JPS60169497A - Human parathyroid hormone antagonist derivative and preparation thereof - Google Patents
Human parathyroid hormone antagonist derivative and preparation thereofInfo
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- JPS60169497A JPS60169497A JP59026754A JP2675484A JPS60169497A JP S60169497 A JPS60169497 A JP S60169497A JP 59026754 A JP59026754 A JP 59026754A JP 2675484 A JP2675484 A JP 2675484A JP S60169497 A JPS60169497 A JP S60169497A
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Abstract
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、ｆｒ現なヒト副甲状腺ホルモン（ｈ−Ｐ Ｔ
ＩＸ）アンタゴニスト誘導体およびその製法にＧｌｕ
−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｇ１ｕ＝Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ
−Ｌｙｓ −Ｌｙｓ −Ｌｅｕ −Ｇｌｎ −Ａｓｐ
−Ｖａｌ −Ｈｉｓ −Ａｓｎ−Ｔｙｒ −ＮＨ２Ｃ
Ｉ ）
−１Ｈ−Ｍｅｔ −ｆ−ｆｉｓ −Ａｓｎ −Ｌｅｕ
−Ｇｌｙ−１ｉ（−Ｌｅｕ −１ｖｌｅｔ −ｔｌｉｓ
−Ａｓｎ −Ｌｅｕ −Ｇｌｙ−まだはｄ −１１ｅ
−Ｇｉｎ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ｈｉｓ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ
−Ｇｌｙ−を示す）で表わされるペプチドまたはその
塩である。また、本発明は、ペプチド〔■〕を製造する
に当り、式〔■〕のアミノ酸順序に個々のアミノ酸およ
び（または）ベグチドフラグメントを羅合して構成し、
その際、ｇＩ１１鎖の官能基υよび（またＶｉ）、Ｎ−
末端アミノ酸のα−アミノ基全保獲基で保護し、Ｃ−末
端チロジンのα−カルボキシル基金アミド基に候え、そ
して侍られた保護されたペプチドＣＩ）の保護基金准分
解により脱離することを特徴とするペプチド〔Ｉ〕また
けその塩の製造法も包含される。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION The present invention relates to the use of modern human parathyroid hormone (h-P T
IX) Glu in antagonist derivatives and their production method
-Arg-Val-G1u=Trp-Leu-Arg
-Lys -Lys -Leu -Gln -Asp
-Val -His -Asn-Tyr -NH2C
I) -1H-Met-f-fis-Asn-Leu
-Gly-1i(-Leu -1vlet -tlis
-Asn -Leu -Gly-Madaha d -11e
-Gin-Leu-Met-His-Asn-Leu
-Gly-) or a salt thereof. In addition, in producing the peptide [■], the present invention comprises combining individual amino acids and/or vegutide fragments in the amino acid order of the formula [■],
At that time, the functional groups υ and (also Vi) of the gI11 chain, N-
The α-amino group of the terminal amino acid is protected with an all-retaining group, the α-carboxyl group of the C-terminal tyrosine is protected, and the protected peptide CI) is protected by a protective group that is freed by subdecomposition. Also included are methods for producing the characteristic peptide [I] and its salts.
従来、副甲状腺ホルモン（Ｐ Ｔ Ｉ（）アンタゴニス
ト活性ｆｆ：肩するペプチドとしてはラン副甲状腺ホル
モン（ｂ−Ｐ’ｌ’ｆ（）ペプチド誘導体が知られてい
るＣ Ｍｊｃｈａｅｌ Ｒｏｓｅｎｂｌａｔｔ、Ｐａｔ
ｈｏｂｊｏｌ ｏｑｙＡｎｎｕａｌ １１．５３〜８６
（１９８１） 、 ｅｄｉｔｅｄ ｂｙＨａｒｒｙ
Ｌ、 Ｉｏａｃｈｉｍ、 Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ、
Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ ］が、ウシ型Ｐ Ｔ Ｉ（に関する
ものであって、ヒトの医嬶品としては抗体産生等の安全
性に問題がある。Conventionally, peptide derivatives of parathyroid hormone (b-P'l'f()) have been known as parathyroid hormone (PTI() antagonist activity ff).Chael Rosenblatt, Pat
hobjol oqyAnnual 11.53~86
(1981), edited by Harry
L, Ioachim, Raven Press,
New York] is related to bovine PTI, and as a human medical product, there are safety issues such as antibody production.
本発明者らは、ヒト型Ｐ Ｔ １（ベグチド防４体にク
ーて種々研究を続けてＬ／１だが、本発明のベプチＭ
［：Ｉ］ カ５ット腎＃ｌ］Ｉ胞に対してはアンタゴニ
スト活性は示さないが、ヒト腎ｍ胞に対してはアンタゴ
ニスト活性を示すことｔ見出し、不発明勿児成したもの
である。従って、本発明のｈ−ＰＴｆ（アンタゴニスト
誘導体は副甲状腺機能亢進症に併なう疾患の治療剤とし
て有用である。The present inventors have continued various studies on the human type P T 1 (L/1 based on the vegtide 4 body), but the vegtide M of the present invention
[:I] Kidney kidney #l] It was discovered that it does not show antagonistic activity against human kidney M cells, but it does show antagonistic activity against human kidney M cells, and this was accomplished without invention. . Therefore, the h-PTf (antagonist derivative) of the present invention is useful as a therapeutic agent for diseases associated with hyperparathyroidism.
本発明のｈ−ＰＴＩ（アンタゴニスト誘導体は、式〔■
〕で示されるアミノ酸順序に個々の保護されたアばノ敵
および（城たは）保護された低級ペプチドを液相合成法
により縮合し、縮合反応の最終段階でＮ末端のアミノ基
の保護基および側鎖の官能基の保護基をば分解により悦
寵することＶＣより得られる。縮合反応自体はペプチド
合成のだめの常法手段に従って、保護基の着脱、縮合反
応を繰り返すことにより行われる。即ち、本ペプチド〔
■〕の原料ならびにすべての中間体の製造において使用
される各種保護基はペプチド合成で既知なもの、従って
加水分解、ぽ水解、還水、アミノリフ２またはヒドラジ
ツリシスのような既知手段によって容易に脱離すること
ぶてきる・保護基が用いられる。The h-PTI (antagonist derivative) of the present invention has the formula [■
] The individual protected abano-enemy and protected lower peptide are condensed with the amino acid sequence shown in ] by liquid phase synthesis method, and in the final step of the condensation reaction, the protecting group of the N-terminal amino group is added. It can be obtained from VC by decomposition of the protective group of the functional group of the side chain. The condensation reaction itself is carried out by repeating the attachment/detachment of a protecting group and the condensation reaction in accordance with conventional methods for peptide synthesis. That is, the present peptide [
The various protecting groups used in the production of the starting materials and all intermediates are those known in peptide synthesis and can therefore be easily removed by known means such as hydrolysis, polyhydrolysis, rehydration, aminorif 2 or hydrazitolysis. Protective groups are used.
このような保護基はベグチド合成化学の分野の文献なら
びに参考誉に記載されている。Such protecting groups are described in the literature and references in the field of begutide synthetic chemistry.
例えば、アミン基に使用する保ｍ基としては、ホルミル
基、トリフルオロアセチル基、フタロイル基、ｐ−）ル
エンスルホニル基、ｏ−二トロフェニルスルフェニル基
なとのアシル基、ベンジルオキシカルボニル基、ｏ （
またはｐ）−ブロモベンジルオキ７カルボニル基、ｏ（
まりＩｄ ｐ ）−クロロベンジルオキシカルボニル基
、ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル基、ρ−ノドキ
ンベンジル＃ ＊ ’／ カルボニル基などのベンジル
オキシカルボニル基、）！Ｉクロロエチルオキ７カルボ
ニル基、ｔ−ブチルオキシカルボニル基、ｔ−アミルオ
キ／ｆ） ／ｌ／ ホ＝ル基、ジイソノロピルメチルオ
キシカルボニル基などの脂肪族オキシカルボニル基、２
−７ 工＝ ／ｌ／ −イア クロボキンカルボニル基
、２−トリルーイソクロボキンカルボニル基、２−ｐ−
ジフェニルーインクロボキンカルボニル基などのアラル
キルオキシ力ルボニル基などがある。またこれらアミン
基全ベンゾイルアセトン、アセチルアセトンなどの１．
３−ジケトンと反応させることによって得られるエナミ
ンの形成により保護することができる。For example, the retaining group used for the amine group includes a formyl group, a trifluoroacetyl group, a phthaloyl group, a p-)luenesulfonyl group, an acyl group such as an o-nitrophenylsulfenyl group, a benzyloxycarbonyl group, o (
or p)-bromobenzylox7carbonyl group, o(
Mari Id p )-chlorobenzyloxycarbonyl group, p-nitrobenzyloxycarbonyl group, ρ-nodoquinbenzyl #*'/ benzyloxycarbonyl group such as carbonyl group, )! Aliphatic oxycarbonyl groups such as I chloroethyloxycarbonyl group, t-butyloxycarbonyl group, t-amyloxycarbonyl group, 2
-7 engineering = /l/ -ia chloroboquine carbonyl group, 2-tolyluisochloroboquine carbonyl group, 2-p-
Examples include aralkyloxycarbonyl groups such as diphenyloxycarbonyl groups. In addition, these amine groups such as total benzoylacetone and acetylacetone 1.
Protection can be achieved by the formation of enamines obtained by reaction with 3-diketones.
カルボキシル基は、アミド形成、ヒドラチド形成まだは
エステル化によって保護される。即ちアミド基は、３．
４−ジメトキシベンジル基、ビス−（ｐ−Ｊトキシフェ
ニル）メチル基などによって置換キれる。ヒドラチド基
はベンジルオキシカルボニル基、トリクロロエチルオキ
シカルボニル基、トリフルオロアセチル基、ｔ−プチル
オキシカルボニル基、トリチルＭ、２−ｐ−ジフェニル
ーイソグロボキシ力ルボニル基などによって置換される
。エステル基はメタノール、エタノール、ｔ−ブタノー
ル、シアノメチルアルコールなどのアルカノール−、ベ
ンジルアルコール、、ｐ−ブロモベンジルアルコール、
ｐ−クロロベンジルアルコール、２．６−シクロロベン
ジルアルコール、ｐ−メトキシベンジルアルコール、ｐ
〜ニトロベンジルアルコール、ベンズヒドリルアルコー
ル、ベンツイルメチルアルコール、ｐ−ｊロモベンゾイ
ルメチルアルコール、ｐ−クロロベンゾイルメチルアル
コールなどのアルカノール’１ ２，４゜６−トリクロ
ロフエノール、２，４．５−）リクロロフェノール、ペ
ンタクロロフェノール、ｐ−ニトロフェノール、２．４
−ジニトロフェノ−ルナトノフェノール、チオフェノー
ル、ｐ−ニトロチオフェノールなどのチオフェノールな
どによって置換される。Carboxyl groups are protected by amide formation, hydratide formation or esterification. That is, the amide group is 3.
It can be substituted with 4-dimethoxybenzyl group, bis-(p-Jtoxyphenyl)methyl group, etc. The hydratide group is substituted with a benzyloxycarbonyl group, trichloroethyloxycarbonyl group, trifluoroacetyl group, t-butyloxycarbonyl group, trityl M, 2-p-diphenylisogloboxycarbonyl group, and the like. Ester groups include alkanols such as methanol, ethanol, t-butanol, and cyanomethyl alcohol, benzyl alcohol, p-bromobenzyl alcohol,
p-chlorobenzyl alcohol, 2,6-cyclobenzyl alcohol, p-methoxybenzyl alcohol, p
~Alkanols such as nitrobenzyl alcohol, benzhydryl alcohol, benzyl methyl alcohol, p-j lomobenzoyl methyl alcohol, p-chlorobenzoyl methyl alcohol, 2,4°6-trichlorophenol, 2,4.5-) Lichlorophenol, pentachlorophenol, p-nitrophenol, 2.4
-Dinitrophenol Substituted with thiophenols such as natonophenol, thiophenol, and p-nitrothiophenol.
前記セリンおよびチロシンの水版基は、例えばエステル
化またはエーテル化によって保護することができる。こ
のエステル化に適する基としては、例えばアセチル基、
ベンゾイル基、ベンジルオキシカルボニル基、エチルオ
キシカルボニル４などである。またエーテル化に適する
基としては、例工ばヘンシル＆、２．６ ｙクロロベン
ジル基、テトラヒドロピラニル基、Ｌ−ブチル基である
。The serine and tyrosine water groups can be protected, for example, by esterification or etherification. Groups suitable for this esterification include, for example, acetyl group,
Examples include benzoyl group, benzyloxycarbonyl group, and ethyloxycarbonyl group. Examples of groups suitable for etherification include Hensyl &, 2.6y chlorobenzyl group, tetrahydropyranyl group, and L-butyl group.
これらの水酸基の保護にｒｔｚ、２．ｚ−）！Ｊフルオ
ロー１−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノエチル基、
２，２．２−トリフルオロ−１−ベンジルオキシカルボ
ニルアミノ基も適する。rtz to protect these hydroxyl groups, 2. z-)! J fluoro 1-t-butyloxycarbonylaminoethyl group,
Also suitable is the 2,2,2-trifluoro-1-benzyloxycarbonylamino group.
前記アルギニンのグアニジノ基中のアミ７基を保薩する
のに使用する基としては、例えばニトロ基、トシル基、
ベンジルオキシカルボニル基、メシチレン−２−スルホ
ニル基などであるが、このグアニジノ基を必ずしも保護
する必要はない。Examples of the group used to preserve the amide 7 group in the guanidino group of arginine include a nitro group, a tosyl group,
Examples include a benzyloxycarbonyl group and a mesitylene-2-sulfonyl group, but it is not necessary to protect this guanidino group.
前記ヒスチジンのイミノ基を保護するのに使用する基と
しては、例えばベンジル基、トリチル基、ベンジルオキ
７カルボニル基、トシル基、２，２゜２−トリフルオロ
−１−ｔ−プチルオキシカルボニルアミレエチル基、２
，２．２−トリフルオロ−１−ベンジルオキ７カルポニ
ルアミノエチル基などであるが、このイミノ基を必ずし
も保護する必４ｖｉない。Groups used to protect the imino group of histidine include, for example, benzyl group, trityl group, benzyloxy7carbonyl group, tosyl group, 2,2゜2-trifluoro-1-t-butyloxycarbonyl amylethyl group. base, 2
, 2,2-trifluoro-1-benzylox7carponylaminoethyl group, etc., but it is not necessary to protect this imino group.
前記のメチオニンのチオメチル基はメチルスルホキシド
基にして副反応を防止するのが好ましいが、必らずしも
酢化して保護する心安はない。Although it is preferable to convert the thiomethyl group of the methionine into a methyl sulfoxide group to prevent side reactions, it is not always safe to protect the methionine by acetylation.
本発明においては、α−アミン基の保護に１−ブチルオ
キシカルボニル４、ｔ−アミルオキシカルボニル基、ｐ
−メトキシベンジルオキシカルボニル基を用い、１ｊｌ
ｌｌ鎖のアミン基の保護に０−クロロベンジルオキシカ
ルボニル基金用い、α−カルボキシル基の保護にメチル
エステル基、ベンジルエステル基金用い、ｌｌ１ｌｊ鎖
のカルボキシル基の保護にベンジルエステル基を用い、
セリンの水ば基金全く保護する場合には、その保護基に
ベンジル基のアミン基の保護にメシチレン−２−スルホ
ニル基、トシル基を用するのが好ましｌＡ。In the present invention, for the protection of the α-amine group, 1-butyloxycarbonyl 4, t-amyloxycarbonyl group, p
-methoxybenzyloxycarbonyl group, 1jl
A 0-chlorobenzyloxycarbonyl group is used to protect the amine group of the ll chain, a methyl ester group and a benzyl ester group are used to protect the α-carboxyl group, a benzyl ester group is used to protect the carboxyl group of the ll1lj chain,
When serine is completely protected, it is preferable to use a mesitylene-2-sulfonyl group or a tosyl group to protect the amine group of the benzyl group.
本目的化合物〔■〕の合成においては、個々のアミノ酸
および（またｖ′ｉ）低級ペプチドの縮合は、例えば保
護はれたα−アミン基および活性化末端カルボキシル基
をもつアミノばまたはペプチドと遊離のαアミノ基およ
び保護された末端カルボキシル基をもつアミノ咽または
ペプチドとを反応させるか、あるいは活性化α−アミノ
羞および保護された末端カルボキシル基をもつアミノば
またはペプチドと遊離の末端カルボキシル基２よび保護
されだα−アミン基をもつアミノ酸またはペプチドを反
応させることにより、芙施することかできる。In the synthesis of the target compound [■], the condensation of individual amino acids and (also v'i) lower peptides is carried out, for example, with amino acids or peptides having a protected α-amine group and an activated terminal carboxyl group. or a peptide with an activated α-amino group and a protected terminal carboxyl group with a free terminal carboxyl group. This can be achieved by reacting an amino acid or peptide with a protected α-amine group.
この場合、カルボキシル基は、例えばばアジド、ば無水
物、酸イミダゾリドまたは活性エステル、ｆｌｕハシア
ノメチルエステル、チオフェニルエステル、ｐ−ニトロ
チオフェニルエステル、ｐ−二トロフェニルエステル、
２．４−）ニトロフェニルエステル、２，４．５− ト
’）クロロフェニルニスｆル、２＋４．６−）ＩＪジク
ロロェニルエステル、ペンタクロロフェニルエステル、
Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミドエステル、Ｎ−ヒドロキ
シフタル酸イミドエステルなどに変換することによって
活性化することができる。またカルボジイミド、例えば
Ｎ 、 Ｎ’−ジンクロヘキシルー力ルポジイミド、Ｎ
−エチル−Ｎ’−３−ジメチルアミンプロピル−カルボ
ジイミド、Ｎ、Ｎ’−カルボニル−ジイミダゾールまた
はインオキゾリウム項、例えばウッドワード反応剤など
の縮合剤を使用して反応させることによって活性化する
ことができる。In this case, the carboxyl group is, for example, an azide, anhydride, acid imidazolide or active ester, flu hasyanomethyl ester, thiophenyl ester, p-nitrothiophenyl ester, p-nitrophenyl ester,
2.4-) nitrophenyl ester, 2,4.5-t') chlorophenyl ester, 2+4.6-) IJ dichlorophenyl ester, pentachlorophenyl ester,
It can be activated by converting it into N-hydroxysuccinimide ester, N-hydroxyphthalic acid imide ester, etc. Also carbodiimides, such as N,N'-zinchlorohexyllupodiimide, N
-Ethyl-N'-3-dimethylaminepropyl-carbodiimide, N,N'-carbonyl-diimidazole or inoxolium terms, which can be activated by reaction using a condensing agent such as Woodward reagent. .
本発明におりて好ましい縮合方法は、アジド法、活性エ
ステル法およびカルボジイミド法である。Preferred condensation methods in the present invention are the azide method, active ester method and carbodiimide method.
縮合の各段１肴ではラセミ化が起らない方法またはラセ
ミ化が最少になる方法を用いるのが望ましく、好ましく
はアジド法、活性エステル法、ビュンシユ法ＣＺ、Ｎａ
ｔｕｒｆｏｒｓｃｈ、、２１ｂ、４２６ （１９６６）
〕またはガイガー法ＣＣｈｅｍ Ｂｅｒ、、 １０３
，７８８ （１９７０） 〕とりわけ縮合剤としてＮ−
エチル−Ｎ−３−ジメチルアミノグロピルー力ルポジイ
ミド（ＷＳ Ｃ１））を用いる変法などを用いるのが適
する。For each stage of condensation, it is desirable to use a method that does not cause racemization or a method that minimizes racemization, preferably the azide method, active ester method, Bunschyu method CZ, Na
Turforsch, 21b, 426 (1966)
] or Geiger method CChem Ber, 103
, 788 (1970)] in particular as a condensing agent.
It is suitable to use a modified method using ethyl-N-3-dimethylaminoglopyrupodiimide (WS C1).
縮合順序は弐［０で示されるアミノ酸順序であれば、如
何なる順序からも合成し得るが、Ｃ−末端側から順次ア
ミノ酸および（または）ペプチドを連結させるのが好ま
しい。As long as the condensation order is the amino acid order shown by 2[0, synthesis can be performed in any order, but it is preferable to connect amino acids and/or peptides sequentially from the C-terminal side.
例えば、２９〜３４番のアミノ酸順序からなるＣ−末端
フラグメントと２３〜２８番のアミノ酸からなるペプチ
ドフラグメントを縮合させるのがよい。このＣ−末端フ
ラグメントとへサキペプチド２３−２８を縮合させるに
はガイガー法により行うのが適する。得られたＣ−末端
フラグメント２３−３４のＡｉＪ ＩＩＣ１８〜２２４
のアミノば順序からなるペプチドフラグメントを縮合さ
せるのがよい。この縮合にはＶＶＳＣＤ ｆ用いるガイ
ガー変法により行うのが適する。得られたＣ−末端フラ
グメント１８−３４の前に１３〜１７査のアミノ酸ノ順
序からなるペプチドフラグメントを縮合させるのがよい
。この縮合には上記変法によシ行うのが適する。得られ
たＣ−末端フラグメント１３−３４、即ち保護されたＣ
Ｔｙｒ” 、１ ｈ −ＰＴＨ（１３−３４）ＮＩ２
の前に９〜１２番のアミノ酸順序からなるテトラペプチ
ドフラグメント、８〜１２番のアミノ酸順序からなるペ
ンタペプチドフラグメントまたは７〜１２番のアミノ酸
順序からなるヘキサペプチドフラグメントを縮合させる
ことにより保護されたＣ Ｔｙｒ”） ｈ −ＰＴＨ（
９−３４） ＮＩ２、保護された［Ｔｙｒ”’〕ｈ−Ｐ
’Ｉ”ｌ（（８−３４） Ｎｔ（２または保１Ｊ−Ｊれ
たＣ Ｔｙｒ” ］ ｈ −ＰＴＨ（７−３４） Ｎ１
（２が得られるが、この縮合も上記のＷＳＣＤを用いる
変法により行うのが適する。得られた保護された〔Ｔｙ
ｒ” 〕ｈ −ＰＴＨ（８−３４） ＮＩ２のＡｉＪに
５〜７番のアミノ酸順序からなるトリペプチドフラグメ
ントを縮合ざぜることにより保護さｎたＣ Ｔｙｒ３４
］ｈ−ＰＴＨ（５−３４） Ｎｆ（２カ得られるが、コ
ノ縮合もＶＶ Ｓ ＣＤ ’ｆｒ用いる変法によシ行う
のが適する。For example, it is preferable to condense a C-terminal fragment consisting of amino acids 29-34 with a peptide fragment consisting of amino acids 23-28. The Geiger method is suitable for condensing this C-terminal fragment with Hesakipeptide 23-28. AiJ IIC18-224 of the resulting C-terminal fragment 23-34
It is preferable to condense peptide fragments consisting of the amino sequence of This condensation is suitably carried out by a modified Geiger method using VVSCD f. The resulting C-terminal fragment 18-34 is preferably preceded by a peptide fragment consisting of 13-17 amino acid sequences. This condensation is suitably carried out by the modified method described above. The resulting C-terminal fragment 13-34, i.e. the protected C
Tyr'', 1h-PTH(13-34)NI2
Protected C Tyr") h -PTH(
9-34) NI2, protected [Tyr”']h-P
'I"l((8-34) Nt(2 or 1J-J C Tyr"] h -PTH(7-34) N1
(2 is obtained, but this condensation is also suitably carried out by a modified method using WSCD as described above. The resulting protected [Ty
r” ]h -PTH (8-34) C Tyr34 protected by condensing a tripeptide fragment consisting of amino acids 5 to 7 to AiJ of NI2
]h-PTH(5-34)Nf (2 compounds are obtained, but the condensation is also suitably carried out by a modified method using VVS CD'fr.
上記の縮合反応におけるα−アミン基の保護基例えばｔ
−ブチルオキシカルボニル基、ｔ−アミルオキシカルボ
ニル基はトリフルオロ酢酸で脱離される。A protecting group for the α-amine group in the above condensation reaction, for example, t
-Butyloxycarbonyl group and t-amyloxycarbonyl group are removed with trifluoroacetic acid.
こうして保護されたＮ末端α−アミノ基、ε−アミノ基
、側鎖カルボキシル基、グアニジノ基および（または）
水酸基を有するペプチド〔Ｉ〕、即ち、保護されたＣ
Ｔｙｒ”） ｈ−ＰＴＨ（１３−３４）Ｎｆ（２、保護
されたＣＴｙｒ３Ｊ ｈ−ＰＴＨ（９−３４）ＮＩ（２
、保護された［： Ｔｙｒ３４ ） ｈ −Ｐ Ｔ Ｈ
’（８−３４）ＮＩ２、保護されｋＣ’ｆ’ｙｒ”）
ｈ−Ｐ’ｒｆ（（７−３４）または保護されたＣ Ｔｙ
ｒ” ］ ｈ −Ｐ ＴＨ（５−’３４）Ｎｆ（２が得
られる。これらの保護基は、好ましくは酸分解、例えば
無水弗化水粱またはトリフルオロメタンスルホン酸を用
いる酸分解による方法によって一階で脱離され、式〔■
〕のペプチド、即ち〔Ｔｙｒ” ：］ ｈ Ｐ Ｔ Ｈ
（１３３４） ＮＩ２ 、Ｃ−１ｙｒ３４ 〕ｈ−ＰＴ
Ｈ（９−３４） ＮＩ２、ＣＴｙｒ”〕ｈ−ＰＴＨ（８
−３４） Ｎｆ（２、ＣＴｙｒ３４） ｈ−ＰＴｆ（（
７−ａ４）１［２またはＣＴｙｒ３４：］ ｈ−Ｐ’ｆ
’Ｈ（５−３４）Ｎｕ（□が得られる。Thus protected N-terminal α-amino group, ε-amino group, side chain carboxyl group, guanidino group and/or
Peptide [I] having a hydroxyl group, i.e. protected C
Tyr”) h-PTH(13-34)Nf(2, protected CTyr3J h-PTH(9-34)NI(2
, protected [:Tyr34)h-PTH
'(8-34)NI2, protectedkC'f'yr'')
h-P'rf((7-34) or protected C Ty
r'']h-PTH(5-'34)Nf(2) are obtained. These protecting groups are preferably removed by acid decomposition, for example using anhydrous fluorinated starch or trifluoromethanesulfonic acid. It is detached on the floor, and the formula [■
] peptide, i.e. [Tyr”:] h P T H
(1334) NI2, C-1yr34]h-PT
H(9-34) NI2,CTyr”]h-PTH(8
-34) Nf(2, CTyr34) h-PTf((
7-a4) 1[2 or CTyr34:] h-P'f
'H(5-34)Nu(□) is obtained.
