other purposes. Equipment is provided.

入口１１０にはフィルター人れ１２４と雄管接続部分１
２６が付いた培地注入線１２２が備えつけられている。The inlet 110 has a filter channel 124 and a male pipe connection part 1.
A medium injection line 122 labeled 26 is provided.

穴１１２とその付着管１２８とフィルター入れ１３０は
出口として働く。穴１１４はそれを通る長い管１３２を
持ち、従来の酸素プローブ、ｐＨ測定プローブ、あるい
は培地や他の容器８に入る液体の状態をモニターするた
めの装置を受けるための連結１３４を備えつけている。Hole 112 and its attachment tube 128 and filter receptacle 130 serve as outlets. Hole 114 has a long tube 132 passing through it and is equipped with a connection 134 for receiving a conventional oxygen probe, pH measuring probe, or other device for monitoring the condition of the medium or other liquid entering container 8 .

穴１１６は管１３５と雌連結１２６を備えつけている。Hole 116 is equipped with tube 135 and female connection 126.

この構造は細胞または、前もって作製された微小担体、
または組み立てられたカプセルや微小担体に用いられる
いろいろな液体の注入のために働く。穴１１８と１２０
は管１３８と１４０およびそれらに付いたフィルタ一部
品１４２゜１４４と雄管接続部分１４６，１４８を備え
つけている。This structure consists of cells, prefabricated microcarriers,
Or work for injection of various liquids used in assembled capsules and microcarriers. holes 118 and 120
is equipped with tubes 138 and 140 and associated filter parts 142, 144 and male tube connections 146, 148.

穴１１８．管１３８．フィルタ一部品１４２と分節１４
６は容器８の液体３０のレベル以上の上部空間において
規定の組成の気体を供給するために用いることができる
。穴１２０．管１４０．フィルタ一部品１４４と分節１
４８は空気、酸素または酸素／二酸化炭素混合物の源と
結合できる。穴１２０を通ったガスは導管１５０を通っ
て上で参照したアメリカ特許出願第５７９，４９１号に
発表したように培地を酸素化するために小孔噴出頭１５
２へ運ばれる。Hole 118. Tube 138. Filter part 142 and segment 14
6 can be used to supply a gas of a prescribed composition in the upper space above the level of the liquid 30 in the container 8. Hole 120. Tube 140. Filter part 144 and segment 1
48 can be coupled to a source of air, oxygen or an oxygen/carbon dioxide mixture. Gas passing through hole 120 passes through conduit 150 to small hole spout head 15 to oxygenate the medium as disclosed in U.S. patent application Ser. No. 579,491 referenced above.
Transported to 2.

水かき駆動と制御商品１４は支持シャフト３０８０つい
た基底板３０６よ多構成される。電気モーター３００は
駆動シャフト（図示せず）のついた基底板３０６にすえ
付けられ駆動箱３１０内の従来の環状磁気駆動部品（図
示せず）に板３０６を貫通して、連結している。部品１
４をカバ一部品１２上に置くときは環状駆動部品はカバ
一部品１２上、磁気駆動部品１０８のまわりに同軸で位
置する。モーター３００の回転運動は磁気連結を通して
シャツ）　１１０と水かき１１２に転送される。モータ
ー３００の電力はモーター３００と水かき１１２の回転
速度を制御する当分野でよく知られている回路を含む制
御器３０２を通して供給される。制御器３０２は水かき
１１２の回転運動の変化速度をいくつかの固定された速
度の一つにセットできるノブ３０４よ）制御できる回路
を含有する。言いかえればノブ３０４は水かき１１２の
回転速度を適切な回転速度１例えば２０　ｒｐｍに与え
られた時間、例えば５分で除々に増大させる回路を働か
せる。The web drive and control article 14 is comprised of a base plate 306 with a support shaft 3080. Electric motor 300 is mounted to base plate 306 with a drive shaft (not shown) and coupled through plate 306 to a conventional annular magnetic drive component (not shown) in drive box 310 . Part 1
4 on the cover part 12, the annular drive part is positioned coaxially around the magnetic drive part 108 on the cover part 12. The rotational motion of motor 300 is transferred to shirt 110 and web 112 through magnetic coupling. Power for motor 300 is provided through a controller 302 that includes circuitry well known in the art to control the rotational speed of motor 300 and paddle 112. The controller 302 contains circuitry that can control the rate of change of the rotational movement of the web 112 (such as a knob 304) that can set the rate of change of the rotational motion of the web 112 to one of several fixed speeds. In other words, the knob 304 activates a circuit that gradually increases the rotational speed of the web 112 to an appropriate rotational speed of 1, eg, 20 rpm, over a given period of time, eg, 5 minutes.

