JPS60185719A - 抗腫瘍剤 - Google Patents
抗腫瘍剤Info
- Publication number
- JPS60185719A JPS60185719A JP4273884A JP4273884A JPS60185719A JP S60185719 A JPS60185719 A JP S60185719A JP 4273884 A JP4273884 A JP 4273884A JP 4273884 A JP4273884 A JP 4273884A JP S60185719 A JPS60185719 A JP S60185719A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cells
- human
- antitumor agent
- staurosporine
- neuroblastoma
- Prior art date
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- Pending
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は新規抗腫瘍剤、より詳しくは下記構造式〔■〕
で示されるスタウロスポリンを有効成分として含有する
抗腫瘍剤に関する。
で示されるスタウロスポリンを有効成分として含有する
抗腫瘍剤に関する。
（１）
これまでスタウロスポリンが抗腫瘍活性を示すことは知
られていなかったが、本発明者は、スタウロスポリンが
、ヒト神経芽朧細胞であるＮＢ−１細胞、８ＹＭ−１細
胞、５ＫＮＳＨ細胞、ＧＯＴＯ細胞、 ヒト子宮頚癌細
胞ヘラ（Ｈ＠Ｌａ）細胞、ヒト白血病細胞、ＨＬ−６０
細胞および凪−１細胞に対し強い生育阻害作用を有して
ｉることを初めて見い出し、この発見に基づき本発明を
完成するに至った。
られていなかったが、本発明者は、スタウロスポリンが
、ヒト神経芽朧細胞であるＮＢ−１細胞、８ＹＭ−１細
胞、５ＫＮＳＨ細胞、ＧＯＴＯ細胞、 ヒト子宮頚癌細
胞ヘラ（Ｈ＠Ｌａ）細胞、ヒト白血病細胞、ＨＬ−６０
細胞および凪−１細胞に対し強い生育阻害作用を有して
ｉることを初めて見い出し、この発見に基づき本発明を
完成するに至った。
前記構造式〔１〕で示されるスタウロスポリンはＮＢ−
ＩＭ／ｌｉｔ、８ＹＭ−１ｉ胞、５ＫＮｓｎ Ｈ胞、Ｇ
ｏＴｏ細胞、ＨｓＬａ細胞、）ＩＬ−６０細胞及びＭＬ
−１ｉ胞に対して強い生育阻害作用を有しておシ、抗腫
瘍剤として利用できるものである。特に上記神経芽腫細
胞に対しては顕著かつ特異的作用を有することから、抗
神経芽腫細胞に対して特に有効な抗腫瘍剤となシ得る。
ＩＭ／ｌｉｔ、８ＹＭ−１ｉ胞、５ＫＮｓｎ Ｈ胞、Ｇ
ｏＴｏ細胞、ＨｓＬａ細胞、）ＩＬ−６０細胞及びＭＬ
−１ｉ胞に対して強い生育阻害作用を有しておシ、抗腫
瘍剤として利用できるものである。特に上記神経芽腫細
胞に対しては顕著かつ特異的作用を有することから、抗
神経芽腫細胞に対して特に有効な抗腫瘍剤となシ得る。
前記構造式で示されるスタウロスポリンは本発明者が見
い出した方法で製造することができる。
い出した方法で製造することができる。
すなわち本発明において使用する微生物としては、スタ
ウロスポリンを生産する能力を有するストレノトミセス
・アクツオサスＦＥＲＭ−Ｐ ６７４０がある。
ウロスポリンを生産する能力を有するストレノトミセス
・アクツオサスＦＥＲＭ−Ｐ ６７４０がある。
本発明においては上記菌株およびその人工ならびに自然
変異株は勿論のこと、ストレプトマイセス属に属するス
タウロスポリン生産菌のすべてが使用され得る。
変異株は勿論のこと、ストレプトマイセス属に属するス
タウロスポリン生産菌のすべてが使用され得る。
本微生物を用いてスタウロスポリンを生産するにあたっ
て用いられる培地は炭素源、窒素源及び無機塩類、更に
必要に応じて有機微量栄養素を適宜含有する通常の液体
培地が用いられる。
て用いられる培地は炭素源、窒素源及び無機塩類、更に
必要に応じて有機微量栄養素を適宜含有する通常の液体
培地が用いられる。
炭素源としては、例えばグルコース、フラジ） −ス、
マルトース、シュークロース、スターチ、デキストリン
、澱粉加水分解物、廃糖蜜等の炭水化物、クエン酸、コ
ハク酸、フマール酸、酢酸等の有機酸類及びグリセリン
等のアルコール類が用いられる。窒素源としては例えば
硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、リン酸アンモニ
