JPS60214897A - タンパク質の製造法 - Google Patents
タンパク質の製造法Info
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- JPS60214897A JPS60214897A JP60052572A JP5257285A JPS60214897A JP S60214897 A JPS60214897 A JP S60214897A JP 60052572 A JP60052572 A JP 60052572A JP 5257285 A JP5257285 A JP 5257285A JP S60214897 A JPS60214897 A JP S60214897A
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
- C07K1/22—Affinity chromatography or related techniques based upon selective absorption processes
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
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- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/20—Fusion polypeptide containing a tag with affinity for a non-protein ligand
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、所望のタンパク質のためのDNA配列を2種
の特定の他のペプチドと遺伝子工学法により同時クロー
ニング(co−cloning)することによるタンパ
ク質の製造法に関する。ここで3種の構成成分の化合タ
ンパク質(combined protein)が発現
される。次いで、この化合タンパク質を担体結合生物特
異性相補的物質上へ吸収させそして、残りの構成成分を
除去した後、所望のタンパク質がそれらの断片のうちの
1種であるいくつかの断片のみが存在するように、切り
離す。
の特定の他のペプチドと遺伝子工学法により同時クロー
ニング(co−cloning)することによるタンパ
ク質の製造法に関する。ここで3種の構成成分の化合タ
ンパク質(combined protein)が発現
される。次いで、この化合タンパク質を担体結合生物特
異性相補的物質上へ吸収させそして、残りの構成成分を
除去した後、所望のタンパク質がそれらの断片のうちの
1種であるいくつかの断片のみが存在するように、切り
離す。
6°i伝子丁学によるタンパク質の製造において、発現
されたタンパク質を純粋な形態で多成分の混合物から単
離するという問題が常に存在する。
されたタンパク質を純粋な形態で多成分の混合物から単
離するという問題が常に存在する。
こうして、本発明は、遺伝子工学によるタンノくり質を
V造しかつ単離する概念的に新規な方法を提供する。
V造しかつ単離する概念的に新規な方法を提供する。
この新規な方法は、
a)このタンパク質について遺伝情報を指定する(co
de for)DNA配列、短鎖ペプチドについて遺伝
情報を指定するDNA配列および生物特異性ポリペプチ
ドについて遺伝情報を指定するDNA配列を、前記短鎖
ペプチドにつり4でのDNA配列が他の2つのDNA配
列の門に存在す、パ るように、生いに結合させ: b)このようにして得られる新し1.r% D N A
断片を宿主有機体のDNA中へ適当な遺伝子工学法によ
り、前記生物特異性ポリペプチド、前記短鎖ペプチドお
よび前記所望のタンパク質から成る化合タンパク質の転
写(transcripti。
de for)DNA配列、短鎖ペプチドについて遺伝