このようにして得られたペプチド〔１〕は、ペプチドま
たは蛋白質を精製する公升の手段によって分離精製する
ことができる。例えば、セファデックスＧ−２５、セフ
ァデックスＧ〜５０、セファデックスＬＨ−２０などの
ゲルｐ過剤を用いるゲル濾過、カルボキシメチルセルロ
ース、イオン交換樹ｊ指などを用いるカラムクロマトグ
ラフィー、高速液体クロマトグラフィーなどにより行う
ことができる。The peptide [1] thus obtained can be separated and purified by conventional means for purifying peptides or proteins. For example, gel filtration using a gel filtration agent such as Sephadex G-25, Sephadex G~50, Sephadex LH-20, column chromatography using carboxymethyl cellulose, ion exchange resin, etc., high performance liquid chromatography, etc. This can be done by
本発明のペプチドＣＩ）は、その栄件により塩基まだは
その塩の形で得られる。塩としては、無機酸塩、ギ酸、
酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、コ・・りｒ投、リ
ンゴ酸、酒石ば、クエン酸などの有機ばとの塩である。The peptide CI) of the present invention can be obtained in the form of a salt thereof depending on its merits. Salts include inorganic acid salts, formic acid,
These are salts of organic acids such as acetic acid, propionic acid, glycolic acid, co-reactive acid, malic acid, tartaric acid, and citric acid.
次に、本発明のペプチド〔■〕のアンタゴニスト活性に
ついて述べる。Next, the antagonist activity of the peptide [■] of the present invention will be described.
＜ ｐ ’ｒ Ｈアンタゴニスト活性測定法〉（材料）
ヒト腎腫瘍、腎孟ノ厘瘍で摘出した、腎臓の健常部分を
取り出し、皮質をはさみで細切し、それ金ＤＭ Ｅ （
Ｄｕｌｂｅｃｃｏ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｍｉｎｉｎｕｍ
ＥｓｓｅｎｔｉａｌＭｅｄｉｕｍ）で３回洗浄し、コ
ラゲナーゼ（１ｍ９７ｍｅ）を含むＤＭＥｌＯｍｌを加
え３７℃で１０分間静置した後、上清を捨てる。（ａ）
残直にコラゲナーゼを含むＤＭＥＩＱｍｌを〃ｎえ３７
℃で５分間静置し、（ｂ）次いで強く振とうした後、さ
らに５分間静置する。上清Ａを採取し、残渣ｋ（ａ）、
（ｂ）の操作全２回繰り返して、各々上清Ｂ１上澄Ｃを
得る。上清ＡＸＢ、Ｃを混合し、これに１６１ＦＣＳ
（Ｆｏｅｔａｌ Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ） ｆ：含
むＤＭＥｉ半量加えた後、１０００ ｒｐｍで１０分間
遠心分離して上清を捨てる。残渣をＦｅ２を含む０ ＋
ＶＩ Ｅ ４０ｍｌで懸濁して遊離細胞の懸濁岐を得る
。<Method for measuring p'r H antagonist activity> (Materials) A healthy part of the kidney removed from a human renal tumor or renal tumor was taken out, the cortex was cut into small pieces with scissors, and the cortex was cut into pieces with gold DM E (
Dulbecco Modified Minimum
After washing the tube three times with DMElOml containing collagenase (1m97me) and leaving it at 37°C for 10 minutes, discard the supernatant. (a)
Add DMEIQml containing collagenase to the residue37
℃ for 5 minutes, (b) then shake vigorously, and then leave to stand for an additional 5 minutes. The supernatant A was collected, and the residue k(a),
Repeat the procedure (b) twice to obtain supernatant B1 and supernatant C, respectively. Mix supernatants AXB and C and add 161FCS to this.
(Fetal Bovine Serum) f: After adding half the amount of DMEi, centrifuge at 1000 rpm for 10 minutes and discard the supernatant. Residue containing Fe2 0 +
Suspend in 40 ml of VIE to obtain a suspension of free cells.
（方法）
上記懸濁液を１デイソンユ当り２ ｍｌづつカルチャー
・ディツシュに分注し、３７℃で培養する。(Method) Dispense 2 ml of the above suspension into a culture dish per day and culture at 37°C.
２４時間後にＦｅ２を含ひｌ） ｌＶＩ Ｅとメディウ
ム又挨を行い、４８時間後に２ｍＭメチルイソブチルキ
サンチンを含むＩ） ｔｖｌ’ Ｅ Ｋ ｈ −Ｐ Ｔ
ｆ（（１−３４）を２．４３ＸＩＯＭ添加し、これに
各種濃度のペプチド〔■〕を添加したメディウムと交換
し、６０分間培養して、そのメディウム中および細胞内
のＣ−Ａ ＩＡ Ｐ ｉをラジオイムノアッセイ （Ｒ
Ｉ Ａ）キット（ヤマザ醤油社製）を用いて測定し、■
ティッシュ当りのＣ−ＡＭＰ量（ｆｍｏｌ 請求めた。After 24 hours, the medium was mixed with lVIE containing Fe2, and after 48 hours, it was mixed with I) tvl' E K h -P T containing 2mM methylisobutylxanthine.
2.43XIOM of f((1-34) was added, and the medium was replaced with a medium containing various concentrations of peptide [■], and cultured for 60 minutes. Radioimmunoassay (R
I A) Measured using a kit (manufactured by Yamaza Soy Sauce Co., Ltd.), and
The amount of C-AMP (fmol) per tissue was requested.
（結果）
上記測定結果は次表の通りであって、ペプチドＣＤの添
加によりＣ−ＡＩＶＩＰの生成を抑制することから、本
発明のペプチド〔■〕がＰ ’Ｌ” ）ｌアンタゴニス
ト活性−ｔｍすることを示している。(Results) The above measurement results are as shown in the following table, and the addition of peptide CD suppresses the production of C-AIVIP. It is shown that.
尚、本明細書中に記載Ｏ略記号は次の意味を有する。In addition, the abbreviation O described in this specification has the following meaning.
’Ｉ”ｙｒ ； Ｌ−チロ７／
Ａｓｎ ； Ｌ−アスノくラギン
）Ｉｉｓ；Ｌ−ヒスチジン
Ｖａｌ ： Ｌ−バリン
Ａ１１） ； Ｌ−アスパラギン酸
Ｇｌｎ ； Ｌ−グルタミン
Ｌｅｕ ； Ｌ−ロイ７ン
Ｉ、ｙｓ ； Ｌ −リ ジ ン
Ａｒｇ ； Ｌ−アルギニン
Ｔｒｐ ； Ｌ −トリプトファン
Ｇｌｕ ； Ｌ−グルタミン酸
Ｍｅｔ ； Ｌ−メチオニン
Ｓｅｒ ｌ Ｌ−セリン
Ｇｌｙ；グリ７ン
１１ｅ ； Ｌ−インロイ７ノ
ＢＯＣ； ｔ−ブトキシカルボニル
ＡＱＣ；Ｌ−７ミルオキシカルボニル
Ｚ−Ｃ／； ｏ−クロロベンジルオキ７カルポニルＯＥ
ｔ ；エチルエステル
０Ｂｚｌ；ベンジルエステル
ＯＮＰ ； Ｉ）−二トロフェニルエステル０ＰＡＣ；
フェナシルエステル
Ｂｚｌ ；ベンジル
Ｂｚｌ−Ｃ１□；２Ｉ６−ジクロロベンジルＤＣＣ；ジ
シクロヘキ・／ルカルボジイミドＤＣＵ ；シンクロヘ
キシル尿素
ＷＳＣＤ： Ｎ〜エチル、Ｎ’−３−ジメチルアミノプ
ロピル−カルポジイミド
１（ＯＢＴ； ｌ−ヒドロキシベンゾトリアゾールＴＦ
Ａ ； トリフルオロ酢酸
ＴｏｓＯＨ： ｐ −）ルエンスルホン酸ＡｃＯＨ；酢
酸
Ａｃ０Ｋ；酢酸カリウム
Ａｃ０ＮＨ４：酢酸アンモニウム
ＮＭＶｉ ； Ｎ−メチルモルホリン
ｋＡ３Ｎ： トリエチルアミン
Ｌ）ＣＩ−ＩＡ；シシクロヘキソルアミンＴＢＡ ；
ｔ−ブチルアミン
ＴＨＦ ；テトラヒドロフラン
Ｅｔ２０；ジエチルエーテル
ＣＨ２Ｃｌ２；ジクロロメタン
ＤＭＦ ；ジメチルホルムアミド
ＭｅＯＨ；メタノール
ＥｔＯＨ；エタノール
Ａｃ０Ｅｔ；酢酸エチル
ＥＤＴ ；エタンジチオール
Ｍｅ２Ｓ；ジメチルスルフィド
次に丈施例を挙げて本発明の製造クリ（ｌ−具体的に説
明する。'I"yr; L-tyro7/ Asn; L-thyro7/ Asn; L-histidine Val: L-valine A11); L-aspartic acid Gln; L-glutamine Leu; L-leu7 I, ys ; L-lysine Arg; L-arginine Trp; L-tryptophan Glu; L-glutamic acid Met; L-methionine Ser; L-serine Gly; ;L-7miloxycarbonyl Z-C/; o-chlorobenzylox7carponyl OE
t; ethyl ester 0Bzl; benzyl ester ONP; I)-nitrophenyl ester 0PAC;
Phenacyl ester Bzl; benzyl Bzl-C1□; 2I6-dichlorobenzyl DCC; dicyclohexyl/carbodiimide DCU; synchlohexyl urea WSCD: N~ethyl, N'-3-dimethylaminopropyl-carpodiimide 1 (OBT; l-hydroxy Benzotriazole TF
A; trifluoroacetic acid TosOH: p-)luenesulfonic acid AcOH; acetic acid Ac0K; potassium acetate Ac0NH4: ammonium acetate NMVi; N-methylmorpholine kA3N: triethylamine L) CI-IA; cyclohexolamine TBA;
t-Butylamine THF; Tetrahydrofuran Et20; Diethyl ether CH2Cl2; Dichloromethane DMF; Dimethylformamide MeOH; Methanol EtOH; Ethanol Ac0Et; Ethyl acetate EDT; Ethanedithiol Me2S; Dimethyl sulfide -Explain in detail.
尚、実施列中の薄層クロマトグラフィーＣＴＬＣ）の担
体および溶媒系、アミノ酸分析の条件および高速液体ク
ロマトグラフィー（ＨＰｆ、Ｃ）Ｏ測定条件は特記しな
Ｉ／−１限り次の通りでるる。The carrier and solvent system of thin layer chromatography (CTLC), the conditions of amino acid analysis, and the conditions of high performance liquid chromatography (HPf, C)O measurement in the practical example are as follows, as long as I/-1 is not specified.
＜ ’１１’ Ｌ Ｃ＞
担体；メルク社製セルロースＡｒｔ ５７１６に開溶媒
；
１１ ブタノールピリジン−酢酸−水（５：３：０．１
：１１）の上層液
１２ ブタノールピリジン−酢酸−水（１５：１０：３
：１２）
担体；メルク社製シリカゲルＡｒｔ ５７１５展開溶媒
；
２ クロロホルム−エタノール−ｍｆ ｍ ：ｒ−ｆ
ル（５：２：５）
３ クロロホルム−メタノール−酢１７（９５：５：３
）
４ クロロホルム−メタノール−酢１ｇ（８５：１５：
５）
５ クロロホルム−メタノール−ｆｆｌ［（８０：２５
：２）
６ ｎ−ヘキサン−酢酸エチル（ｌ：ｔ）７ ベンゼン
−酢酸エチル（２：ｌ）
〈アミノ酸分析〉
被検体を２％チオグリコール酸含有６Ｎ塩酸で１０５℃
、２４時間加水分解し、これを諷庄乾固してアミノ酸分
析に供した。<'11' L C> Support: Cellulose Art 5716 manufactured by Merck & Co., Ltd. opened solvent; 11 Butanolpyridine-acetic acid-water (5:3:0.1
:11) Upper layer liquid 12 Butanolpyridine-acetic acid-water (15:10:3
:12) Carrier; Silica gel Art 5715 manufactured by Merck; developing solvent; 2 chloroform-ethanol-mf m : r-f
(5:2:5) 3 Chloroform-methanol-vinegar 17 (95:5:3
) 4 Chloroform-methanol-vinegar 1g (85:15:
5) 5 Chloroform-methanol-ffl [(80:25
:2) 6 n-hexane-ethyl acetate (l:t) 7 benzene-ethyl acetate (2:l) <Amino acid analysis> The sample was heated at 105°C in 6N hydrochloric acid containing 2% thioglycolic acid.
The product was hydrolyzed for 24 hours, dried to dryness, and subjected to amino acid analysis.
（ｉ（Ｐ Ｌ Ｃの測定条件〉
カラム； Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ ５ Ｃ１Ｂ （４ｍｍ
より Ｘ １５ （Ｊｍｍ）緩衝液； ０． ｌ Ｍ
’Ｊン酸含有Ｏ１％酢酸とアセトントリル、３０分間に
アセトントリルを１０チから４０優に変化する直線型＃
度勾配流速；’１ｍｌ／分
検出： ２２５ ｎｍ
結果；リテンション・タイムを分単位で示す。(i (PLC measurement conditions) Column; Nucleosil 5 C1B (4mm
From X 15 (Jmm) buffer; 0. l M
'Linear type that changes from 10% to 40% acetone in 30 minutes with 1% acetic acid and acetone containing acid.
Gradient flow rate: '1 ml/min Detection: 225 nm Results: Retention times are shown in minutes.
実施列 １
［：Ｔｙｒ”〕ｈ−ＰＴＨ（１３−３４）Ｎｌ（２：１
４− Ｌｙｓ −１（ｉ ａ −Ｌｅｕ −Ａｓｎ −
Ｓｅｒ −１Ｖ１ｅｔ −Ｇｌｕ−Ａｒｇ −Ｖａｌ
−Ｇｌｕ −Ｔｒｐ −Ｌｅｕ −Ａｒｇ−Ｌｙｓ −
Ｌｙｓ −Ｌｅｎ −Ｇｉｎ −Ａｓｐ −Ｖａｌ −
山ｓ −Ａｓｎ −Ｔｙｒ −Ｎ１−１２１）、 Ｆ
（３４Ｔ） ＮＨ２： ＢＯＣ−’ｆ’ｙｒ（Ｂｚｌ
−Ｃ４）−ＮＨ２［：１］
ＢＯＣ−Ｔｙｒ （Ｂｚｌ −Ｃ７２） −ＯＲ５２，
８４、！９（０，１２Ａ４）とｐ−ニトロフェノール１
６．６９７を’ｆ’ ｔ（Ｆ ５００ ｍｌに溶解し、
θ℃冷−Ａｊ下１）ＣＣ２４，７６、ｉｌ？（１当重）
のＴｔｔＦ嬉Ｍ、全刃口えて、−夜撹拌した。生じたＤ
ＣＵをＹｐ過した後、溶液にアンモニアを飽才口し、５
時間ｉ）を件した。溶媒を減圧留去した後、残、査にＥ
ｔ ２０ を刀ｌえて結晶化して目的物Ｃ１〕４４．７
”＃（収率８４９％）をｆ尋た。Actual column 1 [:Tyr”]h-PTH(13-34)Nl(2:1
4-Lys-1(ia-Leu-Asn-
Ser -1V1et -Glu-Arg -Val
-Glu -Trp -Leu -Arg-Lys -
Lys -Len -Gin -Asp -Val -
Mountain s -Asn -Tyr -N1-121), F
(34T) NH2: BOC-'f'yr (Bzl
-C4)-NH2[:1] BOC-Tyr (Bzl -C72) -OR52,
84,! 9(0,12A4) and p-nitrophenol 1
6. Dissolve 697 in 'f' t (F 500 ml,
θ℃ Cold-Aj lower 1) CC24,76, il? (1 weight)
TttF happy M, all the blades were opened, and stirred at night. D caused
After passing CU through Yp, add ammonia to the solution and add 5
Time i) was reported. After distilling off the solvent under reduced pressure, the residue was
t 20 and crystallize the object C1] 44.7
"# (yield 849%)"
融点２１４〜２１６℃
〔α〕ろ５−５．５４°（Ｃ＝１．１）ＭＦ）Ｔ ＬＣ
； Ｒｆ３＝０．６２
元素分析〔Ｃ２Ｉｆ（２，０４Ｎｆ１２として〕０％
６％ Ｎチ
計算値 ５７，４１ ５，５１ ６．３８測定値 ５７
，４２ ５．５９ ６．５１２）、ＰＦ （３３−３４
Ｔ） ｌ”ＪＨ２： ｆＨＪｃ −ＡｓｎＴｙｒ （Ｂ
ｚｌ Ｃｌ２） Ｎｄｚ ［：２］ＣＤ ２６．３６
ｇ（６０ｍＭ） ’ｅｃｌＩ２Ｃ７２２０ｍｌ。Melting point 214-216℃ [α] Filter 5-5.54° (C=1.1) MF) T LC
; Rf3=0.62 Elemental analysis [C2If (as 2,04Nf12)] 0%
6% Nchi calculated value 57,41 5,51 6.38 measured value 57
, 42 5.59 6.512), PF (33-34
T) l”JH2: fHJc −AsnTyr (B
zl Cl2) Ndz [:2] CD 26.36
g (60mM) 'eclI2C7220ml.
ＴＦＡ１００ｍ／！ｌｃｇかし、室温で３０分間撹拌し
た陵、溶媒全減圧留去した。残渣にＥｔ２０を加え、生
じた沈澱′ｆ：ｖ５取した。得られた粉末を１） Ａ／
Ｉ Ｆｚｏｏｍｉｖｇ４かし、ＮＭＭでｐＨ７に調節し
た。TFA100m/! The mixture was stirred at room temperature for 30 minutes, and then all the solvent was distilled off under reduced pressure. Et20 was added to the residue, and the resulting precipitate 'f:v5 was collected. The obtained powder is 1) A/
IFzoomivg4 and adjusted to pH 7 with NMM.
これにＢ ＯＣ−Ａｓｎ −ＯＨｌ ３．９３ 、！ｉ
’ （１当童）、）ｉ０ＢＴ８．１”（１当：ｔ）ｔ−
、ｖｏえ、ｏ’ｃ冷ｉ１下ＷＳ ＣＤ Ｉ ０．９８ｍ
ｌ （，１当量）を加えて、室温で一夜撹拌した。反応
後、生じた結晶をＰ取し、５％重曹水、水、ＭｅＯＨの
順で洗浄した。またＤＭＦを減圧留去し生じた結晶を水
、ＭｅＯＨの順で洗浄した。２つの結晶をあわせ゛Ｃ目
的イ勿［２〕２８．６４．９（収率８６．３％）を得た
。To this, B OC-Asn -OHl 3.93,! i
' (1 winner),) i0BT8.1" (1 winner: t) t-
, voe, o'c cold i1 lower WS CD I 0.98m
1 (, 1 eq) was added and stirred at room temperature overnight. After the reaction, the resulting crystals were collected and washed with 5% sodium bicarbonate solution, water, and MeOH in this order. Further, DMF was distilled off under reduced pressure, and the resulting crystals were washed with water and MeOH in that order. The two crystals were combined to obtain 28.64.9 (yield: 86.3%).
融点；２４０〜２４２℃
〔α）％５−２４．０６°（Ｃ＝１ 、Ｉ）ＭＦ）ＴＬ
Ｃ； Ｒｆ５＝０．４６
元素分析〔Ｃ２５Ｈ３ｏ０６Ｎ４Ｃ１２として〕０％
Ｈチ Ｎチ
計算値 ５４，２５５．４６ １０．１３測定埴 ５４
．４６ ５．３８ １０．３１３）、Ｐ Ｆ （３１−
３４Ｔ） ＮＨ２： ＢＯＣ−’Ｖａｌ−Ｈｉｓ −Ａ
ｓｎ −Ｔｙｒ （Ｂｚｌ −ＣＡ！２ ） −ＮＨ２
［３］［２） ２２．１４１ （４０ｍＭ）をＣＨ２Ｃ
ｌ２２０ ｍｌ。Melting point; 240-242°C [α)%5-24.06° (C=1, I)MF)TL
C; Rf5=0.46 Elemental analysis [as C25H3o06N4C12] 0%
Hchi Nchi calculated value 54,255.46 10.13 Measuring clay 54
．． 46 5.38 10.313), P F (31-
34T) NH2: BOC-'Val-His-A
sn -Tyr (Bzl -CA!2) -NH2
[3] [2) 22.141 (40mM) in CH2C
l220 ml.
ＴＦ１６０ｍｌＶＣ爵かし、室温で１時間撹拌した後、
溶媒を減圧留去した。残渣にＥｔ２０を加え、生じた沈
頗をＰ取した。得られた粉末をυＩＶＩ ＩＩ’１００
ｍｌに浴かし、ＮＭＭでｐＨ７に調節した。After adding 160 ml of TF and stirring at room temperature for 1 hour,
The solvent was removed under reduced pressure. Et20 was added to the residue, and the resulting precipitate was collected. The obtained powder is υIVI II'100
ml and adjusted to pH 7 with NMM.
一方、Ｂ ＯＣ−Ｈｉ ｓ （Ｔｏｓ） −０ｉ（ＩＩ
ＤＣｆ（Ａ２８．３６．９（４８ｍＭ） ｔＡｃＯＥｔ
５００ｍｌ、Ｉ Ｎ硫酸と共にふりまぜ、有機層を水
洗した後、無水硫液ナトリウムで乾燥し、Ａｃ０Ｅｔを
減圧留去して油状＊′ｔ−侍だ。倚られた油状物をＴｔ
（Ｆ” ｌ ｏ ｏｍｌＫｍかし、上記１）ＭＦｍ液に
加え、ｌ（ＯＢ ’ｒ ６．４８１１（１当量）を〃ｕ
えて、０℃冷却下ＷＳＣＯ８，７８ｍ１！ｆ：加えた後
、室温で一夜撹拌した。反応後、溶媒を減圧留去し、５
％重値水を加え、生じた沈澱金Ｐ取した後、水、Ｍｅａ
ｔ（で洗浄後、ＭｅＯＨ−Ｅｔ２０より古語晶化した。On the other hand, B OC-Hi s (Tos) -0i (II
DCf(A28.36.9(48mM) tAcOEt
The organic layer was washed with water, dried over anhydrous sodium sulfate, and Ac0Et was distilled off under reduced pressure to obtain an oily *'t-samurai. Tt the swallowed oily substance
(F"l omlKm, above 1) Add to the MFm solution, add l(OB 'r 6.4811 (1 equivalent)
Then, WSCO8,78m1 under 0℃ cooling! f: After addition, the mixture was stirred at room temperature overnight. After the reaction, the solvent was distilled off under reduced pressure, and
After adding % weight water and removing the resulting precipitated gold P, water, Mea
After washing with t(), it was crystallized from MeOH-Et20.
母液も同１チに結晶化を行ない、得られた結晶をあわせ
てＭｅＯＨ−へキサ／よシ再結晶して目的物２８．８１
．９（収率８５．２％）を得た。The mother liquor was also crystallized in the same manner, and the resulting crystals were recrystallized from MeOH-hex/yoshi to obtain the desired product 28.81.
．． 9 (yield 85.2%) was obtained.
この生成物は溶媒系５におけるＴＬＣでは２スポツトを
示した。これは出Ｓの側鎖保護基でりる′工゛Ｏ８基が
悦離したものを含有するからだが、これ以上梢製するこ
となく次の反応に用いた。The product showed 2 spots on TLC in solvent system 5. This is because it contained a side chain protecting group of S, which was removed from the O8 group, but it was used in the next reaction without further preparation.
上記で侍だ生成’４ａ２８．８１１／ （３４，０６ｍ
ｆＶｉ）ｔ Ｃｔｌｚ＜−１１２２０〃ｌ’ ％ ’ｌ
” Ｆ’ Ａ Ｉ ２０ ” Ｔ ｒ４カし、室温で３
０分間撹拌した後、溶媒を減圧留去した。Samurai generation above '4a28.811/ (34,06m
fVi)t Ctlz<-11220〃l'% 'l
"F' AI 20" T r4, 3 at room temperature
After stirring for 0 minutes, the solvent was distilled off under reduced pressure.
得られた粉末ｋＯＬＶＩ Ｆ２００ｍ１ＶＣ浴かし、Ｎ
１４ＭでｐＨ７に調節した。これにＢ ＯＣ−Ｖａｌ
−ＯＨ８，１４ｇ（］、、 １当量） 、ＨＯｆ３Ｔ５
．０６＆ （１，１当緻）を〃口え、ＯＣａ却下ＷＳＣ
Ｄ６．８６ｍ１（１，１当屯）１加えた後、室γ７ｔ＋
＋で一夜撹拌した。反応後、Ｄ ［ｖｉＦ’ ｋ ｄ
ａＥ ７１１去し、残渣に５１■水を加えて、生じた沈
＄ｆ：ｌＰ取し、水で洗浄して目的物［３，）２７７６
、Ｆ（収率１０３．２％）を倚だ。The resulting powder kOLVI F200ml 1VC bath, N
The pH was adjusted to 7 with 14M. To this B OC-Val
-OH8,14g (],, 1 equivalent), HOf3T5
．． 06 & (1, 1), OCa rejected WSC
After adding D6.86m1 (1,1 ton)1, chamber γ7t+
Stir overnight at +. After the reaction, D [viF' k d
aE 711 was removed, 51 ■ water was added to the residue, the resulting precipitate $f:lP was collected, and the target product [3,) 2776 was washed with water.
, F (yield 103.2%).
融点；１６４〜１６６℃
〔α）” −２８，３８°（Ｃ＝ｌ、Ｄｔ質Ｆ）Ｔ Ｌ
Ｃ；ｚ＜ｆ ５＝ ０．６６
すＰ Ｆ （３０３４’Ｉ” ） Ｎ１（２＋ ＢＱＣ
Ａｓｐ（ＯＢｚ Ｉ） −Ｖａ １−Ｈ４５−Ａｓ ｎ
−Ｔｙ ｒ （ｇｚ １−Ｃ１１２）−〜ＮＨ２〔４，
］
［：３：ＩＩ ２７．７ ｇ （３５，１ｍＭ） ｋｃ
Ｈ２Ｃ１２２０１ｎｌ。Melting point: 164-166°C [α)” -28,38° (C=l, Dt quality F) T L
C; z<f 5= 0.66 PF (3034'I") N1(2+ BQC
Asp(OBz I) -Va 1-H45-As n
-Tyr (gz 1-C112)-~NH2[4,
] [:3:II 27.7 g (35,1mM) kc
H2C12201nl.
ＴＦＡｌｌｏｍＪに溶かし、室温で３０１同撹拌１〜だ
鏝、溶媒を減ＩＥ留去した。残直にＥｔ２０全別え、生
じた法談をｐ取した。侍られた粉末金υＭ Ｆｚｏｏｍ
ｌでｍｓＩし、Ｎ ｒＶＬ Ｎｌでｐｉ（７にｍ Ｆ１
６した。The mixture was dissolved in TFAllomJ, stirred at room temperature for 30 minutes, and the solvent was distilled off using reduced IE. I immediately separated all Et20 and recorded the memorial service that occurred. Powdered gold υM Fzoom
msI in l, N rVL Nl in pi (m F1 in 7
I did 6.
