JPS60502153A - ２３，２３−ジフルオロ−１α，２５−ジヒドロキシ−ビタミンＤ↓３ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ２３・２３−ジフルオロ−１α、２５−ジー±ど４アエ３ノ艮、１５この明細書 中に記載されている発明は、デパートメント・オブ・ヘルス・アンド会ヒユーマ ン・サービスからの助成金あるいは賞金のもとで行われていた研究においてなさ れたものである。

国立科学財団によって授与された日米協同援助金ＩＮＴ−７６−０５７９３に従 う本発明の権利もまた政府が所有する。

技術分野 本発明はビタミンＤ様活性を特徴とする化合物に関する。

さらに詳細には、本発明はビタミンＤ３誘導体に関する。

ビタミンＤ３はカルシウムと燐とのホメオスタシスを調１窮する働きを持つこと で良く知られている薬剤である。本化合物は、止常動物またはヒトにおいて腸の カルシウム輸送並びに骨のカルシウム流動化を促進させることが知られており、 くる病の予防に効果を発揮する。

効力を発揮するためにはビタミンＤ３は生体内でそのヒドロキシル化形に変換さ れなければならないこともまた現在では知られている。例えばこのビタミンは肝 臓中でまずヒドロキシル化されて２５−ヒドロキシ−ビタミンＤ３になり肝臓中 でさらにヒドロキシル化されて１α、２５−ジヒドロキシ−ビタミンＤ３または ２４，２５−ジヒドロキシ−ビタミンＤ　を生成する。このビタミンＤ３の１一 ヒドロキシル化形がこのビタミンの生理的に活性なすなわちホル３．２３．２３ −ジフルオロ−２５−ヒドロキシ−ビタミンＤ３分子の１位の炭素を生体外で酵 素的にヒドロキシル化することからなる２３．２３−ジフルオロ−１，２５−ジ ヒドロキシ−ビタミンＤ３を調製する方法。

この明細書中に記載されている発明は、デパートメント・オブ・ヘルス・アンド ・ヒユーマン・サービスからの助成金あるいは賞金のもとで行われていた研究に おいてなされたものである。

国立科学財団によって授与された日米協同援助金ＩＮＴ−７６−０５７９３に従 う本発明の権利もまた政府が所有する。

皮森分１ 本発明はビタミンＤ様活性を特徴とする化合物に関する。

さらに詳細には、本発明はビタミンＤ３誘導体に関する。

ビタミンＤ３はカルシウムと燐とのホメオスタシスを調１窮する働きを持つこと で良く知られている薬剤である。本化合物は、止常動物またはヒトにおいて腸の カルシウム輸送並びに骨のカルシウム流動化を促進させることが知られており、 くる病の予防に効果を発揮する。

効力を発揮するためにはビタミンＤ３は生体内でそのヒドロキシル化形に変換さ れなければならないこともまた現在では知られている。例えばこのビタミンは肝 臓中でまずヒドロキシル化されて２５−ヒドロキシ−ビタミンＤ３になり肝臓中 でさらにヒドロキシル化されて１α、２５−ジヒドロキシ−ビタミンＤ３または ２４，２５−ジヒドロキシ−ビタミンＤ３を生成する。このビタミンＤ３の１− ヒドロキシル化形がこのビタミンの生理的に活性なすなわちホルモン的作用を有 する形であり、また腸での燐及びカルシウムの吸収増強作用や骨ミネラルを流動 化する作用や腎臓内でのカルシウムの再吸収を起こさせる作用等のビタミンＤ様 活性と呼ばれる作用の応答物質であると一般的に考えられているものである。

１景孜遺 ビタミンＤの生物学的に活性な代謝物質が発見されて以来、これら代謝物質の構 造的類似体の合成に多くの関心が注がれてきた。それはそのような化合物がカル シウム代謝異常に起因する病気の治療に有用な作用物質である可能性があるから である。様々のビタミンＤ様化合物が合成されてきた。例えば、ｌα−ヒドロキ シコレカルシフェロールについて述べている米国特許第３．７４１．９９６号、 ｌα−ヒドロキシエルゴカルシフェロールについて述べている米国特許第３，９ ０７，８４３号、２２−デヒドロ−２５−ヒドロキシコレカルシフェロールにつ いて述べている米国特許第３，７８６．０６２号、側鎖がフッ素化されたジヒド ロタキステロールの種々の類似体の合成について述べている米国特許第４，０６ ９．３２１号、２４．２４−ジフルオロ−１α、２５−ジヒドロキシコレカルシ フェロールについて述べている米国特許第４，２０１，８８１号及び２４．２４ −ジフルオロ−２５−ヒドロキシコレカルシフェロールについて述べている米国 特許第４，１９６，１３３号などがある。これらより別の代謝性化合物はビタミ ンＤ化合物の代謝及び体内からの最終的な除去に割合を果していると思われてい るものがあり、またｌα、２５−ジヒドロキシコレカルシフェロール（米国特許 第３．６９７．５５９号）はビタミンＤの循環ホルモン形であると一般的に認め られている。

発明の開示 腸内でのカルシウム輸送を促進する作用または骨からカルシウムを流動化する作 用で測定したところ少なくとも２５−ヒドロキシビタミンＤ３　（米国特許第３ ，５６５，９２４号参照）と同等の効能を有するビタミンＤの新語導体がここに 見い出された。この誘導体は２３．２３−ジフルオロ−１α、２５−ジヒドロキ シコレカルシフェロール（２３，２３−ジフルオロ−１，２５−ジヒドロヤシビ タミンＤ３ｔたは２３．２３−Ｆ２−１．２５−　（ＯＨ）２Ｄ３）であること が同定された。

ビタミンＤの主要な不活性化経路は２５−ヒドロキシビタミンＤ３の２３８−ヒ ドロキシル化（国中ら、　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　２０．３８７５−３８７ ！１，１９８１）並びにそれの引き続いての２５Ｒ−ヒドロキシ−２６゜２３５ −ラクトンヘノ転換（国中ら、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔ’！、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ 。