ノブ３０５は水かき１１２の最大回転速度をセットする
。Knob 305 sets the maximum rotational speed of web 112.

図４に言及すると、培養容器８と組合わせて用いるゲル
状マトリックス作製装置９の詳細を示す。Referring to FIG. 4, details of the gel-like matrix production device 9 used in combination with the culture vessel 8 are shown.

装置９はゲル状溶液で水槽２００を満たすための水槽入
口２０２を備え付けた水槽２００を入れる容器７２よ多
構成される。穴２０２は出口として働く。出口線２０６
に配置したパルプ２０４は装置９で作製され導管７０を
通って容器８への流れ調節する。水槽２００の溶液は以
後言及するようにして作製されそして真核動物細胞を含
有するアルギン酸ナトリウム水滴をゲル化するに用いる
塩化カルシウムの希釈溶液である。The device 9 consists of a container 72 containing the aquarium 200, which is equipped with an aquarium inlet 202 for filling the aquarium 200 with a gel-like solution. Hole 202 serves as an outlet. Exit line 206
Pulp 204 placed in is produced in apparatus 9 and flows through conduit 70 to container 8 . The solution in bath 200 is a dilute solution of calcium chloride prepared as hereinafter referred to and used to gel sodium alginate droplets containing eukaryotic cells.

水滴作製装置２０８は水槽２００の上にある。空間２１
０で区切られた構造と分離した隔室２１２よ多構成され
る。複数の中空の針２１４は空間２１０から空間２１２
を通って延び、水槽２００の上に位置する円錐状開口部
２１８内に出る場所の小滴作製装置２０８の底壁２１６
を貫通する。それぞれの中空の針と底壁２１６の間にあ
る環状の空間は隔室２１２と円錐状開口部２１８間の空
気通路を与える。空間２１０には導管２２０を通して、
ゲル状溶液１例えばアルギン酸ナトリウム、に入りた動
物培養細胞を移送するため、任意にはポンプ（図示せず
）が使われて、給送される。空間２１２には空気取シ入
れ口管２２２と付属のフィルター容器２２４とによって
給送される。小滴作製装置２０８はポリカーボンやポリ
サルホンのような透明なプラスチックにょシ組立てられ
る。中空針２１４の内径と、管２２２を通して注入され
る空気圧、空間２１０内に含有するゲル化溶液の粘度は
ともに装置９での小滴の大きさを決定する。The water droplet making device 208 is located above the water tank 200. space 21
It is composed of multiple compartments 212 and separate compartments 212 separated by 0. A plurality of hollow needles 214 move from space 210 to space 212.
a bottom wall 216 of the droplet making device 208 where it extends through and exits into a conical opening 218 located above the aquarium 200;
penetrate. The annular space between each hollow needle and the bottom wall 216 provides an air passage between the compartment 212 and the conical opening 218. A conduit 220 is passed through the space 210,
Optionally, a pump (not shown) is used to transport the animal cultured cells in the gel-like solution 1, such as sodium alginate, for pumping. The space 212 is supplied by an air intake pipe 222 and an associated filter container 224 . Droplet maker 208 is constructed from a transparent plastic such as polycarbon or polysulfone. The inner diameter of the hollow needle 214, the air pressure injected through the tube 222, and the viscosity of the gelling solution contained within the space 210 together determine the droplet size in the device 9.

