JPS6067426A - Low-toxic carcinostatic agent and its preparation - Google Patents

Abstract

PURPOSE:To provide a carcinostatic agent having low toxicity and excellent carcinostatic effect, by bonding a carcinostatic substance to a divinyl ether- maleic anhydride copolymer having a specific molecular weight, and using the bonded product as an active component. CONSTITUTION:The objective carcinostatic agent contains 5-40wt% active component comprising the polymeric compound of formula I (R is residue capable of giving carcinostatic activity, e.g. the group of formula II, etc.; n is a number corresponding to the molecular weight of 2,000-15,000 of the divinyl ether- maleic anhydride copolymer bonded to R) and its salt. The agent has excellent slow-releasing property and low toxicity, and furthermore, excellent casrcinostatic effect compared with the single use of the carcinostatic substance, by the synergistic effect with the copolymer having carcinostatic activity by itself. The compound of formula I can be prepared by reacting the copolymer of formula IIIwith a carcinostatic substance (e.g. 5-fluorouridine) in an organic solvent such as N-methylpyrrolidone in the presence of a catalyst such as triethylamine, hydrolyzing the reaction product, and if necessary, converting to a salt.

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規な制ガン剤及びその製造方法に関し、−さ
らに詳しくは特定の分子量を有するジビニルエーテル−
無水マレイン酸共重合体に、制ガン活性物質を結合させ
たものを活性成分として成る、低ｊ８性かつ制ガン効果
に優れた制ガン剤及びその製１告力法に関するものであ
る。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION The present invention relates to a novel anticancer agent and a method for producing the same, and more particularly to a divinyl ether having a specific molecular weight.
The present invention relates to an anticancer agent with low j8 properties and excellent anticancer effect, which is composed of a maleic anhydride copolymer bound to an anticancer active substance, and a method for producing the same.

近年、優わた制ガン効果を有する物質として５−フルオ
ロウリジンやｌ−β−Ｄ−アラビノフラノ／ルントノン
のような核酸誘導体、あるいはアドリアマイシンやダウ
ンマイシンのようなアントラザイクリン系抗生物質など
が見出されている。In recent years, nucleic acid derivatives such as 5-fluorouridine and l-β-D-arabinofurano/lunthonone, and anthrazycline antibiotics such as adriamycin and downmycin have been discovered as substances with excellent anticancer effects. ing.

しかしながら、これらの制ガン活性物質は、優れた制ガ
ン効果を有すると同時に、正常細胞に対しても強い毒性
を示す欠点を有し、したがってその使用に除しては、副
作用に対して十二分な注意が必要でアバそのため少量づ
つ多数回投与するなど煩雑な方法がとられている。However, while these cancer-fighting active substances have excellent cancer-fighting effects, they also have the drawback of being highly toxic to normal cells. Therefore, complicated methods such as administering small doses multiple times are used.

ところで、前記のような低分子化合物である制ガン活性
ｌ吻質を高分子化合物に結合させた場合、該制ガン活性
物質は体内で徐々に放出されてその濃度が一定に保たれ
、１庭そのものの体内分布が変り、毒性が軽減されて制
ガン効果が高まることが期待される。By the way, when the above-mentioned low-molecular-weight compound with anti-cancer activity is bonded to a high-molecular compound, the anti-cancer active substance is gradually released in the body and its concentration is kept constant. It is expected that the distribution of the substance in the body will change, reducing its toxicity and increasing its anticancer effect.

本発明者らは、このような事情に鑑み、活性水素を有す
る制ガン活性物質を結合させる高分子化合物について鋭
意研究を重ねた結果、ある特定の分子量を有するジビニ
ルエーテル−無水マレイン酸共重合体は、それ自体優れ
た制ガン効果を有し、かつ毒性が極めて低く、また分子
中に多数の酸無水物構造を有しているため、活性水素を
もつ制ガン活性物質と容易に反応し、しかもこの反応物
は温和な条件下で前記制ガン活性物質を徐々に放出する
など、該制ガン活性物質の担体として極めて優れている
ことを見出し、この知見に基づいて本発明を完成するに
至った。In view of these circumstances, the present inventors have conducted intensive research on polymer compounds that bind anticancer active substances having active hydrogen, and have found that a divinyl ether-maleic anhydride copolymer having a specific molecular weight has been developed. has an excellent anticancer effect in itself, has extremely low toxicity, and has many acid anhydride structures in its molecule, so it easily reacts with anticancer active substances that have active hydrogen. Moreover, it was discovered that this reaction product gradually releases the anti-cancer active substance under mild conditions, and is extremely excellent as a carrier for the anti-cancer active substance.Based on this knowledge, the present invention was completed. Ta.

すなわち、本発明は、一般式 （式中のＲは制ガン活性を与える残基、ｎはＲと結合す
るジビニルエーテル−無水マレイン酸共重合体の分子量
２　、０００〜１５，０００に相当する値でろる） で示される高分子化合物及びその薬理的に許容しつる塩
類を活性成分として成る制ガン剤、及び有機溶媒の存在
下、分子ｚ２．ｏｏｏ〜１５，０００を有するジビニル
エーテル−無水マレイン酸共重合体に、活性水素を有す
る制ガン活性物質を反応させだのち加水分解し、次いで
所望に応じ塩に変えることを特徴とする、前記一般式（
１）で示される制ガン剤及びその塩類の製造方法を提供
するものである。That is, the present invention is based on the general formula (where R is a residue imparting anticancer activity, and n is a value corresponding to the molecular weight of the divinyl ether-maleic anhydride copolymer bonded to R, 2,000 to 15,000). Molecule z2. The above-mentioned general method is characterized in that a divinyl ether-maleic anhydride copolymer having a molecular weight of 15,000 to 15,000 is reacted with an anticancer active substance having active hydrogen, and then hydrolyzed and then converted into a salt as desired. formula(
The present invention provides a method for producing the anticancer agent and its salts shown in 1).

