JPS6040957A - 抱合型ビリルビンの安定化法 - Google Patents
抱合型ビリルビンの安定化法Info
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- JPS6040957A JPS6040957A JP14944183A JP14944183A JPS6040957A JP S6040957 A JPS6040957 A JP S6040957A JP 14944183 A JP14944183 A JP 14944183A JP 14944183 A JP14944183 A JP 14944183A JP S6040957 A JPS6040957 A JP S6040957A
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- conjugation
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- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/72—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood pigments, e.g. haemoglobin, bilirubin or other porphyrins; involving occult blood
- G01N33/728—Bilirubin; including biliverdin
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は抱合型ビリルビンの安定化法に関するものであ
る。
る。
体液中のビリルビンには1卵胞合型と抱合型があり)抱
合型ビリルビンは為非抱合型ビリルビン1すなわちビリ
ルビンそのものに対し、その側鎖のプ四ピオン酸残基に
水可溶性の化合物(ヒト体液中では主として、グルクロ
ン酸)が結合したものである。これらビリルビンの為特
に血中での動態は1黄痘の鑑別診断のために1その定量
的把握が重要とされてきた。すなわち例えば溶血性黄痕
では非抱合型のビリルビンの血中濃度が上昇し、また閉
塞性質置では抱合型ビリルビンの血中濃度が゛上昇する
。従来の定員法において、直接型ビリルビンと称される
ものは1抱台型ビリルビンの濃度を反映し1間接型ビリ
ルビンと称されるものは、非抱合型ビリルビンに対応し
ている。
合型ビリルビンは為非抱合型ビリルビン1すなわちビリ
ルビンそのものに対し、その側鎖のプ四ピオン酸残基に
水可溶性の化合物(ヒト体液中では主として、グルクロ
ン酸)が結合したものである。これらビリルビンの為特
に血中での動態は1黄痘の鑑別診断のために1その定量
的把握が重要とされてきた。すなわち例えば溶血性黄痕
では非抱合型のビリルビンの血中濃度が上昇し、また閉
塞性質置では抱合型ビリルビンの血中濃度が゛上昇する
。従来の定員法において、直接型ビリルビンと称される
ものは1抱台型ビリルビンの濃度を反映し1間接型ビリ
ルビンと称されるものは、非抱合型ビリルビンに対応し
ている。
体液中のビリルビン及びその分画(直接型および間接型
)の測定法として最も広く用いられている方法は1芳香
族ジアゾニウム塩とビリルビンとの反応により生成する
色素(アゾビリルビンピグメント)の光吸収を利用した
ものであり〜これは1000年代にHIJMANS V
AN DFiN EIGHらにより考案され51930
年代にMAItLOYとILVBLYHおよび、Tl0
NDRA8 S IKとG’R’OFらにより定量法と
して確立されたものである。そして近年1種々の改良法
が実施されているが1いずれも分画法は、溶解性の差を
利用している。すなわちメタノ−)L/−%尿素1ジメ
チルスルホキシド1カフェインと安息香酸1ダイフィリ
ン1非イオン界面活性剤等の促進剤と呼ばれるもの−こ
れらは水系には溶解しにくい非抱合体を可溶化するm−
を添加し、抱合体と非抱合体の総計を発色定量すること
により測定される総ビIJ )レビン値と上記促進剤の
非存在下で測定される抱合体に対応した直接ビリルビン
に分画される。
)の測定法として最も広く用いられている方法は1芳香
族ジアゾニウム塩とビリルビンとの反応により生成する
色素(アゾビリルビンピグメント)の光吸収を利用した
ものであり〜これは1000年代にHIJMANS V
AN DFiN EIGHらにより考案され51930
年代にMAItLOYとILVBLYHおよび、Tl0
