JPS60259187A - プラスミノーゲン活性化因子を増収する方法 - Google Patents
プラスミノーゲン活性化因子を増収する方法Info
- Publication number
- JPS60259187A JPS60259187A JP60081493A JP8149385A JPS60259187A JP S60259187 A JPS60259187 A JP S60259187A JP 60081493 A JP60081493 A JP 60081493A JP 8149385 A JP8149385 A JP 8149385A JP S60259187 A JPS60259187 A JP S60259187A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- concentration
- present
- plasminogen activator
- cell line
- cells
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
良用座背ｌ
プラスミノゲン活性化因子（ＰＡ）は、２−頻ブラスミ
ン分子を生成する、プテスミノゲン中のＡｒｇｓｓａ
Ｖａ１５ｅ１ペプチド結合ノ加水分解によりその作用を
及ぼすセリンプロテアーゼである。プラスミンは一般的
タンパク質分解活性を有し、そして循環する血液の生理
学的環境において、主としてフィブリンを攻撃する。プ
ラスミノゲン活性化因子は繊維素溶解系において重要な
役割を演じ、脈管の内部または外部の血栓、凝塊または
ｍ維素沈着物を溶解することにより、血栓塞栓症の脈管
の病気の発生およびその克服に強く影響を及ぼす。
ン分子を生成する、プテスミノゲン中のＡｒｇｓｓａ
Ｖａ１５ｅ１ペプチド結合ノ加水分解によりその作用を
及ぼすセリンプロテアーゼである。プラスミンは一般的
タンパク質分解活性を有し、そして循環する血液の生理
学的環境において、主としてフィブリンを攻撃する。プ
ラスミノゲン活性化因子は繊維素溶解系において重要な
役割を演じ、脈管の内部または外部の血栓、凝塊または
ｍ維素沈着物を溶解することにより、血栓塞栓症の脈管
の病気の発生およびその克服に強く影響を及ぼす。
プラスミノゲン活性化因子は、体液、例えば、血液およ
び尿、および種々の組織学的源の充実組織から弔離され
てきた。哺乳動物の細胞培養物もプラスミノゲン活性化
因子を生産することが知られている。同一の動物の異る
組織から誘導される細胞系統（ｃｅｌｌ １ｉｎｅ）に
より、同一・腫瘍形成性物質（ｏｎｃｏｇｅｎｉｃ ａ
ｇ ｅ ｎｔ）で独立に形質転換された単一の型の細
胞から誘導される同一の組織学的をの細胞により、生産
されるプラスミノゲン活性化因子の量において大きい差
が存在しうる。
び尿、および種々の組織学的源の充実組織から弔離され
てきた。哺乳動物の細胞培養物もプラスミノゲン活性化
因子を生産することが知られている。同一の動物の異る
組織から誘導される細胞系統（ｃｅｌｌ １ｉｎｅ）に
より、同一・腫瘍形成性物質（ｏｎｃｏｇｅｎｉｃ ａ
ｇ ｅ ｎｔ）で独立に形質転換された単一の型の細
胞から誘導される同一の組織学的をの細胞により、生産
されるプラスミノゲン活性化因子の量において大きい差
が存在しうる。
増大した量のプラスミノゲン活性化因子を生産すること
ができる細胞を得ること、および工業的規模でプラスミ
ノゲン活性化因子を生産する動物細胞を使用する方法を
改良する技術を確立することが緊急に要求されている。
ができる細胞を得ること、および工業的規模でプラスミ
ノゲン活性化因子を生産する動物細胞を使用する方法を
改良する技術を確立することが緊急に要求されている。
ｒ る １
欧州特許出願１１３，３１９ Ａ２号は、血清および他
の高分子の生長因子の不存在で増殖することができる人
間の細胞系統ならびにこのような細胞系統を生産するた
めに利用する方法を開示している。欧州特許出願１１２
，１７４ Ａ ２ 号は、広い範囲の懸濁液および単層
の細胞を生長することができる血清不合培地を記載して
おり、前記培地はフェツイン、トランスフェリンおよび
置換ホスファチジル−コリンを含有する。
の高分子の生長因子の不存在で増殖することができる人
間の細胞系統ならびにこのような細胞系統を生産するた
めに利用する方法を開示している。欧州特許出願１１２
，１７４ Ａ ２ 号は、広い範囲の懸濁液および単層
の細胞を生長することができる血清不合培地を記載して
おり、前記培地はフェツイン、トランスフェリンおよび
置換ホスファチジル−コリンを含有する。
生物学化学雑誌（Ｊ 、Ｂｉ ｏ ｌ 、Ｃｈｅｍ、。
２５６．７０３５−７０４１ （１９８１）中に教示さ
れているように、新生細胞源の人間の細胞系統、例えば
、色素細胞腫細胞、は実質的の量のプラスミノゲン活性
化因子を生産することができることは知られている。
れているように、新生細胞源の人間の細胞系統、例えば
、色素細胞腫細胞、は実質的の量のプラスミノゲン活性
化因子を生産することができることは知られている。
悪性細胞系統、例えば、頚部癌、喉頭癌、口腔の表皮細
胞癌、結腸および直腸癌の細胞はプラスミノゲン活性化
因子を生産することが示された１カ子細胞生化学（Ｍｏ
ｌｅｃｕｌａｒ Ｃｅ１ｌｕｌａｒ Ｂｉｏｃｈｅｍｉ
ｓｔｒ ）、ｖ。
胞癌、結腸および直腸癌の細胞はプラスミノゲン活性化
因子を生産することが示された１カ子細胞生化学（Ｍｏ
ｌｅｃｕｌａｒ Ｃｅ１ｌｕｌａｒ Ｂｉｏｃｈｅｍｉ
ｓｔｒ ）、ｖ。
１．１５．Ｎｏ、２，１４９−１５３ページ（１９７７
）参照］。
）参照］。
２種類の準安定前立腺癌の細胞系統、ＰＣ−３およびＤ
Ｕ−１４５，は血清、ホルモン類または生長因子を含有
しない定められた培地中の長期間の培養において生長し
たことが報告された［Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、
ｓｃｉ、、Ｖｏ、７８、Ｎｏ、９．５６７３−５６７６
（１９８１）１゜ 準安定潜在的腫瘍発生性の漸進的損失は、人間の表皮細
胞癌の生体外の順次の継代接種後に認められた。しかし
ながら、プラスミノゲン活性化因子に関すると、高い水
準の生産は腫瘍発生の保持および転位によく相関関係を
もっていた［癌研究（Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅ５ａｅｒｃｈ
）、４０．２３１０−２３１５ （１９８０）］。
Ｕ−１４５，は血清、ホルモン類または生長因子を含有
しない定められた培地中の長期間の培養において生長し
たことが報告された［Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、
ｓｃｉ、、Ｖｏ、７８、Ｎｏ、９．５６７３−５６７６
（１９８１）１゜ 準安定潜在的腫瘍発生性の漸進的損失は、人間の表皮細
胞癌の生体外の順次の継代接種後に認められた。しかし
