JPS6018398B2 - インタ−フエロンの効率的生産法 - Google Patents
インタ−フエロンの効率的生産法Info
- Publication number
- JPS6018398B2 JPS6018398B2 JP57189244A JP18924482A JPS6018398B2 JP S6018398 B2 JPS6018398 B2 JP S6018398B2 JP 57189244 A JP57189244 A JP 57189244A JP 18924482 A JP18924482 A JP 18924482A JP S6018398 B2 JPS6018398 B2 JP S6018398B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cells
- interferon
- culture
- culture medium
- medium
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
インターフェロン（以下ＩＦＮと略す）の生産には、白
血球、リンパ芽球様細胞、センィ芽細胞、ヒト群腰細胞
などを培養し、一定細胞濃度に達した後、該細胞を単離
し、もしくは単離しないで種々のウイルスや合成二本鎖
ＲＮＡ（Ｐｏｌｙ ｌ：Ｃ）などの誘発剤で誘発し、Ｉ
ＦＮを誘導する方法が知られている。
血球、リンパ芽球様細胞、センィ芽細胞、ヒト群腰細胞
などを培養し、一定細胞濃度に達した後、該細胞を単離
し、もしくは単離しないで種々のウイルスや合成二本鎖
ＲＮＡ（Ｐｏｌｙ ｌ：Ｃ）などの誘発剤で誘発し、Ｉ
ＦＮを誘導する方法が知られている。
ｍＮ‘ま、譲発剤処理後、数時間後より細胞から分泌さ
れ、一定時間後には、その力価は‐−定の値を示す様に
なると考えられている（価ｔｉｍｉｃｒｏめａＩＡ鞍ｎ
ｔａｎｄＣｈｅｍｏのｅｒａｐｈｙ、２０‘１｝５、１
９８１）。
れ、一定時間後には、その力価は‐−定の値を示す様に
なると考えられている（価ｔｉｍｉｃｒｏめａＩＡ鞍ｎ
ｔａｎｄＣｈｅｍｏのｅｒａｐｈｙ、２０‘１｝５、１
９８１）。
これらの知見より、従来、ＩＦＮの生産は、自発産生細
胞によるＩＦＮの生産を除いては、その培地中に分泌さ
れたＩＦＮを一度、採取するのみであった。本発明者ら
は、用いた細胞の増殖生理と培養条件等を種々検討した
結果、ＩＦＮ生産館をもはや喪失したと思われる細胞を
培養系より単離し、程よく栄養分を加えた新たな新鮮培
地に再び添加し浮遊培養を行なったところ驚くべきこと
には、該細胞が再びＩＦＮ産生態力を発揮し、箸量のＩ
ＦＮを産生する事実を見し、出し、本発明を完成した。
胞によるＩＦＮの生産を除いては、その培地中に分泌さ
れたＩＦＮを一度、採取するのみであった。本発明者ら
は、用いた細胞の増殖生理と培養条件等を種々検討した
結果、ＩＦＮ生産館をもはや喪失したと思われる細胞を
培養系より単離し、程よく栄養分を加えた新たな新鮮培
地に再び添加し浮遊培養を行なったところ驚くべきこと
には、該細胞が再びＩＦＮ産生態力を発揮し、箸量のＩ
ＦＮを産生する事実を見し、出し、本発明を完成した。
本発明により、同量の細胞を用いても、従来法に比べよ
り多くのＩＦＮを得ることが可能となった。以下に本発
明を詳しく説明する。本発明によるｍＮの取得方法を説
明すると、例えば、リンパ芽球細胞を用いる場合には、
先ず該細胞を高濃度培養液を調製する。
り多くのＩＦＮを得ることが可能となった。以下に本発
明を詳しく説明する。本発明によるｍＮの取得方法を説
明すると、例えば、リンパ芽球細胞を用いる場合には、
先ず該細胞を高濃度培養液を調製する。
このとき細胞濃度が濃いほど効率的である。高濃度細胞
培養液を得るためには種々の工夫が行なわれている。本
発明においては新手法により該高濃度液が調製されてい
る。その詳細は本願と同日に、同一出願人により出願さ
れる出願「発明の名称：浮遊細胞の高濃度培養法並びに
その装置」に詳述されている。次いで得られた細胞液を
希釈するかもしくは該細胞を単離し仲Ｎ産生に好適な濃
度で新鮮塔地に浮遊し誘発剤で処理する。誘発剤の処理
に先立ち、処理剤で処理して該細胞を単離回収し改めて
新鮮塔地に再浮遊培養すると一層効果的である。かくし