情報を指定するDNA配列および生物特異性ポリペプチ
ドについて遺伝情報を指定するDNA配列を、前記短鎖
ペプチドにつり4でのDNA配列が他の2つのDNA配
列の門に存在す、パ るように、生いに結合させ: b)このようにして得られる新し1.r% D N A
断片を宿主有機体のDNA中へ適当な遺伝子工学法によ
り、前記生物特異性ポリペプチド、前記短鎖ペプチドお
よび前記所望のタンパク質から成る化合タンパク質の転
写(transcripti。
n)、翻訳(t rans lat i on)および
発現(expression)が起こることができるよ
うに、導入し; C)前記宿主有機体をそれが前記化合タンノ々り質を生
成するように培養し: d)前記培養系の前記化合タンパク質を含有する部分を
、適当ならば他の成分を除去した後、適当な担体物質か
ら成る固定化系と接触させ、前記固定化系には前記生物
特異性ポリペプチドに対して相補的でありかつ所定の反
応条件下でこのポリペプチドへ強く結合する物質が結合
されてお。
発現(expression)が起こることができるよ
うに、導入し; C)前記宿主有機体をそれが前記化合タンノ々り質を生
成するように培養し: d)前記培養系の前記化合タンパク質を含有する部分を
、適当ならば他の成分を除去した後、適当な担体物質か
ら成る固定化系と接触させ、前記固定化系には前記生物
特異性ポリペプチドに対して相補的でありかつ所定の反
応条件下でこのポリペプチドへ強く結合する物質が結合
されてお。
す;
e)前記化合タンパク質が結合するようになった前記固
定化系を他の成分から適当な方法で分離し、そして前記
結合化合タンパク質から前記短鎖ペプチドを特異的に切
り離す物質で処理し;そしf)このように遊離された所
望のタンパク質友、適当な方法で、他の成分から分離し
かり単離オる; ことを特徴とする。
定化系を他の成分から適当な方法で分離し、そして前記
結合化合タンパク質から前記短鎖ペプチドを特異的に切
り離す物質で処理し;そしf)このように遊離された所
望のタンパク質友、適当な方法で、他の成分から分離し
かり単離オる; ことを特徴とする。
こうして、本発明の方法は、所望のタンパク質を単離さ
れた形態ではなく、2種の他の要素、すなわち、生物特
異性ポリペプチドおよび短鎖ペプチド、と関連させて発
現させることを可能とする1段からなる。
れた形態ではなく、2種の他の要素、すなわち、生物特
異性ポリペプチドおよび短鎖ペプチド、と関連させて発
現させることを可能とする1段からなる。
この概念において、所望のタンパク質と生物特異性ポリ
ペプチドとの間に位置する短鎖ペプチドは意図する切断
部位を表わす。したがって、短鎖ペプチドはこの方法の
後の工程において高度に特異的な方法で切除(exci
se)されうるように位置しなくてはならない。この切
除は好ましくは酵素を用いて実施される。こうして、短
鎖ペプチドの選択は、短鎖ペプチドのアミノ酸配列を認
識【7かつ切り離す(s p l i t)ことができ
る物質(agent)、例えば、酵素が大手可能である
かどうかに依存する。しかしながら、単に短鎖ペプチド
と所望のタンパク質との間の結合を1つの側において切
り離すことでまた十分である。
ペプチドとの間に位置する短鎖ペプチドは意図する切断
部位を表わす。したがって、短鎖ペプチドはこの方法の
後の工程において高度に特異的な方法で切除(exci
se)されうるように位置しなくてはならない。この切
除は好ましくは酵素を用いて実施される。こうして、短
鎖ペプチドの選択は、短鎖ペプチドのアミノ酸配列を認
識【7かつ切り離す(s p l i t)ことができ
る物質(agent)、例えば、酵素が大手可能である
かどうかに依存する。しかしながら、単に短鎖ペプチド
と所望のタンパク質との間の結合を1つの側において切
り離すことでまた十分である。
このような高度に特異性の酵素の1つの例は、膵臓から
得られる酵素カリクレイン(E 、 C。