ながら、プラスミノゲン活性化因子に関すると、高い水
準の生産は腫瘍発生の保持および転位によく相関関係を
もっていた［癌研究（Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅ５ａｅｒｃｈ
）、４０．２３１０−２３１５ （１９８０）］。
］へ−ンズＢａｒｎｅｓ）およびサトウ（Ｓａｔｏ）は
、゛血清不合培地中の人間の哺乳動物腫瘍細胞系統の生
長（Ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ａ Ｈｕｍａｎ Ｍａｍｍａ
ｒｙ Ｔｕｍｍｏｕｒ Ｃｅ１ｌ Ｌｉｎｅ ｉｎ ａ
Ｓｅｒｕｍ−Ｆｒｅｅ Ｍｅｄｉｕｍ）” （Ｎａｔ
ｕｒｅ、０Ｃｔｏｂｅｒ １９７９）中で、インシュリ
ン、トランスフェリン、表皮細胞生長因子、プロスタグ
ランジンＦ および低温不溶生グロブリンを補充２α した血清不合培地中のＭＣＦ−７細胞の生長を報告して
いる。この研究において使用する合成栄養培地はハム（
Ｈａｍ）のＦ−１２とダルベツコ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ）
変性イーグル（Ｅａｇｌｅ）の培地とのｌ：ｌ混合物で
あり、抗生物質、重炭酸ナトリウム、ＨＥＰＥＳおよび
ナトリウムセレナイトが補充されている。
、゛血清不合培地中の人間の哺乳動物腫瘍細胞系統の生
長（Ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ａ Ｈｕｍａｎ Ｍａｍｍａ
ｒｙ Ｔｕｍｍｏｕｒ Ｃｅ１ｌ Ｌｉｎｅ ｉｎ ａ
Ｓｅｒｕｍ−Ｆｒｅｅ Ｍｅｄｉｕｍ）” （Ｎａｔ
ｕｒｅ、０Ｃｔｏｂｅｒ １９７９）中で、インシュリ
ン、トランスフェリン、表皮細胞生長因子、プロスタグ
ランジンＦ および低温不溶生グロブリンを補充２α した血清不合培地中のＭＣＦ−７細胞の生長を報告して
いる。この研究において使用する合成栄養培地はハム（
Ｈａｍ）のＦ−１２とダルベツコ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ）
変性イーグル（Ｅａｇｌｅ）の培地とのｌ：ｌ混合物で
あり、抗生物質、重炭酸ナトリウム、ＨＥＰＥＳおよび
ナトリウムセレナイトが補充されている。
これらの参考文献のいずれも、プラスミノゲン活性化因
子分泌細胞からのプラスミノゲン活性化因子の収量を、
胎児子牛血清を木質的に含有しない培地中でこのような
細胞を生長させることにより、増加できることを示唆ま
たは教示していない。
子分泌細胞からのプラスミノゲン活性化因子の収量を、
胎児子牛血清を木質的に含有しない培地中でこのような
細胞を生長させることにより、増加できることを示唆ま
たは教示していない。
魚肌ｄ若
本発明は、プラスミノゲン活性化因子生産性細胞系統か
ら得られるプラスミノゲン活性化因子（ＦＡ）の収量を
増加する方法、および比較的多い量のプラスミノゲン活
性化因子を生産することができる細胞系統に関する。こ
の方法は、胎児子牛血清（ウシ血清）を含有する適当な
生長培地中で生長するプラスミノゲン活性化因子生産性
細胞を生長させ、そして減少する量の胎児子牛血清を含
有する前記生長培地の１系列を通して前記細胞な継代接
１ｆｔ（ｐａｓｓ）することにより胎児子牛血清を木質
的含有しない前記適当な培地中で前記細胞を生長させる
ことを包含する。
ら得られるプラスミノゲン活性化因子（ＦＡ）の収量を
増加する方法、および比較的多い量のプラスミノゲン活
性化因子を生産することができる細胞系統に関する。こ
の方法は、胎児子牛血清（ウシ血清）を含有する適当な
生長培地中で生長するプラスミノゲン活性化因子生産性
細胞を生長させ、そして減少する量の胎児子牛血清を含
有する前記生長培地の１系列を通して前記細胞な継代接
１ｆｔ（ｐａｓｓ）することにより胎児子牛血清を木質
的含有しない前記適当な培地中で前記細胞を生長させる
ことを包含する。
比較的大量のプラスミノゲン活性化因子を生産すること
のできる生物学的に純粋な組織培養物は、人間の前立腺
の腺癌［アメリカン・タイプ・カルチャーコレクション
（ＡＴＣＣ）（ｔ ｈｅＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ
Ｃｕ１ｔｕｒｅＣｏ １１ ｅｃｔ ｉ ｏｎＫ）から
入手できる、細胞受託物系統（ＣＲＣ）−１４３５と表
示］。本発明の方法に従い適応させたとき、比較的大量
のプラスミノゲン活性化因子を生産することのできる生
物学的に純粋な組織培養物はＡＴＣＣＣＲＣ−１６２２
およびＡＴＣＣＣＲＣ−１５７９である。
のできる生物学的に純粋な組織培養物は、人間の前立腺
の腺癌［アメリカン・タイプ・カルチャーコレクション
（ＡＴＣＣ）（ｔ ｈｅＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ
Ｃｕ１ｔｕｒｅＣｏ １１ ｅｃｔ ｉ ｏｎＫ）から
入手できる、細胞受託物系統（ＣＲＣ）−１４３５と表
示］。本発明の方法に従い適応させたとき、比較的大量
のプラスミノゲン活性化因子を生産することのできる生
物学的に純粋な組織培養物はＡＴＣＣＣＲＣ−１６２２
およびＡＴＣＣＣＲＣ−１５７９である。
登別１４１１に説用
プラスミノゲン活性化因子は培養において腫瘍細胞によ
り生産することができることはよく知られている。本発
明において使用することのできる哺乳動物からの腫瘍細
胞の例は、色素細胞腫、前立腺、***（ｂｒｅａｓｔ）
、結腸、卵巣、膵臓、頚部、直腸、子宮内膜および線維
芽細胞の腫瘍細胞を包含する。好ましい細胞系統は、哺
乳動物の腫瘍細胞は、色素細胞腫、前立腺、***、結腸
、卵巣、膵臓および子宮内膜である。適当な癌細胞系統
は、受託所、例えば、アメリカンΦタイフ令カルチャー
コレクション（ＡＴＣＣ）（ｔ ｈｅ Ａｍｅｒｉｃａ
ｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕ１ｔｕｒｅ Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ
、１２３０１ Ｐａｒｋｌａｗｎ Ｄｒｉｖｅ、Ｒｏｃ
ｋｖｉｌｌｅ。
り生産することができることはよく知られている。本発
明において使用することのできる哺乳動物からの腫瘍細
胞の例は、色素細胞腫、前立腺、***（ｂｒｅａｓｔ）
、結腸、卵巣、膵臓、頚部、直腸、子宮内膜および線維
芽細胞の腫瘍細胞を包含する。好ましい細胞系統は、哺
乳動物の腫瘍細胞は、色素細胞腫、前立腺、***、結腸
、卵巣、膵臓および子宮内膜である。適当な癌細胞系統
は、受託所、例えば、アメリカンΦタイフ令カルチャー
コレクション（ＡＴＣＣ）（ｔ ｈｅ Ａｍｅｒｉｃａ
ｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕ１ｔｕｒｅ Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ
