JPS60105629A - イムノトキシン - Google Patents
イムノトキシンInfo
- Publication number
- JPS60105629A JPS60105629A JP59191853A JP19185384A JPS60105629A JP S60105629 A JPS60105629 A JP S60105629A JP 59191853 A JP59191853 A JP 59191853A JP 19185384 A JP19185384 A JP 19185384A JP S60105629 A JPS60105629 A JP S60105629A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- allograft
- immunotoxin
- antigen
- cells
- antibody
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
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Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K17/00—Carrier-bound or immobilised peptides; Preparation thereof
- C07K17/02—Peptides being immobilised on, or in, an organic carrier
- C07K17/06—Peptides being immobilised on, or in, an organic carrier attached to the carrier via a bridging agent
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
- A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
- A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
- A61K47/6817—Toxins
- A61K47/6819—Plant toxins
- A61K47/6825—Ribosomal inhibitory proteins, i.e. RIP-I or RIP-II, e.g. Pap, gelonin or dianthin
- A61K47/6827—Ricin A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
この発明は移植免疫学の分野に属し、そして同種移植片
を移植する前にこれを、同種移植片に担持されている）
ａ同等抗原（例えばＨＬＡ−ＤＲ抗原）に対するイムノ
トキシンによ多処理することによシ該同種移植片に対す
る受容個体の免疫応答を低下せしめる技法に関する。
を移植する前にこれを、同種移植片に担持されている）
ａ同等抗原（例えばＨＬＡ−ＤＲ抗原）に対するイムノ
トキシンによ多処理することによシ該同種移植片に対す
る受容個体の免疫応答を低下せしめる技法に関する。
（従来の技術）
同種の遺伝的に類似しない個体間の移植（同種異系移植
父は同種移植と称される）は一般に、受容体個体又は宿
主個体において免疫応答を誘発する。この免疫応答はし
ばしば同種移植片の拒絶又は破壊を導く。この応答は、
主として、供与体を受答体から識別する細胞表面抗原に
対するＴ細胞介在応答であると（ｌｉしられる。
父は同種移植と称される）は一般に、受容体個体又は宿
主個体において免疫応答を誘発する。この免疫応答はし
ばしば同種移植片の拒絶又は破壊を導く。この応答は、
主として、供与体を受答体から識別する細胞表面抗原に
対するＴ細胞介在応答であると（ｌｉしられる。
同種移植片の生存を助長するための供与体及び／又は受
容体の神々の処理が報告されている。受容体が、同１１
＋移植片に応答する受容体の能力を低下せしめるための
免疫抑制剤、例えば抗***剤及び副腎ステロイドで処置
している。この処置方法は通常、受容体を免疫不全にし
、そしてそれ故に感染に対して感受性にする。種々の抗
血清もまた同種移植片生存助長剤として試験された。
容体の神々の処理が報告されている。受容体が、同１１
＋移植片に応答する受容体の能力を低下せしめるための
免疫抑制剤、例えば抗***剤及び副腎ステロイドで処置
している。この処置方法は通常、受容体を免疫不全にし
、そしてそれ故に感染に対して感受性にする。種々の抗
血清もまた同種移植片生存助長剤として試験された。
［）ａｖｉｅｓ、 Ｄ、Ａ、Ｌ、及び５ｔａｉｎｅｓ、
Ｎ、ＡｌＴｒａｎｓｐｌａｎｔ。
Ｎ、ＡｌＴｒａｎｓｐｌａｎｔ。
抗体を用いる受容体の受働免疫によるげり歯動物におけ
る器官移植の生存の助長を報告している。
る器官移植の生存の助長を報告している。
多くの文献が、同種移植の生存を助長するだめの抗リン
パ球血清（ＡＬＳ）による供与体の処置について記載し
でいる。これに関して、Ｈｏｒｎｕｎｇ、Ｍ、Ｏ。
パ球血清（ＡＬＳ）による供与体の処置について記載し
でいる。これに関して、Ｈｏｒｎｕｎｇ、Ｍ、Ｏ。
等、Ｊ、 Ｉｍｍｕｎ、 （１９７１）１０７：９７９
−９８４は、試験白血球を抗−ＨＬＡ −ＡＦ （ａｂ
’） ｔで処理して、混合リンパ球反応（ＭＬＲ）にお
いて標的白血球を刺激するその能力を除去することを記
載している。
−９８４は、試験白血球を抗−ＨＬＡ −ＡＦ （ａｂ
’） ｔで処理して、混合リンパ球反応（ＭＬＲ）にお
いて標的白血球を刺激するその能力を除去することを記
載している。
この文献は、Ｆ（ａｂ’）２が試験白梅球上のＨＬＡ−
Ａ抗原に結合し、そしてこれらが標的リンパ球を刺激す
るのを除去することを予想している。文献の他の１群は
、同種移植片の生存が、四種竪（口片の弛俸春内培養に
よって同種移植片からパラセンジャー白血球を除去する
ことによって助長されることを報告している。Ｓｕｒｇ
ｅｒｙ（１９７７）８１ニア４−７９ ： ５ｃｉｅｎ
ｃｅ （１９８０）２０９：１８３−１８５ ：及３４
： ３０２−３０５は、抗−工ａ抗体を用いて供与体
組織を前処理することによる、免疫抑制されたネズミ受
容体における心臓同種移植片の生存について報告してい
る。
Ａ抗原に結合し、そしてこれらが標的リンパ球を刺激す
るのを除去することを予想している。文献の他の１群は
、同種移植片の生存が、四種竪（口片の弛俸春内培養に
よって同種移植片からパラセンジャー白血球を除去する
ことによって助長されることを報告している。Ｓｕｒｇ
ｅｒｙ（１９７７）８１ニア４−７９ ： ５ｃｉｅｎ
ｃｅ （１９８０）２０９：１８３−１８５ ：及３４
： ３０２−３０５は、抗−工ａ抗体を用いて供与体
組織を前処理することによる、免疫抑制されたネズミ受
容体における心臓同種移植片の生存について報告してい
る。
イムノトキシンは、ジフテリア毒又はリシンのごとき細
菌性又は植物性毒素と抗体との接合体である。イムノト
キシンの分野は、最近Ｑｌｓｎｅｓ＋ Ｓ−及びｐｉｌ
ｌＩ、 Ａ、＋ Ｐｈａｒｍａｃ、 Ｔｈｅｒ、 （１