上記の装置は連続または断続的に新鮮な培地を与える一
方、動物細胞を含有する微小担体を作製し、固定化また
は非固定化細胞を高密度にまで培養するのに用いられる
。真核動物細胞を含有する保形ゲル化マトリックスを作
製するための装置９は任意の成分である。希望するなら
これは装置からはずしてもよい。微小担体または浮遊培
養は別々に調製でき例えば入口１１６より培養容器に注
入できる。The above-described device is used to create microcarriers containing animal cells and to culture immobilized or non-immobilized cells to high density while continuously or intermittently providing fresh medium. The device 9 for producing a shape-retaining gelled matrix containing eukaryotic cells is an optional component. This can be removed from the device if desired. Microcarriers or suspension cultures can be prepared separately and, for example, injected into the culture vessel through the inlet 116.

本発明の操作の典型的な順序をこれから記す。A typical sequence of operation of the present invention will now be described.

この装置をオートクレーブなどで滅菌する前に、上述の
ようにカバ一部品１２を頭部１６に封する。滅菌後、水
かき駆動と制御部品１４を板１００のカバ一部品１２の
上にボルトでしめつけ、等侵食塩水を例えば入口１１６
を通して容器内にポンプで注入する。Before the device is sterilized, such as in an autoclave, the cover part 12 is sealed to the head 16 as described above. After sterilization, the web drive and control part 14 is bolted onto the cover part 12 of the plate 100 and the iso-erosive brine is, for example, inlet 116.
Pump into the container through the tube.

バルブ３８と６２を閉じ食塩水を例えば入口の連結６６
のちょうど下のレベルまで満たせる。Close valves 38 and 62 and drain the saline solution, e.g. at inlet connection 66.
can be filled to just below the level.

例えば単クローン抗体を生成する培養パイブリド−マな
どの動物細胞培養における１例えば１．２％アルギン酸
ナトリウムのような溶液を、それが空間２１０を満たし
中空の針２１４を通る導管２２０を通して注入する。一
つの適切なゲル状溶液を与える速度は１時間あたシロリ
ットルである。空気または無毒気体は例えば１時間あた
！１１７０立方フィートの速度で管２２２を通して注入
されそこで空間２１２が満たされ、壁２１６の環状開口
部を通って中空の尉・２１４を通過する。円錐状開口部
２１８は空気の流れによって２３０に記したアルギン酸
ナトリウムの小滴を、例えば直径５ｏｏ−１，ｏｏｏミ
クロンのレベルに切断する作用がある。前もって入口導
管２０２を通して塩化カルシウム１．２％溶液で満たし
である水槽２００が水滴を受ける。溶液に接触すると小
滴のアルギン酸ナトリウムは水槽２００のカルシウムイ
オンと反応して微小担体として働く多数の保形マトリッ
クスを形成する。保形アルギン酸カルシウムゲル小球ま
たは、他の形は連続してまたは断続的に、上で参照した
併願の米国特許出願第５７９，４９４号に発表したよう
に出口２０６．バルブ２０４．導管７０と連続６６を通
シ容器８の食塩水に入シ、そこで膨張する。ゲル小球は
バルブ６２を開き、以前の食塩水を排出し、新しい食塩
水を例えば入口１１６より注入することにより新しい食
塩水で数回洗浄できる。この時点で容器８は動物細胞を
含有するアルギン酸カルシウムゲル小球カ微小担体とし
て働くように細胞増殖のための培地で満たされる。しか
し、ゲル小球のまわりに半透過性膜を形成しゲルを液化
することにより大量移送と細胞増殖を促進することが直
前に参照したアメリカ特許出願第５７９，４９４号とア
メリカ特許第４．３５２，８８３号とに発表したように
、望ましい。A solution such as, for example, 1.2% sodium alginate in animal cell culture, such as cultured pubic tumors that produce monoclonal antibodies, is injected through conduit 220, where it fills space 210 and passes through hollow needle 214. One suitable gel-like solution rate is liters per hour. For example, air or non-toxic gas per hour! It is injected through tube 222 at a rate of 1170 cubic feet, where it fills space 212, and passes through an annular opening in wall 216 and into hollow tube 214. The conical opening 218 serves to cut the sodium alginate droplets marked 230 into, for example, 5 oo-1,00 micron diameters by means of a flow of air. A water tank 200, previously filled with a 1.2% calcium chloride solution through an inlet conduit 202, receives the water droplets. Upon contact with the solution, the droplets of sodium alginate react with the calcium ions in the water bath 200 to form a large number of shape-retaining matrices that act as microcarriers. Shape-retentive calcium alginate gel globules or other shapes may be continuously or intermittently inserted into outlet 206. Valve 204. It passes through conduit 70 and conduit 66 into the saline solution in container 8, where it expands. The gel globule can be washed several times with fresh saline by opening valve 62, draining the old saline, and injecting fresh saline, for example through inlet 116. At this point, the container 8 is filled with medium for cell growth so that the calcium alginate gel globules containing the animal cells act as microcarriers. However, forming a semi-permeable membrane around the gel globules and liquefying the gel promotes mass transfer and cell proliferation in the just-referenced U.S. Patent Application No. 579,494 and U.S. Pat. , No. 883, is desirable.