、１２３０１ Ｐａｒｋｌａｗｎ Ｄｒｉｖｅ、Ｒｏｃ
ｋｖｉｌｌｅ。
ＭＤ ２０８５２）から入手可能であり、あるいは大学
、病院または研究所における多数の研究者から得ること
ができる。癌細胞系統の同一性は、非常に重要というわ
けではない；本発明の方法はプラスミ／ゲン活性化因子
生産性細胞から得られるプラスミノゲン活性化因子の縦
を約５〜約６０倍程度に多く増加させることができる。
、病院または研究所における多数の研究者から得ること
ができる。癌細胞系統の同一性は、非常に重要というわ
けではない；本発明の方法はプラスミ／ゲン活性化因子
生産性細胞から得られるプラスミノゲン活性化因子の縦
を約５〜約６０倍程度に多く増加させることができる。
ここで示すように、プラスミノーゲン活性化因子の好ま
しい高い収量の生産体は、人間の前立腺の腺癌、ＡＴＣ
ＣＣＲＬ−１４３５である。本発明の方法に従い適応さ
せたとき、比較的大量のプラスミノゲン活性化因子を生
産することのできる生物学的に純粋な組織培養物はＡＴ
ＣＣＣＲＣ−１６２２およびＡＴＣＣＣＲＣ−１５７９
である。
しい高い収量の生産体は、人間の前立腺の腺癌、ＡＴＣ
ＣＣＲＬ−１４３５である。本発明の方法に従い適応さ
せたとき、比較的大量のプラスミノゲン活性化因子を生
産することのできる生物学的に純粋な組織培養物はＡＴ
ＣＣＣＲＣ−１６２２およびＡＴＣＣＣＲＣ−１５７９
である。
ここで使用するとき、「適当な生長培地」とい用語は、
ウェイマウス（Ｗａ ｙｍｏ ｕ ｔ ｈ） （７）Ｍ
Ｂ ７５２ ／ １、ダルベツコ最小必須培地（Ｄｕｌ
ｂｅｃｃｏ Ｍｉｎｉｍａｌ Ｅｓ５ｅｎｔｉａｌ Ｍ
ｅ ｄ ｉ ｕｍ）（ＭＥＮ）およびハム（Ｈａｍ）の
Ｆ−１２培地のそれぞれ約１：１：ｌ〜約３： １ ：
２の比（重量）で含有する、以後詳述するような培地を
意味する。
ウェイマウス（Ｗａ ｙｍｏ ｕ ｔ ｈ） （７）Ｍ
Ｂ ７５２ ／ １、ダルベツコ最小必須培地（Ｄｕｌ
ｂｅｃｃｏ Ｍｉｎｉｍａｌ Ｅｓ５ｅｎｔｉａｌ Ｍ
ｅ ｄ ｉ ｕｍ）（ＭＥＮ）およびハム（Ｈａｍ）の
Ｆ−１２培地のそれぞれ約１：１：ｌ〜約３： １ ：
２の比（重量）で含有する、以後詳述するような培地を
意味する。
この方法は１．プラスミノゲン活性化因子を生産する親
の癌細胞系統を選択し、そしてこの細胞系統を最初に約
５〜約２０％の胎児子牛血清を含有する適当な生長培地
中で全面生長（ｃｏｎｆｌｕｅ ｎ ｃ ｙ）に生長さ
せることを包含する。細胞系統が全面生長に到達後、細
胞を、通常トリズシン化により取り出し、そして減少す
る量の胎児子牛血清を含有するｌ系列の適当な生長培地
中で継代培養（ｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅ）する。胎児子牛
血清の取り出しの速度は、子牛血清を順次に減少し、そ
して細胞生長の生育性を検査することにより容易に決定
することができる。例えば、親細胞をほぼ１０％の胎児
子牛血清を含有する適当な生長培地中で全面生長に生長
させることができる。
の癌細胞系統を選択し、そしてこの細胞系統を最初に約
５〜約２０％の胎児子牛血清を含有する適当な生長培地
中で全面生長（ｃｏｎｆｌｕｅ ｎ ｃ ｙ）に生長さ
せることを包含する。細胞系統が全面生長に到達後、細
胞を、通常トリズシン化により取り出し、そして減少す
る量の胎児子牛血清を含有するｌ系列の適当な生長培地
中で継代培養（ｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅ）する。胎児子牛
血清の取り出しの速度は、子牛血清を順次に減少し、そ
して細胞生長の生育性を検査することにより容易に決定
することができる。例えば、親細胞をほぼ１０％の胎児
子牛血清を含有する適当な生長培地中で全面生長に生長
させることができる。
次いで、細胞を取り出し、そしてほぼ５％の胎児子牛血
清を含有する適当な生長培地中で少なくとも１回の継代
接種（ｐａｓｓａｇｅ）で継代培養する。細胞が全面生
長に到達した後、細胞を再び取り出し、はぼ２．５％の
胎児子牛血清を含有する適当な生長培地中で少なくとも
１回の継代接種で継代培養する。この手順を使用する適
当な生長培地が胎児子牛血清を本質的に含有しなくなる
まで反復する。本発明において、２倍のファクターの順
次の減少は好ましい方法であることがわかった。
清を含有する適当な生長培地中で少なくとも１回の継代
接種（ｐａｓｓａｇｅ）で継代培養する。細胞が全面生
長に到達した後、細胞を再び取り出し、はぼ２．５％の
胎児子牛血清を含有する適当な生長培地中で少なくとも
１回の継代接種で継代培養する。この手順を使用する適
当な生長培地が胎児子牛血清を本質的に含有しなくなる
まで反復する。本発明において、２倍のファクターの順
次の減少は好ましい方法であることがわかった。
商業的に入手可能な生長培地の種々の組み合わせは本発
明における使用に適することが発見された。しかしなが
ら、胎児子牛血清の濃度が減少するにつれて、本発明の
方法において使用する適当な生長培地は相応して次の生
長因子を補充しなくてはならない：フェツイン（ｆｅｔ
ｕｆｎ）、ウシ血清アルブミン、インシュリン、トラン
スフェリン、５α−ジヒドロテストステロンおよびデキ
サメタソン（ｄｅｘａｍｅｔ ｈａｓｏｎｅ）、これら
の生長因子を添加しなくてはならない、胎児子牛血清の
順次の減少の間の時点は、当業者により容易に決定する
ことができ、そして培養する細胞系統のタイプおよび培
養を老雄している特定の条件のような因子に依存して変
化するであろう。
明における使用に適することが発見された。しかしなが
ら、胎児子牛血清の濃度が減少するにつれて、本発明の
方法において使用する適当な生長培地は相応して次の生
長因子を補充しなくてはならない：フェツイン（ｆｅｔ
ｕｆｎ）、ウシ血清アルブミン、インシュリン、トラン
スフェリン、５α−ジヒドロテストステロンおよびデキ
サメタソン（ｄｅｘａｍｅｔ ｈａｓｏｎｅ）、これら
の生長因子を添加しなくてはならない、胎児子牛血清の
順次の減少の間の時点は、当業者により容易に決定する
ことができ、そして培養する細胞系統のタイプおよび培
養を老雄している特定の条件のような因子に依存して変
化するであろう。
細胞の生存性がそうでなければ胎児子牛血清の濃度の減
少のために脅かされるような時点に、生長因子を添加し
なければならない、ということで十分である：しかしな
がら、適当な培地が細胞の生長を維持するために十分な
濃度の胎児子牛血清を含有するとき、上に記載した生長
因子の添加は不必要であり、そして引き続いて適当な生
長培地中で細胞を生長させるとき困難の導く。
少のために脅かされるような時点に、生長因子を添加し
なければならない、ということで十分である：しかしな
がら、適当な培地が細胞の生長を維持するために十分な
濃度の胎児子牛血清を含有するとき、上に記載した生長
因子の添加は不必要であり、そして引き続いて適当な生
長培地中で細胞を生長させるとき困難の導く。