９８２） １５ ：３３５−３８１ ：並びにＪａｎ８
ｅｎ＋ Ｆ、に、＋等、ｉｍｍｕｎ。
菌性又は植物性毒素と抗体との接合体である。イムノト
キシンの分野は、最近Ｑｌｓｎｅｓ＋ Ｓ−及びｐｉｌ
ｌＩ、 Ａ、＋ Ｐｈａｒｍａｃ、 Ｔｈｅｒ、 （１
９８２） １５ ：３３５−３８１ ：並びにＪａｎ８
ｅｎ＋ Ｆ、に、＋等、ｉｍｍｕｎ。
Ｒｅｖ、（１９８２）６２ ： １８５−２１６ によ
り総説された。イムノトキシンは主として抗新生物剤と
して使用さＪしておシ、この場合、接合体の抗体部分が
標的腫喝に対して向けられる。本発明者は、ＨＬＡ−１
）Ｉｔ抗原（又は哺乳仙物穐における類似の抗原）に対
して向けられた抗体を含む先行技術に係るイムノトキシ
ンを了知しない。本発明者が了知している移植における
イムノトキシンの先行技術に係る使用は、自生的骨髄移
植において悪性細胞を根絶するだめの抗体−リシン接合
体の使用Ｖｏ１．Ｌ Ｎｏ−３： ３８９ ４１５ ：
及びｖｉｔｅｔｔａ＋ Ｅ、Ｓ。
り総説された。イムノトキシンは主として抗新生物剤と
して使用さＪしておシ、この場合、接合体の抗体部分が
標的腫喝に対して向けられる。本発明者は、ＨＬＡ−１
）Ｉｔ抗原（又は哺乳仙物穐における類似の抗原）に対
して向けられた抗体を含む先行技術に係るイムノトキシ
ンを了知しない。本発明者が了知している移植における
イムノトキシンの先行技術に係る使用は、自生的骨髄移
植において悪性細胞を根絶するだめの抗体−リシン接合
体の使用Ｖｏ１．Ｌ Ｎｏ−３： ３８９ ４１５ ：
及びｖｉｔｅｔｔａ＋ Ｅ、Ｓ。
並びに移植片対宿主疾患を除去するためにネズミ骨髄に
おけるイムノコンピテントＴリンパ球ヲ根絶するための
使用［Ｖａｌｌｅｒａ＋ Ｄ、Ａ、 Ｊ、 Ｅｘｐ、
Ｍｅｄ。
おけるイムノコンピテントＴリンパ球ヲ根絶するための
使用［Ｖａｌｌｅｒａ＋ Ｄ、Ａ、 Ｊ、 Ｅｘｐ、
Ｍｅｄ。
（１９８２）１５５ ： ９４９−９５４）のみである
。
。
（発明の構成）
この発明は、適当なイムノトキシンによシ同種移植片を
処理することによシ、受容体において応答細胞を刺激す
る同種移植片細胞を消耗するとと゛によって同種移植片
の生存を助長することができるとする発明者の着想に基
礁を置いている。発明者はこの仮説を試験し、そしてげ
っ歯動物の同種移植片を抗−■ａ イムノトキシンで処
理することによって該移植片の刺激細胞を根絶すること
ができることを見出した。
処理することによシ、受容体において応答細胞を刺激す
る同種移植片細胞を消耗するとと゛によって同種移植片
の生存を助長することができるとする発明者の着想に基
礁を置いている。発明者はこの仮説を試験し、そしてげ
っ歯動物の同種移植片を抗−■ａ イムノトキシンで処
理することによって該移植片の刺激細胞を根絶すること
ができることを見出した。
従って、この発明の１つの観点は、同種移殖片をその移
イＩＩｔ前に同種移植片によって担持されているＩａ同
等抗原に対するイムノトキシンによシ処理することを特
徴とする同種移植片の免疫原性を低下せしめる方法であ
る。
イＩＩｔ前に同種移植片によって担持されているＩａ同
等抗原に対するイムノトキシンによシ処理することを特
徴とする同種移植片の免疫原性を低下せしめる方法であ
る。
この発明の他の観点は、同種移植片により担持されてい
るＪａ同等抗原に対するイムノトキシンによシ前処理（
すなわち、移植前の処理）されていることを％漱とする
同種移植片である。
るＪａ同等抗原に対するイムノトキシンによシ前処理（
すなわち、移植前の処理）されていることを％漱とする
同種移植片である。
この発明の第３の観点は、抗体に接合した毒素部分を含
んで成り、そして該抗体が■ａ同等抗原に対するもので
あることをｔｒ！ｊ徴とする同種移植片の免疫原性を低
下せしめるために使用されるイムノトキシンに関する。
んで成り、そして該抗体が■ａ同等抗原に対するもので
あることをｔｒ！ｊ徴とする同種移植片の免疫原性を低
下せしめるために使用されるイムノトキシンに関する。
この明細書においてｒ工ａｌＦｙ１等抗原」とは、主要
組織適合性遺伝子複合体（ＭＭＣ）の遺伝子産物であっ
て、前１（己のＭＬＲにおいて免疫反応を刺激するもの
を丸味する。この用語は種に特異的でないことが意図さ
れ、そしてネズミの遺伝子産物、例えばＩＡ領領域びＩ
Ｅ領領域産物のみならず、他の哺乳動物種の同様なＭ、
ｌ（Ｃ領域、例えば）ＩＬＡのＤＲＳＳＶ、又はＤＣ領
域の機能的に類似する生成物をも包含する。ヒトの場合
、この用語は通常はＨＬＡ−ＤＲ抗原を意味する。従っ
て、抗−ｉａ同等抗体は、前記のＭＬＲにおける刺激細
胞上に存在するＩａ同等抗原と反応する抗体である。
組織適合性遺伝子複合体（ＭＭＣ）の遺伝子産物であっ
て、前１（己のＭＬＲにおいて免疫反応を刺激するもの
を丸味する。この用語は種に特異的でないことが意図さ
れ、そしてネズミの遺伝子産物、例えばＩＡ領領域びＩ
Ｅ領領域産物のみならず、他の哺乳動物種の同様なＭ、
ｌ（Ｃ領域、例えば）ＩＬＡのＤＲＳＳＶ、又はＤＣ領
域の機能的に類似する生成物をも包含する。ヒトの場合
、この用語は通常はＨＬＡ−ＤＲ抗原を意味する。従っ
て、抗−ｉａ同等抗体は、前記のＭＬＲにおける刺激細
胞上に存在するＩａ同等抗原と反応する抗体である。
この明細書において使用する「抗体」な込語は、ポリク
ローナル抗体及びモノクローナル抗体、並びにその抗原
結合性断片（Ｆａｂ 、 Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂす、及び
ＦＶ）を包含する。
ローナル抗体及びモノクローナル抗体、並びにその抗原
結合性断片（Ｆａｂ 、 Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂす、及び
ＦＶ）を包含する。
「同種移植片」なる語は、個体哺乳動物細胞の多様性、
又は意図される受答体と遺伝的に類似しない個体からの
組織又は器官を規定する関連哺乳動物細胞の多様性を意
味する。これは通常、皮膚、又はｉａ同等抗原担持内皮
を有さず、そしてその実質細胞がＩａ同等抗原を欠いて
いる器官、例えば内分泌腺（下垂体、甲状腺、副腎、上
皮不休、及び膵臓）に関する。
又は意図される受答体と遺伝的に類似しない個体からの
組織又は器官を規定する関連哺乳動物細胞の多様性を意
味する。これは通常、皮膚、又はｉａ同等抗原担持内皮
を有さず、そしてその実質細胞がＩａ同等抗原を欠いて
いる器官、例えば内分泌腺（下垂体、甲状腺、副腎、上
皮不休、及び膵臓）に関する。
この明細書において「免疫原性」なる語は、同種移植片
が、遺伝的に類似しない個体に移植された場合に免疫応
答を生じさせる該移植片の能力に関する。
が、遺伝的に類似しない個体に移植された場合に免疫応
答を生じさせる該移植片の能力に関する。
抗−Ｉａ同等イムノトキシンの細胞毒性部分は、細菌性
毒素もしくは植物性毒素、酵素的に活性な断片を含むこ
の毒素の部分、又はこの毒素の酵素活性に類似する酵素
活性を示す蛋白質である。これらの毒素及び蛋白質はポ
リペプチドである。これらはその酵素活性のために、一
旦吸収されれば、例えば伸長因子−２を不活性化するこ
とにより、又はリボゾーム６０ｇサブユニットを不活性