得られる酵素カリクレイン(E 、 C。
3.4.21.8.)である。この酵素はキニノーゲン
のペプチド鎖からデカペプチドLys−Arg−Pro
−Pro−Gly−Phe−3er−Pro−Phe−
Argの配列を切り離す。
のペプチド鎖からデカペプチドLys−Arg−Pro
−Pro−Gly−Phe−3er−Pro−Phe−
Argの配列を切り離す。
このデカペプチドは好ましくは本発明に従い同時クロー
ニングされる。
ニングされる。
本発明に従いまた同時クローニングされる生物特異性ポ
リペプチドは、担体結合生物特異性相補的物質へ結合し
、こうして担体を媒質の他の構成成分から、それへ結合
した化合タンパク質と ・緒に分離できるようにする仕
事を有する。当然の帰結として、生物特異性ポリペプチ
ド/相補的物質1ゴ の系はそれらの間に強い結合が所定の反応条件下で起こ
るという要件に従うことになる。
リペプチドは、担体結合生物特異性相補的物質へ結合し
、こうして担体を媒質の他の構成成分から、それへ結合
した化合タンパク質と ・緒に分離できるようにする仕
事を有する。当然の帰結として、生物特異性ポリペプチ
ド/相補的物質1ゴ の系はそれらの間に強い結合が所定の反応条件下で起こ
るという要件に従うことになる。
生物学的に活性なポリペプチド、例えば、酵素は/I:
物学的に活性な相補的物質、例えば、阻害剤と、生物特
異性複合体(comp l ex)、例えば、酵素−阻
害剤複合体を形成することができる。
物学的に活性な相補的物質、例えば、阻害剤と、生物特
異性複合体(comp l ex)、例えば、酵素−阻
害剤複合体を形成することができる。
このような生物特異性酵素−阻害剤複合体は高い結合親
和性を有する。その解離定数はそれに応して低い。
和性を有する。その解離定数はそれに応して低い。
酵素−阻害剤複合体の1つの例は、本発明に従い好まし
いトリプシン−アプロチニン複合体(trypsin−
aprotinin complex)であり、これは
酵素トリプシンと酵素阻害剤アプロチニンとから形成さ
れる。この複合体の解離定数Kiはわずかに6XlO−
”モル/1(pH=8.0、t=25”)であり、そし
て複合化の速度はtl/2=6.3秒である。したがっ
て、トリプシン−アプロチニン複合体は非常に急速に形
成し、そして所定の反応条件下で非常に高い安定性を有
する。しかしながら、トリプシン−アプロチニン複合体
の安定性は溶液のpH値に依存し、そしてPH値が低下
するとき減少する。トリプシン−アプロチニン複合体は
、約2゜0のPH値においてほとんど完全に解離する。
いトリプシン−アプロチニン複合体(trypsin−
aprotinin complex)であり、これは
酵素トリプシンと酵素阻害剤アプロチニンとから形成さ
れる。この複合体の解離定数Kiはわずかに6XlO−
”モル/1(pH=8.0、t=25”)であり、そし
て複合化の速度はtl/2=6.3秒である。したがっ
て、トリプシン−アプロチニン複合体は非常に急速に形
成し、そして所定の反応条件下で非常に高い安定性を有
する。しかしながら、トリプシン−アプロチニン複合体
の安定性は溶液のpH値に依存し、そしてPH値が低下
するとき減少する。トリプシン−アプロチニン複合体は
、約2゜0のPH値においてほとんど完全に解離する。
このような挙動は本発明の関係においてとくに望ましい
。なぜなら、担体結合相補的物質の再生はその結果容易
に可能であるからである。次いで、この物質はこの方法
において再使用可能である。さらに、生物特異性ポリペ
プチドと担体結合相補的物質との間の結合の形成速度は
高いことがさらに望ましい。担体結合相補的物質と化合
タンパク質の他の部位との起こりうる拮抗反応は、この
ようにして減少されうる。
。なぜなら、担体結合相補的物質の再生はその結果容易
に可能であるからである。次いで、この物質はこの方法
において再使用可能である。さらに、生物特異性ポリペ