ここで記載するように使用するために適当な生長培地は
、ウェイマウス（Ｗａｙｍｏｕｔｈ）のＭＢ７５２／ｌ
培地、ダルベ、７＝＋（ＤｕｌｂｅｃＣｏ）ＭＥＮおよ
びハム（Ｈａｍ）のＦ−１２培地（ＧＩＢＣＯＬａｂｏ
ｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｇｒａｎｄ ｌ５ｌａｎｄ、Ｎｅｗ
Ｙｏｗｋから商業的に入手できる）を−緒に混合する
ことにより得ることができる。比（重量）はそれぞれ１
：１＝１〜３：１：２の範囲であることができる。
、ウェイマウス（Ｗａｙｍｏｕｔｈ）のＭＢ７５２／ｌ
培地、ダルベ、７＝＋（ＤｕｌｂｅｃＣｏ）ＭＥＮおよ
びハム（Ｈａｍ）のＦ−１２培地（ＧＩＢＣＯＬａｂｏ
ｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｇｒａｎｄ ｌ５ｌａｎｄ、Ｎｅｗ
Ｙｏｗｋから商業的に入手できる）を−緒に混合する
ことにより得ることができる。比（重量）はそれぞれ１
：１＝１〜３：１：２の範囲であることができる。
好ましい培地、以後“ＳＹＣ”培地という、はウェイマ
ウス（Ｗａｙｍｏｕｔｈ）のＭＢ７５２／ｌ、ダルヘラ
＋ （Ｄ ｕ ｌ ｂ ｅ ｃ ｃ ｏ） ＭＥＮおよ
びハム（Ｈａｍ）のＦ−１２培地のそれぞれ１：ｌ：ｌ
（重量）混合物から構成されている。
ウス（Ｗａｙｍｏｕｔｈ）のＭＢ７５２／ｌ、ダルヘラ
＋ （Ｄ ｕ ｌ ｂ ｅ ｃ ｃ ｏ） ＭＥＮおよ
びハム（Ｈａｍ）のＦ−１２培地のそれぞれ１：ｌ：ｌ
（重量）混合物から構成されている。
細胞の生長は、使用する適当な培地がＳＹｃ培地である
とき、最適であることが観察された。
とき、最適であることが観察された。
ウェイマウス（Ｗａｙｍｏｕｔ ｈ） のＭＢ７５２／
１の完全な不存在において、細胞の生長は大きく遅延さ
れる。これらの培地は表Ｉに示すような組成を有する。
１の完全な不存在において、細胞の生長は大きく遅延さ
れる。これらの培地は表Ｉに示すような組成を有する。
前述のように、胎児子牛血清の濃度が順次に各継代接種
毎に減少するにつれて、適当な生長培地を５０〜１５０
ｍｇ／ｌのフェツイン；５０〜１５０ｍｇ／ｌのウシ血
清アルブミン；５〜１０ｍ ｇ ／ １のインシュリン
；５〜４０ｍｇ／ｌのトランスフェリン；５〜２００Ｊ
Ｌｇ／ｌの５α−ジヒドロテストステロン；そして５０
〜２００μｇ／ｌのデキサメタソンを補充することが必
要になる。インシュリンおよびトラスフェリンは重要な
生長因子であり、それらが存在しないと、それ以外のす
べての生長因子を添加して適当な生長培地を補充した、
１回の継代接種後に細胞は死ぬであろうことが観察され
た。
毎に減少するにつれて、適当な生長培地を５０〜１５０
ｍｇ／ｌのフェツイン；５０〜１５０ｍｇ／ｌのウシ血
清アルブミン；５〜１０ｍ ｇ ／ １のインシュリン
；５〜４０ｍｇ／ｌのトランスフェリン；５〜２００Ｊ
Ｌｇ／ｌの５α−ジヒドロテストステロン；そして５０
〜２００μｇ／ｌのデキサメタソンを補充することが必
要になる。インシュリンおよびトラスフェリンは重要な
生長因子であり、それらが存在しないと、それ以外のす
べての生長因子を添加して適当な生長培地を補充した、
１回の継代接種後に細胞は死ぬであろうことが観察され
た。
次の実施例により、本発明をさらに説明する。
実施１」
受託所から受取った後、人間の前立腺の腺癌、ＡＴＣＣ
ＣＲＬ−１４３５、をアールの最小必須培地（Ｅａｒｌ
ｅ’ｓ Ｍｉｎｉｍａｌ Ｅｓ５ｅ、ｎｔ ｉａｌ Ｍ
ｅｊｉｕｍ） （ＭＥＭ） （ＧＩＢＣＯから商業的に
入手できる）中で全面生長に生長させることにより安定
化させた。この手順は次のように実施した。２５ｍ１の
ＭＥＭおよび１０％の胎児子牛血清を１７５ｍ１容の培
養フラスコに入れ、３７℃において５％のＣＯ□雰囲気
中で維持し、そして５Ｘ１０Ｓの上の腺癌細胞を添加し
た。親細胞をフラスコから５ｍｌの部分の０．２５％の
トリプシンの添加により取り出した。
ＣＲＬ−１４３５、をアールの最小必須培地（Ｅａｒｌ
ｅ’ｓ Ｍｉｎｉｍａｌ Ｅｓ５ｅ、ｎｔ ｉａｌ Ｍ
ｅｊｉｕｍ） （ＭＥＭ） （ＧＩＢＣＯから商業的に
入手できる）中で全面生長に生長させることにより安定
化させた。この手順は次のように実施した。２５ｍ１の
ＭＥＭおよび１０％の胎児子牛血清を１７５ｍ１容の培
養フラスコに入れ、３７℃において５％のＣＯ□雰囲気
中で維持し、そして５Ｘ１０Ｓの上の腺癌細胞を添加し
た。親細胞をフラスコから５ｍｌの部分の０．２５％の
トリプシンの添加により取り出した。
次いで、上の安定化手順からの親細胞を、前もって準備
した量の１０％の胎児子牛血清を含有するＳＹＣ培地へ
添加し、そして３７℃で維持した。細胞はほぼ１週で全
面生長に到達し、その後それらを前述のようにトリプシ
ンで取り出し、そしである量の５％の胎児子牛血清を含
有するＳＹＣ培地へ添加した。細胞を再び、全面生長に
到達するまで、３７℃に維持した。この手順をそれぞれ
２．５％および１．２５％の胎児子牛血清を含有するＳ
ＹＣ培地を使用して２回反復した。１゜２５％の胎児子
牛血清濃度において、フェツイン（７５ｍｇ／ｍｌ）；
ウシ血清アルブミン（７５ｍｇ／ｍｌ）；インシュリフ
（８ｍｇ／ｌ）； トランスフェリン（２５ｍｇ／ｌ
）； ５α〜ジヒドロテストステロン（１００μｇ／ｌ
）およびデキサメタソン（１００ＩＬｇ／ｌ）で補充す
る。細胞はほぼ１０日で全面生長に到達した。
した量の１０％の胎児子牛血清を含有するＳＹＣ培地へ
添加し、そして３７℃で維持した。細胞はほぼ１週で全
面生長に到達し、その後それらを前述のようにトリプシ
ンで取り出し、そしである量の５％の胎児子牛血清を含
有するＳＹＣ培地へ添加した。細胞を再び、全面生長に
到達するまで、３７℃に維持した。この手順をそれぞれ
２．５％および１．２５％の胎児子牛血清を含有するＳ
ＹＣ培地を使用して２回反復した。１゜２５％の胎児子
牛血清濃度において、フェツイン（７５ｍｇ／ｍｌ）；
ウシ血清アルブミン（７５ｍｇ／ｍｌ）；インシュリフ
（８ｍｇ／ｌ）； トランスフェリン（２５ｍｇ／ｌ
）； ５α〜ジヒドロテストステロン（１００μｇ／ｌ
）およびデキサメタソン（１００ＩＬｇ／ｌ）で補充す
る。細胞はほぼ１０日で全面生長に到達した。
次いで、胎児子牛血清が存在しない以外、１゜２５％の
胎児子牛血清の継代接種におけるのと同一の生長因子を
含有するＳＹＣ培地中に細胞を継代接種した。細胞はほ
ぼ１週で全面生長に到達した。
胎児子牛血清の継代接種におけるのと同一の生長因子を
含有するＳＹＣ培地中に細胞を継代接種した。細胞はほ
ぼ１週で全面生長に到達した。
次いで、ヒの細胞を含有子牛血清を含有しないＳＹＣ培
地（上と同一の生長因子を含有する）を通して１０回継
代接種して、細胞系統を安定化した。安定化の決定は、
各継代接種の間開−の生長パターンおよび生産されるプ
ラスミノゲン活性化因子（ＦＡ）の量を観測することに
より達成した。１０回の継代接種後、生物学的に純粋な