化することによυｆｌｌｌｌ胞性蛋白質合成を阻害する
。このような毒素及び蛋白質の例として、ジフテリア毒
、エキソトキシ／〔シュードモナス・アエルギノ−ｔ
（ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕ １ｎｏａａ）由
来の〕）リジン（ｒｉｃｉｎ ）、アプリｙ （ａｂｒ
ｉｎ ）、モデｙ’／７（ｍｏｄｅｃｃｌｎ ）、α−
サルシン、アリューリテス・７オルデ４− （Ａｌｅｕ
ｒｉｔｅｓ ｆｏｒｄｉｉ ） 蛋白質１デイアンチ７
ｉ１ｆ白質（ｄｉａｎｔｈｆｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ）
、フィト２ム衣！−Ｌノ講ｉｔ 二ｊ−（Ｐｈｙｔｏｌ
ａｃｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａ ）蛋白質（ＰＡＰ １
． ＰＡＰ Ｉｌ、及びＰＡＰ−８）、モモクロチ：ｙ
（ｃｒｏｔｉｎ ）、ゲｏ 二：ｙ （ｇｅｌｏｎｉ
ｎ ）、ミトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ ）、ｌ／
ストリクトシン（ｒｅｓｔｒｉｃｔｏｃｉｎ ）、フェ
ノマイシｙ（ｐｈｅｎｏｍｙｅｉｎ ）、及びエノマイ
シン（ｅｎｏｍｙｅｉｎ ）を挙げることができる。こ
れらの毒素及び蛋白質は、適切な細菌又は植物から抽出
又は分離することができる。これらの毒素の酵素的に活
性な断片は、毒素の活性鎖（Ａ鎖）と結合鎖（Ｂ鎖）と
の間の結合を破壊しく例えば、Ａ鎖とＢ鎖の間のジスル
フィド結合を適当な還元剤、例えば２−メルカプトエタ
ノール又はジチオスレイトールによ）イ元し）、そして
Ｂ鎖からＡ鎖を分離することによシ得られる。最近の）
ｌｔ伝子工学的技法によって、同様に機能する蛋白質、
又は少なくともｓ１紫の酵素的に活性な断片を製造する
ことも可能である。
毒素もしくは植物性毒素、酵素的に活性な断片を含むこ
の毒素の部分、又はこの毒素の酵素活性に類似する酵素
活性を示す蛋白質である。これらの毒素及び蛋白質はポ
リペプチドである。これらはその酵素活性のために、一
旦吸収されれば、例えば伸長因子−２を不活性化するこ
とにより、又はリボゾーム６０ｇサブユニットを不活性
化することによυｆｌｌｌｌ胞性蛋白質合成を阻害する
。このような毒素及び蛋白質の例として、ジフテリア毒
、エキソトキシ／〔シュードモナス・アエルギノ−ｔ
（ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕ １ｎｏａａ）由
来の〕）リジン（ｒｉｃｉｎ ）、アプリｙ （ａｂｒ
ｉｎ ）、モデｙ’／７（ｍｏｄｅｃｃｌｎ ）、α−
サルシン、アリューリテス・７オルデ４− （Ａｌｅｕ
ｒｉｔｅｓ ｆｏｒｄｉｉ ） 蛋白質１デイアンチ７
ｉ１ｆ白質（ｄｉａｎｔｈｆｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ）
、フィト２ム衣！−Ｌノ講ｉｔ 二ｊ−（Ｐｈｙｔｏｌ
ａｃｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａ ）蛋白質（ＰＡＰ １
． ＰＡＰ Ｉｌ、及びＰＡＰ−８）、モモクロチ：ｙ
（ｃｒｏｔｉｎ ）、ゲｏ 二：ｙ （ｇｅｌｏｎｉ
ｎ ）、ミトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ ）、ｌ／
ストリクトシン（ｒｅｓｔｒｉｃｔｏｃｉｎ ）、フェ
ノマイシｙ（ｐｈｅｎｏｍｙｅｉｎ ）、及びエノマイ
シン（ｅｎｏｍｙｅｉｎ ）を挙げることができる。こ
れらの毒素及び蛋白質は、適切な細菌又は植物から抽出
又は分離することができる。これらの毒素の酵素的に活
性な断片は、毒素の活性鎖（Ａ鎖）と結合鎖（Ｂ鎖）と
の間の結合を破壊しく例えば、Ａ鎖とＢ鎖の間のジスル
フィド結合を適当な還元剤、例えば２−メルカプトエタ
ノール又はジチオスレイトールによ）イ元し）、そして
Ｂ鎖からＡ鎖を分離することによシ得られる。最近の）
ｌｔ伝子工学的技法によって、同様に機能する蛋白質、
又は少なくともｓ１紫の酵素的に活性な断片を製造する
ことも可能である。
イムノトキシンの抗体成分は常法に従って得られ、又は
試製される。抗−ｉａ同等血清は、高力価の目的とする
抗体を有することが知られている免疫された個体から得
られる。ヒトの場合、妊娠抗−Ｉａ同等抗体の分離源で
ある。抗−ＩａＰ］等抗体は、宿主動物、例えば馬、や
ぎ、ラビット、羊を、適切なＩａ同等タイプの個体から
のＢ細胞によシ免疫し、そして免疫された宿主から血清
を集めることにより２周製することができる。
試製される。抗−ｉａ同等血清は、高力価の目的とする
抗体を有することが知られている免疫された個体から得
られる。ヒトの場合、妊娠抗−Ｉａ同等抗体の分離源で
ある。抗−ＩａＰ］等抗体は、宿主動物、例えば馬、や
ぎ、ラビット、羊を、適切なＩａ同等タイプの個体から
のＢ細胞によシ免疫し、そして免疫された宿主から血清
を集めることにより２周製することができる。
モノクローナル抗−Ｉａ同等抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ。
Ｇ、及びＭｉｌｓｔｅｌｎ＋ Ｃ０＋ Ｎａｔｕｒｅ
（１９７５） ２５６ ：４９５−４９７により初めて
記載された体細胞雑種形成法によシ作ることができる。
（１９７５） ２５６ ：４９５−４９７により初めて
記載された体細胞雑種形成法によシ作ることができる。
この方法に使用される腫瘍細胞系、試薬、及び条件は良
く知られておシ、ぞして文献〔５ｏｒｎａｔ１ｃ Ｃｅ
１ｌ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ。
く知られておシ、ぞして文献〔５ｏｒｎａｔ１ｃ Ｃｅ
１ｌ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ。
（１９７９）５ ： ９５７−９７２）に広範に総説さ
れている。簡単に記載すれば、この方法は、宿主を注目
の免疫原（適切なｉａ同等タイプの個体からのＢ細胞）
によって免疫し、免疫した宿主から抗体産生細胞を隼め
、免疫した宿主からの抗体産生細胞ヲ、ポリエチレング
リコールのごとき融合剤を用いて適切な腫瘍細胞と融合
せしめ、選択培地中で細胞を増殖せしめることによって
未雑種形成親細胞を除去し、免疫原に対する抗体を産生
ずるハイプリドーマを同定し、とのノ・イブリドーマを
増殖せしめ、そして得られた培地（又は、生体内で増殖
せしめた場合には体液）からモノクローナル抗体を集め
る。ラット、マウス及びヒトの腫瘍細胞系が融合のため
に使用し得るので、最近の注目されるモノクローナル抗
体は典型的にはヒト、ラット又はネズミのものである。
れている。簡単に記載すれば、この方法は、宿主を注目
の免疫原（適切なｉａ同等タイプの個体からのＢ細胞）
によって免疫し、免疫した宿主から抗体産生細胞を隼め
、免疫した宿主からの抗体産生細胞ヲ、ポリエチレング
リコールのごとき融合剤を用いて適切な腫瘍細胞と融合
せしめ、選択培地中で細胞を増殖せしめることによって
