JPS6017509B2 - new microorganisms - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、新規微生物に関するものである。[Detailed description of the invention] The present invention relates to a novel microorganism.

本発明の新規微生物ＹＬＭ−１は、酵母の生菌体を単一
の炭素源及び窒素源として増殖できることが特徴的であ
る。近年、遺伝子操作や細胞融合の際の酵母のプロトプ
ラストの調製及び酵母の細胞壁の構造の研究等に使用す
る目的で、酵母溶解微生物の検索が精力的に行われてい
る。The novel microorganism YLM-1 of the present invention is characterized in that it can grow using live yeast cells as a single carbon source and nitrogen source. In recent years, efforts have been made to search for yeast-lytic microorganisms for the purpose of preparing yeast protoplasts for genetic manipulation and cell fusion, and for researching the structure of yeast cell walls.

発明者らは、高濃度の食品製造廃水を酵母により処理し
た後、活性汚泥等の生物処理を行う新しい廃水処理方式
〔吉沢：農化、亀〜亀、７０５〜７１１（１９８１）〕
において、酵母槽で増殖した酵母が活性汚泥槽で、どの
ように消えていくか調査を行うため、酵母溶解微生物用
培地開発し、その培地を用し、て酵母処理を実施してい
る活性汚泥槽中の酵母溶解微生物の検索を行った結果、
国税庁醸造試験所の活性汚泥中から酵母の生菌体を単一
の炭素源及び窒素源として増殖できる新規微生物ＹＬＭ
−１（以下「本微生物」と記す。）を分離し、徴工研菌
寄第６７８１号として寄託し、本発明を完成するに至っ
た。従来から、酵母細胞壁を溶解する微生物に関する報
告は多数ある〔船津、鶴線「漆菌酵素」〕が、それらの
微生物は、菌体外へ細胞壁溶解酵素を分泌することによ
り、加熱処理を行った酵母の死菌体のみ、あるいは死菌
体と生菌体の両者を溶解し、通常肉汁塔地、酵母エキス
及び／又はべプトンを含む培地等でも容易に増殖する。The inventors developed a new wastewater treatment method in which highly concentrated food manufacturing wastewater is treated with yeast and then subjected to biological treatment such as activated sludge [Yoshizawa: Nouka, Kame-Kame, 705-711 (1981)]
In order to investigate how the yeast that grows in the yeast tank disappears in the activated sludge tank, we developed a medium for yeast-dissolving microorganisms, and we are using this medium to treat activated sludge. As a result of searching for yeast-dissolving microorganisms in the tank,
YLM, a novel microorganism that can grow live yeast cells as a single carbon and nitrogen source from activated sludge at the National Tax Agency Brewing Laboratory
-1 (hereinafter referred to as "the present microorganism") was isolated and deposited as Chokoken Bacteria No. 6781, and the present invention was completed. There have been many reports on microorganisms that dissolve yeast cell walls [Funatsu and Tsurusen, "Urushi Bacterial Enzyme"], but these microorganisms secrete cell wall-dissolving enzymes outside of the bacterial cells, which can be used for heat treatment. It dissolves only dead yeast cells or both dead and live yeast cells, and easily grows in a medium containing normal broth, yeast extract, and/or veptone.

本微生物は、その形態は通常の細胞に類似しているもの
の、酵母の生菌体に本微生物が付着した状態で酵母の溶
解を起すとともに増殖すること、さらに通常の肉汁塔地
、酵母エキス及び／又はべプトン等を含む培地等では増
殖が困難で、これらの培地にカタラーゼ又はベルオキダ
ーゼを添加することにより、初めて通常の増殖を示すこ
と、酵母生菌体は本微生物に対して単なる炭素源及び窒
素源となるだけでなく、カタラーゼ及び／又はベルオキ
シダーゼ源となるために、本微生物にとって良好な栄養
物となること、極めて特異的な新規微生物である。Although the form of this microorganism is similar to normal cells, it can cause yeast lysis and proliferate while attached to viable yeast cells. It is difficult to grow in media containing / or beptone, etc., and normal growth is only observed when catalase or peroxidase is added to these media. This microorganism is a very specific novel microorganism that serves not only as a nitrogen source but also as a source of catalase and/or peroxidase, thus providing good nutrition for the microorganism.

本発明により、酵母溶解酵素の精製操作のような複雑な
手段を用いることなく、酵母懸濁液に本微生物を直接接
種し、好気的環境下に培養することにより、酵母の生菌
体を溶解することができ、さらにその培養液から酵母エ
キスを効率的に製造することができる。According to the present invention, viable yeast cells can be obtained by directly inoculating the present microorganism into a yeast suspension and culturing it in an aerobic environment without using complicated means such as purifying yeast lytic enzymes. It can be dissolved, and yeast extract can be efficiently produced from the culture solution.