プチドと担体結合相補的物質との間の結合の形成速度は
高いことがさらに望ましい。担体結合相補的物質と化合
タンパク質の他の部位との起こりうる拮抗反応は、この
ようにして減少されうる。
説明する酵素/阻害剤系は単なる1つの例である。例え
ば、抗原/抗体またはペプチドのホルモン/受容体系を
同様に使用できる。
ば、抗原/抗体またはペプチドのホルモン/受容体系を
同様に使用できる。
生物特異的吸収は、生物特異的に相補性の物質が結合す
る水不溶性担体を使用して実施することか々rましい。
る水不溶性担体を使用して実施することか々rましい。
この結合は既知の固定化法により、スペーサー分子を使
用しであるいは使用しないで、実施することができる。
用しであるいは使用しないで、実施することができる。
+iii p+;の3成分のDNA配列を遺伝子工学の
方法により同時クローニングにし、そしてこのようにし
て得られるDNAを宿主のDNA中に、例えばプラスミ
ド中に、遺伝子工学の方法により転移する。適当な微生
物は、例えば、バクテリア、とくに、E、coli、ま
たはBac、5ubt i 1is、または酵母を宿主
有機体として使用することができる。同時クローニング
されたDNAの転写、翻訳および、最後に、発現は微生
物の培養中に起こる。醗酵溶液が所望のタンパク質を2
種の同時クローニングされたペプチドと一緒に含有する
場合、細胞を、例えば、遠心または交差流濾過により、
分離し、そして培養物の濾液を単離に使用する。細胞自
体が所望のタンパク質を2種の同11’、rクローニン
グされたペプチドと一諸に含有する場合、細胞を分離し
、破壊し、そして細胞断片を分離により除去する。培養
物の濾液または細胞抽出液は所望の同時クローニングき
れた化合タンパク質のみならず、その上多数の他のタン
パク質、多数の他の生成物およびまた栄養媒質の付着す
る構成成分を含有する。所望の化合タンパク質はここで
この複雑な組成の溶液から単離され、そして精製される
。これは担体結合生物特異的相補性物質、例えば、固定
化トリプシン、を培養物の濾液または抽出液に添加する
ことにより実施する。次の5成分の水不溶性複合体は、
高い複合化速度で直ちに形成する:押体+生物特異的に
相補性の物質+生物特異性ポリペプチド+短鎖ペプチド
+所望のタンパク質、例えば、5成分すなわち担体十ト
リプシン士アプロチニン十デカペプチド+所望のタンパ
ク質の複合体。担体結合生物特異的相補性物質を、室温
において、しかしまた、複合化が高速度であるので、低
温、例えば+2°Cにおいて添加することができる。水
不溶性複合体は醗酵溶液中の他のタンパク質からおよび
またすべての他の不純物から簡単な癌過により分離する
ことができる。
方法により同時クローニングにし、そしてこのようにし
て得られるDNAを宿主のDNA中に、例えばプラスミ
ド中に、遺伝子工学の方法により転移する。適当な微生
物は、例えば、バクテリア、とくに、E、coli、ま
たはBac、5ubt i 1is、または酵母を宿主
有機体として使用することができる。同時クローニング
されたDNAの転写、翻訳および、最後に、発現は微生
物の培養中に起こる。醗酵溶液が所望のタンパク質を2
種の同時クローニングされたペプチドと一緒に含有する
場合、細胞を、例えば、遠心または交差流濾過により、
分離し、そして培養物の濾液を単離に使用する。細胞自
体が所望のタンパク質を2種の同11’、rクローニン
グされたペプチドと一諸に含有する場合、細胞を分離し
、破壊し、そして細胞断片を分離により除去する。培養
物の濾液または細胞抽出液は所望の同時クローニングき
れた化合タンパク質のみならず、その上多数の他のタン
パク質、多数の他の生成物およびまた栄養媒質の付着す
る構成成分を含有する。所望の化合タンパク質はここで
この複雑な組成の溶液から単離され、そして精製される
。これは担体結合生物特異的相補性物質、例えば、固定
化トリプシン、を培養物の濾液または抽出液に添加する