膜形成のためにゲル小球の入った食塩水をバルブ６２を
通して排出する。孔あきスクリーン弦のためにこの工程
でゲル状小球は失なわれない。その後、ポリリジンやポ
リオルニチンのようなポリカチオン溶液を例えば穴１１
６を通して容器８忙注入する。ポリカチオンはアルギン
酸カルシウムゲル化、保形マトリックスの表面の、負電
荷と反応して、それぞれ半透過性膜を形成する。同じポ
リカチオンのいろいろな濃度であるいは異なるポリカチ
オンで１度またはそれ以上の処理の後、液相を再び出口
５８、導管６０およびバルブ６２を通して排出する。The saline solution containing the gel globules is discharged through valve 62 for film formation. No gel globules are lost in this process due to the perforated screen string. Thereafter, a polycation solution such as polylysine or polyornithine is added to hole 11, for example.
Pour into container 8 through 6. The polycations react with the negative charges on the surface of the calcium alginate gelling and shape-retaining matrix to form semi-permeable membranes, respectively. After one or more treatments with different concentrations of the same polycation or with different polycations, the liquid phase is again discharged through outlet 58, conduit 60 and valve 62.

アルギン酸の金沢溶液を容器に注入し微小カプセル上の
正荷電を中和するのが望ましい。動物細胞を含有する微
小カプセルをカプセル内からカルシウムイオンを除きそ
れＫよってゲルを液化するためにクエン酸またはキレー
ト剤の溶液で洗浄するのが望ましい。It is desirable to inject a Kanazawa solution of alginic acid into the container to neutralize the positive charges on the microcapsules. It is desirable to wash the microcapsules containing animal cells with a solution of citric acid or a chelating agent to remove calcium ions from within the capsule, thereby liquefying the gel.

荷電−中和液を除去しカプセルを食塩水で数回洗浄した
後、培地を穴１１０を通してバルブ６２．３８を閉じ５
４を開けて注入する。培地が水槽４６の開口部拐まで温
圧された時、培地は孔あきスクリーンＣを通過し水槽４
６の下に流れバルブ５４、管接続５６、それに結合した
管（図示せず）を通過する。容器はこのように、例えば
２０リツトルの培地と５リツトルの微小カプセルであわ
せて２５リツトルで満たされる。After removing the charge-neutralizing solution and washing the capsule several times with saline, the medium is passed through hole 110 and valve 62.38 is closed.
Open 4 and inject. When the culture medium is heated and pressurized to the opening of the water tank 46, the culture medium passes through the perforated screen C and enters the water tank 4.
6 passes through a flow valve 54, a pipe connection 56, and a pipe (not shown) connected thereto. The container is thus filled with, for example, 20 liters of medium and 5 liters of microcapsules, totaling 25 liters.

他にも、前もって作製した細胞を含有した微小担体や従
来の浮遊培養もカバー板ｌｏｏ内の適切な入口を通して
容器８内に直接注入できる。Alternatively, microcarriers containing prefabricated cells or conventional suspension cultures can also be directly injected into the container 8 through a suitable inlet in the cover plate loo.