また、食品製造廃水の酵母処理により増殖した酵母菌体
を本微生物により溶解し、活性汚泥槽における廃水処理
を容易にすることができる。本微生物の菌学的性質を常
法の細菌の分類同定法（長谷川武治編著「微生物の分類
と同定法」学会出版センター）に記載の条件にシグマ社
牛肝臓カタラーゼＣ−４０（６Ｑ岬、ただし、カタラー
ゼ試験を行うときは同濃度のマイルス社西洋ワサビベル
オキシダーゼ３６−４５３−１を使用）を各試験培地に
添加する条件を加えて調べた結果、次のとおりである。In addition, the present microorganisms can dissolve yeast cells grown by yeast treatment of food manufacturing wastewater, thereby facilitating wastewater treatment in an activated sludge tank. The mycological properties of this microorganism were determined using the conditions described in the conventional bacterial classification and identification method (edited by Takeji Hasegawa, “Classification and Identification Methods of Microorganisms” Society Publishing Center). The following results were obtained by adding the same concentration of horseradish peroxidase 36-453-1 (Miles Co., Ltd., when conducting the catalase test) to each test medium.

【１１ 形態 ■ 細胞の形 樟菌■ 細胞の大
きさ ０．３〜０．４×０．９〜１．８ムｍ■ 細
胞の多形成の有無 なし■ 運動性
あり■ 鞭毛の着生状態
極鞭毛■ グラム染色性
陰性■ 抗酸性 陰
性■ 生育状態カタラーゼを無菌的に添加した培地にお
ける生育状態■ 肉汁寒天平板塔地 生 育 貧弱な生育コロニーの色
うす黄色コロニーの色沢
有りコロニ−の透明度
半透明表面の形態 円形、凸円状■ 肉
汁寒天斜面培地 生 育 貧弱な生育表面の形態
円滑■ 肉液体培養混濁の程
度は適度、液面の生育はなし ■ 肉汁ゼラチン穿刺培養 深部まで生育するが液化せず ■リトマスミルク アルカリ性 ‘３ｌ 生理学的性質 カタラーゼ（カタラーゼ生成試験の場合はカタラーゼの
代りにベルオキシダーゼ）添加した条件下における生理
学的性質■ 硝酸塩還元 なし■
脱窒反応 陰性■ ＭＲテ
スト 陰性■ ＶＰテスト
陰性■ インドールの生成
なし■ 硫化水素の生成
なし■ デンプンの加水分解 分解す
る■ クエン酸の利用 利用しない■ 無機
窒素の利用アンモニウム塩を利用する■ 色素の生成
なし■ ワレアーゼ
陰性■ オキシダーゼ
陰性■ カタラーゼ ー 陰性■
生育の範囲■ 酸素に対する態度 通性嫌気
性■ ○−Ｆテスト（Ｈｕ述−Ｌｅｉ＄ｏｎ法）フアー
メンタテイブ■ 糖類からの酸及びガスの生成 糖頚 酸ガス Ｌーアラピノース Ｄーキシロース Ｄーグルコース ＋ Ｄーマンノース 十 Ｄ−フラクトース 十 Ｄーガラクトース 麦芽糖 − − ミョ糖 乳糖 − − トレノ・ロース Ｄーソルビツト ○ーマンニツト イノシツト グリセリン デンフ。[11 Morphology■ Cell shape: Antrum■ Cell size: 0.3 to 0.4 x 0.9 to 1.8 mm■ Presence or absence of cell polyplasia: None■ Motility
Yes■ Epiphytic state of flagella
Polar flagellum ■ Gram staining
Negative ■ Acid-fast Negative ■ Growth status Growth status in medium supplemented with catalase aseptically ■ Growth on gravy agar plate Color of poorly growing colonies
Light yellow colony color
Transparency of existing colonies
Morphology of translucent surface: circular, convex circular ■ Growth on gravy agar slant medium Poor growth surface morphology
Smooth ■ Meat liquid culture Moderate degree of turbidity, no growth on the liquid surface ■ Meat juice gelatin puncture culture Grows deep but does not liquefy ■ Litmus milk Alkaline '3L Physiological properties Catalase (In the case of catalase production test, use instead of catalase) Physiological properties under conditions with addition of peroxidase ■ Nitrate reduction None ■
Denitrification reaction negative ■ MR test negative ■ VP test
Negative ■ Production of indole
None ■ Hydrogen sulfide generation
None ■ Hydrolysis of starch Decomposes ■ Use of citric acid Not used ■ Use of inorganic nitrogen Use of ammonium salt ■ Formation of pigment
None ■ Warease
Negative ■ Oxidase
Negative■ Catalase - Negative■
Range of growth ■ Attitude towards oxygen Facultative anaerobic ■ ○-F test (Hu-Lei $on method) Confirmative ■ Production of acids and gases from sugars Sugar neck Acid gas L - Arapinose D - Xylose D - Glucose + D - Mannose 10D-fructose 10D-galactose maltose - - myoose lactose - - trenotolose D-sorbitol - mannitutoinositoglycerin delph.

