JPS5965058A - Heneicosapeptide - Google Patents

Abstract

NEW MATERIAL:The heneicosapeptide having the amino acid sequence of formula I (the amino acid residues are represented by the first 3 letters of the English name; provided that Asn is asparagyl, Gln is glutaminyl and Ile is isoleucyl). USE:Useful for assay of the insulin-like growth factor-I (IGF-I) in serum of the patient of pituitary diseases, and also useful as a synthetic intermediate. For example, an antiserum and tracer necessary in the radioimmunoassay of IGF-I can be prepared therefrom. PROCESS:The C-terminal of the hexapeptide having the amino acid sequence of formula II is protected. Three kinds of pentapeptides having the amino acid sequences of formula III, formula IV and formula V are condensed stepwise to the N-terminal of the protected hexapeptide, and if necessary, the protecting group is removed to obtain the heneicosapeptide of formula I .

Description

【発明の詳細な説明】 いたインスリン様成長因子一ｌ（以下，ＩＧＦ−１と略
記する）の測定に関するものである。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION This invention relates to the measurement of insulin-like growth factor-1 (hereinafter abbreviated as IGF-1).

１ＧＦ−Ｉは１９７６年，　Ｒｉｎｄｅｒｋｎｅｃｈｔ
らによりインスリン抗体により抑制されない血中インス
リン様活性物質の一つとして見出され（　Ｐｒｏｃ．　
Ｎａｔｌ．　ｋｃａｄＪｃｉ．ＵＳＡ．７３：　　２８
６５〜２３６９（１９７（３））＋その後彼らによりヒ
ト血清より単離され．その７０個のアミノ酸配列が明、
うかにされた（　Ｊ．Ｂｉａｌ．　Ｏｈｅｍ，　２５３
　：　２７６９＝２７７６（１９７８））ｏ　　Ｚａｐ
ｆ　　らは、この抽出工ＧＦ−Ｉを用いて血清中１ＧＦ
−１をラジオイムノアッセイで測定し，臨床的有用性に
ついても報告した（　Ａｃｔａ　Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ
　、、　９　５　：　５　０　５　〜５１７（１９８０
））が、抽出法では型部精製が煩雑困難で収量も極めて
少なく，満足な方法とは言えない。1GF-I in 1976, Rinderknecht
It was discovered as one of the insulin-like active substances in the blood that is not suppressed by insulin antibodies (Proc.
Natl. kcadJci. USA. 73: 28
65-2369 (197(3)) + later isolated from human serum by them. The 70 amino acid sequence is clear.
(J. Bial. Ohem, 253
: 2769=2776 (1978)) o Zap
f et al. used this extractor GF-I to increase 1GF in serum.
-1 was measured by radioimmunoassay, and the clinical usefulness was also reported (Acta Endocrinol
, 95: 505-517 (1980
)) However, in the extraction method, purification of the mold part is complicated and difficult, and the yield is extremely low, so it cannot be said to be a satisfactory method.

その後，　Ｚａｐｆらにより前記抽出工ＧＦ−工を用い
たラジオイムノアッセイにより下垂体疾患等における血
清９工Ｇｖ　−　工測定の意砂が確認された（　Ｊ．Ｏ
ｌｉｎ．　Ｉｎｖｅｓｔ．、　６　８　：１３　２１〜
ｌ３８　０（１９８１））が日常検査に応用し得る測定
系の確立には至っていない。Subsequently, Zapf et al. confirmed the significance of measuring serum Gv-1 in pituitary diseases etc. by radioimmunoassay using the above-mentioned extractant GF-4 (J.O.
lin. Invest. , 6 8:13 21~
1380 (1981)) has not yet established a measurement system that can be applied to routine testing.

そこで本発明者は工ＧＦ一工の優れたラジオイムノア，
セイ法を確立すべく研究を重ね。Therefore, the inventor of the present invention has developed an excellent radio immuno
Repeated research to establish the Sei method.

、工９ｙ一工の２６位から４６位に相当するアミノ酸配
列（Ｉ）を有するヘンエイコサペプチドを製し，本物質
を用いた工Ｇ，　Ｆ一工のラジオイムノアッセイを確立
した。We prepared a heneicosapeptide having the amino acid sequence (I) corresponding to positions 26 to 46 of G, G, F, and G, and established a radioimmunoassay of G and F, using this substance.

Ａｏｎ　−Ｌｙｎ　−Ｐｒｏ　−Ｔｈｒ　−Ｇｌｙ　−
Ｔｙｒ　−Ｇｕｙ　−Ｓｅｒ　−５ｅｒ−Ｓｅｒ　−Ａ
ｒｇ　−Ａｒｇ−Ａｌａ　−Ｐｒｏ　−Ｇｉｎ　−Ｔｈ
ｒ　−Ｇｌｙ−工１ｅ−Ｖａｌ　−Ａｓｐ　−Ｇｌｕ　
　（１）なお１本明細書において各アミノ酸残基は原則
として英語名最初の３文字で示し９例外としてＡＢｎは
アスパラギニル、　Ｇｉｎはグルタミニル。Aon -Lyn -Pro -Thr -Gly -
Tyr-Guy-Ser-5er-Ser-A
rg-Arg-Ala-Pro-Gin-Th
r -Gly-ENG1e-Val -Asp -Glu
(1) In this specification, each amino acid residue is generally indicated by the first three letters of its English name.9 Exceptions are ABn for asparaginyl and Gin for glutaminyl.

工１ｅはイソロイシルを示す。1e indicates isoleucyl.

以下特別に示す以外は本明細書中ではこの式（１）のア
ミノ酸配列を有するペプチドをヘンエイコサペプチドと
称す。Unless otherwise specified below, the peptide having the amino acid sequence of formula (1) is referred to herein as a heneicosapeptide.

このペプチドは実施例に示した如く、適切な保護基と能
率的なフラグメンテーションにより簡便に製造すること
ができる。すなわち、　’Ｉｈｒ−Ｇｕｙ−工１ｅ　−
Ｖａｌ　−Ａｓｐ　−Ｇｌｕで表わされるアミノ酸配列
を有するヘキサペプチドのＣ端を保護し。This peptide can be easily produced using appropriate protecting groups and efficient fragmentation, as shown in the Examples. i.e. 'Ihr-Guy-E -
The C-terminus of a hexapeptide having an amino acid sequence represented by Val-Asp-Glu was protected.

このＮ端にＡｒｇ　−Ａｒｇ　−Ａｌａ　−Ｐｒｏ　−
Ｇｉｎ、Ｔｙｒ　−Ｇｌｙ　−８ｅｒ　−Ｓｅｒ　−Ｓ
ｅｒ及びＡｓｎ　−ＩＩｙｅ　−Ｐｒｏ　−Ｔｈｒ　−
Ｇｌｙで表わされるアミノ酸配列を有する３種のペンタ
ペプチドを段階的に縮合させる。その後必要に応じ保護
基を脱離させる。Arg −Arg −Ala −Pro −
Gin,Tyr-Gly-8er-Ser-S
er and Asn -IIye -Pro -Thr -
Three types of pentapeptides having the amino acid sequence represented by Gly are condensed stepwise. Thereafter, the protecting group is removed if necessary.

このものは式（１）で示した基本的なアミノ酸配列を有
していれば目的に応じ多少の修飾を加えてもよく、アッ
セイ用または合成中間体として使用することができる。As long as this product has the basic amino acid sequence shown in formula (1), it may be modified to some extent depending on the purpose, and can be used for assay purposes or as a synthetic intermediate.

タトえば、ヘンエイコサペプチドから工ＧＦ−工のラジ
オイムノア、セイに必要な抗血清及びトレーサーを製造
することができる。抗血清作成のための免疫用抗原とし
てはヘンエイコサペプチドとアルブミン、グロブリン、
アスカリス抽出物等のタンパクとの縮合体を使用するの
が適当であり、トレーサーはハンターとグリーンウッド
の方法（Ｎａｔｕｒｅ　、　１９４　：　４９４　（１
９６２）　）を用いることにより得ることができる。In other words, the antiserum and tracer necessary for the radioimmunoassay of GF-GF can be produced from the heneicosapeptide. Antigens for immunization to create antiserum include heneicosapeptide, albumin, globulin,
It is appropriate to use a condensate with a protein such as Ascaris extract, and the tracer can be prepared using the method of Hunter and Greenwood (Nature, 194: 494 (1).
962) ).

次に実施例を挙げて説明するが、アミノ酸はグリシンを
除いてＬ−型を用いた。また９本明細書中に記載の記号
は次の意味を有する。Next, an example will be described, in which L-type amino acids were used except for glycine. Further, the symbols described in this specification have the following meanings.

２：　ベンジルオキシカルボニル Ｂｏａ　ｅ三級ブチルオキシカルボニルＴｏａ：ｐ−ト
ルエンスルホニル ＮＯ７：ニトロ ０Ｂｕｔ　：三級エチルエステル ＯＭＯ：メチルエステル Ｏ８ｕ：Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミドエステル　　　
。2: Benzyloxycarbonyl Boa eTertiary butyloxycarbonyl Toa: p-Toluenesulfonyl NO7: Nitro0But: Tertiary ethyl ester OMO: Methyl ester O8u: N-hydroxysuccinimide ester
.

ＤＭＦ　ニジメチルホルムアミド １１０Ｂｔ：　１−ヒドロキシベンゾトリアゾールＤ０
０＝　ジシクロへキシルカルボジイミドＴＨＦ：　テト
ラヒドロフラン また、薄層クロマトグラフィーはシリカゲル薄層を用い
、　Ｒｆはｌ−ブタノール・酢酸・水（４：１：５）を
、　Ｒｆ”は１−ブタノール・ピリジン・酢酸・水（８
０：２０：６：２４）を展開溶媒としたときの値である
。DMF Nidimethylformamide 110Bt: 1-Hydroxybenzotriazole D0
0 = Dicyclohexylcarbodiimide THF: Tetrahydrofuran Also, thin layer chromatography uses a thin layer of silica gel, Rf is 1-butanol/acetic acid/water (4:1:5), Rf'' is 1-butanol/pyridine/acetic acid・Water (8
0:20:6:24) as the developing solvent.

例１：原料の製法 Ａ、　（１）　　Ｚ　−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−ＯＭｅＺ　−
Ｔｈｒ−ＯＨ１０，１３９をＤＭＦ７５−に溶かした溶
液に、　ＨＯＢｔ　５．４１６水溶性カルボジイミド塩
酸塩７．６６９及びＨ−Ｇｕｙ　−ＯＭｅ塩酸塩５．２
８９のトリエチルアミン（５，６，７）を含むＤＭＦ（
７５ｍ＋／）溶液を０℃で攪拌しながら添加した。混合
物を０℃で２時間、さ らに室温で２４時間攪拌したのち溶媒 を留去した。Example 1: Raw material manufacturing method A, (1) Z -Thr-Gly-OMeZ -
In a solution of Thr-OH10,139 in DMF75-, HOBt 5.416 water-soluble carbodiimide hydrochloride 7.669 and H-Guy-OMe hydrochloride 5.2
DMF containing 89 triethylamine (5,6,7) (
75m+/) solution was added with stirring at 0°C. The mixture was stirred at 0° C. for 2 hours and then at room temperature for 24 hours, and then the solvent was distilled off.