この時点で制御器３０２が働き、加速制御ノブ３０４と
回転速度制御ノブ３０５がモーター３００を働かせる。At this point, controller 302 is activated, and acceleration control knob 304 and rotational speed control knob 305 activate motor 300.

制御器３０２の制御め下、磁気駆動部品がモーター３０
０の駆動で駆動部品１０８とシャフト１１０のゆつくシ
した回転を開始させ、水かき１１２がゆっくり回転速度
を上げてゆく。これは容器に含有される微小カプセルお
よび／または動物細胞の障害な奄小にする。培養の過程
で、培地は定期的に出口５８を通してバルブ６２を開は
排出され、入口１１０を経て新しい培地に置換される。Under the control of the controller 302, the magnetic drive component is the motor 30.
0, the driving part 108 and the shaft 110 start rotating slowly, and the web 112 slowly increases the rotational speed. This results in an undesirable collapse of the microcapsules and/or animal cells contained in the container. During the cultivation process, the medium is periodically drained through the outlet 58 by opening the valve 62 and replaced with fresh medium through the inlet 110.

容器内の圧力は出口１１２によって大気の近くに保持さ
れる。The pressure within the container is maintained close to atmospheric pressure by outlet 112.

酸素プローブまたはｐＨプローブは穴１１４と管１３２
を通して挿入され培地の気体の分圧または他の状態をモ
ニターする。容器の頭部空間の気体の組成は穴１１８を
通して空気、二酸化炭素および酸素などの気流の注入に
より制御される。カプセル化した培養細胞を増殖させる
とき、もし希望するならば併願した米国特許出願等５７
９，４９３号に発表しであるように培養液は穴１１２と
付属の噴出頭１５２を通して酸素化できる。The oxygen probe or pH probe is connected to hole 114 and tube 132.
to monitor the partial pressure of gases or other conditions in the medium. The composition of the gases in the headspace of the container is controlled by the injection of a gas flow, such as air, carbon dioxide, and oxygen, through holes 118. When growing encapsulated cultured cells, if you wish, you may apply for concurrently filed US patent applications, etc. 57
9,493, the culture medium can be oxygenated through the hole 112 and the attached spout head 152.

培養液の連続的な補充は穴１１０を通して培養液を供給
することにより簡単に遂行できる。容器８の液量が増大
すると、過剰の培地は導管４６とパルプ８を通って排出
される。培地中の微小担体や遊離細胞は孔あきスクリー
ンＣの開口部より通過せず従って容器内に保持される。Continuous replenishment of culture medium can be easily accomplished by supplying culture medium through hole 110. As the volume of liquid in container 8 increases, excess medium is drained through conduit 46 and pulp 8. Microcarriers and free cells in the medium do not pass through the openings of the perforated screen C and are therefore retained within the container.

微小カプセルの穴がカプセル内の細胞によって生成され
る興・味深いタンパクがカプセル膜を通過できるならば
、タンパクは培地より精製できる。この場合、これらの
タンパクの生成時期に、細胞には一度に培地が与えられ
るが、連続的に与えられ、容器から穴５８とバルブ６２
かまたは導管４６とバルブ５４を通って排出される使用
済み培地からこのタンパクが合併される。膜の孔がもし
全部または大部分のタンパクが微小カプセル内に、培養
の最後の時期に、保持されるように制御されるならばパ
ルプ３８を開け、容器の全量を雄管接続部分４０に接続
している管（図示せず）を通して合併されるのが好まし
い。タンパクは微小カプセルを破壊しそれに含まれてい
た細胞と他の成分に分離して採取する。If the holes in the microcapsules allow interesting proteins produced by the cells inside the capsule to pass through the capsule membrane, the protein can be purified from the culture medium. In this case, during the period of production of these proteins, the cells are given medium at once, but continuously, and from the container to hole 58 and valve 62.
Alternatively, the protein may be merged from spent medium that is drained through conduit 46 and valve 54. If the pores of the membrane are controlled such that all or most of the protein is retained within the microcapsules during the final period of culture, the pulp 38 is opened and the entire volume of the container is connected to the male tube connection part 40. Preferably, they are merged through a tube (not shown). The protein is collected by destroying the microcapsule and separating it into the cells and other components contained within it.