て培養液中にＩＦＮが産生し、一定時間後に『Ｎ産生が
一定値に達すると、細胞を単離回収し、再び新鮮塔地に
再浮遊培養する。一定時間後にｍＮ産生が一定値に達す
ると単離回収、再浮遊培養をくり返す。かくして一定量
の細胞から著婁のｍＮを得ることが可能となった。本発
明で用いる印Ｎ産生用の培地としては、ペニシリン、ス
トレプトマイシン、グルタミン、へべス緩衝液等を添加
したＲＰＭＩ−１６４０宅地及びイーグルＭＥＭ塔地が
適しており、血清は種々の血清が用いられ０．５〜２０
％、好ましくは３〜１０％が適している。
培養液を得るためには種々の工夫が行なわれている。本
発明においては新手法により該高濃度液が調製されてい
る。その詳細は本願と同日に、同一出願人により出願さ
れる出願「発明の名称：浮遊細胞の高濃度培養法並びに
その装置」に詳述されている。次いで得られた細胞液を
希釈するかもしくは該細胞を単離し仲Ｎ産生に好適な濃
度で新鮮塔地に浮遊し誘発剤で処理する。誘発剤の処理
に先立ち、処理剤で処理して該細胞を単離回収し改めて
新鮮塔地に再浮遊培養すると一層効果的である。かくし
て培養液中にＩＦＮが産生し、一定時間後に『Ｎ産生が
一定値に達すると、細胞を単離回収し、再び新鮮塔地に
再浮遊培養する。一定時間後にｍＮ産生が一定値に達す
ると単離回収、再浮遊培養をくり返す。かくして一定量
の細胞から著婁のｍＮを得ることが可能となった。本発
明で用いる印Ｎ産生用の培地としては、ペニシリン、ス
トレプトマイシン、グルタミン、へべス緩衝液等を添加
したＲＰＭＩ−１６４０宅地及びイーグルＭＥＭ塔地が
適しており、血清は種々の血清が用いられ０．５〜２０
％、好ましくは３〜１０％が適している。
さらに、インターフェロンの精製分離を容易ならしめる
ためには無血清培地も効果的である。無血清培地として
は、上記の培地の血清の替りにインシュリン０．３〜１
００ｒタ′肌好ましくは１〜１０仏夕／泌、トランスフ
エリン０．１〜１００ｒ夕／泌、好ましくは１〜１０山
夕／泌、頭セレン酸０．１〜１００×１０‐７Ｍ、好ま
しくは０．５〜１０×１０‐７Ｍ、ピルビン酸ナトリウ
ム０．１〜１００ｗＭ、好ましくは０．５〜２０のＭを
加え、場合により血清アルブミン０．１〜２００山の似
、好ましくは１〜５０ｒ夕／の【が適している。さらに
、種々のホルモン類、ビタミン類などを加えても良い。
処理剤による処理方法についてのべると、リンパ芽球細
胞を用いる場合は公知の誘発剤で処理する２岬時間〜４
報時間以前より、ソジウムプチレイト、ジメチルスルホ
キシド（以下ＤＭＳＯと略す）、ビタミンＡ、５−プロ
モデオキシウリジンなどの処理剤を単独、もしくはそれ
ぞれの組合せで処理することより好ましい結果が得られ
る。
ためには無血清培地も効果的である。無血清培地として
は、上記の培地の血清の替りにインシュリン０．３〜１
００ｒタ′肌好ましくは１〜１０仏夕／泌、トランスフ
エリン０．１〜１００ｒ夕／泌、好ましくは１〜１０山
夕／泌、頭セレン酸０．１〜１００×１０‐７Ｍ、好ま
しくは０．５〜１０×１０‐７Ｍ、ピルビン酸ナトリウ
ム０．１〜１００ｗＭ、好ましくは０．５〜２０のＭを
加え、場合により血清アルブミン０．１〜２００山の似
、好ましくは１〜５０ｒ夕／の【が適している。さらに
、種々のホルモン類、ビタミン類などを加えても良い。
処理剤による処理方法についてのべると、リンパ芽球細
胞を用いる場合は公知の誘発剤で処理する２岬時間〜４
報時間以前より、ソジウムプチレイト、ジメチルスルホ
キシド（以下ＤＭＳＯと略す）、ビタミンＡ、５−プロ
モデオキシウリジンなどの処理剤を単独、もしくはそれ
ぞれの組合せで処理することより好ましい結果が得られ
る。
細胞は、上記処理剤で処理した後、無菌的に回収し、新
鮮な培地に再浮遊させＮＤＶ（ニューカツスル・デイジ
ーズス・ウイルス）、センダイウイルス（１０〜１００
庇いｕ／の【）を用いて誘発する。細胞濃度は１〜２０
×１びｃｅｌｌｓ／の【の範囲であれば良いが、好まし
くは４〜７×１ぴｃｅｌｌｓ／の【が望ましい。センィ
芽細胞に於ては、合成二本領ＲＮＡ（ｐｏｌｙ ｌ；Ｃ
）等により誘発されるが場合によっては、引き続いて超
誘発処理（例えば、シクロヘキサミドとアクチノマイシ
ンＤの組合せ）する。
鮮な培地に再浮遊させＮＤＶ（ニューカツスル・デイジ