ＵＳＡ　７８．４８０５−４８０８．１９８１）である。国中らのこれらの知見 を考慮すると、本発明のビタミンＤ誘導体は２３位の炭素についているフ。

素置換基のためにこの炭素が容易にはヒドロキシル化されないであろうし、従っ てこの誘導体は長期にわたるビタミンＤ様活性を有することを特徴とすることが わかるであろう。そしてこの長期ビタミンＤ様活性は、多くの治療上の用途にお いて明らかな利点とな゛るであろう。

１　るのに　の′熊 ２３．２３−ジフルオロ−１α、２５−ジヒドロキシ−ビタミンＤ３は、下記の 図式に示されているように、２３．２３−ジフルオロ−２５−ヒドロキシ−ビタ ミンＤ３を生体内酵素ヒドロキシル化することによって容易に合成することがで きる。

１位炭素のヒドロキシル化は、前駆物質２３．２３−ジフルオロ−２５−ヒドロ キシビタミンＤ３をビタミンＤ欠乏ひよこの腎臓組織から調製したホモジネート と共にインキニーベートすることによって達成しうる。

生後１日目のレグホンひよこに１％カルシウム含有ビタミンＤ欠乏食を２週間与 えた（オムダールら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、　１０．２９３５−２９４０ （１９７１））。次にこれらのひよこを殺して腎臓を取り除いた後、１５ｍＭの トリスアセテニド（トリヒドロキシメチルアミノエタンアセテート）（室温でｐ Ｈ７，４）及び１．９ｍＭの酢酸マグネシウムを含む水冷０．１９Ｍショ糖溶液 中で２０％（Ｗ／Ｖ）ホモジネートを調製した（国中ら、Ａｒｃｈ、　Ｂｉａｃ ｈｅ＋ｗ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　１７１．５２１−５２６（＋９７５））　、こ のインキュベーションの過程で、９ルｇの２３゜２３−ジフルオロ−２５−ヒド ロキシビタミンＤ３を１００ｇ１の９５％エタノールに溶解したものを、１ｇの 腎組織、０．１９Ｍショ糖、１．５ｍＭ）リスアセテート、１．’９ｍＭの酢酸 マグネシウム及び２５ｍＭコハク酸塩を有し最終容積７．５ｍＪ１としたものを 含む１２５ｍＫＬ容エルレンマイヤーに加えた。この混合物を３７００で２時間 振とうした後、１５ｍＭのメタノールと７　、５ｍＪ１（７）ＣＨ２Ｃ１，とを 加えて反応を停止させた。さらに別に７．５ｍｌのＣＨ２Ｃｌ、を有機相に添加 した後、得られた混合物を分離して減圧下で蒸発させた。そして目的の２３．２ ３−ジフルオロ−１゜２５−ジヒドロキシビタミンＤ３を含んだ残渣を、２５４ ｎｍで作動する紫外線検出器を備えたＡＬＣ／ＧＰＣ２０４ｇ高圧液体クロマト グラフ（ウォーターアソシエイッ社、マサチューセッツ州メトフォード）を用い て高圧液体クロマトグラフで精製した。ヘキサンに溶解した１０％２−プロパツ ール溶液の１００＃文中に残渣を溶解してこれを１ｏｏｏｐｓｉの圧力下で作動 して２ｍ１１分の流速を有するシリカゲルカラム（Ｚｏｒｂａｘ−３ｒＬ、　０ ．４８Ｘ　２５ｃｍ、デュポン社）にかけた。ヘキサに溶解した１０％２−プロ パツールを含有する溶媒系を用いて試料をこの方ラムにかけて２回精製した後収 集した。

こうして得られたと推定される２３．２３−ジフルオロ−１，２５−ジヒドロキ シビタミンＤ３を、２０００ｐｓｉの圧で作動する同じ高圧液体クロマトグラフ を用いて、逆相カラム（’Ｌｉｃｈｒｏｓｏｒｂ　ＲＰ−１５、Ｏ，Ｉ１６Ｘ２ ５ｃｍ、　Ｅ、メルク社、ドイツ連邦共和国Ｄａｒｍａｓｔａｄｔ　）　、、ｌ −１でさらに精製した。そして生成物を水とメタノールとの１対４の混合液で溶 出させて収集した。残渣は上述と全く同じ条件を用いてＺｏｒｂａｘ　ＳＩＬカ ラムを用いて再びクロマトグラフィーにかけた。

生成物が２３．２３−ジフルオロ−１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３である ことの同定はその分光特性によって確認した。この化合物は典型的なビタミンＤ 様紫外部吸収を示し、２６４ｎｍで吸収極大を示した。生成物の質量スペクトル は２３．２３−ジフルオロ−１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３の場合に検出 されるべきはずのものであるｍ　／　ｅ　４５２の分子イオンを含んでいた。ｍ ／ｅ４３４及び４１６のフラグメントはＨ２Ｏが１分子及び２分子取り除かれた ものを表わす。全側鎖が無くなるとｍ　／　ｅ　２８７のフラグメントか生じ、 これから１分子及び２分子のＨ２Ｏが取り除かれるとｍ　／　ｅ　２６９と２５ １とにピークが表われる。さらに、得られたスペクトルにはｍ／ｅ１５２とｍ／ ｅ１３４（１分子のＨ２Ｏの除去）とに目ケっだピークが表われるが、これは環 Ａフラグメントの存在を表わしており１α、３β−ジヒドロキシビタミンＤ３化 合物に特徴的なものである。

本発明の化合物である２３．２３−ジフルオロ−１α、２５−ジヒドロキシビタ ミンＤ３は、所望ならば、有機化学の分野で良く知られているように、適当な炭 化水素溶媒またそのような溶媒とアルコール性溶媒とを組み合せたもの（例えば ヘキサンとメタノールとの組み合せ）から再結晶することによって結晶状物質と して得ることができる。

炎魚と景Ω育虞 前述の方法によって、それから２３．２３−ジフルオロ−１α。

２５−ジヒドロキシビタミンＤ３を得る物質である２３．２３−シフ　ル、ｔロ ー２５−ヒドロキシビタミンＤ３が、以下に図式（図式中同じ番号は同じ化合物 を指す）を伴って示され説明される方法に従って得ることができる。