NDRA8 S IKとG’R’OFらにより定量法と
して確立されたものである。そして近年1種々の改良法
が実施されているが1いずれも分画法は、溶解性の差を
利用している。すなわちメタノ−)L/−%尿素1ジメ
チルスルホキシド1カフェインと安息香酸1ダイフィリ
ン1非イオン界面活性剤等の促進剤と呼ばれるもの−こ
れらは水系には溶解しにくい非抱合体を可溶化するm−
を添加し、抱合体と非抱合体の総計を発色定量すること
により測定される総ビIJ )レビン値と上記促進剤の
非存在下で測定される抱合体に対応した直接ビリルビン
に分画される。
これら1測定法において用いられる標準液としては1従
来抱金型ビリルビンが入手困離であったために1卵胞合
型ビリルビンを用いて総ビリルビンの検量線を描き1こ
れを直接ビリルビン測定に転用するという方法が実施さ
れてきた。係る方法は)前記促進剤の存在が1アゾビリ
ルビンピグメントの吸光係数に影響しないという仮定の
もとに、直接ビリルビン濃度が算定されることになり、
理論的明確さに欠ける点がある。また実用的側面におい
ても為自動分析機の多くのものは11つの測定項目に対
し対応する標準液があるべきシステムとなっており、直
接ビリルビンの如き、従来対応する標準液として適当な
ものがない場合には、代用標準を用いることが多く行わ
れてきた。
来抱金型ビリルビンが入手困離であったために1卵胞合
型ビリルビンを用いて総ビリルビンの検量線を描き1こ
れを直接ビリルビン測定に転用するという方法が実施さ
れてきた。係る方法は)前記促進剤の存在が1アゾビリ
ルビンピグメントの吸光係数に影響しないという仮定の
もとに、直接ビリルビン濃度が算定されることになり、
理論的明確さに欠ける点がある。また実用的側面におい
ても為自動分析機の多くのものは11つの測定項目に対
し対応する標準液があるべきシステムとなっており、直
接ビリルビンの如き、従来対応する標準液として適当な
ものがない場合には、代用標準を用いることが多く行わ
れてきた。
本発明の目的は直接ビリルビン及び総ビリルビンの各々
の測定に対して使用し得る抱合散ビリルビンを用いた安
定な標準液を提供することである。
の測定に対して使用し得る抱合散ビリルビンを用いた安
定な標準液を提供することである。
一般にビリルビンは)化学的に不安定である。・抱合型
ビリルビンは一%酸化に不安定(ビリベルジンに変化)
)光に比較的安定であり1卵胞合型ビリルビンは1酸化
に比較的安定1光に不安定である〔臨床検査技術全書6
1臨床化学検査l332頁、1980年医学書院発行〕
。定量分析に用いる標準液としては特に安定性が優れて
いることが望まれている。
ビリルビンは一%酸化に不安定(ビリベルジンに変化)
)光に比較的安定であり1卵胞合型ビリルビンは1酸化
に比較的安定1光に不安定である〔臨床検査技術全書6
1臨床化学検査l332頁、1980年医学書院発行〕
。定量分析に用いる標準液としては特に安定性が優れて
いることが望まれている。
最近、ポルフィリン プロダクツ社から1合成ジタウリ
ンビリルビン誘導体\商品名ビリルビンコンジュゲート
が発売されている。このものは1ヒト胆汁から積極され
たビリルビンジグルクロナイドと種々のジアゾ法におい
て同様の反応性を示すことが示された。ところがこのビ
リルビンコンジュゲート水浴液の安定性を検討したとこ
ろ、極めて悪いことが明らかとなった。このビリルビン
コンジュゲートの不安定さは一タウリンに依る誘導体に
限られず、水溶解性を促進するための抱合化を行ったも
の一般に言い得ることがあって1グルクロン酸抱合体も
同様に安定性が悪い。ビリルビン骨格が酸化されて)ビ
リベルジン骨格に変化することは、良く知られている事
実であるから、還元剤の添加により安定化されることは
容易に類推される。事実ビリルビンコンジュゲートの水
溶液に1アスコルビン販1イソアスコルビン酸1ジチオ
スレイトール1システイン、グルタチオン等の還元剤を
添加することにより安定化される。然しなからこれらの
還元剤は1ジアゾ反応を著しく阻害するためビリルビン
標準液としては1十分な安定化を確保するための還元剤
の十分な輩を添加することは適当でない。
ンビリルビン誘導体\商品名ビリルビンコンジュゲート
が発売されている。このものは1ヒト胆汁から積極され
たビリルビンジグルクロナイドと種々のジアゾ法におい
て同様の反応性を示すことが示された。ところがこのビ
リルビンコンジュゲート水浴液の安定性を検討したとこ
ろ、極めて悪いことが明らかとなった。このビリルビン
コンジュゲートの不安定さは一タウリンに依る誘導体に