ン 十セロビオース ＋ ラフイノース ■ ＤＮＡの分解性 分解しない■ カゼ
インの分解性 分解する■ 塩化ナトリウ
ムの耐性３％でわずかに生育する 本微生物は、グラム陰性の通気嫌気性樟菌であるところ
から、パージ一のマニュアル・オブ・デタミナティブ・
バクテオロジー第８版における第８群に属する細菌であ
る。Decacellobiose + Raffinose ■ Degradability of DNA: Does not degrade ■ Degradability of casein: Decomposes ■ This microorganism, which grows slightly with a tolerance of 3% sodium chloride, is a Gram-negative aerobic anaerobic bacteria, so it can be easily purged. Manual of Determinative
It is a bacterium that belongs to group 8 in Bacteology, 8th edition.

本微生物は極鞭毛を有することから、これに該当する既
知の細菌としてはビブリオ（Ｖｉｂｒｉｏ）属、ェロモ
ナス（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ）属、フオトバクテリウ ム
（Ｐｈｏｔｏｂａｃにｒｉ血）属、プレシオモナス（Ｐ
ｉｅｓｉｏｍｏｎａｓ）属及びクロモバクテリゥム（Ｃ
ｈｒｏｍｏｂａｃにｒｉｍｍ）属の各属の細菌がある。
しかるに本微生物はカタラーゼ及びオキシダーゼを生成
せず硝酸還元性も示さない点でビブリオ属、ェロモナス
属、プレシオモナス属及びクロモバクテリウム属の細菌
と異なり、オキシダーゼを生成せず、硝酸塩を還元せず
、類類の代謝によりガスを生成しない点でフオトバクテ
リウム属とも異なる。以上の点から本微生物を新規属種
の細胞であると認めた。Since this microorganism has a polar flagellum, known bacteria corresponding to this include the genus Vibrio, the genus Aeromonas, the genus Photobacterium, and the genus Plesiomonas.
iesiomonas) and Chromobacterium (C
There are bacteria in each genus of the genus hromobac and rimm).
However, this microorganism differs from bacteria of the genera Vibrio, Aeromonas, Plesiomonas, and Chromobacterium in that it does not produce catalase or oxidase and does not exhibit nitrate-reducing properties. It differs from the genus Photobacterium in that it does not produce gas through metabolism. Based on the above points, this microorganism was recognized as a cell of a new genus and species.

酵母生菌体の溶解性は次のとおりである。The solubility of live yeast cells is as follows.

■ 本微生物により溶解される酵母（溶解と同時に本微
生物が生育する。■ Yeast lysed by this microorganism (this microorganism grows at the same time as lysis).

）の代表例を下記に示す。エンドミセス・ゲオトリクム
（Ｅｎｄｏｍｙｃｅｓ鉾ｏｔｒｉｃｈｍｍ）ＩＦＯ９５
４１サツカロミセス・セレビシエ （Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）
花００２０３シユワニオミセス・オキシデンタリス（Ｓ
ｃｈｗａｎｎｌｏｍｙｃｅｓｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓ
）ＩＦＯ１８４１デバリオミセス・ハンゼニイ（Ｄｅ戊
ｒｙｏｍｙｃｅｓｈａｓｅｎｉｉ）ＩＦＯＯ０３２ピヒ
ア・メンブランフアシエンス（Ｐｉｃｈｉａｍｅｍｂｒ
ａｎａｅｆａＣｉｅ船）ＩＦ。) are shown below. Endomyces geotrichum IFO95
41 Saccharomyces cerevisiae
Flower 00203 Schwaniomyces oxydentalis (S
chwannlomycesocidentalis
) IFO1841 Deryomyces shasenii IFOO032 Pichia memembr
anaefaCie ship) IF.