、、＋／ＣＨ２０Ｈ １２３ ４６３−ＴＨＰ　８　Ｒ−〇５ｏ２ｃＦ３９　１０　１１ これらの化合物の種々の物理化学的特性は下記に記載する装置を用いて測定した 。また種々の略号や方法の定義を下記に示す。

融点は加熱載物台顕微鏡で測定して補正を加えていない。ＵＶスペクトルは島津 ＵＶ−２００二重ビーム分光光度計を用いてエタノール溶液で得た。ＩＲスベグ トルはＪＥＯＬ　ＩＲＡ−１型回折格子赤外分光光度計で得た。’Ｈ−ＮＭＲは テトラメチルシランを内部標準として、別に特記しない限りは、ＣＤＣ交、中に てＶａｒｉａｎ　ＥＭ−３６０Ｌ分光計に記録した。１９Ｆ−ＮＭＲスペクトル はベンントリフルオリドを内部標準としてＣＤＣｌ３溶液中でＶａｒｉａｎ　Ｅ Ｍ３６ＯＬ分光計に記録した（プラスは高磁場（ｈ　ｉｇｈｆｉｅｌｄ）を意味 する）。質量スペクトルは［１立の二重集束型質量分析計ＲＭＵ−７Ｌを使って 得た。カラムクロマトグラフィーはシリカゲル（Ｍｅｒｃｋ、　７０−２３７ン シ、）を用いて行った。分離用薄層クロマＩ・グラフィーをあらかしめシリカゲ ル（メルり社、シリカゲル６０Ｆ２５４）を塗布したプレート１で行った。本明 細書中通常の処理とは、水でＷ１釈して有機溶媒で抽出した後、洗浄して中性に して、その後硫酸マグネシウム−１−で乾燥してろ過してから減圧下で溶媒を除 去する力／）：を指す。次のような略号を用いた。ＴＨＦはテトラヒドロフラン 、ｅｔｈｅｒはジエチルエーテル、ＨＭＰＡはヘキサメチルホスポラミド、Ｔｓ ＯＨはｐ−トルエンスルホン酸、ＴＨＰはテトラヒドロピラニル、Ｓは一市線、 ｄは−ｎ重線、ｔはニー重線、ｑは四千、線、ｍは多重線、ｂＳは広−重線をそ れぞれ表わしている。

合成 ｊ１二４」まヱニ」」コ」ヒシじげしヨしし−ζ支二２２西二ｊ」二コランー２ ２−アール　２ 文献の方法に従って合成した６β−メトキシ−３α、５−シクロ−２３，２４− ジノル−５α−コラン−２２オール（１）（２，０ｇ、１５．８モル）を、ジク ロロメタン（４０ｍＭ）中ピリジニウムクロロクロメート（３、８ｇ）と酢酸ナ トリウム（１，４ｇ）とを懸濁した懸濁液に加えてこの混合物を室温で２．５時 間攪拌した。そしてこの溶液にエーテル（ｌ　ＯＯｍＭ）を加えた後得られた沈 殿物をろ過してエーテル（１００＋ｎ４）で洗浄した。ろ液を合せて５％Ｎ　ａ 　ＨＣＯ３と塩水で連続して洗浄した後硫酸マグネシウム上で乾燥した。真空中 で溶媒を除去した後残渣をシリカケルのカラム（３００ｇ）にかけた。ｎ−へキ サンとエーテルとの１０対ｌの程合液で流出させるとアルデヒド（２）が得られ た。（１、４４ｇ、７３％）不定形、Ｈ−ＮＭＲδ：０．７８（３Ｈ２ｓ、　＋ ８−Ｈ３）、　１．３０（３Ｈ，ｄ。

ＪＪＨｚ、　２＋−８３）、　１．１７（３Ｈ，Ｓ、　＋９−８３）、　２．７ ８（］、Ｈ，ｍ、　６−Ｈ）、　３．３３（３Ｈ１Ｓ、　−０ＣＲ３）、　９． ５１（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝３．５Ｈｚ、−Ｃ：ＨＯ）、　ＭＳ　ｍ／ｚ：３４４（Ｍ 　）。

３２９、３１２゜ ６β−メトキシ−２３−トリエチルシリルオキシ−３α、５−シフ１０ｍｕのＴ ＨＦ中のジイソプロピルアミン（１，０５ｍＭ、７．５ｍｍｏ　ｌ）溶液に一７ ８℃のアルゴン雰囲気下でｎ−ブチルリチウム（６ｍｍｏ　ｌ）を加えて得られ た溶液を５分間攪拌した。

ＴＨＦ　（１０ｍｆｌ）中に溶解したメチルα−トリエチルシリルオキシ−α− ジメチルホスホノアセテート（１、５６ｇ、５ｍｍｏ　ｌ）をこの溶液に添加し て得られた混合物を室温で１５分間攪拌しだ。

次にこうして得られた溶液に、ＴＨＦ（１０ｍ文）中に溶解したアルデヒド（２ ）（４９１ｍｇ、１　、４３’ｍｍ　ｏ　ｌ）を加えてこの混合物を室温で４時 間攪拌した。そして通常の処理（エーテルで抽出）を施して粗生成物を得た後、 これをシリカゲルのカラム（１５０ｇ）にかけた。その後ｎ−へキサンとエーテ ルとの１５対１の混合液で溶出すると不飽和エステル（３）が得られた。（６１ ５ｍｇ、８１％）。無色の油、　’Ｈ−ＮＭＲδ：３．３０（３Ｈ，ｓ。

−０ＣＨ３）、　３．７３（３Ｈ，ｓ、　−Ｃ：０２ＣＪ）、　５．２ｆｌ（Ｉ Ｈ，ｄ、　Ｊ＝ＩＯＨｚ、　２２−Ｈ）、　ＭＳｍ／ｚ：５３０（Ｍ”）、　５ ０１．４８！１１゜３−アセトキシ−２３−オキソコール−５−エン−２４−オ イック−アシ−トメチルエステル（４ 酢酸（７ｍＭ）中に不飽和エステル（３）（１，５３ｇ、２９ｍｍｏｌ）を溶解 した溶液を８０−９０℃で６時間加熱した。これに通常の処理（エーテルで抽出 ）を施して粗生成物を得た後、この粗生成物と触媒量のＴｓＯＨとをジオキサン （１０ｍＪ１）と水（１０ｍＪＬ）との混液中に懸濁したものを８５−９５℃で ７時間加熱した。これに通常の処理（エーテルで抽出）を施して粗生成物を得た 後、この生成物をシリカゲルのカラム（３００ｇ）にかけた。ｎ−へキサンとエ ーテルとの１５対ｌの混合液で溶出するとα−ケトエステル（４）が得ラレタ。

