JPS6058554A - 液体テスト試料中のアナライト検出のための改善された多層テスト装置 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は液体テスト試料中のアナライト検出のための頃
合された多ノヒテストｒ、−関する。

生物流体中の臨床的に閑心のある椋々のノ戊分の伏出お
よびｕｌｌＪ定に対して偵々のタイツの化字分併か１史
用さγしている。こｌ（ら分析はジオｌ　ＶＣ’をニー
ＥＫツエット化学およびトシイ化芋として標Ｒ練威さｎ
る２の刀アコｌ／−ｉ’Ｌわけつれる。ウェット化４分
ター「は液体浴液のルの試栄を１丈用し。

でして子動的および１動分＋７１．−りの１１１す刀で
広（使用されている。ドライ化乎分りＩＱよ夫誓目′す
ｅ（［〕・で触ｎで４ｉ味している」テスト表１ｄ中で
餓梨を使用１゛る。両りイグの分析はそ７″ｌでれのイ
リ点ｒ市しているけＦξども、往々にしてトライ化’４
１法は七のデザインにおいてより１ｌｉｉ　’＋−’で
己りり、より少い絨楽Ｉ＋ｙ、抜を委３（シより胚ヤか
／よ荀米を与えそしてより安定である。多（θトフイ化
′ｆｌ法は生吻学的ｆＪｒＬ体中の測定１べざ化せ吻で
あるアナライトのある鵬展にメ」了るでの双応ｅ（おい
て。

定性的でしかない％或は最良でも手足量的でしυ・ない
といプ不、＋Ｉｌ／よ点を市している。

定量的起未を与えうるいくつかのドライ化学テスト装置
〃・ｉ己載さ才（ている。木−動杆第４ρ４２β６５号
明！−中には赦捧り分夕１用の多ノ曽装随が記載されて
いる。このｓｂｔＭは（１ノ前以って定められたアナラ
イトの存仕上にオ０互反応して拡舷性恢出性成分乞与え
うる組Ｊ戎吻を包含する臥桑層および（２）その徴用性
成分に対して后遍性リヤしてその中ででの様な紙分を検
出しつる秋水層馨包含し℃いる。こりエレメントは放射
ブロック用のセしてアストか（科の均一な分散りための
その他の層を包含し５る。このテスト装置は生物流体の
定二緬的またＱよ定注的分伯に使用ツることかできる。

しかしこのテスト装置の操作口」撓性は廠しく限定され
ている。一度＃ｌヤトが廟用されたならば、種々の屑を
通しての拡散による制御不能な工程が化ターゐ。こり仏
以を矩ツ１咋−３−るテ訳は与えらｘしてい７よい。

木−分ムｊ−第４，１４４，３０６カーリｊ細−に（・
よ同僚り多層テス１゛裟瀘が囲示さｉＬ又いΦ。こりナ
スト表匝は兄投化乎分伯ＶＣ＋史ハ］ラクことがでひる
。こりノ寵は間乞駈して筺直さセ０ことρＡでごる。１
スト無料珈川は匈に圧さくカミ）Ｊ口えてひＩＣ”Ｉ＝
乞ｔ］ＩＪ以ってガムさセフこｌしに仏触ｃ−ｃるごと
かできる。

このテスト殻匝は試イ４τ急１１」シてし−ＬＩ　Ｊ＋
２を懐１誌させ７゛こ後のへｄン塵しての′ノ′プーン
・１１・ま７こは−（ソよの少励ＶＣ対して瓶飾ン与え
／よい。

木−特許第６，７２６．Ｕ６４号明Ｋ１ヰ１にはアソー
ライトの磁度を定量的にｇ＋＋ｊ定する７このの、アナ
ライトと反応してｂ的望紙寸勿馨生１ｊＡご−ビる１已
序１．偶′；τ會授びセた第一または賞分胎、弔−によ
ひ第二の）山を“分離している多すし在族ン進し又口的
生成吻馨引ぎこむための第二または仏運鳩４ｄよびその
目的生成物と反応して、Ｊ曽１で生成され七してノ曽６
に：ｌ：ｌＪｍした目的生ｈｇ吻の存在の視覚的畑示を
与えることのできる試薬を含反させた第３の筐たはイン
ティケータ一層を包含している。