０１２８ハンゼヌ ラ・ム ラキー（Ｈａｎｓｅｎｕｌ
ａｍｕｒａｋｉｉ）ＩＦＯ０８９７シテロミセス・マト
リテンシス （ＣｉｔｅｒｏｍｙｃｅＳｍａｔｒｉにｎｓｊｓ）ＩＦ
〇０９５４クリベロミセス・ラクテイス（Ｋ１ｕＷｅｒ
ｏｍｙｃｅｓｌａｃｔｉｓ）ＩＦＯ １２６７デツケラ
・インターメディア（Ｄｅｋｋｅｒａｉｎｔｅｒｍｅｄ
ｉａ）ＩＦＯ １５９１サツカロミコプシス・フイブリ
ゲラ （Ｓａｃｈａｒｏｍｙｃｏｐｓｉｓｆｉｂｕｌｉ袋ｒａ
）び００１０３リポミセス・スターキイ（Ｌｉｐｏｍｙ
ｃｅｓｓねｒｋｅの）ＩＦ〇１２８９ハンゼイアスポラ
・バルビエンシス （Ｈａｎｓｅｎｌａｓｐｏｒａｖａｌｂｙｅｎｓｉｓ）
ＩＦＯ０６８３トルロブシス・キヤンデイダ（Ｔｏｒ山
ｏｐｓｉｓｃａｎｄｉ脇）ＩＦＯ０６２３ブレタノミセ
ス・インターメデイウス （Ｂｒｅｔｔａｎｏｍｙｃｅｓｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｓ
）ＩＦＯ １５８７キヤンデイダ・クルセイ（Ｃａｎｄ
ｉｄａｋｒｕｓｅｉ）ｍ０１３９５ トリコスポロン・フアーメンタンス （Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎｆｅｒｍｅｎねｎｓ）ＩＦ
○１１９９■ 本微生物により溶解されない酵母（本微
生物の生育も起らない。0128 Hansenul
amurakii) IFO0897 Citeromyces matritensis (Citeromyce Smatri nsjs) IF
〇0954 Klyveromyces lacteis (K1uWer
IFO 1267 Dekkera intermed
ia) IFO 1591 Sacharomycopsis fibuli bagra
) and 00103 Lipomyces starchyi
cessnerke) IF〇1289 Hansenlaspora valbyensis
IFO0683 Torrolobsis candiida (Mount Tor opsiscandi side) IFO0623 Brettanomyces intermedius (Brettanomyces intermedius)
) IFO 1587 Candida Crucei (Cand
m01395 Trichosporonfermentans IF
○1199■ Yeast that is not lysed by this microorganism (growth of this microorganism does not occur either).

）の代表例を、下記に示す。シゾサツカロミセス・ボン
ベ （ＳＣｈｉＺＯＳａＣＣｈａｍｍｙＣｅＳｐ。) are shown below. SChiZOSaCChammyCeSp.

ｍｂｅ）『〇。３４２スポロボロミセス・サーモニカラ
ー（Ｓｐｏｒｏｂｏｌｏｍｙｃｅｓｓａｌｍｏｎｉｃｏ
ｌｏｒ）ＩＦＯＩ０３８クリプトコツカス・アルビダス
（Ｃりｐｔｏｃｏｃｃ瓜ａｌｂｉｄｕｓ）ＩＦＯ０３７
８トリコスポロン・クタネウム（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒ
ｏｎｃｕｔａｎｅｕｍ）ＩＦＯＩＩ９８ロドトルラ・ル
プラ（Ｒｈｏｄｏｔｏ川ｌａ川ｂｒａ）ｍ００８７０ｏ
ドスポリデイウム・トルロイデス （Ｒｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍｔｏｍｌｏｉｄｅｓ）
ＩＦＯ０５５９ロイコスポリデイウム・スコツテイ（じ
ｕｃｏｓｐｏｒｉｄｉｍｍｓｃｏｔｔｉｉ）ＩＦＯ１２
１２本微生物は、酵母処理を行っている国税庁醸造試験
所の活性汚泥から特定の単離操作によって単離された。mbe) 『〇. 342 Sporobolomyces thermalmonico
lor) IFOI038 Cryptococcus albidus IFO037
8 Trichosporon cutaneum
oncutaneum) IFOII98 Rhodotorula lupula (Rhodoto river la river bra) m00870o
Rhodosporidium tomloides
IFO0559 Leucosporidium scottii IFO12
The 12 microorganisms were isolated by a specific isolation procedure from activated sludge at the National Tax Agency's Brewing Laboratory, which performs yeast treatment.