残渣を酢酸エチルに溶解し、ＩＮ− クエン酸、飽和炭酸水素ナトリウム溶 液及び飽和食塩水で洗浄したのち、無 水硫酸ナトリウム上で乾燥し、ついで 溶媒を留去した（以上の処理操作を以 下常法と称す。）。The residue was dissolved in ethyl acetate and IN- Citric acid, saturated sodium bicarbonate solution After washing with liquid and saturated saline, Dry over sodium hydrosulfate, then The solvent was distilled off (the above process was repeated as follows). It is called the lower common law. ).

残液をｎ−ヘキサンで処理すること により固化させたのち、酢酸エチル・ ｎ−ヘキサンより再結晶した。収量 １０．８３９．融点１１５〜１１６℃０Ｒｆ’　０．６
　？　、　Ｒｆ　　０．７２゜〔α）、％９−６５．０
°（０−１，０７，メタノール）。The residual liquid was solidified by treatment with n-hexane, and then recrystallized from ethyl acetate/n-hexane. Yield 10.839. Melting point 115-116℃0Rf' 0.6
? , Rf 0.72゜[α), %9-65.0
°(0-1,07, methanol).

元素分析　Ｃ，。Ｈ，Ｎ、Ｏ，として 計算値　０５７．００．　　Ｈ６，４６，Ｎ　９．９７
実験値　０５６．９６．　　Ｈ６，２４，Ｎ　９．９０
（２）　　Ｚ　−Ｐｒｏ　−Ｔｈｒ　−Ｇｕｙ　−ＯＭ
ｅ上記生成物５．３３５９をＩＮ−塩酸 を含むメタノール（１６，４５，ａｇ）中でパラジウム
黒を触媒として１７時間接 接触光を行なった。濾過後溶媒を留去 し、残渣を五酸化リン・水酸化カリウ ム上で乾燥した（　Ｒｆ’　０．３６　、　Ｒｆ”ｏ、
７ｏ）。Elemental analysis C. Calculated value as H, N, O, 057.00. H6, 46, N 9.97
Experimental value 056.96. H6, 24, N 9.90
(2) Z -Pro -Thr -Guy -OM
e The above product 5.3359 was exposed to contact light for 17 hours in methanol (16,45, ag) containing IN-hydrochloric acid using palladium black as a catalyst. After filtration, the solvent was distilled off, and the residue was dried over phosphorus pentoxide/potassium hydroxide (Rf' 0.36, Rf''o,
7o).

Ｚ　−Ｐｒｏ−０Ｈ８，６９９のＤＭＦ（１５ｍ）溶液
にＮ−メチルモルホリ ン１．６３−及びクロルギ酸イソブチル１．９２−を−
１５℃で攪拌しながら加えた。これに上記還元体のトリ
エチル アミン（２，３１ｍｇ）を含むＤＭＩＦ（１５ｍ）溶液
を一り５℃°で攪拌しながら加えたのち一１０℃で１分
間攪拌 した。この混合物を濃縮したのち酢酸 エチルに溶解し常法により処理した。In a DMF (15 m) solution of Z-Pro-0H8,699, 1.63- of N-methylmorpholine and 1.92- of isobutyl chloroformate were added.
It was added with stirring at 15°C. To this was added a solution of DMIF (15 m) containing the above reduced triethylamine (2.31 mg) at 5° C. with stirring, followed by stirring at -10° C. for 1 minute. After concentrating this mixture, it was dissolved in ethyl acetate and treated in a conventional manner.

得られた油状の残渣に石油エーテルを 加え固化させたのち、酢酸エチル・ｎ −ヘキサンから再結晶して目的のトリ ペプチドを得た。収ｆｆ１４．１３り、融点元素分析　
０２゜Ｈ２７Ｎ３０７とじて計算値　０５７．００．　
　Ｈ６，４６，Ｎ　９．９７実験値　０５６．９６．　
　Ｈ６，２４，Ｎ　９．９０（３）　　Ｚ　−Ｉｙｓ　
（ＴｏＢ）　−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−ＯＭｅＺ　−
Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−ＯＭｅ　４．１５９をメタノ
ール中でパラジウム黒を触媒と して２０時間接接触光した。濾過後。Petroleum ether was added to the obtained oily residue to solidify it, and then recrystallized from ethyl acetate/n-hexane to obtain the desired tripeptide. Convergence ff14.13, melting point elemental analysis
Calculated value as 02°H27N307 057.00.
H6,46,N 9.97 Experimental value 056.96.
H6,24,N 9.90(3) Z-Iys
(ToB) -Pro-Thr-Gly-OMeZ -
Pro-Thr-Gly-OMe 4.159 was contacted with light for 20 hours in methanol using palladium black as a catalyst. After filtration.

溶媒を留去し残液をエーテルで処理し たのち減圧乾燥し、固化物を得た。The solvent was distilled off and the residual liquid was treated with ether. Afterwards, it was dried under reduced pressure to obtain a solidified product.

Ｚ　−Ｌｙｓ　（Ｔｏｅ）　−ＯＨ４，２８９をＤＭＦ
５０−に溶かした溶液にＨＯＢｔＬ６０９．ＤＯＯ２，
０８９及び上記 還元体のＤＭＩＦ　（５０ｓｄ）溶液を０℃で攪拌しな
がら加えた。混合物を０℃ で２時間、さらに室温で２０時間攪拌 したのち濃縮し、酢酸エチルに溶解し た。これを常法により処理し、得られ た油状の残渣にｎ−ヘキサンを加えガ ム状の物質を得た。このガム状の物質。Z -Lys (Toe) -OH4,289 in DMF
HOBtL609. DOO2,
A solution of 089 and the above reduced product in DMIF (50 sd) was added at 0° C. with stirring. The mixture was stirred at 0° C. for 2 hours and then at room temperature for 20 hours, concentrated, and dissolved in ethyl acetate. This was treated in a conventional manner, and n-hexane was added to the resulting oily residue to obtain a gummy substance. This gummy substance.

をエーテルで処理したのち減圧乾燥し 固化物を得た。収量５．９（１゜ Ｒｆ　　Ｏ，７４，Ｒｆ　　Ｏ，８３゜〔α〕腎−５０
，３°（０−２，１１，メタノ−ル）。was treated with ether and then dried under reduced pressure to obtain a solidified product. Yield 5.9 (1°Rf O, 74, Rf O, 83° [α] Kidney-50
, 3° (0-2, 11, methanol).

元素分析　０１８Ｈ４５’１ｌｏｌｏｓとシテ計算値　
０５６．８２．　　Ｈ６，４４，Ｎ　９．９５実験値　
０５６．１８．　　Ｈ６，４２，Ｎ　９．６９（４）　
　Ｚ−Ａｓｎ−ＩＩｙｓ（Ｔｏｓ）−Ｐｒｏ−’Ｔｈｒ
−Ｇｌｙ−ＯＭθ 上記生成物２．８２９をＩＮ−塩酸を 含むメタノール（ｓｏｂ）中でパラジ ウム黒を触媒として８０時間接触還元 を行なった。濾過後濃縮し、残渣をエ ーテル処理したのちエーテルをデカン テーションにより除き、メタノール− エーテルを加えて固化させた（　Ｒｔｌｏ、８０　、　
　Ｒｒｌｌ　　０．６５　）。Elemental analysis 018H45'1lolos and shite calculation value
056.82. H6, 44, N 9.95 experimental value
056.18. H6,42,N 9.69(4)
Z-Asn-IIys(Tos)-Pro-'Thr
-Gly-OMθ The above product 2.829 was subjected to catalytic reduction in methanol (sob) containing IN-hydrochloric acid using palladium black as a catalyst for 80 hours. After filtration and concentration, the residue was treated with ether, the ether was removed by decantation, and methanol-ether was added to solidify (Rtlo, 80,
Rrll 0.65).

上記還元体をトリエチルアミンを含 むＤＭＦ２ａｍに溶解した溶液に２− Ａｓｎ−ｏｓｕ　１．４５りをｏｔ＋で攪拌しながら加
えた。混合物を４℃で１５時間 攪拌し、さらにｚ　−Ａｓｎ−０８ｕ　Ｏ，２９９を０
℃で攪拌しながら加えたのち。To a solution in which the above reduced product was dissolved in DMF 2am containing triethylamine, 1.45 μl of 2-Asn-osu was added while stirring at ot+. The mixture was stirred at 4°C for 15 hours, and z-Asn-08u O,299 was added to 0.
After adding with stirring at ℃.

４℃で５時間攪拌した。溶媒を留去し たのち、残渣を０℃でＩＮ−クエン酸 で処理した。得られたガム状物に水を 加え、さらに酢酸エチルを加えて懸濁 させた。有機層を水洗したのち、濃縮 乾固した。収量２．４８ｇ。融点１６２〜１６８℃。The mixture was stirred at 4°C for 5 hours. distill off the solvent Afterwards, the residue was diluted with IN-citric acid at 0°C. Processed with. Add water to the resulting gum. Add ethyl acetate and suspend. I let it happen. After washing the organic layer with water, concentrate It was dried and solidified. Yield: 2.48g. Melting point 162-168°C.

Ｒｆ’　０．４８　、　Ｒｆ　　Ｏ，７８゜〔α）ｐ−
２ｏ、７°（０−１，２４，ＤＭＦ）元素分析　ＣＩ？
Ｈ１ｌＩＮ？ｏｌ！ｓ　として計算値　０５４．３３．
　　Ｈ６，２８，Ｎ　ＩＩＪ）９実験値　０５４．２８
．　　Ｈ６，２６，Ｎ　１１．７６「を加水分解物中の
アミノ酸の比率 Ａｓｐ　Ｏ，９５、Ｇ１７１．０１　、　Ｐｒ。Rf' 0.48, Rf O, 78° [α) p-
2o, 7° (0-1, 24, DMF) elemental analysis CI?
H1lIN? ol! Calculated value as s 054.33.
H6,28,N IIJ)9 Experimental value 054.28
．． H6,26,N 11.76'Proportion of amino acids in the hydrolyzateAsp O,95,G171.01, Pr.

Ｌ、０８　、　Ｔｈｒ　１．００　、　Ｌｙｓ　　Ｏ，
９０（５）　　Ｚ−Ａｓｎ−Ｉ７ｙｓ（Ｔｏｓ）−Ｐｒ
ｏ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ　　Ｂ・−ＮＩＩＮＨ２ Ｚ　−Ａｓｎ　−ＴＪｙｓ　（Ｔｏｓ　）　−Ｐｒｏ　
−Ｔｈｒ　−Ｇｌｙ−ＯＭｅ　　１．００　ｐをメタノ
ール８ｏ−に溶解し、０℃でヒドラジン水和物 ０．６−を加えた。混合物を室温で２日間放置し、濃縮
し１−ブタノールに溶 解したのち水で洗浄した。溶媒を留去 したのち残渣にエーテルを加え固化さ せた。メタノール・エーテルよす再結 晶を行ない製品とした。収量０．８８り。L, 08, Thr 1.00, Lys O,
90(5) Z-Asn-I7ys(Tos)-Pr
o-Thr-Gly B・-NIINH2 Z -Asn -TJys (Tos) -Pro
1.00 p of -Thr -Gly-OMe was dissolved in 8 o of methanol, and 0.6 o of hydrazine hydrate was added at 0°C. The mixture was left at room temperature for 2 days, concentrated, dissolved in 1-butanol, and washed with water. After the solvent was distilled off, ether was added to the residue to solidify it. The product was obtained by recrystallizing with methanol and ether. Yield: 0.88 ri.