ーズス・ウイルス）、センダイウイルス（１０〜１００
庇いｕ／の【）を用いて誘発する。細胞濃度は１〜２０
×１びｃｅｌｌｓ／の【の範囲であれば良いが、好まし
くは４〜７×１ぴｃｅｌｌｓ／の【が望ましい。センィ
芽細胞に於ては、合成二本領ＲＮＡ（ｐｏｌｙ ｌ；Ｃ
）等により誘発されるが場合によっては、引き続いて超
誘発処理（例えば、シクロヘキサミドとアクチノマイシ
ンＤの組合せ）する。
これらの誘発処理後、２８ｏ〜３７０下で１８〜４母時
間培養して、インターフェロンを生産せしめインターフ
ェロンの力価が技大値を示す時点附近（誘発後１５〜２
岬時間）で細胞を回収し、さらに新鮮な培地に再浮遊さ
せ、再びインターフェロンを生産せしめる。この操作は
、インターフェロンが分泌され続けるかぎり何度でも行
うことができる。実施例 １１そのスピンナーフラスコ
を用い、３％の子牛血清を含むＲＰＭＩ−１６４０者地
で培養したりンパ芽球細胞であるナマルバ細胞３６５×
１ぴｃｅｌｌｓ／肌、３４０の‘を３００仇ｐｍ耳分間
遠０分離し、細胞を回収した。
間培養して、インターフェロンを生産せしめインターフ
ェロンの力価が技大値を示す時点附近（誘発後１５〜２
岬時間）で細胞を回収し、さらに新鮮な培地に再浮遊さ
せ、再びインターフェロンを生産せしめる。この操作は
、インターフェロンが分泌され続けるかぎり何度でも行
うことができる。実施例 １１そのスピンナーフラスコ
を用い、３％の子牛血清を含むＲＰＭＩ−１６４０者地
で培養したりンパ芽球細胞であるナマルバ細胞３６５×
１ぴｃｅｌｌｓ／肌、３４０の‘を３００仇ｐｍ耳分間
遠０分離し、細胞を回収した。
この細胞を３４０泌の３ムタ′の‘インシュリン、３ｍ
Ｍピルビン酸ナトリウム５山タ′の‘のトランスフェリ
ン、１．２５×１．０‐７Ｍ亜セレン酸を含むＲＰＭＩ
−１６４の鴎血清塔地に浮遊させた。さらに１ｍＭ′の
【になるようにソジウムブチレイトを加え、２細時間、
３７０で培養した。培養後、上記の条件で細胞を回収し
、上記の新鮮な無血清培地に再浮遊させ、５００ＨＡｕ
／似となる様、センダィゥィルスを接種した。３７０、
７時間処理後、２８ｏｏに温度を下げ、１虫時間処理し
た。
Ｍピルビン酸ナトリウム５山タ′の‘のトランスフェリ
ン、１．２５×１．０‐７Ｍ亜セレン酸を含むＲＰＭＩ
−１６４の鴎血清塔地に浮遊させた。さらに１ｍＭ′の
【になるようにソジウムブチレイトを加え、２細時間、
３７０で培養した。培養後、上記の条件で細胞を回収し
、上記の新鮮な無血清培地に再浮遊させ、５００ＨＡｕ
／似となる様、センダィゥィルスを接種した。３７０、
７時間処理後、２８ｏｏに温度を下げ、１虫時間処理し
た。
ここで培養液を遠心分離して細胞を回収すると共に上清
に含まれるインターフェロンを回収した。細胞をさらに
、無血清培地に再浮遊させ２８ｑｏ、２岬時間培養し、
インターフェロンの生産を見た。その結果を下記に示す
。表１ この操作により１バッチで行う１．５７倍のＩＦＮを得
た。
に含まれるインターフェロンを回収した。細胞をさらに
、無血清培地に再浮遊させ２８ｑｏ、２岬時間培養し、
インターフェロンの生産を見た。その結果を下記に示す
。表１ この操作により１バッチで行う１．５７倍のＩＦＮを得
た。
実施例 ２
実施例１に示した方法で培養したナマルバ細胞、２．４
×１ぴケ／の‘、４３０の‘を前記の方法で回収し、無
血清培地４３０私に再浮遊した。
×１ぴケ／の‘、４３０の‘を前記の方法で回収し、無
血清培地４３０私に再浮遊した。
さらに１のＭ／の‘になる様にソジウムブチレィト及び
２％ｖ／ｖとなる様にＤＭＳＯを加え、２少時間、、３
７℃で培養した。培養後、実施例１に示した方法により
、ィンダクションを行い、遠心分離、新鮮塔地への再浮
遊を三回繰返し、それぞれの上清に含まれるびＮの生産
量を測定した。結果を下記に示す。表２この三回の操作
により、１バッチで得られる全力価の１．鱗音のインタ
ーフェロンが得られた。
２％ｖ／ｖとなる様にＤＭＳＯを加え、２少時間、、３
７℃で培養した。培養後、実施例１に示した方法により
、ィンダクションを行い、遠心分離、新鮮塔地への再浮
遊を三回繰返し、それぞれの上清に含まれるびＮの生産
量を測定した。結果を下記に示す。表２この三回の操作