すなわち、活性汚泥を殺菌生理的食塩水で、適宜希釈し
、その５０仏〆と酵母生菌体懸濁液２の‘を使用直前に
溶かし、４６のこ保ってある下記寒天塔地１８の‘に手
早く加え、よく混合した後、殺菌剤べトリ皿に流し込ん
で固めた。寒天が、よく固まってから３０ｑｏで２日〜
５日間培養した。本微生物分離用寒天培地組成（全容９
０の上）活性汚泥抽出液 ３
０の‘１′１５リン酸緩衝液（ｐＨ７．０）
５０の‘舟調整（水酸化ナトリウム溶液）
ｐＨ９．０寒天（ディコフ社バクトアガー）
０．７夕（寒天培地は、１２０ｑ０ｌ０分間殺菌を行
った。）なお、酵母生菌体懸濁液は酵母ハンゼヌラ・ア
ノマラ（世ｎｓｅｎｕｌａａｎｏｍａｌａ）Ｙ−１（徴
工研菌寄第３５９４）をＹＭ塔地（グルコース１％、酵
母エキス０．３％、麦芽エキス０．３％、ベプトン０．
５％）１００妙に１白金耳接種し、３ぴ０で２８間振と
う培養した培養液を３００比ｐｍｌ０分間遠心分離して
菌体を集め、約１００の‘の殺菌水で２回洗浄し、得ら
れた洗浄菌体を約２×１ぴ／柵となるように殺菌水に懸
濁して調製した。また、活性汚泥抽出液は活性汚泥を蒸
留水により洗浄したものを乾物濃度として１％になるよ
う蒸留水に懸濁し、その１５の‘を４０の‘客ブラウン
の破砕ビンに入れ、０．４５〜０．５側のガラスビーズ
４０夕を加え、ブラウンの細胞破砕機によに活性汚泥中
の諸細胞が完全に破砕されるまで処理（約５分を要した
。That is, the activated sludge was appropriately diluted with sterilized physiological saline, 50 g of the diluted sludge and 2 part of the live yeast cell suspension were dissolved immediately before use, and 46 of the agar powder was kept in the following agar tower 18'. The mixture was quickly added to the water, mixed well, and poured into a disinfectant petri dish to solidify. 2 days at 30qo after the agar hardens well
It was cultured for 5 days. Composition of this agar medium for isolation of microorganisms (complete information 9)
Above 0) Activated sludge extract 3
0'1'15 phosphate buffer (pH 7.0)
50's adjustment (sodium hydroxide solution)
pH 9.0 agar (Bacto Agar, Dikov)
0.7 pm (The agar medium was sterilized for 120q0l0 minutes.) The yeast live cell suspension was prepared by using yeast Hansenula anomala Y-1 (Choken Bacteria Collection No. 3594) in the YM tower. Ground (glucose 1%, yeast extract 0.3%, malt extract 0.3%, beptone 0.
5%) was inoculated with one platinum loopful of 100 μl and cultured with shaking at 3×0 for 28 days.The culture solution was centrifuged at 300 μl for 0 min to collect bacterial cells, and washed twice with approximately 100 μl of sterilized water. The obtained washed bacterial cells were suspended in sterilized water to a density of about 2×1 cells per fence. In addition, the activated sludge extract is prepared by washing activated sludge with distilled water, suspending it in distilled water to a dry matter concentration of 1%, and placing 15' of the extracted liquid in a 40' customer brown crushing bottle. Forty minutes of ~0.5 glass beads were added, and the activated sludge was treated with a Braun cell crusher until the cells in the activated sludge were completely crushed (it took about 5 minutes).

）した後、破砕液及びガラスビーズに付着した破砕活性
汚泥円蒸留水で洗い出し、３００比ｐｍｌび分間遠心分
離した上澄み液を蒸留水で全容を３０の‘とて調製した
。), the crushed activated sludge adhering to the crushed liquid and glass beads was washed out with distilled water, and the supernatant liquid was centrifuged for 300 pml and minutes, and the total volume was diluted with distilled water for 30 minutes.

本微生物が生育した周囲には溶菌斑が生じるので、その
熔菌斑の中心を釣菌し、再度殺菌生理的食塩水で適宜希
釈したものについて、上記培養を溶菌斑以外の細胞コロ
ニーが検出されなくなるまでり返し行い、更に、本微生
物と酵母生菌体分離するために、カタラーゼ又はベルオ
キシダーゼ無菌的に約６の血となるように添加した肉汁
寒天平板培地を用いて常法により純化した。Lytic plaques occur around the area where this microorganism grows, so the center of the bacterial plaque was collected, diluted again with sterilized physiological saline, and the above culture was performed to detect cell colonies other than the lytic plaques. This was repeated until the microorganism was exhausted, and further, in order to separate the present microorganism and viable yeast cells, it was purified by a conventional method using a broth agar plate medium to which catalase or peroxidase was added aseptically to a concentration of about 6 ml.

純化した本微生物の保存は、肉汁寒天斜面塔地に酵母ハ
ンゼヌラ・アノマラ（Ｈａｎｓｅｎｕｌａａｎｏｍａｌ
ａ）Ｙ−１（徴工研菌寄第３５９４号）と本微生物を同
時に塗抹し、３０℃で２日〜３日培養し、白色不透明な
酵母の生育帯の中心にバフ色半透明な本微生物の生育帯
を確認して、２℃保存する方法若しくは上記カタラーゼ
又はベルオキシダーゼを添加した肉汁寒天斜面培地によ
り保存する方法がよい。The purified microorganism is preserved by incubating the yeast Hansenula anomala on a sloping plate of meat juice agar.
a) Smear Y-1 (Shokoken Bacteria No. 3594) and this microorganism at the same time and culture at 30°C for 2 to 3 days to form a buff-colored, translucent book in the center of the white, opaque yeast growth zone. It is preferable to confirm the growth zone of the microorganism and preserve it at 2°C or to preserve it using a broth agar slant medium supplemented with the above-mentioned catalase or peroxidase.

本微生物を培養するためにはカタラーゼ及び／又はベル
オキシダーゼ源としても酵母生菌体が好ましく、前記単
離操作において酵母生菌体懸濁液の代りに加熱殺菌酵母
懸濁液を使用した場合は本微生物の単離は不可能である
。In order to culture this microorganism, live yeast cells are preferable as a source of catalase and/or peroxidase, and when a heat-sterilized yeast suspension is used instead of a live yeast cell suspension in the above isolation procedure, Isolation of this microorganism is not possible.