変更された全面生長細胞（ＰＣ−３ｆと表示、そして受
託番号ＣＲＬ−８５３９でＡＴＣＣに受託された）を、
次の手順によりプラスミノゲン活性化因子の生産につい
て評価した［化学的繊維素溶解および血栓溶解における
進歩（Ｐｒｏ ｒｅｓｓｉｎ Ｆｉｂｒｉｎｏｌ ｓｉ
ｓ ａｎｄ 工］ｏｒｏｍｂｏｌ ５ｉｓ）、Ｖｏ、３
，３１５−３２２ページに記載されている］、。
地（上と同一の生長因子を含有する）を通して１０回継
代接種して、細胞系統を安定化した。安定化の決定は、
各継代接種の間開−の生長パターンおよび生産されるプ
ラスミノゲン活性化因子（ＦＡ）の量を観測することに
より達成した。１０回の継代接種後、生物学的に純粋な
変更された全面生長細胞（ＰＣ−３ｆと表示、そして受
託番号ＣＲＬ−８５３９でＡＴＣＣに受託された）を、
次の手順によりプラスミノゲン活性化因子の生産につい
て評価した［化学的繊維素溶解および血栓溶解における
進歩（Ｐｒｏ ｒｅｓｓｉｎ Ｆｉｂｒｉｎｏｌ ｓｉ
ｓ ａｎｄ 工］ｏｒｏｍｂｏｌ ５ｉｓ）、Ｖｏ、３
，３１５−３２２ページに記載されている］、。
１００ｐｌの部分の培養流体（全面生長後に得た）を１
００μｍのヒトのプラスミノゲン（０゜３３ｍｇ／ｍｌ
）と−緒に３７℃において１５分間インキュベーション
し、その後２５０ＩＬｌのトリス（Ｔｒｉｓ）緩衝液ｃ
ｏ、ｉモルのトリス；０ 、２モルｃｙ）ＮａＣｌ ；
ｐＨ７、４）および２５０川１（７）トリペプチド基
質（Ｖａｌｅｕ−１ｙｓ−ｐ−ｎｉｔｒｏ−ａｎｉｌｉ
ｄｅ；Ｋａｂｉ 。
００μｍのヒトのプラスミノゲン（０゜３３ｍｇ／ｍｌ
）と−緒に３７℃において１５分間インキュベーション
し、その後２５０ＩＬｌのトリス（Ｔｒｉｓ）緩衝液ｃ
ｏ、ｉモルのトリス；０ 、２モルｃｙ）ＮａＣｌ ；
ｐＨ７、４）および２５０川１（７）トリペプチド基
質（Ｖａｌｅｕ−１ｙｓ−ｐ−ｎｉｔｒｏ−ａｎｉｌｉ
ｄｅ；Ｋａｂｉ 。
Ｓｔ ｏｃｋｈｏ’１ｍ、Ｓｗｅｄｅｎ）を添加した。
この混合物をさらに３分間インキュベーションし、その
後反応を１ＯｏＪＬｌの５０％酢酸の添加により停止さ
せた０反応混合物の吸収を４０５ｎｍにおいて読み、次
いで商業的に入手可能なウロキナーゼ（Ｃａｌｂｉｎｏ
ｃｈｅｍ、、ＬａＪｏｌｌａ、ＣＡ）で同一手順により
発生させたウロキナーゼの標準曲線と比較した。この検
定技術により、培養流体中に存在するプラスミノゲン活
性化因子からのプラスミノゲンの活性化により生産され
るプラスミンの量を測定することにより細胞が生産する
プラスミノゲン活性化因子を定量することができる。
後反応を１ＯｏＪＬｌの５０％酢酸の添加により停止さ
せた０反応混合物の吸収を４０５ｎｍにおいて読み、次
いで商業的に入手可能なウロキナーゼ（Ｃａｌｂｉｎｏ
ｃｈｅｍ、、ＬａＪｏｌｌａ、ＣＡ）で同一手順により
発生させたウロキナーゼの標準曲線と比較した。この検
定技術により、培養流体中に存在するプラスミノゲン活
性化因子からのプラスミノゲンの活性化により生産され
るプラスミンの量を測定することにより細胞が生産する
プラスミノゲン活性化因子を定量することができる。
試験結果を表ＩＩに記載する。細胞が生産するプラスミ
ノゲン活性化因子の量を培養流体の１ｍｌ当りのＣＴＡ
単位で表わす［ザ壷コミッティー會オン嗜トロンボリテ
ィック・エイジェント・オブ・ザＱナショナル・バー１
インスチチユート（ｔｈｅ Ｃｏｍｍ１ｔｔｅｅ ｏｎ
Ｔｈｒ。
ノゲン活性化因子の量を培養流体の１ｍｌ当りのＣＴＡ
単位で表わす［ザ壷コミッティー會オン嗜トロンボリテ
ィック・エイジェント・オブ・ザＱナショナル・バー１
インスチチユート（ｔｈｅ Ｃｏｍｍ１ｔｔｅｅ ｏｎ
Ｔｈｒ。
ｍｂｏｌｙｔｉｃ Ａｇｅｎｔｓ ｏｆ ｔｈｅＮａｔ
ｉｏｎａｌ Ｈｅ＆ｒｔ Ｉｎ＜ｔ、ｉ＋＋１ｔｅ）に
より規定された。Ｔｈｒｏｍｂ、Ｄｉａｔｈ、Ｈａｅｍ
ｏｒ、、２１．２５９ページ（１９６９）に記載されて
いる］、対照として、親細胞系統（ＡＴＣＣ−１４３５
）（１）ｆｙ７゜ミノゲン活性化因子の活性をまた決定
した。
ｉｏｎａｌ Ｈｅ＆ｒｔ Ｉｎ＜ｔ、ｉ＋＋１ｔｅ）に
より規定された。Ｔｈｒｏｍｂ、Ｄｉａｔｈ、Ｈａｅｍ
ｏｒ、、２１．２５９ページ（１９６９）に記載されて
いる］、対照として、親細胞系統（ＡＴＣＣ−１４３５
）（１）ｆｙ７゜ミノゲン活性化因子の活性をまた決定
した。
人Ｊ
（ＦＡの活性、ＣＴＡ単位／ｍｌ）
細胞系統 ４８時間 ７２時間 ９６時間ＡＴＣＣＣＲ
Ｌ−１４３５１１，５１８，５死亡
ＰＣ−３ｆ（Ａ
ＴＣＣＣＲＬ
−８５３９） ２８．５ ４５．０ ７０．４上の試験
結果が示すように、血清不合培地を通る親細胞系統の継
代接種はある細胞系統を生産した。この細胞系統は、親
細胞系統が生産するプラスミノゲン活性イ）：因子の１
＃±１８ ＦｓｍＴΔｍｂニ比ｉｌ、て、７０．４ＣＴ
Ａ単位までのプラスミノゲン活性化因子を生産し、はぼ
４倍の増加を示した。有利には、変更された細胞系統は
さらに２４時間の間生存することができた。
結果が示すように、血清不合培地を通る親細胞系統の継
代接種はある細胞系統を生産した。この細胞系統は、親
細胞系統が生産するプラスミノゲン活性イ）：因子の１
＃±１８ ＦｓｍＴΔｍｂニ比ｉｌ、て、７０．４ＣＴ
Ａ単位までのプラスミノゲン活性化因子を生産し、はぼ
４倍の増加を示した。有利には、変更された細胞系統は
さらに２４時間の間生存することができた。
尖蔦１１
親細胞系統としてヒトの膵臓癌細胞系統、ＡＴＣＣ−１
４２０、を使用して、実施例Ｉに記載する手順を反復し
た。ここに記載する手順により得られた生物学的に純粋
な変更された細胞系統をＰａＣａ−２ｆと表示し、そし
て受託番号ＡＴＣＣＣＲＬ−８７２５でＡＴＣＣにおい
て受託された。得られた試験結果を下表■に要約する：
人１ （ＦＡの活性、ＣＴＡ単位／ ｍ ｌ ）細胞系統 ４
８時間 ７２時間 ９６時間ＡＴＣＣ１４ ２０、２，５７，５死亡 ＰａＣａ−２ｆ （ＡＴＣＣＣ ＲＬ−８７２５，４１５，０２５，２ ５） 上の試験結果が示すように、血清不合培地を通る親細胞
系統の継代接種はある細胞系統を生産した。この細胞系
統は、２５．２ＣＴＡ単位までのプラスミノゲン活性化
因子を生産し、はぼ３倍の増加、ならびに２４時間の生
存能力の増加を示した。
４２０、を使用して、実施例Ｉに記載する手順を反復し
た。ここに記載する手順により得られた生物学的に純粋
な変更された細胞系統をＰａＣａ−２ｆと表示し、そし
て受託番号ＡＴＣＣＣＲＬ−８７２５でＡＴＣＣにおい
て受託された。得られた試験結果を下表■に要約する：
人１ （ＦＡの活性、ＣＴＡ単位／ ｍ ｌ ）細胞系統 ４
８時間 ７２時間 ９６時間ＡＴＣＣ１４ ２０、２，５７，５死亡 ＰａＣａ−２ｆ （ＡＴＣＣＣ ＲＬ−８７２５，４１５，０２５，２ ５） 上の試験結果が示すように、血清不合培地を通る親細胞
系統の継代接種はある細胞系統を生産した。この細胞系
統は、２５．２ＣＴＡ単位までのプラスミノゲン活性化
因子を生産し、はぼ３倍の増加、ならびに２４時間の生