ウム、硝酸アンモニウム、酢酸アンモニウム等のアンモ
ニウム塩、硝酸ナトリウム、硝酸カリウム等の硝酸塩、
尿素、アンそニア水、アンそニアガス、アミノ酸類、さ
らにペプトン、大豆ホエー、大豆フレーク及びそれらの
加水分解物等の蛋白質、米糠等が用いられる。その他無
機塩としては例えばマンガン塩、リン酸塩が適宜用いら
れ、又有機微量栄養素としてはアミノ酸、ビタミン及び
これらを含有するペプトン、酵母エキス等が適宜用いら
れる。
マルトース、シュークロース、スターチ、デキストリン
、澱粉加水分解物、廃糖蜜等の炭水化物、クエン酸、コ
ハク酸、フマール酸、酢酸等の有機酸類及びグリセリン
等のアルコール類が用いられる。窒素源としては例えば
硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、リン酸アンモニ
ウム、硝酸アンモニウム、酢酸アンモニウム等のアンモ
ニウム塩、硝酸ナトリウム、硝酸カリウム等の硝酸塩、
尿素、アンそニア水、アンそニアガス、アミノ酸類、さ
らにペプトン、大豆ホエー、大豆フレーク及びそれらの
加水分解物等の蛋白質、米糠等が用いられる。その他無
機塩としては例えばマンガン塩、リン酸塩が適宜用いら
れ、又有機微量栄養素としてはアミノ酸、ビタミン及び
これらを含有するペプトン、酵母エキス等が適宜用いら
れる。
培養条件は、培地組成その他によシ異なるが、例えば通
常ｐＨ４，０〜９．０、温度１５〜４０℃で振盪培養、
通気攪拌培養等好気的条件下に培養が行われる。
常ｐＨ４，０〜９．０、温度１５〜４０℃で振盪培養、
通気攪拌培養等好気的条件下に培養が行われる。
本発明のスタウロスポリンはこのようにして培養して得
られる培養液中及び菌体内に存在し、培養液よシスタウ
ロスポリンを分離・採取する方法は酢酸エチル等の有機
溶媒抽出法、活性炭、シリカダル、アルミナ等の吸着剤
を用いる吸着クロマトグラフィー、ダル濾過法等の公知
の分離・精製法を適宜組み合せて行われる。例えば、菌
体を分離した上清液について酢酸エチルで抽出し、濃縮
乾固した後シリカゲルカラムクロマトグラフ（−ヲ行い
、更に、セファデックスＬＪ（２０カラムクロマトグラ
フイーを行うことによってシリカダル薄層クロマトグラ
フィーでＲｆ値０．６７の単一スポットを与える精製さ
れたスタウロスポリンが得られる。
られる培養液中及び菌体内に存在し、培養液よシスタウ
ロスポリンを分離・採取する方法は酢酸エチル等の有機
溶媒抽出法、活性炭、シリカダル、アルミナ等の吸着剤
を用いる吸着クロマトグラフィー、ダル濾過法等の公知
の分離・精製法を適宜組み合せて行われる。例えば、菌
体を分離した上清液について酢酸エチルで抽出し、濃縮
乾固した後シリカゲルカラムクロマトグラフ（−ヲ行い
、更に、セファデックスＬＪ（２０カラムクロマトグラ
フイーを行うことによってシリカダル薄層クロマトグラ
フィーでＲｆ値０．６７の単一スポットを与える精製さ
れたスタウロスポリンが得られる。
一方、菌体内に生成されたスタウロスポリンはメタノー
ル等の有機溶媒で抽出した後上記の方法に従って精製分
離される。分離・精製されたスタウロスポリンは溶媒を
除去することによシ黄色粉末として得られる。
ル等の有機溶媒で抽出した後上記の方法に従って精製分
離される。分離・精製されたスタウロスポリンは溶媒を
除去することによシ黄色粉末として得られる。
以上述べた方法は、あくまでも−例であハ培地組成、培
養条件、スタウロス、１？ ＩＪンの生産量等に応じ更
に適切な方法を工夫することカニできる。
養条件、スタウロス、１？ ＩＪンの生産量等に応じ更
に適切な方法を工夫することカニできる。
例えば前述の方法の一部を省略し、反復しもしくは順序
を変えて行うことは有効であシ、又他の分離法例えば活
性炭を用いる吸着クロマトグラフィー等を工程に組み込
むことも有効である。
を変えて行うことは有効であシ、又他の分離法例えば活
性炭を用いる吸着クロマトグラフィー等を工程に組み込
むことも有効である。
次に製造例を示す。
第１表に示した培地（ｐ）１７．２ ） １００ｍｌを
分注した５００Ｍ容ゾラスコを１２０℃２０分間殺菌し
て、これにストレノトミセス・アクツオサスＦＥＲＭ、
Ｐ−６７４０の培養液１ｒＬｌを接種し、２７℃で４日
間培養した。一方３０１容のステンレス・ジャーファー
メンタ−の中に前記の培地を１８１入れ殺菌したものに
上記の種母２１を接種しかく拌（３５０ｒｐｍ）、通気
（１／２ ｖｖｍ ） Ｌ ２７℃で３日間培養を続け
た。更にその２０ノを２次種母として３００１容のステ