本発明に用いるジビニルエーテル−無水マレイン酸共重
合体は、次の式 ％式％ （式中のｎは該共重合体の分子量２，０００〜１５，０
００に相当する値である） で示される分子量が２．０００〜１５，０００の範囲の
ものであって、ジビニルエーテルと無水マレイン酸とを
公知の方法に従って共重合させることにょｐ得られる。The divinyl ether-maleic anhydride copolymer used in the present invention has the following formula % formula % (in the formula, n is the molecular weight of the copolymer 2,000 to 15,0
It has a molecular weight in the range of 2.000 to 15,000, and can be obtained by copolymerizing divinyl ether and maleic anhydride according to a known method.

このジビニルエーテル−無水マレイン酸共重合体は制ガ
ン活性、抗菌性、インターフェロン誘発能などの種々の
活性を有しているが、その分子量が２　、０００未満の
ものは前記活性が低く、その上納金した制ガン活性物質
の徐放性に問題がラシ、一方１５，０００を超えると毒
性が強くなって好ましくない。This divinyl ether-maleic anhydride copolymer has various activities such as anticancer activity, antibacterial activity, and interferon-inducing ability, but those with a molecular weight of less than 2,000 have low activities, and There are many problems with the sustained release of the paid anticancer active substance, and on the other hand, if it exceeds 15,000, it becomes undesirably toxic.

丑だ、前記共重合体は、その分子中に多数の酸無水物構
造を有しているた板氷酸基、アミノ基、メルカプト基な
どの活性水素を有する制ガン活性物質と容易に反応して
、それぞれエステル結合、アミド結合、チオエステル結
合を形成しつる。Unfortunately, the copolymer has many acid anhydride structures in its molecule and easily reacts with anticancer active substances that have active hydrogen such as acid groups, amino groups, and mercapto groups. They form ester bonds, amide bonds, and thioester bonds, respectively.

本発明に用いられる制ガン活性物質としては、例えば水
酸基を含有するものとして、５−フルオロウリ７ン、ア
ミン基を含有するものとして、１−β−Ｄ−アラビノフ
ラノシルシトシン、アドリアマイシンやダウンマイシン
のようなアントラサイクリン系抗生′吻質などが挙げら
れる。前記一般式（＋）におけるこれらの制ガン活性物
質の残基■（を次に示す。Examples of anticancer active substances used in the present invention include those containing a hydroxyl group, such as 5-fluorourinine, and those containing an amine group, such as 1-β-D-arabinofuranosylcytosine, adriamycin, and downmycin. Examples include anthracycline antibiotics such as. The residue () of these anticancer active substances in the general formula (+) is shown below.

Ｒ’＝　ｃａ３　ダウノマイシン残基 不発明の制ガン剤は、例えばＮ−メチルビロリド７など
の有機溶媒、トリエチルアミンなどの触媒の存在下、ジ
ビニルエーテル−無水マレイン酸共重合体と前記の制ガ
ン活性物質とを反応させたのち加水分解し、次いでイオ
ン交換樹脂や限外ろ過膜などを用いて目的物以外のもの
を取り除いたのち、凍結乾燥などを行うことによって得
られる。R' = ca3 daunomycin residue The uninvented anticancer agent is obtained by reacting a divinyl ether-maleic anhydride copolymer with the above-mentioned anticancer active substance in the presence of an organic solvent such as N-methylpyrolide 7 and a catalyst such as triethylamine. After that, it is hydrolyzed, then anything other than the target substance is removed using an ion exchange resin or an ultrafiltration membrane, and then it is obtained by freeze-drying or the like.

１だ、所望に応じ、前記の加水分解後、薬理的に許容し
うる塩、例えばナトリウム塩、カリウム塩、カル／ラム
塩、マグネシウム塩などに変えたのち、限外ろ過、凍結
乾燥などを行い、塩として取り出してもよい。1. If desired, after the above-mentioned hydrolysis, after changing to a pharmacologically acceptable salt, such as sodium salt, potassium salt, Cal/Rum salt, magnesium salt, etc., perform ultrafiltration, freeze-drying, etc. , may be taken out as salt.

このようにして得られた制ガン剤中の制ガン活性物質の
含有敏は、好ましくは５〜４０重量係重量囲である。The content of the anticancer active substance in the anticancer agent thus obtained is preferably in the range of 5 to 40% by weight.

本発明の制ガン剤における制ガン活性物質の徐放性につ
いては、例えばアドリアマイシンとジビニルエーテル−
無水マレイン酸共重合体との結合物の場合、試験管内の
０．１規定、ｐＨ７，２１Ｊン酸２週間で約２０％であ
った。また１−β−Ｄ−アラビノフラノシルシトシンと
該共重合体との結合物の場合、試験管内の生理食塩水溶
液中における制ガン活性物質の放出速度は、１週間で５
０％程度であった。Regarding the sustained release of the anticancer active substance in the anticancer agent of the present invention, for example, adriamycin and divinyl ether
In the case of the conjugate with maleic anhydride copolymer, the concentration was about 20% in a test tube at 0.1 N, pH 7, and 21 J acid for 2 weeks. In addition, in the case of a conjugate of 1-β-D-arabinofuranosylcytosine and the copolymer, the release rate of the anticancer active substance in a physiological saline solution in a test tube was 5% per week.
It was about 0%.