融点１７３〜１７４℃。Melting point: 173-174°C.

Ｒｆ’　０．４０　、　Ｒｆ　　Ｏ，７４゜元素分析　
’１１６Ｈ１１１’１ｌｏｌｌｓ　’　＋Ｈｔｏとして
計算値　０５２．２９．　　Ｈ６，Ｌ４．　　Ｎ　１５
．２４実験値　０５２゜８８．　　Ｈ６，２１，Ｍ　１
４．９９酸加水分解物中のアミノ酸の比率 Ａｓｐ　１．０８　、　Ｇｌｙ　１．０１　、　Ｐｒ。Rf' 0.40, Rf O, 74° elemental analysis
Calculated value as '116H111'1lolls' +Hto 052.29. H6, L4. N15
．． 24 Experimental value 052°88. H6, 21, M 1
4.99Ratio of amino acids in acid hydrolyzate Asp 1.08 , Gly 1.01 , Pr.

Ｏ，９９、Ｔｈｒ　Ｏ，９２、Ｌｙｓ　Ｏ，９，１（１
）　　−Ｂｏａ　−Ｔｙｒ　−Ｇｌｙ　−ＮＨＮＨ２Ｂ
ｏａ−Ｔｙｒ−ＯＨ５，６４９をＤＭＩＦ４０％ｔに溶
かした溶液にＨＯＢｔ　２．７０９゜ＤＯＯ４，１２ｇ
及びＨ−Ｇｌｙ　−ＯＭｅ塩酸塩８．００９のトリエチ
ルアミン （３，８６，７）を含むＤＭＦ（２０ｒ／）溶液を０℃
で攪拌しながら添加した。O,99, Thr O,92, Lys O,9,1(1
) -Boa -Tyr -Gly -NHNH2B
Add HOBt 2.709°DOO4,12g to a solution of oa-Tyr-OH5,649 dissolved in DMIF40%t.
A DMF (20 r/) solution containing triethylamine (3,86,7) and H-Gly-OMe hydrochloride 8.009 was heated at 0°C.
was added while stirring.

混合物を０℃で１時間さらに室温で ２０時間攪拌したのち溶媒を留去し酢 酸エチルに溶解した。これを常法にて 処理し、得られた油状物にエーテル・ ｎ−ヘキサンを加え結晶化させたのち メタノール−エーテル（１：１）に溶 解し、活性炭処理のあと、酢酸エチル ・ｎ−ヘキサンから再結晶を行ない。The mixture was heated at 0°C for 1 hour and then at room temperature. After stirring for 20 hours, the solvent was distilled off and vinegar was added. Dissolved in ethyl acid. Do this in the usual way The resulting oil is treated with ether and After adding n-hexane and crystallizing Dissolved in methanol-ether (1:1) After decomposition and activated carbon treatment, ethyl acetate - Recrystallize from n-hexane.

ジペプチドのメチルエステル体 ５．７９９を得た（ＲｆＯ，８５゜ Ｒｆ　　　Ｏ，８８）。Methyl ester of dipeptide 5.799 was obtained (RfO, 85° Rf O, 88).

上記メチルエステルをメタノール ５０−に溶解し、ヒドラジン水和物 ８．９＋＋＋ｌを加えたのち、室温で２４時間放置した
。混合物を水を飽和した１− ブタノールで抽出したのち、メタノー ル−エーテルから再結晶を行ない目的 物を得た。収ｆｉ５．０１９．融点１５７〜１６０℃。The above methyl ester was dissolved in 50 methanol, 8.9 +++ l of hydrazine hydrate was added, and the mixture was left at room temperature for 24 hours. The mixture was extracted with 1-butanol saturated with water, and then recrystallized from methanol-ether to obtain the desired product. Collection fi5.019. Melting point: 157-160°C.

Ｒｆ’　０．６７　、　Ｒｆ”　０．７７゜〔α）％’
　＋１　ａ、ｏｏ（０−Ｌ９１．　、ｉｌタノール〕。Rf' 0.67, Rf"0.77゜[α)%'
+1 a, oo (0-L91., iltanol).

元素分析　０．。Ｈ２４Ｎ４０５として計算値　０５４
．５（、Ｈ６，８７，Ｎ　１５．９０実験値　０５４．
７０．　　Ｈ６，８−２，Ｎ　１５．８８（２）　　Ｚ
　−Ｓｅｒ　−Ｓｏｒ　−ＯＭｅＺ−Ｆ３ｅｒ−ＨＨＨ
Ｈ，２，５８９をＤＭＩ＋’２０−に溶カルだ溶液に６
Ｎ−塩酸／ ジオキサン５．０１−及び亜硝酸イソアミルト３４−を
一１５℃で激しく攪拌 しながら加えた。混合物をトリエチル アミンで中和したのちＨ−Ｓｅｒ　−ＯＭｅｌ、８５９
のトリエチルアミン （１，６８，ｊ）を含むＤＭｌｒ　（２０常ｌ）溶液を
一１５℃で加えた。混合物を 一１０℃で２時間、さらに４℃で２０ 時間攪拌したのち溶媒を留去し酢薗エ チルに溶解した。これを常法にて処理 したのちエーテルを加えて結晶化させ。Elemental analysis 0. . Calculated value as H24N405 054
．． 5 (, H6, 87, N 15.90 experimental value 054.
70. H6,8-2,N 15.88(2) Z
-Ser -Sor -OMeZ-F3er-HHH
Dissolve H, 2,589 in DMI+'20- and add 6
N-hydrochloric acid/dioxane 5.01 and isoamyl nitrite 34 were added at -15° C. with vigorous stirring. After neutralizing the mixture with triethylamine, H-Ser-OMel, 859
A solution of DMlr (20 liters) containing triethylamine (1,68,j) was added at -15°C. The mixture was stirred at -10°C for 2 hours and then at 4°C for 20 hours, then the solvent was distilled off and the mixture was dissolved in ethyl vinegar. After treating this in a conventional manner, ether was added to crystallize it.

サラにメタノール−エーテルから再結 晶して製品とした。収５１２．５２９゜融点１４２〜１
４３℃。The product was then recrystallized from methanol-ether. Yield 512.529° Melting point 142-1
43℃.

〔α〕背−４，２°（０−１，１４，メタノール）元素
分析　ＣヤＨ２ＯＮ２Ｏ？として 計算値　０５２．９４．　　Ｈ５，９２，Ｎ　８．１？
実験値　０５＆１３．　　Ｈ５，９２，Ｎ　８．１７（
８）　　Ｚ　７　Ｓｅｒ　−Ｓｅｒ　−Ｓｅｒ　−ＯＭ
。[α] Back -4,2° (0-1,14, methanol) Elemental analysis Cya H2ON2O? Calculated value as 052.94. H5, 92, N 8.1?
Experimental value 05 & 13. H5, 92, N 8.17 (
8) Z7 Ser -Ser -Ser -OM
.

Ｚ−３ｅｒ−８ｅｒ−ＯＭｅ　４．７０９をＩＮ−塩酸
を含むメタノール（１，３，８ｍ）中でパラジウム黒を
触媒として２６時間 接触還元を行なった。濾過後溶媒を留 失して固化物を得た。Z-3er-8er-OMe 4.709 was subjected to catalytic reduction for 26 hours in methanol (1,3,8m) containing IN-hydrochloric acid using palladium black as a catalyst. After filtration, the solvent was distilled off to obtain a solidified product.

Ｚ−８ｅｒ−ＮＨＮＨ２４，１９９の６Ｎ−塩酸／ジオ
キサン（８，３０ｔｄ）を含むＤＭｙ（３ｏｇ）溶液に
一１５℃で攪 拌しながら亜硝酸イソアミル２．２２ｄを加え、トリエ
チルアミンで中和した のち、上記還元体のトリエチルアミン （１，９３，ｊ）を含むＤＭＦ　（８０ｇＬｔ）溶液を
一１５℃で攪拌しながら加えた。To a DMy (3 og) solution containing Z-8er-NHNH24,199 in 6N-hydrochloric acid/dioxane (8,30 td), 2.22 d of isoamyl nitrite was added while stirring at -15°C, and after neutralization with triethylamine, the above A DMF (80 gLt) solution containing the reduced product triethylamine (1,93,j) was added at -15° C. with stirring.

混合物を一１５℃で１時間、さらに ４℃で２０時間攪拌したのち溶媒を留 失し、残渣を水で飽和した１−ブタノ ールで抽出した。濃縮し、酢酸エチル から結晶化させ、さらにメタノール・ 酢酸エチルから再結晶し製品とした。Heat the mixture at -15°C for 1 hour, then After stirring at 4℃ for 20 hours, the solvent was distilled off. 1-butano and the residue was saturated with water. Extracted with a tool. Concentrate to ethyl acetate Crystallized from methanol and The product was recrystallized from ethyl acetate.

収量４，１５９　、融点２０４〜２０７℃。Yield 4,159, melting point 204-207°C.

Ｒｆｌ　０．６７、Ｒｆｌ　０．７６　。Rfl　0.67　, Rfl　0.76　.

〔α）　”＋　１０．７°（０−１，１８，ＤＭＦ　）
元素分析　Ｃ１１１Ｈ２ｓＮ８０ｏとして計算値　０５
０．５８．　　Ｈ５，９０，Ｎ　９．８３実験値　０５
０．３９．　　Ｈ５，７６、Ｎ　９．７９（４）　　Ｂ
ｏＣ−Ｔｙｒ　−Ｇｌｙ　−Ｓｅｒ　−Ｓｅｒ　−Ｓｏ
ｒ　−ＯＭｅＺ−８ｅｒ−８ｅｒ−８ｅｒ−ＯＭｅ　　
２．０５９を１０％酢酸（２０ｍ）を含むメタノー ル（１５０ａｔ　）中でパラジウム黒を触媒として１５
時間接触還元を行なった。[α)”+10.7°(0-1,18,DMF)
Elemental analysis Calculated value as C111H2sN80o 05
0.58. H5, 90, N 9.83 experimental value 05
0.39. H5,76, N 9.79 (4) B
oC-Tyr-Gly-Ser-Ser-So
r -OMeZ-8er-8er-8er-OMe
2.059 was dissolved in methanol (150 at) containing 10% acetic acid (20 m) using palladium black as a catalyst.
Time contact reduction was performed.

濾過後、溶媒を留去し残渣をエーテル により固化した（　Ｒｒｌ　Ｏ，１９、ＲｔＲＯ，５７
）。After filtration, the solvent was distilled off and the residue was solidified with ether (RrlO, 19, RtRO, 57
).

Ｂｏｏ　−Ｔｙｒ　−Ｇｌｙ　−ＮＨＮＨ２２，０３９
をＤＭＦＩＯ艷に溶かした溶液に６Ｎ− 塩酸／ジオキサン２．８８４を一１５℃で攪拌しなから
°加えたのち、亜硝酸イソアミル０．７７−を加え、ト
リエチルアミンで中和した。この溶液に上記還 元体のトリエチルアミン（０，６７，７）を含むＤＭＦ
　（１０コ）溶液を一１５℃で攪拌しながら加え、−１
５℃で１時 間、さらに４℃で１５時間攪拌した。Boo-Tyr-Gly-NHNH22,039
To a solution prepared by dissolving 6N hydrochloric acid/dioxane in a DMFIO vessel, 2.884 g of 6N hydrochloric acid/dioxane was added at -15° C. while stirring, and then 0.77 g of isoamyl nitrite was added, followed by neutralization with triethylamine. DMF containing the above reduced triethylamine (0,67,7) in this solution
(10) Add the solution while stirring at -15℃, -1
The mixture was stirred at 5°C for 1 hour and then at 4°C for 15 hours.