これにＢＯＣ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ ）−ＯＲ１２，５ｇ
（１１轟量） 、１（ＯＢＴ５．２２ｇ（］ １当量）
を加え、θ℃冷却下ｖＶ Ｓ ＣＤ ７．０８ ｍｌ
（１，１当量）ヲ加えた後、室温で一夜撹拌し／こ。反
応後、Ｄ＋ｖｒＦを減圧留去し、残渣に５％重１水を加
えて、生じた沈澱金Ｐｊ４ｙ、シだ。水で洗浄した後、
＋ＪｅＯ１−１に懸濁し、Ｅｔ２０を加えＥ取して目的
物［：４１３１．４２．９（収率８９８チ）−８ｉ−得
た。To this, BOC-Asp(OBzl)-OR12.5g
(11 tons), 1 (OBT5.22g (] 1 equivalent)
Add 7.08 ml of vV S CD under cooling at θ°C.
(1.1 equivalent) was added and stirred at room temperature overnight. After the reaction, D+vrF was distilled off under reduced pressure, and 5% sodium chloride water was added to the residue to form a precipitated gold Pj4y. After washing with water,
The mixture was suspended in +JeO1-1, Et20 was added thereto, and the desired product [:4131.42.9 (yield: 898 cm) -8i- was obtained.
素点；２１４〜２１５℃
〔α兄５−２３．２８°（Ｃ＝１ 、 ＤＭＦ”）１’
Ｌｃ ；Ｒｆ５＝０．６０
元素分析ＣＣ４７Ｈ５７０１□Ｎ、Ｃ１２として〕Ｃチ
？−１％ ８条
百１昇値 ５６．７４ ’５．７８ １２．６７測定値
５６，１９ ５．７９ １２．（Ｊ６５）、 ＰＦ
（２９−３４Ｔ） Ｎｌ２ ；ＢＯＣ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ
（０Ｂｚｌ ） −ＶａＩ−山ｓ −Ａｓｎ −Ｔｙ
ｒ （Ｂｚｌ−Ｃｎ２）−ｒＪｄ２［５］
［４］ ３ １．１ １ １ （３１，２７＋ｎ＋Ｖ１
） ’ｔｃ１イ。Ｃ７ｅ２２’ ”ｌＸＴ Ｆ Ａ ｌ
２ Ｑ ＩｎｔＫ％７）−し、室温で３０分間規押し
た後、溶媒を減圧留去した。残渣にＥｔ２゜を加え、生
じた沈澱ｋｒ＊Ｌだ。倚られた紛木金Ｄ ＩＶｉＦ ２
００ ｍｌに溶解し、Ｎ ｒＶＬ ｒＶＬでｐｌ（７に
調節した。これｖｃｔ（ＯＢＴＯ，４２＆ （０，１当
最） 、ＢＱＣ−Ｇｉｎ−ＯＮＰ１２’、６４．９ （
１，１当重）を力日え、冷＋４１下ＮＭｉＶ１３．７８
１ｎｅ （１，１当Ｔｆ） ｆ）ＪＤ工ｆｃ後、室６借
で一夜１夏坤した。反応後、Ｄ ｒｖｌ’ Ｆを減圧留
去し、残直に５％重重曹氷水加えて、生じた沈澱をＰ取
した。水で洗浄した後、Ｍｅ（Ｊ）Ｈに懸濁し、Ｅｔ２
０を加え、戸取して目的物（：５） ３３．１１Ｖ 、
（収率９４５条）を得た。Raw score: 214-215°C [α 5-23.28° (C=1, DMF”) 1'
Lc; Rf5=0.60 Elemental analysis CC47H5701□N, as C12] Cchi? -1% 8th article 101 increase value 56.74 '5.78 12.67 Measured value 56,19 5.79 12. (J65), PF
(29-34T) Nl2; BOC-Gln-Asp
(0Bzl) -VaI-Yamas -Asn -Ty
r (Bzl-Cn2)-rJd2 [5] [4] 3 1.1 1 1 (31,27+n+V1
) 'tc1i. C7e22' ”lXT F A l
2Q IntK%7)- and after pressuring at room temperature for 30 minutes, the solvent was distilled off under reduced pressure. Et2° was added to the residue, and the resulting precipitate was kr*L. Swallowed Makikin D IViF 2
00 ml and adjusted to pl (7) with N rVL rVL.
1.1 weight), cold +41 lower NMiV13.78
1ne (1,1 Tf) f) After JD engineering fc, I rented 6 rooms for one night and one summer. After the reaction, Drvl'F was distilled off under reduced pressure, and 5% sodium bicarbonate in ice water was added to the residue, and the resulting precipitate was collected. After washing with water, suspending in Me(J)H and Et2
Add 0, remove and get the target (:5) 33.11V,
(Yield 945 articles) was obtained.
融点；８１〜８３℃
〔α兄’−２３，９８°（Ｃ＝Ｉ、Ｉ］■Ｆ）１”Ｉ、
Ｃ；ｋｌｆ５＝０．４７
元素分；１７Ｔｃｃ、、□Ｈ６５０□３１寸、□Ｃｇ２
として〕Ｃチ ６％ Ｎ％
計算１直 ５５，６１ ５．８３ １３７２測定値 ５
４，８１ ５．９６ １３．０７アミノ酸分析； Ａｓ
ｐ ２．１９（２） 、Ｇｌｕ １．０５ （１） 、
Ｖａｌ １（１）、Ｔｙｒ ０．７３（１） 、出ｓＯ
，８５（６）、ＰＦ （２７−２８） ；ＢＯＣ−Ｌｙ
ｓ（Ｚ −Ｃｌ） −Ｌｅｕ −ＯＥｔ、［６：］Ｂ
ＯＣ−Ｌｙｓ（Ｚ −Ｃｎ）−０１（・ＴＢＡ ９７．
６ ｇ （０，２Ｉ■） ’ｆ： Ａｃ０Ｅｔ ５００
ｍｌおよびＩＮ塩ばと共にふりまぜた。Ｍ機層を水洗
し、熱水硫ばナトリウムで乾燥後、Ａｃ ＯＥｔを留去
して油状物金得た。これと、１４ＣＡ”Ｈ−Ｌｅｕ −
ＯＥｔ ３ ９． １４ 、！ｉ’ （１当重）ＨＯＢ
’ｆ’２７．０ｇ （１当ｉ）ｋ ’ｆ’ ＨＦ ５０
０ ｍ１ＶＣ溶かし、０℃冷却下ｖＶｓ ＣＤ ３６．
６ ｍ１ｋ７ＪＵえ、室温で一夜撹拌した。反応後、′
ｒ ＨＦを減圧上留去し、残渣ｆ Ａｃ０Ｅｔ ６００
ｍｌＫ溶解し、５チ甫凸水、■ＪＳＪ塩酸、水の領で
洗浄し、無水硫ぽす） ＩＪウムで乾燥した。Ａｃ０Ｅ
ｔを留去後、０℃に一夜放置し、析出し／こ結晶勿ヘキ
サンでＰ取し、目的物〔６〕１１０．６２．？（収率９
９５チ）を得た。Melting point; 81-83℃ [α brother'-23,98° (C=I, I] ■F) 1"I,
C; klf5=0.47 elemental content; 17Tcc,, □H650□31 dimension, □Cg2
] Cchi 6% N% Calculation 1st shift 55,61 5.83 1372 Measured value 5
4,81 5.96 13.07 Amino acid analysis; As
p 2.19 (2), Glu 1.05 (1),
Val 1(1), Tyr 0.73(1), Out sO
, 85(6), PF (27-28); BOC-Ly
s(Z-Cl)-Leu-OEt, [6:]B
OC-Lys(Z-Cn)-01(・TBA 97.
6 g (0,2I ■) 'f: Ac0Et 500
ml and IN Shioba. After washing the M layer with water and drying over hot sodium sulfate, Ac OEt was distilled off to obtain oily gold. This and 14CA"H-Leu -
OEt 3 9. 14,! i' (1 equivalent weight) HOB
'f'27.0g (1 per i)k 'f' HF 50
0 ml VC melted and cooled at 0°C vVs CD 36.
6 m1k7JU was added and stirred at room temperature overnight. After the reaction,′
r HF was distilled off under reduced pressure, and the residue f Ac0Et 600
The solution was dissolved in 5ml of water, washed with JSJ hydrochloric acid and water, and dried with anhydrous sulfur solution and IJum. Ac0E
After distilling off t, it was left at 0°C overnight, and the crystals were precipitated and P was removed with hexane to obtain the target product [6] 110.62. ? (Yield 9
95chi) was obtained.
Ｍ！ｌ 点 ； ７７〜８０ ℃
〔α）”−１９，０８°（Ｃ二ｘ、ｏ＋ｖｒ゛）Ｔ Ｌ
Ｃ； Ｒｆ６（ロ）、４８
元本分析〔Ｃ２９Ｈ４□０７ｆ’Ｊ３Ｃ６□として〕Ｃ
％ ６％ Ｎ％
計４＋＋［５８，３１７，６１７，５９測定直 ５８，
０７ ７．８４ ７．４９７）、ＰＦ （２６−２８）
：ＢＯＣ−Ｌｙｓ（Ｚ −Ｃｌ） −Ｌｙｓ（Ｚ−０
，６）−Ｌｅｕ−ＯＥｔ ［７〕［６） ｌ ｌ Ｏ，
６２＆ （０，１９９Ｍ） をＣＩ（２ＣＡ’２５０ｍ
１． ＴＦＡ２５０ｍｌに浴かし、室温で１時間撹拌し
た１麦、＃：！ｆ下ＣＨ下口Ｈ２Ｃｌ１２Ａ？留云して
油状物を４た。M! l point; 77~80℃ [α)”-19,08° (C2x, o+vr゛) T L
C; Rf6 (b), 48 Principal analysis [as C29H4□07f'J3C6□]C
% 6% N% Total 4++ [58,317,617,59 measurement direct 58,
07 7.84 7.497), PF (26-28)
:BOC-Lys(Z-Cl)-Lys(Z-0
,6)-Leu-OEt [7][6) l l O,
62 & (0,199M) to CI (2CA'250m
1. 1 barley soaked in 250 ml of TFA and stirred at room temperature for 1 hour, #:! f lower CH lower opening H2Cl12A? I vomited 4 drops of oily substance.
一方、Ｂ ＯＣ−Ｌｙｓ （Ｚ −Ｃ６） −０１（−
ＴＤＡ ９７１ｇ（１当、敬）をＡｃ０Ｅｔ ５００
ｍｌ！ ＊−よびｌ Ｎ塩酸と共にふりまぜた。肩機層
を水洗し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、Ａｃ０Ｅｔを
留去して油状＋ｌｌ！Ｉを得た。On the other hand, B OC-Lys (Z -C6) -01(-
TDA 971g (1 hit, honor) Ac0Et 500
ml! *- and lN Hydrochloric acid was mixed together. After washing the shoulder layer with water and drying with anhydrous sodium sulfate, Ac0Et was distilled off to form an oily layer! I got I.
これと、上記の油状物、Ｉ（０１３Ｔ２６．９！！（１
当量）をＴｔｌＦ４００ｍｌＫ溶解し、ｏ℃冷ＩＩ 下
Ｗ ｓＣＤ ３６．４ ｍｌ！ （１当量）を加え、室
温で一夜撹拌した。反応後、Ｔ ｉｔ Ｆ 全′ｔＩＩ
宏すると沈澱が生じた。This and the above oily substance, I(013T26.9!!(1
Equivalent amount) was dissolved in 400 ml of TtlF and cooled to 36.4 ml of sCD at 0°C. (1 equivalent) was added and stirred at room temperature overnight. After reaction, T it F total 'tII
Upon clearing, a precipitate formed.
これｋ ＡｃＯｇｔ Ｋ溶かし、５チ重ぎ水、ＩＮｍ暇
、水の順で次階し、無水ｍｌ Ｌｌｅナトリウムで乾燥
後、Ａｃ０Ｅｔを留去すると結晶が恒出した。ヘキサン
でｐ＝し、Ａｃ ＯＥｔ Ｅ ｔ ２０−ヘキサ：’
ｆ ４Ｑ 帖晶全Ｍない目的肉Ｃ７） １５６．５２ｇ
（収率９２２％）を得た。This was dissolved in AcOgt K, washed with 5 ml of water, then with 100 ml of water, then dried with anhydrous sodium chloride, and the Ac0Et was distilled off to form crystals. p = in hexane, Ac OEt E t 20-hex:'
f 4Q Chap. all M purpose meat C7) 156.52g
(yield 922%).
融点；１１４〜１１６℃
Ｃｒｔ’：Ｊ３９−２０．７２°（Ｃ＝１．ＤＭＦ）Ｔ
ＬＣ； Ｒｆ４ ＝０．７ ８
元素分析〔Ｃ４□Ｈ５，０、。Ｎ５ＣＡ’２として〕０
％ ６％ Ｎ％
１十算１直 ５７，７４ ６，９７ ８．２１測定値
５７，４４ ７，３７ ８．２３８）、ＰＦ （２５−
２８） ： ＡＯＣ−Ａｒｇ（ｒｏｓ） −Ｌｙｓ （
Ｚ−Ｃｌ）−Ｌｙｓ（Ｚ−Ｃｌ） 〜Ｌｅｕ−ＯＥｔＣ
８）［７］ １ ５６．５ｇ（０，１８４ｉＶＩ） ｆ
：ｃＨ２Ｃ１２５０１ｎｅＸＴＮ’Ａ ２５０１ＸｌＫ
醇かし、室温で１時間ＩＭ、拌した後、減圧下ＣＨ２Ｃ
ｌ２、Ｔ Ｆ Ａ （！−留云して油状１勿をイ停／コ
。これをＤＭＦ４００ｍｌＶＣ溶かし、Ｎ ＷｉＭでｐ
Ｈ７に調節した。これにＨＯＢＴ２７．３．９（１１当
量） 、ＡＯＣ−ＡｒｇＣｌ”ｏｓ）−０Ｈ８６，０９
を加え、０℃冷却下ＷＳ １） ３７．（ｚ＋Ｊｌｒｏ
えて、室温で一夜撹拌した。反応後、ＯＭＦ？＃）４圧
下留云し）残渣をＡｃ０Ｅｔｌ／ 浴解し、５％重１水
、ＩＮ塩酸、水の順で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾
燥した。Melting point: 114-116°C Crt': J39-20.72° (C=1.DMF)T
LC; Rf4 =0.7 8 Elemental analysis [C4□H5,0,. As N5CA'2〕0
% 6% N% 10s 1st shift 57,74 6,97 8.21 Measured value
57,44 7,37 8.238), PF (25-
28): AOC-Arg(ros)-Lys (
Z-Cl)-Lys(Z-Cl) ~Leu-OEtC
8) [7] 1 56.5g (0,184iVI) f
:cH2C12501neXTN'A 2501XlK
After stirring for 1 hour IM at room temperature, CH2C was dissolved under reduced pressure.
12, T F A (!-) and remove the oily mixture. Dissolve this in 400 ml of DMF and VC, and boil with N WiM.
Adjusted to H7. To this, HOBT27.3.9 (11 equivalents), AOC-ArgCl"os)-0H86,09
Add and cool to 0°C WS 1) 37. (z+Jlro
The mixture was stirred at room temperature overnight. After reaction, OMF? #) Distilled under 4 pressures) The residue was dissolved in Ac0Etl/bath, washed successively with 5% sodium bicarbonate, IN hydrochloric acid, and water, and dried over anhydrous sodium sulfate.
Ａｃ０Ｅｔを留去し、残渣ＶＣＥｔ２０を加え、生じた
沈澱物を戸取して、目的物［：８．］２２１７．９１ｇ
収率１００．６チ）を得だ。Ac0Et was distilled off, the residue VCEt20 was added, and the resulting precipitate was collected to obtain the target product [:8. ]2217.91g
A yield of 100.6 cm) was obtained.
融点；７５〜７８℃
［ａ］［，８−１４，０２°（Ｃ＝１．ＤｍＦ）ＴＬＣ
；Ｒｆ、＝０６７
元素分析〔Ｃ５５Ｈ７９０Ｉ３Ｎ９ＳＩＣ１２として〕
Ｃチ Ｈチ Ｎチ
計滑二１直 ５６１１ ６．７６ １０７１測定値 ５
６，１６ ７．０５ １０．４７９）、Ｐ Ｆ （２４
−２８） ： Ｂ ＯＣ−Ｌｅｕ −Ａｒｇ（Ｔｏｓ）
−Ｌｙｓ （Ｚ−Ｃ４） −Ｌｙｓ（Ｚ−ＣＩり −Ｌ
ｅｕ −ＯＥｔ ［：９）
［８］ ２１７．９．９ （０１８５１ＶＩ） ｋｃＨ
２Ｃ／２、′ｒＦＡ２５０ｍｌＶＣ浴かし、室温で８０
分＋＝Ｊ ｉＷ拌した後、減圧下ＣＨ２Ｃｌ！２、Ｔ
Ｆ Ａｔ−留去してγ田状物勿得た。これ’ｓ：ＤＭ１
１ｉ”４０（ＪｍｌＫ溶かし、Ｎ ｒｖｌ ｒＶｌでｐ
ｔ（７に調節した。これ［）ＩＯＢ’ｒ２７．６１ （
１１当量） 、７３０Ｃ−Ｌｅｕ−０１（＠Ｈ２０５０
，９ｇ（１，１当量）を加え、０℃冷却下ＷＳＣＤ３７
．３ｍｌ （］、、１当量）を加えて、室温で一夜撹拌
した。反応後、Ｄ Ｍ Ｆを減圧下留去し、残渣に水を
加えて、生じた沈澱物をＰ取し／ヒ。これｆ：ＭｅＯＨ
−Ｅｔ２０− ヘキサンから２度再沈澱を行なめ目的物
［９，］ ２１３５３．９（収率９０５条）を得た。Melting point; 75-78°C [a] [, 8-14,02° (C = 1.DmF) TLC
;Rf,=067 Elemental analysis [as C55H790I3N9SIC12]
Cchi Hchi Nchi meter slip 2nd shift 5611 6.76 1071 Measured value 5
6,16 7.05 10.479), P F (24
-28): BOC-Leu-Arg(Tos)
-Lys (Z-C4) -Lys(Z-CIri -L
eu -OEt [:9) [8] 217.9.9 (01851VI) kcH
2C/2,'rFA250ml VC bath, 80ml at room temperature
Min + = J iW After stirring, CH2Cl! under reduced pressure! 2.T
F At-distillation was performed to obtain a γ-field-like substance. This's: DM1
1i”40 (melt JmlK, p with N rvl rVl
t(adjusted to 7.This[)IOB'r27.61 (
11 equivalents), 730C-Leu-01 (@H2050
, 9g (1,1 equivalent) was added to WSCD37 under cooling at 0°C.
．． 3 ml (], 1 equivalent) was added and stirred overnight at room temperature. After the reaction, DMF was distilled off under reduced pressure, water was added to the residue, and the resulting precipitate was collected. This f: MeOH
-Et20- Re-precipitation was performed twice from hexane to obtain the target product [9,] 21353.9 (yield: 905 items).
融点１（４〜１６０℃
〔α兄’−１８．６８°（Ｃ＝ ｌ 、 Ｄ＋Ｖｉ Ｆ
）ＴＬＣ；ｌえ／４＝０．７７、ｌ心／３＝ ０．２８
元素分析ＣＣ６ｏ１（ｓａｏ＋４Ｎ＋ｏｓ＋ｃ７ｚとし
て〕Ｃ％ｌ−Ｉ俤 Ｎ％
言−ｔ ｎ ＋直 ５６，４６ ６．９５ １０．９７
ｄ１り定値 ５６．２８ ７．２９ １０．８２１０）
、ＰＦ （２３−２８） ： ＢＯＣ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ
−Ａｒｇ （ｒｏｓ） −Ｌｙｓ （Ｚ −ｃａ ）
−Ｌ３’Ｓ （Ｚ−Ｃｌ） −Ｌｅｕ −ＯＥｔ ［：
ＩＯ，］
［９，］ １５３．１７．！？ （０，１２１ＶＩ）を
ＣＨＣＨ２Ｃｌ２１Ｏ０，Ｔ Ｆ Ａ ２５０ ｍ１Ｖ
ｃ）ｆｊかし、室温テ８０ 分子ｓ１ ＋ｊｔ拌した鎌
、減圧下ＣＨ２Ｃｌ２、ＴＦＡ金留去した。残浩にＥｔ
２０を７ＩＯえ、生じ／ＣＣ沈金戸数した。得られた
粉末をＤＭＦ２５０ｍｌに溶解し、ＮＩＶＩ ＩＶＩで
ｐ）Ｉ７に調節した。これに、ｆ（０１３Ｔ １７８４
、？ （１，１当ｊｉ’） 、ＢＯＣ〜Ｔｒｐ−Ｏｆ
（４０，１７ｇ（１，１当量を加え、０℃冷却下＃ Ｓ
ＣＩ） ２４．２ ｍｅ ｆ加え、室温で一夜撹絆し
／こ。反応後、Ｄ Ｍ Ｆ Ｊｃ減圧下留去して油状物
を侍だ。これを５チ重暫水５１中に訓え、生じた沈＃を
Ｐ取し、水で洗浄し〆こ。Ｍ’ｅＯ１−１−ｇｔ 、、
ｏから再沈澱を２１ｆ行ない目的物Ｃｔｏｌ ｌ ４２
５７Ｉ（収率８１２係）を得た。Melting point 1 (4-160°C [α brother'-18.68° (C=l, D+Vi F
)TLC; 1/4=0.77, 1/3=0.28
Elemental analysis CC6o1 (as sao+4N+os+c7z) C%l-I 俤 N% word-t n + direct 56,46 6.95 10.97
d1 constant value 56.28 7.29 10.8210)
, PF (23-28): BOC-Trp-Leu
-Arg (ros) -Lys (Z -ca)
-L3'S (Z-Cl) -Leu -OEt [:
IO,] [9,] 153.17. ! ? (0,121VI) CHCH2Cl21O0, T F A 250 m1V
c) fj Sickle, stirred at room temperature 80 molecules s1 + jt, CH2Cl2, TFA gold distilled off under reduced pressure. Zanhiro ni Et
20 was calculated by 7IO, and the number of generated/CC deposits was calculated. The obtained powder was dissolved in 250 ml of DMF and adjusted to p)I7 with NIVI IVI. To this, f(013T 1784
,? (1,1 hit ji'), BOC~Trp-Of
(Add 40,17 g (1,1 equivalent) and cool to 0°C #S
CI) Add 24.2 mef and stir overnight at room temperature. After the reaction, DMF Jc was distilled off under reduced pressure to obtain an oily substance. Pour this into 5 liters of heavy water, remove the resulting precipitate, and wash with water. M'eO1-1-gt,,
Perform reprecipitation from o to 21f to obtain the target object Ctol l 42
57I (yield: 812) was obtained.
融点；１６８〜１７ｏ０
〔α〕乙’−１８．６４°（Ｃ＝ｉ 、ＤＭＦ）Ｔ Ｌ
Ｃ： Ｒｆ、 ＝０．８２ 、１（ｆ３＝０３１元素分
析〔Ｃ７１１（９８ｏ１５ＩＶ１１１□５１ｃｅ２とし
て〕Ｃ％トＩ％Ｎ％
言１ 碑： ；直 ５８，３１ ６．７５ １１．４９
測定１；α ５８．２７ ６，８８ １．１．３７Ｈ）
、ＰＦ （２３−２８） ； ８０Ｃ−ｒｒｐ−ｆ、ｅ
ｕ−Ａｒｇ（ｒｏｓ）−Ｌｙｓ（Ｚ−ＣＩＪ）−Ｌｙｓ
（Ｚ−Ｃ７） −Ｌｅｕ −Ｏｒｌ ・２ｌ−Ｉ２０
［１１）［１０：１１１４０．６４．！ｉ’ （９６，
２ｍＭ）をＥｔＯ）１１２００ｍｌに溶かし、ｌ Ｎ
−ＮａＯＨ水溶液２８８ｍ１（３描量）を加え、室温で
１時間撹拌した。■、Ｎ −’ｒｏｓｏ）ｆ水溶液１９
２ｍｌ （，２当重）を加えた後、ＥｔＯＨを減圧上留
去した。残渣Ｖこ冷却下ＩＮ−ＴｏｓＯｆ（水浴液ｑ６
ｍＪ（を当欧）を加え、さらに水２１を加えた後、住じ
た沈ン殿をＰ取した。充分に水洗後、減圧乾燥して目的
物［：ｔＤ １４２．９８ ｊｊ （Ｉｖｙ率１０１１
係）を得た。Melting point; 168-17o0 [α] O'-18.64° (C=i, DMF) T L
C: Rf, =0.82, 1 (f3=031 elemental analysis [C711 (as 98o15IV111□51ce2)]
Measurement 1; α 58.27 6,88 1.1.37H)
, PF (23-28); 80C-rrp-f, e
u-Arg(ros)-Lys(Z-CIJ)-Lys
(Z-C7) -Leu -Orl ・2l-I20
[11) [10:11140.64. ! i' (96,
Dissolve 2mM) in 11200ml of EtO and dilute with lN
288 ml (3 drawing amounts) of -NaOH aqueous solution was added, and the mixture was stirred at room temperature for 1 hour. ■, N-'roso) f aqueous solution 19
After adding 2 ml (2 equivalents), EtOH was distilled off under reduced pressure. The residue is cooled IN-TosOf (water bath liquid q6
After adding 21 mJ of water and further adding 21 g of water, the precipitate was collected. After thorough washing with water and drying under reduced pressure, the target product [:tD 142.98 jj (Ivy rate 1011
) was obtained.
融点：１２５〜１３０℃
〔α兄７−３７．２４°（Ｃ＝１．１）Ｍｌ’）Ｔ Ｌ
Ｃ： Ｒｆ４”” ０．７１
元素分析ＣＣ６９Ｈ９４０（５Ｎ、 ２Ｓ、Ｃ１２・２
Ｈ２０として〕Ｃダ３ＨダｂＮ％
Ｈｒ算値 ５６３５ ６．７２ １１．４３泪１ｊ定１
直 ５６．０３ ６．６２ １１．８５アミノ：稜分析
； Ｌｅｕ ２ （２）、Ｌｙｓ ２．０８ （２）、
Ａｒｇｌ、 ＯＯ（１）、Ｔｒｐ ０．８５ （１）１
２）、ＰＦ （２３−３４Ｔ） Ｎｄ□； ＢＯＣ−Ｔ
ｒｐ−Ｉ、ｅｕ−Ａｒｇ（’ｌ”ｏｓ）−Ｌｙｓ（Ｚ−
ＣＩり−Ｌｙｓ（Ｚ ＣＡ）−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ
（ＯＢｚｌ ）−Ｖａｌ−Ｈｉｓ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ （
Ｂｚｌ −Ｃ（Ｉ２） −ＮＨ２［１２〕［５） １．
６８ ｇ （１，５ｍＭ） をＣＨ２Ｃ７２２ｍｅ Ｔ
Ｆ Ａ７ｍｌに溶かし、室温で３０分間撹拌した後、
溶媒を減圧留去した。／Ａ渣にＥｔ２０を加えて、生じ
た沈澱を戸数した。得られた粉末をＤ ｔＶＩ Ｆ ５
Ｑ ｍｅに溶解し、Ｎ＋ＶｉＭでｐＨ７に調節した。Melting point: 125-130℃ [α 7-37.24° (C=1.1) Ml') T L
C: Rf4”” 0.71 Elemental analysis CC69H940 (5N, 2S, C12・2
As H20] C da 3 H da b N% Hr calculation value 5635 6.72 11.43 tears 1j constant 1
Straight 56.03 6.62 11.85 Amino: Edge analysis; Leu 2 (2), Lys 2.08 (2),
Argl, OO(1), Trp 0.85 (1)1
2), PF (23-34T) Nd□; BOC-T
rp-I, eu-Arg('l”os)-Lys(Z-
CI Ri-Lys(Z CA)-Leu-Gln-Asp
(OBzl)-Val-His-Asn-Tyr (
Bzl -C(I2) -NH2[12][5) 1.