（７８８ｍｇ　、　７Ｂり、ｍ、ｐ、　＋４Ｅｉ−１４７’０（ｎ−ヘキサ７） 　、　ｒＲｒ日ｌ；ｃｍ−’　：１７２０．１２４（１，’Ｈ−ＮＭＲδ：０． ７３（３Ｈ，ｓ、　１８−Ｊ）、０−１３３（３）１．ｄ、　Ｊ＝８Ｈｚ、２ｌ −Ｈａ）、１．０３（３Ｍ、　ｓ、　１９４ｓ）、　２．０３（３Ｈ，ｓ、アセ チル）、　３．８８（３１（、ｓ、　−ＣＨ２紺、）、　４．８３（ＩＨ。

ｍ、　３−Ｈ）、　５．４１（ＩＨ，ｍ、８−Ｈ）、　ＭＳ　ｍ／ｚ：３８４（ Ｍ＋−ＣＨ５ＣＯＯＨ）、　３８９．分析、　Ｃ２７Ｈ，０５ｔ７）計算値：ｃ 、　？２．９２　；　Ｈ，９，０８，測定値：Ｃ，？２．８３゜Ｈ，ＬＨ３゜ １Δ二ｌ連ユ」些＝ノ」シ」じしづとυヒ１Ｌジ胚二旦二ｘ７ニヱＡ二工Ａ」ｊ −ｊ−什しトムＬ竪三五力水」）■α−ケトエステル（４）（４００ｍｇ、０． ９ｍｍ０１）ジエチルアミノスルフルトリフルオリド（１，５ｍＪ１．９．５ｍ ｍｏｌ）とをジクロロメタン（１５ｍ文）中に溶解した混合液を室温で１６時間 攪拌した。通常の処理（エーテルで抽出）で粗生成物を得た後これをシリカゲル のカラム（１００ｇ）にかけた。その後ｎ−へキサンとエーテルとの１０対１の 混合液でこれを溶出するとジフルオロエステル（５）が得られた。（３１２ｍｇ 、７４％）　、　ｍ、ｐ、　＋３２−１３２．５℃（ｎ−ヘ＋＋７）、　ｒＲ１ ’究ｃｍ　’　＋１７７０．１？３０．１２５５．　’Ｈ−ＮＭＲδ：０．７０ （３Ｈ，Ｓ、　＋ａ−ｕ３）”’、　ｌ−０（３Ｈ，ｓ、　１９　ＨＥ）、　１ ．１０（３Ｈ，ｄｌＪ＝６）１ｚ、　２１）１３）、　２．０３（３Ｈ，ｓ、ア セチル）、　３．８７（３Ｂ、　ｓ、　−ＣＯ２０Ｈ＝）。

４．６０（ＩＨ，ｍ、　３−Ｈ）、　５．３８（ＩＨ，ｍ、　８−Ｈ）、′ｑＦ −ＮＭＲ：＋４０．３．　ＭＳ　ｍ／ｚ　：４０８（Ｎ”−ＣＨ５ＣＯＯＨ）、 分析、　ＣＨ２７Ｈ，Ｏ，Ｆ、　ノ計算値：Ｃ，６９，５０；　Ｈ。

８．８４　、　Ｆ、　８．＋４．　実測値：ｃ、　、６９．７５．　）！、　８ ．７５．、　Ｆ、　８．２８゜ん１−ムｌニオ乙（幻しシリ辷う」」四」沖」箋 Ｇ」」」ジコユルー５−工ンー２４−オイークアシードメチルエステル　６ジフ ルオロエステル（５）（８８０ｚｎｇ、１．９ｍｏ　ｌ）を２％ＫＯＨ−ＭｅＯ Ｈ（３０ｍ文）で室温にて２時間処理した。これに通常の処理（エーテルで抽出 ）を施すと粗酸が得られた。得られたエーテル中の粗酸を、ガスが発生しなくな るまでジアゾメタンのエーテル溶液で処理した。この溶液を減圧下で濃縮すると 残渣が残った。この残液をジオキサン（１０ｍ４）中に溶解したものを２．３− ジヒドロピラン（５１６ＩＬ！ｌ）とＴｓＯＨ（１０ｍｇ）とで室温において３ 時間処理した。これに通常の処理（エーテルで抽出）を施して得られた粗生成物 をシリカゲルのカラム（２００ｇ）にかけた。その後カラムをｎ−へキサンとエ ーテルとの１５対ｌの混合液で溶出させるとＴＨＰ−エステル（６）が得られた 。

（９０７ｍｇ、９５％）、無定形、　’Ｈ−ＮＭＲδ：０．７０（３Ｈ，ｓ、　 ＋８−Ｈａ）、　１−０３　（３Ｈ９ｓ、１８−Ｈ３）、１．１０（３Ｈ，ｄ、 　Ｊ＝６Ｈｚ、　２１Ｊ）、３．５３（２Ｈ，ｔｘ、　ＴＨＰ）、　３．８Ｂ（ ３Ｈ，ｓ、　−ＧＯｚｊ；Ｊ（３）、　３．９３（ＩＨ，ｍ、　３−１（）、　 ４．７３（ＬＨ，ｍ、　ＴＩＰ）、　５．３８（ＩＨ，ｍ、　８−Ｈ）、　”Ｆ −ＮＭＲδ；＋ａｏ、ｏ、　ＭＳ　ｍ／ｚ：４２４（Ｍ＋−ＤＨＰ）、　４０８ ．３９１゜２３２３−ジフルオロコル−５−エン−３，２４−ジオール３−ＴＨ Ｐエーテル（７ エーテル（１０ｍＪｌｊ）中にリチウムアルミニウムハイドライド（６３ｍｇ、 １．６５ｍｍｏｌ）を懸濁した懸濁液に、エーテル（１０ｍ文）中にジフルオロ エステル（６）　（１，４０ｇ、２．７６ｍｍｏ　Ｉ）を溶解した溶液を加えて 混合物を０℃において１０分間攪拌した後、室温で１０分間攪拌した。これに通 常の処理（エーテルで抽出）を施すと粗生成物が得られたが次にこの粗生成物を シリカゲルのカラム（１００ｇ）にかけた。その後このカラムをｎ−ヘキサンと エーテルとの５対ｌの混合液で溶出させるとアルコール（７）が得ラレタ。（１ ，１３ｇ、８６ｚ）、粘性油。／Ｈ−ＮＭＲδ：０．７３（３Ｈ，ｓ、　１８− Ｈ＞）、　１．０３（３Ｈ，ｓ、　１９Ｈ−、）、　１．１３（３８，ｄ、　Ｊ ＝６Ｈ２゜２＋−８３）、３．３３−４．１０（５１（、ｍ、２４−Ｈ２，３− Ｈａｎｄ　ＴＨＰ）、４．７８（ＩＨ’。