ンレスタンク中に上記組成の培地２８０！を入れ殺菌し
た°ものに接種しかく拌（３１０ｒｐｍ）、通気（１／
２ ｖｖｍ ） Ｌ、２７℃で３日間培養した。
分注した５００Ｍ容ゾラスコを１２０℃２０分間殺菌し
て、これにストレノトミセス・アクツオサスＦＥＲＭ、
Ｐ−６７４０の培養液１ｒＬｌを接種し、２７℃で４日
間培養した。一方３０１容のステンレス・ジャーファー
メンタ−の中に前記の培地を１８１入れ殺菌したものに
上記の種母２１を接種しかく拌（３５０ｒｐｍ）、通気
（１／２ ｖｖｍ ） Ｌ ２７℃で３日間培養を続け
た。更にその２０ノを２次種母として３００１容のステ
ンレスタンク中に上記組成の培地２８０！を入れ殺菌し
た°ものに接種しかく拌（３１０ｒｐｍ）、通気（１／
２ ｖｖｍ ） Ｌ、２７℃で３日間培養した。
第１表
グルコース １．０ 襲
酵母エキス ０．２ 係
ＫＨ２ＰＯ４０，１％
ＭｇＳＯ４４ａｑ ０．１ ％
バクトソイトン ０．７ ％
バクトペゾトン ０．５ ％
デンプン ２、θ ％
アデカノール ０．０５％
（−７，２）
２８０ノの培養液を遠心分離し、菌糸８匈と除＠液２６
０ノを得た。菌糸よシスタウロスポリンを含む区分を取
得するには、以下の方法に従えばよい。
０ノを得た。菌糸よシスタウロスポリンを含む区分を取
得するには、以下の方法に従えばよい。
この菌糸１６Ｋｇに、メタノール６０１を加え室温で４
時間攪拌した後、濾過によυ菌糸を除去した。スタウロ
スポリンを含むメタノール液を濃縮し、油状物質３００
ｒｎｌ’ｅ得た。
時間攪拌した後、濾過によυ菌糸を除去した。スタウロ
スポリンを含むメタノール液を濃縮し、油状物質３００
ｒｎｌ’ｅ得た。
除菌液２６０！中よシスタウロスポリンを含む区分を取
得するには以下の方法に従えばよい。
得するには以下の方法に従えばよい。
除菌液２６０１を６０℃で３０１まで濃縮する。
濃縮液に６０ノの酢酸エチルを添加し、４０℃３時間抽
出する操作を３回く多返した。抽出液１８０ノを濃縮し
、１．５８１の濃縮液を得た。この濃縮液と菌体から得
た抽出液を合わせ、１８８／の活性物質を含む液を得た
。この液にクロロホルム３．５１を添加し抽出する操作
を２回行ない、クロロホルム層を濃縮乾固し約５０．ｉ
９の活性物を得た。
出する操作を３回く多返した。抽出液１８０ノを濃縮し
、１．５８１の濃縮液を得た。この濃縮液と菌体から得
た抽出液を合わせ、１８８／の活性物質を含む液を得た
。この液にクロロホルム３．５１を添加し抽出する操作
を２回行ない、クロロホルム層を濃縮乾固し約５０．ｉ
９の活性物を得た。
これを０．３ノのアセトンに溶解し、アセトンで平衡化
した２、２１のシリカダルカラムに乗せ、カラムクロマ
トグラフィーを行なった。活性画分５０１を濃縮晶析を
行ない粗結晶１．５３９を得た。粗結晶をクロロホルム
−メタノール（７：１）混液に溶解しｐ過後アセトンを
添加し濃縮晶析し１．４９の結晶を得た。一方晶折抜の
母液をさらに濃縮後、シリカダルカラムクロマトグラフ
ィーを行ない、同様の操作で粗結晶を総計３．３９を得
た。この粗結晶をり目ロホルム：メタノール（７：１）
混液に溶解後、同混液で平衡化したシリカゲルカラムク
ロマトグラフィー（３０９ｍカラム）を行なりた。活性
画分３ノを濃縮晶析し、精製結晶３．１ｇを得た。
した２、２１のシリカダルカラムに乗せ、カラムクロマ
トグラフィーを行なった。活性画分５０１を濃縮晶析を
行ない粗結晶１．５３９を得た。粗結晶をクロロホルム
−メタノール（７：１）混液に溶解しｐ過後アセトンを
添加し濃縮晶析し１．４９の結晶を得た。一方晶折抜の
母液をさらに濃縮後、シリカダルカラムクロマトグラフ
ィーを行ない、同様の操作で粗結晶を総計３．３９を得
た。この粗結晶をり目ロホルム：メタノール（７：１）
混液に溶解後、同混液で平衡化したシリカゲルカラムク
ロマトグラフィー（３０９ｍカラム）を行なりた。活性
画分３ノを濃縮晶析し、精製結晶３．１ｇを得た。
このよりに分離・精製されたスタウロスポリンの理化学
的性質は以下に示すとおシである。
的性質は以下に示すとおシである。
（ａ） 分子ｉ：４６６（マススベクトル法）（ｂ）
ＵＶスペクトル；λ”：：、’、” ｎｍ ： ２４Ｌ
２６７（ｓｈ、）。
ＵＶスペクトル；λ”：：、’、” ｎｍ ： ２４Ｌ
２６７（ｓｈ、）。
２９２、３２２（ｓｈ−）、 ３３５．３５６．３７２
（メタノール溶液中） （ｃ）Ｈ−ＮＭＲスペクトラム（ＤＭＳＯ中）第１図に
示す通シ （ｄ） Ｃ−ＮＭＲスペクトラム（ＤＭＳＯ中）第２図