未雑種形成親細胞を除去し、免疫原に対する抗体を産生
ずるハイプリドーマを同定し、とのノ・イブリドーマを
増殖せしめ、そして得られた培地（又は、生体内で増殖
せしめた場合には体液）からモノクローナル抗体を集め
る。ラット、マウス及びヒトの腫瘍細胞系が融合のため
に使用し得るので、最近の注目されるモノクローナル抗
体は典型的にはヒト、ラット又はネズミのものである。
抗−ＨＬＡ−ＤＲモノクローナル抗体についての多くの
報告が文献中に存在する。例えば、Ｑｒｕｍｅｔ、 Ｆ
、Ｃ，等、Ｈｕｍａｎ３４６０、及Ｅｕｒｏｐｅａｎ
’（Ｊ ｉｍｍｕｎ、 （１９８３） １３ ：６４−
７２を参照のこと。抗−ＨＬＡ−１）Ｒモノクローナル
抗体は最近ベクトンーディッキンソン（Ｂｅｃｔｏｎ−
］）ｉｃｋ１ｎｓｏｎ ）、サニーバレー、カリホルニ
アによシ販売されている。
報告が文献中に存在する。例えば、Ｑｒｕｍｅｔ、 Ｆ
、Ｃ，等、Ｈｕｍａｎ３４６０、及Ｅｕｒｏｐｅａｎ
’（Ｊ ｉｍｍｕｎ、 （１９８３） １３ ：６４−
７２を参照のこと。抗−ＨＬＡ−１）Ｒモノクローナル
抗体は最近ベクトンーディッキンソン（Ｂｅｃｔｏｎ−
］）ｉｃｋ１ｎｓｏｎ ）、サニーバレー、カリホルニ
アによシ販売されている。
ポリクローナル抗体又はモノクローナル抗体の抗原結合
断片（ｐａｂ 、 ｐａｂ’、Ｆ（”ｂ’）ｗ、ｐ’ｖ
）は、全Ｉｇを適切なプロテアーゼによシ、例えばＦ
ａｂの場合はパパイン、そしてＦ（ａｂ’）、の場合は
ペプシンによシ、消化することによシ製造することがで
きる。使用する抗体のクラス（及びサブクラス）は臨界
的ではない。抗血清を使用する場合、抗体がＩｇＧ で
ある可能性が最も強い。このクラスが支配的だからであ
る。所望によシ、同種移植片の刺激Ｂ細胞上に存在する
ｌａ同等抗原に対するモノクローナル抗体の混合物を使
用することができる。同様に、抗体のスペーシスは臨界
的ではない。
断片（ｐａｂ 、 ｐａｂ’、Ｆ（”ｂ’）ｗ、ｐ’ｖ
）は、全Ｉｇを適切なプロテアーゼによシ、例えばＦ
ａｂの場合はパパイン、そしてＦ（ａｂ’）、の場合は
ペプシンによシ、消化することによシ製造することがで
きる。使用する抗体のクラス（及びサブクラス）は臨界
的ではない。抗血清を使用する場合、抗体がＩｇＧ で
ある可能性が最も強い。このクラスが支配的だからであ
る。所望によシ、同種移植片の刺激Ｂ細胞上に存在する
ｌａ同等抗原に対するモノクローナル抗体の混合物を使
用することができる。同様に、抗体のスペーシスは臨界
的ではない。
上記のように、適当なヒト腫瘍系及びげつ歯動物腫瘍系
が使用可能であるため、抗体はげり歯動物又はヒト由来
のものであろう。
が使用可能であるため、抗体はげり歯動物又はヒト由来
のものであろう。
イムノトキシンの毒素（Ｋ白質は、標準的な接合技法を
用い、そして必要であれば２官能カツプリング剤を用い
て抗体に共有結合的に接合せしめる（ Ｑ１１１１ｎｅ
８＋ ｓ、及びｐｉｈｌ 、 Ａ、前掲）。毒素及び抗
体の両者が遊南の反応性アミノ酸（例えばシスティン！
Ａ基上の遊π／１−８Ｈ基）を含有する場合、これらを
カップリング剤を用いないで接合せしめることかでＬ！
る。毒素と抗体とを遁−元可能々ジスル１Ｊｋ・ｋｔｒ
ｔ八）イー丁幻；半２品広ｋｆ Ｑ當台仁−）プ。。
用い、そして必要であれば２官能カツプリング剤を用い
て抗体に共有結合的に接合せしめる（ Ｑ１１１１ｎｅ
８＋ ｓ、及びｐｉｈｌ 、 Ａ、前掲）。毒素及び抗
体の両者が遊南の反応性アミノ酸（例えばシスティン！
Ａ基上の遊π／１−８Ｈ基）を含有する場合、これらを
カップリング剤を用いないで接合せしめることかでＬ！
る。毒素と抗体とを遁−元可能々ジスル１Ｊｋ・ｋｔｒ
ｔ八）イー丁幻；半２品広ｋｆ Ｑ當台仁−）プ。。
フィト、例えば３．３′−ジメチル−ジチオ−ビスプロ
ピオネート、及びＮ−サクシンイミジルー３−（２−ピ
リジルジチオ）グロピオネー） （ＳＰＤＰ）が使用さ
れている。そのほかのカップリング剤と例として、それ
ぞれ６−マレイミドカプロン酸、２−ブロモ酢酸及び２
−ヨウド酢酸のＮ−ヒドロキシサクシンイミドエステル
、これらの酸のそのほかの活性エステル、イミドエステ
ル、例えばジメチルアジピミデート、ジサクシンイミジ
ルスベレート、アルデヒド、例えばグルタルアルデヒド
、ビスアジド化合物、例えばビス−（ｐ−アジドベンゾ
イル）ヘキサンジアミン、ビス−ジアゾニウム誘導体、
及びジイソシアナート、例えばトリレニン−２，６−ジ
イソシアナート、及び２カルボジイミドを挙げることが
できる。
ピオネート、及びＮ−サクシンイミジルー３−（２−ピ
リジルジチオ）グロピオネー） （ＳＰＤＰ）が使用さ
れている。そのほかのカップリング剤と例として、それ
ぞれ６−マレイミドカプロン酸、２−ブロモ酢酸及び２
−ヨウド酢酸のＮ−ヒドロキシサクシンイミドエステル
、これらの酸のそのほかの活性エステル、イミドエステ
ル、例えばジメチルアジピミデート、ジサクシンイミジ
ルスベレート、アルデヒド、例えばグルタルアルデヒド
、ビスアジド化合物、例えばビス−（ｐ−アジドベンゾ
イル）ヘキサンジアミン、ビス−ジアゾニウム誘導体、
及びジイソシアナート、例えばトリレニン−２，６−ジ
イソシアナート、及び２カルボジイミドを挙げることが
できる。
イムノトキシンが同種移植片のＩａ同等抗原担持細胞の
少なくとも部分、好ましくは全部を廃棄することができ
る争件下で、同種移植片をイムノトキシンによシ処理す
る。多くのヒト同種移植片が死体から得られる。これら
の同種移植片を、摘出した後に、又はその場でイムノト
キシンによシ処理することができる。生きている供与体
から得られた同種移植片は摘出した後に処理されるであ
ろう。摘出後に処理される場合、同種移植片はイムノト
キシンを含有する潅流媒体によシ潅流され、又はイムノ
トキシンを作有する培地中に保持されるであろう。イム
ノトキシンは通常、工ａ同等抗原相持細胞Ｉ Ｘ １０
６当シ約１μ２以上、通常１〜１０μ２において、潅流
媒体又は培地に添加する。
少なくとも部分、好ましくは全部を廃棄することができ
る争件下で、同種移植片をイムノトキシンによシ処理す
る。多くのヒト同種移植片が死体から得られる。これら
の同種移植片を、摘出した後に、又はその場でイムノト
キシンによシ処理することができる。生きている供与体
から得られた同種移植片は摘出した後に処理されるであ
ろう。摘出後に処理される場合、同種移植片はイムノト
キシンを含有する潅流媒体によシ潅流され、又はイムノ
トキシンを作有する培地中に保持されるであろう。イム
ノトキシンは通常、工ａ同等抗原相持細胞Ｉ Ｘ １０
６当シ約１μ２以上、通常１〜１０μ２において、潅流
媒体又は培地に添加する。
イムノトキシンＩＪ： 、接触後急速に刺激細胞を根絶
することがＭＬＲ実験により示される。従って、イムノ
トキシンと細胞との間の接触の効率が処理時間を決定す
るようである。処理を迅速に行う理由は通常存在しない
から、処理時間は通常少なくとも約１５分であり、又は
同種移植片が大きい場合はさらにＪ’ｊ−１’；１間と
なるであろう。イムノトキシンは典型的には水溶性であ
シ、そして薬剤の非経腸的投力のためにコｔｈ常使用さ
れる水性媒体中に調製することができる。同種移植片を