このインディケータ一層ハ、剥に１トさせてテストの永
久記載を与えるべく保存ラ−る様に適応させることかで
さる。第一および第二池・の間に置がれた多孔性膜はア
ナライトの娘反ｅζよって目的生成物の通過をＵＪ龍７
よらしめる、異った：［２ｆ過牲の領域を有する。多孔
性膜を通しての流体の通過は単に７ナフイトのＱ夏の函
数であり、そしてそれ以俊は制イ却口Ｊ　ｈｅではない
。

本国特許第４，２５８，００１号明細告は直接し１．体
接触における少（とも２の＝癩性蛍域を含刹゛する液体
中の物質の分り丁のための多ｒＨｊ域エレメントを記載
している。試料逸用波の帝〕人間の吻１斗の拡散を制何
ｊｊるための手段は与えられていない。

本国特許第４ｙ１６６．０９３芳明釉）ゴは多孔性放射
ブロックノ普と放射送廟性航菌ノ會の＋１４Ｊに直がｌ
（た放射透過性、挾出性′吻買秒１コ１訂古）冑を色羽
する液体分析用エレメントを記載して（・句。−３へて
の６の増は１殉心あるＩナライトｆ（刈し１坊］へ１」
ユである。移行阻害ノｗは乎に４＊出性１勿Ｒ↓かてこ
では七れが非伎出性とＬる放痢ノロソタノ曽ｅ（逆に移
動し′Ｃ行くことを低）さセるだけである。即ちそれは
一力［ｐ」バルブとして４糞症する。

ヨーロッパ１寸肝出惠県第４６．υ１．Ｊ４カリＪｉ州
簀は死投４的組甘せの因子の測定用の非りロマトグラフ
ィー的アソセー装置を記載している。この装ａは少（と
も２の和暦、即す欣トド父人しＪ恍にめる兄投収后市域
および液体ｖく収イ６・柩より７よっている。シグナル
生Ｊ戊糸の成分が十Ｉ曽〃・ら上）曽に移″ｒ′ｆ″′
ｆるのを１５ｆ１１′Ｊ−る障妬ｆ孔１す、・として１
初く迅ツカ」り鳩乞包百さセることかできる。こり障壁
ｔよ化り２的またはｒＭ、素的障壁であってその構造的
一体性はアツセ一工程では妨害されない。

ヨーロッパ特許出願第６６．６４８号明細書は競争免疫
反応が特定成分の検出に対して使用されているドライ化
学多層分析エレメントを記載している。このノーの−は
タイミング層であって、その機能は試料溶液を反応層中
に、試料と検出試薬の完全な反応を可能ならしめるに充
分な時間の間保携さぜることである。このタイミング層
は典型的にはＭ８体物質好ましくはゼラチンより構成さ
れている。それは液体流れに対するオール・オワ・ナン
（ａ：ｕ−ｏｒ−ｎｏｎ）障壁としては機能ぜす、単に
その流速を制御するのみである。

前記多層テスト装置は共通の欠陥を有している。テスト
試料が一度適用されたならば、アナライト試薬および反
応生成物の移杓は非制御的となるということである。移
動能ならびに移動速度は装置の構造の函数である。そこ
には（４）その特定の層中での反応時間を上昇させる目
的のための装置の前身って選ばれたＪ９中での特定の成
分の移動を停止させるための、ぞして（２）次の層への
移動を再び開始でせるための方法はない。

−またはそれ以上の層が、一度テスト試料を適用した後
に、層を通してのアナライトおよび／または試薬の移動
を停止捷だはり１］始させる手段を与える様な化学分析
に対する多１曽テスト］（置に対するをが存在している
。

この要求はテスト液体中のアナライトの分析のための改
善された多層テスト装置である不発りＪによって実質的
尺度で満足される。この数音された装置は化学的に不活
性な液体平俗性多孔性Ｆｉ’、１膜を包含する、そして
その孔が、アツセー幅）ＬでＣ１液体非透過性であるが
しかし加熱きれた場合には溶融しうる、それによって前
ａ己ｆ叔１花層の１０」に速やか１よ＃、体猛絖を与え
る熱感受性吻貿で充填されている障壁ノ曽により分所り
さ才した少（とも２の准９＋−透過性伝舵ｌ曽を仮言し
ている。