に示す通） （、） 物質の色、黄色 σ） 溶解性、水に離溶、メタノール、エタノール、酢
酸エチル、及びクロロホルムに可溶 （ｇ） シリカゲル薄層クロマトグラフィーのＲｆ（直
、０．６７ （クロロホルム：メタノール＝１：１）Ｑ
ｌ） 元素分析 Ｃ６１，７％、 Ｈ５，Ｅｌ、 Ｎ
９．７％（１） 呈色反応 ドラーダンドルフ反応に陽
性以上の性状から本物質は大村ら、ジャーナルオプ ア
ンティバイオティックス３０，２７５（１９７７） （
Ｓ、Ｏｍｕｒａ＋ ｅｔ ａｌ Ｊ、 Ａｎｔｉｂｉｏ
ｔｉｃｓ＋３０．２７５（１９７７））の報告するスタ
ウロヌポリンと同一である。′ 次にスタウロスポリンの抗腫瘍活性を示す。
（メタノール溶液中） （ｃ）Ｈ−ＮＭＲスペクトラム（ＤＭＳＯ中）第１図に
示す通シ （ｄ） Ｃ−ＮＭＲスペクトラム（ＤＭＳＯ中）第２図
に示す通） （、） 物質の色、黄色 σ） 溶解性、水に離溶、メタノール、エタノール、酢
酸エチル、及びクロロホルムに可溶 （ｇ） シリカゲル薄層クロマトグラフィーのＲｆ（直
、０．６７ （クロロホルム：メタノール＝１：１）Ｑ
ｌ） 元素分析 Ｃ６１，７％、 Ｈ５，Ｅｌ、 Ｎ
９．７％（１） 呈色反応 ドラーダンドルフ反応に陽
性以上の性状から本物質は大村ら、ジャーナルオプ ア
ンティバイオティックス３０，２７５（１９７７） （
Ｓ、Ｏｍｕｒａ＋ ｅｔ ａｌ Ｊ、 Ａｎｔｉｂｉｏ
ｔｉｃｓ＋３０．２７５（１９７７））の報告するスタ
ウロヌポリンと同一である。′ 次にスタウロスポリンの抗腫瘍活性を示す。
（リ 神経芽腫細胞に対する抗腫瘍効果ＲＰＭＩ １６
４０粉末培地（Ｇｉｂｅｏ社製の細胞培養用培地成分）
１０．４＆及びＮａＨＣＯｓ １．４１１を１．０ノの
蒸留水に溶解し、ポアサイズ０．２２μのミリポアフィ
ルメーで無菌濾過し、これに無菌的に調製した牛胎児血
清（Ｆｌｏｗ Ｌａｂ９社製）を１００属添カロして細
胞培養用培地を調製した。この培地に、神経芽腫細胞と
してＮＢ−１細胞、ＳＹＭ−１細胞、５ＫＮＳＨ細胞、
ＧＯＴＯ細胞（いずれの細胞も、大星章−１関ロ守正、
がん、ｐ２９１、（１９７８）共立出版）を加え（細胞
濃度； Ｉ Ｘｉ Ｏ４／＃Ｉ／！ ） この細胞懸濁
液をマイクロテストデレー） （Ｎｕｎｃ社製、９６穴
）に０．１ｄ宛無菌的に分注し、炭酸ガスインキ島ベー
ター中（炭酸ガス濃度５チ、温度３７℃）で２４時間培
養した。この培養液に、製造例で得られた黄色粉末状の
スタウロスポリンを一定量含有する上記培地を０．１
ｄ宛添加し、更に３日間培養を継続し、倒立顕微鏡下で
細胞の状態を観察し、す／４１ンゾル染色法で計測した
。
４０粉末培地（Ｇｉｂｅｏ社製の細胞培養用培地成分）
１０．４＆及びＮａＨＣＯｓ １．４１１を１．０ノの
蒸留水に溶解し、ポアサイズ０．２２μのミリポアフィ
ルメーで無菌濾過し、これに無菌的に調製した牛胎児血
清（Ｆｌｏｗ Ｌａｂ９社製）を１００属添カロして細
胞培養用培地を調製した。この培地に、神経芽腫細胞と
してＮＢ−１細胞、ＳＹＭ−１細胞、５ＫＮＳＨ細胞、
ＧＯＴＯ細胞（いずれの細胞も、大星章−１関ロ守正、
がん、ｐ２９１、（１９７８）共立出版）を加え（細胞
濃度； Ｉ Ｘｉ Ｏ４／＃Ｉ／！ ） この細胞懸濁
液をマイクロテストデレー） （Ｎｕｎｃ社製、９６穴
）に０．１ｄ宛無菌的に分注し、炭酸ガスインキ島ベー
ター中（炭酸ガス濃度５チ、温度３７℃）で２４時間培
養した。この培養液に、製造例で得られた黄色粉末状の
スタウロスポリンを一定量含有する上記培地を０．１
ｄ宛添加し、更に３日間培養を継続し、倒立顕微鏡下で
細胞の状態を観察し、す／４１ンゾル染色法で計測した
。
ＮＢ−１０−
０，０１＋
０、０５ ＋十
ｏ、ｉｏ 十千十
０．２０ ＋＋＋＋
０．４０ ＋＋＋十
ＳＹＭ−１０−
１Ｏ−
２０十
３６ ＋＋
６３ ＋＋＋
１２５ ＋＋＋
＋２５ ＋十十十
５ＫＮＳＨＯ−
０，０１＋＋
０．０５ ＋十＋
ｏ、ｉｏ 士千十十
ＧＯＴＯＯ’ −
０，０１＋十
ｏ、ｏｓ ＋士十
ｏ、ｉ ｏ 十十＋＋
細胞生育阻止効果判定基準
十十＋十 完全に細胞死滅
士士士 生育量は無添加の２０チ以下
士士 生育量は無添加の２０〜５０チ
＋ 生育量は無添加の５０〜９０チ
４種の神経芽腫に対して顕著な細胞生育阻害効果を示し
た。スタウロスポリンが神経芽腫細胞に細胞毒性を示す
ことは本発明によって初めて見い出された知見である。
た。スタウロスポリンが神経芽腫細胞に細胞毒性を示す
ことは本発明によって初めて見い出された知見である。
ヒト子宮頚癌細胞ＨｅＬａに対する作用ｍメルペッコ粉