溶媒を留去し、残渣を水に溶解し酢酸 でｐＨを８−４に調整したのち、１− ブタノールで抽出した。溶媒を留去し たのち残渣をエーテルにより固化し。The solvent was distilled off, the residue was dissolved in water, and acetic acid was added. After adjusting the pH to 8-4 with Extracted with butanol. distill off the solvent Afterwards, the residue was solidified with ether.

さらにメタノール・エーテルから再結 晶し製品とした。収量２．５４９．融点１５６〜１５８
℃。The product was further recrystallized from methanol/ether. Yield 2.549. Melting point 156-158
℃.

〔α麿−１３，２°（０−１，００，メタノール〕。　
　　　　Ｃ６ 元素分析　Ｃ工Ｈ８゜Ｎ、Ｏ□、・−）Ｈ２Ｏとして計
算値　０５０．４０．　　Ｈ６，４５，Ｎ　１１．８０
実験値　０５０．３５．　　Ｈ６，３５，Ｈ１１，２８
（５）　　Ｂｏａ　−Ｔｙｒ　−Ｇｌｙ　＝　Ｓｅｒ　
−Ｓｏｒ　−Ｓｅｒ　−ＮＨＮＨ。[αMaro-13,2° (0-1,00, methanol)].
C6 Elemental analysis C engineering H8°N, O□, ·-) Calculated value as H2O 050.40. H6,45,N 11.80
Experimental value 050.35. H6, 35, H11, 28
(5) Boa −Tyr −Gly = Ser
-Sor -Ser -NHNH.

ＢＱＯ−Ｔｙｒ　−Ｇｕｙ　−Ｓｅｒ　−５ｅｒ−タｅ
ｒ　−ＯＭｅｌ、２２ｇをメタノール・エタノール （１：１）２０−に溶かした溶液に ０℃でビドラジン水和物１．０−を加えた。混合物を室
温で２０時間放置した のち、沈澱物を濾別し、エタノールで 洗浄した。得られた粗生成物１．２２９をメタノールに
懸濁させ、エーテルに より沈澱させ目的物を得た。収量 １．１　ａ　９　、融点２１５℃（分解）。BQO-Tyr-Guy-Ser-5er-tae
1.0-hydrazine hydrate was added to a solution of 22 g of r-OMel dissolved in 20-methanol/ethanol (1:1) at 0°C. After the mixture was left at room temperature for 20 hours, the precipitate was filtered off and washed with ethanol. The obtained crude product (1.229 g) was suspended in methanol and precipitated with ether to obtain the desired product. Yield 1.1 a 9 , melting point 215°C (decomposed).

Ｒｆｌ　Ｏ，４Ｂ　、　Ｒｆｌ　０．７３゜〔α〕曾−
８３．６°（０−１，０４，水）。Rfl O,4B, Rfl 0.73゜[α] So-
83.6° (0-1,04, water).

元素分析　’！１ｌＨ１ｌＮ？０１１として計算値　０
４８．９３．　　Ｈ６，４１，Ｎ　１５．９Ｂ実験値　
０４８．８７．　　Ｈ６，５８，Ｎ　１５．５３（１）
　　Ｚ　−Ｐｒｏ−Ｇｉｎ　−ＮＨｍＨＢｏｃＺ−Ｇｉ
ｎ−１１ＨＩＪＨＢｏｃ　７．８９９をメタノール中で
パラジウム黒を触媒として接 触還元した。濾過し、溶媒を留去した のち、残渣をエーテルで処理した（Ｒｆｌｏ、４７．Ｒ
ｆｌ　０．６４）　　。Elemental analysis'! 1lH1lN? Calculated value as 011 0
48.93. H6,41,N 15.9B experimental value
048.87. H6,58,N 15.53(1)
Z-Pro-Gin-NHmHBocZ-Gi
n-11HIJHBoc 7.899 was catalytically reduced in methanol using palladium black as a catalyst. After filtration and evaporation of the solvent, the residue was treated with ether (Rflo, 47.R
fl 0.64).

Ｚ−Ｐｒｏ−ＯＨ４，４９９をＤＭＰ１５ｍに溶解した
溶液にＮ−メチルモルホリ ブ′ ン１．９８−及びクロルギ酸イソ←チル２．８４−を−
１８℃で攪拌しながら加えた。これに上記還元体のＮ−
メチル モルホリン（ｇ、２ｏ−）を含むＤＭＦ（１０ｍ）溶液
を−１８℃で攪拌しな がら加え一１０℃で１分間攪拌した。In a solution of Z-Pro-OH4,499 dissolved in DMP15m, N-methylmorpholibone 1.98- and iso←thyl chloroformate 2.84- were added.
The mixture was added at 18° C. with stirring. To this, the N-
A DMF (10 m) solution containing methylmorpholine (g, 2o-) was added at -18°C with stirring, and the mixture was stirred at -10°C for 1 minute.

溶媒を留去したのち、酢酸エチルに溶 解し常法により処理した。残渣をエー テルによす固化し、メタノール・エー テルから再結晶して製品とした。収量 ？、６１９　、融点１７７〜１７９℃。After distilling off the solvent, dissolve in ethyl acetate. It was then treated in a conventional manner. Remove the residue It solidifies into methanol and methanol. The product was recrystallized from tel. yield ? , 619, melting point 177-179°C.

Ｒｆｌ　Ｏ，７７、Ｒｆｌ　Ｏ，８６゜（α）Ｄ−７１
８°（０−２，５５，メタノール） 元素分析　’ｔｇＨｓｓＮｓｏ’ｒ　として計算値　０
５６．２６．　　Ｈ６，’ｌ’ｌ、　　Ｎ　１４．２５
実験値　０５６．１９．　　Ｈ６，８０，Ｎ　１４．２
９（２）　　Ｚ　−Ａｌａ　−Ｐｒｏ　−Ｇｉｎ　−Ｎ
ＨＩＪＨＢｏａＺ　−Ｐｒｏ　−Ｇｌｎ　−ＮＨＨＨＢ
ｏａ　　５．７６ｇをメタノール中でパラジウム黒を触
媒と して４時間接触還元した。濾過後溶媒 を留去し固化物を得た（　Ｒｆｌ　Ｏ，８５。Rfl O, 77, Rfl O, 86° (α) D-71
8° (0-2,55, methanol) Elemental analysis Calculated value as 'tgHssNso'r 0
56.26. H6,'l'l, N 14.25
Experimental value 056.19. H6,80,N 14.2
9(2) Z -Ala -Pro -Gin -N
HIJHBoaZ -Pro -Gln -NHHHB
5.76 g of OA was catalytically reduced in methanol using palladium black as a catalyst for 4 hours. After filtration, the solvent was distilled off to obtain a solidified product (Rfl O, 85).

Ｒｆ璽　０．６５）。Rf seal 0.65).

Ｚ−Ａｌａ−ＯＨ２，６２９をＤＭＦ １５−に溶解した溶液にＮ−メチルモ ルホリン１．２９−及びクロルギ酸イソブチル１．５２
−を−１８℃で撹拌しながら加えたのち、上記還元体の
Ｎ−メ チルモルホリン（１，２９ｍ）を含む ＤＭＦ　（１５ｔｇ）溶液を一１８℃で攪拌しながら加
え一１０℃で１分間攪拌 した。溶媒を留去したのち、酢酸エチ ルで抽出し、エーテルにより固化させ。A solution of Z-Ala-OH2,629 in DMF 15- was added with 1.29- and 1.52-N-methylmorpholine and isobutyl chloroformate.
- was added with stirring at -18°C, then a DMF (15tg) solution containing the above reduced N-methylmorpholine (1,29m) was added with stirring at -18°C, and the mixture was stirred at -10°C for 1 minute. . After distilling off the solvent, the mixture was extracted with ethyl acetate and solidified with ether.

メタノール・エーテルから再結晶した。Recrystallized from methanol/ether.

収量５．５４９．融点１１４〜１１７℃。Yield 5.549. Melting point 114-117°C.

Ｒｆｌ　　Ｏ，７１，Ｒｆ履　０．８５゜〔α）”−８
８，４°（０−１，８５，メタノール）。Rfl O, 71, Rf 0.85゜〔α)”-8
8,4° (0-1,85, methanol).

元素分析　’２６Ｈ３８Ｎ６０ｇ・＋Ｈ２０として計算
値　０５４．６３．　　Ｈ６，８８，Ｎ　１４．７０実
験値　０５．４．６８．　　Ｈ６，８９，Ｎ　１４．．
７６（ａ）　　Ｚ−Ａｒｇ　（Ｎｏ、　）　−Ａｌａ−
Ｐｒｏ−Ｇｌｎ−ＮＨＮＨＢｏｃ Ｚ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｇｉｎ−ＮＨＮＨＢｏｃ　２．２
５９をメタノール５〇−中でパラジウム黒 を触媒として１５５時間接触還した。Elemental analysis '26H38N60g・+H20 Calculated value 054.63. H6,88,N 14.70 Experimental value 05.4.68. H6,89,N 14. ．．
76(a) Z-Arg (No, ) -Ala-
Pro-Gln-NHNHBoc Z-Ala-Pro-Gin-NHNHBoc 2.2
59 was catalytically reduced in 50 methanol using palladium black as a catalyst for 155 hours.

濾過後溶媒を留去し、残渣にエーテル を加えたのち乾燥させ固化物を得た （　Ｒｆｌ　Ｏ，２６、Ｒｆｌ　Ｏ，６０）。After filtration, the solvent was distilled off and the residue was diluted with ether. was added and dried to obtain a solidified product. (Rfl O, 26, Rfl O, 60).

Ｚ−Ａｒｇ（Ｎｏ、）−０Ｈ１，２９９を６Ｍア１０−
に溶かした溶液にＮ−メチルモ ルホリン０．４−及びクロルギ酸イソブチル０．４７−
を−１８℃で攪拌しながら加えた。この混合物に上記還
元体の Ｎ−メチルモルホリン（０，４ｍ）を含むＤＭＦ（ｌＯ
−）溶液を°−１５℃で攪拌しながら加えたのち一１０
℃で１ 分間攪拌した。溶媒を留去したのち。Z-Arg(No,)-0H1,299 to 6M A10-
N-methylmorpholine 0.4- and isobutyl chloroformate 0.47-
was added with stirring at -18°C. This mixture contains DMF (lO
-) After adding the solution with stirring at -15°C,
The mixture was stirred at ℃ for 1 minute. After distilling off the solvent.

残渣にエーテルを加えガム状物を得。Add ether to the residue to obtain a gum-like substance.

飽和炭酸水素す）　ＩＪウム溶液で洗浄し　゛１−ブタ
ノールψ酢酸エチル（１：　１゜１５０．１１／）に溶
解した。有機層を水で洗浄したのち１０％酢酸でｐＨ４
・０に調節し、１−ブタノールで飽和した ２％酢酸溶液で洗浄した。有機層をま とめて溶媒を留去したのち、残渣をエ ーテルから固化し、メタノール・エー テルより再結晶し°（目的物を得た。The mixture was washed with a saturated IJ solution and dissolved in 1-butanol/ethyl acetate (1:1/150.11/). After washing the organic layer with water, the pH was adjusted to 4 with 10% acetic acid.
- Adjusted to 0 and washed with 2% acetic acid solution saturated with 1-butanol. After the organic layers were combined and the solvent was distilled off, the residue was solidified from ether and recrystallized from methanol/ether (the desired product was obtained).