さらに、ｐ３８８白血病の雄のＣＤＦ　ｊマウスを用い
た制ガン効果については、例えばアドリアマイシンと該
共重合体との結合物では最高延命率５７０チ（６０日生
存５／６）、アトリアマイノン単独では同８５係（６０
日生存Ｏ／６）であり、１−β−り一アラビノフラノ／
ルシトシンと該共重合体との結合物では最高延命率１２
５％、１−β−Ｄ−アラビノフラノシルシトシン単独で
は同１０％であったＯ このように、本発明の制ガン剤は、制ガン活性物質の徐
放性に優れ低毒性である上に、それ自体制ガン活性をも
つ該共重合体との相乗効果によシ、該制ガン活性！吻質
を単独で用いる場合に比べて、優れた制ガン効果を有す
る。Furthermore, regarding the anticancer effect using male CDF j mice with p388 leukemia, for example, the combination of adriamycin and the copolymer had the highest survival rate of 570 chi (60-day survival 5/6), while atriamynon alone had a Section 85 (60
day survival O/6), and 1-β-ri1 arabinofurano/
The highest life extension rate for a combination of lucitosine and this copolymer is 12
5%, and 10% for 1-β-D-arabinofuranosylcytosine alone.As described above, the anticancer agent of the present invention not only has excellent sustained release properties of anticancer active substances, but also has low toxicity. Due to the synergistic effect with the copolymer, which itself has anticancer activity, the anticancer activity! It has an excellent anticancer effect compared to when the proboscis is used alone.

６　Ｉｔｒ　中ｉ　ａｌｌ　’Ｘ７．　Ｆｔｊ　＃　４
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ｃ−ＩＦ詳糸用Ｋ　ｇ見１月する。6 Itr medium i all 'X7. Ftj #4
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c-IF detailed thread K g I will look at it in January.

ｉ　：ｔ、−、、／ビニルエーテルー無水マレイ／酸共
重合体をＩ）ＩＶ’ＩＣＩｔ４Ａと略記する。i:t, -, ,/vinyl ether-male anhydride/acid copolymer is abbreviated as I)IV'ICIt4A.

実Ｍ１１例１５−フルオロウリジン−ＤＩＩＭＡ結合物 １）ＩＶＥＭＡ　（分子化７０００　）　５（’ｔｏ　
ＴｎｆをＮ−メチルピロリドン２０　ｙｎｅに溶かし、
５−フルオロウリジン１．００ｉ／及びトリエチルアミ
ンＯＡＯｍｅを加えて、室温下４０時間かき１ぜ反応さ
せた。この反応混合物を５００＋＋＋ｉ！の水中に投入
し、炭酸水素ナトリウムを加えてｐＨ８に調整したのち
、２時間放置した。次いでＩＮ塩酸を加えてｐＨ３に調
整後、ダイアフローメンブレン（ＹＭ−５）を用い限外
ろ過して未反応物、有機溶媒、塩を除いたのち、凍結乾
燥して目的物５９３ｍｇを白色粉末として得た。Actual M11 Example 15-fluorouridine-DIIMA conjugate 1) IVEMA (Molecularization 7000) 5('to
Dissolve Tnf in 20 yne of N-methylpyrrolidone,
1.00 i/ml of 5-fluorouridine and triethylamine OAOme were added, and the mixture was stirred and reacted at room temperature for 40 hours. This reaction mixture was heated to 500+++i! After adding sodium bicarbonate to adjust the pH to 8, the mixture was left to stand for 2 hours. Next, after adjusting the pH to 3 by adding IN hydrochloric acid, ultrafiltration was performed using a diaflow membrane (YM-5) to remove unreacted substances, organic solvents, and salts, and lyophilization was performed to obtain 593 mg of the target product as a white powder. Obtained.

このもののＵＶ吸収量からめた５−フルオロウリノン含
有量は３６１重敏係であった。The 5-fluorourinone content of this product was 361% based on the amount of UV absorption.

結合物 ＤＩＶＫＭＡ　（分子量７０００）　５００ｍｇをＮ−
メチ／ｌｚピロリドン２０ｍｅに溶かし、５−フルオロ
ウリジン７５ｍｇ及びトリエチルアミン０．１０＋ｎｅ
を加えて、室温下４０時間かきまぜ反応させた。Conjugate DIVKMA (molecular weight 7000) 500mg N-
Dissolved in methi/lz pyrrolidone 20me, 5-fluorouridine 75mg and triethylamine 0.10+ne
was added thereto, and the mixture was stirred and reacted at room temperature for 40 hours.

反応混合物を実施例１と同様の方法で処理して目的物４
９０　ｍ（／を得た。このものの５−フルオロウリジン
含有量は１６．１重量％であった。The reaction mixture was treated in the same manner as in Example 1 to obtain the desired product 4.
90 m(/) was obtained. The 5-fluorouridine content of this was 16.1% by weight.