ｍ、Ｔ）ＩＰ）、５．３８（ＩＩ、ｍ、６−Ｈ）、”Ｆ−ＮＭＲδ　：”４３． ３．　ＭＳ　ｍ／ｚ：３９６（Ｍ’［］ＨＰ）、３７８゜ ２３２３−ジフルオロ−２４−トリフルオロメタンスルホニルオキシフルー ピリジン（１２４ｊＬＪ１）と無水三フッ化メタンスルホン酩（２　０　６　ｇ ｌ）　との混合物をジクロルメタン（５＋ｎｆＬ）中に溶解したものを一２０℃ においてアルゴン雰囲気下で５分間攪拌した。そしてジクロロメタン（１０ｍＪ Ｌ）中のアルコール（７）（４ｏ。

ｍｇ、１　、　０　２ｍｍ　ｏ　ｌ）をこの溶液に加えた後この混合物を室温に て４０分間攪拌した。これに通常の処理（ジクロロメタンで抽出）を施してトリ フレート（８）（６　１　２ｍｇ）を得た後、これを精製しないまま次の段階に 用いた。　’Ｈ−ＮＭＲ　δ・０．７３（３）１，　ｓ。

１８−１ｂ）、　１．００（３Ｈ，　ｓ，　＋９−Ｈ３）、　１．１５（３Ｌ　 ｄ，　Ｊ−６Ｈｚ，２１−Ｈ．３）、　３．５Ｂ（２Ｈ，　ＩＩＩ，　ＴＨＰ） 、　３．８５（ＩＨ，　ｍ．　３−Ｈ）、４．５０（２Ｂ，　ｔ，Ｊ＝１２Ｈｚ ，　２４−８２）。

４、７０（ＩＨ．　ｍ．　ＴＨＰ）、　５．３７（ＩＨ，　ｒｎ，　８−Ｈ）、 ′ｑＦ−ＮＭＲ　δ：　＋１２．２（３Ｆ）。

＋４１．３（２Ｆ）。

２３、２３−ジフルオロ−３β−テトラヒドロピラニルオキシコレスト−５−エ ン−２６　、２７−シオイツクアシントシエチルエステ反（溌ｙ ｔｅｒｔ−ブトキシドカリウム（１．１ｇ、９　、６ｍｍｏ　＋）とマロン酩ジ エチル（３．８ｇ、２４ｍｍｏ　ｌ）との混合物をＴＨＦ（２　５　ｍｌ）とＨ ＭＰＡ（８ｍＭ）の混液中に加えたものを室温でアルゴン雰囲気１１時間攪拌し た，ＴＨＦ　（２　０ｍ交）中にトリノし・−１・　（８）（１，４７ｇ、２． ４ｍｏ　ｌ）を溶解したものをこの得られた溶液に加えて混合物を室温にて２６ 時間攪拌した。次に通常の処理（エーテルで抽出）を施して粗生成物を得た後、 これをシリカゲルのカラム（１００ｇ）に力）けた。その後にこのカラムをｎ− ヘキサンとエーテルとの５対ｌの混液で溶出するとジエステル（９）が得られた 。　（１，２０ｇ、８１ｚ）、ｎ＋、ｐ、　７９−８０℃（エタノール）。

ＩＲｊ’：”；　ｃｍ−’　：１７５０．１７４０−　’Ｈ−ＮＭＲδ：０．７ ３（３Ｈ，ｓ、　＋８−Ｈ３）、　１．００（３Ｈ，ｓ、　＋９−Ｈ））、　１ ．１０（３Ｈ，ｄ、Ｊ＝８Ｈ２，２＋−Ｈ３）、　１．２７（ＢＨ，ｔ、　Ｊ＝ ７１ｚ、　−ＣＤ７ＣＨ７Ｃル）、　３．４［ｆ（２Ｈ，ｍ、　ＴＨＰ）、　３ ．８２（Ｉ）Ｉ、　ｔ、　Ｊ＝６Ｈｚ、　２５−Ｈ）、３．８０（ＩＨ９ｍ、　 ３−Ｈ）、　４．１４（４Ｈ，９，Ｊ＝ＪＨｚ、　−ＣＯＣ：Ｈ２ＣＨ３）、　 ４．８４（ＩＨ，ｍ、　ＴＨＰ）、　５．３０（ＩＩ、　ｍ、ｅ−）１）、　Ｍ Ｓ　ｍ／ｚ：５３８（Ｍ＋−１１ＨＰ）、　５２０゜５０５　分析、Ｃ％Ｈ”Ａ ＯＧ：Ｆ２の計算値；ｃ、　６９．４０；　Ｈ，９，０８：　Ｆ、　８．１０． 実Ｉ＋１１イ＃；ｃ、８９．＋９．Ｈ，９，１１，Ｆ、５．８５゜ム且二ｌ」巳 忙野しし一石り二ＺヱルオＰ二」」二づＬヒｉ景上…イラニルオキシコレスト− ５−エン−２６，２７−シオイツクアシンドシエチルエステル　ｌＯ ジエステル（９）（７００ｍ、１．１２５ｍｍｏ　ｌ）をジメＩ、キシエタン（ ２０ｍ文）中で、室温にてアルゴン雰囲気下で１時間、水素化ナトリウム（３９ ｍｇ、１．６２５ｍｍｏ　ｌ）を用いて処理ｌ　０次にこの溶液にＮ−クロロサ クシンイミド（１８０ｍｇ、１．３５ｍｍｏ　ｌ）を加えた後この混合物を室温 にて１時間攪拌した。これに通常の処理（エーテルで抽出）を施して粗生成物を 得た後、これをシリカゲルのカラム（２０ｇ）にかけた。その後にこのカラムを ｎ−ヘキサンとエーテルとの１０対ｌの混液で溶出するとクロロジエステル（１ ０）が得られた。（７３０■、９８％）、カラス質。