存能力の増加を示した。
衷施１１
親細胞系統としてマウスの色素細胞腫細胞系統、Ｂ−１
６［ジャクンン研究所（Ｊａｃｋｓ。
６［ジャクンン研究所（Ｊａｃｋｓ。
ｎ Ｌａｂ、、Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ、Ｍａｉｎｅ）か
ら入手可能］を使用して、実施例工に記載する手順を反
復した。ここに記載する手順により得られた生物学的に
純粋な変更された細胞系統をＢ−１６と表示した。得ら
れた試験結果を下表■に要約する： 人１ （ＰＡ（７）活性、ＣＴＡ単位／ｍ’ｌ）細胞系統 ２
４時間 ４８時間 ９６時間Ｂ−１６ ０．７０ １．
２０ 死亡 細胞系統 ９６時間 Ｂ−１６−−− Ｂ−１６３，２ 生物学的に純粋な変更された細胞系統は、２４時間にお
いて３倍のプラスミノゲン活性化因子の増加および４８
時間において２倍のプラスミノゲン活性化因子の増加を
示した。さらに、変更された細胞系統は９６時間まで生
存することができた。
ら入手可能］を使用して、実施例工に記載する手順を反
復した。ここに記載する手順により得られた生物学的に
純粋な変更された細胞系統をＢ−１６と表示した。得ら
れた試験結果を下表■に要約する： 人１ （ＰＡ（７）活性、ＣＴＡ単位／ｍ’ｌ）細胞系統 ２
４時間 ４８時間 ９６時間Ｂ−１６ ０．７０ １．
２０ 死亡 細胞系統 ９６時間 Ｂ−１６−−− Ｂ−１６３，２ 生物学的に純粋な変更された細胞系統は、２４時間にお
いて３倍のプラスミノゲン活性化因子の増加および４８
時間において２倍のプラスミノゲン活性化因子の増加を
示した。さらに、変更された細胞系統は９６時間まで生
存することができた。
実１１１■
親細胞系統としてＡＴＣＣ−１６２２、子宮内膜腺癌細
胞系統（ＡＴＣＣから入手可能）を使用して、実施例工
に記載する手順を反復した。未発明の方法により得られ
た生物学的に純粋な変更された細胞系統をＫＬＥ と表
示し、そして受託番号ＡＴＣＣＣＲＬ−８７２６でＡＴ
ＣＣにおいて受託された。細胞が全面生長に到達した後
４８時間にプラスミノゲン活性化因子の活性を測定し、
そして得られた試験結果を下表Ｖに示す。
胞系統（ＡＴＣＣから入手可能）を使用して、実施例工
に記載する手順を反復した。未発明の方法により得られ
た生物学的に純粋な変更された細胞系統をＫＬＥ と表
示し、そして受託番号ＡＴＣＣＣＲＬ−８７２６でＡＴ
ＣＣにおいて受託された。細胞が全面生長に到達した後
４８時間にプラスミノゲン活性化因子の活性を測定し、
そして得られた試験結果を下表Ｖに示す。
人Ｎ
（ＰＡの活性、ＣＴＡ単位単位／ｍ
側胞系統 ４８時間
ＡＴＣＣＣＲＬ−１６２
２０，０５
ＫＬＥ （ＡＴＣＣＣＲ３，ｏ３
Ｌ−８７２６）
表Ｖに示されるように、変更された細胞系統、ＫＬＥ
は、４８時間において親細胞系統よりも６０倍のプラス
ミノゲン活性化因子の生産の増加を示した。
は、４８時間において親細胞系統よりも６０倍のプラス
ミノゲン活性化因子の生産の増加を示した。
丈蔦諮Ｎ
親細胞系統として受託番号ＡＴＣＣ−１５７９でＡＴＣ
Ｃから入手可能なメラニ欠乏の色素細胞腫細胞系統を使
用して、実施例工に記載する手順を反復した。本発明の
方法により得られた生物学的に純粋な変更された細胞系
統をＭＬ と表示し、そして受託番号ＡＴＣＣＣＲＬ−
８７２４でＡＴＣＣにおいて受託された。細胞が全面生
長に到達した後４８時間にプラスミノゲン活性化因子の
活性を測定し、そして得られた試験結果を下表■に示す
。
Ｃから入手可能なメラニ欠乏の色素細胞腫細胞系統を使
用して、実施例工に記載する手順を反復した。本発明の
方法により得られた生物学的に純粋な変更された細胞系
統をＭＬ と表示し、そして受託番号ＡＴＣＣＣＲＬ−
８７２４でＡＴＣＣにおいて受託された。細胞が全面生
長に到達した後４８時間にプラスミノゲン活性化因子の
活性を測定し、そして得られた試験結果を下表■に示す
。
表ｊ
（ＦＡ（７）活性、ＣＴＡ単位／ ｍ ｌ ）細胞系統
４ａ時間 ＡＴＣＣＣＲＬ−１５７ ９０ａ ＫＬ （ＡＴＣＣＣＲＬ ｏ、ｏ７ −８７２４） ａ 活性の水準は検定の検出限界より下であった。
４ａ時間 ＡＴＣＣＣＲＬ−１５７ ９０ａ ＫＬ （ＡＴＣＣＣＲＬ ｏ、ｏ７ −８７２４） ａ 活性の水準は検定の検出限界より下であった。
特許出願人 マイルス参ラボラドリース・インコーポレ
ーテツド
ーテツド
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、プラスミノゲン活性化因子生産性細胞を胎児子牛血
清を含有する適当な生長培地中で生長させ、そして減少
する量の胎児子牛血清を含有する前記適当な生長培地の
１系列を通してこのような細胞を継代接種する工程から
なり、これにより前記細胞は前記胎児子牛血清を木質的
に含有しない前記Ｍ当な生長培地中で全面生長に到達す
ることができ、そして前記細胞は初期のプラスミノゲン
活性化因子生産性細胞の水準より大きい水準でプラスミ
ノゲン活性化因子を生産することができることを特徴と
するプラスミノゲン活性化因子生産性細胞から得られる
プラスミノゲン活性化因子の収部を増加する方法。 ２、プラスミノゲン活性化因子生産性細胞は、色素細胞
腫、前立腺、***、結腸、卵巣、膵臓、や口部、直腸、
子宮内膜および線維芽細胞の腫瘍細胞から成る群より選
択される哺乳動物の腫瘍細胞である特許請求の範囲第１
項記載の方法。 ３、哺乳動物の腫瘍細胞は、色素細胞腫、前立腺、***
、結腸、卵巣、膵臓および子宮内膜から成る群より選択
される人間の癌細胞である特許請求の範囲第２項記載の
方法。 ４、腫瘍細胞系統が人間の前立腺の腺癌である特許請求
の範囲第３項記載の方法。 ５、人間の前立腺の腺癌はＡＴＣＣＣＲＬ−１４３５で
ある特許請求の範囲第４項記載の方法。 ６、適当な生長培地はＳＹＣ培地である特許請求の範囲
第１項記載の方法。 ７、ＳＹＣ培地はフェツイン、ウシ血清アルブミン、イ
ンシュリン、トランスフェリン、５α−ジヒドロテスト
ステロンおよびデキサメタソンを含有する特許請求の範
囲第６項記載の方法。 ８、フェツインは５０〜１５０ｍｇ／ ｌ （７）濃度
で存在し；ウシ血清アルブミンは５０〜１５０ｍ ｇ
、／ ］の濃度で存在し；インシュリンは５〜１０ ｍ
ｇ ／ ｌの濃度で存在し；トランスフェリンは５〜
４０ｍｇ／ｌの濃度で存在し；５α−ジヒドロテストス
テロンは５〜２００延ｇ／ＬＩＭＢ度で存在し：そして
デキサメタソンは５０〜２００ルｇ／Ｉの濃度で存在す
る特許請求の範囲第７項記載の方法。 ９、フェツインは７５ｍｇ／ｌの濃度で存在し；ウシ血
清アルブミンは７５ｍｇ／ｌの濃度で存在し；インシュ
リンは８ ｍ ｇ ／ ｌの濃度で存在しニドランスフ
ェリンは２５ｍｇ／ｌの濃度で存在し：５α−ジヒドロ
テストステロンは１００ｇｇ／ｌの濃度で存在し：そし
てデキサメタソンは１００ｋｇ／ｌの濃度で存在する特
許請求の範囲第７項記載の方法。 １０、胎児子牛血清の濃度は前記継代接種の各々を通し