Ａ、一般 不発りｊり多層装置に２４１のタイプの層、即ち機能層
と障壁層の組付せよりなっている。谷装置は少くとも２
０機能）曽と少（とも−の障壁層を含有している。

障ｉｉ層を使用して物理的Ｋ　２の機１ｆｂ層を分離さ
せそして熱が障壁層に適用されるまでそれらの間の液体
接続を阻止させる。障壁層の最初の禍造的−悼性はυ）
Ｃ体ｆＡすれに幻する初期非透過性を与える。しかし熱
の通用および七の結呆の障壁層の栴迫的−不性Ｖ仮壊俵
には液体接続が磯雇増の間に４えられる。

Ｂ−機ｉ４式ノー日Ｖ 機能Ｎは仄の即ち分散、分離、反応、検出。

いんぺい２よび培賛の俵Ｐと−Ｊ）１またｔよそχＬ以
上馨米しうる。障壁層ＶＣより分ｙ３ｉＬさ、１１、た
少くともンりその４〉」【な崩を不発１シ」すｊ髪直中
に存佳さぜる。

追〃口の風壁ノ曽をイ史用して、または七れ／よしで、
これら伝屈層の２−Ｊ、たはぞスを以上の什々の帆汀セ
を構ノ戊さセることかできる。

種々の機能層の横送および模ｈｔは、こと（（ｍ蓚照と
して包含されているオクＬ！！ｌ瞥許第４，１４４．３
　［１６号明紬畳中に広（教示さ才１ている。

反応機能Ｍはテスト試料成分と相互反応させるための試
薬を會イ〕している。前身つ又定めた時間（拡散Ｖｃよ
り与えられるものユリ人）の１１４１の反応ノｙ中での
試ダ４の陪食は］−１，・病ｆ＝　ｔｖｊ中の燕Ａ％％
受性吻質Ｖ（メＪし−（上当１１ＣＩＩ！３’　ｌｆｌ
を１１つて然を適用りることＱこよって制御することか
できる。反ＬＣ）崩は往々にして他の磯月已ノ曽と組せ
セて１丈用さ才ｊる。

例えば紙・系イムノアツセーは反応Ｍ’ｉ中にＪラージ
イト−酵素または抗体−酵素ｉンジュゲートが存在する
。ことを賛求する。テスト試料を適用すると、アナライ
ト−酵素コンジュゲート（ここでは可溶性試薬）Ｒよび
テスト試料からの遊離アナライトが混合しそして不動化
抗アナライト抗体上の混付郡位に対して競合する。熱を
適用すると流体は次のノ曽中に流れそれによって遊離お
よび結合アナライトまたは＃素−アナライトの分離を行
わせる。即ち第一機能層は原則として反応および分層機
能の両方なＩｉｉ合せている。

この例においては、それに続く贋はそれの中に透焉する
アナライト−酵素コンシュケートｉ。

検出のための試薬を有する反応および検出層としても働
く分散層でありうる。機能層中の試薬はｈ」浴外または
不動化されたものでありうる。

検出Ｎ（時には衣示層として参照される）はアナライト
の検出のための終極Ｗとして冑く。

検出層は刀１ｊ（面の１鈎でありうるし、または文才（
は反応または培養層と組−＠　、４ｚ、ることかで゛ぎ
る。でれは検出可能なシグナル生ｌ戊のために火・軟な
試娠を含有しうるしまたはそれはシフナルを跋縮させる
似に慟くことができる。検出層ね、またシールド１残症
を呆しうる。進常はその装置のＪ長も底のイ汐Ｎヒ層で
ある検出層は永久的にナスト装パに１１！！！足された
ものでありうるしまたｔよこハは装置から剥府注可能で
ありうる。それが剥紐男りとである場合には、それはテ
スト結果の水入記録として働ぎうる。この検出を六は］
〜スト試料成分（例えば減血琢）の視覚的＃ｉ祭または
「Ｙ糸またはその他の化学反応生成物の視覚的または欽
椅検出を包なしうる。その’ＩＩ！ｉの検出スキームと
しては縦果したラテックス粒子または刹色顔料程子のン
ール÷＾ｈ、ピＪ−ｂシＴｎｔ’ｌｉ”、□、シイーー
ー１＋、＝＋１＋−＋−＝−１：−−−＋。

の機器手段が醇素的反、応の生成物、アナライトまたは
アナライトの種々の反応生成物の検出に対して存在して
いる。往々にして光学的にまたは反射光測定的に測定し
うる色が生成する。生成物はそれらの光散乱性によって
濁度計または比濁技術を使用して測定することができる
。螢光生成物は視覚的にまたは機器の使用によって容易
に検出させることができる。検出層はまた電気化学的手
段による生成物の測定をも与えうる。イオン感受性電極
を使用することができ。