’Ｈ−ＮＭＲ：０．７２（３Ｈ，ｓ、　＋８−８３）、　１．０２（３Ｈ，ｓ、 　＋５−８３）、　１．１０（３Ｈ，ｄ。

Ｊ＝８Ｈ２，２１Ｈ３）、　１．３０（８Ｈ，ｔ、　Ｊ＝７．５８２．−Ｃｏ、 ４ＣＨ２ＣＨ３）、　２．９５（２）１゜ｔ、　Ｊ＝１５Ｈｚ、　２４−Ｈ２） 、　３．５２（２ｔｌ、　ｍ、　ＴＩＰ）、　３．８８（ＩＨ，ｍ、　３−Ｈ） 、　４．３２（４Ｈ，ｑ、　Ｊ＝７．５Ｈｚ、　−ＧＯ２ＧＯ２ＣＪ）、　４． ７２（ＩＨ，ｍ、　ＴＨＰ）、　５．３８（ＩＨ，ｍ。

６−Ｈ）、　ＭＳ　ｍ／ｚ：５５４．５２０゜２５−クロロ−２３，２３−ジフ ルオロコレスト−５−エン−３１−ヱ」−」じ−二り四本二盤盈二ＴＨＦツ三ヨ シに工↓↓ｙエーテル（１５ｍｇ）中にクロロジエステル（１０）（７３０ｍｇ 、１．１ｍｍｏｌ）を溶解した液にリチウムアルミニウムハイｉ・ライトを加え た後、この混合物を０℃において１時間攪拌してからさらに室温にて２時間攪拌 した。そして得られた混合物に通常の処理（エーテルで抽出）を施して粗生成物 を得た後、これをシリカゲルのカラム（５０ｇ）にかけた。その後にこの方ラム をジクロロメタンで溶出するとクロロジオール（１１）が得られた。（２５０ｍ ｇ、３９％）　ｍ、ｐ、　１５２〜１５３℃（ｎ−ヘキサン−エーテル）。

Ｈ−ＮＭＲ８（ＣＤＣ１３−７セト７　ｄに−ＤＭＳＯｄ、）：０．７？（３Ｈ ，Ｓ、　１８−Ｈ３）。

１．００（３Ｈ，ｓ、　＋９−Ｈ３）、　１．１０（３Ｈ，ｄ、　Ｊ＝６Ｈｚ、 　２＋−Ｈ３）、　３．５０−４．５０（７Ｈ。

ｍ、　３−Ｈ１２Ｂ−Ｈ２、２７−Ｈ２及びＴＨＰ）、４．７７（３Ｈ，ｍ、　 ２６−仄江、　２７−ＯＨ及ヒＴＨＰ）、　５．３８（ＩＩ、　ｍ、　６”Ｈ） ；　８　（ＣＤＣ１３−７−ｔ＝　）　ｙｄ、ｌ；−ＤＭＳＯｄ、；−０２０） ：３．６０（２Ｈ，ｍ、　ＴＨＰ）、　３．７７（４Ｈ，ｓ、２Ｂ−Ｈ２及び２ ７−Ｈ２）、　４４−７７（ＩＨ２゜ＴＨＰ）。ＭＳ　ｍ／ｚ：４３４．４＋Ｊ 　４０４゜分析、　Ｃ３２Ｈ，，０４ＣＩＦ２ノ計算値：ｃ。

８７．０５’、　Ｈ，８，９７；　Ｃ１，６，＋９．　Ｆ、　６．８３．　実測 値：Ｃ，８７，０８；　Ｈ。

ｓ、ｓｓ；　ｃｌ、ｓ、９ｓ；　Ｆ、８．５３２５ε　−２５，２６−ニポキシ ー２３２３−ジフルオロコレスト二に三Ｚ二ｌ五−ヱ１ニクユ：処」二］」」ニ ーｊ五工↓ｌエ クロロジオール（１１）（１８３ｍｇ、０．３２ｍｍｏ　ｌ）を、ジメトキシエ タン（１８ｍｌ）中で、室温にて約６日間、水素化すトリウム（１８ｍｇ、０． ７５ｍｍｏｌ）を用いて処理した。次にこの混合物に通常の処理（エーテルで抽 出）を施して粗生成物を得た後、これをシリカゲルのカラム（１００ｇ）にかけ た。その後にこの方ラムをジクロルメタンで抽出するとエポキシアルコール（１ ２）が得られた。（５６ｍｇ、３２％）、ガラス質。　Ｈ−ＮＭＲδ；２．９２ （２０，ｍ、　２８−０２）、　３．６７−４．１６（３Ｈ，ｍ、　３Ｈ及び２ ７−Ｈ２）。ＭＳＩＯ／ｚ：４３４（Ｍ”−ＴＨＰ　ＯＨ）、４１６．４０８及 びクロロジオール（１１）を回収（９２ｍｇ、５０％）。