68 g (1,5mM) of CH2C722meT
After dissolving in 7 ml of F A and stirring at room temperature for 30 minutes,
The solvent was removed under reduced pressure. Et20 was added to the /A residue, and the resulting precipitate was counted. The obtained powder was D tVI F 5
Dissolved in Qme and adjusted to pH 7 with N+ViM.
これに１−１０ ＢＴＯ，２２，９（１，１当ｉ）およ
び［１１］ ２．４３７ （１，１Ｍ量）を加え、θ℃
冷却下’ｙＶｓ ＣＤ ０．３ｍｌ （１１当量）を７
ＪＤえた後、室温で一夜撹拌した。反応後、ＤＭＦを減
圧留去し、残渣に５％重傅水を加えて、生じた沈澱をＰ
取した。水で洗浄した後、ＩＶＩｅｏｌ−Ｉに懸濁、Ｅ
ｔ ２０を加え、Ｐ取して目的物［１２）３．６２９（
収率９９１％）を傅た。Add 1-10 BTO, 22,9 (1,1 equivalent i) and [11]2.437 (1,1M amount), and heat at θ℃
0.3 ml (11 equivalents) of 'yVs CD under cooling
After drying, the mixture was stirred at room temperature overnight. After the reaction, DMF was distilled off under reduced pressure, 5% Chongfu water was added to the residue, and the resulting precipitate was
I took it. After washing with water, suspend in IVIeol-I, E
Add t 20 and remove P to obtain the target [12) 3.629(
A yield of 991% was achieved.
融点；２６０〜２７０℃
〔α〕る５−４，６６°（Ｃ＝０．３ 、１）ＭＦ）Ｔ
ＬＣ；１えｆ５二〇９２
アミツボ分析； Ａｓｐ １．９４ （２）、Ｇｌｕ
Ｏ，９６（１）、Ｖａｌ ０．７１ （１）、Ｌｅｕ
２ （２） 、’ｆ’ｙｒ’ ０．９８ （１）、Ｌｙ
ｓ２．０９（２）、山ｓ Ｏ，５８（１）、Ａｒｇ ０
．９１ （１）、Ｔｒｐｏ、７８（１）
１３）、 Ｆ （２２） ： ＢＯＣ−Ｇｌｕ（ＯＢｚ
ｌ）−０ＰＡＣ〔１３〕
Ｂ ＯＣ−Ｇｌｕ（ＱＢｚｌ） −〇Ｈｌ ２８．２
、！ｉ’ （０，３８Ｍ）を１）ｔＶＦ６０（１＋ｌＫ
溶かし、フェナシルブロマイド１１３．５．９’ （１
，、，５当量）を加え、冷却下Ｅｔ３Ｎ７９、３ｍｅ
（１，５当量）を加えて、３０℃で４時間撹拌した。反
応後、Ａｃ０Ｋ３０ ｇ （０，７５当量）ｆ。Melting point: 260-270°C [α] 5-4,66° (C=0.3, 1)MF)T
LC; 1e f5 2092 Amitsubo analysis; Asp 1.94 (2), Glu
O, 96 (1), Val 0.71 (1), Leu
2 (2), 'f'yr' 0.98 (1), Ly
s2.09 (2), mountain s O, 58 (1), Arg 0
．． 91 (1), Trpo, 78 (1) 13), F (22): BOC-Glu (OBz
l) -0PAC [13] B OC-Glu (QBzl) -〇Hl 28.2
,! i' (0,38M) as 1)tVF60(1+lK
Dissolve phenacyl bromide 113.5.9' (1
,,,5 equivalents) and cooled to Et3N79,3me.
(1.5 equivalents) was added and stirred at 30°C for 4 hours. After the reaction, 30 g of Ac0K (0,75 equivalents) f.
加え、４５分間撹拌した。減圧下１）ｉｖＩＦを留去し
、残渣をＡｃ０Ｅｔ ６００ ｍｌに溶かし、５チ重曹
水、水の順で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。and stirred for 45 minutes. 1) ivIF was distilled off under reduced pressure, and the residue was dissolved in 600 ml of AcOEt, washed successively with 5 ml of aqueous sodium bicarbonate and water, and dried over anhydrous sodium sulfate.
Ａｃ０Ｅｔを減圧上留去し、生じた結晶をヘキサンで充
分洗浄して目的物Ｃ１３Ｊ ｌ ５６．２ 、ｌｉ’
（９０，２チ）を得た。Ac0Et was distilled off under reduced pressure, and the resulting crystals were thoroughly washed with hexane to obtain the target product C13J l 56.2 , li'
(90.2chi) was obtained.
’ｒ ＬＣ； Ｒｆ６＝０．７３
元素分析〔Ｃ２５Ｈ２，０゜Ｎ１として〕Ｃチ トＩチ
８％
Ｎ１遭：１直 ６５．９２ ６４２ ３．０８測定値
６５．５８ ’６，４８ ３．３３１４）、ＰＦ （２
１−２２） ； ＢＯＣ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）
−０ＰＡＣ［１４）
ＣＩ３〕１５０．３ ｇ（０，３３Ｍ）をＣＨ２Ｃ１２
１ＯＯｍ１１ＴＣＨ２Ｃｌ２１ＯＯ浴かし、室温で１時
間撹拌した後、減圧下ＣＨ２Ｃｌ２、ＴＦＡを留去し／
こ。残渣にＥｔ２０を加え、生じた沈澱を（ｐ叡した。'r LC; Rf6=0.73 Elemental analysis [as C25H2, 0°N1] C 8% N1 encounter: 1 shift 65.92 642 3.08 Measured value
65.58 '6,48 3.3314), PF (2
1-22); BOC-Val-Glu(OBzl)
-0PAC [14) CI3] 150.3 g (0.33M) of CH2C12
After stirring at room temperature for 1 hour in a 1OOm11TCH2Cl21OO bath, CH2Cl2 and TFA were distilled off under reduced pressure.
child. Et20 was added to the residue, and the resulting precipitate was filtered.
得られた粉末をＤ Ｍ Ｆ ３００ ｍｅＶｃ溶かし、
Ｎ Ｍ ｊ■テｐＨ７に調節した。コれに、ＨＯＢ Ｔ
３５．１９ （０，７当量） 、ＢＯＣ−Ｖａｌ−Ｏ
Ｈ５６，５ｇ（０，７当量）を加え、０℃冷却下Ｗ Ｓ
ＣＤ ４７．６ ｍｌ （０，７当量）を加え、室温
で２日間撹拌した。反応後、ＯｒＶｉ ｌｉ”を減圧上
留去し、残渣をＡｃ０Ｅｔ ３００ ｍｅ ＶＣ溶かし
、５％重曹水、ＩＮ塩酸、水の順で洗浄し、無水硫酸ナ
トリウムで乾燥した。Ａｃ０Ｅｔを減圧上留去して生じ
た結晶をへキサンでＰ取し、Ａｃ０Ｌｔ ａｔ２゜から
再結晶して目的物［：１４．：１１０７．８．！ｉ’
（７５，０％’）’ｆｒ：得た。The obtained powder was dissolved in DMF 300 meVc,
The pH was adjusted to 7. To this, HOB T
35.19 (0.7 equivalents), BOC-Val-O
Add H56.5g (0.7 equivalent) and cool at 0°C.
47.6 ml (0.7 eq.) of CD was added and stirred at room temperature for 2 days. After the reaction, OrVi li'' was distilled off under reduced pressure, and the residue was dissolved in Ac0Et 300 me VC, washed successively with 5% aqueous sodium bicarbonate, IN hydrochloric acid, and water, and dried over anhydrous sodium sulfate.Ac0Et was distilled off under reduced pressure. The resulting crystals were purified with hexane and recrystallized from Ac0Lt at 2° to obtain the desired product [:14.:1107.8.!i'
(75,0%')'fr: Obtained.
融点；１３９〜１４１℃
〔α昂９−１８．９６° （Ｃ＝ｌ、ＤＭＦ）’ｒＬＣ
； Ｒｆ６＝０．６３
元素分析〔Ｃ３ｏＨ３８０８１Ｎ２として〕Ｃチ Ｎ％
Ｎ％
計算値 ６４，９７ ６，９１ ５．０５測定値 ６５
，０４ ７．１５ ５．９７１５）、 ＰＦ （２０−
２２） ；ＡＯＣ−Ａｒｇ（ｒｏｓ）−Ｖａｌ −Ｇｌ
ｕ （ＯＢｚｌ） −０Ｐ Ａ Ｃ［１５）［１３，Ｉ
Ｉ ９９．８３９ （０，１８１ＶＩ）をＣＨ２Ｃｌ２
５０ｍｌ 。Melting point; 139-141°C [α 9-18.96° (C=l, DMF)'rLC
; Rf6=0.63 Elemental analysis [as C3oH38081N2] C Chi N%
N% Calculated value 64,97 6,91 5.05 Measured value 65
,04 7.15 5.9715), PF (20-
22) ;AOC-Arg(ros)-Val-Gl
u (OBzl) -0P A C[15)[13,I
I 99.839 (0,181VI) to CH2Cl2
50ml.
Ｔ Ｆ Ａ ２００ ｍｌに溶かし、室温で１時間撹拌
した後、減圧下ＣＨ２Ｃｌ２、ＴＦＡを留去し、残渣を
ヘキサン、Ｅｔ２０で洗浄して油状？Ｉを得た。これを
Ｄ Ｍ １；’ ４００ ｍｌに溶かし、Ｎ Ｍ ＩＶ
ＩでｐＨ７に調節した。そしてｆ（ＯＢ Ｔ ２４．３
３．９ （１当量）、ＡＱＣ−Ａｒｇ（ｒｏｓ）−０Ｈ
７６，６０ｇ （１当量）を加え、０℃冷却下ＷＳＣＤ
３２．９４ｍｌ （１当量）′ｆＩ：加えて、室温で
一夜撹拌した。反応後、ＯｒＶｉ Ｉ’；’を減圧上留
去し、残’１ｌｌｉ ｆ： Ａｃ０Ｅｔ １１ Ｋ溶か
し、５チ重替水、ＩＮ塩酸、水の順で洗浄し、無水硫酸
ナトリウムで乾燥した。Ａｃ０Ｅｔを留去後、残渣をＡ
ｃ０Ｅｔ −Ｅｔ２０で結晶化し、結晶をＥｔ２０で光
分洗浄して目的物し１５） ｌ ４９．７５．９ （収
率９４．６％）を得た。After dissolving in 200 ml of TFA and stirring at room temperature for 1 hour, CH2Cl2 and TFA were distilled off under reduced pressure, and the residue was washed with hexane and Et20 to form an oil. I got I. Dissolve this in 400 ml of DM IV
The pH was adjusted to 7 with I. and f(OB T 24.3
3.9 (1 equivalent), AQC-Arg(ros)-0H
Add 76.60 g (1 equivalent) and WSCD under cooling at 0°C.
32.94 ml (1 equivalent)'fI: was added and stirred overnight at room temperature. After the reaction, OrVi I';' was distilled off under reduced pressure, and the remaining '1llif: Ac0Et 11 K was dissolved, washed in this order with 5 liters of water, IN hydrochloric acid, and water, and dried over anhydrous sodium sulfate. After distilling off Ac0Et, the residue is A
It was crystallized with c0Et-Et20, and the crystals were photospectively washed with Et20 to obtain the desired product (15) l49.75.9 (yield 94.6%).
融点；１１０〜１１４℃
〔α：］２９−１１．５° （Ｃ＝ｌ 、ＤＭＦ）ＴＬ
Ｃ； Ｒｆ３＝０．７４ 、Ｒｆ２＝０．８１元素分析
ＣＣ４４１（５８０１□Ｎ６Ｓ、として〕Ｃ％ Ｈチ
Ｎ％
計算値 ６０．１２ ６６５ ９．５６測定値 ５９．
６５ ６，８６ ９．９０１６）、 Ｐ Ｆ （１９−
２２） ； ＢＯＣ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ａｒｇ （
Ｔｏｓ）−Ｖａｌ −Ｇｌｕ （ＯＢｚｌ） −０ＰＡ
Ｃ（１６）［１５：］１１４９．４０ｇ０．１７Ｍ）を
ＣＨ２Ｃ６２５０ｍｌ。Melting point; 110-114°C [α:] 29-11.5° (C=l, DMF) TL
C; Rf3=0.74, Rf2=0.81 Elemental analysis CC441 (as 5801□N6S) C% H-chi
N% Calculated value 60.12 665 9.56 Measured value 59.
65 6,86 9.9016), P F (19-
22) ; BOC-Glu(OBzl)-Arg (
Tos)-Val-Glu (OBzl)-0PA
C(16)[15:]1149.40g0.17M) of CH2C6250ml.
ＴＦＡ３００＋＋＋１！に溶かし、室温で１時間撹ｊ手
した後、ＣＨ２Ｃｌ２、ＴＦＡを減圧留去して、油状物
を得／ζ。これｋＤＭＦ３ＱＱ＋＋＋（！に溶かし、Ｎ
Ｍ ＋Ｊ ｆｐＨ７に調節した。これにＨＯＢＴ２５
．２７．９（１１当量） 、Ｂ ＱＣ−Ｇｌｕ（ＯＢｚ
ｌ）−ＯＨ６３，０９ｇ（１，１当量）ｆニアＩＯえ、
０℃冷却下＃５ＣＤ３４．２２ｍ１を加えて、型温で一
夜撹拌した。反応後、ＤＭ Ｆを減圧上留去し、残渣を
水６１中に加え、生した沈１殿をｒ取した。沈澱をＭｅ
（ｌ（Ｅ ｔ ２０で洗浄して目的物［１６） １４１
．４４ｇ（収率７６７チ）を得た。TFA300+++1! After stirring for 1 hour at room temperature, CH2Cl2 and TFA were distilled off under reduced pressure to obtain an oil. Dissolve this in kDMF3QQ+++(!, N
M + J fpH adjusted to 7. HOBT25 for this
．． 27.9 (11 equivalents), B QC-Glu(OBz
l) -OH 63.09 g (1.1 equivalent) f near IO,
While cooling at 0° C., 34.22 ml of #5CD was added, and the mixture was stirred at mold temperature overnight. After the reaction, DMF was distilled off under reduced pressure, the residue was added to water 61, and the resulting precipitate was collected. Me the precipitate
(l(Wash with E t 20 to obtain the target [16) 141
．． 44 g (yield: 767 g) was obtained.
融点；１１９〜１２１℃
〔α］２９−１２．９０ （Ｃ＝ｌ、Ｄ＋ｖＩＦ’）Ｔ
ＬＣ；Ｒｆ３＝０．５６．Ｒｆ２＝０．８２元素分析［
Ｃ５５Ｈ６９０１４Ｎ７ＳＩとして〕０％ Ｎ％ Ｎ％
削算値 ６０，９３ ６，４１ ９．０４測定値 ６０
，６９ ６，４４ ９．０５１７）、ＰＦ （１８−２
２） ； ＢＯＣ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ） −Ａ
ｒｇ （Ｔｏｓ） −Ｖａｌ −Ｇｌｕ （０Ｂｚｌ
） −０ＰＡＣ〔１７〕
［１６］ １０８．４．９ （０，１０Ｍ）をＣｌ４２
Ｃ＃２５０ｍｌ 。Melting point; 119-121°C [α] 29-12.90 (C=l, D+vIF')T
LC; Rf3=0.56. Rf2=0.82 Elemental analysis [
As C55H69014N7SI] 0% N% N% Reduction value 60,93 6,41 9.04 Measured value 60
,69 6,44 9.0517), PF (18-2
2); BOC-Met-Glu(OBzl)-A
rg (Tos) -Val -Glu (0Bzl
) -0PAC [17] [16] 108.4.9 (0,10M) as Cl42
C#250ml.
’Ｉ’ Ｆ Ａ ２５０ ｍｌに溶かし、室温で１時間
撹拌した後、減圧下ＣＨ２Ｃｌ１２、ＴＦＡを留去した
。残渣にＥｔ２０を加えて、生じた沈澱をＰ取しだ。得
られた粉末ｋ Ｄ ＩｖＩＦ ２００ ｍｌに溶かし、
Ｎ＋ＡＭでｐＨ７に５ｊ＋１節した。これに、１（ＯＢ
ＴＩ ４．９．９ （１，１当量）、Ｂ ＯＣ−ＩＶＪ
ｅｔ−ＯＨ２７，４，！ｉ’（１，１当蓋）全〃Ｄえ、
０℃冷却下ＷＳＣＤ２０１ｍ１ （１，１当量）ヲ加え
て、室温で一夜撹拌した。反応後、減圧’Ｔ Ｄ ｒＶ
ｉ Ｐを゛昭去して、残渣に水を加え、生じた沈澱全戸
数し、５チ重訝水、水のｊ幀で洗浄した。そして、Ｍｅ
ＯＨ−Ｅｔ、、０で洗浄して目的物［１：１７） ９３
．２５ ’、？（収率７６７係）を得た。After dissolving in 250 ml of 'I' F A and stirring at room temperature for 1 hour, CH2Cl12 and TFA were distilled off under reduced pressure. Et20 was added to the residue, and P was removed from the resulting precipitate. Dissolve the obtained powder in 200 ml of kD IvIF,
Adjusted to pH 7 with N+AM to 5j+1. In addition to this, 1 (OB
TI 4.9.9 (1,1 equivalent), B OC-IVJ
et-OH27,4,! i' (1,1 cover) all〃D,
While cooling at 0° C., 201 ml (1.1 equivalent) of WSCD was added, and the mixture was stirred at room temperature overnight. After reaction, reduce pressure 'T DrV
After the iP was removed, water was added to the residue, and the resulting precipitate was washed with 5 g of water and then with water. And Me
Wash with OH-Et, 0 to obtain the target product [1:17) 93
．． 25',? (yield: 767).
融点；１７９〜１８１℃
〔α、］２９−１６．０４° （Ｃ＝１ 、 ｉ）＋φ
Ｆ）ＴＬＣ； Ｒｆ４＝０．８１
元素分析〔Ｃ６１，１１□８０１５Ｎ８Ｓ２として〕０
％ ｌＪ係 Ｎ％
計真１匝 ５９．２９ ６４７ ９．２２測定値 ５９
．０６ ６．７４ ９．４０１８）、ＰＦ （１８−２
２） ； ＢＯＣ−ｍｅｔ −Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ’）
−Ａｒｇ Ｑ’ｏｓ） −ＶａＩ−Ｇｌｕ （ＯＢｚｌ
） −０１（［１８］Ｃ１７：］ ９ １．３ ８１
（７５，２ｍｒＶＩ ） ｋ 酢Ｈ６Ｑ Ｑｍｌに溶か
し、亜鉛末２００．９’（ｒ加え、室温で５時間撹、宇
した。反応液をＰ週し、ｒＩ′ｒ、敏を減圧下留去し、
残渣にＣｌ２０を加え、生じた沈７−・マをＦ取して、
目的例ＣＬ８”Ｊ ８２．３７ ｇ（収４９９８優）を
侍だ。Melting point; 179-181°C [α,]29-16.04° (C=1, i)+φ
F) TLC; Rf4=0.81 Elemental analysis [as C61,11□8015N8S2] 0
% lJ person N% Measurement 1 ton 59.29 647 9.22 Measured value 59
．． 06 6.74 9.4018), PF (18-2
2); BOC-met-Glu(OBzl')
-Arg Q'os) -VaI-Glu (OBzl
) -01([18]C17:] 9 1.3 81
(75,2mrVI) k Dissolved in vinegar H6Q Qml, added 200.9' (r) of zinc powder, stirred at room temperature for 5 hours, and stirred for 5 hours.
Add Cl20 to the residue, collect the resulting precipitate 7-・Ma,
Purpose example: CL8"J 82.37 g (yield: 4998 yen) is a samurai.
融点；２２１〜２２４℃
〔α］ ２９− １ １． ０ ４ ° （Ｃ＝ ｌ
、Ｄ ｌｖＩ Ｐ’）ＴＬＣ：Ｒｆ４＝０．５８
元素分析ＣＣ５２１（７２０，き８Ｓ２として〕Ｃ係
８％ Ｎ％
計算値 ５６，９２ ６．６１ １０．２１６１］１定
値 ５６．６３ ６，８８ ９．６３アミノ酸分析；
Ｇｌｕ ２． ｌ ２ （２）、Ｖａｌ ｌ （１）、
Ｍｅｔ ０．４６ （１）、Ａｒｇ ０．９７ （１）
１９）、ＰＦ （１８−３４Ｔ）ＮＨ□： ＢＯＣ−Ｍ
ｅｔ −Ｇｌｕ （ＯＢｚｌ）−Ａｒｇ Ｃ１’ｏｓ）
−Ｖａｌ −Ｇｌｕ （ＯＢｚｌ） −Ｔｒｐ−Ｌｅｕ
−Ａｒｇ （Ｔｏｓ） −Ｌｙｓ （Ｚ −ｃｌ）−
Ｌｙｓ （Ｚ−Ｃｌ）−Ｌｅｕ −Ｇｉｎ−Ａｓｐ （
ＯＢｚｌ） −’Ｖａｌ −＋（ｉｓ −Ａｓｎ −Ｔ
ｙｒ （Ｂｚｌ−Ｃ１２）−ＮＩ（□ 〔１９〕０２］
３．５６ｊ９ （１，４５ｍＭ）にスカトールＯ１９（
１当ｉ） 、ｍｅ２Ｓ ７．５ｍ１．、ＥＤ Ｔ ０．
７５ｍ（。Melting point; 221-224°C [α] 29-1 1. 0 4 ° (C= l
, D lvI P') TLC: Rf4 = 0.58 Elemental analysis CC521 (720, as 8S2) Section C
8% N% Calculated value 56,92 6.61 10.2161] 1 Constant value 56.63 6,88 9.63 Amino acid analysis;
Glu 2. l 2 (2), Val l (1),
Met 0.46 (1), Arg 0.97 (1)
19), PF (18-34T)NH□: BOC-M
et -Glu (OBzl)-Arg C1'os)
-Val -Glu (OBzl) -Trp-Leu
-Arg (Tos) -Lys (Z -cl)-
Lys (Z-Cl)-Leu-Gin-Asp (
OBzl) −'Val −+(is −Asn −T
yr (Bzl-C12)-NI(□ [19]02]
3.56j9 (1,45mM) with skatole O19 (
1 per i), me2S 7.5m1. , ED T 0.
75m (.
ＴＦＡ１５＋ｌｌｌ１ｆ：加えて浴解し、室温で３０分
間撹拌した後、溶媒を減圧解云した。残渣にＣｌ２０を
加えて、生じた沈澱をＰ取した。得られた粉末を）Ｊｎ
４Ｆ６０ｍｌＫ溶屏し、Ｎ １ｖＩ Ｗｌ ｆ ｐＨ７
ＶＣ調ｎ１ノシた。これに＋（ＯＢ Ｔ Ｏ，２４ｇ
（１，２当重） 、Ｃｌ８：Ｉｌｌ、９Ｌ１（１，２当
量）を加え、０℃冷−Ａｊ下ＷＳＣＤ Ｏ，３２ｍｌ
（１，２当量）ｆ：加えた後、室温で一夜撹拌した。反
応後、Ｄ ｒＶｉ Ｆを減圧留去し、残渣に５％重曹水
を加えて、生じた沈澱全戸数し、水で洗浄した。ＭｅＯ
ｔｌに感？蜀し、Ｃｌ２０をカロえてθゴ取し、目的９
勿［’１９１４．８９ ＃ （９７，９チ）をイ舒だ。TFA15+111f: was added and dissolved in the bath, and after stirring at room temperature for 30 minutes, the solvent was dissolved under reduced pressure. Cl20 was added to the residue, and the resulting precipitate was collected as P. The obtained powder) Jn
4F60mlK, N 1vI Wl f pH 7
VC style n1 noshita. To this + (OB T O, 24g
(1,2 equivalents), Cl8:Ill, 9L1 (1,2 equivalents) were added, and WSCD O, 32 ml was cooled at 0°C under Aj.
(1,2 equivalents) f: After addition, the mixture was stirred at room temperature overnight. After the reaction, DrVi F was distilled off under reduced pressure, 5% aqueous sodium bicarbonate was added to the residue, and the resulting precipitate was washed with water. MeO
Do you feel like tl? Shu, add Cl20 and remove θ, objective 9
Of course I'm not going to give you '1914.89 # (97,9chi).
融点；１５０〜１６０℃
〔α］２５−３．８２° （Ｃ＝１，１）ＩＶｉＦ）Ｔ
ＬＣ； Ｒｆ５＝０．７ ：３
アミノ酸分析； Ａｓｐ １．９６ （２）、Ｇｌｕ
３．４４ （３）、Ｖａｌ ２．１６ （２）、ＩＶｌ
ｅｔ １． ｌ ２ （１）、Ｌｅｕ ２ （２）、Ｔ
ｙｒ ０．９２ （１）、Ｌｙｓ ２．０８ （２）、
Ｈｉｓ ０．６４ （１）、Ａｒｇ ２．２０ （２）
、Ｔｒｐ Ｏ，２４（１）２ω、Ｆ （１７） ：
Ｂ ＯＣ−５ｅｒ（Ｂｚｌ） −〇ＰＡＣ［２０］
Ｂ ＱＣ−８ｅｔ（Ｂｚｌ） −ＯＨｌ １８．１ ｇ
（０，４＋ＶＩ）をＤＭＦ ５００１ｎｌＶＣｆＪか
し、フェナシルブロマイド１１９．４ｇ（１，５当頁）
を加え、冷却下Ｅｔ３Ｎ８３、４ ｍｌを加えて、３０
℃で４時間撹拌した。反応ｆｆ１ＡｃＯＫ２９．４ ｇ
（０，７５当量）倉加え、１時間撹拌した。減圧下ＤＭ
１（″を留去し、残渣をＡｃ０Ｅｔ ６００ ｍｌに溶
かし、５チ重曹水、水の順で洗浄し、無水硫酸す） ｌ
）ラムで乾燥した。Ａｃ０Ｅｔを減圧下留去し、冷却下
放置して、生じた結晶をヘキサノで戸数して目的物［２
０：］ ］１５７．１ 、！１７ （収イ４９ ５．
（１％） をイ（ｔだ。Melting point; 150-160°C [α]25-3.82° (C=1,1)IViF)T
LC; Rf5=0.7:3 Amino acid analysis; Asp 1.96 (2), Glu
3.44 (3), Val 2.16 (2), IVl
et 1. l 2 (1), Leu 2 (2), T
yr 0.92 (1), Lys 2.08 (2),
His 0.64 (1), Arg 2.20 (2)
, Trp O,24(1)2ω,F (17):
B OC-5er (Bzl) -〇PAC[20] B QC-8et (Bzl) -OHl 18.1 g
(0,4+VI) in DMF 5001nlVCfJ, phenacyl bromide 119.4g (1,5 this page)
and 4 ml of Et3N83 under cooling.