収量２，７１９　、融点１５２℃（分解）。Yield 2,719, melting point 152°C (decomposition).

Ｒｆｌ　Ｏ，５６、Ｒｆｌ　Ｏ，８２゜〔α〕背−３９
，８°（０−１，０２，ＤＭＦ）元素分析　’ｊ２Ｈ４
９Ｎｌ１０１１・＋Ｈ，Ｏとして計算値　０４９．７３
．　　Ｈ６，５２，Ｎ　１４゜９４実験値　０４９．６
５．　　Ｈ６，４２，Ｎ　１４．８８（４）　　Ｚ　−
Ａｒｇ　（Ｎｏ、　）　−Ａｒｇ　−Ａｌａ−Ｐｒｏ　
−Ｇｉｎ　−ＮＨＮＨＢｏ。Rfl O, 56, Rfl O, 82° [α] back -39
,8°(0-1,02,DMF) elemental analysis 'j2H4
Calculated value as 9Nl1011・+H,O 049.73
．． H6,52,N 14°94 Experimental value 049.6
5. H6,42,N 14.88(4) Z −
Arg (No, ) -Arg -Ala-Pro
-Gin-NHNHBo.

Ｚ　−Ａｒｇ　（Ｎｏ２）　−Ａｌａ　−Ｐｒｏ　−Ｇ
ｉｎ　−ＮＨＩＪＨＢｏｃ　　２，７８　ｇをメタノー
ル（５０＋ｄ）、酢酸（８−）及び水 （４２，ｇ）の混合液中パラジウム黒を触媒として４０
０時間接触還した。Z -Arg (No2) -Ala -Pro -G
in -NHIJHBoc 2,78 g was dissolved in a mixture of methanol (50+d), acetic acid (8-) and water (42, g) using palladium black as a catalyst.
The contact was returned for 0 hours.

濾過後、濾液を濃縮し、残渣を凍結乾 燥し、固化物を得た（ｕｒｌＯ，１７゜ＲｆｌＩ　Ｏ，
６３）。After filtration, the filtrate was concentrated and the residue was freeze-dried to obtain a solidified product (urlO, 17°RflIO,
63).

Ｚ　−Ａｒｇ　（ＮＯ２）　−ＯＨ１−１６９をＤＭＦ
１０ｃ＋ｔＩＣ溶かした溶液にＮ−メチルモ　Ｄ。Z -Arg (NO2) -OH1-169 in DMF
Add N-methylmoD to the solution containing 10c+tIC.

ルボリン０．３６−及びクロルギ酸イソブチル０．４２
−を一１８℃で攪拌しながら加えた。この混合物に上記
還元体 のＤＭＦ　（１５ｓ＋ｔ）溶液を一１８℃で攪拌しなが
ら加えたのち一１０℃で１ 分間攪拌した。溶媒を留去し、残渣を 酢酸エチルから固化させた。得られた 粗生成物（Ｌ２．５９）　　を１−ブタノールに溶解し
、２％酢酸溶液で洗浄した。Ruborin 0.36- and isobutyl chloroformate 0.42-
- was added with stirring at -18°C. A DMF (15s+t) solution of the above reduced product was added to this mixture at -18°C with stirring, and then stirred at -10°C for 1 minute. The solvent was evaporated and the residue was solidified from ethyl acetate. The obtained crude product (L2.59) was dissolved in 1-butanol and washed with 2% acetic acid solution.

溶媒を留去したのち残渣をエーテルに より固化し、さらにメタノール・酢酸 エチルから再結晶を行ない製品とした。After distilling off the solvent, the residue was dissolved in ether. It becomes more solidified and further methanol/acetic acid The product was recrystallized from ethyl.

収量２．３９　ｇ、融点１６６〜１６８℃。Yield 2.39 g, melting point 166-168°C.

Ｒｆｌ　００３７　、　Ｒｆｌ　Ｏ，７？。Rfl　0037　,　Rfl　O,7? .

〔α〕￥）−ａａ、ａｏ（０−１，１５，メタノール）
元素分析　Ｃｌ１ｌＨ６ｊＮｊ５０１２・ＯＨ，０ＯＯ
Ｈ・２Ｈ２０として 計算値　０４８゜０４１．　　Ｈ６，９５，Ｎ　２］、
、０１実験値　０４７．８５．　　Ｈ６，６２，’Ｎ　
２１．０２（リ　　Ｚ−’ｌｈｒ　−Ｇｌｙ−ＮＨＮＨ
。[α] ¥)-aa, ao (0-1,15, methanol)
Elemental analysis Cl1lH6jNj5012・OH,0OO
Calculated value as H・2H20 048°041. H6,95,N2],
, 01 experimental value 047.85. H6,62,'N
21.02 (Li Z-'lhr -Gly-NHNH
.

Ｚ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−ＯＭｅ　４．３９のエタノール（
８０ｍ）溶液にヒドラジン水和物 フ一を０℃で加え、室温で２０時間放 置した。沈澱を濾別し、濃硫酸及び五 酸化リン上で減圧乾燥した。得られた 粗生成物（４，２２９）を熱エタノールに懸濁し、冷却
した後、沈澱物を濾取 した。収ｆｉＬ９７ｇ、融点１７０〜 １７１℃。Z-Thr-Gly-OMe 4.39 ethanol (
80m) To the solution was added hydrazine hydrate at 0°C, and the mixture was left at room temperature for 20 hours. The precipitate was filtered off and dried under reduced pressure over concentrated sulfuric acid and phosphorus pentoxide. The obtained crude product (4,229) was suspended in hot ethanol, and after cooling, the precipitate was collected by filtration. Yield: 97g, melting point: 170-171°C.

Ｒｆｌ　Ｏ，５７、Ｒｆｌ　Ｏ，８２゜〔α〕蟹−Ｌｌ
’　（０−１，８８，Ｄ　Ｍ　Ｆ’　）元素分析　Ｃｌ
４Ｈ２ｏＮ４０５として計算値　０５１．８５．　　Ｈ
６，２２，Ｎ　１７．２７実験値　０５１．６８．　　
Ｈ６，１９，Ｎ　１７．２４（２）　　　　　Ｚ−Ｖａ
ｌ−Ａｅｐ（ＯＤｕｔ）−Ｇｌｕ（ＯＢｕｔ）２Ｚ−Ａ
ｓｐ（ＯＢｕｔ）　−ＯＨ６，４７９のＴＨＦ（５０−
３溶液にＮ−メチルモルポリ ＞　２２　ｖｄ及びクロルギ酸イソブチル２．６４□−
を−１８℃で攪拌しながら加えた。Rfl O, 57, Rfl O, 82° [α] Crab-Ll
'(0-1,88,DM F') Elemental analysis Cl
Calculated value as 4H2oN405 051.85. H
6,22,N 17.27 Experimental value 051.68.
H6,19,N 17.24(2) Z-Va
l-Aep(ODut)-Glu(OBut)2Z-A
sp(OBut) -OH6,479 THF(50-
3 solution of N-methylmolpoly>22 vd and isobutyl chloroformate 2.64□-
was added with stirring at -18°C.

この溶液にＨ−Ｇｌｕ　（０Ｂｕｔ　）、塩酸塩５．９
２９のＮ−メチルモルホリン （２，２＊／　）を含むＴＨＦ　（５ｏ＠ｔ）の溶液を
一１８℃で攪拌しながら加えたのち 一１０℃で１分間攪拌した。溶媒を留去したのち、残渣
をエーテルに溶解し、常法により処理した。残渣をｎ−
ヘキサンで２回処理したのち、減圧乾燥してジ ペプチドＺ　−Ａｓｐ　（ＯＢｕｔ）−Ｇｌｕ（ＯＢｉ
ｚｔ）２１０．０４９（油状物）を得た（ｎｆ　Ｏ，８
６゜ ＲｒＯ，８３）。得られた油状物をメ タノール中でパラジウム黒を触媒とし て２時間接触還元を行なった（Ｒｆ’ ０．７３　、　Ｒｆ　　Ｏ，８）。濾過し、溶媒を留去
したのち、残液を減圧乾燥した。In this solution, H-Glu (0But), hydrochloride 5.9
A solution of THF (5o@t) containing 29 N-methylmorpholine (2,2*/ ) was added with stirring at -18°C, and then stirred at -10°C for 1 minute. After evaporating the solvent, the residue was dissolved in ether and treated in a conventional manner. Residue n-
After treatment with hexane twice, the dipeptide Z-Asp(OBut)-Glu(OBi
zt) 210.049 (oil) was obtained (nf O,8
6°RrO, 83). The obtained oil was subjected to catalytic reduction in methanol using palladium black as a catalyst for 2 hours (Rf' 0.73, Rf O, 8). After filtration and distilling off the solvent, the residual liquid was dried under reduced pressure.

Ｚ−’Ｖａｌ−ＯＨ４，０２９のＴ　ＨＦ（３０ｍ）溶
液にＮ−メチルモルホリ ン（１，７６、／）及びクロルギ酸イソブチル２．１１
−を−１８℃で攪拌しながら加えた。この溶液に上記還
元体のＮ −メチルモルホリン（１，７６−ｄ）を含むＴＩＰ（８
０ｇＩり溶液を一１８℃で攪拌しながら加えたのち、−
１０℃で １分間攪拌した。溶媒を留去したのち。A solution of Z-'Val-OH4,029 in THF (30 m) contains N-methylmorpholine (1,76,/) and isobutyl chloroformate 2.11
- was added with stirring at -18°C. This solution contains TIP (8) containing the reduced form N-methylmorpholine (1,76-d).
After adding 0gI solution with stirring at -18℃, -
The mixture was stirred at 10°C for 1 minute. After distilling off the solvent.

残渣をエーテルに溶解し、常法により 処理した。残渣をｎ−ヘキサンにより 結晶化し、さらに酢酸エチル・ｎ−ヘ キサンから再結晶を行ない製品とした。Dissolve the residue in ether and use the usual method Processed. The residue was diluted with n-hexane. Crystallized and further diluted with ethyl acetate/n-hexyl The product was recrystallized from xane.

収量８．０９９　、融点１４５〜１４７℃０Ｒｆｌ　Ｏ
，？　８　、　Ｒｆｌ　Ｏ，８２゜〔α〕腎−８５，９
°（ａ−ｉ、４ｇ、メタノール）元素分析　０８４Ｈ，
、Ｎ３０．。として計算値　０６１．５２．　　Ｈ８，
０５，Ｎ　６．３３実験値　０６１．．８７．　　Ｈ７
，９９，Ｎ　６．４７（３）ｚ−工１ｅ　−Ｖａｌ　−
Ａｓｐ　（０Ｂｕｔ　）　−Ｇｌｕ（ｏｎｕｔ）。Yield 8.099, melting point 145-147℃0RflO
，? 8, Rfl O, 82° [α] Kidney-85, 9
°(ai, 4g, methanol) elemental analysis 084H,
, N30. . Calculated value as 061.52. H8,
05, N 6.33 Experimental value 061. ．． 87. H7
,99,N 6.47(3)z-Work1e -Val-
Asp(0But)-Glu(onut).