末培地（Ｇｉｂｃｏ社製）１ｇを１００ｄの二段蒸留水
に溶解した後、０．１４ｇのＮａＨＣＯｓを加え溶解し
、ミリポアフィルタ−（０，２２μ）で濾過し、これに
牛胎児血清（Ｆｌｏｗ Ｌａｂ１社製）１１ｄを加えた
培地に、予め、３７℃５チｃｏ２存在下３日間培養した
Ｈ、Ｌ、細胞（Ｇａｙ＋ Ｋｕｂｌｃｅｌｅａｎｄ Ｃ
ｏｆｆｍａｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ＋ １２ ＋ ２
６４（１９５２））を５ Ｘｉ Ｏ’ ｃｅｌｌｓ／Ｉ
！Ｌｔになる様に分散させ、そノ培地０．２ｄずつマイ
クロプレート（Ｎｕｎｃ社製９６穴）に分注し、３時間
５ ％ ｃｏ２存在下３７℃で培養した。これにＯ〜５
００μＩ／−の濃度になる様にスタウロスポリンを加え
５日間培養した。その後生ロスポリンは■＠ＬＩＬ細胞
に対して顕著な細胞生育阻害効果を示し、）１．Ｌ、細
胞に細胞毒性を示すことが明らかになった。したがって
スタウロスポリンはＨｅＬａ細胞に対し、細胞毒性を与
えることがわかる。
末培地（Ｇｉｂｃｏ社製）１ｇを１００ｄの二段蒸留水
に溶解した後、０．１４ｇのＮａＨＣＯｓを加え溶解し
、ミリポアフィルタ−（０，２２μ）で濾過し、これに
牛胎児血清（Ｆｌｏｗ Ｌａｂ１社製）１１ｄを加えた
培地に、予め、３７℃５チｃｏ２存在下３日間培養した
Ｈ、Ｌ、細胞（Ｇａｙ＋ Ｋｕｂｌｃｅｌｅａｎｄ Ｃ
ｏｆｆｍａｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ＋ １２ ＋ ２
６４（１９５２））を５ Ｘｉ Ｏ’ ｃｅｌｌｓ／Ｉ
！Ｌｔになる様に分散させ、そノ培地０．２ｄずつマイ
クロプレート（Ｎｕｎｃ社製９６穴）に分注し、３時間
５ ％ ｃｏ２存在下３７℃で培養した。これにＯ〜５
００μＩ／−の濃度になる様にスタウロスポリンを加え
５日間培養した。その後生ロスポリンは■＠ＬＩＬ細胞
に対して顕著な細胞生育阻害効果を示し、）１．Ｌ、細
胞に細胞毒性を示すことが明らかになった。したがって
スタウロスポリンはＨｅＬａ細胞に対し、細胞毒性を与
えることがわかる。
０ −
０．１４ ＋
０．４４ ＋＋
１．３８ ＋＋＋
８．７５ ＋十＋
ヒト白血病細胞ＨＬ−６０、ＭＬ−１に対する作用ＲＰ
ＭＩ−１６４０粉末培地（Ｇｉｂｃｏ社製）Ｉｇを１０
０−の２段蒸留水に溶解した後、０．１４．！ｉｔのＮ
ａＨ■３を加え溶解し、ミリポアフィルタ−（０，２２
μ）で濾過し、これに牛胎児血清（Ｆｌｏｗ Ｌａｂ、
社製）１１ｄを加えた培地に、予め３７℃、 ５ ％
ＣＯ２存在下で３日間培養したＨＬ−６０細胞（Ｃｏ１
１ｉｎｓ、 ｅｔ ａｌ＋Ｎａｔｕｒｅ＋ ２１０，３
４７−３４９（１９７７））およびＭＬ−１細胞（Ｊ、
Ｍｉｎｏｗａｄａ ｅｔ ａｌ、 Ｉｎｔｅｒｎａｔ
ｉｏｎａｌＳｙｍｐｏｓｉｕｍ ’ｏｎ Ｎｅｗ Ｔｒ
ｅｎｄｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｉｒｎｍｕｎｏｌｏｇｙ
ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ
ｐｐ １８８−１９９（１９８０））をそれぞれ５Ｘ１
０ ｃｓ＋１１ｓ〜になるように分散させその培地０．
２ｄずつマイクロプレー） （Ｎｕｎｃ社ｌＲ９６穴）
に分注し、３時間５％ｃｏ２存在下３７℃で培養した。
ＭＩ−１６４０粉末培地（Ｇｉｂｃｏ社製）Ｉｇを１０
０−の２段蒸留水に溶解した後、０．１４．！ｉｔのＮ
ａＨ■３を加え溶解し、ミリポアフィルタ−（０，２２
μ）で濾過し、これに牛胎児血清（Ｆｌｏｗ Ｌａｂ、
社製）１１ｄを加えた培地に、予め３７℃、 ５ ％
ＣＯ２存在下で３日間培養したＨＬ−６０細胞（Ｃｏ１
１ｉｎｓ、 ｅｔ ａｌ＋Ｎａｔｕｒｅ＋ ２１０，３
４７−３４９（１９７７））およびＭＬ−１細胞（Ｊ、
Ｍｉｎｏｗａｄａ ｅｔ ａｌ、 Ｉｎｔｅｒｎａｔ
ｉｏｎａｌＳｙｍｐｏｓｉｕｍ ’ｏｎ Ｎｅｗ Ｔｒ
ｅｎｄｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｉｒｎｍｕｎｏｌｏｇｙ
ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ
ｐｐ １８８−１９９（１９８０））をそれぞれ５Ｘ１
０ ｃｓ＋１１ｓ〜になるように分散させその培地０．
２ｄずつマイクロプレー） （Ｎｕｎｃ社ｌＲ９６穴）
に分注し、３時間５％ｃｏ２存在下３７℃で培養した。