ＤＩＶＫＭＡ　（分子量７０００　）　５００　ｍ’ｊ
をＮ−メチルピロリドン４０−に溶かし、１−β−Ｄ−
アラビノフラノシルシトシンｉ、ｏｏ　ｒ及びトリエチ
ルアミン０．２５ｍｅを加えて、室温下４０時間かきま
ぜ反応させた。次いで反応混合物を５００艷の水中に投
入したのち、炭酸水素ナトリウムを加えてｐＨ８に調整
後、２時間放置した。次にＩＮ塩酸を加えてｐＨをいっ
たん３付近に下げたのち、ＩＮ水酸化ナトリウム水溶液
でｐＨ５に戻し、ダイアフローメンブレン（ＹＭ−５）
を用い限外ろ過して未反応物、有機溶媒、塩を除き、凍
結乾燥して目的物９３０ｍｆを白色粉末として得だ。DIVKMA (molecular weight 7000) 500 m'j
was dissolved in N-methylpyrrolidone 40-, and 1-β-D-
Arabinofuranosylcytosine i, oo r and 0.25 me of triethylamine were added, and the mixture was stirred and reacted at room temperature for 40 hours. Next, the reaction mixture was poured into 500 liters of water, and after adjusting the pH to 8 by adding sodium hydrogen carbonate, it was left to stand for 2 hours. Next, add IN hydrochloric acid to lower the pH to around 3, then return to pH 5 with IN sodium hydroxide aqueous solution, and then use the diaflow membrane (YM-5).
The mixture was ultrafiltered to remove unreacted substances, organic solvents, and salts, and freeze-dried to obtain 930 mf of the desired product as a white powder.

このもののＮ　Ｖ吸収量からめた１−β−Ｄ−アラビノ
フラノシル／トンン含有量は３８．３重量％であった。The 1-β-D-arabinofuranosyl/ton content of this product was 38.3% by weight based on the NV absorption amount.

ＩＪＩＶＫＭＡ　（分子量７０００　）　５ｏｏ　ｍｇ
、Ｎ−メチルピロリドン４０ｍｅ、■−β−Ｄ−アラビ
ノフラノンシン）・シン１５０７ｎｇ、トリエチルアミ
７０．２５ｍ１＋を用い、実施例３と同様の方法で反応
及び後処理を行って、６５３ｍｇの目的物を得た。IJIVKMA (molecular weight 7000) 5oo mg
, N-methylpyrrolidone 40me, ■-β-D-arabinofuranonsyn) 1507 ng, and triethylamine 70.25 ml+ were reacted and post-treated in the same manner as in Example 3 to yield 653 mg of the target product. I got it.

このもののＵＶ吸収量からめた１−β−Ｄ−アラビノフ
ラノシルシトノン含有計ｉｌ″ｌ：］、５．２重喰係で
６った。The total content of 1-β-D-arabinofuranosylcytonone, calculated from the UV absorption amount, was 5.2 with a double weight ratio of 6.

実施例５　アドリアマインンーＤＩＶＦ２ＭＡ結合物Ｄ
ＩＶＦＭＡ　（分子量７０００　）　１００　ｍ’ｉを
ｌ　ｍｅの無水Ｎ−メチルピロリドンに溶解し、かきま
ぜながら８　ｍｌのＮ−メチルピロリドンに溶解させた
アドリアマイシン塩酸塩１１００Ｔｎを滴下した。次い
で触媒として５０μｔの無水トリエチルアミンを５ｍｌ
のＮ−メチルピロリドンに溶解したものを１０分間で滴
下した。反応は室温で１２時間、光を遮断した状態で行
った。反応後、無水のｎ−ヘキサンＩｔ中に激しくかき
１ぜながら反応液を滴下し、沈殿した赤い固体物を新し
い１ｔのｎ−ヘキサンで洗浄した。沈殿物を集めて再蒸
留水５０ｍｅに浮遊させ、かき捷ぜながら１重ｉ％炭酸
水素ナトリウム水溶液でｐＨ７，０に調整した。１時間
後に固形物はすべて溶解し、赤い溶液となった。次いで
未反応のアドリアマイシン及び触媒のトリエチルアミン
を除去するため、２回強陽イオン交換樹脂（ダウエック
ス）２００■を加えて１０分間かき筐せたのちろ過し、
１０ｍｅの水で洗浄した。ろ液を分子量１万の分別に相
当する限外ろ過膜（アミコン社製、ＰＭＩＯ）を用いて
再蒸留水によりろ過、洗浄した。ろ液の色が完全になく
なった時点でろ過をｉＬめ、０．２２μ孔径のミリポア
フィルタ−に通しだのち、凍結乾燥した。アトリアマイ
ノンの分解によって生じる水に不溶性のアドリアマイシ
ンは存在しなかった。凍結乾燥によって２０４ｍｆの赤
橙色の綿状固体物が得られた。Example 5 Adriamine-DIVF2MA conjugate D
100 m'i of IVFMA (molecular weight 7000) was dissolved in 1 me of anhydrous N-methylpyrrolidone, and while stirring, 1100Tn of adriamycin hydrochloride dissolved in 8 ml of N-methylpyrrolidone was added dropwise. Then, 5 ml of 50 μt of anhydrous triethylamine was added as a catalyst.
was dissolved in N-methylpyrrolidone and added dropwise over 10 minutes. The reaction was carried out at room temperature for 12 hours in the absence of light. After the reaction, the reaction solution was dropped into anhydrous n-hexane It while stirring vigorously, and the precipitated red solid was washed with fresh It of n-hexane. The precipitate was collected and suspended in 50 ml of redistilled water, and the pH was adjusted to 7.0 with a 1% aqueous sodium bicarbonate solution while stirring. After 1 hour all the solids were dissolved and a red solution was formed. Next, in order to remove unreacted adriamycin and the catalyst triethylamine, 200 μm of strong cation exchange resin (Dowex) was added twice, stirred for 10 minutes, and then filtered.
Washed with 10me water. The filtrate was filtered and washed with double-distilled water using an ultrafiltration membrane (manufactured by Amicon, PMIO) corresponding to fractionation with a molecular weight of 10,000. When the color of the filtrate completely disappeared, the filtrate was filtered for 1 liter, passed through a Millipore filter with a pore size of 0.22 μm, and then freeze-dried. There was no water-insoluble adriamycin produced by the decomposition of atriamynon. Freeze-drying yielded 204 mf of a red-orange flocculent solid.