Ｚ　−Ｖａｌ−Ａｏｐ　（０Ｂｕｔ　）　−Ｇｌｕ　（
０Ｂｕｔ　）。Z -Val-Aop (0But) -Glu (
0But).

５．３４９をメタノール中でパラジウム黒を触媒として
２０時間接接触光した （　Ｒｆｌ　Ｏ，６８、ＲｆＩＩｏ、７６　）。濾過し
溶媒を留去したのち残渣を減圧乾燥し た。5.349 was catalyzed in methanol with palladium black as a catalyst for 20 hours (RflO, 68, RfIIo, 76). After filtration and distilling off the solvent, the residue was dried under reduced pressure.

Ｚ−１１ｅ−ＯＨ２，１８９をＴ　ＨＩＦ５０−に溶か
した溶液にＮ−メチルモ ルホリン０．８８５−及びりｐルギ酸イソブチル１．０
６−を−１８℃で攪拌しながら加えたのち、これに上記
還元体 のＮ−メチルモルホリン（０，８８５ｍｇ）を含むＴＨ
Ｆ（ａｎｄ）溶液を一１８℃で攪拌しながら加えた。−
１０℃で１ 分間攪拌したのち、溶媒を留去し酢酸 エチルに溶解した。常法処理により得 られた酢酸エチル抽出物を石油エーテ ルにより固化し、酢酸エチル・ｎ−ヘ キサンから再結晶を行ない製品とした。In a solution of Z-11e-OH2,189 dissolved in T HIF50-, 0.885-N-methylmorpholine and 1.0-isobutyl p-purformate were added.
After adding 6- with stirring at -18°C, TH containing the above reduced N-methylmorpholine (0,885 mg) was added.
The F(and) solution was added with stirring at -18°C. −
After stirring at 10°C for 1 minute, the solvent was distilled off and the mixture was dissolved in ethyl acetate. The ethyl acetate extract obtained by conventional treatment was solidified with petroleum ether and recrystallized from ethyl acetate/n-hexane to obtain a product.

収量ｆｉ、４５９．融点１８１〜１８２℃。Yield fi, 459. Melting point: 181-182°C.

Ｒｆｌ　Ｏ，８Ｑ　、　ＲｆｌＩ　Ｏ，９８。Rfl　O,8Q　,　RflI　O,98.

〔α〕腎−４８，２°（０−ＬＯ８，メタノール） 元素分析　０４０Ｈ６４Ｎ４０１１として計算値　０６
１．８４．　　Ｈ８，３０，Ｂｌ　７．２１実験値　０
６１．５３．　　Ｈ８，１６，Ｎ　７．２１（４）　　
Ｚ　−Ｔｈｒ　−Ｇｌｙ−工Ｒｅ　−Ｖａｌ　−Ａｓｐ
　（０Ｂｕｔ　）−Ｇｌｕ（ＯＢｕｔ）２ ２−よりｅ　−Ｍａｌ　−Ａｓｐ　（０Ｂｕｔ　）　−
Ｇｌｕ　（ｏｎｕｔ）。[α] Kidney -48.2° (0-LO8, methanol) Elemental analysis Calculated value as 040H64N4011 06
1.84. H8,30,Bl 7.21 Experimental value 0
61.53. H8, 16, N 7.21 (4)
Z -Thr -Gly-TechRe -Val -Asp
(0But)-Glu(OBut)2 2-from e-Mal-Asp (0But)-
Glu (onut).

２．５２９をメタノール中パラジウム黒を触媒として２
４時間接触還元した。2.529 in methanol with palladium black as catalyst 2
Contact reduction was carried out for 4 hours.

濾過し、溶媒を留去したのち残渣をｎ −ヘキサンで処理し、減圧乾燥して固 化物を得た（　Ｒｆｌ　Ｏ，６４、Ｒｆｎ　Ｏ，８２）
Ｚ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−ＮＨＮＨ２１，２６９をＤＭＦ　
１５−に溶かした溶液に６Ｎ−塩酸／ジオキサン１．９
４−及び亜硝酸イソアミル０．５２＠ｔを一１８℃で攪
拌しながら加えた。トリエチルアミンで。After filtering and distilling off the solvent, the residue was treated with n-hexane and dried under reduced pressure to obtain a solidified product (Rfl O, 64, Rfn O, 82).
Z-Thr-Gly-NHNH21,269 in DMF
1.9 of 6N hydrochloric acid/dioxane in a solution dissolved in 15-
4- and 0.52@t of isoamyl nitrite were added at -18 DEG C. with stirring. with triethylamine.

中和したのち、上記還元体のトリエチ ルアミン（ｏ、４５−）を含むＤＭＦ （２ｏ−）溶液を、加え、−１５℃で２時間、さらに４
℃で１８時間攪拌した。After neutralization, a DMF (2o-) solution containing the above reduced triethylamine (o, 45-) was added, and the mixture was heated at -15°C for 2 hours and further for 4 hours.
Stirred at ℃ for 18 hours.

溶媒を留去したのち、残渣にＩＮ−ク エン酸を加えて沈澱物を得、メタノー ル・エーテルから再結晶を行ない製品 とした。収ｉ２．５５９．融点２１６〜２１８℃。After distilling off the solvent, the residue was Add enoic acid to obtain a precipitate, and add methanol Products obtained by recrystallization from Le Ether And so. Yield i2.559. Melting point 216-218°C.

Ｒｆｌ　　Ｏ，９２、Ｒｆ画　０．９４゜〔α〕曾−２
２．６°（０−１，１３，ＤＭＦ）元素分析　０４ｅｌ
Ｈ１４’６０１４として計算値　０５９．０Ｂ、　　Ｉ
（７，９Ｂ、　　Ｎ　８．９９実験値　０５８．８３．
　　Ｈ７，９２，Ｎ　８．９６酸加水分解物中のアミノ
酸の比率 Ａｓｐ　１．０４　、　Ｔｈｒ　１．０８　。Rfl O,92, Rf picture 0.94゜[α]曾-2
2.6° (0-1,13,DMF) elemental analysis 04el
Calculated value as H14'6014 059.0B, I
(7,9B, N 8.99 experimental value 058.83.
H7,92,N 8.96Ratio of amino acids in acid hydrolyzate Asp 1.04, Thr 1.08.

Ｇｌｕ　　１．０４　、　　Ｇｌｙ　　１．０９　。Glu 1.04, Gly 1.09.

Ｖａｌ　　Ｏ，９３、工１ｅｏ、８６ 例２：　　Ｚ−Ａｒｇ（ＮＯ，）−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｐ
ｒＯ−ＧＬｎ−Ｔｈｒ　−Ｇｌｙ−工ｉｓ−’Ｖａｌ−
Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）−Ｇｌｕ（ＯＤｕｔ　）ｔの製法 Ｚ　−Ｔｈｒ　−Ｇｌｙ−工Ｒｅ　−Ｖａｌ　−Ａｓｐ
　（０Ｂｕｔ）　−Ｇｌｕ（ＯＢｕｔ）２１．１２９を
メタノール（５ｏ−）及びＤＭＦ　（１０＊）の混液中
でパラジウム黒を触媒として１８時間接触還元した。濾
過後溶媒を留去し、残渣を五酸化リン上で減圧乾燥して
固化物を得た（　Ｒｆｌ　Ｏ，６７、Ｒｆｌｌｏ、７９
　）。Val O, 93, Eng 1eo, 86 Example 2: Z-Arg(NO,)-Arg-Ala-P
rO-GLn-Thr -Gly-Engineering is-'Val-
Production method of Asp(OBut)-Glu(ODut)t Z -Thr -Gly-Re -Val -Asp
(0But) -Glu(OBut) 21.129 was catalytically reduced in a mixture of methanol (5o-) and DMF (10*) using palladium black as a catalyst for 18 hours. After filtration, the solvent was distilled off, and the residue was dried under reduced pressure over phosphorus pentoxide to obtain a solidified product (Rfl O, 67, Rfllo, 79
).

ｚ　−Ａｒｇ　（Ｎｏ２）　−Ａｒｇ　−Ａｌａ　−Ｐ
ｒｏ　−Ｇｉｎ　−ＮＨＮＨＢＯＩ：！１．８２９をト
リフルオロ酢酸４艷に溶解し。z -Arg (No2) -Arg -Ala -P
ro -Gin -NHNHBOI:! Dissolve 1.829 in trifluoroacetic acid.

室温で４５分間放置したのち、エーテルにより沈澱させ
ヒドラジドを得た（　Ｒｆ’　０．１　Ｇ　。After standing at room temperature for 45 minutes, it was precipitated with ether to obtain hydrazide (Rf' 0.1 G).

Ｒｆ’　０．６９　）　。コｆ）　ヒドラジドをＤＭＦ
ｌｏｆｉ（に溶解した溶液に６Ｎ−塩酸／ジオキサン０
．７２−及び亜硝酸イソアミ／Ｌ−０，１９８−を加え
一１８℃で攪拌した。トリエチルアミンで中和したのち
、トリエチルアミン（０，ｉｏａ＋ｙ）を含むＤＭＦ　
（２０ｍ）に溶解した上記還元体の溶液を一１０℃で攪
拌しながら加えた。Rf'0.69). f) Hydrazide in DMF
Lofi (6N-hydrochloric acid/dioxane solution dissolved in 0
．． 72- and isoamide nitrite/L-0,198- were added and stirred at -18°C. After neutralization with triethylamine, DMF containing triethylamine (0,ioa+y)
A solution of the above reductant dissolved in (20ml) was added at -10°C with stirring.

２時間攪拌したのち、さらに２０時間４℃で攪拌した。After stirring for 2 hours, the mixture was further stirred at 4°C for 20 hours.

溶媒を留去し、残渣を水により固化させ粗生成物を得た
（　１．７５９　）。ＤＭＦ−メタノール−酢酸エチル
より再結晶を行ない製品とした。収Ｊ１．２３．融点２
０２〜２０４℃。The solvent was distilled off and the residue was solidified with water to obtain a crude product (1.759). The product was recrystallized from DMF-methanol-ethyl acetate. Collection J1.23. Melting point 2
02-204℃.

Ｒｆｌ　Ｏ，４０、Ｒｆ”　０．’８２゜〔α）２６−
３０．２°（０−１，０２，ＤＭＦ　）。Rfl O, 40, Rf"0.'82゜[α)26-
30.2° (0-1,02, DMF).