これに０〜５００μ９７ｍ１の濃度になるようにスタウ
ロスＩリンを添加し５日間準により細胞生育阻害を示し
たのがｋＡ、おる。
ロスＩリンを添加し５日間準により細胞生育阻害を示し
たのがｋＡ、おる。
１表 １
ＨＬ−６００−
０，６３＋
１．８９ ＋＋
５．８０ ＋士士
１６．５０ ＋士士
ＭＬ−１０−
１０，０＋
２０．０ ＋＋
３９．５ ＋＋＋
７７．５ ＋＋十
ＭＬ−６０細胞およびＭＩｊ−を細胞に対して顕著な細
胞生育阻害効果を示し、Ｉ（Ｌ−６０細胞およびＭＬ−
１細胞に対して細胞毒性を示すことが明らかになった。
胞生育阻害効果を示し、Ｉ（Ｌ−６０細胞およびＭＬ−
１細胞に対して細胞毒性を示すことが明らかになった。
以上の結果よルスタウロスポリンは癌細胞の生育を阻害
することが明らかになシ有効な抗腫瘍剤となシ得る。
することが明らかになシ有効な抗腫瘍剤となシ得る。
特に神経芽腫細胞に対してその効果は顕著かつ特異的で
あることから抗神経芽腫剤として特に有効である。
あることから抗神経芽腫剤として特に有効である。
本発明の構造式〔Ｉ〕で示される物質を有効成分として
含有する抗腫瘍剤はヒトに含有される腫瘍哺乳動物を治
療する抗腫瘍剤として有用であシ、そして経口投与とし
て錠剤、カプセル剤またはエリキシル剤のような調剤で
または非経口投与として無菌溶液剤または懸濁液剤で処
方することによって生体中の腫瘍を抑制せしめるために
利用することができる。本発明に使用する前記有効成分
はかかる治療を必要とする患者（動物およびヒト）に対
して患者当ｐ０．２〜５００ｍｇの用量範囲で一般に数
回に分けて従って１日当υ１〜２０００ダの全日用量で
投与することができる。用量は病気の重さ、患者の体重
および当業者が認める他の因子によって変化させる。
含有する抗腫瘍剤はヒトに含有される腫瘍哺乳動物を治
療する抗腫瘍剤として有用であシ、そして経口投与とし
て錠剤、カプセル剤またはエリキシル剤のような調剤で
または非経口投与として無菌溶液剤または懸濁液剤で処
方することによって生体中の腫瘍を抑制せしめるために
利用することができる。本発明に使用する前記有効成分
はかかる治療を必要とする患者（動物およびヒト）に対
して患者当ｐ０．２〜５００ｍｇの用量範囲で一般に数
回に分けて従って１日当υ１〜２０００ダの全日用量で
投与することができる。用量は病気の重さ、患者の体重
および当業者が認める他の因子によって変化させる。
本発明に使用する前記物質は生理学的に認められるベヒ
クル、担体、賦形剤、結合剤、防腐剤、安定剤、香味剤
などとともに一般に認められた製剤実施に要求される単
位用量形態で混和される。
クル、担体、賦形剤、結合剤、防腐剤、安定剤、香味剤
などとともに一般に認められた製剤実施に要求される単
位用量形態で混和される。
これらの組成物または製剤における活性物質の量は指示
された範囲の適当な用量が得られるようにするものでお
る。
された範囲の適当な用量が得られるようにするものでお
る。
錠剤、カプセル剤などに混和することができる具体的な
薬剤は次に示すものである一トラガント、アラビアゴム
、コーンスターチまたはゼラチンのような結合剤；微品
性セルロースのような賦形剤；コーンスターチ、前ゼラ
チン化デングン、アルギン酸などのような膨化剤；ステ
アリン酸マグネシウムのような潤滑剤；シ、棚、乳糖ま
たはサッカリンのような甘味剤；ペパーミント、アカモ
ノ油またはチェリーのような香味剤、調剤単位形態がカ
プセルである場合には上記のタイプの材料にさらに油脂
のような液状担体を含有することができる。種々の他の
材料は被覆剤としてまたは調剤単位の物理的形′態を別
な方法で変化させるために存在させることができる。例
えば錠剤はシェラツク、砂糖またはその両方で被覆する
ことができる。シロッゾまたはエリキシルは活性化合物
、甘味剤とＬ−’Ｃショ糖、防腐剤としてメチルおよび
プロピル・ぐラペン、色素およびチェリーまたはオレン
ジ香味のような香味剤を含有することができる。
薬剤は次に示すものである一トラガント、アラビアゴム
、コーンスターチまたはゼラチンのような結合剤；微品
性セルロースのような賦形剤；コーンスターチ、前ゼラ
チン化デングン、アルギン酸などのような膨化剤；ステ
アリン酸マグネシウムのような潤滑剤；シ、棚、乳糖ま
たはサッカリンのような甘味剤；ペパーミント、アカモ
ノ油またはチェリーのような香味剤、調剤単位形態がカ
プセルである場合には上記のタイプの材料にさらに油脂
のような液状担体を含有することができる。種々の他の
材料は被覆剤としてまたは調剤単位の物理的形′態を別