て２倍のファクターで順次に減少されている特許請求の
範囲第１項記載の方法。 １１、人間の前立腺の腺癌細胞系統、ＡＴＣＣＣＲＬ−
１４３５、を胎児子牛血清を含有する適当な生長培地中
で生長させ、そして減少する量の胎児子牛血清を含有す
る前記適当な生長培地の１系列を通してこのような細胞
を継代接種する工程からなり、これにより前記細胞系統
は前記胎児子牛血清を本質的に含有しない前記適当な生
長培地中で全面生長に到達することができ、そして前記
細胞系統は初期のプラスミノゲン活性化因子生産性細胞
系統の水準より大きい水準でプラスミノゲン活性化因子
を生産することができることを特徴とする人間の前立腺
の腺癌細胞系統、ＡＴＣＣＣＲＬ−１４３５、から得ら
れるプラスミノゲン活性化因子の収量を増加させる方法
。 １２、適当な生長培地はＳＹＣ培地である特許請求の範
囲第１１項記載の方法。 １３、前記ＳＹＣ培地はフェツイン、ウシ血清アルブミ
ン、インシュリン、トランスフェリン、５α−ジヒドロ
テストステロンおよびデキサメタソンを含有する特許請
求の範囲第１２項記載の方法。 １４．７ｘツインは５０〜１５０ｍｇ／ｌの濃度で存在
し：ウシ血清アルブミンは５０〜１５０ｍ ｇ ／ １
の濃度で存在し；インシュリンは５〜Ｌｏｎｇ／ｌの濃
度で存在し；トランスフェリンは５〜４０ｍｇ／ｌの濃
度で存在し；５α−ジヒドロテストステロンは５〜２０
０ｇｇ／ｌの濃度で存在し；そしてデキサメタソンは５
０〜２００ｇｇ／ １の濃度で存在する特許請求の範囲
第１３項記載の方法。 １５、フェツインは７５ｍｇ／ｌの濃度で存在し；ウシ
血清アルブミンは７５ｍｇ／ｌの濃度で存在し：インシ
ュリンは８ｍｇ／ｌの濃度で存在しニドランスフェリン
は２５ｍｇ／ｌの濃度で存在し；５α−ジヒドロテスト
ステロンは１１０Ｏｘ／ｌの濃度で存在し；そしてデキ
サメタソンは１１００ｐ／ｌの濃度で存在する特許請求
の範囲第１４項記載の方法。 １６、胎児子牛血清の濃度は前記継代接種の各々を通し
て２倍のファクターで順次に減少されている特許請求の
範囲第１１項記載の方法。 １７、ＳＹＣ培地と表示される化学的に定められる生長
培地。 １８、フェツイン、ウシ血清アルブミン、インシュリン
、トランスフェリン、５α−ジヒドロテストステロンお
よびデキサメタソンを含有する特許請求の範囲第１７項
記載の化学的に定められる生長培地。 １９、フェツインを５０〜１５０ｍｇ／１ｔ７）６度で
含有し；ウシ血清アルブミンを５０〜１５０ｍｇ／ｌの
濃度で含有し；インシュリンを５〜１０ｍｇ／ｌの濃度
で含有しニドランスフェリンを５〜４０ｍｇ／ｌの濃度
で含有し：５α−ジヒドロテストステロンを５０〜２０
０．ｇ／ｌの濃度で含有し；そしてデキサメタソンを５
０〜２００ｇｇ／ｌの濃度で存在する特許請求の範囲第
１８項記載の化学的に定められる生長培地。 ２０．フェツインを７５ｍｇ／ｌの濃度で含有し；ウシ
血清アルブミンを７５ｍｇ／ｌの濃度で含有し；インシ
ュリンを８ｍｇ／ｌの濃度で含有し；トランスフェリン
を２５ｍｇ／ｌの濃度で含有し：５α−ジヒドロテスト
ステロンを１ＯＯＪ１．ｇ／ｌの濃度で含有し；そして
デキサメタソンを１００．ｇ／ｌの濃度で存在する特許
請求の範囲第２０項記載の化学的に定められる生長培地
。 ２１、ＡＴＣＣ受託番号ＣＲＬ−８５３９を有するＰＣ
−３ｆと表示されるプラスミノゲン活性化因子分泌性細
胞系統の生物学的に純粋な培養物。 ２２、ＡＴＣＣ受託番号ＣＲＬ−８７２５を有するＰａ
Ｃａ−２ｆと表示されるプラスミノゲン活性化因子分泌
性細胞系統の生物学的に純粋な培養物。 ２３、ＡＴＣＣ受託番号ＣＲＬ−８７２６を有するＫＬ
Ｅ、と表示されるプラスミノゲン活性化因子分泌性細胞
系統の生物学的に純粋な培養物。 ２４、ＡＴＣＣ受託番号ＣＲＬ−８７２４を有するＭＬ
と表示されるプラスミノゲン活性化因子分易性細胞系
統の生物学的に純粋な培養物。 ２、特許請求の範囲第２１項記載の細胞系統により分泌
されたプラスミノゲン活性化因子。 ２、特許請求の範囲第２２項記載の細胞系統により分泌
されたプラスミノゲン活性化因子。 ２、特許請求の範囲第２３項記載の細胞系統により分泌
されたプラスミノゲン活性化因子。 ２、特許請求の範囲第２４項記載の細胞系統により分泌
されたプラスミノゲン活性化因子。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US60186884A | 1984-04-19 | 1984-04-19 | |
| US601868 | 1984-04-19 | ||
| US704593 | 1985-02-22 |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2276605A Division JPH03151873A (ja) | 1984-04-19 | 1990-10-17 | プラスミノゲン活性化因子産生細胞系 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60259187A true JPS60259187A (ja) | 1985-12-21 |
| JPH0358270B2 JPH0358270B2 (ja) | 1991-09-04 |
Family
ID=24409076
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60081493A Granted JPS60259187A (ja) | 1984-04-19 | 1985-04-18 | プラスミノーゲン活性化因子を増収する方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60259187A (ja) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5728009A (en) * | 1980-06-11 | 1982-02-15 | Leuven Res & Dev Vzw | Novel plasminogen activator and drug having thrombosis dissolving activity |
| JPS5865219A (ja) * | 1981-07-15 | 1983-04-18 | イエダ・リサ−チ・アンド・デベロツプメント・コンパニ−・リミテツド | プラスミノ−ゲン賦活体の製造法 |
| JPS59134733A (ja) * | 1983-01-24 | 1984-08-02 | Asahi Chem Ind Co Ltd | 生物活性物質の製法 |
-
1985
- 1985-04-18 JP JP60081493A patent/JPS60259187A/ja active Granted