２３．２３−ジフルオロコレスト−５−エン−３β、２５−ジオール３−ＴＨＰ エーテル（１３） エポキシアルコール（１７）（５５ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）をジクロロメタ ン（１０ｍ’ｉ）中で、室温にて１３時間、メタンスルホニルクロリド（２０ｇ ｌ）とトリエチルアミン（３０ｇＭ）とで処理した。次にこの混合物に通常の処 理（エーテルで抽出）を施して粗メシレート（６９ｍｇ）を得た。このメシレー トをエーテル（Ｉ　ＯｍＭ）中で、０℃において１．５時間、水素化リチウムア ルミニウムで処理した。次にこの混合物に通常の処理（エーテルで抽出）を施し て粗生成物を得た後、これをシリカゲルのカラム（２０ｇ）にかけた。その後こ のカラムをｎ−ヘキサンとエーテルどの５対２の混液で溶出すると２５−オール （１３）が得られた。（４３，３ｍｇ、８０％）　、ｍ、ｐ、　１４８−１４９ ℃（ｎ−ヘキサン−シクロヘキサン）。’Ｈ−Ｎ）ＩＲδ：０．７２（３Ｈ，ｓ 、　１８−）＋３）、　１．０１（３Ｈ，ｓ、　１９−Ｈ３）、　１．１０（３ ０，ｄ、Ｊ＝ＧＨｚ、　２ｌ−Ｈ）、　！、３５（［ｆＨ，ｓ、　２６−Ｈ３及 び２７−Ｈ３）、　３．５３（２８，ｍ、　ＴＨＰ）、　３．８７（ＩＨ９ｍ、 　３−Ｈ）、　４．７１（ＩＨ。

ｍ、ＴＨＰ）、　５．３７（ＩＨ，ｍ、　６−Ｈ）。ＭＳ　ｍ／ｚ：４２０（Ｎ −ＴＥＰＯＨ）、　４０５゜Ｃ，Ｈ，２Ｆ２０（Ｍ＋−ＴＨＰＯＨ）に対する高 分解能ＭＳの計算値：４２０．３２１４゜実測値：　４２０．３２０８゜ ２３．２３−ジフルオロコレスト−５−エンニ３β、２５−ジオール３−アセテ ート（１４） ＴＨＰ−１−チル（１３）（２６ｍｇ、０．０４９８ｍｍｏ　＋）をメタノール （４ｍ　文）とＴＨＰ　（９）（４＋ｎＫＬ）の溶液中に溶解したものを、室温 にて１時間触媒量のＴｓＯＨで処理した。これに通常の処理（酢酸エチルで抽出 ）を施して粗ジオール（２１，４ｍｇ）を得た。このジオールを無水酢酸（１ｍ 、Ｊｌ）とピリジン（１ｍＭ）とで室温において１４時間処理した。次にこの混 合物に通常に処理（酢酸エチルで抽出）を施して粗生成物を得た後、これをシリ カゲルのカラム（５ｇ）にかけた。その後にこのカラムをベンセンと酢酸エチル との１０対ｌの混液で溶出するとアセテート（１４）が得られた。（２３，０ｍ ｇ、８８％）；　ｒａ、ｐ、　１８８−１７０℃（ツタノーＪｌ／）　、’Ｈ− ＮＭＲδ：　０．８２（３Ｈ，ｓ、　１８−Ｈ３）、　１．０２（３）１．　ｓ 、　ｌ１３−Ｊ）。

１．０７（３Ｈ，ｄ、　Ｊ＝６Ｈｚ、　２ｌ−Ｈ３）、　１．３５（６Ｈ，ｓ、 　２６−Ｈ３及び２７−）１３）、　２．０３（３Ｈ，ｓ、アセチル）、　４． ５５（ＩＨ，ｍ、　３−Ｈ）、　５．３８（１）！、　ｒｘ、　８−Ｈ）　。

Ｃ２□Ｈ４□Ｆ２０（Ｍ＋−ＯＨＣ００）ｌ）に対する高分解能ＭＳの計算値： ４２０゜３２０２゜実測値：　４２０．３２０Ｂ。

２３２３−ジフルオロコレスタ−５７−ジニンー３２５−ジ±二基（１５） 四塩化炭素（２’ｍ文）中にアセテート（１４）（１９ｍｇ、０．０３９６ｍｍ ｏｌ）を溶解した液にＮ−プロモサクシンイミド（１０ｍｇ、０．０５７１ｍｍ ｏ　ｌ）を加えた後、この混合物をアルゴン雰囲気下で２０分間還流した。次に ０℃まで冷却した後、得られた沈澱物をろ過した。このろ液を４０℃以下で濃縮 すると残渣が残った。この残渣をキシレン（２ｍ４）に溶解したものを、Ｓ−コ リジン（０、５）とキシレン（１，５ｍ１）とから成る還流液に滴下添加して２ ０分間還流を続けた。次に通常の処理（酢酸エチルで抽出）を施して粗ジエンを 得た。このジエンをアセトン（１０ｍＪＬ）中に溶解したものを室温にてアルゴ ン雰囲気下で光を遮って１４時間、触媒量のＴｓＯＨで処理した０次に通常の処 理（酢酸エチルで抽出）を施して粗５，７−ジニンアセテートを得た。このアセ テートをＴＨＦ　（５ｍＪ１）中に溶解したものを、室温にてアルゴン雰囲気下 で光を遮って３０分間、５％ＫＯＨ−ＭｅＯＨ（１，０ｍｊＬ）で処理した０次 にこの混合物に通常の処理（酢酸エチルで抽出）を施して粗生成物を得た後、こ れを分離用薄層クロマトグラフィー（ベンゼンと酢酸との２：ｌ混液、２回展開 ）にかけた。Ｒｆ価値、４７のバンドを切り取って酢酸エチルで溶出した。溶媒 を除去すると５．７−ジオン（１５）が得られた。（３，７５ｍｇ、２１７％） 　、　ＵＶｋｍａｘ　ｍｍ：２９４．２８２．２７２゜２３２３−ジフルオロ− ２５−ヒドロキシビタミンＤ　１６５．７−ジオン（１５）（３，７５ｍｇ、８ ．６０ｐＬｍｏｌ）をベンゼン（９０ｍ文）とエタノール（４０ｍｆｌ）１％液 中に溶解した液に、水冷したビコールフィルターを通してアルゴン雰囲気下で２ ．５分間、中圧水銀ランプで照射した。溶媒を減圧下で除去して得られた粗生成 物を分離用薄層クロマトグラフィー（ベンゼンと酢酸エチルとの２対ｌｆｉ液、 ２回展開）にかけた。Ｒｆ価値、５９のバンドを切り取って酢酸エチルで溶出し た。次に溶媒を除去するとビタミンＤ３誘導体（１６）（０，９６ｍｇ、２５． ６％）が得られた。これをさらに、ヘキサンとジクロロメタンの１対２混液を溶 離剤として２ｍＪＬ／ｍｉｎの流速でＺｏｒｂａｘ　ＳＴＬ普通普通シカラム、 ６ｍｍφＸ１５ｃｍ）上で高性能液体クロマトグラフィーを行って生成した。誘 導体（１６）の保持時間は７．４分であった。ＵＶ入ＩＩＩａｘ　ｎｍ：２８５ ．人ｗｉｎ　ｎｍ：２２８．　Ｈ−ＮＭＲδ：０．５８（３Ｈ，ｓ。