本微生物の生育に必すな無機塩は、リン酸塩及びマグネ
シウム塩であるが、好ましくはマグネシウム塩の代りに
活性汚泥抽出液がよい。Inorganic salts essential for the growth of this microorganism are phosphates and magnesium salts, but activated sludge extract is preferably used instead of magnesium salts.

活性汚泥抽出液の本微生物の生育に対する効果は、その
中に含まれているマグネシウムの他に禾知の有機化合物
の生育促進効果による。培地のｐＨは６以上、好ましく
は７〜９．５とし、培養温度は１２．ｙｏ〜３５ｑ０、
好ましくは２７℃〜３３００で好気的に１日〜４日（園
体培地では、２日〜５日）培養する。The effect of the activated sludge extract on the growth of this microorganism is due to the growth-promoting effect of organic compounds contained therein, in addition to magnesium. The pH of the medium is 6 or more, preferably 7 to 9.5, and the culture temperature is 12. yo~35q0,
Preferably, the culture is carried out aerobically at 27° C. to 3300° C. for 1 to 4 days (2 to 5 days in Sonodai medium).

このようにして培養した本微生物と培養液及びノ又はわ
ずかに残存している酵母を分離する方法としては、通常
の固液分離手段、例えば遠心分離、ろ過、凝集沈殿、等
轟沈殿等が使用できるが、最も簡単な方法としては３０
０仇ｐｍｌび分間の遠心分離により大部分の酵母を残さ
として除去できる。As a method for separating the microorganism thus cultured from the culture solution and the remaining yeast, ordinary solid-liquid separation means such as centrifugation, filtration, flocculation sedimentation, etc. are used. It is possible, but the easiest way is 30
Most of the yeast can be removed as a residue by centrifugation for 0 pml/min.

目的に応て上澄み液を本微生物の懸濁液として使用でき
るが、酵母を完全に除去するためには、その上澄み液を
さらに１．２ミクロン以下、０．８ミクロン以上の孔径
のメンブランフィルターでろ過すれば、そのろ液から酵
母を完全に除去することができる。上記〆ンプランフイ
ルターによるろ液から本微生物菌体を得るには、１００
仇ｐｍ２船ご間の遠０分離による沈殿物又は０．５ミク
ロン以下のメンブランフィルターによるろ過残さとして
菌体を回収する方法がよい。上記各方法により得られた
本微生物の純度は、殺菌生理的食塩水による適宜希釈液
について前記単離操作を行うことにより検定が可能であ
り、残存酵母は同希釈液をＹＭ寒天塔地に塗布し、３０
００２日間培養する方法により、また、操作中の雑菌等
の汚染は、同希釈液をブイヨン寒天塔地に塗布し、３０
午０２日〜７日間培養する方法により、それぞれ検定で
きる。Depending on the purpose, the supernatant liquid can be used as a suspension of this microorganism, but in order to completely remove yeast, the supernatant liquid should be further passed through a membrane filter with a pore size of 1.2 microns or less and 0.8 microns or more. Filtration can completely remove yeast from the filtrate. To obtain the present microorganism cells from the filtrate using the above-mentioned 〆Plant filter, 100%
A good method is to collect the bacterial cells as a precipitate by centrifugal separation between enemy pm2 ships or as a filtration residue using a membrane filter of 0.5 microns or less. The purity of this microorganism obtained by each of the above methods can be tested by performing the above isolation procedure on an appropriately diluted solution with sterilized physiological saline, and residual yeast can be detected by applying the diluted solution on a YM agar plate. 30
The method of culturing for 0.002 days also prevents contamination with bacteria during operation by applying the same diluted solution on a bouillon agar plate and culturing for 30 days.
Each can be assayed by a method of culturing for 7 days from the 2nd day of the afternoon.

酵母生菌体を用いて本微生物を培養した培養液中には核
駿及びたんぱく質を含み、良好な酵母エキスとなる。The culture solution obtained by culturing this microorganism using live yeast cells contains nucleosynthesis and protein, and becomes a good yeast extract.

また、廃水処理において酵母処理を採用する場合、モデ
ル廃水としてグルコース：べプトン：酵母をＣＯＤ比率
で１０：１：５の割合で、汚泥負荷０．０５タＣＯＤ／
タＭＢＳで活性汚泥処理を行っておけば、酵母は活性汚
泥槽で順調に消化されていくが、酵母がその比率を上回
った場合、活性汚泥中の原生動物等による酵母の捕食作
用が極端に低下し、酵母が消化しきれぬまま放流水に流
出する。このようなときに、本微生物により、いったん
酵母菌体を溶解した後、活性汚泥に移すと、本微生物菌
体は活性汚泥中の諸微生物の好じ（餌）となり、円滑な
廃水処理を行なえるようにする。次に、本発明の参考例
を示す。In addition, when yeast treatment is adopted for wastewater treatment, the model wastewater is glucose:beptone:yeast at a COD ratio of 10:1:5, and the sludge load is 0.05 tCOD/
If activated sludge treatment is carried out using Ta-MBS, yeast will be smoothly digested in the activated sludge tank, but if the yeast exceeds this ratio, the predation effect on yeast by protozoa in the activated sludge will become extreme. The yeast is not fully digested and flows into the effluent water. In such cases, if the yeast cells are lysed using this microorganism and then transferred to activated sludge, the microorganisms will become favorite food for the various microorganisms in the activated sludge, making it impossible to perform wastewater treatment smoothly. so that Next, reference examples of the present invention will be shown.