そしてこれはイオン性のものの測定に対して当技術では
周知である。Ｈ２Ｏ２の様なものの検出および適当な試
薬と反応させた場合ＫＨ２０２を生成させうる広範な種
々のアナライトの検出に対しては電流滴定検出機を使用
しうる。

存在させる場合の分散層は、いくつかの目的に働きうる
。それは試料流体をテスト装置の表面全体に均一に分散
させる。それは、その厚さによって吸収された試料流体
の６量を決定する。

そしてそれはアナライトを濃縮させそして１＞ＩＩ害害
物物質除去する様に機能（〜うる。種々の紙および重合
体物質がこの分散Ｈすの成形成用に適尚である。

分離機能層はテスト実施の間試薬および／またはアナラ
イトを分離させるｔｌ　Ｋ　＆ｉｒ　＜。分離層の一例
は物質多分蛋白質をテスト試料からそわらの分子量に基
いて分離させる分離物質である、制御された孔サイズ排
除ゲル層である。その他の例は抗原または抗体にそ）１
ぞれ結合する不動化抗体または抗原を有する分１Ｍ層の
使用である。

障壁層が破かいされた後これら結合された分子は試料中
の他の成分から分離さねそしてこわはそわに続（層中に
移行しうる。

存在させる場合の培養層は保持帯域として機能する。そ
れは更に不動化または可溶性試薬を含有しうるがその場
合それは反応層としても働（。培養層はまた余剰の液体
に対するレザボアとしても機能しつる。

存在させる場合のシールド層は電磁放射をＦ遍させる様
に働く。最もひんばんにはこの機能は支持体またはベー
ス中ＫＡ体化されており。

そして別の層は構成しない。

Ｃ１障壁層 障壁層は物理的に２の機能層を分離させそしてそれに熱
が適用されるまでそれらの間の流体接続を阻止させる様
に働く。

理想的には障壁層は流体流わに対してオール・オワナン
障壁として作用すべきである。一般に室温であるアツセ
一温度においては１分離された機能層の間には流体接続
はあるべきではないがその溶融状態にあっては障害のな
い接続が存在すべきである。従って一度熱が適用された
場合には障壁層の透過性は速やかに上昇することが望ま
しい。

本発明の障壁層は化学的に不活性な液体不溶性多孔性隔
膜から製造されており、その孔にはアツセ一温度におい
ては液体非透過性であるがしかしアツセー流度以上に加
熱された場合には溶融しうる熱感受性ｑＩ／）質で充積
されている。溶融工程はその他の現象例えばその物質中
の物ｊ！目的変化を生成させて孔の開放を導き３ｉＬ体
を流牙］させる傾向のある溶媒加および膨潤を包含しう
る。実際問題として、障壁層は温度の少（とも約５℃の
上昇が溶融に対して要求される仔にデザインされている
。少（とも約１０℃の士別が好ましい。要求される熱の
正確な量は障壁層の厳密な性質ならびにアツセー物質の
制約に依存する。

濾過用材料が一般に最も有用であるがしかしこれが隔膜
用に使用しうる絶対的に唯一のタイプの材料ではない。

これらタイプの物質は一般に良好に定義された流れ特性
を有しており、そして低い非特異的結合性を有している
。炉端材料はまた容易に入手可能である。更に、孔部が
一度開いたならば、そのフィルのふるいわけ済過性をあ
る場合には有利ｒ（使用して阻害的テスト物質を除去し
そして／または例えばイムノアアツセー適用において一
出会う様な遊離および結合物質を分離させることができ
る。

特定的には有用であることの見出された４のタイプのフ
ィルター支持マトリックスが存在している。最も簡単な
タイプは例えばナイロン。

合成ポリエステルおよび天然ｆＪ＆、維布の様な網様の
または織った材料より構成されている。これら物質は一
般に高い強度および５０〜１０００μの大なる孔サイズ
を有していて大なる細胞および粒状固体相試桑の通過を
ｏＪ能ならしめる。

使用しうる第ンのタイプの孔性マトリックスは「テブス
フイルター」である。これらは不規則配列繊維よυ作ら
れた繊維性シートまたはマットから構成されている。こ
れらのタイプの物ηは商い表面積を与えそして１０μま
での大粒子を抽えることにおいて有用な、曲りくねった
通路を与える。七の様な支持体は））ラス、紙１毛、絹
、羊毛、ヘンブ、ジュート、麻、金顔、ナイロン、ポリ
エステル、セルロースアセテート。