限られず、水溶解性を促進するための抱合化を行ったも
の一般に言い得ることがあって1グルクロン酸抱合体も
同様に安定性が悪い。ビリルビン骨格が酸化されて)ビ
リベルジン骨格に変化することは、良く知られている事
実であるから、還元剤の添加により安定化されることは
容易に類推される。事実ビリルビンコンジュゲートの水
溶液に1アスコルビン販1イソアスコルビン酸1ジチオ
スレイトール1システイン、グルタチオン等の還元剤を
添加することにより安定化される。然しなからこれらの
還元剤は1ジアゾ反応を著しく阻害するためビリルビン
標準液としては1十分な安定化を確保するための還元剤
の十分な輩を添加することは適当でない。
本発明者らは上記欠点を教養するため)種々鋭意検討し
たところ非イオン性界面活性剤を添加することにより抱
合型ビリルビンが著しく安定化されることを見出し、本
発明に到達した。すなわち本発明は抱合型どりルピンに
非イオン型界面活性剤を共存させることを特徴とする抱
合型ビリルビンの安定化法である。
たところ非イオン性界面活性剤を添加することにより抱
合型ビリルビンが著しく安定化されることを見出し、本
発明に到達した。すなわち本発明は抱合型どりルピンに
非イオン型界面活性剤を共存させることを特徴とする抱
合型ビリルビンの安定化法である。
本発明では非イオン界面活性剤を共存させることにより
抱合型ビリルビンの安定性を著しく向上させることがで
きる。
抱合型ビリルビンの安定性を著しく向上させることがで
きる。
本発明に用いる抱合型ビリルビンとはビリルビ2個のプ
ロピオン酸残基の1個又は2個に1水溶性化合物が結合
したものであり一生体中では1グルクロン酸)タウリン
1硫酸等が結合したものが知られている。本発明では直
接ジアゾ化返応をするために1水溶性化される基であれ
ば何でもよい。
ロピオン酸残基の1個又は2個に1水溶性化合物が結合
したものであり一生体中では1グルクロン酸)タウリン
1硫酸等が結合したものが知られている。本発明では直
接ジアゾ化返応をするために1水溶性化される基であれ
ば何でもよい。
本発明に用いる抱合型ビリルビンは固体でもあるいは溶
液であってもよい。抱合型ビリルビン溶液はpi−1s
、o〜10.5であることが好ましい。
液であってもよい。抱合型ビリルビン溶液はpi−1s
、o〜10.5であることが好ましい。
本発明に用いる非イオン界面活性剤としてはHLB10
〜20であるものが好ましい。具体例としてはポリエチ
レングリコール(PIGと略する)セチルエーテk (
HL B 13.0 ) % P I G −/ ニル
フェニルエーテル、pH!G−アルキルエーテル1PF
IG−ラウリルエーテル、PEG−PPG (ポリプロ
ピレングリコール)共重合体、PEG−Xテアリルエー
テル、商標名パイオニンD −1420(竹本油脂製)
などがある。
〜20であるものが好ましい。具体例としてはポリエチ
レングリコール(PIGと略する)セチルエーテk (
HL B 13.0 ) % P I G −/ ニル
フェニルエーテル、pH!G−アルキルエーテル1PF
IG−ラウリルエーテル、PEG−PPG (ポリプロ
ピレングリコール)共重合体、PEG−Xテアリルエー
テル、商標名パイオニンD −1420(竹本油脂製)
などがある。
本発明に用いる非イオン界面活性剤の添加量は砲台型ビ
リルビン溶液に全して0.2〜10w/v%好ましくは
1〜3 W/v%である。非イオン界面活性剤に還元性
物質1例えばグルタチオン1システイン1アスコルビン
酸1イソアスコルビン酸ナト抱台型および非抱合型ビリ
ルビンのジアゾ発色の色調(最大吸収波長)は、 ’I
fflliRYN−MALIiOY法を端緒とする酸ア
ゾ法においては、蛋白質の存在片により影響(低波長シ
フト)する。したがって血清を検体として行う分析の場
合には該標準液中に蛋白質を共存させることが好ましい
。特に動物またはヒトの正常血清の添加が好ましい。
リルビン溶液に全して0.2〜10w/v%好ましくは
1〜3 W/v%である。非イオン界面活性剤に還元性
物質1例えばグルタチオン1システイン1アスコルビン
酸1イソアスコルビン酸ナト抱台型および非抱合型ビリ
ルビンのジアゾ発色の色調(最大吸収波長)は、 ’I
fflliRYN−MALIiOY法を端緒とする酸ア
ゾ法においては、蛋白質の存在片により影響(低波長シ
フト)する。したがって血清を検体として行う分析の場
合には該標準液中に蛋白質を共存させることが好ましい
。特に動物またはヒトの正常血清の添加が好ましい。
本発明の抱合型ビリルビン溶液は、凍結乾燥した状態で