ことにより実施する。次の5成分の水不溶性複合体は、
高い複合化速度で直ちに形成する:押体+生物特異的に
相補性の物質+生物特異性ポリペプチド+短鎖ペプチド
+所望のタンパク質、例えば、5成分すなわち担体十ト
リプシン士アプロチニン十デカペプチド+所望のタンパ
ク質の複合体。担体結合生物特異的相補性物質を、室温
において、しかしまた、複合化が高速度であるので、低
温、例えば+2°Cにおいて添加することができる。水
不溶性複合体は醗酵溶液中の他のタンパク質からおよび
またすべての他の不純物から簡単な癌過により分離する
ことができる。
タンパク質加水分解性酵素、例えば、トリプシンを11
:物特毘的相補性物質として使用する場合、これを醗酵
溶液への添加前に低分子量の阻害剤で飽和することがで
きる。しかしながら、低分子量の肝1害剤の解離定数は
生物特異性ポリペプチドのそれよりも大きくなくてはな
らない。解離定数がWるため、低分子量阻害剤は醗酵溶
液の添加時に生物4ν冗性ポリペプチドから置換される
。担体結合トリプシンのために使用できる低分子量阻害
剤の例は解離定数が18X10−6モル/Iであるベン
ズアミジンまたは解離定数が72X10−6モル/1で
あるフェニルグアニジンである。
:物特毘的相補性物質として使用する場合、これを醗酵
溶液への添加前に低分子量の阻害剤で飽和することがで
きる。しかしながら、低分子量の肝1害剤の解離定数は
生物特異性ポリペプチドのそれよりも大きくなくてはな
らない。解離定数がWるため、低分子量阻害剤は醗酵溶
液の添加時に生物4ν冗性ポリペプチドから置換される
。担体結合トリプシンのために使用できる低分子量阻害
剤の例は解離定数が18X10−6モル/Iであるベン
ズアミジンまたは解離定数が72X10−6モル/1で
あるフェニルグアニジンである。
あるいは、カラムに担体結合生物特異的相補性’+h質
を充填することができる。次いで、培養物の濾液または
細胞抽出液をこの方ラムに通過する。
を充填することができる。次いで、培養物の濾液または
細胞抽出液をこの方ラムに通過する。
この場合においてまた、もっばら所望の化合タンパク′
((は生物特異性ポリペプチドを介して固体の担体へ結
合されるが、すべての他のタンパク質およびすべての他
の不純物はカラムを流過する。p−!休へ結合した生物
特異的相補性ポリペプチドは結合すべき複合体で出来る
だけ完全に飽和されるべきである。カラムから残留する
41着する不純物を。
((は生物特異性ポリペプチドを介して固体の担体へ結
合されるが、すべての他のタンパク質およびすべての他
の不純物はカラムを流過する。p−!休へ結合した生物
特異的相補性ポリペプチドは結合すべき複合体で出来る
だけ完全に飽和されるべきである。カラムから残留する
41着する不純物を。
緩衝液または他の適当な溶液で洗浄することにより除去
することができる。複合化速度は高いので、カラムはま
た低温で装填することができる。
することができる。複合化速度は高いので、カラムはま
た低温で装填することができる。
最後に、担体へ結合した化合タンパク質は特異性酵素の
作用により切り離す。特異性酵素は短鎖ペプチドのペプ
チド結合をもっばら切り離す。
作用により切り離す。特異性酵素は短鎖ペプチドのペプ
チド結合をもっばら切り離す。
全体の複合体が成分すなわち担体十トリプシン+アプロ
チニン十デカペプチド士所望のタンパク質から構成され
る場合、酵素のカリクレインを、前述のように、特異的
酵素として使用することができる。カリクレインはデカ
ペプチドを両側で加水分解し、そして末端に結合する所
望のタンパク質な化合タンパク質から切り離す。短鎖ペ
プチドと所qノのタンパク質との間の結合の1つの側の
切り離しは十分である。このような短鎖ペプチドは配列
Pro−Phe−Argをもつ前述のデカペプチドから
の最後の3つのC末端アミノ酸を多分台イ1する。こう
してカリクレインは、ヘキサペプチド Pro−Phe−Arg−3er−Tyr−Gin K