本発明はその発想と範囲に含まれる他の特定の形式をも
つ形態をも含有しうる。The invention may also include forms having other specific forms within its spirit and scope.

従って、他の実施態様も本特許請求の範囲に含まれる。Accordingly, other implementations are within the scope of the following claims.

【図面の簡単な説明】[Brief explanation of the drawing]

図１は本発明の微小担体−固定化細胞培養容器の透視お
よび部分的断面の分解部・品配列図である。 図２は図１の容器の、典型的な入口の構造を描写したカ
バーの詳細な透視図である。図３は図１の容器の、微小
担体または細胞を回収し、採収または置換のための培地
の排出および、容器内に一定量の接地を自動的に保持す
るための容器の出口部分を描写した詳細図であシ、図４
は固定化細胞を含有する、保形ゲル小球または他の成形
物作製するための装置全体の詳細図である。FIG. 1 is an exploded view of the microcarrier-immobilized cell culture vessel of the present invention in perspective and partial cross section. FIG. 2 is a detailed perspective view of the cover of the container of FIG. 1 depicting a typical inlet structure. Figure 3 depicts the outlet portion of the vessel of Figure 1 for collecting microcarriers or cells, evacuation of the medium for harvesting or replacement, and automatically maintaining a constant amount of ground within the vessel. This is the detailed diagram shown in Figure 4.
1 is a detailed view of the entire apparatus for making shape-retaining gel globules or other moldings containing immobilized cells. FIG.

Claims (1)