Stirred at ℃ for 4 hours. Reaction ff1AcOK29.4 g
(0.75 equivalents) was added and stirred for 1 hour. DM under reduced pressure
1 (distill off '', dissolve the residue in 600 ml of AcOEt, wash with 5 ml of sodium bicarbonate solution and water in that order, and dilute with anhydrous sulfuric acid)
) dried with rum. Ac0Et was distilled off under reduced pressure, left to cool, and the resulting crystals were washed with hexanoate to obtain the desired product [2].
0:] ]157.1,! 17 (account 49 5.
(1%) is a (t).
融点；４５〜４７℃
〔α〕２９゛５−１１８８° （Ｃ二１．ＤＭＦ）ＴＬ
Ｃ； Ｒ，、／’６＝０８２
元素分析〔Ｃ２３Ｈ２□０６Ｎ１として〕Ｃチ １１チ
Ｎチ
割算値 ６６．８１ ６，５８ ３．３９測定値 ６６
．７７ ６，６８ ３．４６２１）、ＰＦ （１６−１
７） ： Ｊ３０Ｃ−Ａｓｎ−８ｅｒＧ３ｚｌ） −０
Ｐ Ａ Ｃ［：２１］［：２０］ １５３．０ 、！？
（０，３７ｉＶｌ） ｋＣＨ２Ｃ１２５０ｍ４ＴＦＡ
２５０＋ｎｌＫ溶かし、室温で１時間麻ゴギした後、減
圧下ＣＨ２Ｃｌ２、Ｔ Ｆ Ａを留去した。残ｍＫＥｔ
２０を加え、生じた沈澱をｐ取した。得られた粉末ｋ
１） ｒＶｉ ｆ” ４００ ｍ１３ Ｋ溶解し、Ｎ
ＩＶｉ Ｍテｐｉ（７に調節した。これに１４ＯＢ′ｆ
’４０．５ｇ（０，８当量）、Ｂ ＯＣ−Ａｓｎ−０ｔ
（６９，７、ｉ’ （０，８当量）をカロえて、０℃冷
却下ＷＳ ＣＤ ５４．９ｍｌ （０，８当量）ヲ刀口
え、室温で３日間撹拌した。反応後、減圧下Ｄ Ｍ Ｆ
を留去し、残、査を水５１中に卵え、生じた沈姥をＥ取
した。乾燥ｆ麦、＋ｖｆｅＯＨに懸ン蜀し、ニーチルを
）３０えて戸数して目的物［２１：］ ９５．０ ｇ
（収率６００係）を得だ。Melting point; 45-47℃ [α] 29゛5-1188° (C21.DMF)TL
C; R,, /'6=082 Elemental analysis [as C23H2□06N1] Cchi 11chi Nchi division value 66.81 6,58 3.39 Measured value 66
．． 77 6, 68 3.4621), PF (16-1
7): J30C-Asn-8erG3zl) -0
P A C [:21] [:20] 153.0,! ?
(0,37iVl) kCH2C1250m4TFA
After dissolving 250+nlK and stirring at room temperature for 1 hour, CH2Cl2 and TFA were distilled off under reduced pressure. Remaining mKEt
20 was added, and the resulting precipitate was collected. The obtained powder k
1) rVi f” 400 m13 K dissolved, N
IVi Mtepi (adjusted to 7. 14OB'f to this
'40.5g (0.8 equivalent), BOC-Asn-0t
(69,7,i' (0.8 equivalents) was added and added to 54.9 ml (0.8 equivalents) of WS CD under cooling at 0°C, and stirred at room temperature for 3 days. After the reaction, DM under reduced pressure. F
was distilled off, the residue was poured into water, and the resulting sediment was collected. Dried f wheat, +vfeOH, add nitil) add 30, count and target [21:] 95.0 g
(Yield: 600) was obtained.
融点；１７４〜１７６℃
〔α〕２９・５−５．５４° （Ｃ＝ Ｌ 、 Ｄ ｉ
ＶＩ Ｐ ）ＴＬＣ；ｌ尤ｆ２＝０．６２ 、 ｋ？、
ｆ４＝０．６１元素分析〔Ｃ２□ｔ（３３０８Ｎ３とし
て〕０％ Ｈチ Ｎ係
計算値 ６１，４７ ６，３１ ７．９６測定１１区
６１，２６ ６，２７ ７．４８２２）、ＰＦ （１５
−１７’） ： ＢＯＣ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ（Ｂ
ｚｌ’）−０Ｐｆｉ、Ｃ〔２２）［：２１］ ８０．９
１．９ （０，１５３Ｍ）をＣ１−１２Ｃ１２５０７７
！ｌ、’ｒ Ｆ Ａ ｌ ５０ ｍｌＫ溶かし、室温で
１時：Ｔｈ’１１蒐；１ミした後、減圧下Ｃｄ２Ｃ１２
、’ｆ’ Ｆ Ａ ＃ ’ｍ ｆ Ｌ タ。残査金ａｔ
２ＬＪで洗浄して油状物を得た。これを、ＤＭＦｌ
５ｏｍｌに溶かし、ＮＭＭでｐＨ７に調節した。これに
ＨＯＢＴ２２．７１（１，１当景）、ＢＯＣ−Ｌｅｕ−
Ｏｆ−Ｉ ・ｌ−Ｉ２０４１．９９ （］、 １当量）
を加えて、０℃冷却下Ｗ Ｓ ＣＤ ３０．７ ｍｌ
（１，１当量）を加え、室温で一夜撹拌後、反応液が固
化したので、５℃で３日間放置した。反応後、水を加え
てＰ取し、５係重げ水、水の順で洗浄して目的物〔２２
〕８８．５２ｇ（収率９０３％）を得た。Melting point; 174-176°C [α] 29.5-5.54° (C=L, Di
VI P) TLC; l likelihood f2=0.62, k? ,
f4=0.61 Elemental analysis [C2□t (as 3308N3)] 0% Hchi N coefficient calculated value 61,47 6,31 7.96 Measurement 11 sections
61,26 6,27 7.4822), PF (15
-17') : BOC-Leu-Asn-Ser(B
zl')-0Pfi, C[22)[:21] 80.9
1.9 (0,153M) to C1-12C125077
! l,'r F A l Dissolved in 50 mlK at room temperature for 1 hour: Th'11; After 1 hour, Cd2C12 under reduced pressure.
, 'f' F A # 'm f L ta. Remaining amount at
Washing with 2LJ gave an oily substance. Add this to DMFl
The solution was dissolved in 5 oml and adjusted to pH 7 with NMM. In addition to this, HOBT22.71 (1,1 view), BOC-Leu-
Of-I ・l-I2041.99 (], 1 equivalent)
Add 30.7 ml of W S CD under cooling at 0°C.
(1.1 equivalents) was added, and after stirring at room temperature overnight, the reaction solution solidified and was left at 5° C. for 3 days. After the reaction, water was added to remove P, and the target product was washed with water and water in that order.
] 88.52 g (yield 903%) was obtained.
融点；１９２〜１９３℃
〔α〕２８−１２．２６° （Ｃ＝１．ＤＭＦ）ＴＬＣ
： ｋｔｆ４＝ｏ、ｓ 。Melting point; 192-193°C [α] 28-12.26° (C=1.DMF) TLC
: ktf4=o,s.
元素分析ＣＣ３３Ｈ４４０９Ｎ４として〕Ｃ％ Ｈチ
８％
計算値 ６１，８６ ６，９２ ８．７５測定ｉｍ ６
１，８１ ７，０５ ８．５６２３）、ＰＦ （１４−
１７） ： ＢＯＣ−Ｈｉｓ（ｆ”ｏｓ）−Ｌｅｕ −
Ａｓｎ −Ｓｅｒ （Ｂｚｌ） −０ＰＡＣ［２３：］
［：２２〕８７．５５．！ｉ’ （０，１３７」Ｖｉ）
をＣＨＣＨ２Ｃｌ２１Ｏ０，’ｆ’ＦＡ ２００ｍｌに
溶解し、室温で７０分間撹拌した後、減圧下ＣＨ２Ｃｌ
２、ＴＦＡを留去した。Elemental analysis CC33H4409N4] C% H
8% Calculated value 61,86 6,92 8.75 Measured im 6
1,81 7,05 8.5623), PF (14-
17): BOC-His(f”os)-Leu-
Asn -Ser (Bzl) -0PAC[23:]
[:22]87.55. ! i'(0,137"Vi)
was dissolved in 200 ml of CHCH2Cl21O0,'f'FA, stirred at room temperature for 70 minutes, and then dissolved in CH2Cl under reduced pressure.
2. TFA was distilled off.
残渣にＥｕ２Ｏを加え、生じた沈殿をＰ取した。得られ
た粉末をＤＭＦ３５０１ｎｌに溶かし、Ｎ Ｍ ｉｎで
ｐＨ７に調節した。Eu2O was added to the residue, and the resulting precipitate was collected as P. The obtained powder was dissolved in 3501 nl of DMF and adjusted to pH 7 with N Min.
一方Ｂ ＯＣ−ＨｌｓＣＦｏｓ）−Ｏｆ（−ＤＣＨＡ
８９．２ ｇ （１１当量）をＡ、ｃＯＥｔ１４に加え
、ＩＮ値酸、水の順でふりまぜた。有機層を無水硫酸ナ
トリウムで乾燥した後、減圧濃縮した。イ弄られた油状
物Ｖ（上記のＤ ＩＶＩ Ｆ 浴液を加え、これにＨＯ
Ｂ Ｔ ２０．４ 、！７（１，１当量）をノＪ■えた
後、０℃冷却下＊５ＣＤ２７、６１１１１ （１，１当
量）を加えて、室温で３日間撹拌した。反応後、減圧下
Ｄ Ｍ Ｆを留去し、残直に水を加え、生じた沈澱をＰ
取した後、５チ１１Ｗ水、水の順で洗浄して目的物〔２
３）１０８．６３ｇ（収率８５．１％）を得た。On the other hand, B OC-HlsCFos)-Of(-DCHA
89.2 g (11 equivalents) was added to A, cOEt14, and mixed with IN value acid and water in that order. The organic layer was dried over anhydrous sodium sulfate and then concentrated under reduced pressure. Add the oily substance V (add the above DIVI F bath solution and add HO
B T 20.4,! After adding 7 (1,1 equivalents) to the mixture, *5CD27, 61111 (1,1 equivalents) was added under cooling at 0° C., and the mixture was stirred at room temperature for 3 days. After the reaction, DMF was distilled off under reduced pressure, water was added to the residue, and the resulting precipitate was dissolved in P.
After removing the sample, wash the 5 pieces with 11W water and water in that order to remove the object [2].
3) 108.63g (yield 85.1%) was obtained.
この生成物は溶媒系４におけるＴＬＣでは２スポツトを
示した。これは出Ｓの側鎖医護基である’［”ｏｓ基が
脱離しなりものが含脣するからであるが、これ以上精製
することなく次の反応に用いた。The product showed 2 spots on TLC in solvent system 4. This was because the '[''os group, which is a side chain protective group of S, was removed and some was included, but it was used in the next reaction without further purification.
’ｆ’Ｌｃ ； ｋｔｆ、＝０．２０ 、０．７９２４
）、ＰＦ （１３−１７） ： ＢＯＣ−Ｌｙｓ（Ｚ
−ＣＩＪ ） −ｆ（ｉｓ −Ｌｅｕ −Ａｓｎ−８ｅ
ｒ ０３ｚｌ） −０ＰＡＣ〔２４，Ｉｔ［２３］ １
０７．９６ ＆ （０，１１６Ｍ） （！−ｃＨ２Ｃ１
２１００ｍｌ、ＴＦＡ２００ｍｌに溶解し、室温ｆ ｌ
時Ｉ’１１’］ ｆｉｔ 拌した後、減１モ下ＣＨ２
ＣＡ２． Ｔ Ｆ Ａを留去した。残渣にＥｕ２Ｏを加
え、生じた沈澱をｉｐ取した。得られた粉末をＤＭＦ３
００ｍｌに溶解し、Ｎ−メチルモルホリンでｐＨ７に調
節した。'f'Lc; ktf, = 0.20, 0.7924
), PF (13-17): BOC-Lys(Z
-CIJ) -f(is -Leu -Asn-8e
r 03zl) -0PAC[24,It[23] 1
07.96 & (0,116M) (!-cH2C1
2100ml, dissolved in TFA200ml, room temperature f l
time I'11'] fit After stirring, reduce 1 mo of CH2
CA2. TFA was distilled off. Eu2O was added to the residue, and the resulting precipitate was collected by IP. The obtained powder was mixed with DMF3
00 ml and adjusted to pH 7 with N-methylmorpholine.
一方、Ｂ ＯＣ−Ｌｙｓ （Ｚ−Ｃｌ） −０Ｈ−ＴＢ
Ａ ６２．４６．９（１，１Ｍｆｉ’）をＡｃ０ＩｉＥ
ｔ ６００ ｍｌに力日え、ＩＮｊｍ酸、水のノ順でふ
りまぜた。廟機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、
減ｌ：ＩＥ濃縮した。得られた油状１勿に上記のＤ Ｍ
Ｆ溶液を加え、これにＨＯ１３Ｔ１７．３０．！Ｉ’
（１，１当量）を加えた後、０℃冷却下ｖ％７ｓ ＣＤ
２３．４２ｍｌを〃０えて、室ｔｍ チー夜ｈｉ 拌
した。反応後、減圧下Ｄ ＬＶＩＦを留去し、残直に５
％重曹水を加え、生じた沈澱をＰ取した後、水で洗浄し
た。減圧乾旅後、ＩＶＪ’ｅＯＨ−Ｅｕ２Ｏで再沈澱を
行ない、Ａｃ０Ｅｔで洗浄して目的物（２４］ １１４
．４２ｇ（収率９１８％）を得た。On the other hand, B OC-Lys (Z-Cl) -0H-TB
A 62.46.9 (1,1Mfi') Ac0IiE
Into 600 ml of the mixture, the following ingredients were sprinkled in the following order. After drying the mound layer with anhydrous sodium sulfate,
Reduced liter: IE concentrated. The resulting oil 1 of course the above DM
F solution was added, and to this was added HO13T17.30. ! I'
After adding (1,1 equivalent), v%7s CD under cooling at 0℃
Add 23.42 ml and stir in the room. After the reaction, D LVIF was distilled off under reduced pressure, and the residue was directly
% sodium bicarbonate solution was added, and the resulting precipitate was washed with water. After drying under reduced pressure, reprecipitation was performed with IVJ'eOH-Eu2O, and washed with Ac0Et to obtain the target product (24) 114
．． 42 g (yield 918%) was obtained.
融点；２００〜２０２℃
〔α）Ｄ−２６，９４° （ｃ ＝ ｔ 、 Ｄ＋ｖｌ
Ｆ）ＴＬ Ｃ；町、 ＝０．３４ 、 Ｒ１５＝０．
６８元素分析〔ｃ５３Ｈ６８ｏ１３Ｎ９ｃ１１として〕
Ｃチ Ｈヂ Ｎヂ
ａ１鼻値 ５９，２３ ６．．３８ １１．７３ｄ１り
足１直 ５９，２４ ６．６５ １１６４２５）、ＰＦ
（１３−１７） ； ＢＯＣ−Ｌｙｓ（Ｚ−ＣＩり−
Ｈｉｓ −Ｌｅｕ −Ａｓｎ −Ｓｅｒ Ｑ３ｚｌ）
−０１−Ｉ・２ＡｃＯ１（・２Ｈ２０［２５）
［２４，１８６，０，？ （８０ｍｊｖＩ） ’ｅ酢瞭
５００ｒｎｅｖｃ溶解して、亜鉛末ｉｓｏｇを加え、室
温で５時間撹拌した。詐りを減圧下留云し、残渣にＥｔ
２０ を加えて、生じた沈澱をＩＰ叡してｎ的物［２
５） ８４．７０ｇ（収率９５．２％）を得た。Melting point; 200-202°C [α) D-26,94° (c = t, D+vl
F) TL C; Town, =0.34, R15=0.
68 element analysis [as c53H68o13N9c11]
Cchi Hji Njia1 nasal value 59,23 6. ．． 38 11.73d1 foot 1 shift 59,24 6.65 116425), PF
(13-17) ; BOC-Lys(Z-CIri-
His-Leu-Asn-Ser Q3zl)
-01-I・2AcO1(・2H20[25) [24,186,0,? (80mjvI) 500rnevc of vinegar was dissolved, zinc powder isog was added, and the mixture was stirred at room temperature for 5 hours. Distill the residue under reduced pressure and add Et to the residue.
20 was added, and the resulting precipitate was subjected to IP treatment to obtain the n-type product [2
5) 84.70g (yield 95.2%) was obtained.
融点；２４ｏ〜２５（Ｉｃ
［：ａ］３０−１９．１６° （Ｃ＝１ 、 、ＤｒＶ
ＩＰ）ＴＬＣ； Ｒｆ４＝０．４７
元素分析［Ｃ，５Ｈ５□０．□Ｎ、（Ｊ、−２ＣＨ３Ｃ
’０Ｏ１（−２Ｈ２０として〕
Ｃ係 Ｈチ Ｎ％
計麹−値 ５３．７６ ６．６３ １１．５２測定直
５２．８３ ６．３６ １１．３５アミノ酸分析； Ａ
ｓｐ １． ＯＬ （１）、Ｓｅｒ Ｏ，８３（１）、
Ｌｅｕ １ （１）、Ｌｙｓ ０．９３ （１）、Ｈｉ
ｓ Ｏ，９７（１）２６）、ＰＦ （１３−３４Ｔ）
ＮＥ（２；ＢｏＧ −Ｌｙｓ（Ｚ−Ｃｌ）−Ｈｉｓ−Ｌ
ｅｕ−Ａｓｎ −５ｅｒ（Ｂｚｌ） −１＼４ｅｔ −
Ｇｌｕ （０Ｂｚｌ ）−Ａｒｇ ＣＩ’ｏｓ）−Ｖａ
ｌ −Ｇｌｕ （ＯＢｚｌ）−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ
Ｃｒｏｓ）−Ｌｙｓ （Ｚ−Ｃ４） −Ｌｙｒ（Ｚ−Ｃ
１ｌ）−Ｌｅｕ −Ｇｉｎ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−Ｖａ
ｌ−１（ｉｓ−Ａｓｎ −Ｔｙｒ Ｇ３ｚｌ−Ｃｌ１２
） ＮＨ□［：２６：］［１９］４．６６９（１，３５
ｍＭ）にスヵト〜ルｏ、ｉ Ｓ９、＋ｖｌｅ ｚ Ｓ７
５” Ｘｂ Ｄ Ｔ Ｏ７５”’ 、、Ｔ ＦＡ １５
”を加えて浴解し、室温で３０分間撹拌した鏝、溶媒
ケ減圧屏去した。残渣にｇｔ ２ｏを卵えて、生じた沈
び＋Ｑを戸数した。得られた粉末を／３Ｑｍｌに浴かし
、Ｎ ｉＪ Ｍ −Ｃｐｉ（７ＶＣ、Ｊ ＊ｉｆｆ シ
た。これ＆ｃＨＯＢ Ｔ Ｏ，２２，９（１，２当 屯
） 、［２５］ １．８ ０７？ （１，２当量）
を ｉｎえ、０℃冷却下ｖＶ Ｓ ＣＤ ０．３ ｍｌ
（１，２当ｊｉｉ）’ｅ７Ｊｌ］えた後、室温で一夜
撹拌した。反応後、Ｄ Ｍ Ｉ！’全減圧留去し、残渣
に５％重曹水を加えて、生じた沈澱をＰ取し、水で洗浄
した。ＩＶｅＯＨに懸濁し、Ｅｔ２０を加えてＰ取し、
目的物［：５５］ ５．９４ ＆ （収率９９２％）を
得た。Melting point; 24o~25(Ic[:a]30-19.16° (C=1, , DrV
IP) TLC; Rf4=0.47 Elemental analysis [C,5H5□0. □N, (J, -2CH3C
'0O1 (as -2H20) C section H section N% Total koji value 53.76 6.63 11.52 Direct measurement
52.83 6.36 11.35 Amino acid analysis; A
sp1. OL (1), Ser O, 83 (1),
Leu 1 (1), Lys 0.93 (1), Hi
s O,97(1)26), PF (13-34T)
NE(2;BoG-Lys(Z-Cl)-His-L
eu-Asn -5er(Bzl) -1\4et -
Glu (0Bzl)-Arg CI'os)-Va
l -Glu(OBzl)-Trp-Leu-Arg
Cros)-Lys (Z-C4) -Lyr(Z-C
1l)-Leu-Gin-Asp(OBzl)-Va
l-1(is-Asn-Tyr G3zl-Cl12
) NH□[:26:][19]4.669(1,35
mM) to scuttle o, i S9, +vle z S7
5" Xb D T O75"',, T FA 15
The solution was stirred at room temperature for 30 minutes, and the solvent was removed under reduced pressure.Gt 2O was added to the residue, and the resulting precipitate +Q was counted. and N iJ M -Cpi (7VC, J*iff Shita. This&cHOB TO, 22,9 (1,2 equivalents), [25] 1.8 07? (1,2 equivalents)
Inject 0.3 ml of vV S CD under cooling at 0℃.
(1,2 times jii)'e7Jl] and then stirred at room temperature overnight. After the reaction, DMI! 'The whole was distilled off under reduced pressure, 5% aqueous sodium bicarbonate was added to the residue, and the resulting precipitate was collected and washed with water. Suspend in IVeOH, add Et20 to remove P,
The desired product [:55] 5.94 & (yield 992%) was obtained.
融点：１５０〜１６０℃
〔α、）” −３，８４° （Ｃ＝ｌ 、 Ｄｌ■Ｆ）
’ｒＬＣ； ｋ＜ｆ５＝０６４
アミノ酸分析； Ａｓｐ ２．９３ （３）、Ｓｅｒ
Ｏ，８８（１）、Ｇｌｕ ３．０９ （３）、Ｖａｌ
１．９４ （２）、Ｍｅｔ ０．９７ （１）、Ｌｅｕ
３ （３）、Ｔｙｒ Ｏ，８５（１）、Ｌｙｓ ２．
９１ （３）、Ｈｉｓ １．６９ （２）、Ａｒｇ １
．９６ （２）、Ｔｒｐ ０．１９（１）
２７）、ＣＴｙｒ３４］ ｈ−ＰＴＨ（１３−３４）
ＮＨ２〔２６） １．２５＆ Ｃ０，３ｍモル）Ｋアニ
ソール３ｍｌ。Melting point: 150-160℃ [α,)” -3,84° (C=l, Dl■F)
'rLC;k<f5=064 Amino acid analysis; Asp 2.93 (3), Ser
O, 88 (1), Glu 3.09 (3), Val
1.94 (2), Met 0.97 (1), Leu
3 (3), Tyr O, 85 (1), Lys 2.
91 (3), His 1.69 (2), Arg 1
．． 96 (2), Trp 0.19 (1) 27), CTyr34] h-PTH (13-34)
NH2 [26) 1.25 & C0.3 mmol) K anisole 3 ml.
ＥＤ ’ｆ’ ０．３ｍ１．、Ｍｅｔ １８０ｎＱおよ
びＭｅ２Ｓ ３ ｍｌを加え、これに０℃に冷却下無水
弗化水素（ｔ（Ｆ ）３０ｍｌを加え、１時間撹拌した
。反応後、減圧下１−ＩＦを留去し、残渣ＫＥｔ２０を
加え、生じた沈よ物を戸数した。これ全０． ｌ ＩＶ
Ｉ酢酸５０ｍ１に溶かし、ダウエックスｌ×２ （アセ
テート型）のカラム（（２×４０ｃ１ｎ）にチャージし
、Ｏ，ｌ Ｍ酢酸で溶出した。ニンヒドリン・パクリ反
応陽性区分を集めて凍結乾燥して凍結乾燥品１０１ｇを
得た。得られた乾燥品を０．１Ｍｌ！ｉ’ｌｌ：鷹に溶
かし、これを００５ＭＡ ｃ ０Ｎ１１４水溶液（ｐＨ
５，ｌ ）で平衡化したカルボキンメチルセルロースの
カラム（２Ｘ３０ａｎ）にチャージし、００５ ＭＡｃ
ＯＮＨ４水溶液（ｐＨ５，１）から０．４ ＭＡｃＯＮ
Ｈ４水溶液（ｐ）Ｉ ６．０ ）各６００ｍ１を用いる
連続濃度勾配法によりｄ出し、ざらに０、４ ＭＡｃＯ
Ｎｆ（４水溶液（１）ｌ（６，０） ３００ｎｌｅで溶
出した。溶出液を１２．５ ｍｌつつ分画し、２８０ｎ
ｍの吸光度で確認し、３０〜５８木目のフラクションＣ
１，５９〜７５本目のフラクションＣ２および７６〜１
１０本ＮのフラクションＣ３を集め谷々凍帖乾燥して乾
燥品Ｃ１、Ｃ２υよびＣ３を得た。ED 'f' 0.3m1. , 180 nQ of Met, and 3 ml of Me2S were added thereto, and 30 ml of anhydrous hydrogen fluoride (t(F)) was added thereto under cooling at 0°C, followed by stirring for 1 hour. After the reaction, 1-IF was distilled off under reduced pressure, leaving a residue of KEt20. was added, and the resulting sediment was counted.This total was 0.l IV
It was dissolved in 50 ml of I acetic acid, charged onto a DOWEX 1 x 2 (acetate type) column (2 x 40 c 1 n), and eluted with O, 1 M acetic acid. The fractions positive for the ninhydrin-reproduction reaction were collected, lyophilized, and frozen. 101 g of a dry product was obtained.The obtained dry product was dissolved in 0.1 Ml!