な方法で変化させるために存在させることができる。例
えば錠剤はシェラツク、砂糖またはその両方で被覆する
ことができる。シロッゾまたはエリキシルは活性化合物
、甘味剤とＬ−’Ｃショ糖、防腐剤としてメチルおよび
プロピル・ぐラペン、色素およびチェリーまたはオレン
ジ香味のような香味剤を含有することができる。
注射のための無菌組成物は注射用水のようなベヒクル中
の活性物質、ゴマ油、ヤシ油、落花生油、綿実油などの
ような天然産出植物油またはエチルオレエートなどのよ
うな合成脂肪ベヒクルを溶解または懸濁させる通常の製
剤実施に従って処方することができる。緩衝剤、防腐剤
、酸化防止剤などが必要に応じて結合することができる
。
の活性物質、ゴマ油、ヤシ油、落花生油、綿実油などの
ような天然産出植物油またはエチルオレエートなどのよ
うな合成脂肪ベヒクルを溶解または懸濁させる通常の製
剤実施に従って処方することができる。緩衝剤、防腐剤
、酸化防止剤などが必要に応じて結合することができる
。
第１図はスタウロスポリンの１Ｈ−ＮＭＲスペクトラム
である。 第２図はスタウロスポリンの Ｃ−ＮＭＲスペクトラム
である。 出願人 味の素株式会社
である。 第２図はスタウロスポリンの Ｃ−ＮＭＲスペクトラム
である。 出願人 味の素株式会社
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 下記構造式で示される物質を含有する抗腫瘍剤■ Ｈ５
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4273884A JPS60185719A (ja) | 1984-03-06 | 1984-03-06 | 抗腫瘍剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4273884A JPS60185719A (ja) | 1984-03-06 | 1984-03-06 | 抗腫瘍剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60185719A true JPS60185719A (ja) | 1985-09-21 |
Family
ID=12644365
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4273884A Pending JPS60185719A (ja) | 1984-03-06 | 1984-03-06 | 抗腫瘍剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60185719A (ja) |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0323171A2 (en) * | 1987-12-24 | 1989-07-05 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Novel K-252 derivatives having anti-tumor activity and pharmaceutical compositions containing them |
| WO1989007105A1 (en) * | 1988-02-04 | 1989-08-10 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Staurosporin derivatives |
| JPH01246288A (ja) * | 1987-11-25 | 1989-10-02 | Takeda Chem Ind Ltd | Ｔａｎ−１０３０ａおよびその誘導体，これらの製造法ならびに用途 |
| US4923986A (en) * | 1987-03-09 | 1990-05-08 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Derivatives of physiologically active substance K-252 |
| WO1993007153A1 (en) * | 1991-10-10 | 1993-04-15 | Schering Corporation | 4'-(n-substituted-n-oxide)staurosporine derivatives |