【特許請求の範囲】 １、培地中に入れられた動物細胞を培養するための装置
であって： 上記培地と上記動物細胞を保持するための空間を限定す
る底壁と側壁を持つ容器； 上述の容器に培養液を導入するための手段；上述の容器
の底壁に隣接した、培地と無傷の細胞の除去を行なうに
十分な大きさの第一出口を有する手段；および 上記細胞の通過を阻止するが該培地の通過を許すに十分
な大きさの開口部を有する第一多孔性手段であつて、第
二出口と上述の空間の間に位置する手段からなる装置。 ２、上述の細胞が微小担体に固定化され、上述の第一出
口が無傷な微小担体の除去に十分な大きさで上述の開口
部が上述の微小担体の通過を阻止する大きさである特許
請求の範囲第１項の装置。 ３、上述の空間から液体を排出するための第三出口のあ
る上述の容器の底壁に隣接する手段と、上述の細胞の通
過を阻止するが上述の培地は通過させるに十分な大きさ
の開口部を有する第二の多孔性手段であつて、上述の第
三出口と上述の空間の間に位置する手段より構成される
特許請求の範囲第１項の装置。 ４、上述の空間から液体を排出するための第三出口のあ
る上述の容器の底壁に隣接する手段、及び上述の微小担
体の通過を阻止するが上述の培地は通過させるに十分な
大きさの開口部のある第二多孔性手段であつて上述の第
三出口と上述の空間との間に位置する手段より構成され
る特許請求の範囲第２項の装置。 ５、上述の動物細胞と上述の培地を攪拌するための上述
の空間内にある水かき、上述の水かきを回転させる駆動
手段、及び上述の細胞または上述の微小担体の傷害を最
小限にするために上述の水かきの回転速度を調節するた
めの制御手段より構成される特許請求の範囲第１、２、
３または４項の装置。 ６、さらに、微小担体−固定化動物細胞を上述の空間に
注入するための第一入口より構成される特許請求の範囲
第１、２、３または４項の装置。 ７、さらに、動物細胞を含有する複数の保形マトリック
スを作製するための一体となつた手段と上述の空間内へ
上述の保形マトリックスを移送するための上述の第一入
口と連絡している導管手段より構成される特許請求の範
囲第６項の装置。 ８、さらに、上述の容器中の上述のマトリックスのまわ
りに膜を作製するために上述の保形マトリックスを被覆
する成分を含有する液体を上述の容器に導入する第二入
口より構成される特許請求の範囲第７項の装置。 ９、第二出口を有する上述の手段が上述の容器内の第二
出口のレベルを調節するための手段を有する特許請求の
範囲第１、２、３または４項の装置。 １０、微小担体−固定化動物細胞を形成し、上述の動物
細胞を培養する装置であつて：液体を保持するための空
間を限定する底壁と側壁のある容器；上述の容器に液体
を導入する手段； 無傷の微小担体を除去させるに十分な大きさの第一出口
を有する上述の容器の底壁に隣接する手段；分散させた
動物細胞を含有する複数の保形マトリックスを作製する
ための一体となつた手段；および上述のマトリックス作
製手段から上述の容器の中へ上述の保形マトリックスを
移送するための導管手段よりなる装置。 １１、さらに、上述の容器内の上述のマトリックスのま
わりに膜を形成するために上述の保形マトリックスを被
覆するための成分を含有する液体を上述の容器へ導入す
るための第２入口より構成される特許請求の範囲第１０
項の装置。 １２、さらに、上述の容器から液体を排出するための第
３出口を持つ上述の容器の底壁に隣接する手段、および
上述の容器に含有される微小担体の通過は阻止するが液
体は通過させるに十分なサイズの開口部を持つた多孔性
手段であつて、上述の第３出口と上述の空間の間に位置
する手段より構成される特許請求の範囲第１１項の装置
。 １３、さらに、その中に含有される液体を撹拌するため
の容器内の水かきと上述の水かきを回転させるための駆
動手段と上述の容器内にある液体に含有される微小担体
と細胞への傷害を最小にするために上述の水かきの回転
速度を調節するための制御手段より構成される特許請求
の範囲第１０項の装置。 １４、動物細胞を分散させた保形マトリックスを形成す
るための一体となつた手段が、複数の動物細胞を含有す
るゲル状物質の溶液を保持するための空間、上述の空間
と連絡する複数の導管であつてその各々が該空間の下に
配置された開口部を有する導管、上述の導管を通してゲ
ル状物質を押出すための手段、該ゲル状物質の流れを複
数の小滴に分離するため上述のゲル状物質の流れに干渉
させるための上述の開口部に隣接する空気の通路を持つ
手段、および上述の小滴を保形マトリックスに変換させ
るためのゲル状溶液を保持する貯蔵器からなる特許請求
の範囲第１０項の装置。 １５、さらに、上述の容器内の上述のマトリックスのま
わりに膜を形成するために上述の保形マトリックスを被
覆するための成分を含有する液体を上述の容器に導入す
るための第２の入口より構成される特許請求の範囲第１
４項の装置。 １６、さらに、上述の容器から液体を排出するための第
３出口のある上述の容器の底壁に隣接した手段、および
上述の容器に含有する微小担体の通過は阻止するが液体
は通過させるに十分な大きさの開口部のある多孔性手段
であつて第３の出口と上述の空間との間に位置する手段
より構成される特許請求の範囲第１４項の装置。 １７、その中に含有される動物細胞培養物を攪拌するた
めの水かきを持つた動物細胞を培養するための容器であ
つて、その中に含有される細胞または微小担体への傷害
を最小にするために上述の水かきの回転速度を調節する
ための手段からなる改良容器。 １８、調節のための上述の手段が、少なくとも１分間に
渡つて除々に上述の水かきを加速していくための電気モ
ーター駆動制御器より構成される特許請求の範囲第１７
項の容器。[Claims] 1. An apparatus for culturing animal cells placed in a medium, comprising: a container having a bottom wall and side walls defining a space for holding the medium and the animal cells; means for introducing the culture medium into the vessel; means having a first outlet adjacent to the bottom wall of said vessel and of sufficient size to effect the removal of the medium and intact cells; and means for introducing said cells into said vessel; A device comprising a first porous means having an opening large enough to block but allow passage of said medium, said means being located between said second outlet and said space. 2. A patent in which the above-mentioned cells are immobilized on microcarriers, the above-mentioned first outlet is large enough to remove intact microcarriers, and the above-mentioned opening is large enough to prevent passage of the above-mentioned microcarriers. Apparatus according to claim 1. 3. means adjacent to the bottom wall of said container with a third outlet for draining liquid from said space and of sufficient size to prevent the passage of said cells but to allow said medium to pass through; 2. The device of claim 1, comprising a second porous means having an opening and located between said third outlet and said space. 4. means adjacent to the bottom wall of said container with a third outlet for draining liquid from said space, and of sufficient size to prevent the passage of said microcarriers but to allow said medium to pass through; 3. The apparatus of claim 2, comprising a second porous means having an opening located between said third outlet and said space. 5. A web within the space for stirring the animal cells and the medium, a driving means for rotating the web, and a mechanism for minimizing damage to the cells or microcarriers. Claims 1, 2, and 3 are comprised of control means for adjusting the rotational speed of the above-mentioned web.