A column of carboquine methylcellulose (2X30an) equilibrated with
0.4 MAcON from ONH4 aqueous solution (pH 5,1)
H4 aqueous solution (p)I 6.0) was removed by continuous concentration gradient method using 600 ml each, and roughly 0.4 MAcO
Nf (4 aqueous solution (1) l (6,0) was eluted with 300 nl. The eluate was fractionated into 12.5 ml portions, and 280 nl
Confirmed by absorbance of m, fraction C with 30-58 wood grains
1,59-75th fraction C2 and 76-1
10 N fractions C3 were collected and dried in a Yaya-freeze to obtain dried products C1, C2υ and C3.
Ｃ２をできるだけ少数の０．１ Ｍ酢ばに溶かし、セフ
ァデックスＧ−２５のカラム（３，５Ｘ ｌ ｌ ５ｃ
ｍ）にチャージし、０．１Ｍ酢酸で溶出した。浴出液を
１０．５ゴづつ分画し、２８０ｎｍの吸光度で４１伍ｙ
し、４０〜６３木目のフラクションＣ２Ｇ’（ｉ＝集め
て凍結乾燥して乾燥品Ｃ２Ｇ １４０ ｍ９を得た。こ
れヶできるだけ少量のブタノール−ピリジン−酢酸−〇
、 ６ ｆＷＡｃＯＮＨ４水溶液（５： ｓ ： ｏ、
ｔ ： １１Ｖ／Ｖ）の混合溶媒の上層液に浴かし、予
め前呂己ｆ４媒の下ｌｔ”ｔ Ｖｋ 、ヒノー液の順で
処理したセファデックスＧ −５０のカラム（３Ｘｌ１
５釧）にチャージし、上により確認し、１８〜５０８〜
５０本目ション０２ＧＰ、 、７４〜９３本目のフラク
ション０２ＧＰ２および９４〜１１４本目のフラクショ
ンＣ２Ｇｆ）３’ｔ ’１４めて各々減圧濃縮した。得
られた乾燥品０２ＧＰ２をできるだけ少量の０１Ｍ酢酸
に浴かし、これをセファデックスＧ−２５のカラム（３
，５Ｘ ｌ １５ａｎ）にチャージし、０．’１Ｍ酢ｊ
藪で溶出した。浴出液を１０、５１ｎｌづつ分画し、２
８０ｎｍの吸光度で確認し、４４〜５１４〜５フラクシ
ョンＣ２ＧＰ２Ｇ ｅ東めで凍鈷乾繰してＣＴｙｒ３４
） ｈ−ＰＴｆ（（１３−３４）ＮＨ２を得だ。収量１
６３・ＶＯｆ Ｌ、 Ｃ： １Ｌｆ１１＝ ０．３２、
ｉ＜ｆ１２＝ ０．５１ＨＰＬＣ； ｌ ８．８４分
アミノ酸分析； Ａｓｐ ２．９５ （３）、Ｓｅｒ
０．７１ （１）、 ４
Ｇｌｕ ３．０ ０ （３）、Ｖａｌ １．８ １ （
２） 、Ｍｅｔ １．４＝４（１）、Ｌｅｕ ３． ０
０ （３）、’Ｉ’ｙｒ ０．９５ （１）、Ｌｙｓ
３．０３（３）、山ｓ １．６６ （２）、Ａｒｇ
２．０２ （２）、Ｔｒｐ ０．９４（１）
実施Ｖ１１２
ＣＴｙｒ”、］ ｈ−ＰＴＩ（（９−３４） Ｎｔ１２
：１（−ｔ（ｉｓ −Ａｓｎ −Ｌｅｕ −Ｇｌｙ −
Ｌｙｓ −１（ｉｓ −Ｌｅｕ −Ａｓｎ −Ｓｅｒ
−ＩＶｉｅｔ −Ｇｌｕ −Ａｒｇ −’Ｖａｌ−Ｇｌ
ｕ、−Ｔｒｐ −Ｌｅｕ −Ａｒｇ −Ｌｙｓ −Ｌｙ
ｓ −Ｌｅｕ −Ｇｌｎ −Ａｓｐ −Ｖａｌ −ｔ（
ｉ ｓ −Ａｓｎ −’ｆ’ｙｒＮＨ２
２８）、 ＰＦ （１０−１２） ： ＢＯＣ−Ａｓｎ
−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ −０Ｂｚｌ ［２７：］
］ＢＯＣ−Ｌｅｕ−０１ ｌｌＨ２Ｏ１１２，２１／
（０，４５＋Ｖ） １（−Ｇｌｙ−ＯＢｚｌ−ＴｏｓＯ
ｆ（ｌ ５１．８ 、！ｉ’ （１当量）およびｔ（Ｏ
ＢＴ６０．８ ｇ（１当足）をＴ ＨＦ５５０ｍｅＫ溶
かし、これにθ℃冷却下ＷＳＣ０８６，３ｎｌ （０，
９４当量）を加えて、室温で一夜慎拌した。反応液を減
圧濃縮して、残渣をＡｃ０Ｅｔ ｌｌに溶かし、５％重
曹水、ｌＮ塩酸、水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナト
リウムで乾録し、減圧濃縮して油状物を得だ。Dissolve C2 in as little amount of 0.1 M vinegar as possible and apply it to a Sephadex G-25 column (3.5
m) and eluted with 0.1M acetic acid. The bath solution was fractionated into 10.5 parts, and the absorbance at 280 nm was 41 parts.
The 40-63 wood grain fraction C2G' (i = collected and lyophilized to obtain a dry product C2G 140 m9. As small as possible, a butanol-pyridine-acetic acid-〇,6 fWAcONH4 aqueous solution (5: s: o ,
A column of Sephadex G-50 (3
5), check above, 18~508~
The 50th fraction 02GP, the 74th to 93rd fractions 02GP2, and the 94th to 114th fractions C2Gf)3't'14 were each concentrated under reduced pressure. The dried product 02GP2 obtained was soaked in as small a amount of 01M acetic acid as possible, and then added to a Sephadex G-25 column (3
, 5X l 15an) and 0. '1M vinegar j
It was eluted in the bush. The bath solution was fractionated into 10 and 51 nl portions, and 2
Confirm the absorbance at 80 nm, and freeze and dry the 44-514-5 fraction C2GP2Ge east to CTyr34.
) h-PTf((13-34)NH2 was obtained. Yield 1
63・VOf L, C: 1Lf11= 0.32,
i<f12=0.51 HPLC; l 8.84 min Amino acid analysis; Asp 2.95 (3), Ser
0.71 (1), 4 Glu 3.0 0 (3), Val 1.8 1 (
2), Met 1.4=4(1), Leu 3. 0
0 (3), 'I'yr 0.95 (1), Lys
3.03 (3), mountain s 1.66 (2), Arg
2.02 (2), Trp 0.94 (1) Implementation V112 CTyr”,] h-PTI ((9-34) Nt12
:1(-t(is-Asn-Leu-Gly-
Lys −1(is −Leu −Asn −Ser
-IViet -Glu -Arg -'Val-Gl
u, -Trp -Leu -Arg -Lys -Ly
s -Leu -Gln -Asp -Val -t(
i s -Asn -'f'yrNH2 28), PF (10-12): BOC-Asn
-Leu-Gly -0Bzl [27:] ]BOC-Leu-01 llH2O112,21/
(0,45+V) 1(-Gly-OBzl-TosO
f(l 51.8 ,!i' (1 equivalent) and t(O
BT60.8 g (1 foot) was dissolved in THF550meK and WSC086,3nl (0,
94 equivalents) and stirred overnight at room temperature. The reaction solution was concentrated under reduced pressure, and the residue was dissolved in Ac0Etll, and washed with 5% aqueous sodium bicarbonate, 1N hydrochloric acid, and water. The organic layer was dried over anhydrous sodium sulfate and concentrated under reduced pressure to obtain an oil.
これをＣＨ２Ｃｌ２１００ｍ１ＸＴＦＡ ７００ｎｌに
溶解し、室温で５０分間撹拌した後、減圧下ＣＨ２Ｃｌ
２、ＴＦＡを留去した。得られた油状物をＤＭＦ ５０
０ｍ／！に溶かし、Ｎ Ｍ ｓＶｌでｐＨ７に調節した
。これにＨＯ１３Ｔ６．ｏ８．？ （０，を当量）ＢＯ
Ｃ−Ａｓｎ −０ＮＰ ｌ ３２．９ｇ（０，８’３当
量）を加えた後、室温で２日間撹拌した。反応液を減圧
濃縮し、得られた油状物をＡｃ０Ｅｔ ｌ ｌに溶かし
、５チ重曹水で洗浄した。生じた沈澱をＰ取し、有機層
をｌＮ塩酸、水の順で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾
燥後、減ａＥ＃縮した。残渣にヘキサンを加え、生じた
沈澱を戸数し、先の沈澱と合せてＡｃ０Ｅｔ−ヘキサン
から再結晶化して目的物［２７］ １６６．２Ｊ？ （
収率７５．０％）を得た。This was dissolved in 100ml of CH2Cl2 and 700nl of XTFA, stirred at room temperature for 50 minutes, and then dissolved in CH2Cl2 under reduced pressure.
2. TFA was distilled off. The obtained oil was dissolved in DMF 50
0m/! The pH was adjusted to 7 with N M sVl. This includes HO13T6. o8. ? (equivalent to 0)BO
After adding 32.9 g (0,8'3 equivalents) of C-Asn-0NP1, the mixture was stirred at room temperature for 2 days. The reaction solution was concentrated under reduced pressure, and the resulting oil was dissolved in AcOEtl and washed with 5 ml of aqueous sodium bicarbonate. The resulting precipitate was collected, and the organic layer was washed with 1N hydrochloric acid and water in that order, dried over anhydrous sodium sulfate, and concentrated to reduce aE#. Hexane was added to the residue, the resulting precipitate was separated, combined with the previous precipitate, and recrystallized from Ac0Et-hexane to obtain the desired product [27] 166.2J? (
A yield of 75.0% was obtained.
融点；１５９〜１６０℃
［α］３０−３４．１° （Ｃ＝ｔ 、ＤＭＦ）ＴＬＣ
； Ｒｆ２＝０．５６
元素分析〔Ｃ２４Ｈ３６０□Ｎ４として〕Ｃチ ８％
Ｎ％
計算値 ５８，５２ ７．３７ １１．３８測定値 ５
８，３９ ７．４９ １１．２７２９）、ＰＦ （９−
１２） ； ＢＯＣ−ｆ（ｉｓ−Ａｓｎ −Ｌｅｕ −
Ｇｌｙ −０Ｂｚｌ ［：２８〕［２７） ｌ １８．
２！ｊ（０，２４Ｍ） ’ｔｃＨ２Ｃ１２ｔｏｏｍｇ。Melting point; 159-160°C [α] 30-34.1° (C=t, DMF) TLC
; Rf2=0.56 Elemental analysis [as C24H360□N4] Cchi 8%
N% Calculated value 58,52 7.37 11.38 Measured value 5
8,39 7.49 11.2729), PF (9-
12); BOC-f(is-Asn-Leu-
Gly -0Bzl [:28] [27) l 18.
2! j(0,24M)'tcH2C12toomg.
ＴＦＡ３５０ｍ６に溶かし、室温で３０分間撹拌した後
、減圧下ＣＨ２Ｃ４□、ＴＦ’Ａを留去した。残渣にＥ
ｔ２０を加えて、生じた沈澱を戸数した。得られた粉末
をＤＭＦ ２００祠に溶解し、Ｎ Ｍ〜１でｐｉ（７に
ｐｉ、４節した。After dissolving in 350 m6 of TFA and stirring at room temperature for 30 minutes, CH2C4□ and TF'A were distilled off under reduced pressure. E on the residue
t20 was added and the resulting precipitate was counted. The obtained powder was dissolved in DMF 200 K and NM~1 pi (7 pi, 4 sections).
一方、Ｂ ＯＣ−Ｈｉｓ（ｒｏｓ）−０）Ｉ ｅＤＣＨ
Ａｌ ７０．１ｇ（１２当量）をＡｃ０Ｅｔ １．５１
１ Ｋ懸濁し、ＩＮ硫酸５００ｍ１．水の順で洗浄し、
無水硫酸す） ＩＪウムで乾燥後、減圧濃縮した。得ら
れた油状＋ｇをＤＭ Ｆ ２００ ｍｌに溶解し、上記
のｉ）ＭＦ浴溶液加えた。これ［ＨＯＢ ’ｒ ３８．
９ ｇ（１，２当量）を加え、０℃冷却下ＷＳＣＤ ５
２．７ｍｉ （１，２当滑）を加えて、室温で一夜撹拌
した。反応液金減ＩｉＥｍ縮し、得られた油状物をＡｃ
０Ｅｔ １．５１３ Ｋ溶かした後、５チ重曹水、水で
３回づつ洗浄した。有つ炭層を無水硫酸ナトリウムで乾
燥後、減圧濃縮し、残直にＥｔ２０を加え、生じた沈澱
をＦ取した。ＭｅＯｌ−ｆ −ＦＪｔ２０から再沈澱さ
せて、目的物Ｃ２８：１１３４６．９をイ４すた。この
生成物Ｖ′ｉ溶媒系２におけるＴ Ｌ Ｃでは２スポツ
トを示した。これは山Ｓの側鎖保護基であるＴｏｓ基が
脱離しないものが含有するからであるが、これ以上精製
することなく次の反応に用いた。On the other hand, B OC-His(ros)-0)I eDCH
70.1 g (12 equivalents) of Al to 1.51 g of Ac0Et
1 K suspended in 500 ml of IN sulfuric acid. Wash with water,
The mixture was dried over anhydrous sulfuric acid and concentrated under reduced pressure. The obtained oil +g was dissolved in 200 ml of DM F, and the above i) MF bath solution was added. This [HOB'r 38.
Add 9 g (1,2 equivalents) and cool to 0°C. WSCD 5
2.7mi (1.2 hours) was added and stirred overnight at room temperature. The reaction solution was reduced in gold by IiEm, and the resulting oil was converted into Ac.
After dissolving 0 Et 1.513 K, it was washed three times each with 50% sodium bicarbonate solution and water. After drying the carbon layer with anhydrous sodium sulfate, it was concentrated under reduced pressure, and Et20 was added directly to the residue, and the resulting precipitate was collected as F. The target product C28:11346.9 was obtained by reprecipitation from MeOl-f-FJt20. TLC of this product V'i in solvent system 2 showed 2 spots. This is because the Tos group, which is the side chain protecting group of YamaS, is contained, but it was used in the next reaction without further purification.
３０）、ＰＦ （９−１２） ； ＢＯＣ−Ｈｉｓ−Ａ
ｓｎ−Ｌｅｕ −Ｇｌｙ−ＯＨ［２９：ＩＩ［：２８］
２７．７ ｇを〜ｆｅＯＨ２００ｍｌ！ Ｋ溶かし、
これに少量の水で湿めした１０％Ｐｄ −Ｃ粉末５ｇを
加え、室温で撹拌下３時間水系添加した。反応後、析出
した結晶をＤ ｔｖｌ Ｆを加えて浴かした後、濾過し
た。ｅ′ｔｊ、を減圧凝縮し、残渣にＥＬ２０ｆ：カロ
えて結晶化させて目的物１：２９） １９．９．９を得
た。30), PF (9-12); BOC-His-A
sn-Leu-Gly-OH[29:II[:28]
27.7 g~feOH200ml! Melt K,
To this was added 5 g of 10% Pd-C powder moistened with a small amount of water, and aqueous addition was carried out for 3 hours while stirring at room temperature. After the reaction, the precipitated crystals were bathed in D tvl F, and then filtered. e'tj was condensed under reduced pressure, and the residue was added with EL20f and crystallized to obtain the target product 1:29) 19.9.9.
融点：１８０℃（分解）
３１）、ＰＦ （９−３４Ｔ） ＮＨ２，： ＢＯＣ−
Ｈｉｓ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ −Ｇｌｙ−Ｌｙｓ （Ｚ−Ｃ
ｌ） −Ｈｌｓ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−８ｅｒ Ｑ３ｚｌ
’） −ｊＶｉｅｔ −Ｇｌｕ （０Ｂｚｌ）−Ａｒｇ
（Ｔｏｓ） −Ｖａｌ−Ｇｌｕ （０Ｂｚｌ ） −
Ｔｒｐ −Ｌｅｕ−Ａ ｒ ｇσｏｓ） −Ｌｙｓ（Ｚ
−ＣＡ）−Ｌｙｓ（Ｚ−ＣＡ）−Ｌｅｕ−Ｇｉｎ−Ａｓ
ｐ（ＯＢｚｌ ）−Ｖａｌ −Ｈｌｓ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ
（Ｂｚｌ −Ｃ４） ＮＨ，、Ｃ３０）［２９］ １
．０８ ｇを乾燥ＤＭＦ５０ｍｌＫ溶かしこれにｄＯＢ
ＴＯ，２７，！Ｖおよび実施例ＩＫｉｊ己賊の〔２６，
］ ４．１６ ｇを加え、次いで０℃に冷却下ＷＳＣＤ
０．３７ ｍｌを加えた後、室温で一夜撹拌した。反
応後、減圧下でＤＭＦを留去し、残渣に１Ｍ酢酸をノＪ
ｌえ、セ１出した結晶をＰ取し真空載録して目的物［：
３０］ ４．７９を得た。Melting point: 180°C (decomposition) 31), PF (9-34T) NH2,: BOC-
His-Asn-Leu-Gly-Lys (Z-C
l) -Hls-Leu-Asn-8er Q3zl
') -jViet -Glu (0Bzl) -Arg
(Tos) -Val-Glu (0Bzl) -
Trp -Leu-A r gσos) -Lys(Z
-CA)-Lys(Z-CA)-Leu-Gin-As
p(OBzl)-Val-Hls-Asn-Tyr
(Bzl -C4) NH,,C30) [29] 1
．． Dissolve 08g in dry DMF50mlK and add dOB to this.
TO, 27,! V and Example IKij Self-Thief [26,
] Add 4.16 g of WSCD and then cool to 0 °C.
After adding 0.37 ml, the mixture was stirred at room temperature overnight. After the reaction, DMF was distilled off under reduced pressure, and 1M acetic acid was added to the residue.
1. Take the crystal that came out and record it in vacuum to obtain the target [:
30] 4.79 was obtained.
３２）、ＣＴｙｒ３４］ ｈ−ＰＴＨ（９−３４） ｌ
”Ｊｆ（２［３０〕１．４２ ｇ （０，３ｍ モル）
にアニソール３ｍｌ、Ｅｊ）Ｔ ０．３ｍｌ！ＸＭｅｔ
１８０ｒＩＱおよび＋ＶＩｅ２Ｓ ３ ｍｌを加え、
これに０℃に冷却下無水ｔ（Ｆ ３０ ｍｌを加え、１
時間撹拌した。反応後、減圧下ｆ（Ｆｔｌ−留去し、残
渣ＫＥｔ２０を加え、生じた沈澱物を戸数した。これを
ＩＭ酢酸５０ｍ１ＶＣ溶かし、ダウエックス１×２（ア
セテート型）のカラム（２Ｘ ３６ｃｍ） ｌｃチャー
ジし、１ＩＶＩ酢酸で溶出した。ニンヒドリン・パウリ
反応陽性区分を梁めて凍結乾燥して凍結乾燥品１．１
、Ｖを得た。こ八をできるだけ少量■ＩＭ酢酸に溶かし
、これを０．０５ ｒ■Ａ ｃ ＯＮＨ４水溶液（ｐＨ
５，１）で平衡化したカルボキシメチルセルロースのカ
ラム（２，５Ｘ ３８ｍ）にチャージし、０、０５１Ｖ
ｉＡｃＯＮｆ（４水溶液（ｐＨ５，１）から０．４ Ｍ
Ａ ＣＯＮＨ４水溶液（ｐｆ（６，０）各６００ｍ１を
用いる連続濃度勾配法により溶出した。溶出液を８ｍ１
．づつ分画し、２８０ｎｍの吸光度で確認し、３３〜５
３本目のフラクションＣ，，５４〜７９本目のフラクシ
ョンＣ２，８０〜１０９本目のフラクションＣ３および
１１Ｏ〜１３０本目のフラクションＣ４を各々凍結乾燥
して乾燥品Ｃ１２１０１ｎｙ、Ｃ２２３Ｑ １１９、Ｃ
３２７０ノｎ９およびＣ４５０ｍｇを得た。32), CTyr34] h-PTH(9-34) l
"Jf (2 [30] 1.42 g (0.3 m mol)
3ml of anisole, 0.3ml of Ej)T! XMet
Add 3 ml of 180rIQ and +VIe2S,
Add 30 ml of anhydrous T(F) to this while cooling at 0°C, and add 1
Stir for hours. After the reaction, Ftl was distilled off under reduced pressure, the residue KEt20 was added, and the resulting precipitate was collected. This was dissolved in 50 ml of IM acetic acid in 1 VC, and a DOWEX 1 x 2 (acetate type) column (2 x 36 cm) was charged with LC. It was eluted with 1IVI acetic acid.The ninhydrin-Pauli reaction positive section was lyophilized to obtain lyophilized product 1.1.
, we obtained V. Dissolve Kohachi in as little amount as possible in IM acetic acid, and add this to 0.05 rA c ONH4 aqueous solution (pH
Charge a carboxymethyl cellulose column (2,5X 38m) equilibrated with 5,1) and apply 0.051V.
iAcONf (0.4 M from 4 aqueous solution (pH 5,1)
A CONH4 aqueous solution (pf (6,0)) was eluted by continuous concentration gradient method using 600 ml each.
．． It was fractionated and confirmed by absorbance at 280 nm.
The third fraction C, the 54th to 79th fractions C2, the 80th to 109th fractions C3, and the 110th to 130th fractions C4 were each freeze-dried to produce dried products C12101ny, C223Q 119, C.
3270 nonn9 and C450 mg were obtained.
Ｃ３をできるだけ少量の０．１ Ｍ酢酸に浴かしセファ
デックスＧ−２５のカラム（３，５Ｘ １１５ｃＴｎ）
にチャージし、０．１Ｍ酢酸で溶出した。溶出液をｌＱ
ｍｌづつ分画し、４０〜６７本目のフラクションＣ３Ｇ
を集めて凍結乾燥して乾燥品２６０ ｍ９を得た。これ
をできるだけ少量のブタノールービリンンー酢酸−０，
６Ｍ Ａｃ０ＮＨ４水浴液（５：３：０１：１１）の混
合船媒の上層液げ浴かし、これをセファデックスＧ−５
０のカラム（３Ｘｌ１５ｃｍ）にチャージし、上記上層
液で浴出する分配クロマトグラフィーを行った。溶出液
を９１ｎｅづつ分画し、Ｆｏｌｉｎ −Ｌｏｗｒｙ法に
よシ確認し、２３〜６９本目のフラクションＣ３ＧＰ１
．７０−１１０本月のフラクション０３ＧＰ２および１
１１〜１３９本目のフラクションＣ３ＧＰ３を集めて各
々減圧凝縮してＣ３ＧＰ。Bath C3 in as little amount of 0.1 M acetic acid as possible and apply it to a Sephadex G-25 column (3.5X 115cTn).
and eluted with 0.1M acetic acid. The eluate is lQ
Fractionate by ml, 40th to 67th fraction C3G
were collected and freeze-dried to obtain 260 m9 of dried product. Add as much of this as possible to butanol rubirin-acetic acid-0,
The upper layer of the mixed medium of 6M Ac0NH4 water bath liquid (5:3:01:11) was poured into a bath, and this was mixed with Sephadex G-5.
Partition chromatography was performed by charging a 0 column (3Xl 15 cm) and bathing with the above upper layer liquid. The eluate was fractionated into 91ne units and confirmed by the Folin-Lowry method, and the 23rd to 69th fractions were C3GP1.
．． 70-110 Monthly fraction 03GP2 and 1
The 11th to 139th fractions C3GP3 are collected and each is condensed under reduced pressure to form C3GP.
１８０ ｍ９、Ｃ３ＧＰ２２８０ ｒｎｇおよびＣ３Ｇ
Ｐ３４０ ｍｇを得た。Ｃ３ＧＰ２をできるだけ少量の
Ｏ，Ｉ Ｍ酢酸に溶かし、これをセファデックスＧ−２
５のカラム（３，５Ｘ ｌ ｌ ５ｃｒｎ）にチャージ
し、ｏ、ｔＭｍ酸で浴出した。溶出液を１０ｍ１づつ分
画し、２８０ ｎ ｍの吸光度で確認し、４５〜６４本
目のフラクションＣ３ＧＰ２Ｇ ｋ 東めて凍結乾燥し
て［： Ｔｙｒ” 〕ｈ −ｐＴＨ（９−３４） ｉ”
ＪＨ２を得た。収量８５１％ＩＴＬＣ；Ｉ％ｆ、ｆ＝０
．３３、Ｒｆ１□＝０４９ＨＰＬＣ；１７．００分
アミノ酸分析； Ａｓｐ ４．１１ （４）、５ｅｔ０
．８８ （１）、Ｇｌｕ ３．０１ （３）、Ｇｌｙ
１．１４ （１）、Ｖａｌ ］、、 ７９（２）、 Ｍ
ｅｔ Ｏ，９７（１）、Ｌｅｕ４．００ （４）、Ｔｙ
ｒＯ，８２（１）、Ｌｙｓ ２．９’６ （３）、出ｓ
２．６５ （３）、Ａｒｇ ２．０３ （２）、Ｔｒ
ｐ ０．３４ （１）実施例 ３
ＣＴｙｒ”］ ｈ−ＰＴＨ（８−３４） Ｎｆ（２：Ｈ
−Ｍｅｔ −１（ｉｓ −Ａｓｎ −Ｌｅｕ−Ｇｌｙ
−Ｌｙｓ −Ｈｌｓ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−８ｅｒ −Ｍｅ
ｔ−Ｇｌｕ−ｋｒｇ−Ｖａｌ −Ｇｌｕ−Ｔｒｐ −Ｌ
ｅｕ −Ａｒｇ−Ｌｙｓ −Ｌｙｓ−Ｌｅｕ −’Ｇｌ
ｎ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｈｉｓ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ −Ｎｉ
２
３３）、ＰＦ （８−１２） ： ＢＯＣ−Ｍｅｔ−Ｈ
ｉｓ−Ａｓｎ −Ｌｅｕ −Ｇｌｙ −ＯＨ［３１）実
施例２に記載の［’２９．］ ｌ ２． ＯＬ ｇを乾
燥したＣｔ（２Ｃ／２に溶かし、これに０℃に冷却下Ｔ
Ｆ Ａ ５０ｍ１を加え、室温で４０分間撹拌した。180 m9, C3GP2280 rng and C3G
P340 mg was obtained. Dissolve C3GP2 in as little O,IM acetic acid as possible and add it to Sephadex G-2.
5 crn) and bathed with o, tMm acid. The eluate was fractionated into 10ml portions, confirmed by absorbance at 280 nm, and the 45th to 64th fractions were lyophilized to yield C3GP2Gk[:Tyr"]h-pTH(9-34)i".
I got JH2. Yield 851% ITLC; I%f, f=0
．． 33, Rf1□=049HPLC; 17.00 min amino acid analysis; Asp 4.11 (4), 5et0
．． 88 (1), Glu 3.01 (3), Gly
1.14 (1), Val ], 79 (2), M
et O, 97 (1), Leu4.00 (4), Ty
rO, 82 (1), Lys 2.9'6 (3), Outs
2.65 (3), Arg 2.03 (2), Tr
p 0.34 (1) Example 3 CTyr”] h-PTH(8-34) Nf(2:H
-Met -1(is -Asn -Leu-Gly
-Lys -Hls-Leu-Asn-8er -Me
t-Glu-krg-Val-Glu-Trp-L
eu -Arg-Lys -Lys-Leu -'Gl
n-Asp-Val-His-Asn-Tyr-Ni
2 33), PF (8-12): BOC-Met-H
is-Asn-Leu-Gly-OH [31) ['29. ] l 2. Dissolve g of OL in dry Ct (2C/2) and add T to this while cooling to 0℃.
50 ml of F A was added and stirred at room temperature for 40 minutes.