このものは４９０ｎｍの可視部の吸収からめたＬころ％
　２９．４重ｔ％のアドリアマイシンを含んでいた。ま
た、このアドリ゛アマインンーＤＩＶＫＭＡ結合物は水
には易溶（５００１１Ｉｇ／ｍｅ）であるが、生理食塩
水には難溶であった。しかし、水に溶解させたのちでは
、生理食塩水に均一に混合することができた。また、こ
のものはＤＭＳＯ，ＤＭＦ’、　Ｎ　−メチルピロリド
ンのような極性溶媒に可溶であっｆｃ／ｒ：、ジエチル
エーテル、ｎ−ヘギサン、ベンゼンなどには不溶でセ〕
つだ。、さらに赤外吸収スペクトルは３３５０．２９４
０　、　１７２０　、　１６６０　、　１６０５．１５
８０．１５２０、】４ｏ５．１３９０　、　１２９０　
、　１２４０　。This is L roller% based on absorption in the visible region of 490 nm.
It contained 29.4 wt% adriamycin. Further, this adriamain-DIVKMA conjugate was easily soluble in water (50011 Ig/me), but poorly soluble in physiological saline. However, after dissolving in water, it could be mixed uniformly into physiological saline. In addition, this substance is soluble in polar solvents such as DMSO, DMF', and N-methylpyrrolidone, and is insoluble in fc/r:, diethyl ether, n-hegisane, benzene, etc.
One. , and the infrared absorption spectrum is 3350.294
0, 1720, 1660, 1605.15
80.1520, ]4o5.1390, 1290
, 1240.

１２１０．１１２０．１０９０．１０７０．　１，０２
０．　９５０゜８００、　７７０ｚ−’に吸収をもち、
アドリアマイシン塩酸塩に相当する吸収の他にアミド結
合（１６６０ｔ）ｎ−’）の存在が示された。またｏＴ
視　紫外部の吸収スペクトルには４８５．２９１．２５
３．２３３　ｎｍに吸収があった。1210.1120.1090.1070. 1,02
0. It has absorption at 950°800 and 770z-',
In addition to the absorption corresponding to adriamycin hydrochloride, the presence of an amide bond (1660t)n-') was demonstrated. Also oT
485.291.25 for the absorption spectrum in the visible ultraviolet region
There was absorption at 3.233 nm.

得られたアトリアマイ７ンーＤＩＶＥＭＡ結合物の赤外
吸収スペクトルを第１図Ａに、可視・紫外吸収スペクト
ルを第１図Ｂに示す。The infrared absorption spectrum and the visible and ultraviolet absorption spectra of the resulting atriamyne-DIVEMA conjugate are shown in FIG. 1A and FIG. 1B, respectively.

実施例６　アドリアマイシン−Ｄｌ：ＶＥＭＡ結合物結
合型） 実施例５　ＶＣよって得られたアドリアマインンーＤＩ
ＶＥＭＡ結合物の水溶液を凍結乾燥直前に、１重＠係炭
酸水素ナトリウム水溶液でｐＨ７，０に調整したのち、
ミリポアフィルタ−を通して凍結乾燥した。その結果、
暗赤色の綿状固体物が実施例５に対して定量的に得ら九
、そのものは実施例５の生成物より容易に水に溶けるこ
とを示した。その赤外吸収スペクトルでは１５８０ｃｒ
ｎ’　Ｋ大きな吸収が現われ、１７２０ｏｎ−’におけ
る吸収が減少した。Example 6 Adriamycin-DI: VEMA conjugate-bound type) Example 5 Adriamycin-DI obtained by VC
Immediately before freeze-drying the aqueous solution of the VEMA conjugate, the pH was adjusted to 7.0 with a monovalent aqueous sodium bicarbonate solution, and then
It was lyophilized through a Millipore filter. the result,
A dark red flocculent solid was obtained quantitatively for Example 5, indicating that it was more easily soluble in water than the Example 5 product. Its infrared absorption spectrum is 1580cr
A large n'K absorption appeared and the absorption at 1720 on-' decreased.

また、可視・紫外吸収スペクトルは変化しなかった。Furthermore, the visible and ultraviolet absorption spectra did not change.

得られた生成物の赤外吸収スペクトルを第２図に示す。The infrared absorption spectrum of the obtained product is shown in FIG.