その場で処理する場合、該移植片を含有する死体を、静
脈を通じてイムノトキシンによル潅流処理する。ヒト以
外の同種移植片の場合には、宿主をイムノトキシンによ
シ生体内潅流処理し、そして殺して移植片を得る。イム
ノトキシンが相対的に短い半減期を有する場合には、生
体内における間欠的又は連続的処理が好ましいであろう
。
することがＭＬＲ実験により示される。従って、イムノ
トキシンと細胞との間の接触の効率が処理時間を決定す
るようである。処理を迅速に行う理由は通常存在しない
から、処理時間は通常少なくとも約１５分であり、又は
同種移植片が大きい場合はさらにＪ’ｊ−１’；１間と
なるであろう。イムノトキシンは典型的には水溶性であ
シ、そして薬剤の非経腸的投力のためにコｔｈ常使用さ
れる水性媒体中に調製することができる。同種移植片を
その場で処理する場合、該移植片を含有する死体を、静
脈を通じてイムノトキシンによル潅流処理する。ヒト以
外の同種移植片の場合には、宿主をイムノトキシンによ
シ生体内潅流処理し、そして殺して移植片を得る。イム
ノトキシンが相対的に短い半減期を有する場合には、生
体内における間欠的又は連続的処理が好ましいであろう
。
供与体細胞の免疫原性を低下せしめるこの発明の効果は
、処理された同種移植片のサンプルをＭＬＲ試験にかけ
ることによって測定することができ、この試験において
は処理された同種移植片の小サンプルを細胞培養媒体中
で受容体からのリンパ球と混合する。
、処理された同種移植片のサンプルをＭＬＲ試験にかけ
ることによって測定することができ、この試験において
は処理された同種移植片の小サンプルを細胞培養媒体中
で受容体からのリンパ球と混合する。
処理された同種移植片は、常用手段によシ受容体に導入
することができる。例えば、皮膚移植においては、処理
された皮膚を移植部位に置き、そして移植片が皮下組織
になじむまで移植部位に保持する。処理された器官は外
科的に導入する。治療目的又は診断目的のために宿主に
導入されるべき同種移植片は典型的には、医薬として許
容される運搬体又は担体と組合わせて注射によシ投与す
る。この明細外において使用する「移植」なる語は、こ
れらすべての導入方法を包含する。
することができる。例えば、皮膚移植においては、処理
された皮膚を移植部位に置き、そして移植片が皮下組織
になじむまで移植部位に保持する。処理された器官は外
科的に導入する。治療目的又は診断目的のために宿主に
導入されるべき同種移植片は典型的には、医薬として許
容される運搬体又は担体と組合わせて注射によシ投与す
る。この明細外において使用する「移植」なる語は、こ
れらすべての導入方法を包含する。
次の５１１は、イムノトキシン、これによって処理され
た同種＃Ｊｉ織片、及び免疫原性の低下における処理の
効果を例示する。これらの例は、この発明を限定するこ
とをなんら意図するものではない。
た同種＃Ｊｉ織片、及び免疫原性の低下における処理の
効果を例示する。これらの例は、この発明を限定するこ
とをなんら意図するものではない。
１３．４と称する抗−ｉａ モノクローナル抗体は、Ｇ
ｕｎｔｅｒ ｌ（ｎｍｍｅｒｌｉｎｇＪＩｖ±、ハイデ
ルベルグ、***から得た。この抗体はＩｍｍｕｎｏｇｅ
ｎｅｔ、 （１９７９）８：４３３−４４５に記載され
ている。これはＩ−Ｅｋ分子と反応し、そしてＩａ７％
異性と関連する。この抗体はラットのクラスｔｌ ＭＨ
Ｃ抗原と交差反応する。モノクローナル抗体１３．４
Ｃ燐酸ｕｆ＆化塩溶液（ＰＢＳ）中２■／ツ〕をヘテロ
２官能架橋剤Ｎ−サクシンイミジルー３−（２−ピリジ
ルジチオ）フロビオネート（５ＰＤＰ ：ファルマシア
＼ビスカットウェイ、ニューシャーシー）によシ誘導体
にする。純エタノール中５ＰＤＰ （０，０７５ゴ、２
０ ｍＭ ）を抗体溶液に加え（抗体溶液ｍｌｌクシ前
記量）、次に室温にて３０分間インキュベートした。誘
導体にされた抗体を４℃においてＰＢＳに対して十分に
透析して残留する未反応５ＰＤＰを除去し、そしてＣａ
ｒｌｓｏｎ等、Ｂｉｏｃｈｅｍ、 Ｊ、 （１９７８）
１７３ ： ７２３−７３７に記載されているようにし
てピリジン−２−ジスルフィド含量について分析した。
ｕｎｔｅｒ ｌ（ｎｍｍｅｒｌｉｎｇＪＩｖ±、ハイデ
ルベルグ、***から得た。この抗体はＩｍｍｕｎｏｇｅ
ｎｅｔ、 （１９７９）８：４３３−４４５に記載され
ている。これはＩ−Ｅｋ分子と反応し、そしてＩａ７％
異性と関連する。この抗体はラットのクラスｔｌ ＭＨ
Ｃ抗原と交差反応する。モノクローナル抗体１３．４
Ｃ燐酸ｕｆ＆化塩溶液（ＰＢＳ）中２■／ツ〕をヘテロ
２官能架橋剤Ｎ−サクシンイミジルー３−（２−ピリジ
ルジチオ）フロビオネート（５ＰＤＰ ：ファルマシア
＼ビスカットウェイ、ニューシャーシー）によシ誘導体
にする。純エタノール中５ＰＤＰ （０，０７５ゴ、２
０ ｍＭ ）を抗体溶液に加え（抗体溶液ｍｌｌクシ前
記量）、次に室温にて３０分間インキュベートした。誘
導体にされた抗体を４℃においてＰＢＳに対して十分に
透析して残留する未反応５ＰＤＰを除去し、そしてＣａ
ｒｌｓｏｎ等、Ｂｉｏｃｈｅｍ、 Ｊ、 （１９７８）
１７３ ： ７２３−７３７に記載されているようにし
てピリジン−２−ジスルフィド含量について分析した。
抗体分子当り平均４個の上記残基が見出された。
リシンＡ鎖（ＲＴＡ）をＥＹラプス、サンマテロ、カリ
ホルニアから購入した。このＲＴＡ は種々の培養細胞
系に対して本質上非毒性であり、蛋白質合成を５０％阻
害するために０．１ ｐＨを必要とする。ＲＴＡ （０
，８１１９／ｄ ）をジチオスレイトール（ＩＭ、ＰＨ
７，０）を最終濃度が５０ｍＭになるように添加し新た
に還元した。室温にて３０分間インキュベートした後、
還元されたＲＴＡを、ＰＢＳ中で平衡化され九Ｇ−２５
カラム上で脱塩した。
ホルニアから購入した。このＲＴＡ は種々の培養細胞
系に対して本質上非毒性であり、蛋白質合成を５０％阻
害するために０．１ ｐＨを必要とする。ＲＴＡ （０
，８１１９／ｄ ）をジチオスレイトール（ＩＭ、ＰＨ
７，０）を最終濃度が５０ｍＭになるように添加し新た
に還元した。室温にて３０分間インキュベートした後、
還元されたＲＴＡを、ＰＢＳ中で平衡化され九Ｇ−２５
カラム上で脱塩した。
最も高い蛋白質濃度を含有する両分をプールした。
次に、還元され脱塩されたＲＴＡを、誘導体にされた抗
体と混合した。誘導体にされた抗体及びＲＴＡ の最終
濃度をそれぞれ４．４μＭ及び１０μＭとした。
体と混合した。誘導体にされた抗体及びＲＴＡ の最終
濃度をそれぞれ４．４μＭ及び１０μＭとした。
この明π１ｌ−１において１３．４− ＲＴＡ と称す
る接合混合物を、室温にて１時間インキュベートし、そ
して４°Ｃにおいてｔｒｉ’蔵した。ドデシル硫酸ナト
リウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（５ＤＳ−−Ｐ
ＡＧＥ）により、そして誘導体にされた抗体とＲＴＡ
との混合の後に放出されるピリジン−２−チオンの量の
分光光変針的測定によシ、好結果の接合が＃ｉＥ ！Ｊ
４された。平均１．５分子のＲＴＡが抗体の各分子に共
有結合的に結合した。この実験に使用したＲＴＡは本質
上非毒性であるため、残留する未反応１ｔＴＡを接合混