保管及び流通することが長期間使用し得る状態に保つた
めに好ましい。
保管及び流通することが長期間使用し得る状態に保つた
めに好ましい。
以下1本発明を実施例により具体的に説明する。
実施例中、単に憾とあるのはψIを示す。
実施例 L
次の組成のジタウロ2ビリルビン溶液を作製した。
プリットン・ロビンソン緩衝液(pIi9.>)FiD
TA−2Na O,l禦M ジタウロビリルビン 14 、 zypq/lu添加物
(第1表の通り) 上記溶液作製初期及び250℃にて3日間保管した後に
1総ビリルビン測定試薬(東洋紡績■製“ダイヤカラー
TB””)にて総ビリルビン値を測定し為総ビリルビン
値の保管前後の保持率をめた。その結果は第1表に示す
通りであり1本発明の方法が安定性が旨いことが示され
た。
TA−2Na O,l禦M ジタウロビリルビン 14 、 zypq/lu添加物
(第1表の通り) 上記溶液作製初期及び250℃にて3日間保管した後に
1総ビリルビン測定試薬(東洋紡績■製“ダイヤカラー
TB””)にて総ビリルビン値を測定し為総ビリルビン
値の保管前後の保持率をめた。その結果は第1表に示す
通りであり1本発明の方法が安定性が旨いことが示され
た。
第 1 表
実施例 &
実施例1と同様の組成において1添加物として第2表に
示される種々の界面活性剤を選んだ(添加量2%)。調
製液を40℃に保管して、ビリルビン値の保持率をみた
。
示される種々の界面活性剤を選んだ(添加量2%)。調
製液を40℃に保管して、ビリルビン値の保持率をみた
。
以下余白
但し試料416,17.18は、それぞれシスティン1
グルタチオン1ジチオスレイトール0.01%を追加し
た。
グルタチオン1ジチオスレイトール0.01%を追加し
た。
第2表に示されたようにS種々の非イオン界面活性剤の
添加によりまた1還元性物質を併用することにより1抱
金型ビリルビンの著しい安定化が達成された。
添加によりまた1還元性物質を併用することにより1抱
金型ビリルビンの著しい安定化が達成された。
実施例 &
実施例1と同様の組成で添加物として1システイン0゜
02%1更に1パイオニンD−1420(竹本油脂製非
イオン界面活性剤)の添加量を第3表の如く)変えて安
定性をみた。
02%1更に1パイオニンD−1420(竹本油脂製非
イオン界面活性剤)の添加量を第3表の如く)変えて安
定性をみた。
第 3 表
実施例 春
次の組成の溶液を作製し1凍結乾燥した。
ブリットン・ロビンソン緩衝液 pH9・5マンニトー
ル 2.0チ リピツドセーラムエ(栄研化学製管理血清) 2・咋ア
スコノシビン酸 0.01% 非イオン界面活性剤D’ −14202・0%ジタウロ
ビリルビン 14 、2W/dl凍結乾燥したバイアル
を冷蔵保管した。蒸溜水定試薬〔東洋紡績■製ダイヤカ
ラーTBおよびDB)にて発色せしめた。発色度の安定
性は第1図に示すXIJ < %良好で1総および直接
ビリルビン測定用として安定な測定を行うために十分な
ものであった。
ル 2.0チ リピツドセーラムエ(栄研化学製管理血清) 2・咋ア
スコノシビン酸 0.01% 非イオン界面活性剤D’ −14202・0%ジタウロ
ビリルビン 14 、2W/dl凍結乾燥したバイアル
を冷蔵保管した。蒸溜水定試薬〔東洋紡績■製ダイヤカ
ラーTBおよびDB)にて発色せしめた。発色度の安定
性は第1図に示すXIJ < %良好で1総および直接
ビリルビン測定用として安定な測定を行うために十分な
ものであった。
なお1発色後の吸収極大は1総ビリルビン560nm1
直接ビリルビン54021mで、患者血清のものと一致
した。
直接ビリルビン54021mで、患者血清のものと一致
した。
実施例 5
実施例4で作製した標準液を市販試薬キットを用いて発
色した。第4表に示すように総ビリルビン1直接ビリル
ビン共1良好な発色を示した。
色した。第4表に示すように総ビリルビン1直接ビリル
ビン共1良好な発色を示した。
第4表
第1図は1本発明によって作製された砲金型ビリルビン
溶液の安定性を示す。図中、のは総ビリルビンの場合1
■は直接ビリルビンの場合を示す。 特許出願人 東洋紡績株式会社
溶液の安定性を示す。図中、のは総ビリルビンの場合1
■は直接ビリルビンの場合を示す。 特許出願人 東洋紡績株式会社
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 ■ 抱合型ビリルビン非イオン型界面活性剤を共存させるこ