実施例７　ア１゛リアマインンーＤＩＩＭＡ結合物実施
例５と同様にして、４０ｍ９のＤＩＶＥＭＡ　（分子Ｍ
７０００）と２０　ｍｇのアドリアマイシン塩酸塩とを
、トリエチルアミン１０μｔを触媒トシてＮ　−メチル
ピロリトノ１０ｎ：ｅ中で反応させたのち、実施例５と
全く同じ処理方法により　５８　ｍｆの赤橙色の凍結乾
燥綿状固体物を得だ。このものは、可視吸収スペクトル
により２２．４重敗％のアトリアマイノンを含むことが
分った。その赤外吸収スペクトル及び可視・紫外吸収ス
ペクトルの吸収位置は実施例５の生成物と同様であった
。Example 7 Aliamine-DIIMA conjugate In the same manner as in Example 5, 40 m9 of DIVEMA (molecule M
7000) and 20 mg of Adriamycin hydrochloride were reacted in 10n:e of N-methylpyrroliton with 10 μt of triethylamine as a catalyst, and then freeze-dried into a red-orange color of 58 mf using exactly the same treatment method as in Example 5. A flocculent solid was obtained. This material was found to contain 22.4% atriamynon by a visible absorption spectrum. The absorption positions of its infrared absorption spectrum and visible/ultraviolet absorption spectrum were similar to those of the product of Example 5.

実施例８　ダウノマイシン−ＤＩＶＫＭＡ　結合物フを
施例５と同様にして、４０■のＤＩＶＥＭＡ　（分−ｒ
−ｉｆｉ７００　’０　）と４０ｍｇのダウノマイシン
塩酸塩をト！Ｊ　ニーｆ−ルｌ　ミン２ｏμｔを触媒と
してＮ−メチルビ０１．’　と７１２ｍ１中で反応させ
たのち、実施例５と全く同じ処理方法ｒ（よ５８７　ｍ
ｇの赤橙色の綿状トす１体物を得た。このものは、可視
吸収スペクトルにより、３２．８型損傷のダウノマイシ
ンを含むことが分った。捷／こ、赤外吸収スペクトルは
３４５ｏ、２９３０．１７０５．１６６０．１６０５．
１５７０．１４０５．１３５０．１２９０．４２３０．
１２１０．１１２０．１０９０゜１０７　（１，１０４
ｆｌ、１０２０．９９０ｉ−’　に吸収をもち、可視　
紫外吸収スペクトルは４８８．２８８．２５１゜２３３
　ｎｍに吸収をもっていた。Example 8 Daunomycin-DIVKMA conjugate was prepared in the same manner as in Example 5, and 40 μm of DIVEMA (min-r
-ifi700'0) and 40mg of daunomycin hydrochloride! J N-Methyl BiOl. ' was reacted in 712 m1, followed by the same treatment method as in Example 5 (587 m1).
A reddish-orange cotton-like solid substance of g was obtained. This material was found to contain daunomycin with type 32.8 damage based on the visible absorption spectrum. The infrared absorption spectrum is 345o, 2930.1705.1660.1605.
1570.1405.1350.1290.4230.
1210.1120.1090°107 (1,104
fl, has an absorption at 1020.990i-' and is visible
The ultraviolet absorption spectrum is 488.288.251°233
It had an absorption at nm.

得られた生成物の赤外吸収スペクトルを第３図、／４　
Ｋ、可視・紫外吸収スペクトルを第３図Ｂに示す０ 実施例９　ダウノマイシン−Ｄ工ＶＥＭＡ結合物（塩型
） 実施例８で得られたダウノマイシン−Ｄ工ＩＭＡ結合物
の水溶液を１重量係炭酸水素ナトリウム水溶液でｐＨ７
，０に調整し凍結乾燥したところ、暗赤色の綿状固体物
が実施例８に対して定量的に得られ、そのものは実施例
８の生成物より水に対する溶解性が高贋ことを示した。The infrared absorption spectrum of the obtained product is shown in Figure 3, /4
K, visible and ultraviolet absorption spectra are shown in FIG. pH7 with sodium hydrogen aqueous solution
When the product was adjusted to 0 and freeze-dried, a dark red flocculent solid was quantitatively obtained for Example 8, indicating that it had higher solubility in water than the product of Example 8. .

その赤外吸収スペクトルでは１５８０ｔ１ｎ−’に大き
な吸収が現われ、１７２０ｔ＊’における吸収は減少し
た。またＯＴ視・紫外吸収スペクトルは変化しなかった
。In the infrared absorption spectrum, a large absorption appeared at 1580t1n-', and the absorption at 1720t*' decreased. Further, the OT visual and ultraviolet absorption spectra did not change.

得られだ生成物の赤外吸収スペクトルを第４図に示す。The infrared absorption spectrum of the obtained product is shown in FIG.