Apparatus according to paragraph 3 or 4. 6. The device according to claim 1, 2, 3 or 4, further comprising a first inlet for injecting the microcarrier-immobilized animal cells into the above-mentioned space. 7. further integrated means for producing a plurality of shape-retaining matrices containing animal cells and in communication with said first inlet for transferring said shape-retaining matrices into said space; 7. The apparatus of claim 6 comprising conduit means. 8. Claim further comprising a second inlet for introducing into said container a liquid containing a component for coating said shape-retaining matrix to create a membrane around said matrix in said container. Equipment within the scope of item 7. 9. A device according to claim 1, 2, 3 or 4, wherein said means having a second outlet comprises means for adjusting the level of said second outlet within said container. 10. Microcarrier - A device for forming immobilized animal cells and culturing the above-mentioned animal cells, comprising: a container with a bottom wall and side walls defining a space for holding a liquid; introducing a liquid into the above-mentioned container; means for producing a plurality of shape-retaining matrices containing dispersed animal cells; and conduit means for transferring the above-mentioned shape-retaining matrix from the above-mentioned matrix production means into the above-mentioned container. 11. further comprising a second inlet for introducing into said container a liquid containing a component for coating said shape-retaining matrix to form a film around said matrix in said container; Claim No. 10
Section equipment. 12. furthermore, means adjacent to the bottom wall of said container having a third outlet for draining liquid from said container, and preventing passage of microcarriers contained in said container but allowing liquid to pass through; 12. The device of claim 11, comprising porous means having an opening of sufficient size to allow the device to be located between said third outlet and said space. 13. Furthermore, a web in the container for stirring the liquid contained therein, a driving means for rotating the web, and damage to microcarriers and cells contained in the liquid in the container. 11. The apparatus of claim 10, further comprising control means for adjusting the rotational speed of said web to minimize the rotational speed of said web. 14. An integrated means for forming a shape-retaining matrix in which animal cells are dispersed includes a space for holding a solution of a gel-like substance containing a plurality of animal cells, and a plurality of spaces communicating with the above-mentioned spaces. a conduit, each having an opening disposed below the space, means for forcing a gel-like substance through said conduit, and for separating the flow of said gel-like substance into a plurality of droplets; means having an air passage adjacent to said opening for interfering with the flow of said gel-like material, and a reservoir for holding a gel-like solution for converting said droplets into a shape-retaining matrix. Apparatus according to claim 10. 15. furthermore, through a second inlet for introducing into said container a liquid containing a component for coating said shape-retaining matrix to form a film around said matrix in said container; Claim 1 consisting of:
Apparatus in Section 4. 16. Furthermore, means adjacent to the bottom wall of said container having a third outlet for discharging liquid from said container, and means for preventing the passage of microcarriers contained in said container but allowing liquid to pass through; 15. The device of claim 14, comprising porous means with an opening of sufficient size, the means being located between the third outlet and said space. 17. A container for culturing animal cells with webs for stirring the animal cell culture contained therein, minimizing damage to the cells or microcarriers contained therein. An improved vessel comprising means for adjusting the rotational speed of the web as described above. 18. Claim 17, wherein said means for adjustment comprises an electric motor drive controller for gradually accelerating said web over a period of at least one minute.
term container.