反応後、ＣＨ２Ｃｌ２およびＴ Ｆ Ａを減圧下で留去
し、残渣にＥｔ ２０を加え、析出した沈澱物を戸数し
、減圧乾燥した。この沈澱物を乾燥ＤＭＦ１２０ｍｇに
溶かし、これに０℃に冷却下Ｎ Ｍ Ｍを加えてｐｉ（
７にし、ＢＯＣ−Ｍｅｔ −Ｏ８Ｕ ９．２７９および
ＨＯ１３ＴＯ３６Ｉを乾燥ＤＭＦ８０ｍｌに溶かした溶
液を加えた後、Ｎ Ｍ Ｍ ２．９ ｍｌを加え、室温
で一夜撹拌した。反応後、ＤＭＦを減圧下で留去し、残
渣にＥｔ２０を加えて処理し、傾斜法により分離する操
作を２回行った後、Ａｃ０Ｅｔを少量加えて結晶化させ
た。この結晶を戸数し、減圧乾燥した後、ＭｅＯＨ−Ｅ
ｔ ２０で２回再結晶化して目的物〔３１〕を得た。収
量１６７９
３４）、Ｐ Ｆ （８−３４Ｔ） Ｎｉ２： ＢＯＣ＝
ＩＶｉｅｔ −１（ｉｓ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌ
ｙｓ（Ｚ−Ｃ４）−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−８ｅｒ（
Ｂｚｌ ） −１Ｖｉｅｔ −Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ａ
ｒｇ （Ｔｏｓ） −Ｖａｌ −Ｇｌｕ （０Ｂｚｌ）
−Ｔｒｐ −Ｌｅｕ−ＡｒｇＣＩ’ｏｓ） −Ｌｙｓ
（Ｚ−Ｃ＃）−Ｌｙｓ（Ｚ−Ｃｄ）−Ｌｅｕ −Ｇｉ
ｎ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ ） −Ｖａｌ −Ｈｉｓ −Ａ
ｓｎ −Ｔｙｒ （Ｂｚｌ −ＣＩＪ２） −Ｎｉ２［
：３２．ＩＩ［：３１］ １．３４．９を乾燥ＤｉＶＩ
Ｆ ２０ ｍ１３に溶かし、これにＨＯＢＴＯ，２７
Ｆ、実施例１に記載の〔２６〕４１６ｇおよび乾燥Ｄ
Ｍ Ｆ ３０ ｍｌを加え、次いで０℃に冷却下Ｗ Ｓ
ＣＤ Ｏ，３７７ｎｌを加え、室温で一夜撹拌した。After the reaction, CH2Cl2 and TFA were distilled off under reduced pressure, Et20 was added to the residue, and the precipitate was collected and dried under reduced pressure. This precipitate was dissolved in 120 mg of dry DMF, and NMM was added to it while cooling at 0°C.
After adding a solution of 9.279 BOC-Met-O8U and HO13TO36I in 80 ml of dry DMF, 2.9 ml of NMM was added, and the mixture was stirred at room temperature overnight. After the reaction, DMF was distilled off under reduced pressure, the residue was treated with Et20, separated by a decanting method twice, and then a small amount of Ac0Et was added for crystallization. After drying the crystals under reduced pressure, MeOH-E
Recrystallization was performed twice at t 20 to obtain the desired product [31]. Yield 1679 34), P F (8-34T) Ni2: BOC=
IViet-1(is-Asn-Leu-Gly-L
ys(Z-C4)-His-Leu-Asn-8er(
Bzl ) -1Viet -Glu(OBzl) -A
rg (Tos) -Val -Glu (0Bzl)
-Trp -Leu-ArgCI'os) -Lys
(Z-C#)-Lys(Z-Cd)-Leu-Gi
n-Asp(OBzl)-Val-His-A
sn -Tyr (Bzl -CIJ2) -Ni2[
:32. II[:31] 1.34.9 Dry DiVI
Dissolve in 20 m13 of F and add HOBTO, 27
F, 416 g of [26] described in Example 1 and dry D
Add 30 ml of MF and then cool to 0°C.
CDO, 377 nl was added and stirred at room temperature overnight.
反応後、減圧下でＤＭｂ″を留去し、残渣に１Ｍ酢酸を
加えて処理し、傾斜法により分離する操作を２回行った
後、再び１Ｍ酢酸を加えて結晶化させ、Ｐ取し、減圧乾
燥して目的物〔３２〕３６４ｇを得だ。After the reaction, DMb'' was distilled off under reduced pressure, the residue was treated with 1M acetic acid, separated by a decanting method twice, and then 1M acetic acid was added again to crystallize, P was recovered, Drying under reduced pressure yielded 364 g of the target product [32].
３５）、ＣＴｙｒ３４〕ｈ−ＰＴｒ（（８−３４） Ｎ
ｉ２［３２：］ １．４６ ｇ （０，３ｍモル）Ｖこ
アニソール３７ｎ’％ ＥＤＴｏ、３ｍｌＸＭｅｔ １
８０”９およびＭｅ２Ｓ３ｍｌを加え、これに０℃に冷
却下無水ｔ−Ｉ Ｆ ３０ ｍｅを加え、１時間撹拌し
た。反応後、Ｍ、川下でｉ（Ｆを留去し、残渣にＥｔ
２０を加え、生じた沈澱物をＦ取した。これをＩＭ酢′
、＄５０ｍ１に溶解し、ダウエックスＩＸ２ （アセテ
ート型）のカラム（２×４０ｃｒｎ）ＶＣチャージし、
ｌ ＬｖＩ酢敏で浴出した。ニンヒドリン・パクリ反応
陽性区分を集めて凍結乾燥して乾燥品１１８ｇを得た。35), CTyr34]h-PTr((8-34) N
i2 [32:] 1.46 g (0.3 mmol) V-anisole 37n'% EDTo, 3mlXMet 1
80"9 and 3 ml of Me2S were added thereto, and anhydrous t-IF 30 me was added thereto while cooling at 0°C, followed by stirring for 1 hour. After the reaction, i(F was distilled off downstream of M, and Et was added to the residue.
20 was added, and the resulting precipitate was collected as F. IM vinegar'
, dissolved in $50ml and charged with VC to a DOWEX IX2 (acetate type) column (2 x 40crn).
I took a bath with LvI vinegar. The sections positive for ninhydrin plagiarism reaction were collected and freeze-dried to obtain 118 g of a dried product.
これをできるだけ少量の１Ｍ酢酸に溶かし、これを０．
０５ ＭＡｃＯｉ”Ｊｔ（。Dissolve this in as little amount of 1M acetic acid as possible and add 0.
05 MAcOi”Jt(.
水溶液（ｐＨ５，１）で平衡化したカルボキンメチルセ
ルロースのカラム（２，５Ｘ３７ｃｍ）にチャージし、
０．０５ ＭＡｃＯＮＨ４水溶液（ｐＨ５，、ｔ ）か
ら０４ＭＡ ｃ ＯＮＨ、水浴液（ｐＨ６，０）各６０
０ ｍｅを用いる連続濃度勾配法により溶出し、きらに
０．０４ ＭＡｃＯＮＨ，（ｐＨ６，０） ３００ｍｌ
で溶出した。ぐ容出液を８ｍｌづつ分画し、２８０ｎｍ
の吸光ＩＫで確認し、３０〜４２本目のフラクションＣ
１，４３〜８４本目のフラクションＣ２および８５〜１
４０本目のフラクションＣ３を果めで各々凍結乾燥して
乾燥品Ｃ４、Ｃ２およびＣ３を得た。Ｃ３をできるたけ
少量の１１Ｖ１酢酸だ溶かし、セファデックスＬ Ｉ−
Ｉ −２０のカラム（４，５Ｘ ｌ ３７ａｎ）にチャ
ージし、１１■酢ｒ波で溶出した。浴出液を１０ｍｇづ
つ分画し、２８０ｎｍの吸光度で確認し、４２〜５８本
目のフラクションＣ３Ｌヲ集めて凍結乾燥して乾燥品４
３０ ｍｇを得た。これをできるだけ少量のブタノルー
ピリジン−酢酸−０，６ＭＡｃＯＮＨ，水浴液（５：３
：０．１：１１）の混合溶媒の上層液に溶かし、これを
セファテックスＧ−５０のカラム（３×１１６ｃｒｎ）
にチャージし、上記溶媒の上層液で溶出８０本口のフラ
クションＣ３ＬＰ、 ％ ８１〜１３０本目のフラクシ
ョンＣ３ＬＰ２および１３１〜１６０本目のフラクショ
ンＣ３ＬＰ３を集めて各々減圧濃縮してＣ３ＬＰ１３
Ｑ Ｏｍ？、Ｃ３ＬＰ２１４０ ｍ９およびＣ３ＬＰ３
４０ ｍ９を傅た。Ｃ３ＬＩ）２をできるだけ少量の０
．１Ｍ酢酸に溶かし、これをセファテックスＧ−２５の
カラム（３Ｘｌ１５ｔ７ｎ）にチャージし、０．１ Ｍ
酢ｒ浚で溶出した。溶出液をＩＱｍｅづつ分画し、２８
０ｍｍの吸光度で確認し、２９〜４８本目のフラクショ
ンＣ３ＬＰ２Ｇを集めて凍結乾燥して〔Ｔｙｒ３４〕ｈ
−Ｐ Ｔ Ｈ（８−３４） ＮＦ２を得た。収量１１９
〜。Charged to a column (2.5 x 37 cm) of carboquine methylcellulose equilibrated with an aqueous solution (pH 5.1),
0.05 MAcONH4 aqueous solution (pH 5,,t) to 04MAcONH, water bath solution (pH 6,0) 60 each
Elute by continuous concentration gradient method using 0.0 me and 300 ml of 0.04 MAcONH, (pH 6,0).
It was eluted. The eluate was fractionated into 8 ml portions and analyzed at 280 nm.
Confirm with absorption IK, 30th to 42nd fraction C
1, 43rd-84th fraction C2 and 85-1
The 40th fraction C3 was freeze-dried at the end to obtain dried products C4, C2 and C3. Dissolve C3 in as little 11V1 acetic acid as possible and add Sephadex L I-
It was charged to a column of I-20 (4.5X l 37an) and eluted with 11 ml of vinegar r-wave. The bath solution was fractionated into 10 mg portions, confirmed by absorbance at 280 nm, and the 42nd to 58th fractions C3L were collected and lyophilized to obtain dried product 4.
30 mg was obtained. Add this to as small a amount as possible of butanol-pyridine-acetic acid-0,6 MAcONH, water bath solution (5:3
:0.1:11) in the upper layer of a mixed solvent, and add this to a Sephatex G-50 column (3 x 116 crn).
80 fractions C3LP, % 81-130 fractions C3LP2 and 131-160 fractions C3LP3 were collected and concentrated under reduced pressure to obtain C3LP13.
Q Om? , C3LP2140 m9 and C3LP3
Achieved 40 m9. C3LI)2 with as little 0 as possible
．． Dissolve in 1M acetic acid, charge this to a Sephatex G-25 column (3Xl15t7n), and add 0.1M
It was eluted with vinegar dredging. The eluate was fractionated by IQme, and 28
Confirmed by absorbance at 0 mm, 29th to 48th fractions C3LP2G were collected and freeze-dried for [Tyr34] h.
-PTH(8-34)NF2 was obtained. Yield 119
~.
ＴＬＣ； Ｒｆ、、＝０．４０、Ｒｆ□２＝０．７４１
（ＰＬＣ；１７．８０分
アミノ酸分析； Ａｓｐ ４．０４ （４）、Ｓｅｒ
０．９４ （１）、Ｇｌｕ ３．０２ （３）、Ｇ１７
１．１３ （、ｌ）、Ｖａｌ ］、 ７６（２）、」′
ｖ１ｅｔ ２．０８ （２）、Ｌｅｕ ４．００（４）
、Ｔｙｒ ０．９９ （１）、Ｌｙｓ ３．０７ （３
）、Ｈｉｓ ２．７８ （３）、Ａｒｇ ２．０３ （
２）、Ｔｒｐ ０．９６ （１）
実施例 ４
ＣＴｙｒ”］ ｈ−ＰＴｆ（（７−３４） ＮＦ２：Ｈ
−Ｌｅｕ −Ｍｅｔ−１−Ｉｉｓ−ＡＳｎ−Ｌｅｕ−Ｇ
ｌｙ −Ｌｙｓ−Ｈｉｓ −Ｌｅｕ −Ａｓｎ−’Ｓｅ
ｒ −Ｍｅｔ−Ｑｌｕ−ｋｒｇ−Ｖａｌ −Ｇｌｕ−Ｔ
ｒｐ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ −Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｇ
ｌｎ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｈｉｓ−Ａｓｎ −Ｔｙｒ −
ＮＨ２
３６）、ＰＦ （７−１２） ： ＢＯＣ−Ｌｅｕ −
Ａ４ｅｔ −−１（ｉｓ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｏ
ＨＣ３３’：］実施例３に記載の［：３Ｄ８．０．９を
乾燥ＣＨ２Ｃｌ２に浴かし、これに０℃に冷却下ＴＦＡ
３２ｍ６を加え、室温で１時間撹拌した。反応後、ＣＨ
２ＣＡ２およびＴＦＡを減圧下で留去し、残渣にＥｔ２
０を加え、析出した結晶を炉取し、減圧乾燥した。この
結晶を乾燥ＤＭＦ６０ｍｌＫ溶かし、これに０℃に冷却
下ＮＭ ｉｖＩ ｋ加えてｐＩ（７にし、Ｂ ＯＣ−Ｌ
ｅｕ −０８０４，６減圧下で留去し、残渣にＭｅＯＨ
およびＥｔ２０を加えて処理し、傾斜法により分離する
操作を２回行った後、再びＥｔ ２０を力ｌえ、祷られ
た結晶をｐ取し、減圧乾燥して目的物〔３３〕を得た。TLC; Rf, , = 0.40, Rf□2 = 0.741
(PLC; 17.80 min amino acid analysis; Asp 4.04 (4), Ser
0.94 (1), Glu 3.02 (3), G17
1.13 (,l), Val], 76(2),'''
v1et 2.08 (2), Leu 4.00 (4)
, Tyr 0.99 (1), Lys 3.07 (3
), His 2.78 (3), Arg 2.03 (
2), Trp 0.96 (1) Example 4 CTyr”] h-PTf((7-34) NF2:H
-Leu -Met-1-Iis-ASn-Leu-G
ly -Lys-His -Leu -Asn-'Se
r-Met-Qlu-krg-Val-Glu-T
rp-Leu-Arg-Lys-Lys-Leu-G
ln-Asp-Val-His-Asn-Tyr-
NH2 36), PF (7-12): BOC-Leu −
A4et--1(is-Asn-Leu-Gly-O
HC33': ] [:3D8.0.9 described in Example 3 was bathed in dry CH2Cl2 and added with TFA while cooling to 0°C.
32 m6 was added and stirred at room temperature for 1 hour. After the reaction, CH
2CA2 and TFA were distilled off under reduced pressure, and the residue was mixed with Et2.
0 was added thereto, and the precipitated crystals were collected in a furnace and dried under reduced pressure. The crystals were dissolved in 60ml of dry DMF, and NMivIk was added to this while cooling at 0°C to make pI (7), and BOC-L
eu -0804,6 was distilled off under reduced pressure, and the residue was mixed with MeOH.
After adding and treating with Et20 and separating by decanting twice, Et20 was applied again, the desired crystals were collected and dried under reduced pressure to obtain the target product [33]. .
収量１１．６９．Ｆ。Yield 11.69. F.
３７）、ＰＦ （７−３４Ｔ） ＮＦ２： ＢＯＣ−Ｌ
ｅｕ −Ｍｅｔ −Ｈｉ ５−Ａｓｎ−Ｌｅｕ −Ｇｌ
ｙ −Ｌｙｓ （Ｚ −Ｃ１ｌ ）Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ａ
ｓｎ−８ｅｔ （Ｂｚｌ ）−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ（ＯＢｚ
ｌ） −Ａｒｇ（Ｔｏｓ）−Ｖａｌ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ
） −Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−ＡｒｇＣｒｏｓ）−Ｌｙｓ（Ｚ
−Ｃｌ）−Ｌｙｓ（Ｚ−Ｃｌ）−Ｌｅｕ−Ｇｉｎ−Ａｓ
ｐ（ＯＢｚｌ） −Ｖａｌ −Ｈｌｓ−Ａｓｎ −Ｔｙ
ｒ （Ｂｚｌ −Ｃｌ２） −ＮＦ２［３４：］［３３
：ｌ １．５７ｇ （２ｍモル）、実施例１ｖｃｇｔ載
の［：２６］ ４．２２１ （ｌ ｍモル）およびＨＯ
Ｂ’ｒ ０．２７ ｇ（２ｍモル）全乾燥ＤＩ！５Ｆ５
０ｍｌに溶かし、これに０℃に冷却下ＷＳＣＤ０．３７
ｍ１（２ｒｒ＋モル）を加えた後、室温で３日間撹拌し
た。反応後、ＤＭＦを減圧下で′ｄ去し、残漬にＩＭ酢
取を加え、析出した沈澱物をＰ取し、水洗、減圧乾燥し
て目的物〔３４〕を得た。収量５．１２ｇ。37), PF (7-34T) NF2: BOC-L
eu -Met -Hi 5-Asn-Leu -Gl
y-Lys (Z-C1l)His-Leu-A
sn-8et (Bzl)-Met-Glu(OBz
l) -Arg(Tos)-Val-Glu(OBzl
) -Trp-Leu-ArgCros)-Lys(Z
-Cl)-Lys(Z-Cl)-Leu-Gin-As
p(OBzl) -Val -Hls-Asn -Ty
r (Bzl -Cl2) -NF2[34:][33
:l 1.57 g (2 mmol), [:26] 4.221 (l mmol) from Example 1vcgt and HO
B'r 0.27 g (2 mmol) completely dry DI! 5F5
Dissolve in 0ml and add WSCD0.37 to this while cooling to 0℃.
After adding m1 (2rr+mol), the mixture was stirred at room temperature for 3 days. After the reaction, DMF was removed under reduced pressure, IM vinegar was added to the residue, and the precipitate was collected with P, washed with water, and dried under reduced pressure to obtain the target product [34]. Yield: 5.12g.
３８）、ＣＴｙｒ”］ ｈ−ＰＴｔ（（７−３４） Ｎ
１（２〔３４１１，４９ｇ（０，３ｍモル）にアニソー
ル３ｍｌ。38), CTyr”] h-PTt((7-34) N
1 (2 [3411.49 g (0.3 mmol) and 3 ml of anisole.
ＥＤＴｏ、３＋＋＋ｌ、 Ｍｅｔ １８０ｍ９およびＭ
ｅ２Ｓ３ ｍｌを加え、これＫＯＣＫ冷却下無水ＨＦ３
０ｍ１を加え、１時間撹拌した。反応後、減圧下でＨＦ
’ｚ留去し、残渣にＥｔ２０を加え、生じた沈澱物ｆ：
Ｆ取した。これをＬＭ酢１ｓｏｍｌＶｃ溶かし、ダウエ
ックス１×２（アセテート型）のカラム（２Ｘ４０ｃｒ
＋＋）にチャージし、１Ｍ酢酸で溶出した。ニンヒドリ
ン・パクリ反応陽性区分を集めて凍結乾燥して乾燥品１
．２２．９を得た。これをできるだけ少量のｌ ｉＶＩ
酢酸に溶かし、これｋ ０．０５ ｔＶｆ Ａｃ０ＮＨ
４水溶液（ｐＨ５、１）で平衡化したカルボキンメチル
セルロースのカラム（２Ｘ４０Ｌ：ｎｌ）にチャージし
、０．０．５ ＭＡ ｃ ＯＮＨ４水溶液（ｐＨ５，１
）から０．４ ＭＡｃＯＮｆ（、水溶液（ｐＨ６，０）
も６０（Ｎ＋＋Ｊを用する連続濃度勾配法により溶出し
、さらに０．４ ＭＡｃＱＮＨ４水浴液（ｐｉ（６，０
）３００ｍ、／で溶出した。？容出液を１２ｍ１づつ分
画し、２８０ｍｍの吸光度で確認し、３５〜４３本目の
フラクションＣ８，５５〜７２本目のフラクションＣ２
，７３〜８４本ｆＪのフラクションＣ３および８５〜１
１０本目のフラクションＣ，ｅ集めてく々凍結乾燥して
乾燥品Ｃ１，０２１３０ｍ１７、ｃ３オヨびＣ４２５０
ｍｇを４た。Ｃ４をできるだけ少量の１Ｍ酢酸に溶かし
、セファデックスＧ〜２５のカラｌ、（３Ｘ Ｌ １６
ｃ＋＊）にチャージし、ｌ Ｍ酢酸で溶出した。溶出液
をＬＯｍｌつつ分画し、２８０ｎｎｎの吸光間でイ面誌
し ５１〜６６本目のフラクションＣ，Ｇを集めて凍結
乾燥して乾燥品Ｃ，Ｇ ｌ ８０Ｔｎ９を得だ。これを
できるだけ少量のブタノルルーピリジン−ｈ ｍ −０
，６＋ｖＩＡ ｃ ＯＮＨ、水溶液（５：３：０．１：
１１）の混合温媒の上層液に溶がし、これをセファデッ
クスＧ−５０のカラム（２，５Ｘ１１５ ｃｍ ）にチ
ャージし、上記溶媒の上層液で浴出する分配クロマトグ
ラフィーを行った。浴出１色を９ｍｌづつ分画し、Ｆｏ
ｌｉｎ −Ｌｏｗｒｙ法により確認し、２１〜３９本目
’７） ７５り／ヨ：ｙ Ｃ４ＧＰ１．４０〜５８本目
のフラクション０４ＧＰ２オよび５９〜７５本目のフラ
クションｃ４ＧＰ３を巣め各々減ＩＩＩ：磯月伯１−て
乾燥品Ｃ，ＧＰ、、Ｃ４ＧＰ２オよびＣ，ＧＰ３を得た
。０４ＧＰ２をできるだけ少量の１１４酢酸に浴かし、
これシ をセファデックスＧ−２５のカラム（３ＸＬＯ
Ｏｃ１ｎ）にチャージし、１Ｍ酢酸で浴出した。溶出液
を１２ｍ１ｉづつ分画し、２８０ｎｍの吸光度で確認し
、３２〜４３本１」のフラクションＣ，ＧＰ２Ｇを集め
て凍結乾燥しテＣＴｙｒ３４〕＋１− Ｐ Ｔ ＩＩ
（７−３４）ｌＮｆ（２を得た。収所５０ ｍ９ 。EDTo, 3+++l, Met 180m9 and M
Add e2S3 ml and add anhydrous HF3 under KOCK cooling.
0ml was added and stirred for 1 hour. After the reaction, HF under reduced pressure
'Z was distilled off, Et20 was added to the residue, and the resulting precipitate f:
I got an F. Dissolve this in 1 somlVc of LM vinegar and use a column of Dowex 1x2 (acetate type) (2x40cr).
++) and eluted with 1M acetic acid. Collect the ninhydrin-pakism reaction positive categories and freeze-dry them to produce dried product 1.
．． 22.9 was obtained. Add this in as little amount as possible.
Dissolve in acetic acid, k 0.05 tVf Ac0NH
A column (2 x 40 L: nl) of carboquine methyl cellulose equilibrated with a 0.0.5 MA c ONH4 aqueous solution (pH 5,1) was charged with a 0.0.5 MA c ONH4 aqueous solution (pH 5,1).
) to 0.4 MAcONf(, aqueous solution (pH 6,0)
was eluted by continuous concentration gradient method using 60 (N++
) 300 m, / was eluted. ? The eluate was fractionated into 12 ml portions and confirmed by absorbance at 280 mm.The 35th to 43rd fractions were C8, and the 55th to 72nd fractions were C2.
, 73-84 fJ fractions C3 and 85-1
Collect the 10th fraction C and e and freeze-dry to obtain dried products C1,02130m17, c3 Oyobi C4250
4 mg. Dissolve C4 in as little amount of 1M acetic acid as possible and add Sephadex G~25 color (3X L 16
c+*) and eluted with 1M acetic acid. The eluate was fractionated in LO ml, and the 51st to 66th fractions C and G were collected and lyophilized to obtain dried products C and Gl 80Tn9. Add this to as small a amount as possible of butanol-pyridine-h m -0
, 6+vIA c ONH, aqueous solution (5:3:0.1:
Partition chromatography was carried out by dissolving the mixture in the upper layer of the mixed hot medium in step 11), charging it to a Sephadex G-50 column (2.5 x 115 cm), and bathing with the upper layer of the above solvent. Fractionate 9 ml of each color from the bath, and
Confirmed by the lin-Lowry method, 21st to 39th '7) 75ri/yo:y C4GP1.40 to 58th fraction 04GP2O and 59th to 75th fraction c4GP3 were reduced respectively III: Haku Isozuki 1 - Dried products C, GP, C4GP2 and C, GP3 were obtained. Bath 04GP2 in as little 114 acetic acid as possible,
Column of Sephadex G-25 (3XLO
oc1n) and bathed with 1M acetic acid. The eluate was fractionated into 12 mL portions, confirmed by absorbance at 280 nm, and fractions C and GP2G of 32 to 43 fractions were collected and freeze-dried.
(7-34) lNf(2 was obtained. Yield 50 m9.
ＴＬＣ；Ｒｆ、、＝０４５、Ｒｆ□２＝０．６１ＨＰＬ
Ｃ；１８．６７分
アミノ酸分析： Ａｓｐ ４．０２ （４）、Ｓｅｔ
０．８２ （１）、Ｇｌｕ ３．１１ （３）、Ｇｌｙ
０．９１ （１）、Ｖａｔ １．８４ （２）、１１
ｅｔ １．９５ （２）、Ｌｅｕ ５．００（５）、Ｔ
ｙｒ Ｏ，９６（１）、Ｌｙｓ ３．１３ （，３）、
Ｈｉｓ ２．５７ （３）、Ａｒｇ ２．０８（２）、
Ｔｒｐ ０．９１ （１）
実施例 ５
ＣＴｙｒ”］ ｈ−ＰＴＩ（（５−３４） ＮＨ２；１
（−１１ｅ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−＋Ｖｆｅｔ−１−ｆｉｓ
−Ａｓｎ −Ｌｅｕ −Ｇｌｙ−Ｌｙｓ −Ｈｉ ｓ
−Ｌｅｕ −Ａｓｎ−ＳｅｒＡｓｎ−５ｅｒ−−Ａｒｇ
−Ｖａｌ −Ｇｌｕ −Ｔｒｐ −Ｌｅｕ−Ａｒｇ
−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ −Ｌｅｕ −Ｇｉｎ −Ａｓｐ−Ｖ
ａｔ −８１ｓ −Ａｓｎ −Ｔｙｒ −ＮＨ２３９）
、Ｆ （７） ；ＢＯＣ−Ｌｅｕ −０ＰＡＣＣ３５）
Ｂ ＯＣＬｅｕ ０ｆ（−ｆ（ｚｏ ｌ ｌ ２．２
ｇ （０，４５モル）金Ｄ Ｍ Ｆ″５００ ｍｌに溶
かし、フェヵ／ルプロマイド１ｏ７．ｓ、９（ｔ２当量
）を加え、冷却下Ｅｔ３Ｎ ７５．６ ｍｌ （１，２
当電）を加えて、室温で３時間撹拌した。反応後、Ａｃ
０Ｋ １３．２３ ｇ（０，３当量）を加え、３０分間
撹拌した。減圧下Ｄ ＩｖＩＦを留去し、残渣をＡｃ０
Ｅｔ １７３ Ｋ浴かし、５条重Ｗ水、ＩＮ塩酸、水の
唄で３回づつ洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。TLC; Rf,,=045, Rf□2=0.61HPL
C; 18.67 minutes Amino acid analysis: Asp 4.02 (4), Set
0.82 (1), Glu 3.11 (3), Gly
0.91 (1), Vat 1.84 (2), 11
et 1.95 (2), Leu 5.00 (5), T
yr O,96 (1), Lys 3.13 (,3),
His 2.57 (3), Arg 2.08 (2),
Trp 0.91 (1) Example 5 CTyr”] h-PTI((5-34) NH2;1
(-11e-Gln-Leu-+Vfet-1-fis
-Asn -Leu -Gly-Lys -His
-Leu -Asn-SerAsn-5er--Arg
-Val -Glu -Trp -Leu-Arg
-Lys-Lys -Leu -Gin -Asp-V
at -81s -Asn -Tyr -NH239)
, F (7) ; BOC-Leu -0PACC35)
B OCLeu 0f(-f(zo l l 2.2
g (0.45 mol) of gold D M F'' was dissolved in 500 ml, fecal/lupromide 1o7.s, 9 (t2 equivalent) was added, and under cooling Et3N 75.6 ml (1,2
The mixture was stirred at room temperature for 3 hours. After reaction, Ac
13.23 g (0.3 eq.) of 0K was added and stirred for 30 minutes. D IvIF was distilled off under reduced pressure, and the residue was converted to Ac0
It was washed three times each with Et 173 K bath, 5-line heavy W water, IN hydrochloric acid, and water, and dried over anhydrous sodium sulfate.