実施例１Ｏダウノマイシン−ＤＩＶＥＭＡ　Ｍ合物実施
例５と同様にして、４０ｍｆ／のＤＩＩＭＡ　（分子ｚ
７ｏｏｏ）と２０ｍｇのダウノマイシン塩酸塩とヲ（・
’）エチルアミン１０μｔを触媒としてＮ−メチルピロ
’Ｊ　）ンｌ　Ｏｍｅ中で反応させたのち、実施し１１
１５と′？〒ぐ同１〕処理方法によυ、５：３；７ｙの
赤澄色の株結乾燥綿状固体物を得た。このものは、可視
吸収スペクトルからめたところ、２３．５重ｔ％のグウ
ノマ・ｒシンを含んでいた。壕だ、可視・紫外吸収スペ
クトルの吸収位置は実り例８の生成物と全く同してあっ
た。Example 1 O Daunomycin-DIVEMA M Compound Similarly to Example 5, 40 mf/DIIMA (molecular z
7ooo) and 20 mg daunomycin hydrochloride and wo(・
') Using 10 μt of ethylamine as a catalyst, the reaction was carried out in N-methylpyrone (11).
15 and'? According to the treatment method (same as 1), a dry flocculent solid with a bright red color and a ratio of υ of 5:3;7y was obtained. This material contained 23.5% by weight of gynoma r-sine as determined from the visible absorption spectrum. As a matter of fact, the absorption positions in the visible and ultraviolet absorption spectra were exactly the same as those of the product of Example 8.

参考例Ｉ Ｄ工ＶＥＭＡの酸無水物構造を加水分解したポリマーを
生理食塩水に溶解し、８〜１０週令の雄のＣＤＦ１マウ
スの腹腔内に１回投与して、３０日間マウスの生死を観
察した。その結果を第１表に示す。Reference Example I A polymer obtained by hydrolyzing the acid anhydride structure of D-engineered VEMA was dissolved in physiological saline and administered once intraperitoneally to male CDF1 mice aged 8 to 10 weeks to determine whether the mice were alive or dead for 30 days. Observed. The results are shown in Table 1.

なお、マウスは１群５〜６匹で繰り返し実験を行い、Ｌ
Ｄｌｏを算出した。The experiment was repeated with 5 to 6 mice per group, and L
Dlo was calculated.

第　１　表 この表から明らかなように、分子量１，２万のＤ工ＩＭ
Ａでは著しく毒性が下ること、及び牌臓肥犬の影響が少
ないことが分った。Table 1 As is clear from this table, D-engineered IM with a molecular weight of 10,000 to 20,000
It was found that A was significantly less toxic and had less effect on splenic dogs.

参考例２ ０．１規定、ｐＨ７，２のリン酸緩衝生理食塩水（１）
ＢＳ）中におけるアトリアマイ７ン（Ａｄ）　−ＤＩＶ
ＥＭＡ結合物から嵌合物放出を検討した。Reference example 2 0.1 normal, pH 7.2 phosphate buffered saline (1)
Atriamine 7 (Ad)-DIV in BS)
The conjugate release from the EMA conjugates was investigated.

実施例５で得られたＡ　ｄ、　−ＤＩ　ＶＥＭＡ結合物
３　、２　ｍｆｊを含む］）ＢＳ　’Ｉ　Ｏｍｅを３７
℃に保ち、一定時間後１１　、１　ｌｎｅをサンプリン
グし、０．１Ｎ塩酸０．４−を加えて該結合物を沈殿さ
せ、遠心分離した上澄液のｒＪＪ視部（４９０ｎｍ）の
吸光度を測定し、Ａｄ放出量をめた。その結果を第５図
に示す。々お放出量は；３つのサンプルの平均値である
。Ad, -DI VEMA conjugate 3,2 mfj obtained in Example 5]) BS'I Ome 37
℃, sample 11,1 lne after a certain period of time, add 0.4-0.1N hydrochloric acid to precipitate the bound substance, and measure the absorbance of the rJJ visual field (490 nm) of the centrifuged supernatant. The amount of Ad released was determined. The results are shown in FIG. Each release amount is the average value of three samples.

この図から、２週間経過後、約２０％のアトリアマイ７
ンが放出されたことが分る。From this figure, after two weeks, about 20% of Atria Mai7
It can be seen that the ion was released.

参考例３ １−β−Ｄ−アラビノフラノ／ル７トシン（ＡｒａＣ）
　−ＤＩＩＭＡ結合物からのＡｒａＣ放出速度。Reference example 3 1-β-D-arabinofurano/ru7tocin (AraC)
- AraC release rate from DIIMA conjugate.

を調べるために、実施例３で得たＡｒａＣ−ＤＩＶＥＭ
Ａ結合物１　結合物音生理食塩水１　ｍｌに溶解させて
３７℃に保った。一定時間毎にサンプリングし、高速液
体クロマトグラフィーで遊離のＡｒａＣ量を測定した。In order to investigate the AraC-DIVEM obtained in Example 3,
A conjugate 1 The conjugate was dissolved in 1 ml of physiological saline and kept at 37°C. Samples were taken at regular intervals and the amount of free AraC was measured by high performance liquid chromatography.

その結果を第６図に示す。The results are shown in FIG.

この図から明らかなように、該結合物からのＡｒａＣ放
出は極めてゆっくりであり、１週間で約５０％のＡｒａ
Ｃが放出されていることが分る。As is clear from this figure, AraC release from the conjugate is extremely slow, with about 50% of AraC released in one week.
It can be seen that C is released.

参考例４ 制ガン活性物質−Ｄ工ＩＭＡ結合物の制ガン活性評価を
Ｐ３８８白血病マウスを用いて行った。Reference Example 4 The anticancer activity of the anticancer active substance-D-IMA conjugate was evaluated using P388 leukemia mice.