石英およびゴム物りの４１　維から（１１・成されてい
る。

第６のタイプのマトリックスは非常に複雑な胎放コロイ
ドタイブイ杓造をイｊりる微細孔性膜フィルターである
。これらはｌｌ中々のコロイド重合体フィルムから作ら
ねており、そして種々の取７造者から市場的に入手可能
である。コロイド薊フィルターマトリックスを使用した
粒子分離のほとんどは表面において生じそして内部チャ
ンネルの迷路の中では行われない。ある場合にはこれは
利点を与える。その理由は固体相は阻害粒子によって邪
まされずに留まりうるからである。しかしコロイド膜支
持体は比較的遅い拡散速度を有しており、そしてこの理
由の故にあまり好ましくはない。

第４のそして最も好ましいタイプのマトリックスは核放
射によりエツチングしたポリカー、１＜ネートフィルム
から製造された均一孔膜である。

最も理想的なふるいであるこれら支持体は真の孔様構造
を有している。これら物質は非常に小さいボイド容量を
有している。含浸は即ちより安全な流体障壁を形成する
。膜は即ち障壁性を犠牲にすることなく厚さ減少させる
ことができる一更に均一孔支持体はある程度は孔の直径
の変化により制御することのできる中間流れ性を有して
いる。障壁適用に約しては０．５〜２０μの範囲の孔直
径が好ましい。こ第１らタイプの支持体のその他の利点
は支持体中のボイド容積中に最低量の液体しか捕捉さね
ないこと、即ち最小液体が失われまたは容易には回収さ
れないものとなるということである。四に１０８〜１０
９／ｍの孔密度のこれら支持体が市場的に入手可能であ
る。

これは障壁層を通しての速やかな流体接続を可能ならし
めるに充分である。

熱感受性物質に対する担体であることに加えて、この多
孔性支持体マトリックスはその他の重要なそして本質的
テスト機能を果す様に作ることができる。これらとして
は（１）共有結合または吸着テスト試薬に対する固相支
持体としてθノくこと（２）反応物質のイオン性または
疎水性結合のための「媒体シンクＪ　（ｍｏｒｄａｎｔ
　５ｉｎｋ）とじて働くこと、（この様にしてＰ遇する
には少量すぎるアツセー物質を、それが−のコンパート
メントから次のコンパートメントに移る時に反応混合物
から除去することができる換言すれば支持体の化学的性
質を適当に制御することによって、−のコンパートメン
トから次のコンパートメントにそれが通過する時にイオ
ン性および疎水性物質をテスト流体から選択的に除去す
ることができる。例えば有色染料または阻害物質を除去
しそしてこれらが下方の反応コンパートメントに入るこ
とを阻止することができる）（３）［害性粒子、細胞ま
たは断片をふるいわけしまたは除去すること、（４）層
の間の流速の調整があげられる。

障壁層製造においては種々の熱感受性物質を多孔性支持
体の含浸用に使用することができる。

室温において高度の結晶構造を有し、低い溶融指数を示
すが結晶状態にある間は水性溶液に容易をでは可溶性で
はない、しかしひらいたまたは解離した状態では荏易に
可溶性の９勿質は理想的物質である。

例えば数種のタイプの天然および合成重合体物質はこの
適用に対して理想的な性質を示す。

ｉ）　１，３−結合β−Ｄ−ガラクトピラノースおよび
１，４−結合６，６−無水２−Ｌ−力ラクトビラノース
構造を有する群の多糖体は−１４−Ｊである。

特定の適用に対してはｓ　＄’Ａ残基をサルフエ−１・
。

メトキシパイルベートおよびカルボキシル基で置換させ
ることができる。寒天またはアガロースとして知られて
いる物質は高度Ｋ　ｌｈ製されたものでありうる。これ
らはそして良ρすに定義された浴融および吸着性を有し
ている。例えば低い荷電含量を有するアガロースは非特
異的結合の阻止に対して望ましいものでありうる。こＪ
ｌら物質は一般にその藻類抽出物としてまたは高等植物
においてペクチンとして見出される。