元素分析　０．、Ｈ，、、Ｎ、９０２．　・０Ｈ３００
０Ｈ・５Ｈ２０として 計算値　Ｃ５θ４２．　　Ｈ７，５９，Ｎ　１５．３０
実験値　０５０．５９．　　Ｈ６，９９，Ｎ　１５．５
０酸加水分解物中のアミノ酸の比率 Ａｒｇ　１．８７　、　Ａｓｐ　１．０５．　’１ｌｈ
ｒ’　０．９７゜Ｇｌｕ　２．１０．　Ｐｒｏ　１．０
３．　Ｇ１７１．０１゜Ａｌａ　１．０２　、　Ｖａｌ
　１．０１　、工１ｅｏ、９４例８　：　　Ｉ３ｏｃ−
Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−８ｅｒ−８ｅｒ−８ｅｒ−Ａｒｇ−Ａ
ｒｇ　−Ａｌａ　−Ｐｒｏ　−Ｇ１７１−　Ｔｈｒ　−
Ｇｌｙ−工１ｅ−ｖａｌ−Ａｓｐ（０Ｂｕｔ）　−Ｇｌ
ｕ（ＯＢｕｔ）２の製法Ｚ　−Ａｒｇ　（Ｎ　Ｏ２）　
−Ａｒｇ　−Ａｌａ　−Ｐｒｏ　−Ｇｉｎ　−Ｔｈｒ　
−Ｇｌｙ−工１ｅ　−Ｖａｌ　−Ａｅｐ　（ＯＢｕｔ）
−Ｇｌｕ　（ＯＢｕｔ）。Elemental analysis 0. ,H,,,N,902.・0H300
Calculated value as 0H・5H20 C5θ42. H7,59,N 15.30
Experimental value 050.59. H6,99,N 15.5
0 ratio of amino acids in acid hydrolyzate Arg 1.87, Asp 1.05. '1lh
r' 0.97°Glu 2.10. Pro 1.0
3. G171.01゜Ala 1.02, Val
1.01, Eng1eo, 94 Example 8: I3oc-
Tyr-Gly-8er-8er-8er-Arg-A
rg -Ala -Pro -G171- Thr -
Gly-Eng 1e-val-Asp(0But) -Gl
Production method of u(OBut)2 Z -Arg (N O2)
-Arg -Ala -Pro -Gin -Thr
-Gly- Engineering 1e -Val -Aep (OBut)
-Glu (OBut).

０．１３８９をＤ　Ｍ　Ｆ　（４０”　）　＊酢酸（２
−）及び水（１０ｍ）の混液中でパラジウム黒を触媒と
して４０時間接触還元した。濾過し。0.1389 to DMF (40”) *acetic acid (2
-) and water (10 m), catalytic reduction was carried out for 40 hours using palladium black as a catalyst. Filter.

溶媒を留去したのち、残渣にエーテルを加えるとガム状
物が得られ、これを凍結乾燥した（　Ｒｆｌ　Ｏ，１８
、Ｒｆｌ　Ｏ，６５）。After evaporation of the solvent, ether was added to the residue to obtain a gum, which was lyophilized (Rfl O, 18
, Rfl O, 65).

Ｂｏｃ　−Ｔｙｒ　−Ｇｌｙ　−Ｓｅｒ　−Ｓｅｒ　−
Ｓｅｒ　−ＮＨＮＨ７０，８９７９をＤＭＦＩＯ−に溶
解した溶液に６Ｎ−塩酸／ジオキサン０．３２−及び亜
硝峻イソアミル０．０８６４を−１８℃で攪拌しながら
加えた。トリエチルアミンで中和したのち、混合物にト
リエチルアミン（０，１８ｍｌ　）を含むＤＭＩＦ　（
１５ｍ＜）に溶解した上記還元体の溶液を一１５℃で攪
拌しながら加えた。Boc -Tyr -Gly -Ser -Ser -
To a solution in which Ser -NHNH70,8979 was dissolved in DMFIO-, 6N-hydrochloric acid/dioxane 0.32- and nitrous isoamyl 0.0864- were added with stirring at -18°C. After neutralization with triethylamine, the mixture contained DMIF (0.18 ml) (
A solution of the above reductant dissolved in 15 m<) was added at -15° C. with stirring.

−１５℃で２時間攪拌したのちさらに４℃で１５時間撹
拌した。溶媒を留去したのち、残渣をエーテルより沈澱
させ、得られた沈澱物を５０％酢酸水溶液に溶解し、濾
過したのち濾液を５０％酢酸水溶液を用いたセファデッ
クスＧ−２５カラムクロマトグラフイー（３φｘｉ３８
ｃｍ）により精製した。溶出ピークは薄層クロマトグラ
フィー及び２８０　ｎｍにおける吸光度により求めた。After stirring at -15°C for 2 hours, the mixture was further stirred at 4°C for 15 hours. After evaporating the solvent, the residue was precipitated from ether, the resulting precipitate was dissolved in a 50% acetic acid aqueous solution, filtered, and the filtrate was subjected to Sephadex G-25 column chromatography using a 50% acetic acid aqueous solution ( 3φxi38
cm). Elution peaks were determined by thin layer chromatography and absorbance at 280 nm.

このピークフラクションを収集し凍結乾燥して製品とし
た。This peak fraction was collected and freeze-dried to produce a product.

収量６３０”９ｍ融点２４０℃（分解）。Yield 630"9m Melting point 240°C (decomposed).

Ｒｆｌ　Ｏ，２Ｂ　、　Ｒｆｌ　Ｏ，７３゜〔α〕甘せ
６６．２°（０−１，０１，５０％酢酸水溶液）。Rfl O,2B, Rfl O, 73° [α] Sweetened 66.2° (0-1,01,50% acetic acid aqueous solution).

元素分析　０１１８Ｈ１４２Ｎ２３０！＠・２０Ｈ３０
００Ｈ・５Ｈ，０として 計算値　０５０．１９．　１１７．５５．　　Ｎ　１４
．ｆ！３実験値　０５０．０４．　　Ｈ７，１６，Ｎ　
１４．５６酸加水分解物中のアミノ酸の比率 Ａｒｇ　１．９８．　Ａｓｐ　Ｏ，９９，Ｔｈｒ　６．
８２゜Ｓｅｒ　１．８８．　Ｇｌｕ　２．００．　Ｐｒ
ｏ　１．０８＋Ｇｌｙ　　２．００．　　Ａｌａ　　１
．９６．　　Ｖａｌ　　１．０　１゜■Ｉｓ　　Ｏ，９
４、Ｔｈｙ　　Ｏ，９５例４　：　　Ｚ−Ａｎｎ−ＩＩ
ｙｓ（Ｔｏｓ）−Ｐｒｏ−４’ｈｒ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−
Ｇｌｙ　−Ｓｅｒ　−Ｓｅｒ　−Ｓｅｒ　−Ａｒｇ、　
−Ａｒｇ　−Ａｌａ　−Ｐｒｏ　−Ｇｉｎ　−’Ｉｈｒ
　−Ｇｌｙ−工Ｒｅ　−Ｖａｌ　−Ａｓｐ　−Ｇｌｕ−
ＯＨの製法 Ｂｏａ　−’［’ｙｒ　−Ｇｌｙ　−Ｓｅｒ　−Ｓｅｒ
　−Ｓｅｒ　−Ａｒｇ　−Ａｒｇ　−Ａｌａ　−Ｐｒｏ
　−Ｇｉｎ　−Ｔｈｒ　−Ｇｌｙ−工Ｒｅ　−ｖａｌ　
−Ａｓｐ（ｏｎｕｔ）−Ｇｔｕ（ｏＢｕｔ）２５　ａ　
９　ｒｎｇをアニソール（０，２ｇＬｔ）　　を含むト
リフルオロ酢酸（１−５ｍｇ）に溶解させ、室温で４５
分間放置したのちエーテルから沈澱さぜた（Ｒｆｌｏ、
ｏ　ｏ　、　ＲｔＨＯ，ａ、５　）。Elemental analysis 0118H142N230! @・20H30
Calculated value as 00H・5H,0 050.19. 117.55. N14
．． f! 3 Experimental value 050.04. H7,16,N
14.56 Ratio of amino acids in acid hydrolyzate Arg 1.98. Asp O, 99, Thr 6.
82°Ser 1.88. Glu 2.00. Pr
o 1.08+Gly 2.00. Ala 1
．． 96. Val 1.0 1゜■Is O,9
4, Thy O, 95 Example 4: Z-Ann-II
ys(Tos)-Pro-4'hr-Gly-Tyr-
Gly-Ser-Ser-Ser-Arg,
-Arg -Ala -Pro -Gin -'Ihr
-Gly- Engineering Re -Val -Asp -Glu-
Production method of OH Boa -'['yr -Gly -Ser -Ser
-Ser -Arg -Arg -Ala -Pro
-Gin -Thr -Gly-Re -val
-Asp(onut)-Gtu(oBut)25 a
9 rng was dissolved in trifluoroacetic acid (1-5 mg) containing anisole (0.2 g Lt) and incubated at room temperature for 45 min.
After standing for a minute, it was precipitated from ether (Rflo,
o o, RtHO,a,5).

Ｚ　−Ａｓｎ−Ｌｙｓ　（−Ｔｏｓ）　−Ｐｒｏ−Ｔｈ
ｒ−Ｇｌｙ−Ｎ２Ｈ３４ＢＢ１ｎｇのＤＭＦ（１０ｍｇ
）溶液に６Ｎ−塩酸／ジオキサン０．２６６−及び亜硝
酸イソアミルの１０％ＤＭＦ溶液１０−を−１８℃で攪
拌しながら加えたのち、上記沈澱物のＤＭ’Ｆ　（１Ｏ
ｄ）溶液を一１５℃で攪拌しながら加えた。−１θ℃で
２時間攪拌したのちさらに４℃で１８時間攪拌し、その
後、濃縮乾固した。得られた物質を５０％酢酸水溶液を
用いたセフアゾ、クスＧ−２５カラムクロマトグラフィ
ー（３φｘ１４Ｑｃｍ）により精製した。前述と同様な
方法でピークフラクションを収集し、凍結乾燥したのち
ＤＭＦ−酢酸エチルから再結晶して目的物を得た。収量
５２Ｂ＋１９．融点２１（１）（分解）。Z -Asn-Lys (-Tos) -Pro-Th
1 ng of r-Gly-N2H34BB in DMF (10 mg
) 6N hydrochloric acid/dioxane 0.266- and 10% DMF solution of isoamyl nitrite 10- were added to the solution while stirring at -18°C.
d) The solution was added with stirring at -15°C. After stirring at -1θ°C for 2 hours, the mixture was further stirred at 4°C for 18 hours, and then concentrated to dryness. The obtained substance was purified by cefazo, Kusu G-25 column chromatography (3φ×14Qcm) using a 50% aqueous acetic acid solution. Peak fractions were collected in the same manner as described above, freeze-dried, and then recrystallized from DMF-ethyl acetate to obtain the desired product. Yield 52B+19. Melting point 21(1) (decomposed).

Ｒｆｌ　Ｏ，２７、Ｒｆｌ　Ｏ，５６゜〔α〕背−６３
．７°（ｏ−’１Ｌ５０％酢酸水溶液）。Rfl O, 27, Rfl O, 56° [α] back -63
．． 7° (o-'1L 50% acetic acid aqueous solution).

元素分析　Ｃ１０？Ｈ１６！Ｎ５ｙＯｓｓＳ・２０Ｈ８
Ｃｏｏ）ｉ・６Ｈ２０として 計算値　ａ　４，８．７１．　　Ｈ６，４８，Ｎ１５Ｊ
５実験値　０４８．６４．　　Ｈ６，３８，Ｎ　１６．
２８酸加水分解物中のアミノ酸の比率 Ｌｙｓ　Ｏ，９５，Ａｒｇ　２．０１．　ＡＢｐ　１．
９９゜Ｔｈｒ　１．７　：３．　Ｓｅｒ　２．３５．　
Ｇｌｕ　２．（１２゜Ｐｒｏ　２．０５．　Ｇｌｙ　３
．１５．　Ａｌａ　１．０　？。Elemental analysis C10? H16! N5yOssS・20H8
Coo) Calculated value as i・6H20 a 4,8.71. H6, 48, N15J
5 Experimental value 048.64. H6, 38, N 16.
28 Ratio of amino acids in acid hydrolyzate Lys O, 95, Arg 2.01. ABp 1.
99°Thr 1.7:3. Ser 2.35.
Glu 2. (12゜Pro 2.05. Gly 3
．． 15. Ala 1.0? .