とを特徴とする抱合型ビリルビンの安定化法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP14944183A JPS6040957A (ja) | 1983-08-15 | 1983-08-15 | 抱合型ビリルビンの安定化法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP14944183A JPS6040957A (ja) | 1983-08-15 | 1983-08-15 | 抱合型ビリルビンの安定化法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS6040957A true JPS6040957A (ja) | 1985-03-04 |
JPH0154669B2 JPH0154669B2 (ja) | 1989-11-20 |
Family
ID=15475181
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP14944183A Granted JPS6040957A (ja) | 1983-08-15 | 1983-08-15 | 抱合型ビリルビンの安定化法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS6040957A (ja) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0484133A2 (en) * | 1990-10-30 | 1992-05-06 | Wako Pure Chemical Industries Ltd | Method for measuring bilirubin |
EP0541729A1 (en) * | 1990-10-22 | 1993-05-19 | Abbott Lab | STABLE OXYGEN-FREE REAGENT SOLUTION FOR DIAGNOSTICS. |
US5872009A (en) * | 1994-12-02 | 1999-02-16 | Nitto Boseki Co., Ltd. | Method for measuring bilirubin |
-
1983
- 1983-08-15 JP JP14944183A patent/JPS6040957A/ja active Granted
Cited By (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0541729A1 (en) * | 1990-10-22 | 1993-05-19 | Abbott Lab | STABLE OXYGEN-FREE REAGENT SOLUTION FOR DIAGNOSTICS. |
EP0541729A4 (en) * | 1990-10-22 | 1994-09-28 | Abbott Lab | Stabilized anoxic diagnostic reagent solution |
EP0484133A2 (en) * | 1990-10-30 | 1992-05-06 | Wako Pure Chemical Industries Ltd | Method for measuring bilirubin |
US5449623A (en) * | 1990-10-30 | 1995-09-12 | Wako Pure Chemical Industries, Ltd. | Method for measuring bilirubin |
EP0686849A3 (ja) * | 1990-10-30 | 1996-01-17 | Wako Pure Chem Ind Ltd | |
US5563072A (en) * | 1990-10-30 | 1996-10-08 | Wako Pure Chemical Industries, Ltd. | Method for measuring bilirubin |
US5872009A (en) * | 1994-12-02 | 1999-02-16 | Nitto Boseki Co., Ltd. | Method for measuring bilirubin |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPH0154669B2 (ja) | 1989-11-20 |
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