=0.25ミリモル またはPro−Phe−Arg
−Ala−Asn−Leu K =0.15ミリモル におけるArg−X間の所望の結合を高度に特異的に切
り離す。所望のタンパク質はデカペプチドと一緒に溶離
され、そして既知の方法、例えば、モレキュラーシーブ
のクロマトグラフィーによりデカペプチドから分離され
ることができる。こうして所望のタンパク質は純粋な形
態で得られる。
チニン十デカペプチド士所望のタンパク質から構成され
る場合、酵素のカリクレインを、前述のように、特異的
酵素として使用することができる。カリクレインはデカ
ペプチドを両側で加水分解し、そして末端に結合する所
望のタンパク質な化合タンパク質から切り離す。短鎖ペ
プチドと所qノのタンパク質との間の結合の1つの側の
切り離しは十分である。このような短鎖ペプチドは配列
Pro−Phe−Argをもつ前述のデカペプチドから
の最後の3つのC末端アミノ酸を多分台イ1する。こう
してカリクレインは、ヘキサペプチド Pro−Phe−Arg−3er−Tyr−Gin K
=0.25ミリモル またはPro−Phe−Arg
−Ala−Asn−Leu K =0.15ミリモル におけるArg−X間の所望の結合を高度に特異的に切
り離す。所望のタンパク質はデカペプチドと一緒に溶離
され、そして既知の方法、例えば、モレキュラーシーブ
のクロマトグラフィーによりデカペプチドから分離され
ることができる。こうして所望のタンパク質は純粋な形
態で得られる。
化合タンパク質中の意図する切断部位として短鎖ペプチ
ドを選択するときの利点は、切り離し後、概して大きい
分子の形で、小さい短鎖ペプチドから容易に除去するこ
とができる。
ドを選択するときの利点は、切り離し後、概して大きい
分子の形で、小さい短鎖ペプチドから容易に除去するこ
とができる。
生物特異性ポリペプチドは、溶離条件下で相補的物質を
介して担体へ結合されたままである。例えば、緩衝液の
p)(を、例えば、2〜3の値に単に変えることにより
、生物特異性ポリペプチドはカラムから切り離されかつ
洗浄されて出る。それ以上の洗浄作業の後、カラムを次
いで緩衝液で適当なPH値に、トリプシン/アプロチニ
ンを使用する場合pH8゜0に、することができ、そし
て他の実験に再使用することができる。
介して担体へ結合されたままである。例えば、緩衝液の
p)(を、例えば、2〜3の値に単に変えることにより
、生物特異性ポリペプチドはカラムから切り離されかつ
洗浄されて出る。それ以上の洗浄作業の後、カラムを次
いで緩衝液で適当なPH値に、トリプシン/アプロチニ
ンを使用する場合pH8゜0に、することができ、そし
て他の実験に再使用することができる。
本発明の方法により製造できるタンパク質の例として、
なかでも、次のものを述べることができる:ホルモン類
、例えば、ヒトのツマトロピン、エリトロポイエチン、
コルチコトロピン、プレープロインシュリン、プレーミ
ニプロインシュリンおよびインシュリンのA鎖およびB
鎖のポリペプチド配列、神経伝達物質類、例えば、物質
Pまたはβ−エンドモルフインのポリペプチド配列、イ
ンターフェロン類、INF−α、INF−βまたはIN
F−γ、雑種インターフェロン類およびインタールーキ
7(interleukin)類のポリペプチド配タリ
、血漿タンパク賀類、例えば、ヒトのα、−抗トリプシ
ン、アルブミンおよび単離因子類、例えば、組織のプラ
スミノーゲン活+1化因子および因子■のポリペプチド
配列、酵、ド類、例えば、D−キシロースイソメラーゼ
、ペニシリンアシラーゼ、ウロキナーゼおよびレンニン
のポリペプチド配列、および抗体類、例えば、モノクロ
ナル抗体およびワクチン類のポリペプチド配列、
なかでも、次のものを述べることができる:ホルモン類
、例えば、ヒトのツマトロピン、エリトロポイエチン、
コルチコトロピン、プレープロインシュリン、プレーミ
ニプロインシュリンおよびインシュリンのA鎖およびB