’Ｖａｌ　　１．０２　、　工１ｅ　Ｏ，９４、Ｔｙｒ
　１．０７例５　：　　Ｈ−Ａｅｎ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ’
−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−８ｅｒ−
３ｅｒ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｐｒｏ　−Ｇｌｎ　
−Ｔｈｒ　−Ｇｌｙ−工１ｅ　−Ｖａｌ　−Ａｓｐ　−
Ｇｌｕ　−ＯＨの製法 Ｚ　−Ａｓｎ　−Ｉ／ｙａ　（Ｔａ２）　−Ｐｒｏ　−
’Ｉｈｒ　−Ｇｌｙ　−Ｔｙｒ　−Ｇｌｙ　−Ｓｅｒ　
−Ｓｅｒ　−Ｓｅｒ　−Ａｒｇ　−Ａｒｇ　−Ａｌａ　
−Ｐｒｏ　−Ｇｌｎ−Ｔｈｒ　−Ｇｌｙ−工１ｅ−Ｖａ
ｌ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−ＯＨＩ　Ｑ　ｌｎｇ及びＨ−Ｔｈ
ｒ−Ｐｒｏ−ＯＨ１２０１１９を一５０℃で攪拌しなが
ら液体アンモニア５０−に溶解した。この溶液に少量の
ナトリウムを無水条件下−５０℃で攪拌しながら加え、
溶液の色が青色を呈して１０秒後に塩化アンモニウム１
ｇを加えアンモニアを除去した。残渣をＩＮ−塩酸でｐ
Ｈ３に調節し、水で５−に希釈した。不溶物を遠心分離
により除去し、上清をＩＭ−酢酸を用いたセファデック
スＧ−２５カラムクロマトグラフイーにより精製しピー
クフラクションを収集し凍結乾燥して製品とした。収量
６８・３ｍ９．融点１９３°（分解）。'Val 1.02, Engineering 1e O,94, Tyr
1.07 Example 5: H-Aen-Lys-Pro'
-Thr-Gly-Tyr-Gly-Ser-8er-
3er-Arg-Arg-Ala-Pro-Gln
-Thr -Gly-Eng.1e -Val -Asp -
Production method of Glu -OH Z -Asn -I/ya (Ta2) -Pro -
'Ihr -Gly -Tyr -Gly -Ser
-Ser -Ser -Arg -Arg -Ala
-Pro -Gln-Thr -Gly-Engineering1e-Va
l-Asp-Glu-OHI Q lng and H-Th
r-Pro-OH120119 was dissolved in liquid ammonia 50°C with stirring at -50°C. Add a small amount of sodium to this solution under stirring at −50°C under anhydrous conditions.
Ammonium chloride 1 10 seconds after the solution turns blue
g was added to remove ammonia. The residue was purified with IN-hydrochloric acid.
Adjusted to H3 and diluted to 5- with water. Insoluble matter was removed by centrifugation, and the supernatant was purified by Sephadex G-25 column chromatography using IM-acetic acid, and peak fractions were collected and freeze-dried to obtain a product. Yield 68.3m9. Melting point 193° (decomposition).

Ｒｆ　　Ｏ，２２，Ｒｆ　　Ｏ，５４゜〔α〕賢−７９
．３°（０−α６６、ＩＭ−酢酸）。Rf O, 22, Rf O, 54゜[α]ken-79
．． 3° (0-α66, IM-acetic acid).

元素分析　０．、Ｈ，、Ｈ，Ｏ，・ｉｏＨ，Ｃｏｏｎ・
、ｌｌ０ｊ！￥Ｈ，Ｏとして 計算値　Ｃ４８・５５　　７．０８　　１５・８７４Ｉ
４１゜■４°　　　６．７９°　　　１６．０８実験値
　０４３．６２．　　Ｈ６，３２，Ｎ　１５．７５酸加
水分解物中のアミノ酸の比率 １″ｙｒＯ，９０，工Ｒｅ　Ｏ，８６、Ｖａｌ　Ｏ，８
９。Elemental analysis 0. ,H,,H,O,・ioH,Coon・
,ll0j! Calculated value as ¥H, O C48・55 7.08 15・874I
41°■4° 6.79° 16.08 Experimental value 043.62. H6,32,N 15.75 Ratio of amino acids in acid hydrolyzate 1″yrO,90, Engineering Re O,86, Val O,8
9.

Ａｌａ　１．０９．　Ｇｌｙ　８．１８．　Ｐｒｏ　２
．０２゜ｏｌｕ　１．８８．　Ｓｅｒ　２．７８．　Ｔ
ｈｒ　１．８２゜Ａｓｐ　２．００　、　Ａｒｇ　２．
００　、　ＴＪｙａ　０．９５例６：　放射性ヨウ素化 ガラス製試験管に蒸留水に溶解した例５で得たヘンエイ
コサペプチド５μ９（５μｌ　）及びＩ　Ｍ　’Ｊ　ン
ｆｉｌ緩衝液（ｐｕ　７．４　）　２　ｏ’ｐｔを加え
た。Ala 1.09. Gly 8.18. Pro 2
．． 02゜olu 1.88. Ser 2.78. T
hr 1.82°Asp 2.00, Arg 2.
00, TJya 0.95 Example 6: 5 μ9 (5 μl) of the heneicosapeptide obtained in Example 5 dissolved in distilled water in a radioiodized glass test tube and I M'J Nfil buffer (pu 7.4). Added 2 o'pt.

Ｎａ　Ｉｔ６エ　１　ｍｏｉ及び酸化剤としてクロラミ
ンＴ２０μｇ（水溶液、１０μｔ）を加えてよく混和し
約３０秒後、１００／７１（水溶液、　５０１１１　）
のソジウムメタビサルファイトで反応を停止させた。こ
の混合液をセファデックスＧ−Ｎ。Add 1 moi of NaIt6 and 20 μg of chloramine T (aqueous solution, 10 μt) as an oxidizing agent, mix well, and after about 30 seconds, 100/71 (aqueous solution, 50111)
The reaction was stopped with sodium metabisulfite. This mixed solution was mixed with Sephadex G-N.

のカラムで１Ｍ酢酸を溶出液としてゲル濾過した。各７
ラクシヨンの放射活性を測定し。Gel filtration was performed on a column using 1M acetic acid as an eluent. 7 each
Measure the radioactivity of lactone.

そのピークフラクションを分取して１２５工標識ヘンエ
イコサペプチドを得た。約２００　ｍＯｉ／ｌｎｇの比
放射活性が得られた。The peak fraction was fractionated to obtain 125-labeled heneicosapeptide. A specific radioactivity of approximately 200 mOi/lng was obtained.

例７：　抗原の製造 例５で得たヘンエイコサペプチド５１ｎ９及び牛血清ア
ルブミン１０１１１９を水Ｌ５−に溶解した。この溶液
に水溶性カルボジイミド塩酸塩１０ｏｍｇを０℃で攪拌
しながら加え、０．ＩＮ塩酸でｐＨを５．５〜６．０に
調製したのち０℃で２時間さらに４℃で２０時間攪拌し
た。その後１反応混合物に酢酸を２滴加え１Ｍ酢酸を溶
出液とするセフＴデ、クスＧ−１０カラムクロマトグラ
フィーにより精製した。溶出ピークは薄層クロマトグラ
フィー及び２８０ｎｍの吸光度より求めた。このピーク
フラクションを凍結乾燥して免疫用抗原を得た。Example 7: Preparation of antigen The heneicosapeptide 51n9 obtained in Example 5 and bovine serum albumin 101119 were dissolved in water L5-. 10 omg of water-soluble carbodiimide hydrochloride was added to this solution with stirring at 0°C. After adjusting the pH to 5.5 to 6.0 with IN hydrochloric acid, the mixture was stirred at 0°C for 2 hours and further at 4°C for 20 hours. Thereafter, two drops of acetic acid were added to the reaction mixture, and the mixture was purified by column chromatography using 1M acetic acid as an eluent. The elution peak was determined by thin layer chromatography and absorbance at 280 nm. This peak fraction was freeze-dried to obtain an antigen for immunization.

例８：　抗体の製造 例７で得た免疫用抗原１１１１９（０，５１１１９）を
生理食塩水に溶解し、これを１ｓｔ（０，５ｓ／）のフ
ロイントの補助液（ｃｏｍｐｌｅｔｅ　１ｒｒｅｕｎａ
７ｓ　ａｄｊｕｖａｎｔ）に懸濁し、家兎〔モルモット
〕に皮下注射した。２週間後回様な方法で抗原Ｑ、５ｍ
ｇ（０，２５１１１９）を用い追加免疫した。３回乃至
４回の注射後１０日後に採血し抗血清を得た。Example 8: Antigen 11119 (0,51119) for immunization obtained in antibody production example 7 was dissolved in physiological saline, and this was added to 1st (0,5s/) Freund's supplementary solution (complete 1rreuna).
7s adjuvant) and injected subcutaneously into domestic rabbits (guinea pigs). Two weeks later, antigen Q, 5m
g(0,251119) was used for boosting. Blood was collected 10 days after the third or fourth injection to obtain antiserum.

例９：　ラジオイムノア、セイ ０、ＯＩＭリン醗緩衝液（ｐ）ｌ　７．４　、０．５％
牛血清アルブミン及び０．０２５Ｍエチレンジアミン四
酢酸ナトリウム含有）０．４−と検体または同じ緩衝液
に溶かした標準液０．１−および適当な濃度に希釈した
抗血清０．１−並びニ１２″工標識ヘンエイコサペプチ
ド・０．１−を混合し４℃で４８時間放置した。反応液
をデキストラン炭末法の常法に従って処理し、得られた
上清の放射能を計測した。第１図のＡはこのようにして
得られた標準曲線である。またＢはＲｉｎｄｏｒｋｎｅ
ｃｈｔらの方法（Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｏｈｅｍ、。Example 9: Radioimmunoa, Sei 0, OIM Phosphorus Buffer (p)l 7.4, 0.5%
(containing bovine serum albumin and 0.025 M sodium ethylenediaminetetraacetate) 0.4-, a sample or a standard solution 0.1- dissolved in the same buffer solution, and an antiserum 0.1- diluted to an appropriate concentration, and a 12-inch tube. Labeled heneicosapeptide 0.1- was mixed and left at 4°C for 48 hours.The reaction solution was treated according to the conventional dextran charcoal method, and the radioactivity of the resulting supernatant was measured. A is the standard curve obtained in this way. B is the standard curve obtained in this way.
The method of cht et al. (J. Biol. Ohem.

２５３：２７６９〜２７７６（１９７８））　　に準じ
てヒト血清より得られた工ＧＩＩ′−■を標準物質とし
て用いて得られた標準曲線である。253:2769-2776 (1978)) using GII'-■ obtained from human serum as a standard substance.

【図面の簡単な説明】[Brief explanation of drawings]

図面は標準曲線である。 The drawing is a standard curve.

Claims (1)

【特許請求の範囲】 式 ％式％ で表わされるアミノ酸配列を有するヘンエイコサペプチ
ド[Claims] A heneicosapeptide having an amino acid sequence represented by the formula % formula %