| EP0657164A1 (en) * | 1993-12-11 | 1995-06-14 | Ciba-Geigy Ag | Pharmaceutical compositions containing staurosphorine derivatives |
| WO2003076623A1 (fr) * | 2002-03-12 | 2003-09-18 | Japan Science And Technology Agency | Complexe de cdc7-ask kinase, son substrat, anticorps specifique pour ce substrat et procede de criblage d'un compose capable d'inhiber cdc7-ask kinase |
| US8076098B2 (en) | 2001-10-29 | 2011-12-13 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Mnk kinase homologous proteins involved in the regulation of energy homeostasis and organelle metabolism |
| US8198435B2 (en) | 2004-11-05 | 2012-06-12 | Novartis Ag | Crystal form of N-benzoyl-staurosporine |
-
1984
- 1984-03-06 JP JP4273884A patent/JPS60185719A/ja active Pending
Cited By (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4923986A (en) * | 1987-03-09 | 1990-05-08 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Derivatives of physiologically active substance K-252 |
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| US4877776A (en) * | 1987-12-24 | 1989-10-31 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | K-252 compounds |
| WO1989007105A1 (en) * | 1988-02-04 | 1989-08-10 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Staurosporin derivatives |
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| US8957020B2 (en) | 2001-10-29 | 2015-02-17 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Mnk kinase homologous proteins involved in the regulation of energy homeostasis and organelle metabolism |
| WO2003076623A1 (fr) * | 2002-03-12 | 2003-09-18 | Japan Science And Technology Agency | Complexe de cdc7-ask kinase, son substrat, anticorps specifique pour ce substrat et procede de criblage d'un compose capable d'inhiber cdc7-ask kinase |
| US8198435B2 (en) | 2004-11-05 | 2012-06-12 | Novartis Ag | Crystal form of N-benzoyl-staurosporine |
| US8710216B2 (en) | 2004-11-05 | 2014-04-29 | Novartis Ag | Organic compounds |
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