＋８−Ｈ３）、　１．０７（３Ｈ，ｄ、　Ｊ＝８．１Ｈｚ、　２ｌ−Ｈ３）　１ ．３４（８Ｍ、　ｓ、　２Ｂ−Ｈ３及び２７−Ｈ３）、　３．９５（ＩＨ，ｒａ 、　３−）１）、　４．８１（ＩＨ，ｂｓ、　１９−Ｈ）、　５．０４（ＩＩ、 　ｂｓ。

＋９−Ｈ）、６．０３（ＩＨ，ｄ、　Ｊ＝１０．７Ｈｚ、　？−Ｈ）、　８．２ ３（１８，ｄ、　Ｊ＝ＩＯ，７Ｈｚ。

６Ｈ）。ＭＳ　＋ｍ／ｚ：４３Ｂ（Ｍ’）、　４１８．４０３．３９８．３８０ ．３７８．３００．２７１゜２８５、１４５．１１８゜Ｃ２□Ｈ４２Ｆ２０２に 対する高分解能ＭＳの計算値：４３Ｂ。

３１５０゜実測値：　４３［ｉ、　３１５５　。

１隻学迫逅七 新しい類似体の生物学的活性は、ラットを用いた適切な生体内検定で証明される 。

離乳したばかりの雄ラット（ホルツマン社、ウィスコンシン州マジソン）に２週 間低カルシウムビタミンＤ欠乏食（０，０２％カルシウム、０．３％燐−Ｊ、　 Ｎｕｔ、　１００．１０４５−１０５２（１９７０））を与えた。

これらのラットを各６〜７匹ずつ３群に分けて対照群のラットには頚静脈注射で ９５％のエタノールを０．０５ｍＭ投与した。そして他の２群のラットには、同 じ方法で、それぞれ１００ｐ１００ｐの１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３（ １、２５−（ＯＨ）２Ｄ３）を含有する０、０５ｍｕのエタノール溶液または１ ００ｐ１００ｐの２３．２３−ジフルオロ−１α、２５−ジヒドロキシビタミン Ｄ　（２３，２３−Ｆ　−１，２５−（０Ｈ）２Ｄ３）を含有する２ ０．０５ｍＪ１のエタノール溶液を投与した。投与９６時間後に、腸のカルシウ ム輸送に対するこれらの化合物の作用をマーチンとデル力の方法で測定した（Ａ ｍ、　Ｊ、　Ｐｈｙｓｉｏｌ、　２１６．１３５１−１３５９．１９８９）。

結果を次の表に示す。

投与化合物　腸のカルシウム輸送 （Ｃａ漿膜の／Ｃａ粘膜の） （平均値±ＳＥＭ） ２３．２３−Ｆ２１．２５−（０Ｈ）２０３４．５　＋　０．３　ｃ）有意差＝ ｂ）とＣ）とａ）に対して検定ｐ＜０．００１上述のデータは、２３．２５−Ｆ ２１，２５−（０Ｈ）２Ｄ３がビタミンＤ３の循環ホルモン形である１　、２５ −　（ＯＨ）２　Ｄ３と同様に活発な腸のカルシウム輸送促進作用を有すること を示してイル。マタデータは、２３．２５−Ｆ２１．２５−　（ＯＨ）　２Ｄ３ が、薬理学的に高い腸のカルシウム輸送の働きが指示される詩にビタミンＤ３の ホルモン形の代替として用いられることを強く示唆している。

本発明の化合物２３．２３−ジフルオロ−１α、２５−ジヒドロキシコレカルシ フェロールは無菌の非経口溶液として注射あるいは静脈内投与で、経口投与剤の 形で消化管からまた半割として容易に投与することができる。１日当り約０．１ ｇｇからｌＯ，ｇがビタミンＤ様活性に特徴的な生理的カルシウム平衡反応を得 るのに効果的であり、維持投与量としては約ｏ、ｚ５ｇｇが適当である。

これら化合物の投薬剤形は、その技術分野で周知のごとく、その化合物を非毒性 で薬剤として受容可能な担体と混合して調製することができる。そのような担体 は固体でも液体でもよく、例えばコーンスターチ、乳糖、ショ糖、ピーナンッ油 、ゴマ油及び水があげられる。固体の担体を用いる場合には１本化合物の製剤形 態は錠剤、カプセル、粉末、トローチまたは菱形剤でもよい。液体担体を用いる 場合には、製剤形態としては軟ゼラチンカプセル、シロップ、液状懸渦液、エマ ルジョンまたは液剤が可能である。投薬用薬剤中にはまた保存剤、安定剤、湿潤 剤または乳化剤糖の補助剤を含有してもよい。投薬用薬剤はまた他の治療的に価 値のある物質をも含有してよい。

投薬量範囲は示されているが、各対象に投与する量は治療しようとする特定の病 状、個々のケースで得ようとする最終結果並びにこのような薬剤を治療に用いる に際して当業者が知っている他の要因によって特定されるものであることを理解 すべきである。

国際調査報告

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．２３．２３−ジフルオロ−１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３゜２、結晶 形である請求の範囲第１項記載の化合物。 ３．２３．２３−ジフルオロ−２５−ヒドロキシ−ビタミンＤ３分子の１位の炭 素を生体外で酵素的にヒドロキシル化することからなる２３．２３−ジフルオロ −１，２５−ジヒドロキシ−ビタミンＤ３を調製する方法。