により、１バッチで得られる全力価の１．鱗音のインタ
ーフェロンが得られた。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ インターフエロン誘発剤により誘発した動物細胞を
培地に培養し、（１）培養液から細胞を単離し、 （２）単離した細胞を新鮮培地に培養し、培養液中にイ
ンターフエロンを蓄積させ、磁上記（１）及び（２）の
工程を繰返して行い、培養液中に蓄積したインターフエ
ロンを採取することを特徴とするインターフエロンの効
率的生産法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57189244A JPS6018398B2 (ja) | 1982-10-29 | 1982-10-29 | インタ−フエロンの効率的生産法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57189244A JPS6018398B2 (ja) | 1982-10-29 | 1982-10-29 | インタ−フエロンの効率的生産法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5982093A JPS5982093A (ja) | 1984-05-11 |
| JPS6018398B2 true JPS6018398B2 (ja) | 1985-05-10 |
Family
ID=16238030
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57189244A Expired JPS6018398B2 (ja) | 1982-10-29 | 1982-10-29 | インタ−フエロンの効率的生産法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6018398B2 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61135598A (ja) * | 1984-12-04 | 1986-06-23 | Green Cross Corp:The | インタ−フエロン−αの製造方法 |
| JPH0775593A (ja) * | 1993-09-08 | 1995-03-20 | Suntory Ltd | 蛋白質の製造方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS50100223A (ja) * | 1974-01-11 | 1975-08-08 | ||
| JPS50140689A (ja) * | 1974-04-30 | 1975-11-11 | ||
| JPS57105195A (en) * | 1980-10-24 | 1982-06-30 | Nat Res Dev | Production of interferon |
-
1982
- 1982-10-29 JP JP57189244A patent/JPS6018398B2/ja not_active Expired
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS50100223A (ja) * | 1974-01-11 | 1975-08-08 | ||
| JPS50140689A (ja) * | 1974-04-30 | 1975-11-11 | ||
| JPS57105195A (en) * | 1980-10-24 | 1982-06-30 | Nat Res Dev | Production of interferon |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5982093A (ja) | 1984-05-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Stetler et al. | Kinetin-induced chloroplast maturation in cultures of tobacco tissue | |