２）ゼラチンまたはコラーゲン群の蛋白質重合体もまた
理想的重合体物質である。

６〕　合成重合体はまた同様の物理的性質を有すると信
じられる。そしてこれは障壁層の製造のための隔膜の含
浸において使用することができる。これらとしてはビニ
ル−ベンゼン、ポリエチレンオキサイドおよびポリビニ
ルアルコールがあげられる。

これら物質は個々におよび／または組合せで使用して熱
感受性物質の溶融温度を変化させることができる。

特定の隔膜物質と熱可塑性重合体の組合せは溶融そして
従って透過の生ずる温度に影きょうを与える。例えば５
チゼ２チンで含浸させたナノ　Ｉ−１＋ノＪｔソ　／／
−１，ｌ十　Ｍ−＋　Ｚ　ｎｏ　１１ヱシＲｌＩト　ｂ
　すｒ　ヱ　Ｊｒ　１５％ゼラチンで含浸させたｐ紙は
約４０℃で透過性となる。

一般に重合体溶液は重合体を液体浴媒例えは燐酸バッフ
ァー化塩水（ＰＢＢ）に溶解させることにより製造され
る。隔膜をこの溶液中にディップさせそして次いで乾燥
すせる。これは隔膜１の孔を栓塞させ、それＫよってこ
の隔膜を液体非透過性とする。障壁層は一般に２の機能
層の間に〆接続的にサンドイツチ化させる。２の機能層
の間に障壁層をサンドイツチ化させるに好ましい方法は
以下のとおりである。その中に一般に円形の切り出しセ
クションを有する２枚の薄い固体フレームを、それらの
間に障壁層をサンドインチ化させて相互に重ねて、切り
出し部分を整軸させて位置させる。この集成体を一緒に
クランプでとめることができるしまたは接着剤を障壁層
に接している２枚のフレーム面上に使用することができ
る。７レームの切り出しセクションの形の吸収媒物質を
この切り出しセクション中にそうスして機能層として働
かせることができる。一般に次いでこの集成体を固体支
持体上に置いてテスト装置を完成させる。例えばテスト
装置を一定渥度表面士ＫＭくことによる障壁層への熱の
適用はこの硬化重合体を溶融させ、それによって流体流
れに対して孔を開口させる。この隔膜の多孔性はまた溶
融重合体を捕捉させそれによって以稜の機能層の収蔵を
阻止させる様にも働きうる。重合体が一度溶融したなら
ば、隔膜の多孔性はテスト液体の隔膜を通してのそして
次の機能層への毛管誘引を生成させる。この毛管誘引は
重力方向に独立の連続し。

だ液体の透過を可能ならしめる。

Ｄ、支持体層 本発明のテスト装置の障壁および機能層は一般に流体流
れに対して′非透過性の支す４体上ぐζ置かれている。

この支持体層はまた取扱の谷易さおよび放射保護の様な
追加の機能に拗ぎうる。

それは装置にｉ−ｔさせることかできるしまたはそれか
ら剥離することができ、セしてそわは導入口を付してま
たはそれなしで成形することかできる。適当な支持体物
質のいくつかの例はマイラｍ−セラミックおよびアルミ
ナである。

例 ■、湯温度よび時間の函数としての障壁層の透治性 ロセ゛ロットゼラチンの５％”／ｖ＝　７ｆｆｌを刀１
」熱によってＰＢＳ中に製造した。この浴液を固化点よ
り約１５℃高い温度に保持させた。多孔性ポリカーボネ
ートフィルム、Ｐ紙、およびナイロン織、メツシュの試
料をとのセラチン溶液に含し２させた。ポリカーボネー
トフィルムは８μ孔性朕シートとしてビオラドラボラト
リーズから入手された。

ゼラチン溶液で飽和するまで支持体を含浸させ次いで除
去しそして４時間室温で乾燥させた。

この段階で支持体は使用する準備ができた。

障壁層のテストのためには、５０パのブルーデキストラ
ンの水性溶液を各ゼラチン処理支持体に適用した。

室温においては５％ゼラチンを使用して製造された層に
関しては染料溶液の移動は観察されなかった。０．５％
ゼラチンを使用して製造された層はトップ層からボトム
層への染料の徐々の移動（３時間内）を示した。

次いでこの層を６０℃に保持されている表面の上に置い
た。流体が下方の層に浸透するに要する時間を測定した
。５３秒間加熱後、染料はポリカーボネート障壁層を通
って移動した。加移動した。５分加熱後、染料は紙障壁
層を通って移動した。