Ａｃ０Ｅｔを減圧下躍去し、Ａｃ０Ｅｔ−ヘキサン、Ｅ
ｔ ２０−ヘキサンで書、漬晶化して目的物Ｃ３５〕１
３２．９ ｇ（収率８８６−％）を倚だ。Ac0Et was removed under reduced pressure, Ac0Et-hexane, E
Written with t20-hexane, pickled and crystallized to obtain the target object C35〕1
32.9 g (886-% yield).
Ｔ Ｌ Ｃ； Ｒ，、／’７＝ ０．７６４（））、Ｐ
Ｆ （６−７） ； Ｈｏｅ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ −ＯＰ
ＡＣ−Ｈ２Ｏ［３６）
［３５） ｌ Ｉ Ｏ，０９（０，３３％） ｆＩ：Ｔ
ＦＡ ３００ｍｌに溶かし、室温で２０分間撹拌した故
、諷王下１゛１”Ａ’ｋｖＩ去した。残ｙｉ Ｖｃ Ｅ
ｔ ２０ ヲ刀ｎ Ｌ、％じに沈ｄを戸叡した。得られ
た粉末を１）ｌＡＦ ２００ｍ１Ｋ溶解し、ＮＭＭでｐ
ｆＩ ７に調節した。これにＲＯＢＴ５３．５ｇ （１
，２当量’） 、ＢＯＣ−Ｇｌｎ −０１−１９７５，
９（］、、２当量）を加え、０℃冷却下ＷＳＣＤ７２．
４７ｍｌ （１，２当量）を加えて、室温で一夜撹拌し
た。反応後、減圧下１）１舅Ｆを留去し、残渣をＡｃＯ
，ＦＥｔ ２１ Ｋ溶かし、５チ重曹水、ＩＮ塩酸、水
の順で３！２Ｉづつ洗浄した。有機層と塩酸洗浄の際に
析出した結晶をあわせて、それにベンゼン３０ｍｅを加
えて、減圧濃縮した。残渣１ｃ Ａｃ０Ｅｔ ５００ｍ
／！を加え、加熱溶解後、冷却し、Ｅｔ２０を加えて結
晶化、この操作を２回くり返して、目的物〔３６〕１２
０、５６．９ （収率７６２襲）を得た。T L C; R,, /'7= 0.764()), P
F (6-7); Hoe-Gln-Leu-OP
AC-H2O [36) [35) l IO,09 (0,33%) fI:T
It was dissolved in 300 ml of FA and stirred at room temperature for 20 minutes, so that 1.1"A'kvI was removed. The remaining yi Vc E
t 20 wo sword n L, %jii sank d was tosei. The obtained powder was dissolved in 1) 1AF 200ml 1K and diluted with NMM.
The fI was adjusted to 7. Add to this ROBT53.5g (1
, 2 equivalents'), BOC-Gln-01-1975,
9 (], 2 equivalents) and cooled to WSCD72.
47 ml (1.2 eq.) was added and stirred overnight at room temperature. After the reaction, 1) 1 F was distilled off under reduced pressure, and the residue was dissolved in AcO
, FEt 21 K was dissolved, and washed with 3 to 2 I of water in the following order: 5 I of sodium bicarbonate solution, IN hydrochloric acid, and water. The organic layer and the crystals precipitated during washing with hydrochloric acid were combined, 30 me of benzene was added thereto, and the mixture was concentrated under reduced pressure. Residue 1c Ac0Et 500m
/! was added, dissolved by heating, cooled, and crystallized by adding Et20. This operation was repeated twice to obtain the target product [36]12.
0.56.9 (yield 762 times) was obtained.
融点；１５８〜１６１℃
元素分析ＣＣ２４Ｈ３ρ６Ｎ３・■」２０として〕Ｃ係
Ｎ％ Ｎ％
割其値 ６０，１１ ７，７８ ８．７６測定値 ５９
，９２ ７，５５ ８．８１４１）、ＰＦ （５−７）
； ＢＯＣＩｌｅ −Ｇｉｎ −［：３６］ ｒ ｔ
５．４１ ＜０．２５ｍ）をＴ ＦＡ ３０ Ｏｔｎ
ｅに溶かし、室温で４５分間撹拌した後１、減圧下ＴＦ
Ａを留去した。残渣にＥｔ２０を加え、生じた沈澱をＰ
ｔした。得られた粉末をＤＭＦ３００ｍｌに溶解し、Ｎ
Ｍ Ｍで１）ｉ（７に調節した。これにＨＯＢＴ４０
．５．９（１，２当量） 、Ｂ ＯＣ〜Ｉｌｅ −０Ｈ
６９４，９（１，２当−取）を加え、０℃冷却下ｗｓ’
ｃ。Melting point: 158-161℃ Elemental analysis CC24H3ρ6N3・■ As 20] C N% N% Percentage value 60,11 7,78 8.76 Measured value 59
,92 7,55 8.8141), PF (5-7)
; BOCIle -Gin -[:36] r t
5.41 <0.25m) T FA 30 Otn
After stirring for 45 minutes at room temperature, 1, TF was added under reduced pressure.
A was distilled off. Et20 was added to the residue, and the resulting precipitate was
I did it. The obtained powder was dissolved in 300 ml of DMF, and N
Adjusted to 1) i (7 with M M. To this, HOBT40
．． 5.9 (1,2 equivalents), BOC~Ile-0H
Add 694,9 (1,2 equivalents) and cool at 0°C ws'
c.
５４．９ｍ１（］、２当量）を加えて、室温で撹拌した
。54.9 ml (], 2 equivalents) was added and stirred at room temperature.
３０分後、反応液が固化したので、ＤＩＶＩＰ２００ｍ
ｌを追加して、−夜（Ｘ Ｊ’１４した。反応後、Ｄ＋
１４Ｆを減圧渭去して、残直に５多重曹゛水と氷水を加
え、生じた沈澱をｐ取し、よく水洗した。熱ＭｅＯＨで
２度懸濁沖過を行なって、目的物［３８］１２４．３ｇ
（収率８５２チ）を得た。After 30 minutes, the reaction solution solidified, so DIVIP200m
- night (X J'14. After reaction, D+
14F was removed under reduced pressure, and to the residue were added 50% sodium bicarbonate water and ice water, and the resulting precipitate was collected and thoroughly washed with water. After carrying out suspension filtration twice with hot MeOH, 124.3 g of the target object [38] was obtained.
(yield: 852 cm).
ＴＬＣ； Ｒｆ３二０．４６
０％ Ｎ％ Ｎ％
計算値 ６１，７３ ８，１２ ９．６０測定値 ６］
、４２ ８，１５ ９．５７４２）、ＰＦ （５−７）
； ＢＯＣ−１１ｅ−Ｇｌｎ −［３８） １２０．
７，９ （０，２１Ｍ）を酢酸８００ ｍｌに溶解して
、亜鉛末３００．？を加え、室温で３時間撹拌した。亜
鉛を戸去し、酢酸を減圧上留去した。残渣にＥｔ２０を
加え、生じた沈澱＊をｐ取した。TLC; Rf32 0.46 0% N% N% Calculated value 61,73 8,12 9.60 Measured value 6]
, 42 8, 15 9.5742), PF (5-7)
; BOC-11e-Gln-[38) 120.
7,9 (0.21M) was dissolved in 800 ml of acetic acid, and 300 ml of zinc powder was added. ? was added and stirred at room temperature for 3 hours. Zinc was removed, and acetic acid was distilled off under reduced pressure. Et20 was added to the residue, and the resulting precipitate* was collected.
ＥｔＯＨ−Ｅｔ２０で３回洗浄して目的物［３Ｆ＋ ８
５．１（収率８５７チ）を得た。The target product [3F+8
5.1 (yield 857 cm) was obtained.
融点；１７８〜１８０℃
ＴＬＣ；Ｎｌ５−Ｃ１６
Ｃ係 Ｎ％ Ｎ％
計算値 ５４．８７ ８．５８ １１．６４測定値 ５
４，６６ ８．８６ １１．６８４３）、１）Ｆ （５
−３４） Ｎｌ２； ＢＯＣ’％１１ｅ 〜Ｇｉｎ−Ｌ
ｅｕ−ＩＶｌｅｔ−Ｈｉｓ −Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ
−Ｌｙｓ （Ｚ −ＣＩＪ ）−ｔ（ｉ ｓ −Ｌｅｕ
−Ａｓｎ−８ｅｒ（Ｂｚｌ ） −＋Ｊｅｔ −Ｇｌ
ｕ （ＯＢｚｌ ） −ＡｒｇＣＴｏｓ ） −Ｖａｌ
−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ ） −’Ｉ’ｒｐ−Ｌｅｕ−Ａ
ｒｇ （’ｆ’ｏｓ）−Ｌｙｓ（Ｚ−Ｃ４）−Ｌｙｓ
（Ｚ−ＣＡ） −Ｌｅｕ −Ｇｌｎ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ
） −Ｖａｌ −ｆ（ｉｓ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ
−ＣＩＪ２） −Ｎｌ２［４０）実施例、３だ記載の
［３２〕１．４６ ｇにスカトール４０ｍ９、Ｍｅ２Ｓ
ｌ ５ ｍｅおよびＥＤＴ］、５ｍｌを加え、これに
０℃に冷却下Ｔ Ｆ Ａ ’４０ ｍｌ！を加えた後、
室温で１時間撹拌した。反応後、減圧下でＴＦＡを留去
し、残渣にＥｔ２０を加え、生じた沈澱物をＰｔした。Melting point: 178-180°C TLC: Nl5-C16 C ratio N% N% Calculated value 54.87 8.58 11.64 Measured value 5
4,66 8.86 11.6843), 1)F (5
-34) Nl2; BOC'%11e ~Gin-L
eu-IVlet-His-Asn-Leu-Gly
-Lys (Z -CIJ)-t(is -Leu
-Asn-8er(Bzl) -+Jet -Gl
u (OBzl) -ArgCTos) -Val
-Glu(OBzl) -'I'rp-Leu-A
rg ('f'os)-Lys(Z-C4)-Lys
(Z-CA) -Leu -Gln-Asp(OBzl
) -Val -f(is-Asn-Tyr(Bzl
-CIJ2) -Nl2 [40) 1.46 g of [32] described in Example 3, 40 m9 of skatole, Me2S
l 5 me and EDT], 5 ml was added thereto, and to this was added 40 ml of TFA' while cooling to 0°C. After adding
Stirred at room temperature for 1 hour. After the reaction, TFA was distilled off under reduced pressure, Et20 was added to the residue, and the resulting precipitate was treated as Pt.
この沈澱物を乾燥Ｄ Ｍ Ｆに浴かし、Ｎ ＭＭでｐＨ
７Ｋ調節した後、［３！Ｊ］ ４２５ｒｎ９（０，９ｍ
モル）およびＨＯＢＴ４２５ｍ９ （０，９ｍモル）
ｆｆ：加えた後、０℃に冷却下ＶＶＳＣＤＯ，ｌ ６５
１１１１ （０９ｍモル）を加え、室温で一夜道拌した
。反応後、減圧下Ｄ Ｍ Ｆを留去し、残、査に０．１
ｉＶＩ酢酸を加え、生じた（ｐ澱物を水洗し、減圧乾
燥して目的物〔４０〕】７５ｇを４／ζ。The precipitate was soaked in dry DMF and adjusted to pH with NMM.
After adjusting 7K, [3! J] 425rn9 (0.9m
mol) and HOBT425m9 (0,9 mmol)
ff: VVSCDO, l under cooling to 0°C after addition 65
1111 (09 mmol) was added and stirred overnight at room temperature. After the reaction, DMF was distilled off under reduced pressure, and the residue was 0.1
iVI Acetic acid was added, and the resulting precipitate was washed with water and dried under reduced pressure to obtain the desired product [40].
４５）、ＣＴｙｒ” ：］ ｈ Ｐ Ｔ ｆ（（５３４
） Ｎｌ２［：４０：］ １．５７ｇ（０，３ｍモル）
にアニソール３ｍｌ、Ｅ Ｄ Ｔ ０．３ ｍｅ、 Ｍ
ｅｔ １８０ ｍ９および１ＶＩｅ２Ｓ ３ ｍｌを加
え、これに０℃にＱ却下無水１−１ Ｆ ３０ ｍｌヶ
加え、０℃で１時間慎拌した。反応波、減圧下でＨＦを
留去し、残渣にＥｔ２０を加え、生じた沈澱＊’をＰｔ
した。これを０１ｇ酢−５ｏｖｔｖｃ浴かし、ダウエッ
クス■×２ （アセテート型）のカラム（２×４０ｃｒ
ｎ）にチャージし、０１Ｍ酢酸で溶出した。45), CTyr":] h P T f ((534
) Nl2[:40:] 1.57g (0.3mmol)
3 ml of anisole, EDT 0.3 me, M
Et 180 m9 and 3 ml of 1VIe2S were added thereto, and 30 ml of anhydrous 1-1 F dissolved in Q was added to this at 0°C, and the mixture was carefully stirred at 0°C for 1 hour. In the reaction wave, HF was distilled off under reduced pressure, Et20 was added to the residue, and the resulting precipitate *'
did. This was soaked in a 01 g vinegar-5 ovtvc bath, and a column of Dowex ■ (acetate type) (2 x 40 cr) was added.
n) and eluted with 01M acetic acid.
ニンヒドリン・パウリ反応陽性区分を集めて凍結乾燥し
て乾燥品を得た。これをできるだけ少量の０、１ ＋Ｖ
Ｉ酢酸に溶かし、これを０．０５ Ｍ Ａｃ０ＮＩ（４
水溶７ｆｆｌ（ｐＨ５，１）で平衡化したカルボキンメ
チルセルロースのカラム（２×３０ｃ１ｎ）ｖｃチャー
ジし、００５１■Ａ ｃ ＯＮＨ４水溶液（ｐＨ５，１
）から０．４ ＭＡｃＯＮＨ４水溶液（ｐＨ６，０）
谷６００ｍｌ？：用いる連続濃度勾配法により溶出し、
さらに０．４ ＭＡｃＯＮＨ４水溶ｒｌｔｉ ＜ Ｉ）
Ｈ６，０）で溶出した。溶出液ｋＬＬ５ｍｅづつ分画し
、２８０ｎｍの吸光度で確認し、３０〜４０本目のフラ
クションＣ１，５０〜６９本目のフラクションＣ２，７
０〜９５本目のフラクションＣ３および９６〜１２０本
目のフラクションＣ４を乗め、各々凍結乾燥して乾燥品
Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３およびＣ４を得た。Ｃ３をできるだけ
少量のｌ ｉＶＩ酢酸に浴かし、セファテックスＧ−２
５のカラム（３×１００＞）ｌ’ｉ：チャージし、１１
ＶＩ酢敵で浴出した。The ninhydrin-Pauli reaction positive sections were collected and freeze-dried to obtain a dry product. Add this as little as possible to 0, 1 +V
0.05 M Ac0NI (4
A column (2 x 30 c1n) of carboquine methylcellulose equilibrated with 7ffl of aqueous solution (pH 5,1) was charged, and 0051■A c ONH4 aqueous solution (pH 5,1
) to 0.4 MAcONH4 aqueous solution (pH 6,0)
Valley 600ml? :Elute using continuous concentration gradient method,
Furthermore, 0.4 MAcONH4 aqueous rlti < I)
It eluted with H6,0). Fractionate the eluate kLL5me and check the absorbance at 280 nm, 30th to 40th fraction C1, 50th to 69th fraction C2, 7.
The 0th to 95th fractions C3 and the 96th to 120th fractions C4 were loaded and freeze-dried, respectively, to obtain dried products C1, C2, C3, and C4. C3 was bathed in as small a amount of l iVI acetic acid as possible, and Sephatex G-2
Column of 5 (3 x 100>) l'i: Charge, 11
I took a bath in VI Vinegar Enemy.
浴出販金１０ｍ１づつ分画し、２８０ｎｍの吸光度で確
認し、３５〜４８本目のフラクション０３Ｇ、および４
９〜５８本目のクラクンヨンＣ３Ｇ２を集め、各々凍結
乾燥して乾繰品Ｃ３ＧＩおよびＣ３Ｇ２２３ Ｑ ＋ｎ
９を得た。０３Ｇ２をできるだけ少量のブタノール−ピ
リジン−水−０，６ＭＡ ｃ ０ＮＨ４水溶液（５：３
：０１：１１）の混合溶媒の上層液に溶かし、これをセ
ファデックスＧ−２５のカラム（２，５Ｘｌ１５ｃｎｎ
）にチャージし、上記溶媒の上層液で溶出する分配クロ
マトグラフィーを行った。溶出夜は８５ｍｅづつ分画し
、Ｆｏｌｉｎ −Ｌｏｗｒｙ法により確認し、２０〜２
９本目のフラクション０３Ｇ２Ｐ１．３０〜４３本目の
フラクション０３Ｇ２Ｐ２．４４〜７０本目のフラクシ
ョン０３Ｇ２Ｐ３を集め、各々減圧濃縮して４精製品Ｃ
３Ｇ２Ｐ１、Ｃ３Ｇ２Ｐ２および２Ｃ３Ｇ２Ｐ３を得た
。０３Ｇ２Ｐ２をできるだけ少量の１Ｍ酢酸に溶かし、
これをセファデックスＧ−２５のカラム（３，５ｘ １
００ｃｒｎ） ＶｒＬチャージし、ＩＭ酢ばて浴出しだ
。溶出液をＩｇｍｌづつ分画し、２８０ＩＴｍの吸光度
で確認し、３６〜４１本目のフラクション０３Ｇ２Ｐ２
Ｇ□および４２〜５４本目のフラクションＣ３Ｇ２Ｐ２
Ｇ２ を得た。フラクション０３Ｇ２Ｐ２Ｇ２を集めて
凍結乾燥してＣＴｙｒ３４） ｈ−ＰＴＨ（５−３４）
Ｎｆ（を得た。収量４４１）ｎｇ。Fractionate each 10ml of bath gold and check the absorbance at 280nm.The 35th to 48th fractions 03G and 4
Collect the 9th to 58th krakunyong C3G2 and freeze-dry them to obtain dried products C3GI and C3G223 Q +n
I got a 9. 03G2 was mixed with as little as possible of butanol-pyridine-water-0,6MAc0NH4 aqueous solution (5:3
:01:11) in the upper layer of a mixed solvent, and this was added to a column of Sephadex G-25 (2,5Xl15cnn
), and partition chromatography was performed using the upper layer of the above solvent as elution. At the elution night, fractionation was carried out in 85me increments and confirmed by the Folin-Lowry method.
9th fraction 03G2P1. 30th to 43rd fraction 03G2P2. 44th to 70th fractions 03G2P3 were collected and concentrated under reduced pressure to obtain 4 purified products C.
3G2P1, C3G2P2 and 2C3G2P3 were obtained. Dissolve 03G2P2 in as little 1M acetic acid as possible,
Sephadex G-25 column (3.5 x 1
00crn) Charge the VrL and take a bath with IM vinegar. The eluate was fractionated into Igml portions, confirmed by absorbance at 280 ITm, and the 36th to 41st fractions 03G2P2
G□ and 42nd to 54th fractions C3G2P2
Got G2. Fraction 03G2P2G2 was collected and lyophilized to produce CTyr34) h-PTH (5-34).
Nf (obtained. Yield: 441) ng.
Ｔ ＬＣ； Ｕ、、＝０．４６、Ｒｆ、□＝０７０１（
ＰＬＣ； ２０．４３分
アミノＩｆ１分析； Ａｓｐ ３．８２ （４）、Ｓｅ
ｒ Ｏ，７２（１）、Ｇｌｕ ４．０６ （４）、Ｇｌ
ｙ ０．９４ （１）、Ｖａｌ １．７５ （２）、Ｍ
ｅｔ １．８２ （２’）、Ｉｌｅ １．０１ （１’
）、Ｌｅｕ ５． ＯＯ（５）、Ｔｙｒ Ｏ，９６（１
）、Ｌｙｓ ３．３２ （３）、Ｈｉｓ ２．４５ （
３）、Ａｒｇ ２．００ （２）、Ｔｒｐ ｉ、 １４
（１）特許出願人
東洋醸造株式会社
代表者 高 １）哲 男TLC; U, , = 0.46, Rf, □ = 0701 (
PLC; 20.43 min Amino If1 analysis; Asp 3.82 (4), Se
r O, 72 (1), Glu 4.06 (4), Gl
y 0.94 (1), Val 1.75 (2), M
et 1.82 (2'), Ile 1.01 (1'
), Leu 5. OO(5), Tyr O,96(1
), Lys 3.32 (3), His 2.45 (
3), Arg 2.00 (2), Trp i, 14
(1) Patent applicant Toyo Jozo Co., Ltd. Representative Takashi 1) Tetsuo
Claims (1)
−Ｇｌｙ−１ｉ（−Ｍｅｔ−１（ｉｓ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ
−Ｇｌｙ−１Ｈ−Ｌｅｑ −Ｍｅｔ −Ｈｉｓ −Ａｓ
ｎ −Ｌｅｕ −Ｇｌｙ−またはＨ−Ｉｊｅ −Ｇｉｎ
−Ｌｅ、ｕ−ＩＶｌｅｔ −Ｈｌｓ−Ａｓｎ −Ｌｅ
、ｕ −Ｇｌｙ−を示す）で表わされるペプチドまたは
その塩。 ２）、式 ％式％ （ ：］ （式中、ＡはＨ、、Ｈ−Ｈｉｓ −Ａｓｎ −ｆ、ｅｕ
−Ｇｌｙ−１ｆ（−Ｍｅｔ −１（ｉｓ−Ａｓｎ−Ｌ
ｅｕ−Ｇｌｙ −１Ｈ−Ｌｅｕ −Ｍｅｔ −Ｈｉｓ
−Ａｓｎ −Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−またはＨ−Ｉｌｅ−Ｇｉ
ｎ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ −’ｔ（ｉｓ −Ａｓｎ−Ｌｅｕ
−Ｇｌｙ−を示す）で表わされるペプチドを製造する
に当り、式ＣＩ）のアミノ酸順序に個々のアミノ酸およ
び（または）ペプチドフラグメントを縮合して構成し、
その際、側鎖の官能基および（または）Ｎ−末端アミノ
酸のα−アミン基を保護基で保護Ｌ、Ｃ−末端チロジン
のα−カルボキシル基ヲアミド基に洟え、そして得られ
た保瞳されたペプチドＣＩ〕の保護基を酸分解により一
段１首で脱離することを特徴とするペプチド〔■〕また
はその項の製造法。 ３）、酸分解が無水弗化水素分解である特許請求の範囲
第２項記載の製造法。 ４）、ペプチド［：Ｉ）ｋゲル沖過剤および吸看＃１１
ｋ用いるカラムクロマトグラフィーにより分離精製す
る特ＩＩＴｆ精求の範囲第２項記載の製造法。[Claims] 1), formula % formula % (2 (wherein AbaHXt(-Has -Asn -Leu
-Gly-1i(-Met-1(is-Asn-Leu
-Gly-1H-Leq -Met -His -As
n -Leu -Gly- or H-Ije -Gin
-Le, u-IVlet -Hls-Asn -Le
, u-Gly-) or a salt thereof. 2), formula % formula % (:] (where A is H, , H-His -Asn -f, eu
-Gly-1f(-Met-1(is-Asn-L
eu-Gly-1H-Leu-Met-His
-Asn -Leu-Gly- or H-Ile-Gi
n-Leu-Met -'t(is -Asn-Leu
-Gly-) is prepared by condensing individual amino acids and/or peptide fragments in the amino acid order of formula CI),
At that time, the side chain functional group and/or the α-amine group of the N-terminal amino acid are protected with a protecting group, and the α-carboxyl group of the C-terminal tyrosine is converted into an amide group, and the resulting Peptide [■] or a method for producing it, characterized in that the protecting group of peptide CI] is removed in one step by acid decomposition. 3) The production method according to claim 2, wherein the acid decomposition is anhydrous hydrogen fluoride decomposition. 4), Peptide [:I)k gel filtrate and absorption #11
The production method according to item 2, which involves separating and purifying by column chromatography using k.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59026754A JPS60169497A (en) | 1984-02-14 | 1984-02-14 | Human parathyroid hormone antagonist derivative and preparation thereof |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59026754A JPS60169497A (en) | 1984-02-14 | 1984-02-14 | Human parathyroid hormone antagonist derivative and preparation thereof |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60169497A true JPS60169497A (en) | 1985-09-02 |
Family
ID=12202068
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59026754A Pending JPS60169497A (en) | 1984-02-14 | 1984-02-14 | Human parathyroid hormone antagonist derivative and preparation thereof |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60169497A (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63313800A (en) * | 1987-05-26 | 1988-12-21 | メルク エンド カムパニー インコーポレーテツド | Parathyroid gland hormone antagonist |
| JPS6413100A (en) * | 1987-05-26 | 1989-01-17 | Merck & Co Inc | Parathyroid hormone antagonist having high metabolic characteristic |
-
1984
- 1984-02-14 JP JP59026754A patent/JPS60169497A/en active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63313800A (en) * | 1987-05-26 | 1988-12-21 | メルク エンド カムパニー インコーポレーテツド | Parathyroid gland hormone antagonist |
| JPS6413100A (en) * | 1987-05-26 | 1989-01-17 | Merck & Co Inc | Parathyroid hormone antagonist having high metabolic characteristic |
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