| EP0000520B1 (en) | Improvement in or relating to a process for producing interferon | |
| Ruscetti et al. | Functional and morphologic characterization of human T cells continuously grown in vitro | |
| FI70927C (fi) | Extration av interferon fraon bakterier | |
| PT633929E (pt) | Metodo para proliferacao (in vitro) de precursores de celulas dentifricas e sua utilizacao para produzir imunogenios | |
| CN104894065A (zh) | 一种nk细胞培养基及nk细胞的培养方法 | |
| Lee et al. | Interferon induced growth depression in diploid and heteroploid human cells | |
| Henle et al. | Neurological signs in mice following intracerebral inoculation of influenza viruses | |
| JPS6018398B2 (ja) | インタ−フエロンの効率的生産法 | |
| US3951740A (en) | Manufacture of interferon | |
| CN117089518A (zh) | 一种外泌体制备方法及其产品和应用 | |
| CN113106063A (zh) | 一种nk免疫细胞体外扩增的方法 | |
| EP0048471A1 (en) | Lymphoblastoid cell lines capable of continuously and spontaneously producing interferon, process for preparing the same, and process for the human interferon production by the same | |
| EP0146107A2 (de) | Verfahren zur nacheinanderfolgenden Herstellung von humanem Leukozyteninterferon und humanem Gamma-Interferon | |
| Johnson et al. | [21] Large-scale induction and production of human and mouse immune interferons | |
| JPS6018399B2 (ja) | インタ−フエロンの効率的生産方法 | |
| CN107779434A (zh) | 高效扩增人外周血nk细胞的实验方法 | |
| US4433052A (en) | Process for producing interferon | |
| CN113046330A (zh) | 携带红系基因编辑***的慢病毒及药物 | |
| JPS6043386A (ja) | ヒト腎細胞癌由来樹立株細胞の増殖抑制剤の製造方法 | |
| Van Dyke | Response of Monkeys to Erythropoietin of Rabbit, Sheep, and Human Origin. | |
| Herrarte et al. | Distribution of Poliomyelitis Virus in Central Nervous System of Mice Paralyzed After Intracerebral Inoculation. | |
| CN118340798A (zh) | 抑制性免疫细胞亚群在制备抗病毒所致炎症因子风暴的产品中的应用 | |
| JPS59162889A (ja) | 人の悪性腫瘍細胞の増殖抑制剤の製造方法 | |
| JPS6028931A (ja) | ヒト腎細胞癌由来樹立株細胞の増殖抑制剤の濃縮方法 |