参考例 １ 本微生物を１×１０７／の‘になるように１／３０モル
リン酸緩衝液、硫酸マグネシウム２ｐｐｍ、酵母ハンゼ
ヌラ・アノマラ（Ｈａｎｓｅｎｕｌａａｎｏｍａｌａ）
Ｙ−１（徴工研菌寄第３５９４号）１×１ぴ／私、ｐＨ
９．０の培地１００のとに接種し、坂口フラスコ中で３
０℃２日間振とう培養した。Reference Example 1 This microorganism was mixed with 1/30 molar phosphate buffer, 2 ppm of magnesium sulfate, and the yeast Hansenula anomala at a concentration of 1 x 107/'.
Y-1 (Choken Bacteria No. 3594) 1×1pi/I, pH
Inoculate 100 volumes of 9.0 medium and inoculate 3 in Sakaguchi flasks.
The cells were cultured with shaking at 0°C for 2 days.

その結果、酵母菌数は２×ｌぴ／泌（９８％溶解）、本
微生物は２×１び／肌となった。培養液を１０００仇ｐ
ｍ２０分間遠心分離を行い、その上澄みについて紫外吸
光度法〔生物化物学実験研究会編「生成化学実験法」１
７６べ−ジ〕により核酸を、また、メンブランフィルタ
ーとアミド・ブラック１肥を用いて〔菅原潔、副島正美
著「蛋白質の定量法」１５５ページ〕たんぱく質を定量
した結果、７１胸（リボ核酸として）の核酸及び６卸剛
（卵製アルブミンとして）のたんぱく質を含む酵母エキ
スが得られた。参考例 ２ 洗米廃水中で３０００２日間振とう培養した酵母ハンゼ
ヌラ，ア／マラ（比ｓｅｎ山ａａｎｏｍａｌａ）Ｙ−１
（徴工研菌寄第３５９４号）を３００仇ｐｍｌび分間遠
心分離して集め、この菌体に１′３０モルリン酸緩衝液
と活性汚泥抽出液を活性汚泥乾物濃度として１０００脚
となるように加え、本微生物を１×１ぴ／私になるよう
に添加し、３０つ０１日間振とう培養した結果、培養開
始時に２×１ぴ／羽存在した酵母が培養終了時に１×１
び／泌に減少し、一方、本微生物は２．５〜１び／泌に
増加した。As a result, the number of yeast bacteria was 2 x 1/secretion (98% lysis), and the microorganism was 2 x 1/skin. 1000p of culture solution
Centrifugation was performed for 20 minutes, and the supernatant was subjected to ultraviolet absorption spectroscopy [Biological Chemistry Experimental Research Group, "Generation Chemistry Experimental Methods" 1]
76 pages] and protein using a membrane filter and Amide Black 1 fertilizer [Kyoshi Sugawara and Masami Soejima, ``Protein Quantification Methods,'' p. 155]. A yeast extract was obtained containing 50% of the nucleic acid and 6% of the protein (as egg albumin). Reference Example 2 Yeast Hansenula aa/mala Y-1 cultured with shaking in rice washing wastewater for 30002 days
(Choken Bacteria Collection No. 3594) was collected by centrifugation for 300 pml for 300 minutes, and the bacterial cells were mixed with 1'30 molar phosphate buffer and activated sludge extract so that the activated sludge dry matter concentration was 1000 microorganisms. In addition, this microorganism was added at a ratio of 1 x 1 p/m, and as a result of shaking culture for 30 days, the yeast that was present at 2 x 1 p/f at the start of the culture became 1 x 1 at the end of the culture.
The number of microorganisms increased to 2.5 to 1.

この培養液に活性汚泥をＭＢＳとして３００の剛となる
ように加え、２５ｑ０で１日間通気した結果、本微生物
は、活性汚泥処理前に１ぴ／泌存在したものが活性汚泥
処理後７×１ぴ／泌に減少した。Activated sludge was added as MBS to this culture solution to give a stiffness of 300, and as a result of aeration for 1 day at 25q0, this microorganism was secreted from 1 p/p before activated sludge treatment to 7 x 1 p/p after activated sludge treatment. The secretion decreased to pi/secretion.