合物から除去する必恍がなかった。
る接合混合物を、室温にて１時間インキュベートし、そ
して４°Ｃにおいてｔｒｉ’蔵した。ドデシル硫酸ナト
リウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（５ＤＳ−−Ｐ
ＡＧＥ）により、そして誘導体にされた抗体とＲＴＡ
との混合の後に放出されるピリジン−２−チオンの量の
分光光変針的測定によシ、好結果の接合が＃ｉＥ ！Ｊ
４された。平均１．５分子のＲＴＡが抗体の各分子に共
有結合的に結合した。この実験に使用したＲＴＡは本質
上非毒性であるため、残留する未反応１ｔＴＡを接合混
合物から除去する必恍がなかった。
Ｓ＋＋胞
１１〜１８ ；ＩｒＡ令、体重２００〜２８０２の雄性
ＡＣＩ ラットをシモンセンラボラトリーズ（Ｓｉｍｏ
ｎａｅｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ ）、ジルｏイ、
カリホルニアから得た。１２〜１８週令、体退会００〜
４００２の雄性Ｉ、ｅｗｉｓ Ｘ Ｂｒｏｗｎ Ｎｏｒ
ｗａｙ （ＬＢＮ）Ｆｌ ラットをハルランスプラグ−
ダウレイ社（Ｈａｒｌａｎ Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌ
ｅｙ Ｃｏｍｐａｎｙ）、ウオルカースビレ、メリーラ
ンドから得た。
ＡＣＩ ラットをシモンセンラボラトリーズ（Ｓｉｍｏ
ｎａｅｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ ）、ジルｏイ、
カリホルニアから得た。１２〜１８週令、体退会００〜
４００２の雄性Ｉ、ｅｗｉｓ Ｘ Ｂｒｏｗｎ Ｎｏｒ
ｗａｙ （ＬＢＮ）Ｆｌ ラットをハルランスプラグ−
ダウレイ社（Ｈａｒｌａｎ Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌ
ｅｙ Ｃｏｍｐａｎｙ）、ウオルカースビレ、メリーラ
ンドから得た。
動物から採取した肺細胞及びリンパ節細胞を、１０襲牛
脂児血清ＣＭ、Ａ、バイオプロダクツ（Ｂｉｏ−ｐｒｏ
ｄｕｃｔｓ ）、ウオルカースビレ、メリーランド〕、
４０ｐＭ ２−メルカプトエタノール［Ｊ、Ｔ、ベーカ
ーケミカル社（Ｂａｋｅｒ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ、
）、フィリップスプルグ、二ニーシャーシー〕、２ｔ
ｎＭＩ。
脂児血清ＣＭ、Ａ、バイオプロダクツ（Ｂｉｏ−ｐｒｏ
ｄｕｃｔｓ ）、ウオルカースビレ、メリーランド〕、
４０ｐＭ ２−メルカプトエタノール［Ｊ、Ｔ、ベーカ
ーケミカル社（Ｂａｋｅｒ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ、
）、フィリップスプルグ、二ニーシャーシー〕、２ｔ
ｎＭＩ。
−グルｐミン〔ギブ：ｒ （Ｑｉｂｃｏ ） 〕、１２
ｍＭヘベス（ギプコ）、１００Ｕ／づペニシリン、１０
０μ２／−ストレプトマイシン（ギプコ）を補充したＲ
ＰＭＩ １６４０ （ギプコ）中で試験した。細胞懸濁
液をＬ２０ Ｏｒｐｍにて１０分間遠心分離し、そして
２回洗浄した。
ｍＭヘベス（ギプコ）、１００Ｕ／づペニシリン、１０
０μ２／−ストレプトマイシン（ギプコ）を補充したＲ
ＰＭＩ １６４０ （ギプコ）中で試験した。細胞懸濁
液をＬ２０ Ｏｒｐｍにて１０分間遠心分離し、そして
２回洗浄した。
方法
ＭＬＲを、１３．４− ＲＴＡで処理した刺激細胞を用
いて行った。比較のため、１３．４、及び１３．４＋ラ
ビット補体を用いてＭＬＲを行った。未処理同種同系Ｍ
ＬＲ、及び未処理同種異系ＭＬＲを対照として行った。
いて行った。比較のため、１３．４、及び１３．４＋ラ
ビット補体を用いてＭＬＲを行った。未処理同種同系Ｍ
ＬＲ、及び未処理同種異系ＭＬＲを対照として行った。
次に手順の詳細を記載する。
１３．４処理 ファルコン３０７２ミクロタイタープレ
ート中で、応答（ＡＣｊ）！Ｉンパ節細胞０．５ Ｘ
１０６／ ０．１ ｍｌを照射処理（３，０００ラド）
された刺６＋ｋ （Ｔ、ＨＮ） ｎ”ｌ細胞Ｉ Ｘ １
０’ ／ ０．１ ｍｌと混合し、そして一連の濃度（
Ｉ Ｘ １０’刺激細胞当り０．００１．０．０１．０
．１．１ｐｙ）のモノクローナル抗体を各ウェルに加え
てＭＬＲ応答を遮断した。培養物を、３７℃において、
加湿雰囲気下、５％ＣＯ２／ ９５ ％ ？気において
４日間インキーベートシ、三ｔｌｉ水素化チミジン（１
μＣｔ、／ウェル）て゛ラベルし、そしてさらに１８時
間インキュベートシた。δ細胞をガラスフィルター（Ｍ
、Ａ、パイオフロタクツ）上で回収し、そしてチミジン
の取り込ミヲ液体ンンチレーション＠１数（ベックマン
ＬＳ６８００、ベツクマンインスッルメンツ社）により
測定した。
ート中で、応答（ＡＣｊ）！Ｉンパ節細胞０．５ Ｘ
１０６／ ０．１ ｍｌを照射処理（３，０００ラド）
された刺６＋ｋ （Ｔ、ＨＮ） ｎ”ｌ細胞Ｉ Ｘ １
０’ ／ ０．１ ｍｌと混合し、そして一連の濃度（
Ｉ Ｘ １０’刺激細胞当り０．００１．０．０１．０
．１．１ｐｙ）のモノクローナル抗体を各ウェルに加え
てＭＬＲ応答を遮断した。培養物を、３７℃において、
加湿雰囲気下、５％ＣＯ２／ ９５ ％ ？気において
４日間インキーベートシ、三ｔｌｉ水素化チミジン（１
μＣｔ、／ウェル）て゛ラベルし、そしてさらに１８時
間インキュベートシた。δ細胞をガラスフィルター（Ｍ
、Ａ、パイオフロタクツ）上で回収し、そしてチミジン
の取り込ミヲ液体ンンチレーション＠１数（ベックマン
ＬＳ６８００、ベツクマンインスッルメンツ社）により
測定した。
１３．４＋補体処理 刺激肺細胞を一連の濃度（刺激細
胞ｉ ｘ ｉ ｏ’当クシ０００１．０．０１．０．１
、Ｉ Ｐ？ ）ノ１３．４に！Ｊ、４°Ｃにて３０分間
前処理し、２回洗浄し、そして１：２０稀釈したラビッ
ト補体と共に３７℃にて３０分間インキュベートした。
胞ｉ ｘ ｉ ｏ’当クシ０００１．０．０１．０．１
、Ｉ Ｐ？ ）ノ１３．４に！Ｊ、４°Ｃにて３０分間
前処理し、２回洗浄し、そして１：２０稀釈したラビッ
ト補体と共に３７℃にて３０分間インキュベートした。
２回洗浄した後、細胞を照射処理（３，０００ラド）シ
、フルオレッセントジアセテー ト（ＦＤＡ）によシＩ
Ｘ １０’生細胞１０．１づ培地に調整し、そして応
答細胞としてのリンパ節細胞０．５ Ｘ １０’ ／
０．１ｍｇと共に４日間培養した。上記のようにしてチ
ミジンの取込みを測定した。
、フルオレッセントジアセテー ト（ＦＤＡ）によシＩ
Ｘ １０’生細胞１０．１づ培地に調整し、そして応
答細胞としてのリンパ節細胞０．５ Ｘ １０’ ／
０．１ｍｇと共に４日間培養した。上記のようにしてチ
ミジンの取込みを測定した。
にて１０分間遠心分離した。１００ ｍＭのラクトース
（１３，４−ＲＴＡ中の全リジン汚染物を不活性化する
ため）、及び一連の濃度（刺激細胞１×１０６当シ０．
００１．０．０１．０．１．１μ２の抗体）の１３．４
− ＲＴＡ を刺激細胞のベレットに加え、そして３７
°Ｃにて６０分間インキュベートした。
（１３，４−ＲＴＡ中の全リジン汚染物を不活性化する
ため）、及び一連の濃度（刺激細胞１×１０６当シ０．