鎖のポリペプチド配列、神経伝達物質類、例えば、物質
Pまたはβ−エンドモルフインのポリペプチド配列、イ
ンターフェロン類、INF−α、INF−βまたはIN
F−γ、雑種インターフェロン類およびインタールーキ
7(interleukin)類のポリペプチド配タリ
、血漿タンパク賀類、例えば、ヒトのα、−抗トリプシ
ン、アルブミンおよび単離因子類、例えば、組織のプラ
スミノーゲン活+1化因子および因子■のポリペプチド
配列、酵、ド類、例えば、D−キシロースイソメラーゼ
、ペニシリンアシラーゼ、ウロキナーゼおよびレンニン
のポリペプチド配列、および抗体類、例えば、モノクロ
ナル抗体およびワクチン類のポリペプチド配列、
第1図は、本発明による方法を線図の形で示す。
持前出願人 バイエル拳アクチェンゲセ゛ルシャフト
1)NA−西ど列
第1図
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 l、タンパク質の製造法であって、 a)このタンパク質について遺伝情報を指定するDNA
配列、短鎖ペプチドについて遺伝情報を指定するDNA
配列および生物特異性ポリペプチドについて遺伝情報を
指定するDNA配列を、前記11f鎖ペプチドについて
のDNA配列が他の2つのDNA配列の間に存在するよ
うに、互いに結合さぜ; b)このようにして得られる新しいDNA断片を室上有
機体のDNA中へ適当な遺伝子工学法により、ifI記
生物特異性ポリペプチド、前記短鎖ペプチドおよび前記
所望のタンパク質から成る化合タンパク質の転写、翻訳
および発現が起こることができるように、導入し; c)iiij記宿主有機体をそれが前記化合タンパク質
を生成するように培養し; d)前記培養系の前記化合タンパク質を含有する部分を
、適当ならば他の成分を除去した後、適当な担体物質か
ら成る固定化系と接触させ、前記固定化系には前記生物
特異性ポリペプチドに対して相補的でありかつ所定の反
応条件下でこのポリペプチドへ強く結合する物質が結合
されており; e)前記化合タンパク質か結合するようになった前記固
定化系を他の成分から適当な方法で分離し、そして前記
結合した化合タンパク質から前記短鎖ペプチドを特異的
に切り離す物質で処理し;そして f)このように遊離された所望のタンパク質を、適当な
方法で、他の成分から分離しかつ単離する: ことを特徴とするタンパク質の製造法。 2、生物特異性ポリペプチドは、高速度で、相補的物質
を結合した担体へ強く結合することを特徴とする特許請
求の範囲第1項記載の方法。 3、結合は+2°Cないし室温において実施する特許請
求の範囲第2項記載の方法。 4、生物特異性ポリペプチドおよび相補的担体結合物質
は酵素および関連する阻害剤の系であることを特徴とす
る特許請求の範囲第1〜3項のいずれかに記載の方法。 5、生物特異性ポリペプチドはアプロチニンであり、そ
して相補的担体結合物質はトリプシンであることを特徴
とする特許請求の範囲第1〜4項のいずれかに記載の方
法。 6、短鎖ペプチドはデカペプチドLys−Arg−Pr
o−Pro−Gly−Phe−3er−Pro−Phe
−Argであることを特徴とする特許請求の範囲第1〜
5項のいずれかに記載の方ツノ:。 7、結合した化合、タンパク質から短鎖ペプチドを特苦
的に切り離す物質は酵素であることを特徴とする特許請
求の範囲第1〜6項のいずれかに記載の方法。 8、酵素はカリクレイン(E、C,3,4,21,8,
)であることな特徴とする特許請求の範囲第6または7
項記載の方法。 9、製造すべきタンパク質は、ホルモン、血清タンパク
質、凝固因子、酵素、抗体またはワクチンであることを
特徴とする特許請求の範囲第1〜8項のいずれかに記載
の方法。。 lO、タンパク質は因子■であることを特徴とする特許
請求の範囲第9項記載の方法。
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