熱電対の使用によって障壁層の温度を時間の函数として
測定した。６０℃の表面を使用して約１分の加熱の後、
障壁層の温度は約３３℃であり、４分後にはその温度は
約４５℃であった。

このことは、透過性を訪導させるために障壁層を上昇さ
せなくてはならない温度が、隔膜の材料と熱感受性物質
の紹合せの函数であることを示す。

■、血液型測定用多層テスト装置 このテスト装置は以下のものから集成された。

１）抗−Ａ型しセプタ一層はアジリジン交叉結合剤ＸＡ
ＭＡ−７（コルドパケミカルＣＯ）で活性化させたナイ
ロンメツシュを抗Ａレクチン（ガンマパイオケミカルズ
）の水性溶液（１’ｌ１ｇ／＋＋ｔ）とつ　１　ｒ　’
ｆ；　Ｑ　賎　Ｆ−’！　ｓμ　名匠ｌｋ　書　４ト　
ヌ一　、−シ　π　ｔ　リ　剥　格　ｆ【れた。次いで
等温ＰＢＳ、ｐＨ７，４で処理することによってメツシ
ュから余剰のレクチン試薬を洗去させた。

２）障壁層は、ナイロンメツシュを５Ｍｊｋ％ＣＤロゼ
ロットセ゛ラチンの溶液中にディッピングさせることに
より製造された。次いで使用前にこのメツシュを２４時
間風乾させた。

３）この装置の吸着層はボトム層に入った細胞の赤色が
装置の上面からはみえないようにする視覚的障壁を与え
るＴｌＯ２粒子で含浸させたカラスミクロファイバーデ
ィスク（ワットマンＧＥ／Ｄ　）から製造された。

次いでこれら３のエレメントを前記記゛載の支持体フレ
ームを使用して一緒に集成させる。

装置の反応性をテストするためには赤血球の希釈試料（
ＰＢＳバッファー中６チ懸濁液）（１００μｋ）を抗−
Ａ層に加えた。次いで更に１００μＬのＰＢＳバッファ
ーを加えた。１０分間の平衡化の後、この装置を４８℃
に加温して障壁層を開かせた。トップ層に吸着されなか
った赤血球は速やかに下方のチャンバー中に通った。

視覚的検査は、ナイロンメツシュがピンク色に変り、成
功した赤血球結合を示した。走査電子顕微鏡および光学
顕微鏡写真は赤血球のナイロンへの結合を確認した。

■、ホースラディツシュパーオキシダーゼ検出のための
多層テスト装置 ポリアミドメツシュディスク（３／４Ｘ０．００２つを
第一に１０係ｗ／ｖ　０ａＯｊ！２含有の水性メタノー
ルで処理しそして次いで６．６５ＭＨＯＡで３０分４５
℃で処理した。これは重合体バックボーンを加水分解さ
せそしてフィルム表面上に蛋白質結合用の官能基（０Ｏ
ＯＨおよびＮＨ２）を与えた。フィルム表面を次いで三
機能性アジリジン交叉結合剤ＸＡＭＡ　−７（コルドパ
ケミカルＣｏ　）の新たに製造された５％水性溶液で室
温で２５分活性化させた。精製水で連続的に洗うことに
よって余剰のＸＡＭＡ　−７試薬を除去した。

次いで活性化ナイロンディスクを２岬／雌抗ホースラデ
イツシユパーオキシダーゼ抗血清（カベルラボラトリー
ス）含有の食塩（０，８５％）溶液中で平衡化させるこ
とによって蛋白質結合を達成させた。（兎工ｇＧがコン
トロールとして使用されたれ　フィルムを次いで冷燐酸
バッファー加塩水（ＰＢＳ　）バッファー、ｐＨ７，５
で過剰の蛋白質を洗去させ、そして４℃でＰＢＳバッフ
ァー中に使用準備ができるまで保存した。

この障壁層は、ポリカーボネート分子フィルター（８，
０μ、ビ第２ド）を前記のように５％水性ロゼロットゼ
ラチンで含浸させることによって製造された。シグナル
生成層はワットマン５４ＦＭｆイスクをＤ−フェニレン
ジアミンジ塩酸塩と原票パーオキサイド（２５〜）を重
炭酸塩バッファーｐａ　５．０　（５，０ｍｌり中に含
有する濃厚溶液で飽和させることによって製造された。