００１．０．０１．０．１．１μ２の抗体）の１３．４
− ＲＴＡ を刺激細胞のベレットに加え、そして３７
°Ｃにて６０分間インキュベートした。
０．１ｍｇの培地中照射処理され１３．４−ＲＴＡ処理
された生存肺細胞ｉ ｘ ｉ ｏ’を、リンパ節細胞０
．５×１０６と共に４日間培養し、そしてチミジンの取
シ込みを上記のようにして測定した。
された生存肺細胞ｉ ｘ ｉ ｏ’を、リンパ節細胞０
．５×１０６と共に４日間培養し、そしてチミジンの取
シ込みを上記のようにして測定した。
これらの処理により達成される抑制の程度（イ）を次の
式により計算した。
式により計算した。
ｌ−実験ＭＬＲのｅｐｍ−未処理
一未処理同種同系ＭＬＲのｃｐｒｎ
これらの試験の結果を第１図に示す。抑制（４）が抗体
濃度に対してプロットされている。刺激細胞Ｉ Ｘ １
０’当り１μｍの濃度において示されるように、１３．
４−ＲＴＡは１００％の抑制をもたらしそして比較処理
のいずれよりも効果的であった。
濃度に対してプロットされている。刺激細胞Ｉ Ｘ １
０’当り１μｍの濃度において示されるように、１３．
４−ＲＴＡは１００％の抑制をもたらしそして比較処理
のいずれよりも効果的であった。
刺激細胞としてＡＣＩ 細胞を用い、そして応答細胞と
してＬＢＮ細胞を用いる逆のＭＬＲを行ったが、はとん
ど同じ結果が得られた。４°Ｃにおいて５分間の短時間
にわたｆｉ １３．４− ＲＴＡ と共にインキュベー
トした刺激細胞を用いた場合にも、同様の結果がイＱら
れた。
してＬＢＮ細胞を用いる逆のＭＬＲを行ったが、はとん
ど同じ結果が得られた。４°Ｃにおいて５分間の短時間
にわたｆｉ １３．４− ＲＴＡ と共にインキュベー
トした刺激細胞を用いた場合にも、同様の結果がイＱら
れた。
−２ｂ ＞マウスをジャクソンラボラトリーズ（Ｊａｃ
ｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ ）、バーハーバ
−、メインから得た。１２〜１８週令の成退会マウスを
使用した。
ｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ ）、バーハーバ
−、メインから得た。１２〜１８週令の成退会マウスを
使用した。
ＡｌＪ系マウスに、下記の方法に従って１３．４−ＲＴ
Ａ を複数回（４回）まで注射した。２■×１；１叩×
２（１時間毎）；及び０．５〜×４（１時間毎）。最初
の注射から４時間後に、動物から牌細胞を採取し、そし
て例１の「細胞」の項に記載した方法により処理した。
Ａ を複数回（４回）まで注射した。２■×１；１叩×
２（１時間毎）；及び０．５〜×４（１時間毎）。最初
の注射から４時間後に、動物から牌細胞を採取し、そし
て例１の「細胞」の項に記載した方法により処理した。
これらの細胞を用い、て、ｆｌｌｌのｒ１３．４−ＲＴ
Ａ処理」 の項に記載したのと同様にしてＭＬＲを行っ
た。接合体によ多処理されていないマウスからのＡ／Ｊ
牌細胞を用いて対照ＭＬＲを行った。第２図は、仁れら
のＭＬＲにおいて観察されるチミジンの取シ込み（ｃｐ
ｍとして表示する）を示す棒グラフである。
Ａ処理」 の項に記載したのと同様にしてＭＬＲを行っ
た。接合体によ多処理されていないマウスからのＡ／Ｊ
牌細胞を用いて対照ＭＬＲを行った。第２図は、仁れら
のＭＬＲにおいて観察されるチミジンの取シ込み（ｃｐ
ｍとして表示する）を示す棒グラフである。
図に示されているように、ＭＬＲは、１３．４−ＲＴＡ
によるＡ／Ｊ刺激細胞の生体内処理によシ実質的に抑
制された。注射回数の増加に伴って観察される効果の増
加は、接合体が生体内で不安定であることを示している
と信じられる。
によるＡ／Ｊ刺激細胞の生体内処理によシ実質的に抑
制された。注射回数の増加に伴って観察される効果の増
加は、接合体が生体内で不安定であることを示している
と信じられる。
上記のこの発明を実廟するための態様の、医学、免疫学
及び／又は分子生物学における当業者に自明な変法は、
この発明の範囲内のものである。
及び／又は分子生物学における当業者に自明な変法は、
この発明の範囲内のものである。
第１図は例１にｆｔ、：、 ｔｌｉ１４ Ｌ／たＭＬＲ
の結果を示すグラフであシ、そして第２図は例２に記載
したＭＬＲの結果を示すグラフである。 特許出願代理人 弁理士 青 木 朗 ｊｒＪ＋ｒ＋士 西舘和之 弁理士 福 本 積 弁理士 山 口 昭 之 ゾｒす１１士 西山雅也 手続補正書（方式） 昭和５９年１２月７３日 特許庁長官 志 賀 学殿 １、事件の表示 昭和５９年 特許願 第１９１８５３号２、発明の名称 イムノトキシン ３、補正をする者 事件との関係 特許出願人 ４、代理人 （外４ 名） ５、補正命令の日付 自発補正 ６、補正の対象 図 面 ７、補正の内容 図面の浄書（内容に変更なし） ８、添付書類の目録 浄書図面 １通
の結果を示すグラフであシ、そして第２図は例２に記載
したＭＬＲの結果を示すグラフである。 特許出願代理人 弁理士 青 木 朗 ｊｒＪ＋ｒ＋士 西舘和之 弁理士 福 本 積 弁理士 山 口 昭 之 ゾｒす１１士 西山雅也 手続補正書（方式） 昭和５９年１２月７３日 特許庁長官 志 賀 学殿 １、事件の表示 昭和５９年 特許願 第１９１８５３号２、発明の名称 イムノトキシン ３、補正をする者 事件との関係 特許出願人 ４、代理人 （外４ 名） ５、補正命令の日付 自発補正 ６、補正の対象 図 面 ７、補正の内容 図面の浄書（内容に変更なし） ８、添付書類の目録 浄書図面 １通
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、移植前に同種移植片を、同種移植片によシ担持され
ているＩａ同等抗原に対するイムノトキシンと接触せし
めることを特徴とする同種移植片の免疫原性を低下せし
める方法。 ２、同種移植片を、同種移植片のＩａ同等抗原担持細胞
Ｉ Ｘ １０’当シ約１μ２のイムノトキシンと接触せ
しめることを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の方
法。 ３、同種移植片がヒト同種移植片であシ、そしてｉａ同
等抗原がＩ−ＩＬＡ−ＤＩＮ抗原である特許請求の範囲
第１埃１１Ｌ載の方法。 ４、イムノトキシンが抗−Ｊａ同等モノクローナル抗体
とりシンＡ鎖との接合体である特許請求の範囲第１項記
＋Ｉｉ２の方法。 ５、同種移植片によシ担持されている■ａ同等抗原に対
するイムノトキシンによシ前処理された同種移植片。 ６、同種移植片がヒト同種移植片であシ、そしてｉａ同
等抗原がＨＬＡ−ＤＲ抗原である特許請求の範囲第５項
記載の同種移植片。 ７、イムノトキシンが抗−ｉａ同等モノクローナル抗体
とりシンＡ鎖との接合体である特許請求の範囲第５項記
載の同種移植片。 ８、抗体に接合した毒素成分を含んで成シ、そして該抗
体が同種移植片に担持されたＩａ同等抗原に対するもの
であることを特徴とする同種移植片の免疫原性を低下せ
しめるために使用されるイムノトキシン。 ９、同種移植片がヒト同種移４μ片であシ、そしてＩａ
同等抗原がＨＬＡ−ＤＲ抗原である特許請求の範囲第８
項記載のイムノトキシン。 １０、毒素成分がリシンＡ鎖であシ、そして抗体がモノ