８〜１０週令の雄のＣＤ　Ｆ、マウスの腹腔内に１×１
０６個のＰ３８８白血病細胞を移植し、２４時間後に制
ガン活性物質−ＤＩＶＥＭＡ結合物の溶嵌合物腹腔内に
投与した。１群６匹のマウスを実験群として用い、生存
日数の中央値を対照群と比較し、次の式によシ延命率を
めた。8-10 week old male CDF, 1 x 1 intraperitoneally into mice
06 P388 leukemia cells were transplanted, and 24 hours later, a conjugate of anticancer active substance-DIVEMA conjugate was intraperitoneally administered. Six mice per group were used as the experimental group, and the median survival days were compared with the control group, and the survival rate was calculated according to the following formula.

ただし、Ｔ：治療群生存日数中央値 Ｃ；対照群治療日数中央値 また、６０日の長期生存マウスが生存する場合、その数
をめた。However, T: Median number of survival days in the treatment group C: Median number of treatment days in the control group In addition, if long-term survival mice of 60 days survived, the number was calculated.

第２表にＡｒａＣ−ＤＩＶＥＭＡ結合物の制嵌合物性を
、第３表にＡｄ−ＤＩＶＥＭＡ結合物（塩嵌合物制ガン
活性を示す。Table 2 shows the anti-mating physical properties of the AraC-DIVEMA conjugate, and Table 3 shows the anti-cancer activity of the Ad-DIVEMA conjugate (salt conjugate).

２Ｉ′４２表 ｇ）　ＤＩｖｇｍＡｏ分子ｔ：　７０００2I'42 table g) DIvgmAo molecule t: 7000

【図面の簡単な説明】[Brief explanation of drawings]

第１図Δ及びＢはそれぞれ実施例５におけるアドリアマ
イシン−Ｄ　Ｔ　ＶＥＭＡ結合物結合性吸収スペクトル
及び可視・紫外吸収スペクトル、第２図は実施例（ｊに
おけるアドリアマイシン−ＤＩＶＥＭＡ結合物（塩型）
の赤外吸収スペクトル、第３図Ａ及びＢはそれぞれ実施
例８におけるダウノマイシン−１）ＩＶＥＭＡ結合物の
赤外吸収スペクトル及び可視・紫外吸収スペクトル、第
４図は実施例９にお、けるダウノマイシン−ＤＩＶＥＭ
Ａ結合物（塩型）の赤外吸収スペクトルである。 また、第５図は０．１規定、ｐＨ７，２のリン酸緩衝生
理食塩水中におけるアトリアマイノン−ＤＴｖＥＭΔ結
合物からのアトリアマイノンの放出量と経過日数との関
係を示すグラフ、第６図は生理食塩水中ニおけるｌ−β
−１）−アラビノフラノシルントンン−１）ＩＶＥＭＡ
結合物からの１−β−Ｄ−アラビノフシノフルシトンン
の放出量と経過日数との関係を示すグラフである。 ＜Ｘ＞りぬＶｌｌ−１Figure 1 Δ and B are the adriamycin-D T VEMA conjugate binding absorption spectrum and visible/ultraviolet absorption spectra in Example 5, respectively, and Figure 2 is the adriamycin-DIVEMA conjugate (salt form) in Example (j).
3A and B are the infrared absorption spectrum and visible/ultraviolet absorption spectrum of the daunomycin-1) IVEMA conjugate in Example 8, respectively, and FIG. 4 is the daunomycin-1) IVEMA conjugate in Example 9. DIVEM
This is an infrared absorption spectrum of A-conjugate (salt type). Furthermore, FIG. 5 is a graph showing the relationship between the amount of atriamynon released from the atriamynon-DTvEMΔ conjugate and the number of days elapsed in 0.1 normal, pH 7.2 phosphate buffered saline, and FIG. is l-β in physiological saline
-1)-Arabinofuranosilton-1)IVEMA
It is a graph showing the relationship between the amount of 1-β-D-arabinofucinoflusiton released from the conjugate and the number of days elapsed. <X> Rinu Vll-1

Claims (1)

【特許請求の範囲】 １一般式 （式中のＲは制ガン活性を力える残基、ｎはＲと結合す
るジビニルエーテル−無水マレイン酸共重合体の分子ｉ
２．ｏｏｏ〜１５．０（１０に相当する整数である） で示される高分子化合物及びぞの薬理的に許容しうる塩
類を活性成分として成る低ｍ性制ガン剤。 ２　有機溶媒の存在下、分子量２，０００〜１５，００
０６゛有するジビニルエーテル−無水マレイン酸共重合
体に、活性水素を有する制ガン活性物質を反応させたの
ち加水分解し、次いで所望に応じ塩に変えることを特徴
とする、一般式 （式中のＲは制ガン活性を与える残基、ｎはＲと結合す
るジビニル−エーテル−無水マレイン酸共重合体の分子
Ｊ１２，０００〜１５　、０００に相当する整数である
） で示される低毒性制ガン剤及びその塩類の製造方法。[Claims] 1 General formula (in the formula, R is a residue that enhances anticancer activity, n is a molecule i of a divinyl ether-maleic anhydride copolymer bonded to R)
2. 1. A low-molecular-weight anticancer agent comprising a polymeric compound represented by ooo to 15.0 (an integer corresponding to 10) and its pharmacologically acceptable salts as active ingredients. 2 Molecular weight 2,000 to 15,00 in the presence of an organic solvent
A divinyl ether-maleic anhydride copolymer having the general formula (in the formula R is a residue that imparts anticancer activity, and n is an integer corresponding to J12,000 to J15,000 of the molecule of the divinyl-ether-maleic anhydride copolymer bonded to R. Method of manufacturing salts.