Claims (1)

【特許請求の範囲】 １ 下記の菌学的性質を有することを特徴とするバージ
ーのマニユアル・オブ・デタミナテイブ・バクテリオロ
ジー第８版における第８群に属する新規微生物ＹＬＭ−
１株。 （１） 形態 （１） 細胞の形 桿菌 （２） 細胞の大きさ ０．３〜０．４×０．９〜１．
８μｍ（３） 細胞の多形成の有無 なし（４） 運動
性 あり （５） 鞭毛の着生状態 極鞭毛 （６） グラム染色性 性 （７） 抗酸性 陽性 （２） 生育状態 カタラーゼを無菌的に添加した培地における生育状態
（１） 肉汁寒天平板培地生育 貧弱な生育 コロニーの色 うす黄色 コロニーの色沢 有り コロニーの透明度 半透明 表面の形態 円形、凸円状 （２） 肉汁寒天斜面培地 生育 貧弱な生育 表面の形態 円滑 （３） 肉液体培養 混濁の程度は適度、液面の生育はなし （４） 肉汁ゼラチン穿刺培養 深部まで生育するが液化せず （５） リトマスミルク アルカリ性 （３） 生理学的性質 カタラーゼ（カラタラーゼ生成試験の場合はカタラー
ゼの代りにペルオキシダーゼ）添加した条件下における
生理学的性質（１） 硝酸塩還元 なし （２） 脱窒反応 陰性 （３） ＭＲテスト 陰性 （４） ＶＰテスト 陰性 （５） インドールの生全 なし （６） 硫化水素の生成 なし （７） デンプンの加水分解 分解する （８） クエン酸の利用 利用しない （９） 無機窒素の利用アンモニウム塩を利用する（１
０） 色素の生成 なし（１１） ウレアーゼ 陰性 （１２） オキシダーゼ 陰性 （１３） カタラーゼ 陰性 （１４） 生育の範囲 ▲数式、化学式、表等があります▼ （１５） 酸素に対する態度 通性嫌気性（１６） Ｏ
−Ｆテスト（Ｈｕｇｈ−Ｌｅｉｆｓｏｎ法） フアーメ
ンタテイブ（１７） 糖類からの酸及びガスの生成 糖類 酸 ガス Ｌ−アラビノース − − Ｄ−キシロース − − Ｄ−グルコース ＋ − Ｄ−マンノース ＋ − Ｄ−フラクトース ＋ − Ｄ−ガラクトース − − 麦芽糖 − − ミヨ糖 − − 乳糖 − − トレハロース − − Ｄ−ソルビツト − − Ｄ−マンニツト − − イノシツト − − グリセリン − − デンプン ＋ − セロビオース ＋ − ラフイノース − − （１８） ＤＮＡの分解性 分解しない （１９） カゼインの分解性 分解する （２０） 塩化ナトリウムの耐性 ３％でわずかに生育する[Scope of Claims] 1. A novel microorganism YLM- belonging to group 8 in Virsey's Manual of Determinative Bacteriology, 8th edition, characterized by having the following mycological properties:
1 share. (1) Morphology (1) Cell shape Bacillus (2) Cell size 0.3-0.4 x 0.9-1.
8 μm (3) Presence or absence of cell polyplasia: Absent (4) Motility: Yes (5) Flagellation status: Polar flagella (6) Gram staining: (7) Acid fast: Positive (2) Growth status: Aseptically coated with catalase Growth status in the added medium (1) Growth on a gravy agar plate Poor growth Color of colonies Light yellow color of colonies Yes Transparency of colonies Translucent surface morphology Circular, convex (2) Growth on gravy agar slant medium Poor Growth surface morphology Smooth (3) Meat liquid culture Moderate turbidity, no growth on the liquid surface (4) Meat juice gelatin puncture culture Grows deep but does not liquefy (5) Litmus milk Alkaline (3) Physiological properties Catalase (Peroxidase instead of catalase in the case of calatalase production test) Physiological properties under the added conditions (1) Nitrate reduction None (2) Denitrification reaction Negative (3) MR test Negative (4) VP test Negative (5) Indole Production of hydrogen sulfide None (6) Hydrogen sulfide generation None (7) Starch hydrolysis Decomposes (8) Use of citric acid No use (9) Use of inorganic nitrogen Use of ammonium salt (1
0) Pigment production None (11) Urease negative (12) Oxidase negative (13) Catalase negative (14) Range of growth▲There are mathematical formulas, chemical formulas, tables, etc.▼ (15) Attitude towards oxygen Facultative anaerobic (16) O
-F test (Hugh-Leifson method) Fermentative (17) Generation of acids and gases from sugars Sugars Acid Gas L-arabinose - - D-xylose - - D-glucose + - D-mannose + - D-fructose + - D-galactose - - Maltose - - Myosaccharide - - Lactose - - Trehalose - - D-sorbitol - - D-mannite - - Inositol - - Glycerin - - Starch + - Cellobiose + - Raffinose - - (18) DNA Degradability: Does not decompose (19) Degradability of casein: Decomposes (20) Resistance to sodium chloride: Slight growth at 3%