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5728009A (en) * | 1980-06-11 | 1982-02-15 | Leuven Res & Dev Vzw | Novel plasminogen activator and drug having thrombosis dissolving activity |
| JPS5865219A (ja) * | 1981-07-15 | 1983-04-18 | イエダ・リサ−チ・アンド・デベロツプメント・コンパニ−・リミテツド | プラスミノ−ゲン賦活体の製造法 |
| JPS59134733A (ja) * | 1983-01-24 | 1984-08-02 | Asahi Chem Ind Co Ltd | 生物活性物質の製法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0358270B2 (ja) | 1991-09-04 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2534020B2 (ja) | 血清不含培地による組織プラスミノ―ゲン活性化物質の製造方法 | |
| Pearistein et al. | Surface proteins and fibrinolytic activity of cultured mammalian cells | |
| Marotti et al. | The production of distinct forms of plasminogen activator by mouse embryonic cells | |
| Camiolo et al. | Plasminogen activator content and secretion in explants of neoplastic and benign human prostate tissues | |
| EP0158958B1 (en) | Method and cell line for obtaining plasminogen activators | |
| Kao et al. | Collagenases in human breast carcinoma cell lines | |
| Iwamoto et al. | Secretion of plasminogen activator and its inhibitor by glomerular epithelial cells | |
| Caspers et al. | Expression of γ-glutamyltranspeptidase in a transformed rat cerebral endothelial cell line | |
| Chou et al. | Cell density‐dependent secretion of plasminogen activator by 3T3 cells | |
| HU200792B (en) | Process for producing new fibrinolytic enzymes and pharmaceutical compositions comprising such enzymes as active ingredient | |
| JPS60259187A (ja) | プラスミノーゲン活性化因子を増収する方法 | |
| US4851346A (en) | Chemically defined growth medium | |
| Hisazumi et al. | Fibrinolytic activity of in vitro cultivated human bladder cell lines | |
| Stausbøl-Grøn et al. | Selective assessment of in vitro radiosensitivity of tumour cells and fibroblasts from single tumour biopsies using immunocytochemical identification of colonies in the soft agar clonogenic assay | |
| Christman et al. | Specificity of response in hamster cells induced to produce plasminogen activator by the tumor promoter, 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate | |
| CA1267621A (en) | Method and cell line for obtaining plasminogen activators | |
| Gumińska et al. | Pyruvate kinase inhibited by L-cysteine as a marker of tumorigenic human urothelial cell lines | |
| Poiley et al. | Characterization of normal human embryo cells grown to over 100 population doublings | |
| EP0151996A2 (en) | Process for the Preparation of a double-chain plasminogen activator | |
| Urade et al. | Continuous culture of human melanoma cells in protein-free medium: establishment and partial characterization | |
| Acker et al. | Endothelial cell mitogen released from HT29 tumour cells grown in monolayer or multicellular spheroid culture. | |
| JP2620299B2 (ja) | 新規プロテアーゼ及び該プロテアーゼ産生細胞株 | |
| JP2879906B2 (ja) | プロコラゲナーゼの製造方法 | |
| Ganea et al. | A serine proteinase inhibitor produced by an HTLV I virus-transformed human T lymphocyte line. | |
| White et al. | Altered biochemical properties of mitochondria in mouse mammary epithelial cells during primary culture |