クローナル抗体である特許請求の範囲第８項記載のイム
ノトキシン。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US53260983A | 1983-09-15 | 1983-09-15 | |
| US532609 | 2000-03-22 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60105629A true JPS60105629A (ja) | 1985-06-11 |
Family
ID=24122465
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59191853A Pending JPS60105629A (ja) | 1983-09-15 | 1984-09-14 | イムノトキシン |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0140109B1 (ja) |
| JP (1) | JPS60105629A (ja) |
| AT (1) | ATE60233T1 (ja) |
| CA (1) | CA1221030A (ja) |
| DE (1) | DE3483996D1 (ja) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5202252A (en) * | 1982-03-05 | 1993-04-13 | Houston Biotechnology Inc. | Monoclonal antibodies against lens epithelial cells and methods for preventing proliferation of remnant lens epithelial cells after extracapsular extraction |
| US4904481A (en) * | 1985-04-17 | 1990-02-27 | The Board Of Trustess Of Leland Stanford University | Method of conferring immuno-tolerance to a specific antigen |
| US4681760A (en) * | 1985-04-17 | 1987-07-21 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Method of conferring immunotolerance to a specific antigen |
| US5011684A (en) * | 1985-09-05 | 1991-04-30 | Beth Israel Hospital Association | Lysing or blocking unwanted cells with IL-2 receptor-specific binding substance |
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| US5616122A (en) * | 1986-11-04 | 1997-04-01 | Baylor College Of Medicine | Methods and compositions for preventing secondary cataracts |
| US5055291A (en) * | 1986-11-04 | 1991-10-08 | Baylor College Of Medicine | Compositions for preventing secondary cataracts |
| NO173974C (no) * | 1986-11-04 | 1994-03-02 | Baylor College Medicine | Fremgangsmaate ved fremstilling av en cytotoksisk blanding |
| US5762933A (en) * | 1987-01-05 | 1998-06-09 | Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale | Method for preventing and treating graft failure in a human patient using a monoclonal antibody specific for leucocyte functional antigen LFA-1 |
| KR0162259B1 (ko) * | 1989-12-05 | 1998-12-01 | 아미 펙터 | 감염성 병변 및 염증성 병변을 검출 및 치료하기 위한 키메라 항체 |
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|---|---|---|---|---|
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| US4489710A (en) * | 1981-06-23 | 1984-12-25 | Xoma Corporation | Composition and method for transplantation therapy |
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-
1984
- 1984-09-14 CA CA000463193A patent/CA1221030A/en not_active Expired
- 1984-09-14 JP JP59191853A patent/JPS60105629A/ja active Pending
- 1984-09-14 AT AT84110998T patent/ATE60233T1/de not_active IP Right Cessation
- 1984-09-14 DE DE8484110998T patent/DE3483996D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1984-09-14 EP EP84110998A patent/EP0140109B1/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0140109A2 (en) | 1985-05-08 |
| DE3483996D1 (de) | 1991-02-28 |
| ATE60233T1 (de) | 1991-02-15 |
| EP0140109B1 (en) | 1991-01-23 |
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| CA1221030A (en) | 1987-04-28 |
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