ディスクは一４０℃で速やかに凍結させそして凍結乾燥
させた。

テスト装置は以下のように集成された。

可塑性ポリエステルシート中に第一に３／４’直径の孔
を切ることによって長方形フレームを製造した。テスト
に要求される反応容量によって種々の厚さのシートが使
用された。このプラスチック層を両面接着剤を使用して
−１１８に保持させた。

テスト試料は１００凪ＰＢＳバツフアー（０，ＣＩＩＭ
。

ｐＨ７４）中ＫＮ製ホースラディッシュバーオキシダー
セ１．１■を希釈することにより製造された。次いで０
．８％（重量基準）牛血消アルフミン含有のＰＢＳ中で
１．１　ｎｇ／ｍＡの濃度までの一連の希釈液を生成さ
せた。この溶液１００μ℃を次いで各テストエレメント
に適用しそして室温で５０分間平衡化させた。

このテストエレメントを４８℃に加温したがこの時障壁
層は透過性となりそして速やかな流体の移動が生じた。

ＰＢＥバッファー（２００ｄ）を加えてずべての残存「
遊離」タグを検出部分に洗い込み、そして検出試薬を可
溶化させた。

室温で５分間平衡化させた後、装置の底から酵素的クロ
モ−ケン発色を視覚的に観察した。

「結合」酵素タグ分画の測定のためには、第一検出ユニ
ットを除去した。第２検出ユニツトを結合させた。クロ
モゲン基質溶液（１００μＩｔ）を加えそして系を５分
間平衡化させた。障壁層を前記のようにして開放させそ
して反応を支持体フィルムを通して視覚的に検査した。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）液体が遅過づ−る相互に重ね合せた少くとも２つの
   液ｉ４−透治性４炊能廓を含むテスト液体中の７す２イ
   トを検定するための多層テスト装置において、前記機能
   層を、化♀的に不活性で液体不音性の穴のあいた隔膜を
   営み且つその穴に検定温度で液体不透通性であるが加熱
   ＃に融解しそれによって前記機能層の間に急速液体遅過
   を与えることのできる熱感受性物質が光たされている障
   壁１−で分離１−ることを特徴とする。多層テスト装置
   。 ２）熱感受性物質が寒天、アガロース、ゼラチン２よび
   コラゲンよりなる抑から選はれる。 前記臀許請氷の範囲第１項記載のテスト装置。 ６）熱感受性物質かゼラチンである。１σ記竹ｒト錆釆
   の範囲第２項記載の１スト鮫直。 ４）熱感受性ｑｙｔｒ質がヒニルベンセン、キコリエチ
   レンオキブイドまたはポリビニルアルコール合成重酋坏
   である。前記符♂「晶ボの軛し」第１項記載のテスト装
   置。 ５）穴のあいた婦辰がナイロン、６戦ポリエステルおよ
   び天然繊維よりなる群から迅んだ１ノ状または祇った物
   質である。前記慣ＢＴ請求の範囲第１項記載のテスト装
   置。 ６）織った’１１／ｌ貿がナイロン−（々］る、１）Ｉ
   Ｊ記刊πＰａ〆Ｊ求の範囲第５項記載の１スト装置ａ０ ７ン　穴のあいた隔膜が紙、ガラス、毛、絹、羊毛・　
   ６７プ・　ジ１−ト、解、蓋域、ナイロン、ポリエステ
   ル、セルロースアセテート、石英およびコムよりなる絹
   ・がら培んだ不規則１５ｒ２列繊維より作られたマット
   である前記船許請求の範囲第１項記載のテスト装置と。 ８）繊維が紙である、前記特許請求の範囲第７項記載の
   テスト装置イ゛。 ９）穴のあいた隔膜が均一の孔の力艮である、前記特許
   請求の範囲第１頂記載のテスト装置。 １０ン　膜が核放射によりエツチングされたポリカーボ
   ネートフィルムである。　Ｍｔｒ記鵠許ｇ＋’ｉ　）Ｒ
   の範囲第９項記載のテスト装置。 １１）穴のあいた隔膜がエツチングされたポリカーボネ
   ートフィルムでありそして熱感受性物質がゼラチンであ
   る。前記特許請求の範囲第１項記載のテスト装置。 １２）ゼラチンが約５　％　（ＭＶ）である、前記ｑ☆
   許紬求の範囲Ｗ、１項記載のテスト装置。